EA004786B1 - Применение (-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3-гидрокси-1-метил)пиперидинил]-4-бензопиран-4-она в качестве ингибитора пролиферации клеток гладких мышц - Google Patents
Применение (-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3-гидрокси-1-метил)пиперидинил]-4-бензопиран-4-она в качестве ингибитора пролиферации клеток гладких мышц Download PDFInfo
- Publication number
- EA004786B1 EA004786B1 EA200100742A EA200100742A EA004786B1 EA 004786 B1 EA004786 B1 EA 004786B1 EA 200100742 A EA200100742 A EA 200100742A EA 200100742 A EA200100742 A EA 200100742A EA 004786 B1 EA004786 B1 EA 004786B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- flavopiridol
- proliferation
- smooth muscle
- treatment
- chlorophenyl
- Prior art date
Links
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 15
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title description 14
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims abstract description 44
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 11
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000002513 implantation Methods 0.000 claims abstract description 3
- BIIVYFLTOXDAOV-YVEFUNNKSA-N alvocidib Chemical compound O[C@@H]1CN(C)CC[C@@H]1C1=C(O)C=C(O)C2=C1OC(C=1C(=CC=CC=1)Cl)=CC2=O BIIVYFLTOXDAOV-YVEFUNNKSA-N 0.000 claims description 82
- 229950010817 alvocidib Drugs 0.000 claims description 81
- 125000004182 2-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(Cl)=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 12
- 125000003386 piperidinyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- 230000003966 vascular damage Effects 0.000 claims description 7
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 claims 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 abstract description 12
- 231100000216 vascular lesion Toxicity 0.000 abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 230000006715 negative regulation of smooth muscle cell proliferation Effects 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 45
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 44
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 40
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 36
- 208000034827 Neointima Diseases 0.000 description 27
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 23
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 20
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 19
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 19
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 17
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 17
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 12
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 9
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 9
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 9
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 8
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 8
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 8
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 7
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 6
- 102000016736 Cyclin Human genes 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 108090000266 Cyclin-dependent kinases Proteins 0.000 description 5
- 102000003903 Cyclin-dependent kinases Human genes 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000008692 neointimal formation Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100025554 Serine/threonine-protein kinase SBK1 Human genes 0.000 description 3
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 150000004777 chromones Chemical class 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- 108091007914 CDKs Proteins 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- HWOWEGAQDKKHDR-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-6-(pyridin-3-yl)-2H-pyran-2-one Chemical compound O1C(=O)C=C(O)C=C1C1=CC=CN=C1 HWOWEGAQDKKHDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027271 40S ribosomal protein SA Human genes 0.000 description 1
- JCIDEANDDNSHQC-UHFFFAOYSA-N 4H-chromene Chemical compound C1=CC=C2CC=COC2=C1 JCIDEANDDNSHQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 101100333151 Arabidopsis thaliana EGC2 gene Proteins 0.000 description 1
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940123587 Cell cycle inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 102000008130 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010049894 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 102100031480 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710146526 Dual specificity mitogen-activated protein kinase kinase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101150114830 EGC1 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- 101000694288 Homo sapiens 40S ribosomal protein SA Proteins 0.000 description 1
- 101001024120 Homo sapiens Nipped-B-like protein Proteins 0.000 description 1
- 101001072338 Homo sapiens Proliferating cell nuclear antigen Proteins 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 229940124647 MEK inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000044589 Mitogen-Activated Protein Kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108700015928 Mitogen-activated protein kinase 13 Proteins 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 102100035377 Nipped-B-like protein Human genes 0.000 description 1
- 101800004937 Protein C Proteins 0.000 description 1
- 102000017975 Protein C Human genes 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 1
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 108050002653 Retinoblastoma protein Proteins 0.000 description 1
- 102220469221 S-adenosyl-L-methionine-dependent tRNA 4-demethylwyosine synthase TYW1B_E18A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 101150084547 SOK4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101800001700 Saposin-D Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 241000529895 Stercorarius Species 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000004004 carotid artery internal Anatomy 0.000 description 1
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- OTAFHZMPRISVEM-UHFFFAOYSA-N chromone Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C=COC2=C1 OTAFHZMPRISVEM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003026 cod liver oil Substances 0.000 description 1
- 235000012716 cod liver oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000013156 embolectomy Methods 0.000 description 1
- 230000008753 endothelial function Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 238000000556 factor analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 235000021323 fish oil Nutrition 0.000 description 1
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N flavone Chemical compound O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- -1 for example Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007954 growth retardant Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000006405 hereditary benign intraepithelial dyskeratosis Diseases 0.000 description 1
- 210000005119 human aortic smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003345 hyperglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006951 hyperphosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 238000003674 kinase activity assay Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 1
- VKRWRNVGVPSVLA-UHFFFAOYSA-N n,n'-bis(2-phenylphenyl)oxamide Chemical compound C=1C=CC=C(C=2C=CC=CC=2)C=1NC(=O)C(=O)NC1=CC=CC=C1C1=CC=CC=C1 VKRWRNVGVPSVLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PVRJOEAYRBQPLF-UHFFFAOYSA-N n-(2-hydroxypropyl)-n-(2-oxopropyl)nitrous amide Chemical compound CC(O)CN(N=O)CC(C)=O PVRJOEAYRBQPLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000013392 nude mouse xenograft model Methods 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 229940126701 oral medication Drugs 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000012660 pharmacological inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 description 1
- 108091005981 phosphorylated proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229940124606 potential therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000856 protein c Drugs 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000022983 regulation of cell cycle Effects 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
- A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
- A61K31/453—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
Abstract
Пролиферация клеток гладких мышц (КГМ) является определяющим компонентом формирования неоинтимы на многих моделях повреждения сосудов животных, а также при многих поражениях у людей. Ингибирование или подавление клеточного цикла с помощью методик переноса генов может блокировать пролиферацию КГМ и образование поражений на многих моделях на животных, хотя эти модели все же не применимы для лечения заболевания у людей. Флавопиридол является идентифицированным в последнее время сильным ингибитором циклинзависимых киназ, который можно вводить перорально. С учетом роли пролиферации клеток гладких мышц (КГМ) при сосудистых заболеваниях исследовано действие флавопиридола, недавно идентифицированного ингибитора циклинзависимых киназ, на рост КГМ in vitro и in vivo. Флавопиридол (75 нмоль/л) эффективно блокирует пролиферацию КГМ, этот эффект связан с понижающей регуляцией активности циклинзависимых киназ и экспрессии гена, связанного с клеточным циклом. Изучено действие флавопиридола на пролиферацию КГМ in vivo на модели повреждения сонной артерии крыс. Флавопиридол (5 мг/кг) снижал размер неоинтимы на 35 и 39% на 7 и 14 день, соответственно, после повреждения баллонным катетером. Флавопиридол может быть потенциальным терапевтическим средством при лечении поврежденных сосудов, богатых КГМ. 4-Н-1-Бензопиран-4-оновые производные ингибируют пролиферацию клеток гладких мышц при низких уровнях дозировки.
Description
Область изобретения
Данное изобретение относится к применению (-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8[4-(3-гидрокси-1 -метил)пиперидинил]-4Н-бензопиран-4-она (флавопиридола) в качестве ингибитора пролиферации клеток гладких мышц (КГМ).
Настоящее изобретение создано при поддержке Национальных институтов здоровья по грантам №№ НБ03658 и ΆΟ15234.
