ES2200829T3

ES2200829T3 - Analogos opticamente puros de la campotecina.

Info

Publication number: ES2200829T3
Application number: ES00907714T
Authority: ES
Inventors: Olivier Lavergne; Dennis Bigg; Christophe Lanco; Alain Rolland
Original assignee: Societe de Conseils de Recherches et dApplications Scientifiques SCRAS SAS
Current assignee: Ipsen Pharma SAS
Priority date: 1999-02-26
Filing date: 2000-02-24
Publication date: 2004-03-16
Anticipated expiration: 2020-02-24
Also published as: DE60033447T2; ZA200107738B; PL361334A1; AR022740A1; PT1165565E; NO20014117L; EP1165565B1; ES2282564T3; WO2000050427A1; ATE353902T1; CZ20013091A3; TWI268931B; RU2230745C2; MXPA01008658A; NZ514153A; FR2790261A1; KR20010108270A; DE60033447D1; HRP20010622A2; CN1345321A

Abstract

Compuestos de fórmula general (IA) en la cual R1 representa un radical alquilo inferior; R2, R3, R4 y R5 representan independientemente un átomo de hidrógeno un radical halo o -OSO2R10; R6 representa un radical -(CH2)mSiR7R8R9; R7, R8 y R9 representan independientemente un radical alquilo inferior; R10 representa un radical alquilo inferior eventualmente sustituido con uno o varios radicales halo iguales o diferentes, o arilo eventualmente sustituido con uno o varios radicales alquilo inferior iguales o diferentes; m es un número entero comprendido entre 0 y 6; debiendo entenderse que cuando el término ¿inferior¿ se refiere a un radical alquilo, esto significa como máximo 6 átomos de carbono; o las sales de adición de estos últimos.

Description

Análogos ópticamente puros de la camptotecina.

La camptotecina es un compuesto natural que fue aislado por primera vez a partir de las hojas y la corteza de la planta china denominada amptotheca acuminata (véase la publicación de Wall y colaboradores, J. Amer. Chem. Chem. Soc. 88:3888 (1966)). La camptotecina es un compuesto pentacíclico constituido por un fragmento de indolizino[1,2-b]quinolina condensado con una \alpha-hidroxilactona de seis eslabones. El átomo de carbono en la posición 20, que porta el grupo \alpha-hidroxi, es asimétrico y confiere a la molécula un poder rotatorio. La forma natural de la camptotecina posee la configuración absoluta "S" en el carbono 20 y responde la fórmula siguiente:

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La camptotecina presenta una actividad anti-proliferadora en diversas líneas celulares cancerosas, que comprenden las líneas celulares de los tumores humanos de colon, pulmón y mamas (Suffness, M. y colaboradores: "The Alkaloids Chemistry and Pharmacology", Bross, A., ed., vol. 25, pag. 73 (Academic Press, 1985)). Se sugiere que la actividad anti-proliferadora de la camptotecina está en relación con su actividad inhibidora de la topoisomerasa del DNA.

Se ha indicado que la \alpha-hidroxilactona era una exigencia absoluta a la vez para la actividad in vivo e in vitro de la camptotecina ("Camptothecins: New Anticancer Agents", Putmesil, M., y colaboradores, ed., pag. 27 (CRC Press, 1995); Wall, M. y sus colaboradores, Cancer Res. 55:753 (1995); Hertzberg y colaboradores, J. Med. Chem. 32:715 (1982) y Crow y colaboradores, J. Med. Chem. 35:4160 (1992)). Por todo ello la solicitante ha desarrollado una nueva clase de análogos de camptotecina en los que una \beta-hidroxilactona sustituye a la \alpha-hidroxilactona natural de la camptotecina (véanse las solicitudes de patentes WO 97/00876, WO 98/28304 y WO 98/28305.

La presente solicitud se refiere a nuevos análogos \beta-hidroxilactónicos de camptotecina cuya actividad biológica expresada, por ejemplo, en términos de concentraciones inhibidoras de la proliferación de colonias celulares tumorales es, de forma inesperada, superior a la actividad de los compuestos ya conocidos. La invención tiene igualmente por objeto, como medicamentos, los compuestos anteriormente citados así como las composiciones farmacéuticas que los contienen. La invención se refiere igualmente a un procedimiento de preparación de compuestos según la invención.

Por tanto, la invención tiene por objeto compuestos de fórmula general I_{A}

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en la cual

R_{1} representa un radical alquilo inferior;

R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} representan independientemente un átomo de hidrógeno un radical halo o -OSO_{2}R_{10};

R_{6} representa un radical -(CH_{2})_{m}SiR_{7}R_{8}R_{9};

R_{7}, R_{8} y R_{9} representan independientemente un radical alquilo inferior;

R_{10} representa un radical alquilo inferior eventualmente sustituido con uno o varios radicales halo iguales o diferentes, o arilo eventualmente sustituido con uno o varios radicales alquilo inferior iguales o diferentes;

m es un número entero comprendido entre 0 y 6;

o las sales de adición de estos últimos.

En las definiciones indicadas con anterioridad, la expresión halo representa el radical flúor, cloro, bromo o yodo y preferentemente cloro, flúor o bromo. Por radical alquilo inferior se entiende en la presente solicitud un radical alquilo lineal o ramificado que comprende de 1 a 6 átomos de carbono como los radicales metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, sec-butilo y terc-butilo, pentilo, isopentilo, neopentilo, hexilo o isohexilo. El término arilo indica un compuesto hidrocarbonado mono-, di- o tri-cíclico con al menos un ciclo aromático, conteniendo cada ciclo como máximo 7 eslabones, como por ejemplo, fenilo, naftilo, antracilo, bifenilo o indenilo.

Son compuestos particularmente preferidos según la invención aquellos para los que R_{1} representa un radical etilo, así como aquellos para los que R_{3} representa un radical halo y en particular flúor.

Preferentemente, los compuestos de fórmula I_{A} responden a una de las fórmulas siguientes:

(5R)-5-etil-9,10-difluoro-5-hidroxi-12-(2-trimetilsililetil)-4,5,13, 15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-3,15-diona;

(5R)-5-etil-5-hidroxi-12-(2-trimetilsililetil)-4,5,13,15-tetrahidro-1H, 3H-oxepino[3',4':6,7]-indolizino[1,2-b]quinolin-3,15-diona.

Los compuestos de fórmula general (I_{A}) pueden ser preparados de la forma siguiente:

- se acopla un producto de fórmula general (M)

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en la que R_{1} tiene el significado indicado con anterioridad, con un compuesto de fórmula (N)

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en la que R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} tienen el significado indicado con anterioridad, para proporcionar el compuesto de fórmula (O)

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en la que R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} tienen el significado indicado con anterioridad;

- el compuesto (O) es seguidamente ciclado para proporcionar el compuesto de fórmula (I).

La formación de los compuestos (O) a partir de los compuestos de fórmulas generales (M) y (N) se efectúa mediante un tratamiento conocido por un experto en la técnica con el nombre de reacción de Mitsunobu (referida a Mitsunobu, O. et coll. Synthesis, pag. 1 (1981)). Se trata de desplazar la función hidroxilo del compuesto (N) con un nucleófilo como el compuesto (M), o un derivado desprotonado de este último, mediante un tratamiento con una fosfina, por ejemplo, trifenilfosfina, y un derivado de azodicarboxilato, por ejemplo, azodicarboxilato de dietilo o de diisopropilo, en un disolvente aprótico como, por ejemplo tetrahidrofurano o N,N-dimetilformamida. La ciclación de los compuestos (O) para proporcionar los compuestos de fórmula (I) se efectúa preferentemente en presencia de un catalizador de paladio (por ejemplo, diacetato de paladio) en condiciones básicas (suministradas, por ejemplo, por un acetato alcalino eventualmente combinado con un agente de transferencia de fases como, por ejemplo, bromuro de tetrabutilamonio) en un disolvente aprótico como acetonitrilo o N,N-dimetilformamida, a una temperatura comprendida entre 50ºC y 120ºC (R. Grigg et coll., Tetrahedron 46, pag. 4003 (1990)).

