JP2001354680A - 高安定性酸性リン脂質および製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】高安定性酸性リン脂質およびその製造方法を提
供する。 【解決手段】酸性リン脂質と賦形剤を共存させることに
より安定な酸性リン脂質を製造する方法において、０〜
５０℃の条件下で水に酸性リン脂質と賦形剤を添加し、
均質化後、真空乾燥して水分を１％以下とすることを特
徴とする高安定性酸性リン脂質の製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、安定性の高い酸性
リン脂質およびその製造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】酸性リン脂質は、リン脂質の酸性物であ
り、例えば、ホスファチジルセリンまたはホスファチジ
ン酸の塩型のものは牛脳や植物から抽出されたり、他の
リン脂質を出発原料とする塩基交換反応または加水分解
により製造されてきた（特開昭６３−３６１９０号公
報、特開昭６３−３６１９１号公報、特開昭６３−３６
７９２号公報、特開平２−７９９９０号公報、特開平４
−１７１９７６号公報）。しかし、前記に開示された先
行技術は、反応後にホスファチジルセリンまたはホスフ
ァチジン酸を塩の形で取り出すものであって、酸型のリ
ン脂質が自然界に存在し難く得ることは困難であった。

【０００３】一方、酸性リン脂質については、近年、様
々な生理活性が見出されており、特にホスファチジルセ
リンは学習効果を高めるような脳機能改善効果や、抗ス
トレス効果等の生理活性が見出されており、医薬品や食
品等への応用が期待されている。しかし、これら酸性リ
ン脂質は酸型の状態では化学的に不安定であり、酸化や
加水分解等の品質劣化を受けやすかった。このため、現
在市場では試薬グレードの酸性リン脂質が冷凍保存状態
で流通していた。ところが、酸性リン脂質は、塩型のも
のと比較し、他の油脂との相溶性に優れ、製品加工を行
いやすい利点があり、塩型とは異なる生理活性を有する
ことから、常温で、高安定性酸性リン脂質を製造する方
法が望まれていた。

【０００４】特開昭５４−１２６２０６号公報には、ホ
スファチジルコリン等のリン脂質含有油脂に 例えば、
オクタデシルアクリルアミド−Ｎ，Ｎ−ジメチルアクリ
ルアミドの共重合体を添加して、リン脂質の褐変を抑え
る方法が開示されているが、この方法で、酸性リン脂質
の酸化、加水分解が抑制されるか否かについては記載が
ない。特開平８−５３６４３号公報には、アルキルアク
リルアミド、Ｎ−置換アクリルアミドからなる水溶性高
分子で被覆することによるリン脂質等の膜の安定化技術
が開示されている。しかし、この方法で、酸性リン脂質
の酸化、加水分解が抑制されるか否かについては記載が
ない。また、この技術は、膜の安定化技術であり、バル
クの酸性リン脂質には適用できないなど問題があった。

【０００５】特表平８−５０５４０３号公報、特表平１
１−５０２８５１号公報では、サイトカイン等の蛋白質
を用いて、リン脂質を含む疎水性脂質を賦形剤として添
加し、蛋白質を安定化する技術が開示されている。しか
し、この方法で、酸性リン脂質の酸化、加水分解が抑制
されるか否かについては記載がない。また、この技術
は、蛋白質の安定化技術であり、酸性リン脂質には適用
できない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、常温
で、安定性のある酸性リン脂質およびその製造方法を提
供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記問題
点に鑑み鋭意検討した結果、特定の条件下に酸性リン脂
質と賦形剤とを配合すると、常温でも、酸性リン脂質が
著しく安定化する知見を得て、本発明を完成させるに至
った。即ち、本発明は、次の［１］〜［４］である。

【０００８】［１］ 酸性リン脂質と賦形剤を共存させ
ることにより安定な酸性リン脂質を製造する方法におい
て、０〜５０℃の条件下で水に酸性リン脂質と賦形剤を
添加し、均質化後、真空乾燥して水分を１％以下とする
ことを特徴とする高安定性酸性リン脂質の製造方法。

【０００９】［２］ 酸性リン脂質がホスファチジン酸
またはホスファチジルセリンであり、賦形剤が炭水化
物、蛋白質、ペプチドおよびアミノ酸からなる群より選
択される１種または２種以上であり、賦形剤の量が酸性
リン脂質が１重量部に対して、０．０１〜１００重量部
である前記［２］の高安定性酸性リン脂質の製造方法。