Предпосылки создания изобретения
Реакции клеток на повреждение сосудов дисфункция клеток, активация, дисдифференцировка, пролиферация и миграция - завершаются такими клиническими явлениями, как рестеноз, который возникает после баллонной ангиопластики и помещения стента для лечения атеросклеротических заболеваний у человека [1]. Пролиферация клеток гладких мышц (КГМ) является общим, и возможно объединяющим, признаком моделей поражений сосудов и КГМ является главным клеточным компонентом повреждений неоинтимы [2,3]. Возобновившийся интерес к ингибированию или подавлению пролиферации КГМ сопровождается повышенным применением стентов для лечения коронарных заболеваний, поскольку стентовый рестеноз почти полностью зависит от образования неоинтимы и гиперплазии КГМ [4]. Установлено, что только в 1997 году требовалось лечение такому большому количеству, как 100000 пациентов со стентовым рестенозом [5]; поэтому легко вводимый эффективный ингибитор гиперплазии КГМ дал бы глубокие клинические и экономические результаты [6].
Попытки подавить пролиферацию КГМ на моделях сосудистых повреждений или путем модуляции медиаторов пролиферативной реакции клеток, или путем непосредственного вмешательства в механизм клеточного цикла, позволили значительно проникнуть в сущность формирования неоинтимы. Развитие клеточного цикла является трудно контролируемым явлением, положительно регулируемым циклинзависимыми киназами (Сбк) и их циклиновыми регуляторными субъединицами [7], и отрицательно - ингибиторами Сбк и генами супрессора опухолей, такими как протеин ретинобластомы (ВЬ) и р53 [8]. Опосредуемая аденовирусом сверхэкспрессия эндогенных ингибиторов Сбк р21 и р27к1р1 или конститутивно активной формы ВЬ блокирует образование неоинтимы на модели повреждения сонной артерии крыс [9-11]; аналогичным образом, подавление активности фактора транскрипции Е2Р путем конкурентной сверхэкспрессии сходных сайтов связывания ДНК также ингибирует пролиферацию КГМ и образование неоинтимы [12]. Такие исследования подтверждают общую гипотезу о том, что ингибирование клеточного цикла является привлекательной целью для вмешательства в формирование повреждений сосудов.
Хотя генетические вмешательства способствуют вскрытию механизмов регуляции формирования неоинтимы, они страдают тем недостатком, что в настоящее время они являются клинически непригодными для лечения сосудистых заболеваний у людей. Водорастворимое низкомолекулярное соединение со специфическими регуляторными эффектами на клеточный цикл, особенно проявляющее активность при пероральном приеме, нашло бы широкое применение как в экспериментах, так и, потенциально, в клинике. Недавно идентифицированный флавон, флавопиридил, является ингибитором Сбк. который эффективно блокирует активность Сбк2, Сбс2 и Сбк4 [13-16]. В противоположность другим фармакологическим ингибиторам Сбк флавопиридол является выдающимся по своей специфичности в отношении киназ, доступности при пероральном приеме и своей активности, являясь эффективным в наномолярных концентрациях [16]. Эти уникальные свойства дают в результате благоприятный профиль побочного действия, что привело к испытанию флавопиридола в Ι-ой фазе клинических испытаний по лечению устойчивых неоплазм [17]. С учетом этих свойств была изучена способность флавопиридола ингибировать пролиферацию КГМ ίη νίίτο и после баллонного повреждения сонной артерии крыс. Было показано, что флавопиридол является сильным и селективным ингибитором развития клеточного цикла и что он останавливает пролиферацию КГМ как ίη νίνο, так и ίη νίίτο; кроме того, формирование неоинтимы эффективно блокируется пероральным приемом доз флавопиридола, ниже тех, которые, как известно, обладают токсическим действием на людей.
В настоящее время неожиданно обнаружено, что (-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)8-[4-(3 -гидрокси-1 -метил)пиперидинил]-4Нбензопиран-4-он является подходящим ингибитором пролиферации КГМ. Известно, что 4Н-1бензопиран-4-оновые производные пригодны для сдерживания роста опухолей. Однако, удивительно то, что 4Н-1-бензопиран-4-оновые производные согласно данному изобретению эффективно действуют как ингибиторы пролиферации КГМ при уровнях доз, меньших уровней доз, которые приходится использовать при сдерживании роста опухолей.
Соответственно, объектом данного изобретения является применение (-)-цис-5,7дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3 -гидрокси-1метил)пиперидинил]-4Н-бензопиран-4-она в качестве ингибиторов пролиферации клеток гладких мышц.
Фиг. 1. Действие флавопиридола на синтез
ДНК НА8МС. НА8МС в состоянии покоя обрабатывали в отсутствие (-) или в присутствии (+)
ЬРОР (10 нг/мл) указанными концентрациями флавопиридола (нмоль/л) в течение 24 ч. Включение ВгбИ в качестве меры пролиферации определяли с помощью анализа РР18А и выражали в виде процента включения в отсутствии обработки ЪРОР. *р<0,05, при сравнении с клетками, не подвергавшимися обработке. |р<0,05, по сравнению с обработкой ЪРОР в отсутствии флавопиридола. В.НА8МС обрабатывали ЪРОР (10 нг/мл), тромбином (2 Ед/мл) или носителем в присутствии и в отсутствии флавопиридола (75 нмоль/л) и определяли включение ВгбИ. *р<0,05, по сравнению с клетками, не подвергавшимися обработке. **р<0,05, по сравнению с обработкой одним ЪРОР. |р<0,05, по сравнению с обработкой одним тромбином.
Фиг. 2. Действие флавопиридола на пролиферацию НА8МС. НА8МС в состоянии покоя обрабатывали одним ЪРОР (10 нг/мл)(·), ЪРОР и флавопиридолом (75 нмоль/л) (·), или носителем (·) в течение указанного времени, и определяли число клеток после обработки. Результаты выражены в виде числа клеток на ячейку (х103).
Фиг. 3. Действие флавопиридола на циклинзависимую киназную активность на НА8МС. НА8МС в состоянии покоя обрабатывали одним ЪРОР (10 нг/мл), тромбином (2 Ед/мл) или носителем в присутствии или в отсутствии флавопиридола (75 нмоль/л) и количественно оценивали фосфорилирование гистона в качестве меры активности Сбк в отсутствии обработки ЪРОР. *р<0,05, при сравнении с клетками, не подвергавшимися обработке. **р<0,05, по сравнению с обработкой одним ЪРОР. |р<0,05, по сравнению с обработкой одним тромбином.
Фиг. 4. Регуляция флавопиридолом протеинов, связанных с клеточным циклом. НА8МС в состоянии покоя обрабатывали в отсутствии (-) или в присутствии (+) ЪРОР (10 нг/мл) тромбином (2 Ед/мл) и/или флавопиридолом (75 нмоль/л) в течение 24 ч. Иммуноблоттинг клеточных лизатов выполняли со специфическими антителами, распознающими циклин Ό1 (верхняя полоса), РПСА (средняя полоса) и фосфорилированными (рЕЪ) и гиперфосфорилированными (ррЕЪ) ЕЪ (нижняя полоса).