El compuesto de fórmula (M) se prepara según un procedimiento constituido por las siguientes etapas sucesivas:

- un éster racémico representado como sigue

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en el que R_{1} tiene el significado indicado con anterioridad, R es un grupo alquilo inferior y Z un grupo protector de la función de alcohol (para su preparación, se hace referencia particularmente a la solicitud de patente WO 97/00876) es transformado en el ácido carboxílico correspondiente;

- se somete seguidamente este compuesto a una operación de separación de los enantiómeros, conocida por el experto en la técnica con el nombre de resolución (véase Jacques et coll., "Enantiomers, Racemates and Resolution", 2ª edición, Wiley, New York, 1991) y que permite la obtención del compuesto enantiómeramente enriquecido de fórmula general (A)

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en la que R_{1} y Z tienen el significado indicado con anterioridad;

- la función alcohol del compuesto de fórmula general (A) es seguidamente desprotegida para proporcionar el producto de fórmula general (B)

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en la que R_{1} tiene el significado indicado con anterioridad,

- el compuesto de fórmula general (B) es seguidamente ciclado para obtener el compuesto de fórmula general (C)

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en la que R_{1} tiene el significado indicado con anterioridad,

- finalmente, el grupo metoxi del compuesto de fórmula general (C) es transformado en carbonilo para obtener un compuesto de fórmula general (M)

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en la que R_{1} tiene el significado indicado con anterioridad.

En el caso particular de que R_{1} represente un grupo etilo, R represente un grupo terc-butilo y Z represente un grupo bencilo, el compuesto de fórmula (N) es sintetizado según el procedimiento constituido por las etapas sucesivas siguientes:

- el éster terc-butílico racémico representado a continuación (para su preparación, se hace referencia particularmente a la solicitud de patente WO 97/00876)

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es tratado por medio de ácido trifluoroacético durante 18 h a temperatura ambiente para proporcionar el ácido carboxílico correspondiente;

- se calienta en alcohol isopropílico la sal de quinolina del ácido 3-(3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil)-3-hidroxi-pentanoico a una temperatura superior a 30ºC y, preferentemente, de aproximadamente 50ºC antes de dejar enfriar el medio de reacción hasta temperatura ambiente, de forma que la sal del enantiómero (+) del ácido 3-(3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil)-3-hidroxi-pentanoico cristaliza, mientras que la sal del isómero (-), cuyo anión es representado a continuación, permanece en solución

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- la solución en alcohol isopropílico de la sal del enantiómero (-) del ácido 3-(3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil)-3-hidroxi-pentanoico es concentrada y tratada con ácido clorhídrico para proporcionar el compuesto de fórmula (A')

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- el compuesto (A') es seguidamente puesto en contacto con paladio en presencia de una fuente de hidrógeno para proporcionar el producto de bencilo de fórmula (B')

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- se cicla seguidamente el compuesto de fórmula (B') para obtener el compuesto de fórmula (C')

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- finalmente, se transforma el grupo metoxi del compuesto de fórmula (C') en carbonilo para obtener la (+)-5-etil-5-hidroxi-1,3,4,5,8,9-hexahidrooxepino [3,4-c]piridin-3,9-diona (o (+)-EHHOPD) representada a continuación

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Para el procedimiento descrito con anterioridad, la reacción que conduce desde el compuesto de fórmula (A') hasta el compuesto de fórmula (B') se hará preferentemente en metanol y, preferentemente, calentando el medio de reacción a 40ºC aproximadamente después de la adición de formiato de amonio. La ciclación del compuesto de fórmula (B') para proporcionar el compuesto (C') se podrá efectuar en THF, preferentemente a una temperatura de aproximadamente 50ºC. Para la reacción que conduce desde el compuesto de fórmula (C') hasta (+)-EHHOPD, se trabajará preferentemente a temperatura ambiente con acetonitrilo como disolvente.

Los compuestos de fórmula (I_{A}) en la que al menos uno de los radicales R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} representa un sulfonato (como, por ejemplo, mesilato, triflato o tosilato) pueden ser obtenidos mediante un procedimiento caracterizado porque se trata el compuesto hidroxilado correspondiente en un disolvente aprótico anhidro con un agente de sulfinilación en presencia de una base. El disolvente aprótico puede ser diclorometano o N,N-dimetilformamida, el agente de sulfonilación cloruro de metanosulfonilo, anhídrido tríflico, N-feniltrifinida o cloruro de p-tolueno-sulfonilo y la base trietilamina, piridina o hidruro de sodio. El grupo sulfonato puede ser igualmente introducido a nivel de productos intermedios.

Los compuestos de fórmula (N) en la que R6 es un átomo de hidrógeno y R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen el significado indicado con anterioridad pueden ser obtenidos a partir de anilinas de fórmula (P)

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en la que R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen el significado indicado con anterioridad, según el procedimiento siguiente: una anilina de fórmula (P) es N-acetilada mediante tratamiento con un agente acetilante como, por ejemplo, anhídrido acético. La acetanilida así obtenida es tratada a una temperatura comprendida entre 50ºC y 100ºC, preferentemente de forma aproximada 75ºC, por medio de un reactivo conocido por el experto en la técnica con el nombre de reactivo de Vilsmeyer (obtenido mediante la acción de oxicloruro de fosforilo sobre N,N-dimetilformamida a una temperatura comprendida entre 0ºC y 10ºC) para proporcionar el correspondiente 2-cloro-3-quinolinocarbaldehído (se hace referencia, por ejemplo, a Meth-Cohn, et coll., J. Chem. Soc., Perkin Trans. I pag. 1520 (1981); Meth-Cohn, et coll J. Chem. Soc., Perkin Rans. I pag. 2509 (1981); y Nakasimhan et coll. J. Am. Chem. Soc., 112, pag. 4431 (1990)). Este intermedio es fácilmente reducido al correspondiente quinolilmetanol de fórmula (N), en condiciones clásicas conocidas por el experto en la técnica como el tratamiento en un disolvente alcohólico (por ejemplo, metanol) por medio de borohidruro de sodio a una temperatura comprendida entre 0ºC y 40ºC.

Los compuestos de fórmula (N) en la que R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} tienen el significado indicado con anterioridad, pueden ser obtenidos también a partir de quinolonas carboxiladas de fórmula (Q)

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en la que R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} tienen el significado indicado con anterioridad, según el procedimiento siguiente: una quinolona de fórmula (Q) es clorada para proporcionar la correspondiente cloroquinolina cuya función carboxilada es reducida para proporcionar el compuesto de fórmula general (N). La cloración puede ser efectuada con un óxido de clorofosfina como oxicloruro de fósforo u óxido de clorodifenilfosfina, puros o en presencia de un codisolvente aprótico inerte como tolueno o cloroformo, a una temperatura comprendida entre 50ºC y 120ºC. La cloración se efectúa preferentemente con un exceso de oxicloruro de fósforo a 80ºC. La reducción puede ser efectuada con un hidruro de aluminio en un disolvente aprótico como dietil-éter, óxido de ter-butilmetilo, tetrahidrofurano, diclorometano, cloroformo, tricloroetano o tolueno a una temperatura comprendida entre 0ºC y 50ºC. La reducción se efectúa preferentemente con hidruro de diisobutilaluminio en diclorometano a temperatura ambiente.