【００１０】［３］ 賦形剤である蛋白質が、ラクトア
ルブミンまたはゼラチンで、賦形剤であるペプチドが卵
白ペプチドである前記の［１］の高安定性酸性リン脂質
の製造方法。

【００１１】［４］ 前記の［１］〜［３］の製造方法
によって得られる酸性リン脂質であって、保存温度４０
℃、相対湿度７５％の条件下で６カ月保存中に酸性リン
脂質の減少量が１０％以下、過酸化物価の上昇が１以下
である高安定性酸性リン脂質。

【００１２】

【発明の実施の形態】本発明に用いるリン脂質は、例え
ば、レシチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジル
エタノールアミン、ホスファチジルグリセロール、リゾ
レシチン等が挙げられる。なかでもホスファチジルセリ
ン、ホスファチジン酸が好ましく挙げられる。用いるリ
ン脂質は、天然資源から抽出したもの、あるいは合成し
たものの如何を問わず使用できる。また、市販のもの、
または公知の方法で調製したものを使用しても良い。例
えば、大豆、脱脂大豆、卵黄等から抽出したものを単独
で用いてもよいし２種以上組み合わせて用いてもよい。
また、動物、植物等の起源については特に限定されな
い。例えば、大豆レシチン、脱脂大豆レシチン、卵黄レ
シチン、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノ
ールアミン、ホスファチジルグリセロール、リゾレシチ
ン等から塩基交換反応もしくは加水分解により得られた
ものを使用することも可能である。本発明に用いる酸性
リン脂質としては、塩型のリン脂質を酸で処理すること
によって得られる。前記の酸としては、例えば、ギ酸、
酢酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、ク
エン酸、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、フィチン酸等が挙
げられる。 これらの中から選ばれる１種または２種以
上を組み合わせて用いることができる。陽イオンの除去
効果の点から塩酸、硫酸、硝酸、リン酸の無機酸、フィ
チン酸等の有機酸を使用することがより好ましい。

【００１３】また、緩衝液溶液、例えば、ギ酸−ギ酸ナ
トリウム緩衝液、グリシン−塩酸緩衝液、酢酸−酢酸ナ
トリウム緩衝液、クエン酸−クエン酸ナトリウム緩衝
液、リン酸緩衝液等を所定のｐＨに調整して用いること
がより望ましい。酸または緩衝液の添加量は、塩型リン
脂質１ｍｏｌに対し、酸を１〜１００ｍｏｌ、好ましく
は１５〜６０ｍｏｌ、より好ましくは２０〜５０ｍｏｌ
に設定する。添加量が１ｍｏｌ未満では酸の効果が十分
でなく、高純度酸性リン脂質を製造することができな
い。また、酸の添加量が１００ｍｏｌを越えると、加水
分解等の副反応が生じるので望ましくない。反応系に添
加する酸の温度は０〜５０℃、好ましくは５〜３０℃、
より好ましくは７〜２０℃である。温度が０℃未満では
酸の粘度が上昇したり凝固するため取り扱いが難しくな
る。また、酸の温度が５０℃を越えると、加水分解等の
副反応が生じるので望ましくない。また例えば酸性リン
脂質の市販品としては、牛脳由来ホスファチジルセリン
（純度９８％：シグマ社製品）、大豆由来ホスファチジ
ルセリン（純度９８％：シグマ社製品）、ジパルミトイ
ルホスファチジン酸（純度９９％：シグマ社製品）等が
好ましいものとして挙げられる。

【００１４】本発明に用いるリン脂質の構成脂肪酸は、
同一または異種であり、炭素数８〜２４の飽和または不
飽和の脂肪酸である。例えば、カプロン酸、カプリン
酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、ベヘン
酸、アラキジン酸、パルミトオレイン酸、オレイン酸、
リノール酸、αおよびγ−リノレン酸、エルシン酸、ア
ラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン
酸、テトラコサテトラエン酸等が挙げられる。なかで
も、オレイン酸、リノール酸、エイコサペンタエン酸、
ドコサヘキサエン酸が生理活性の面から好ましい。