Фиг. 5. Действие флавопиридола на активность МАР киназы на НА8МС. НА8МС в состоянии покоя обрабатывали в отсутствии (-) или в присутствии (+) ЪРОР (10 нг/мл) тромбином (2 Ед/мл), рЭ98059 (30 мкмоль/л) и/или флавопиридолом (75 нмоль/л) в течение 30 мин. Уровни фосфорилированных Егк1 (рЕгк1) и Егк2 (рЕгк2) определяли с помощью иммуноблоттинга со специфическими к фосфорилированию антителами, распознающими оба протеина (верхняя полоса). Активность МАР киназы определяли с помощью анализа киназ в геле с использованием основного протеина миелина в качестве субстрата (нижняя полоса).
Фиг. 6. Жизнеспособность НА8МС после обработки флавопиридолом. НА8МС в состоя нии покоя обрабатывали флавопиридолом (75 нмоль/л), ФНО-П (50 нг/мл) или носителем в течение указанного времени. Выживаемость клеток оценивали по вытеснению трипанового синего. Результаты выражали в виде процента жизнеспособных клеток по отношению ко всем подсчитанным клеткам.
Фиг. 7. Подавление формирования неоинтимы сонной артерии крыс флавопиридолом после баллонного повреждения. Отношения неоинтим/среда определяли по гистологическим срезам сонных артерий крыс, обработанных флавопиридолом (5 мг/кг) или без него в течение 5 дней после повреждения. Артерии исследовали через 7 (п = 12) и 14 дней после повреждения. Дан также процент РЖ'А положительных ядер (± СКО, выраженный в виде процента подсчитанных ядер) в неоинтиме артерий по каждому пункту времени и группе обработки. *р<0,05, по сравнению с обработкой носителем.
Фиг. 8. Гистологические срезы с сонных артерий крыс. Срезы артерий проводились через 7 (полосы А и В) и 14 дней после повреждения. Артерии, показанные на полосах А и С, получены от крыс, обработанных флавопиридолом (5 мг/кг) путем введения через зонд; артерии на полосах В и Ό получены от крыс, обработанных одним носителем. Истинное увеличение х100.
Фиг. 9. Экспрессия Сбк2 после баллонного повреждения сонной артерии у крыс. Срезы являются срезами артерий через 7 (полосы А и В) и 14 (полосы С и Ό) дней после повреждения. Артерии, представленные на полосах А и С, получены от крыс, обработанных флавопиридолом (5 мг/кг) путем введения через зонд; артерии, представленные на полосах В и Ό, получены от крыс, обработанных одним носителем. Сбк2-положительные ядра, расположенные преимущественно в неоинтиме, окрашивают вектором синим с помощью щелочного фосфатазного метода. Истинное увеличение х100.
Подходящим 4-Н-1-бензопираном является (-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3гидрокси-1-метил)пиперидинил]-4Нбензопиран-4-он формулы
(-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3гидрокси-1-метил)пиперидинил]-4Н-бензопиран-4-он (флавопиридол) в форме гидрохлорида.
Соединения согласно изобретению могут быть получены, как описано в патенте США № 4900727 и в патенте США № 5284856, которые включены сюда для сведения. Примеры указанных патентов США также уместны для данной заявки.
Соединения согласно данному изобретению подавляют пролиферацию клеток гладких мышц. Следующим предметом данного изобретения, следовательно, являются также фармацевтические средства для подавления пролиферации клеток гладких мышц, которые содержат (-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3гидрокси-1-метил)пиперидинил]-4Н-бензопиран-4-он, определенный выше, или по меньшей мере одну из его фармакологически приемлемых солей присоединения кислот (кислотноаддитивных солей), и применение указанного соединения, определенного выше, для получения фармацевтического средства, обладающего действием, подавляющим пролиферацию клеток гладких мышц. Типичными областями применения для соединений согласно изобретению являются заболевания/расстройства/поражения, которые сопровождаются повреждениями сосудов, изобилующих клетками гладких мышц. Очень важным примером поэтому являются поражения после повреждения баллоном. Еще одной важной областью применения является профилактика рестеноза после имплантации стента.
(-)-Цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8[4-(3-гидрокси-1 -метил)пиперидинил]-4Н-бензопиран-4-он используют согласно данному изобретению в основном известным способом, который известен специалистам. Что касается фармацевтических средств, эффективное количество названного активного вещества применяется или само по себе или, предпочтительно, в сочетании с подходящими вспомогательными фармацевтическими веществами в форме таблеток, таблеток с покрытием, капсул, суппозиториев, эмульсий, суспензий или растворов, причем содержание активного соединения составляет до примерно 95%, предпочтительно между 10 и 75%.
Специалисту очевидно, исходя из собственных знаний, какие вспомогательные вещества являются подходящими для желаемой лекарственной формы фармацевтического препарата. Кроме вспомогательных веществ для таблеток или растворителей, образующих гель веществ, основ для суппозиториев и других эксципиентов для активного вещества можно использовать, например, антиоксиданты, диспергирующие агенты, эмульгаторы, пеногасители, агенты, улучшающие вкус, консерванты, солюбилизаторы и красящие вещества.
Активное вещество можно вводить перорально, парентерально, внутривенно или ректально, причем предпочтительно пероральное введение. Для перорального введения активное вещество может смешиваться с другими соединениями вместе с добавками, которые пригодны для данной цели, такими как наполнители, стабилизаторы или инертные разбавители, и могут использоваться обычные методы для придания ему подходящих для приема лекарственных форм, таких как таблетки, таблетки с покрытием, твердые желатиновые капсулы и водные спиртовые или масляные суспензии или растворы. Примерами инертных эксципиентов или наполнителей, которые могут использоваться, являются аравийская камедь, оксид магния, лактоза, глюкоза или крахмал, в частности кукурузный крахмал. В данном контексте готовая форма препарата может быть изготовлена в виде сухих гранул или влажных гранул. Примерами подходящих масляных эксципиентов или растворителей являются растительные или животные масла, такие как подсолнечное масло или рыбий жир (масло из печени трески).
Для подкожного или внутривенного введения, изготавливают раствор, суспензию или эмульсию активного вещества, если это уместно, с использованием веществ, которые обычны для данной цели, таких как солюбилизаторы, эмульгаторы или другие вспомогательные вещества. Примерами подходящих растворителей являются вода, физиологический раствор хлорида натрия или спирты, например этанол, пропанол или глицерин, а также растворы сахаров, такие как растворы глюкозы или растворы маннита, или смесь различных растворителей, которые были упомянуты.
Доза, (-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3-гидрокси-1-метил)пиперидинил]4Н-бензопиран-4-она, которую нужно вводить в сутки, должна быть выбрана так, чтобы обеспечить желаемый эффект. (-)-Цис-5,7-дигидрокси2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3-гидрокси-1-метил)пиперидинил]-4Н-бензопиран-4-он можно вводить в дозе, которая менее 70%, предпочтительно менее 60%, в частности менее 50% дозировки, которая используется для сдерживания роста опухоли у соответствующего млекопитающего. Примером была бы - на модели ксенотрансплантата голых мышей - доза, равная примерно 5 мг/кг веса тела, вводимая перорально один раз в сутки. Это составляет половину дозы, которая подавляет рост опухоли на той же самой модели животных (Эгеек с1 а1., С1ш. Сапсег Век., 1997, 3: 273-279).
Фармакокинетические свойства 4Н-1бензопиран-4-оновых производных могли бы сделать необходимым введение указанного соединения несколько раз в сутки или выбор лекарственных форм с медленным освобождением.