Los compuestos de fórmula (Q) en la que R_{6} es un átomo de hidrógeno y R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen el significado indicado con anterioridad pueden ser obtenidos a partir de ácidos antranílicos de fórmula (R)

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en la que R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen el significado indicado con anterioridad, según el procedimiento siguiente: un ácido de fórmula (R) es reducido para proporcionar el correspondiente alcohol bencílico. La función alcohólica del intermedio así obtenido es protegida selectivamente con el de dejar la función amino intacta. La anilina resultante es acilada con un derivado de ácido malónico. La función alcohólica anteriormente protegida es desprotegida, seguidamente es oxidada para proporcionar la función carbonilo correspondiente y el intermedio así obtenido es sometido a un procedimiento intermolecular, según una reacción conocida por el experto en la técnica con el nombre de condensación de Knovenagel, para proporcionar quinolonas carboxciladas de fórmula (Q) en las que R_{6} es un átomo de hidrógeno y R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen el significado indicado con anterioridad. La reducción del ácido en alcohol puede ser efectuada por medio de un hidruro metálico en un disolvente aprótico inerte en una temperatura comprendida entre 0ºC y 50ºC, y preferentemente por medio del hidruro mixto de litio y aluminio en tetrahidrofurano a temperatura ambiente. La protección del alcohol bencílico intermedio puede ser efectuada según los métodos generales conocidos por el experto en la técnica (Greene T. et coll., "Protective groups in Organic Synthesis", 2ª edición, Wiley, New York, 1991) o incluso con un cloruro de sililo en presencia de una base en un disolvente aprótico a una temperatura comprendida entre 0ºC y 50ºC y, preferentemente, por medio de cloruro de terc-butildifenilsililo en presencia de imidazol, en dimetilformamida a temperatura ambiente. La acilación puede ser efectuada con un derivado malónico como cloruro de etilmalonilo o malonato de metilo, en presencia de una base como trietilamina o 4-dimetilaminopiridina, en un disolvente aprótico como acetonitrilo, tetrahidrofurano o tolueno, a una temperatura comprendida entre 0ºC y 110ºC y, preferentemente, con cloruro de etilmalonilo en acetonitrilo a temperatura ambiente, en presencia de trietilamina. La desprotección puede ser efectuada según el grupo protector de alcohol bencílico previamente escogido (Greene, T.) y en el caso de éter sililados por medio de una fuente de ion fluoruro como fluoruro de cesio o de potasio en presencia de un agente de transferencia de fases, o incluso fluoruro de tetrabutilamonio, en un disolvente aprótico como tetrahidrofurano, a una temperatura comprendida entre 0ºC y 50ºC y, preferentemente, a temperatura ambiente. La oxidación puede ser efectuada en presencia de sales de cromo (VI) que portan ligandos piridilo, por medio de la reacción de Swern, o incluso por medio del complejo de piridina-trióxido de azufre en dimetil-sulfóxido en presencia de trietilamina y, preferentemente, por medio de dicromato de piridinio en diclorometano a temperatura ambiente. La condensación de Knoevenagel intramolecular se puede efectuar espontáneamente o en solución en presencia de una base y, preferentemente, en diclorometano en presencia de trietilamina a temperatura ambiente.

Los compuestos de fórmula (Q) en la que R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} tienen el significado indicado con anterioridad, pueden ser obtenidos a partir de aminoacetonas de fórmula (S)

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en la que R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} tienen el significado indicado con anterioridad, según el procedimiento siguiente: una aminofetona (S) es acilada con un derivado de ácido malónico y el intermedio así obtenido es sometido a un procedimiento intramolecular, según una reacción conocida por el experto en la técnica con el nombre de condensación de Knovenagel, para proporcionar quinolonas carboxiladas de fórmula (Q). La acilación puede ser efectuada con un derivado malónico como cloruro de etilmalonilo o malonato de metilo, en presencia de una base como trietilamina o 4-dimetilaminopiridina, en un disolvente aprótico como acetonitrilo, tetrahidrofurano o tolueno, a una temperatura comprendida entre 0ºC y 110ºC y, preferentemente, con cloruro de etilmalonilo en acetonitrilo a temperatura ambiente en presencia de trietilamina. La condensación de Knoevenagel intramolecular puede ser efectuada espontáneamente o en solución en presencia de una base y, preferentemente, en acetonitrilo en presencia de etilato de sodio a temperatura ambiente.

Las aminocetonas de fórmula (S) en las que R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} tienen el significado indicado con anterioridad, pueden ser obtenidas a partir de benzonitrilos orto-aminados de fórmula

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en la que R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen el significado indicado con anterioridad, mediante tratamiento con un reactivo de Grignard de fórmula R_{6}-MgX en la que X es un halógeno y R_{6} tiene el significado anterior, según métodos conocidos por el experto en la técnica.

Las aminocetonas de fórmula (S) en la que R_{6} es un radical arilo y R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen el significado indicado con anterioridad, pueden ser obtenidas a partir de ácidos antranílicos de fórmula (R) descrita con anterioridad, mediante tratamiento con cloruro de benzoilo a reflujo para proporcionar una benzoxazona que puede ser transformada en presencia de un reactivo de Grignard de fórmula R_{6}-MgX, en la que X es un halógeno y R_{6} es un radical arilo en la benzofenona ortoaminada correspondiente, la cual puede ser desbenzoilada por medio de reactivos como, por ejemplo, bromuro de hidrógeno, en solución en agua o en ácido acético glacial.

Las aminocetonas de fórmula (S) en las que R_{2}, R_{3}, R_{4}, R_{5} y R_{6} tienen el significado indicado con anterioridad, pueden ser obtenidas a partir de anilinas de fórmula (P) en las que R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen el significado indicado con anterioridad, según el procedimiento siguiente: el átomo de nitrógeno de una anilina de formula (P) es acilado con un agente que confiere un carácter orto-director en la reacción de metalación de los arilos, y el compuesto así obtenido es metalado, seguidamente tratado por medio de un aldehído de fórmula R_{6}-CHO en la que R_{6} tiene el significado anterior. El procedimiento es seguidamente completado mediante una oxidación del intermedio alcohólico así obtenido y seguidamente mediante una liberación de la función nitrogenada para proporcionar una aminocetona de fórmula (S). Para este procedimiento, el paso a la función orto-directora puede ser obtenido por medio de un tratamiento de una anilina (P) con un agente "director" y preferentemente por medio de dicarbonato de di-terc-butilo en un disolvente aprótico como tetrahidrofurano, dioxano o dimetoxietano a la temperatura de reflujo. La metalación puede ser obtenida mediante tratamiento con un reactivo litiado como terc-butil-litio, sec-butil-litio, mesitil-litio o en presencia de tetrametil-etilendiamina, n-butil-litio y preferentemente n-butil-litio en presencia de tetrametil-etilendiamina en un disolvente aprótico como tetrahidrofurano, dioxano o dimetoxietano, a una temperatura comprendida entre -80 y 0ºC. La oxidación puede ser efectuada en presencia de sales de cromo (VI) que porten ligandos piridilo, mediante la reacción de Swern, o incluso por medio del complejo de piridina-trióxido de azufre en dimetil-sulfóxido en presencia de trietilamina y, preferentemente, mediante dicromato de piridinio en diclorometano a reflujo. La función nitrogenada puede serobtenida mediante un tratamiento en medio ácido y, preferentemente, por medio de ácido trifluoroacético en diclorometano a temperatura ambiente.

Análogos de los compuestos intermedios del tipo de (N) se describieron anteriormente en particular en la solicitud WO 95/05427.

Los compuestos de fórmula (I_{A}) pueden ser obtenidos también mediante un procedimiento nuevo, caracterizado porque se trata un compuesto de fórmula (IV)

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en la que R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} tienen el significado indicado con anterioridad, en un medio fuertemente ácido, en presencia de una sal de hierro (III) y de un precursor del radical libre R_{6}, mediante una solución que contiene los radicales hidróxido o alcóxido.