【００１５】本発明に用いる賦形剤としては、例えば、
炭水化物、蛋白質、ペプチドおよびアミノ酸が挙げられ
る。前記の炭水化物としては、例えば、澱粉、デキスト
リン、セルロース及びその加水分解物、ブドウ糖、果糖
などの単糖類、マルトース、乳糖などの二糖類、アラビ
アゴム、キサンタンガム、ローカストビーンガム、プル
ラン等の多糖類等が挙げられる。これらの１種または２
種以上を組み合わせて用いてもよい。例えば、市販品と
して、ラクトース（ラプリノ社製品）、ＳＤ−２０（シ
クロデキストリン：塩水港精糖（株）製品）、パインデ
ックス（デキストリン：松谷化学（株）製品）等が好ま
しい物として挙げられる。

【００１６】前記の蛋白質としては、動物および植物系
の蛋白質が用いられる。動物性蛋白質としては、例え
ば、カゼイン、コラーゲン、ホエイ蛋白質、卵蛋白質、
魚蛋白質等が挙げられる。またさらに、植物性蛋白質と
しては、大豆蛋白質、小麦蛋白質、トウモロコシ蛋白質
等が挙げられる。前記のペプチドとしては、前記の蛋白
質の分解物またはその塩が挙げられ、例えば、卵白ペプ
チド、魚ペプチド、乳蛋白ペプチド等が挙げられる。前
記のアミノ酸としては、前記のペプチドの分解物、ある
いは各種アミノ酸を使用することができる。この中でも
供給安定性の面から、ゼラチン、卵白ペプチド、ラクト
アルブミン、カゼイネート等が好ましく挙げられる。例
えば、市販品として、低分子コラーゲンパウダーＳＰＨ
（雪印食品（株）製品）、ラクプロダン８０（ラクトア
ルブミン：ＭＤフーズイングレディエンツジャパン
（株）製品）、マグネシウムカゼイネートＳ（ＤＭＶジ
ャパン（株）製品）、ＣＥ９０Ｆ（ホエーペプチド：Ｄ
ＭＶジャパン（株）製品）、ＥＰ−３（卵白ペプチド：
キューピー（株）製品）等が好ましいものとして挙げら
れる。

【００１７】本発明で用いる賦形剤の使用量は、原料と
なる酸性リン脂質１重量部に対して０．０１〜１００重
量部、好ましくは、０．２〜５０重量部、より好ましく
は０．５〜１０重量部である。賦形剤の添加量を酸性リ
ン脂質１重量部に対して１００重量部より多くしても、
それに見合うだけの著しい安定化の向上効果が認められ
ず、０．０１重量部未満では賦形剤による安定化効果が
得られない。

【００１８】本発明を実施する形態は、原料となる酸性
リン脂質１重量部に対して０．０１〜１００重量部の範
囲の賦形剤を攪拌槽中にて水に溶解させ、次いで酸性リ
ン脂質の粉末を添加して均質化させることにより、酸性
リン脂質を賦形剤で包含させる。包含は、０〜５０℃の
範囲で行う。５０℃より高くなると、賦形剤である蛋白
質の変性を生じることや、酸性リン脂質の分解を伴う、
０℃より低くなると水相が凝固してしまう。包含を行う
際にはホモゲナイザー、ポリトロン、マイクロフルイダ
イザ−、ホモミキサー等の均質機を併用することができ
る。なお、反応は窒素還流下で行うことによりリン脂質
に含まれる脂肪酸の劣化を防ぐことができる。その後、
真空ベルト乾燥機、真空凍結乾燥等の真空乾燥機により
乾燥し、最終製品中の水分を１％以下とする。

【００１９】本発明の方法で製造した酸性リン脂質は、
保存温度４０℃、相対湿度７５％の条件下で６カ月保存
中に酸性リン脂質の減少量が１０％以下、過酸化物価の
上昇が１以下を達成できる安定化を著しく向上させたも
のである。

【００２０】

【発明の効果】本発明の高安定性酸性リン脂質の製造方
法は、特定の条件下で、原料の酸性リン脂質と特定の賦
形剤を添加して、安定化を図るもので、０〜５０℃の条
件下で水に酸性リン脂質と賦形剤を添加し、均質化後、
真空乾燥して水分を１％以下とする簡単な方法により安
定化した酸性リン脂質を得ることができる。様々な生理
活性を有する酸性リン脂質を安定化することにより、長
期間、品質を維持することができ、工業的に、健康食品
や医薬品等へ応用することができる。