Примеры
1. Флавопиридол подавляет пролиферацию клеток гладких мышц и образование неоинтимы ίη νίνο на модели повреждения сосудов - повреждения сонной артерии крыс. Вполне установленную модель повреждения сонной артерии крыс, на которой образование повреждений неΊ оинтимы после вызванного с помощью катетера повреждения решающим образом зависит от пролиферации КГМ (С1о\\'ек с1 а1., ЬаЬ. Ιηνβκΐ., 1983; 49:327-333, Скшек е1 а1., С1гс. Век., 1985; 56:139-145), использовали для проверки того, вызывает ли флавопиридол остановку роста КГМ ίη νίνο, как это происходит ίη νίίτο. Флавопиридол вводят перорально в дозе 5 мг/кг один раз в сутки, начиная со дня повреждения и в течение четырех дней после, поскольку данный период времени охватывает первоначальную индукцию Сбк2 и первую волну пролиферации ЗМС на данной модели (С1гс. Век., 1995; 77:445465, С1гс. Век., 1997; 80:418-426). Области средней интимы и медиальные области оценивали количественно через 7 и 14 дней после повреждения, и размер повреждения неоинтимы выражали в виде отношения площади неоинтимы к медиальной площади. В каждой из групп, получавших лечение и не получавших, было по двенадцать животных. Отношение на 7 день составляло 1,00+/-0,05 в артериях крыс, обработанных носителем, и 0,65+/-0,04 в артериях крыс, получавших флавопиридол, снижение равно 35%. На 14 день отношение неоинтима/медиальная область составляло 1,08+/-0,04 у крыс, получавших носитель, и 0,66+/-0,03 у крыс, получавших флавопиридол, снижение равно 38,9%. Эти эффекты были статистически значимы для обоих временных точек (Р < 0,05).
Методы
Материалы. Флавопиридол (Б86-8275, (-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3гидрокси-1-метил)пиперидинил]-4Н-бензопиран-4-он) получали от НоесНк! Мапоп Воикке1, 1пс. и растворяли в диметилсульфоксиде для получения стандартного исходного раствора 50 ммоль/л для экспериментов с культурой клеток или в воде для экспериментов ίη νί\Ό. Основной фактор роста фибробластов (ЬРОР) закупали у
С.о11аЬога1Р'е ВюсНеписак а тромбин у 8щта. Ингибитор МЕК1 ΡΌ98059 получали от Иете Епдкшб Вю1аЬк.
Культура клеток. Клетки гладких мышц аорты человека (НАЗМС) получали от ОонеЕск и культивировали, как описано ранее [18]. Использовали клетки пассажей 5-9. Перед выполнением экспериментов рост клеток останавливали после достижения мутности 80% в течение 48 ч средой, содержащей 0,2% плодной бычьей сыворотки.
Пролиферация клеток ЕБ18А. Пролиферацию клеток определяли с помощью анализа ЕЫ8Л (Ашеткйаш ЫРе Заемсе). НАЗМС выращивали в покрытых желатином 96-ячеечных планшетах и переводили в состояние покоя. Клетки обрабатывали 10 нг/мл ЬРОР, 2 Ед/мл тромбина или носителем в течение 24 ч. Флавопиридол (75 нмоль/л) вводили за 1 ч до обработки фактором роста. Добавляли 5-бром-2'дезоксиуридин (ВтбИ) до конечной концентрации 10 мкмоль/л в течение последних 2 ч обработки. Включение ВтбИ определяли, как описано [19]. Результаты выражали в виде среднего ±
СКО для 12 образцов на каждый режим из двух независимых экспериментов.
Подсчет клеток. НАЗМС с остановленным ростом, выращенные до достижения 50% мутности в 6-ячеечных планшетах, обрабатывали носителем с флавопиридолом (75 нмоль/л) или без него, или ЬРОР (10 нг/мл). С интервалами после обработки клетки обрабатывали трипсином и определяли число клеток с использованием гемоцитометра.
Вестерн-блот анализ. НАЗМС в состоянии покоя обрабатывали носителем в присутствии или в отсутствии факторов роста и/или флавопиридола, как указано. Вестерн-блот анализ выполняли как описано ранее [18]. Первичными антителами были: поликлональные антитела к человеческому циклину Ό1 (М-20, 8аШа Стих), моноклональные антитела (РС10, 81дша) к человеческому ядерному антигену пролиферирующих клеток (РСИА), моноклональные антитела к специфичной для фосфорилирования р44/42 (Егк1/Егк2) МАР киназе (Иете Егщкшб Вю1аЬк) и моноклональные анти-ВЬ антитела (03-245, РЬагтщеп), которые распознают фосфорилированный (рВЬ) и высокофосфорилированный (ррВЬ) виды ВЬ. Для иммуноблоттинг исследований эксперименты повторяли, по меньшей мере, три раза.
Активность Сбк. НАЗМС в состоянии покоя обрабатывали агонистами и ингибиторами в течение 24 ч и получали полные лизаты клеток, как описано для Вестерн-блоттинга. Анализ киназ выполняли с помощью набора для анализа киназной активности гистона Ц (Ирк1а1е Вю1ес111'1о1оду). следуя инструкциям производителя. Вкратце, 10 мкл пептидных ингибиторов для протеинкиназы С (2 мкмоль/л) и протеинкиназы А (2 мкмоль/л), 100 мкг лизата клеток, 10 мкл буфера для анализа и 10 мкл смеси, содержащей 75 мкмоль/л хлорида магния, 500 мкмоль/л АТФ и 1 мкКи/мл [у-32Р]АТФ смешивали в микроцентрифужной пробирке. После инкубации при 30°С в течение 10 мин аликвотные образцы наносили пипеткой на фосфоцеллюлозные бумажки. Бумажки промывали 0,75% фосфорной кислотой с последующим подсчетом расп/мин в сцинтилляционном счетчике (Вескшац). Результаты выражали в виде среднего ± СКО по трем образцам и являются показателями трех независимых экспериментов.
Анализ киназ в геле. НАЗМС в состоянии покоя обрабатывали факторами роста в течение 30 мин и полные лизаты клеток получали, как описано для Вестерн-блоттинга. В некоторых экспериментах НАЗМС предварительно обрабатывали в течение 60 мин 30 мкмоль/л ΡΌ98059, флавопиридолом или носителем. Равные количества протеинов (50 мкг/полосу) разделяли на полиакриламидном геле, который был сополимеризован с 350 мкг/мл миелинового основного протеина. Гель обрабатывали [γ-32Ρ]ΑΤΦ и выполняли ауторадиографию, как описано [19].
Вытеснение трипанового синего. НА8МС выращивали в 5-см чашках до низкой мутности и останавливали рост, как описано. Клетки обрабатывали флавопиридолом (75 нмоль/л) или фактором некроза опухоли-□ (ФНО- ; 50 нг/мл) в указанные сроки. После удаления среды в чашки добавляли 0,4% раствор трипанового синего в фосфатно-буферном физиологическом растворе. Через 5 мин клетки в чашках подсчитывали под микроскопом. Синие клетки считали как нежизнеспособные клетки.