Aunque la técnica anterior hace mención de la aplicación de una reacción similar a los análogos de camptotecina que contienen una \alpha-hidroxilactona (Sawada, S., et coll., Chem Pharm. Bull., (1991), vol. 39, pag. 2574); solicitud PCT WO 98/35940) su utilización para los análogos de camptotecina como los compuestos de fórmula (IV) que contienen una \beta-hidroxilactona no ha sido prevista y es inesperada, ya que en un medio fuertemente ácido una función hidroxilo ternaria y bencílica, en posición \beta con respecto a una función carboxílica, es generalmente eliminada para proporcionar la correspondiente olefina (Nagasawaa, et coll., Heterocycles 1989, vol. 28, pag. 703; Kimura, H. et coll., Chem. Pharm. Bull. 1982, vol. 30, pag. 552; Fujita, T. et coll., J. Appl Chem Biotechnol. 1982, vol. 32, pag. 421; Miller, R.E., et coll., J. Org. Chem. 1950, vol. 15, pag. 89; Fieser, L.F., et coll., J. Am. Chem. Soc. 1948, vol. 70, pag. 3209).

En el procedimiento anterior, el medio fuertemente ácido puede ser suministrado por ácidos como ácido trifluoroacético o ácido sulfúrico, acuoso o no acuoso y preferentemente ácido sulfúrico acuoso; la sal de hierro (III) será preferentemente sulfato de hierro (III) heptahidratado, y el precursor de radical libre, un aldehído de fórmula R_{6}-CHO. La solución que contiene radicales hidróxidos o alcóxidos puede ser suministrada por agua oxigenada o hidróxido de terc-butilo y, preferentemente, por agua oxigenada a 30 volúmenes.

Los compuestos de la presente invención poseen interesantes propiedades farmacológicas. De esta manera, los compuestos de la presente invención tienen una actividad inhibidora de la topoisomerasa I y/o II y una actividad antitumoral. El estado de la técnica sugiere que los compuestos de la invención presentan una actividad anti-parasitaria y/o anti-viral. Los compuestos de la presente invención pueden ser utilizados por tanto en diferentes aplicaciones terapéuticas.

Se encontrará con posterioridad, en la parte experimental, una ilustración de las propiedades farmacológicas de los compuestos de la invención.

Los compuestos pueden inhibir la topoisomerasa, por ejemplo de tipo I y/o II en un paciente, por ejemplo un mamífero como el hombre, mediante la administración a este paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz de uno de los compuestos de la invención.

Los compuestos de la invención poseen una actividad anti-tumoral. Pueden ser utilizados para el tratamiento de tumores, por ejemplo, tumores que expresan una topoisomerasa, en un paciente, mediante la administración a dicho paciente de una cantidad terapéuticamente eficaz de uno de los compuestos de la invención. Ejemplos de tumores o cánceres comprenden los cánceres de esófago, estómago, intestinos, recto, cavidad oral, faringe, laringe, pulmón, colon, mamas, cuello uterino, cuerpo endometrio, ovarios, próstata, testículos, vejiga, riñones, hígado, páncreas, huesos, tejidos conjuntivos, piel, por ejemplo, melanomas, ojos, cerebro y sistema nervioso central, así como cáncer de tiroides, leucemia, enfermedad de Hodgkin, linfomas distintos del de Hodgkin, mielomas múltiples y otros.

Pueden ser utilizados igualmente para el tratamiento de infecciones parasitarias mediante la inhibición de los hemoflagelatos (por ejemplo, en la tripanosomía o infecciones leishmania) o por inhibición de plasmodio (como por ejemplo en la malaria), pero también el tratamiento de infecciones o enfermedades virales.

Estas propiedades hacen que los compuestos de la invención sean adecuados para una utilización farmacéutica. La presente solicitud tiene igualmente por objeto, como medicamentos, compuestos de la invención de fórmula general (I_{A}) como se definió con anterioridad. La invencións e refiere igualmente a composiciones farmacéuticas que contienen, como principio activo, uno al menos de los medicamentos definidos con anterioridad.

La invención se refiere también a composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de la invención o una sal por adición de ácidos farmacéuticamente aceptable de este, en asociación con un soporte farmacéuticamente aceptable según el modo de administración escogido (por ejemplo, oral, intravenoso, intraperitoneal, intramuscular, transdermal o subcutáneo). La composición farmacéutica (por ejemplo, terapéutica) puede estar en forma sólida, líquida, de liposomas o de micelas lípidas.

La composición farmacéutica puede estar en forma sólida, por ejemplo, polvos, píldoras, gránulos, comprimidos, liposomas, cápsulas o supositorios. La píldora, el comprimido o la cápsula pueden estar revestidos con una sustancia capaz de proteger la composición de la acción de los ácidos gástricos o las enzimas en el estómago del sujeto durante un período de tiempo suficiente para permitir que esta composición pase sin ser digerida al intestino delgado de este último. El compuesto puede ser administrado también localmente, por ejemplo, en el lugar mismo del tumor. El compuesto puede ser administrado también según procedimientos de liberación prolongada (por ejemplo, una composición de liberación prolongada o una bomba de infusión). Los soportes sólidos apropiados pueden ser, por ejemplo, fosfato de calcio, estearato de magnesio, carbonato de magnesio, talco, azúcares, lactosa, dextrina, almidón, gelatina, celulosa, metil-celulosa, carboximetil-celulosa de sodio, polivinilpirrolidona y cera. Las composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de la invención pueden presentarse por tanto igualmente en forma líquida como, por ejemplo, soluciones, emulsiones, suspensiones o una formulación de liberación prolongada. Los soportes líquidos apropiados pueden ser, por ejemplo, agua, disolventes orgánicos como glicerol o glicoles como polietilenglicol, así como sus mezclas, en proporciones variadas, en agua.

La invención tiene igualmente por objeto la utilización de los compuestos de la invención para la preparación de medicamentos destinados a inhibir topoisomerasas y, más particularmente, topoisomerasas de tipo I o de tipo II, medicamentos destinados a tratar tumores, medicamentos destinados a tratar infecciones parasitarias así como medicamentos destinados a tratar infecciones o enfermedades virales.

La dosis de un compuesto según la presente invención, prevista para el tratamiento de las enfermedades o trastornos mencionados con anterioridad, varía según el modo de administración, la edad y el peso corporal del sujeto que va a ser tratado así como el estado de este último, y será definida en definitiva por el médico o veterinario encargado. Esta cantidad determinada por el médico o veterinario encargado se denomina en la presente memoria descriptiva "cantidad terapéuticamente eficaz".

A menos que sean definidos de otra manera, todos los términos técnicos y científicos utilizados en la presente memoria descriptiva tienen el mismo significado que el normalmente comprendido por un especialista ordinario en el campo al que pertenece esta invención.

Los ejemplos siguientes se presentan para ilustrar los procedimientos anteriores.

Parte experimental Ejemplo 1 (5R)-5-etil-11-fluoro-5-hidroxi-4,5,13,15-tetrahidro-1H, 3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolino-3,15-diona (no forma parte de la invención) Etapa 1a (3R)-3-(3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil)-3-hidroxi-pentanoato de quinidinio

Se trata 3-(3-benciloximetil-2-metoxi-4-piridil)-3-hidroxi-pentanoato de terc-butilo (obtenido según el método descrito en la solicitud de patente PCT WO 97/00876; 40 g; 100 mmol) por medio de ácido trifluoroacético (150 ml) y el medio de reacción se agita durante 18 h a 20ºC y seguidamente se concentra bajo presión reducida. El residuo, recogido por medio de una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (200 ml) se lava con diclorometano (2 x 100 ml) y la solución resultante se acidifica a pH = 1 con ácido clorhídrico 6 N y seguidamente se extrae con diclorometano (2 x 200 ml). Los extractos combinados se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran. La solución se seca sobre sulfato de magnesio y se concentra. El ácido racémico así obtenido (31,1 g; 90 mmol), recogido en alcohol lisopropílico (30 ml) se trata por medio de una solución de quinidina (29,2 g; 90 mmol) en alcohol isopropílico (30 ml) y la mezcla resultante se agita a 50ºC hasta una disolución completa. Se deja seguidamente que la temperatura descienda a 40ºC, se detiene la agitación y se deja enfriar a temperatura ambiente. El medio se lleva a 0ºC sin agitación y seguidamente se mantiene a esta temperatura durante 16 h. Se deja seguidamente subir la temperatura hasta 20ºC y se agita hasta cristalizar. El medio se diluye con alcohol isopropílico y seguidamente se filtra. El precipitado se aclara con alcohol isopropílico. La sal dextrógira precipita, mientras que la sal levógira permanece en solución en alcohol isopropílico. Se recoge el filtrado que se concentra para proporcionar el producto esperado. Un análisis por HPLC (columna CHIRAL-AGP de 5\mu (10 cm x 4 mm) eluida con una mezcla de alcohol isopropílico/agua/tampón de fosfato pH 6,5, 30/920/50 a un caudal de 1,2 ml/minuto, detección UV a 280 nm) puso de manifiesto un tiempo de retención de 6,4 minutos para la sal levógira y de 2,8 minutos para la sal dextrógira y una relación diastereoisómera de 83/17.