【００２１】

【実施例】本発明を実施例に基づいて説明する。用いた
測定方法、評価方法を示す。 １．リン脂質の定量 高速液体クロマトグラフィー（ギルソン社製、機種モデ
ル３０３）を用いて行った。固定相にはシリカゲルカラ
ム（径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ）を用い、また移動
相にはアセトニトリル：メタノール：１０ｍＭリン酸二
水素アンモニウム＝６１２：２８９：１００の混合溶媒
を用い検出は、紫外線ＵＶ波長２０２ｎｍにおける吸収
を測定することにより定量した。 ２．過酸化物価（ＰＯＶ）の測定 酸化の指標となるＰＯＶは日本油化学協会制定の基準油
脂分析試験法２．４．１２−８６に準じて測定した。 ３．水分の測定 試料中の水分は、カールフィッシャー水分計、三菱化学
（株）製、機種ＣＡ−０６）を用いて測定した。 ４．安定性の評価方法 安定性の評価は、粉末試料を開放状態で、４０℃、相対
湿度７５％の恒温槽内で６ヶ月間保存後、酸性リン脂質
の含量を高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で測
定し、その残存率を求めた。 ５．酸化安定性 前記の方法により初期および粉末試料を開放状態で、４
０℃、相対湿度７５％の恒温槽内で６ヶ月間保存後、過
酸化物価（ＰＯＶ）の測定を行った。

【００２２】実施例１ ラクトアルブミン０．０５ｇと水３ｇを混合し超音波洗
浄機で攪拌し溶解させ、次いで酸性の牛脳由来ホスファ
チジルセリン（純度９８％：シグマ社品）０．５ｇを添
加後、窒素置換を行いながら３０℃でポリトロン（キネ
マチカ社製）を用いて１５分間均質化した。均質化後に
真空凍結乾燥を行い、粉末０．５４ｇを得た。試料の水
分を前記の方法により測定した結果、０．２％であっ
た。

【００２３】実施例２ シクロデキストリン５００ｇを水３０００ｇに入れ、プ
ロペラ撹拌機で溶解し、次いで酸性の大豆由来ホスファ
チジルセリン（純度９８％：シグマ社品）５００ｇを添
加後、１０℃でホモミキサーにて窒素置換を行いながら
１５分間均質化した。反応後に真空ベルト乾燥を行い、
粉末９９０ｇを得た。同様にして水分を測定した結果、
０．１％であった。

【００２４】実施例３ カゼインナトリウム２１４０ｇと水５０００ｇをホモミ
キサーにて攪拌し溶解させ、次いで酸性のジパルミトイ
ルホスファチジン酸（純度９９％：シグマ社品）５００
ｇを添加後、１℃でホモミキサーにより１５分間均質化
した。均質化後に凍結乾燥を行い、粉末２５８０ｇを得
た。試料の水分を測定した結果、０．３％であった。

【００２５】実施例４ ゼラチン１００ｇと水８００ｇを５０℃に加温後プロペ
ラ撹拌により溶解させ、４５℃に冷却した後に大豆由来
ホスファチジルセリン（純度９８％：シグマ社品）１．
９ｇを添加後、窒素置換を行い、ソニファイヤー（ブラ
ンソン社製）により１５分間均質化した。反応後に凍結
乾燥を行い、粉末１０１ｇを得た。試料の水分を同様に
測定した結果、０．１％であった。

【００２６】比較例１ ラクトアルブミン０．０５ｇと水３ｇを混合し超音波洗
浄機で攪拌し溶解させ、次いで酸性牛脳由来ホスファチ
ジルセリン（純度９８％：シグマ社製品）０．５ｇを添
加後、窒素置換を行いながら３０℃でポリトロン（キネ
マチカ社）を用いて１５分間均質化した。均質化後に温
風乾燥を行い、粉末０．４８ｇを得た。試料の水分を同
様にして測定した結果、３．０％であった。

【００２７】比較例２ シクロデキストリン２ｇを水３０００ｇに入れ、プロペ
ラ撹拌機で溶解し、次いで酸性の大豆由来ホスファチジ
ルセリン（純度９８％：シグマ社品）５００ｇを添加
後、１０℃でホモミキサーにて窒素置換を行いながら１
５分間均質化した。反応後にスプレードライを行い、粉
末４５９ｇを得た。試料の水分を同様にして測定した結
果、５．０％であった。