Модель повреждения сонной артерии крыс. Повреждение сонной артерии крыс производили, по существу, как описано [2]. Взрослым крысам-самцам 8ртадие-ОаМеу (400-500 г, Ζίνίο-ΜίΙΙοΓ) производили анестезию внутрибрюшинной инъекцией кетамина (2 мг/кг) и ксилазина (4 мг/кг). Затем в левую внутреннюю сонную артерию вставляли катетер 2Б для эмболэктомии. Баллон наполняли физиологическим раствором соли и продвигали по артерии три раза для получения повреждения растяжением и денудацией (снятием поверхностного слоя с сосуда). Правую сонную артерию оставляли неповрежденной и она служила в качестве контроля повреждения у каждого животного. Сразу же после того, как крысы оправились от анастезии и в течение четырех дополнительных дней после этого крысам вводили флавопиридол (5 мг/кг в воде) через зонд слепым способом. Все крысы пережили хирургическое вмешательство, и не было явных признаков токсичности, связанных с введением лекарственного средства в применяемых дозах. Через определенные интервалы времени после повреждения сонной артерии крысам делали анестезию, как описано выше, и системно фиксировали перфузией 4% параформальдегида в фосфатно-буферном физиологическом растворе. Правую и левую сонные артерии удаляли и растягивали инъекцией 4% параформальдегида через просвет, после чего их дегидратировали и хранили в 70% этаноле при 4°С.
Иммуногистохимическое исследование выполняли, как описано ранее [18], используя моноклональные антитела к РСИА и поликлональные антитела к человеческому С6к2 (М2-С, 8аи1а Стих).
Анализ изображения. Крайние дистальные и проксимальные области каждой артерии (примерно 500 мкм) удаляли. От каждой артерии анализировали десять промежуточных поперечных срезов (8 мкм каждый), взятых с отступом в 500 мкм. Срезы фиксировали и окрашивали гематоксилином и эозином, как описано ранее. С использованием микроскопа Νί1<οη ΌίαρΙιοΙ 300 и объектива 4х, каждый срез фиксировали в виде цифрового изображения, используя видеокамеру Нататайи С5985 и ТСРго 2.41 (Согесо, 1пс). Медиальные области и области неоинтимы определяли, используя программу ΝΙΗ 1таде. Медиальные границы и границы неоинтимы определяли с помощью прибора для просмотра слайдов (А.М.) и подтверждали слепым методом с помощью второго прибора (С.Р.). Размер повреждения выражали в виде отношения неоинтима/медиальная область. Результаты для каждой группы выражали как среднее ± СКО. 92% или более изображений были интерпретируемыми в каждой группе; остальные страдали артефактами от фиксации и не анализировались.
Статистический анализ. Когда уместно, данные количественных исследований выражали как среднее ± СКО. Для многих групп, получавших лечение, применяли факторный дисперсионный анализ ΑΝΟνΑ с последующим критерием наименьшего различия Фишера. Статистически значимым принимали результат при р<0,05.
Результаты
Флавопиридил подавляет пролиферацию НА8МС. На основе способности флавопиридола подавлять пролиферацию ряда разнообразных линий клеток опухолей проведено испытание на гипотезу о том, что его применение должно блокировать рост первичной культуры человеческих КГМ. НА8МС с задержанным ростом обрабатывали митогеном КГМ ЬБСБ (10 нг/мл) в течение 24 ч в присутствии повышающихся концентраций флавопиридола и пролиферацию оценивали с помощью анализа ЕЫ8А. В сравнении с необработанными клетками пролиферация обработанных ЬБСБ клеток повышалась в 5,4 раза (фиг. 1А). Предварительная обработка в течение 1 ч такой небольшой концентрацией флавопиридола как 50 нмоль/л значительно снижала пролиферацию НА8МС (до 3,9 раз, р<0,05), эффект, который был примерно максимальным при концентрациях, равных 75 нмоль/л. Подобные результаты были получены с использованием поглощения тимидина как независимой меры синтеза ДНК (не показано).
Чтобы испытать всеобщность эффектов флавопиридола на пролиферацию КГМ исследовали его действие на митогенез, вызванный тромбином (2 Ед/мл), который действует через связанные с протеином С рецепторы, при сравнении с ЬБСБ, который стимулирует представители рецепторов тирозинкиназного семейства. Флавопиридол (75 нмоль/л) значительно и сильно подавлял пролиферацию НА8МС, вызванную как ЬБСБ, так и тромбином (5,4кратное по сравнению с 1,8-кратным и 2,4кратное по сравнению с 0,7-кратным, соответственно р<0,05, фигура 1В). Производили подсчет клеток для подтверждения того, что действие флавопиридола на развитие клеточного цикла на НА8МС действительно отражает изменения пролиферации. ЬБСБ (10 нг/мл) вызывает 3кратное увеличение числа клеток после 3 дней обработки (фиг. 2). Подобно результатам, на блюдаемым при исследованиях на основе ЕЬ18А, флавопиридол (75 нмоль/л) эффективно блокировал пролиферацию, вызванную ЬЕОЕ.
Флавопиридол подавляет активность Сбк и экспрессию гена, связанного с клеточным циклом в НА8МС. Чтобы оценить специфическое действие флавопиридола на механизм клеточного цикла, определяли киназную активность гистона Н1 в лизатах клеток НА8МС, стимулированных фактором роста. Фосфорилирование гистона Н1 отражает активность Сбе2 и Сбк2 [20]. Обработка НА8МС ЬЕОЕ и тромбином приводила к 4,4-кратному и 3,6-кратному увеличению, соответственно, киназной активности гистона Н1 (фиг. 3). Данные увеличения активности циклинозависимых киназ полностью блокировалось предварительной обработкой флавопиридолом (75 нмоль/л).
С помощью Вестерн-блот анализа устанавливали также, влияет ли флавопиридол на вызываемую фактором роста регуляцию протеинов, связанных с клеточным циклом в НА8МС. Циклин Ό1 является циклином фазы С1, который регулируется в сторону повышения стимуляцией фактором роста и быстро разрушается при выходе из клеточного цикла [21]. Уровни протеина циклина Ό1 регулировались в сторону увеличения в 6,3 раза и 3,2 раза, соответственно, в ответ на обработку ЬЕОЕ и тромбином в течение 24 ч (фиг. 4), эффект, который мог быть полностью блокирован предварительной обработкой флавопиридолом. Подобным же образом повышенная экспрессия ΡΟΝΛ. которая синтезируется преимущественно во время фазы 8 в связи с репликацией ДНК [22], также блокировалась предварительной обработкой флавопиридолом. В качестве конечной меры связанных с клеточным циклом протеинов проверяли фосфорилирование ВЬ в ответ на экспрессию фактора роста с использованием антител, которые распознают фосфорилированный ВЬ. ВЬ является регулятором клеточного цикла, который связывается с фактором транскрипции Е2Е и инактивирует его, когда ВЬ находится в нефосфорилированном состоянии [23] и вызывает остановку роста КГМ ίη νίνο [11]. Фосфорилирование инактивирует ВЬ и дает возможность продолжаться развитию 8 фазы. Анализ фосфорилирования ВЬ особенно значим, поскольку ВЬ является мишенью Сбк2 и Сбк4 ίη νίνο. Гиперфосфорилирование ВЬ, индуцированное как тромбином, так и ЬЕОЕ - действие, которое подавляется флавопиридолом. Взятые вместе, данные результаты указывают на то, что флавопиридол влияет на экспрессию и активность 01 и на элементы регуляции клеточного цикла, связанные с фазой 8 на НА8МС, в сочетании с его ингибирующим рост действием.