Etapa 1b (SR)-5-etil-5-hidroxi-1,3,4,5,8,9-hexahidrooxepino[3,4-c]piridin-2,9-diona, o (+)-EHHOPD

El residuo obtenido en la Etapa Ia es agitada durante 16 h a 20ºC en una mezcla de diclorometano (270 ml) y ácido clorhídrico 1 N (270 ml). Después de separar por decantación, la fase orgánica se concentra y el residuo se recoge en metanol (87 ml) para ser tratado en la fase siguiente. Esta solución es enfriada bajo nitrógeno sobre paladio al 10% sobre carbono húmedo al 50% (27,7 g; 13 mmol). El medio de reacción se agita durante 15 minutos y seguidamente se vierte en una solución de formiato de amonio (11,5 g; 183 mmol) en metanol (135 ml). El medio de reacción es agitado durante 30 minutos dejando evolucionar la temperatura y seguidamente se calienta a 40ºC durante 30 minutos. El medio se filtra seguidamente sobre un lecho de Clarcel y se concentra. Se vierte tolueno (40 ml) que se evapora y esta operación se repite con el fin de eliminar los restos de metanol. El residuo, recogido en tetrahidrofurano (45 ml) es tratado por medio de una solución de diciclohexilcarbodiimida (7,18 g; 34,5 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml). El medio de reacción se calienta a 50ºC durante 1 h y seguidamente se lleva a 20ºC y la diciclohexil-urea se filtra. El filtrado se concentra hasta sequedad y el residuo, recogido en acetonitrilo (46 ml) se trata por medio de yoduro de sodio (6,0 g; 40,5 mmol) y cloruro de trimetil-sililo (5,13 ml; 40,5 mmol). El medio de reacción se mantiene bajo agitación a temperatura ambiente durante 5 h y seguidamente se añade acetonitrilo (28 ml) y agua (5,6 ml). El precipitado obtenido se separa por filtración y seguidamente se recoge en agua (10 ml) y la mezcla obtenida se neutraliza por medio de una solución de amoníaco. El precipitado se separa por filtración y seguidamente se recoge en acetona (40ml) a la que se añade agua (150ml). Los cristales formados se separan por filtración y se secan para proporcionar 3 g de (+)-EHHOPD con una proporción enantiómera de 99,4/0,6. RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 0,8 (t, 3H); 1,65 (m, 2H); 3,00-3,35 (q, 2H); 5,3 (q, 2H); 5,7 (s, 1H); 6,35 (d, 1H); 7,3 (d, 1H); 11,7 (s, 1H).

Etapa 1c 2-amino-6-fluorofenilmetanol

Una solución bajo argón de ácido 2-amino-6-fluorobenzoico (5 g; 32 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (100 ml) se trata a temperatura ambiente por medio de hidruro de litio-aluminio (1 M en tetrahidrofurano; 64 ml; 64 mmol). El medio de reacción se agita durante 3 h y seguidamente se hidroliza a 0ºC por medio de una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (100 ml). La mezcla resultante se extrae con acetato de etilo (2 x 70 ml). Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio y seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran para proporcionar 3,8 g del producto deseado, un sólido blanco (p.f.: 93ºC).

IR (KBr): 784, 1001, 1471, 1591, 1621 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 4,44 (dd, 2H); 4,93 (t, 1H); 5,27 (s, 2H); 6,27 (t, 1H); 6,45 (d, 1h); 6,96 (1, 1H).

Etapa 1d 2-(3-fluoro-2-hidroximetilfenilcarbamoil)-acetato de etilo

Una solución de alcohol aminobencílico (obtenido en la etapa 1c, 3,8 g; 27 mmol) e imidazol (4,3 g; 64 mmol) en N,N-dimetilformamida (52 ml) se trata con cloruro de terc-butildifenilsililo (8,37 ml; 32 mmol). La mezcla resultante se agita durante 2 h a temperatura ambiente y seguidamente se añade agua (100 ml) y se extrae con acetato de etilo (2 x 60 ml). Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran. El intermedio sililado así obtenido (10 g) se recoge en acetonitrilo (52 ml) y seguidamente se añade trietilamina (4,5 ml; 32,4 mmol) a la solución, y la mezcla resultante se trata gota a gota con cloruro de etilmalonilo (4,15 ml; 32,4 mmol). La mezcla resultante se agita durante 2 h a temperatura ambiente y seguidamente se añade agua (100 ml) y se extrae con acetato de etilo (2 x 60 ml). Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran. El residuo (16 g) se recoge con tetrahidrofurano (50 ml) y se trata gota a gota con fluoruro de tetrabutilamonio (1 M en tetrahidrofurano; 27 ml; 27 mmol). La mezcla resultante se agita durante 1 h a temperatura ambiente, seguidamente se añade agua (100 ml) y se extrae con acetato de etilo (2 x 60 ml). Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran. La purificación del residuo por cromatografía a presión media (SiO_{2}, CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5) proporcionan 4,8 g de un sólido blanco (p.f.: 91ºC).

IR (KBr): 1472, 1542, 1589, 1657, 1719, 3282 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 1,19 (t, 3H); 4,14 (q, 2H); 4,55 (dd, 2H); 5,21 (t, 1H); 6,97 (t, 1H); 7,31 (dd, 1H); 7,53 (d, 1H).

Etapa 1e 5-fluoro-2-oxo-1,2-dihidro-3-quinolino-carboxilato de etilo

Una solución de derivado malónico (obtenido en la Etapa 1d; 4,8 g; 19 mmol) en diclorometano (280 ml) se trata con dicromato de piridinio (8,3 g; 22 mmol). La suspensión resultante se agita durante 4 h a temperatura ambiente y seguidamente se trata con trietilamina (30 ml; 220 mmol). El medio de reacción se agita a temperatura ambiente durante 16 h y seguidamente se concentra bajo presión reducida. La purificación del residuo por cromatografía a presión media (SiO_{2}, CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5) proporciona 2,1 g de un sólido amarillo (p.f.: 180ºC).

IR (KBr): 1441, 1498, 1655, 1747 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 1,31 (t, 3H); 4,28 (q, 2H), 7,06 (t, 1H); 7,16 (d, 1H); 7,61 (dd, 1H); 8,43 (s, 1h); 12,27 (s, 1H).

Etapa 1f 2-cloro-5-fluoro-3-quinolinocarboxilato de etilo

La quinolona (obtenida en la Etapa 1e; 2,1 g) se calienta a 80ºC en oxicloruro de fósforo (14 ml) hasta que la reacción se completa (control CCM: SiO_{2}, CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 95/5). La solución resultante se concentra seguidamente bajo presión reducida y el residuo se recoge con agua. El precipitado así formado se separa por filtración, se lava con agua hasta pH neutro y se seca bajo presión reducida en presencia de pentóxido de fósforo para proporcionar 1,8 g de un sólido blanco (p.f.: 97ºC).