【００２８】比較例３ カゼインナトリウム２１４０ｇと水５０００ｇをホモミ
キサーにて攪拌し溶解させ、次いで酸性のジパルミトイ
ルホスファチジン酸（純度９９％：シグマ社製品）５０
０ｇを添加後、６０℃でホモミキサーにより１５分間均
質化した。均質化後に温風乾燥を行い、粉末２２５０ｇ
を得た。試料の水分を同様にして測定した結果、１０％
であった。

【００２９】比較例４ ゼラチン１００ｇと水８００ｇを５０℃に加温後プロペ
ラ撹拌により溶解させ、４５℃に冷却した後に酸性大豆
由来ホスファチジルセリン（純度９８％：シグマ社製
品）１．９ｇを添加後、さらにプロペラ撹拌により１５
分間撹拌した。反応後にスプレードライを行い、粉末８
９ｇの粉末を得た。試料の水分を同様にして測定した結
果、３．５％であった。

【００３０】試験例１ 実施例１〜４、比較例１〜４で得られた粉末を４０℃、
相対湿度７５％の恒温槽内で６ヶ月間保存後、ホスファ
チジルセリンまたはホスファチジン酸の残存量をＨＰＬ
Ｃにて測定し、下記に示す計算式で残存率を求めた。 残存率（％）＝（６ヶ月後の酸性リン脂質含量／初期の
酸性リン脂質含量）×１００その結果を表１および２に
示す。

【００３１】試験例２ 実施例１〜４および比較例１〜４で得られた粉末を４０
℃、相対湿度７５％の恒温槽内で６ヶ月間保存後、ＰＯ
Ｖの測定を行った。初期値および６カ月後のＰＯＶを表
１および２に示した。

【００３２】試験例３ 原料のホスファチジルセリン及びホスファチジン酸を前
記の試験例の方法と同様にして安定性を評価した。結果
を比較例５〜７として表３に示す。

【００３３】

【表１】

【００３４】なお表中に用いた略号は次のとおりであ
る。 ＰＳ；ホスファチジルセリン（酸型） ＰＡ；ホスファチジン酸。 また、ＰＯＶの単位はｍｅｑ／ｋｇである。

【００３５】

【表２】

【００３６】

【表３】

【００３７】６カ月後の原料のホスファチジルセリンと
ホスファチジン酸および比較例１〜４の場合には酸性リ
ン脂質の残存率は少ないのに比べて、本発明の実施例１
〜４では酸性リン脂質の残存率が高いことがわかる。ま
た、初期と６ヶ月後のＰＯＶを比較すると原料のホスフ
ァチジルセリンとホスファチジン酸および比較例１〜４
は共に値が大きくなり、酸化が進行しているのに対し、
実施例１〜４には酸化劣化がほとんど認められなかっ
た。以上の結果から、本発明の実施例に示した酸性リン
脂質は著しく安定していることが分かる。

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】酸性リン脂質と賦形剤を共存させることに
   より安定な酸性リン脂質を製造する方法において、０〜
   ５０℃の条件下で水に酸性リン脂質と賦形剤を添加し、
   均質化後、真空乾燥して水分を１％以下とすることを特
   徴とする高安定性酸性リン脂質の製造方法。
2. 【請求項２】酸性リン脂質がホスファチジン酸またはホ
   スファチジルセリンであり、賦形剤が炭水化物、蛋白
   質、ペプチドおよびアミノ酸からなる群より選択される
   １種または２種以上であり、賦形剤の量が酸性リン脂質
   １重量部に対して、０．０１〜１００重量部である請求
   項１記載の高安定性酸性リン脂質の製造方法。
3. 【請求項３】賦形剤である蛋白質が、ラクトアルブミン
   またはゼラチンで、賦形剤であるペプチドが卵白ペプチ
   ドである請求項２記載の高安定性酸性リン脂質の製造方
   法。
4. 【請求項４】請求項１〜３の製造方法によって得られる
   酸性リン脂質であって、保存温度４０℃、相対湿度７５
   ％の条件下で６カ月保存中に酸性リン脂質の減少量が１
   ０％以下、過酸化物価の上昇が１以下である高安定性酸
   性リン脂質。