Флавопиридол не оказывает действия на фосфорилирование или активность МАР киназы. Чтобы подтвердить, что флавопиридол специфически действует на уровне клеточного цикла, а не неспецифично на предшествующие пути киназного метаболизма, определяли фосфорилирование и активность Егк, (р44 МАР киназа) и Егк2 (р42 МАР киназа), двух представителей семейства МАР киназ. Эти киназы выбрали потому, что они непосредственно предшествуют событиям транскрипции, происходящим в ответ на стимулы роста и действуют после ряда критических или определяющих метаболических путей митогенной индукции [24]. Интактная реакция на МАР киназы указывает, что предшествующие митогенные пути также не затронуты. Статус фосфорилирования Егк1 и Егк2 определяли с помощью моноклональных антител, которые специфично распознают фосфорилированные и, следовательно, активированные формы. В качестве контроля в этих экспериментах использовали РЭ98059, сильный и селективный ингибитор активации МАР киназы. Повышенные количества фосфорилированных Егк1 и Егк2 определяли после обработки НА8МС тромбином и ЬЕОЕ в течение 30 мин в сравнении с необработанными клетками (фигура 5, верхняя полоса). Фосфорилирование Егк1 и Егк2 как тромбином, так и ЬЕОЕ блокировалось предварительной обработкой РЭ98059, но не флавопиридолом. Чтобы подтвердить эти данные, определяли активность Егк1 и Егк2 анализом киназ в геле (фиг. 5, нижняя полоса). И снова было обнаружено, что активность Егк1 и Егк2 повышалась в ответ на действие тромбина и ЬЕОЕ - действие, которое подавлялось РЭ98059, но не флавопиридолом. Эти эксперименты в сочетании с экспериментами, представленными на фиг. 3 и 4, предоставляют свидетельства того, что действие флавопиридола на пролиферацию НА8МС связано со специфической остановкой механизма клеточного цикла путем блокирования активности Сбк без воздействия на предшествующие события активации.
Флавопиридол не снижает жизнеспособность НА8МС. Предшествующие сообщения о действии флавопиридола на другие типы клеток показали, что в зависимости от линии клеток флавопиридол может или вызвать остановку роста без влияния на жизнеспособность, или может вызвать апоптоз [16,26-29]. Поэтому произведена оценка того, снижает ли флавопиридол жизнеспособность НА8МС путем измерения вытеснения трипанового синего через разные периоды времени после обработки. НА8МС в состоянии покоя обрабатывали флавопиридолом (75 нмоль/л), носителем или ФНО□ (50 нг/мл), цитокином, который, как известно, вызывает апоптоз у этого типа клеток 30. В то время, как ФНО-' сильно снижает жизнеспособность НА8МС, приводя к гибели по существу всех обработанных клеток в течение 24 ч, флавопиридол не обладал таким действием (фиг. 6). Замечено, что при более высоких концентрациях и более продолжительной инкуба13 ции может происходить некоторое снижение жизнеспособности в присутствии флавопиридола (не показано). Однако, в условиях испытания флавопиридол непосредственно вызывает остановку роста без влияния на жизнеспособность.
Флавопиридол ингибирует пролиферацию клеток гладких мышц и формирование неоинтимы ίη νίνο на модели поражения сосудов повреждения сонной артерии крыс. Использовали хорошо установленную модель повреждения сонной артерии крыс, при которой формирование поражения после вызванного катетером повреждения решающим образом зависит от пролиферации КГМ [2, 3], для оценки того, вызывает ли флавопиридол остановку роста КГМ ίη νίνο, как он это делает ίη νίΐτο. Флавопиридол вводили перорально в дозе 5 мг/кг один раз в сутки, начиная со дня нанесения повреждения и в течение четырех дней после, так как этот период времени охватывает первоначальную индукцию Сбк2 и первую волну пролиферации КГМ на данной модели [31, 32]. Средние площади интимы и медиальную площадь оценивали количественно через 7 и 14 дней после повреждения, и размер поражения неоинтимы выражали как отношение площади неоинтимы к медиальной площади. В каждой из групп, получавшей препарат и не получавшей, было по двенадцать животных. Отношение неоинтима/медиальная часть через 7 дней составляло 1,00±0,05 в артериях крыс, получавших носитель, и 0,65±0,04 в артериях крыс, получавших флавопиридол, снижение равно 35,0% (фиг. 7). Через 14 дней отношение неоинтима/медиальная часть составило 1,08±0,04 у крыс, получавших носитель, и 0,66±0,03 у крыс, получавших флавопиридол, снижение равно 38,9%. Эти эффекты статистически значимы для обоих интервалов времени (р<0,05). Срезы типичных примеров артерий показаны на фиг. 8.
Чтобы непосредственно продемонстрировать то, что флавопиридол подавлял пролиферацию КГМ, окрашивали срезы на экспрессию ΡΟΝΑ в типичных полях для каждой артерии и определяли процент положительных на ΡΟΝΆ ядер в неоинтиме. Через 7 дней 31,1±7,2% ядер в поврежденных артериях от крыс, не получавших препарата, были ΡСNΑ-положительными, тогда как у получавших флавопиридол крыс только 11,8 ± 1,5% поврежденных артерий были положительными на ΡΟΝΑ (фиг. 7; р<0,05). Через 14 дней ΡСNΑ-положительные ядра присутствовали в 10,4±2,0% клеток неоинтимы от получавших препарат, но только в 4,2±0,5% клеток неоинтимы из поврежденных артерий от крыс, не получавших препарата (р<0,05). (Положительные на ΡΟΝΑ ядра редко наблюдались в неповрежденных артериях независимо от воздействия). Подобным же образом Сбк2положительные клетки были значительно менее обычными в неоинтиме у получавших флавопиридол крыс (фиг. 9, полосы А и С) по сравне нию с артериями от крыс, не получавших препарата (полосы В и Ό) на как 7, так и 14 дни после повреждения.
Обсуждение
В данном исследовании проведена оценка того, является ли новый ингибитор Сбк. флавопиридол, наиболее сильный и специфичный известный ингибитор Сбк, подходящим кандидатом для подавления пролиферации КГМ ίη νίνο, в частности, на фоне повреждения сосудов. Предыдущие попытки терапевтически установить мишень в механизме клеточного цикла для лечения сосудистых заболеваний дали логическое обоснование для данных исследований [912]; однако, методы, использованные для этой цели, опирались на технологии переноса генов для подавления развития цикла. В настоящее время труднопреодолимые помехи препятствуют клиническому применению этих методик [33]. В ходе этих исследований сообщалось, что СУТ-313, недавно идентифицированное соединение, которое также обладает подавляющими Сбк свойствами, но в микромолярных концентрациях, также может подавлять формирование неоинтимы; однако, СУТ-313 потребовалось вводить капельно в сонную артерию во время повреждения, чтобы получить этот эффект [34]. В противоположность этому показано, что флавопиридол при пероральном введении может сильно подавлять формирование неоинтимы до степени, сравнимой с действием других клинически значимых средств [11, 35, 36]. Активность флавопиридола при пероральном приеме делает его практически уникальным среди средств, которые, как показано, активны на моделях повреждения сосудов на животных. Его селективность, активность и легкость применения делают флавопиридол превосходным кандидатом для изучения терапевтических преимуществ подавления клеточного цикла ίη νίνο при поражениях сосудов у людей.
Мы выбрали пероральное введение флавопиридола в концентрации (5 мг/кг), т.е. равной половине той, которая подавляет рост опухоли на модели ксенотрансплантата у голых мышей [27]. Отмечено, что концентрации флавопиридола, равные 75 нмоль/л, приводят к почти полному подавлению пролиферации КГМ в данных исследованиях, тогда как средние концентрации сыворотки, равные 425 нмоль/л, были достигнуты при дозах ниже порога токсичности в 1-ой фазе исследований у людей с устойчивой карциномой. Результаты свидетельствуют, что значительно более низкие дозы ингибиторов клеточного цикла, чем те, которые используются в отношении неоплазии, могут быть эффективны при сосудистых заболеваниях, таких как рестеноз, при сопутствующем преимуществе повышенной переносимости.