IR (KBr): 1268, 1631, 1723 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 1,38 (t, 1h); 4,42 (q, 2H); 7,60 (t, 1H); 7,89 (d, 1h); 7,97 (dd, 1H); 8,92 (s, 1H).

Etapa 1g 2-cloro-5-fluoro-3-quinolilmetanol

Una solución de quinolinocarboxilato (obtenida en la Etapa 1f; 1,8 g, 6,7 mmol) en diclorometano (40 ml) bajo argón se trata gota a gota con hidruro de diisobutilaluminio (1 M en diclorometano; 20 ml; 20 mmol) a una temperatura mantenida a 10ºC por medio de un baño de agua con hielo. La mezcla de reacción se agita durante 1 h a temperatura ambiente y seguidamente se vierte sobre una solución de tartrato de sodio y de potasio al 20% (200 ml). La mezcla resultante se agita vigorosamente durante 1 h y seguidamente se filtra sobre celite. El filtrado se extrae con diclorometano (2 x 100 ml). Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran. La purificación del residuo por cromatografía a presión media (SiO_{2}, CH_{2}Cl_{2}/MeOH, 98/2) proporciona 450 mg de un sólido blanco (p.f.: 176ºC).

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 4,71 (d, 2H); 5,78 (t, 3H), 7,51 (t, 1H), 7,75-7,83 (m, 2H); 8,50 (s, 1H).

Etapa 1h (5R)-5-etil-11-fluoro-5-hidroxi-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolino-3,15- diona

Una solución de quinolilmetanol (obtenida en la Etapa 1g; 422 mg, 2 mmol), (+)-EHHOPD (obtenido en la Etapa 1b; 446 mg; 2 mmol) y trifenilfosfina (592 mg; 2,2 mmol) en N,N-dimetilformamida (8 ml) se trata gota a gota con azodicarboxilato de isopropilo (0,43 ml; 2,2 mmol). La mezcla de reacción se agita durante 16 h a temperatura ambiente. Seguidamente se añade agua (100 ml) y se extrae con acetato de etilo (2 x 100 ml). Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran bajo presión reducida. El residuo se purifica por cromatografía a presión media (SiO_{2}, AcOEt/heptano, 30/70). Una mezcla bajo argón del intermedio obtenido (325 mg; 0,78 mmol), trifenilfosfina (42 mg; 0,156 mmol), acetato de potasio (114 mg, 1,17 mmol), bromuro de tetrabutilamonio (276 mg; 0,86 mol) y acetato de paladio (0,078 mmol) se lleva a reflujo en acetonitrilo anhidro durante 16 h, seguidamente se enfría a temperatura ambiente y se concentra bajo presión reducida. El residuo se purifica por cromatografía a presión media (SiO_{2}, MeOH/CH_{2}Cl_{2}, 5/95) para proporcionar 80 mg del sólido esperado (p.f. > 250ºC).

IR (KBr): 1659, 1734, 3386 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 0,86 (t, 3H); 1,85 (q, 2H); 3,07 (d, 1H); 3,46 (d, 1H); 5,28 (s, 2H); 5,39 (d, 1H); 5,52 (d, 1h); 6,02 (s, 1H); 7,43 (s, 1H); 7,55 (t, 1H); 7,85 (1, 1H); 8,01 (d, 1H); 8,82 (s, 1H).

Ejemplo 4 (5R)-12-bencil-5-etil-5-hidroxi-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolino-3,15-diona (no forma parte de la invención) Etapa 4a 1-(2-aminofenil)-2-fenil-1-etanona

Una solución de 2-amminobenzonitrilo (4,25 g, 36 mmol) en dietil-éter anhidro (40 ml) a 0ºC se trata bajo argón con cloruro de bencil-magnesio (2 M en tetrahidrofurano; 50 ml; 100 mmol). El medio de reacción se mantiene bajo agitación durante 1 h a temperatura ambiente y seguidamente se hidroliza a 0ºC mediante la adición de ácido clorhídrico al 10%, se agita durante 1 h y se neutraliza con sosa. La mezcla resultante se extrae con acetato de etilo. Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio y seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran para proporcionar 3,5 g del producto deseado en forma de un sólido blanco (p.f.: 100-101ºC).

IR (KBr): 1469, 1612, 1725 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 4,25 (s, 2H); 6,53 (t, 1H); 6,74 (d, 1H); 7,2-7,35 (m,8H); 7,90 (d, 1H).

Etapa 4b 4-bencil-2-oxo-1,2-dihidro-3-quinolinocarboxcilato de etilo

Una solución de aminocetona (obtenida en la Etapa 4a; 13,5 g; 16 mmol) ytrietilamina (3,9 ml, 28 mmol) en acetonitrilo (66 ml) se trata a 10ºC gota a gota con cloruro de etilmalonilo (3,64 ml; 28 mmol). El medio de reacción se agita 16 h a temperatura ambiente y seguidamente se trata con etóxido de sodio, obtenido mediante disolución de sodio (0,4 g; 17 mmol) en etanol (25 ml). La mezcla resultante se agita durante 16 h a temperatura ambiente, seguidamente se añade agua (200 ml) y se extrae con diclorometano (2 x 100 ml). Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran. El residuo se recoge en etil-éter para proporcionar un precipitado que se recoge por filtración, se seca bajo presión reducida a 50ºC, para proporcionar el sólido esperado (p.f.: 230ºC).

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 1,19 (t, 3H); 4,17 (s, 2H); 4,27 (q, 2H), 7,13 (t, 1H); 7,15-7,20 (m, 1H); 7,20-7,40 (m, 5H); 7,49 (t, 1H); 7,69 (d, 1H); 12,15 (s, 1H).

Etapa 4c (5R)-12-bencil-5-etil-5-hidroxi-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolino-3,15- diona

Se aplica a la quinolona obtenida según la Etapa 4b y las Etapas 1f a 1h el modo operatorio del Ejemplo 1 anterior. Se obtiene un sólido (p.f. > 250ºC).

IR (KBr): 1578, 1655, 1751 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 0,87 (t, 3H); 1,87 (q, 2H); 3,05 (d, 1H); 3,49 (d, 1H); 4,65 (d, 1H), 4,70 (d, 1H); 5,20 (d, 1H); 5,25 (d, 1H); 5,39 (d, 1H); 5,52 (d, 1H); 6,06 (s, 1H); 7,15-7,30 (m, 5H); 7,41 (s, 1H); 7,67 (t, 1H); 7,83 (t, 1H); 8,16 (d, 1h); 8,28 (d, 1H).

Ejemplo 11 (5R)-5-etil-9,10-difluoro-5-hidroxi-12-fenil-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolixino[1,2-b]quinoli-no-3,15-diona (no forma parte de la invención) Etapa 11a 6,7-difluoro-2-fenil-4H-benzo[b][3,1]oxazin-4-ona

Una mezcla de ácido 2-amino-4,5-difluorobenzoico (3,46 g, 20 mmol) y clorur de benzoilo (56 ml; 480 mmol) se lleva a reflujo durante 16 h y seguidamente se vierte sobre una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (200 ml) y se agita a 80ºC durante 2 h. La mezcla resultante se extrae con diclorometano (2 x 100 ml). Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran bajo presión reducida. El residuo se recoge con etil-éter y el procipitado así formado se separa por filtración, se lava con etil-éter y se seca bajo presión reducida para proporcionar 3,2 g de un sólido blanco (p.f.: 154ºC).

IR (KBr): 1613, 1657, 3341, 3467 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 7,5-7,8 (m 3); 7,8-7,9 (m 1H); 8,1-8,3 (m, 1H).