Хотя было продемонстрировано, что флавопиридол вызывает остановку роста без влияния на жизнеспособность НА8МС в культуре, и было показано сниженное образование неоинтимы после действия флавопиридола ίη νίνο, не было уверенности в том, что остановка клеточного цикла является фактором, снижающим образование неоинтимы в повреждениях сонных артерий. Флавопиридол может вызывать остановку роста, индуцируя или не индуцируя апоптоз, в зависимости от типа наблюдаемых клеток [29]. Интересно, что флавопиридил подавляет апоптоз в клетках РС12, которые были окончательно дифференцированы, хотя он вызывал апоптоз в недифференцированных клетках РС12, которые находятся в состоянии пролиферации [28]. Хотя эксперименты ίη νίίτο были выполнены в условиях, которые должны имитировать фенотип КГМ перед повреждением, возможно, что КГМ могут по-разному реагировать на флавопиридол после повреждения и могут даже подвергаться апоптозу. Хотя роль апоптоза при поражении сосудов не ясна, экспрессия лиганда Гак в КГМ вызывает апоптоз и блокирует формирование неоинтимы у кроликов после повреждения с помощью баллона [37], что наводит на мысль о том, что если флавопиридол действительно индуцирует апоптоз КГМ ίη νίνο, как происходит с пролиферирующими клетками РС12, это может быть полезным феноменом в контексте образования неоинтимы. Другие механизмы также могут участвовать в действии флавопиридола на формирование повреждения. Например, опосредуемое антисмысловым олигодезоксинуклеотидом подавление клеточного цикла улучшает функцию эндотелия в трансплантатах вен кролика [38]. В отношении механизмов действия флавопиридола понадобятся дополнительные исследования на КГМ ίη νίνο, иные чем остановка роста. После того, как показана роль пролиферации КГМ при формировании поражения после повреждения сонной артерии у крыс 2,3, интересно отметить, что, несмотря на глубокое воздействие флавопиридола ίη νίίτο, его способность подавлять формирование неоинтимы (хотя и существенное) была более умеренной в условиях наших экспериментов ίη νίνο. Рассмотрено несколько объяснений этого наблюдения. Маловероятно, что ускоренная пролиферация КГМ происходит после прекращения введения флавопиридола, так как различия в индексах пролиферации сохраняются на протяжении 14 дней после повреждения (фиг. 7 и 9). Более правдоподобно, или то, что другие компоненты формирования поражения, такие как миграция КГМ и продуцирование экстраклеточного матрикса все еще способствуют формированию поражений даже в отсутствии значительной пролиферации КГМ, или то, что введение флавопиридола один раз в сутки является недостаточным для полной остановки пролиферации на данной модели. Недавние данные, указывающие на то, что биологический период полураспада флавопиридола является таким коротким, составляя 2,5 часа, предполагают, что последняя гипотеза может быть верной; при дополнительных исследованиях можно будет определить еще более эффективный режим дозирования [39].
Наши результаты показывают, что флавопиридол может подавлять пролиферацию КГМ и, следовательно, формирование неоинтимы на широко принятой модели сосудистого заболевания на небольшом животном. Следует отметить, что значение подавления пролиферации КГМ спорно в отношении поражения человеческих сосудов и может различаться в зависимости от характера поражения и времени, в которое производили исследование пролиферации. Показатель пролиферации КГМ в образцах после атероэктомии у людей удивительно низкие [40], хотя эти образцы могут и не отражать пролиферативные изменения на ранних, более решающих стадиях развития поражения. Кроме того, моделирование артерий, независимое от роста неоинтимы, может объяснить значительную часть закупорки просвета сосудов после ангиопластики у людей [41]. В противоположность этому, показатели митотической активности КГМ значительно выше (25% ΡΝΟΑположительных) в атероэктомических образцах повреждений людей со стентовым рестенозом, что согласуется с установленной ролью гиперплазии КГМ, но не с ремоделированием в данном процессе [4]. Поскольку случаи установок стента и клинические проблемы стентового рестеноза растут, будет испытываться потребность в более эффективных средствах прекращения гиперплазии КГМ и формирования неоинтимы. Так как флавопиридол является сильным лекарственным средством, которое доступно при пероральном приеме, со специфической подавляющей Сбк активностью, и поскольку безопасные дозы флавопиридола для людей известны, флавопиридол можно считать кандидатом в фармакологические средства для предотвращения стентового рестеноза у людей.
Методы и результаты
При использовании клеток гладких мышц человеческой аорты было обнаружено, что флавопиридол в такой низкой концентрации, как 75 нмоль/л, приводит к почти полному подавлению вызванной основным фактором роста фибробластов и тромбином пролиферации. В данной дозе флавопиридол подавлял активность циклин-зависимых киназ по данным определения фосфорилирования гистона Нь но не оказывал никакого воздействия на активацию МАР киназы. Индукция циклина Ό1 протеинов, связанных с клеточным циклом, ядерного антигена размножающихся клеток и фосфорилированного белка ретинобластомы также блокируются флавопиридолом. Флавопиридол не оказывает воздействия на жизнеспособность клеток. Чтобы испытать, обладает ли флавопиридол аналогичной активностью ίη νίνο при пероральном введении, проверялось формирование неоинтимы в сонных артериях крыс после повреждения баллоном. Флавопиридол (5 мг/кг), который вводили через зонд, снижал площадь неоинтимы на 35% и 39% на 7 и 14 день, соответственно, после повреждения.
Заключение
Флавопиридол подавляет рост КГМ ίη νίίτο и ίη νίνο. Его доступность при пероральном приеме и селективность в отношении циклинзависимых киназ делает его потенциальным терапевтическим средством для лечения повреждений сосудов, богатых КГМ.
Библиография (1) Кокк К., Тке рабюдепейк οί аккегокс1егоκίκ: а регкресЛхе ίοτ кке 1990к. Накиге, 1993; 362:801-809.
(2) СЮтеек АМ, Ке1бу МА, СЮтеек ММ. Κίиебск οί се11и1аг ргобГегакюи аГ1ег аг(ег1а1 щщту. ЬаЬ. 1пуекЦ 1983; 49:327-333.
(3) СЮтеек А, 8с11\\'аг1х 8. 81дшЛсаисе οί с.|шексеп1 ^ηοού) тикс1е ш^д^ак^οи ίη 1ке 61) иге б гак сагобб айету. Сйс. Кек., 1985; 56:139-145.
(4) Кеатеу М, Р1ес/ек А, На1еу Ь, Εομτ6ο ЭМ, Апбгек V, 8скашГе1б К, КοκеπГ^е1б К, [кмег 1М. Η^κкορакЛο1οду οί шккеик гейегюйк ίη рабеикк \\йЛ рет1рйета1 агкегу Фкеаке. Сбсик-иЫп, 1997; 95:1998-2002.
(5) МбЛ/ 68, Нοίίтаηη К, Мекгаи К, Ρίскагб АО, Кеп1 КМ, 8а(1ег ЬР, Ρορта Л, ίνοη МВ. [п-йеп1 гейегюйк: кке МакЫидЮи Нοκρ^ίа1 СеЫег ехрепеисе. Атб.Сатбюк, 1998; 81:7Е13Е.