Etapa 11b 2-benzoil-4,5-difluoro-1-fenilcarboxamido-benceno

Una suspensión de benzoxazina (obtenida en la Etapa 11a; 6,78 g; 26 mmol) en diclorometano (260 ml) se trata gota a gota bajo argón a -78ºC con bromuro de fenil-magnesio (3 M en etil-éter; 22 ml; 66 mmol). La mezcla resultante se agita a -78ºC durante 1 h y seguidamente se hidroliza mediante la adición de una solución acuosa saturada de cloruro de amonio (200 ml) y se extrae con diclorometano (2 x 100 ml). Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran bajo presión reducida. El residuo recogido en isopropil-éter proporciona cristales blancos que se separan por filtración y se secan. Se obtienen 7,3 g de producto (p.f.: 58-59ºC).

IR (KBr): 1423, 1537, 1599, 1682 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d6, \delta): 7,4-7,6 (m, 9H); 7,69 (d, 2H); 7,88 (dd, 1H).

Ejemplo 11c 2-amino-4,5-difluorofenil-fenilmetanona

Una solución de amino-cetona N-benzoilada (obtenida según la Etapa 11b; 7,3 g; 21,7 mol) en ácido acético glacial (300 ml) se trata con ácido bromhídrico al 48% (150 ml) y el medio de reacción se lleva a reflujo durante 10 h. Después de enfriar a temperatura ambiente, la mezcla resultante se concentra bajo presión reducida y seguidamente se recoge en una solución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (200 ml) y se extrae con acetato de etilo (2 x 100 ml). Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio, seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran bajo presión reducida. El residuo se recoge en pentano y el precipitado así formado se separa por filtración para proporcionar 4 g de un sólido amarillo claro (p.f.: 100-101ºC).

IR (KBr): 1514, 1563, 1645, 3372, 3482 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 6,83 (dd, 1h); 7,1-7,4 (m, 3H); 7,5-7,7 (m, 5H).

Etapa 11d (5R)-5-etil-9,10-difluoro-5-hidroxi-12-fenil-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]qui-nolin-3,15-diona

Se trata la aminocetona obtenida en la Etapa 11c según un procedimiento análogo al de la Etapa 4b. Se aplica a la quinolona obtenida las Etapas 1f a 1h del modo operatorio del Ejemplo 1 anterior. Se obtiene un sólido (p.f. > 250ºC).

IR (KBr): 1659, 1734, 3386 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 0,85 (t, 3H), 1,80 (q, 2H); 3,06 (d, 1H); 3,45 (d, 1H), 5,00 (d, 1H), 5,35 (d, 1H); 5,48 (d, 1H); 6,03 (s, 1H); 7,39 (s, 1H); 7,55-7,75 (m, 6H); 8,24 (dd, 1H).

Ejemplo 13 (5R)-12-butil-5-etil-9,10-difluoro-5-hidroxi-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-3,15-diona (no forma parte de la invención) Etapa 13a N-(3,4-difluorofenil)acetamida

Una mezcla de 3,4-difluoroanilina (50 ml; 500 mmol) y trietilamina (70 ml; 500 ml) en diclorometano (1,5 l) se enfría por medio de un baño con hielo. Se añade gota a gota anhídrido acético (71,5 ml; 750 mmol) y la mezcla de reacción se agita durante 1 h a temperatura ambiente. La mezcla obtenida se lava seguidamente de forma secuencial con agua, con una solución de bicarbonato de sodio al 10% y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La fracción orgánica, secada sobre sulfato de sodio, se concentra bajo presión reducida. El residuo se pone en suspensión en pentano, se filtra y se seca bajo presión reducida para proporcionar la anilida esperada, un sólido color beige (p.f.: 126-127,5ºC).

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 2,15 (s, 3H); 7,10-7,65 (m, 2H); 7,65-8,10 (m, 1H); 10,30 (pico largo, 1H).

Etapa 13b 2-cloro-6,7-difluoro-3-quinolino-carbaldehído

A un reactivo de Vilsmeyer, obtenido bajo argón con N,N- dimetilformamidaanhidra (34 ml; 440 mmol) enfriada por medio de un baño con hielo, tratada gota a gota con oxicloruro de fósforo (103 ml; 1,1 mol) y seguidamente agitada durante 0,5 h antes de dejar la temperatura subir hasta temperatura ambiente, se añade la acetanilida obtenida según la etapa 13a (32 g; 220 mmol). La mezcla así obtenida se agita a 70ºC durante 16 h y seguidamente se enfría a temperatura ambiente. El medio de reacción se vierte seguidamente gota a gota sobre una mezcla de agua-hielo (400 ml) y la mezcla resultante se agita durante 2 h. El precipitado obtenido se filtra y se lava con agua hasta pH neutro y seguidamente se seca bajo presión reducida en presencia de pentóxido de fósforo para proporcionar un sólido amarillo (p.f.: 226-229ºC).

IR (KBr): 888, 1061, 1262, 1507, 1691 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 8,17 (dd, 1H); 8,39 (dd, 1H); 8,97 (d, 1H); 10,34 (d, 1H).

Etapa 13c 2-cloro-6,7-difluoro-3-quinolilmetanol

Una suspensión de quinolinia-carbaldehído obtenida según la etapa 13b (9 g; 39 mmol) en metanol (400 ml) se trata con borohidruro de sodio (2 g; 53 mmol) a temperatura ambiente durante 0,5 h. El exceso de borohidruro se destruye por medio de ácido acético (2 ml) y el medio de reacción se concentra bajo presión reducida. El residuo, recogido en acetato de etilo (500 ml) se lava secuencialmente con una solución acuosa de bicarbonato de sodio al 10%, con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio. La fase orgánica, secada sobre sulfato de magnesio, se concentra bajo presión reducida. El residuo se recristaliza en 1,2-dicloroetano para proporcionar el quinolilmetanol esperado, un sólido color beige (p.f.: 166,5-167ºC).

IR (KBr): 871, 1038, 1253, 1513 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 4,67 (d, 2H); 5,80 (t, 1H); 8,01 (dd, 1H); 8,22 (dd, 1H); 8,48 (s, 1H).

Etapa 13d (5R)-5-etil-9,10-difluoro-5-hidroxi-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-3, 15-diona

Se trata el quinolilmetanol obtenido en la Etapa 13c con (+)-EHHOPD según el procedimiento de la Etapa 1h. Se obtiene un sólido blanco.

IR (KBr): 871, 1261, 1512, 1579, 1654, 1746 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 0,87 (t, 3H); 1,85 (m, 2H); 3,08 (d, 1H); 3,44 (d, 1H); 5,26 (s, 2H); 5,39 (d, 2H); 5,52 (d, 1H); 5,99 (s, 1H); 7,39 (s, 1H); 8,15 (dd, 1H); 8,23 (dd, 1H); 8,68 (s, 1H).

Etapa 13e (5R)-12-butil-5-etil-9,10-difluoro-5-hidroxi-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]qui-nolin-3,15-diona

El producto de la Etapa 13d (100 mg; 0,25 mmol) se disuelve en una mezcla de agua (1,33 ml) y ácido sulfúrico al 95% (1 ml). Se añade a esta solución sulfato de hierro (II) hpetahidratado (28 mg; 0,10 mmol), valeraldehído (0,17 ml; 1,60 mmol) y se enfría la solución resultante por medio de un baño con hielo. La mezcla de reacción se trata seguidamente gota a gota con peróxido de hidrógeno al 30% (0,38 ml; 1 mmol), se agita durante 5 h a temperatura ambiente y seguidamente se diluye con agua (50ml) y se extrae con diclorometano (4 x 50 ml). Los extractos combinados se lavan con agua y con una solución acuosa saturada de cloruro de sodio y seguidamente se secan sobre sulfato de magnesio y se concentran bajo presión reducida. El residuo se purifica por cromatografía a presión media (SiO, MeOH/CH_{2}Cl_{2}, 5/95) para proporcionar el sólido esperado (p.f. > 275ºC).

IR (KBr): 1656, 1748, 3385 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 0,85 (t, 3H); 0,94 (t, 3H); 1,47 (q, 2H); 1,64 (m, 2H); 1,83 (q, 2H); 3,05 (d, 1H); 3,16 (m, 2H); 3,47 (d, 1H); 5,27 (s, 2H); 5,39 (d, 1H); 5,52 (d, 1H); 6,05 (s, 1H); 7,35 (s, 1H); 8,13 (m, 1H); 8,32 (m, 1H).

Ejemplo 17 (5R)-5-etil-9,10-difluoro-5-hidroxi-12-(2-trimetilsililetil)-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino [1,2-b]quinolin-3,15-diona

El producto de la Etapa 13b se trata con 3-trimetilsililpropanal (obtenido según Sarkar, T.K., et coll., Tetrahedron (1990), vol. 46, pag. 1885) según un procedimiento análogo a la Etapa 13e para proporcionar el sólido esperado (p.f.: 276ºC).

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 0,14 (s, 9H); 0,86 (m, 5h); 1,83 (q, 2h); 3,07 (m, 3H); 3,46 (d, 1H); 5,26 (s, 2H); 5,40 (d, 1H); 5,51 (d, 1H); 6,06 (s, 1H); 7,34 (s, 1H); 8,14 (m, 2H).

Ejemplo 22 (5R)-5-etil-5-hidroxi-12-(2-trimetilsilil-etil)-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]aindolizino[1,2-b]quinolin-3,15-diona

La (5R)-5-etil-5-hidroxi-4,5,13,15-tetrahidro-1H, 3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-3,15-diona (obtenida según el procedimiento descrito en la solicitud de patente PCT WO 97/00876) se trata con 3-trimetilsililpropanal (obtenido según Sarkar, T.K., et coll., Tetrahedron (1990), col 46, pag. 1885) según un procedimiento análogo al de la Etapa 13e para proporcionar el sólido esperado (p.f. > 250ºC).

IR (KBr): 1655, 1753, 3420 cm^{-1}.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 0,11 (s, 9H); 0,88 (t, 3H); 0,91 (m, 2H); 1,89 (q, 2H); 3,07 (d, 1H); 3,12 (m, 2H); 3,47 (d, 1H); 5,25 (s, 2H); 5,33 (d, 1H); 5,41 (d, 1H); 5,54 (d, 1H); 6,02 (s, 1H); 7,39 (s, 1H); 7,73 (t, 1H); 7,82 (t, 1H); 8,15 (s, 1H).

Ejemplo 90 (5R)-5-etil-9-fluoro-5-hidroxi-3,15-dioxo-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-10-il-trifluorometanosulfonato (no forma parte de la invención)

La (5R)-5-etil-9-fluoro-5,10-dihidroxi-4,5,13,15-tetrahidro-1H, 3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]quinolin-3,15-diona (28 mg, obtenida según la Preparación 20 descrita en la solicitud de patente PCT WO 98/28304) en solución en DMF anhidra (5 ml) se trata a 0ºC con 1,1 equivalente de hidruro de sodio y seguidamente con 1,1 equivalente de N-feniltrifluorosulfonimida. El medio de reacción se mantiene bajo agitación durante 2 h a temperatura ambiente y seguidamente se vierte sobre agua con hielo y se extrae con acetato de etilo. La fase orgánica se seca y se evapora y seguidamente el residuo se recoge con éter y se separa por filtración para proporcionar el producto esperado.

RMN H^{1} (DMSO-d_{6}, \delta): 0,87 (t, 3H); 1,86 (q, 2H); 3,07 (d, 1H); 3,46 (d, 1H); 5,29 (s, 1h); 5,40 (d, 1H); 5,52 (d, 1H); 6,04 (s, 1H); 7,43 (s, 1H); 8,31 (d, 1H); 8,66 (d, 1H); 8,82 (s, 1H).

Estudio farmacológico de los productos de la Invención Procedimiento

Células HT29 de adenocarcinoma de colon humano son cultivadas en mono-capa a 37ºC en una atmósfera humidificada que contiene 95% de aire y 5% de CO_{2}, en un medio esencial modificado de Earle a 4,5 g/l (Gibco, Paisley, Reino Unido); completado con 10% de suero bovino fetal inactivado, glutamina 2 mM y 50 \mug/ml de gentamicina (Gibco, Paisley, Reino Unido).

Aproximadamente 2000 células son sembradas con el medio de cultivo anterior en pocillos de una microplaca (96 pocillos, fondo liso) e incubadas durante 24 h. Soluciones en N,N-dimetil-acetamida (DMA) de cada uno de los ejemplos de la invención, diluidas en el medio de cultivo de forma que la concentración final de DMA sea 0,1% (v/v) son añadidas a los cultivos en placa para obtener intervalos de concentración final de 1 x 10^{-13} a 1 x 10^{-5} M y las células son incubadas durante 72 h.

El reactivo de marcado WST1, (Boehringer, Mannheim, Alemania) es seguidamente añadido a cada pocillo a una concentración final de 9% y las células son incubadas durante 2 h a 37ºC. Esta etapa permite a la deshidrogenasa mitocondrial de las células vivas convertir la sal de tetrazolio anaranjada WST1 en formazano color púrpura. Las soluciones coloreadas resultantes son cuantificadas por detección de doble haz (450 y 690 nm) por medio de un espectrofotómetro multi-cubas de exploración.

Resultados

Los resultados expresados en la Tabla siguiente están expresados en términos de concentración inhibidora al 50% (IC_{50}, en nM) acompañados de un intervalo de confianza. Se aprecian las actividades inhibidoras de la proliferación de las células HT29 de adenocarcinoma de colon humano obtenidas con los ejemplos de la invención, siendo estas actividades, de forma inesperada, superiores a la actividad del compuesto de referencia, descrito en la solicitud de patente PCT WO 97/000876 (y correspondiente al compuesto I_{A} en el que R_{1} = Et, R_{2} = R_{3} = R_{4} = R_{5} = H, R_{6} = H).

	Actividad biológica
Ejemplo	IC_{50}(nM)	Intervalo de confianza
Referencia	30	24-39
11	12	7-21
13	8,5	4-16
17	5,0	1,7-16
22	8,6	3-26

Claims

1. Compuestos de fórmula general (I_{A})

23

en la cual

R_{1} representa un radical alquilo inferior;

R_{6} representa un radical -(CH_{2})mSiR_{7}R_{8}R_{9};

m es un número entero comprendido entre 0 y 6;

debiendo entenderse que cuando el término "inferior" se refiere a un radical alquilo, esto significa como máximo 6 átomos de carbono; o las sales de adición de estos últimos.

2. Compuestos según la reivindicación 1, en los que R_{1} representa un radical etilo.

3. Compuestos de formula I_{A} según la reivindicación 2, y que responden a una de las fórmulas siguientes:

(5R)-5-etil-9,10-difluoro-5-hidroxi-12-(2-trimetilsililetil)-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizi-
no[1,2-b]quinolin-3,15-diona;

(5R)-5-etil-5-hidroxi-12-(2-trimetilsililetil)-4,5,13,15-tetrahidro-1H,3H-oxepino[3',4':6,7]indolizino[1,2-b]qui-
nolin-3,15-diona.

4. Como medicamento, un compuesto de fórmula I_{A} según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, o una sal farmacéuticamente aceptable de dicho compuesto.

5. Composición farmacéutica que contiene, como principio activo, al menos un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3.

6. Utilización de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3, para la preparación de medicamentos destinados a inhibir topoisomerasas y, más particularmente, topoisomerasas de tipo I o de tipo II.

7. Utilización de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3, para la preparación de medicamentos antitumorales.

8. Utilización de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3, para la preparación de medicamentos antivirales.

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9. Utilización de un compuesto según una de las reivindicaciones 1 a 3, para la preparación de medicamentos antiparasitarios.