(6) СаИГГ КМ. Кеккетойк: кке той ίο κοс^еку. Ат.Неагк 1., 1995; 130:680-684.
(7) 811егг С! Маттабап θι сусбик. Се11, 1993; 73:1059-1065.
(8) Ниикег Т. Втакшд 1ке сус1е. Се11, 1993; 75:839-841.
(9) Скег Ώ, Ктайикк Ώ, Скеп Ώ, 8укейег А, Скеп 1, №кеи ΡΏ, Аибегк V. ^οтеη^еди1ак^οи οί сусби-береибеик кшаке 2 асбхЛу апб сусби А ρ^οтοίе^ ас1 ίν 11у ίη таксики ^ηοο^ι тикс1е се11к Ьу р27К1Р1, ап ббиЫГОг οί иеο^ик^та ΓοπηηΟοη ίη кке га( сагобб айету. 1. С1ш. [пуей., 1997; 99:2334-2341.
(10) Скапд ММ, Вагг Е, Ьи ММ, ВагГОп К, Ье1беп 1М. Абеиον^^иκ-теб^акеб ονе^-еxρ^еκκ^οη οί ίке сускп/сусйп-берепбепк кшаке шЫЫЮг, р21 ί пк1Ь11к уаксикп κтοοίк тикс1е се11 ρ^ο1^ίе^аί^οη апб ηеο^ηί^та ΓοπηηΟοη ίη кке га! сагобб айету тοбе1 οί Ьа11οοи аидюр1акку. 1.Скп.[пуек1., 1995; 96:2260-2268.
(11) Скаид ММ, Вагг Е, 8е11хег 1, Лапд Υ-Ц, №Ье1 Е6, Рагтасек М8, Ье1беи 1М. СуЮккабс деие ккегару ίοτ уаксн1аг ρ^ο1^ίе^ак^νе б1адгбегк \\йЛ а топйШШуе1у аскхе Γοηη οί кке ^ек^иοЬ1аκЮта деие ргобиск. 8с1еисе, 1995; 267:518-522.
(12) Мο^^κЛ^ка К, б^Юик 6Н, Ηοή^Μ М, Е1кадп КЕ, №1ка)кпа М, 2каид Ь, Каиеба Υ, Од1кага Т, Эхаи VI. А деие ккегару к!га(еду икшд а к^аиκс^^ρк^οи ГасЮг бетоу οί 1Ле Е2Р Ьшбшд к11е
1пк1Ь11к κтοοίк тикс1е ρ^ο1^Ге^аί^οи ίη νίνο. Ртос.КаЙ. Асаб.8с1.И8А, 1995; 92:5855-5659.
(13) Εο^\νίΙζ МО, Саг1ади ВА, Каиг 6, 8аикх111е ЕА, Мο^1апб Р! Ροίеиί ίηΜΜίίοη οί Сбс2 к1паке ас(1УЙу Ьу кке Πаνапο^б. Л86-8275. В^οскет.В^ορкуκ.Кеκ.Сοшшии., 1994; 201:589595.
(14) Са^1κοπ ВА, ОиЬау ММ, 8аикхШе ЕА, Впхие1а Ь, Мο^1апб Р! Р1аνορ^^^бο1 шбисек 61 аггей \\йЛ ίπΗίόίΙίοπ οί сусби-береибеик кшаке (СОК)2 аиб СОК4 ίη китаи Ьгеай сагскюта се11к. Сапс.Кек., 1996; 56:2973-2978.
(15) бе Аζеνебο МР, Мие11ег-О1есктаип Н1, 8сЛиίζе-6актеи и, Мο^1аπб Р1, 8аикхП1е Е, К1т 8-Н. 8бискига1 Ьайк ίοτ креаПаку аиб ροкеису οί а Πаνаπο^б шЫЫЮг οί китаи Сбк2, а се11 сус1е кшаке. Ρ^οс.Nак1.Асаб.8с^. И8А, 1996; 93:2735-2740.
(16) Каиг 6, 8кек1е^-8кеνеиκοи М, 8еЬегк 8, Мο^1аηб Р, 8еб1асек Н, Муегк С, СζесЛ 1, №кк К, 8анкуШе Е. бготекк шЫЬйюи \\йк гехегйЫе се11 сус1е аггей οί сагсйюта се11к Ьу ίΕνο^ Ь868275. кНаб.Сапсбикк., 1992; 84:1736-1740.
(17) 8епбего\\'1сх АМ, Неаб1ее ϋ, 8к^иκοи 8, Ьикк КМ, Р1дд МО, Р1иба 1, 8аикхШе ЕА. А Ркаке I !г1а1 οί Г1аνορ^^^бο1 (РЬА), а иονе1 сусбибереибеик кшаке 1пЫЬ1Юг, ίπ ра!1епкк теίίк геГгасЮгу иеορ1аκт. Ρ^οс.Ат.8οс.С1^и.Оисο1., 1997; 16:1226а. АЬккгаск.
(18) КиеГ 1, Ни ΖΥ, Υίπ Ь-Υ, Ми Υ, Напади 8К, Ке11у АВ, Нагкег ЬА, Ρηο 6Ν, Кииде М8, Раккетади С. Ιπ6^6οπ οί хакси1аг еибοкЛе1^а1 дготекк ГасЮг ίπ Ьа11οοπ-^π^и^еб ЬаЬοοи айейек. Спс.Кек., 1997; 81:24-33.
(19) КиеГ 1, Кю 6Ν, Ь1 Р, Вοбе С, Раккетади С, Вкакиадаг А, Кииде М8. Ιπ6^6οπ οί гак аο^к^с ^οοώ тикс1е се11 дготекк Ьу кке 11р1б регох1баίίοπ ргобиск 4-куб^οxу-2-иοиеиа1, Сн-сЛакши, 1998; 97:1071-1078.
(20) 8теапк КА, Тк'ид 1Р, 6ιιο ХМ, Vа1беζ 1, ВтабЬиту ЕМ, 6иг1еу ЬК. Εοιπ б1кЛиск сусЛибереибеик кшакек ρЛοκρЛο^у1аке ЫкЮие Н1 ак а11 οί 1кк дготекк ге1акеб ρкοκρкο^у1ак^οи йкек. Вюскешкккту, 1997; 36:13671-13768.
(21) МаккикЫте Н, ^№1 МР, АкЛшии КА, 8кетг С! Сο1οиу-κк^ти1ак^ид ГасЮг 1 геди1акек иονе1 сусЛик бийид кке θι ркаке οί кке се11 сус1е. Се11, 1991; 65:701-713.
(22) В^аνο К. 8уиккейк οί кке иис1еаг ргокеш (РСНА) апб 1кк ^е1ак^οиκЛ^ρκ те1кк ОНА терЛсакюи. Ехр.Се11 Кек., 1986; 163:287-293.
(23) Етееи МЕ, 81икк НК, 8кегг С1, МаккикЫте Н, КаЮ 1Υ, ЬМидкЮи ОМ. Рииск^οиа1 ίπке^аск^οи οί кке ^ек^иοЬ1аκкοта ргокеш те1кк таттаЛап ϋ-куре сусЛик. Се11, 1993; 7:487-497.
(24) Ниикег Т. Ргокеш кшакек апб ρЛοκρЛакакек: Тке уш апб уапд οί ргокеш ρкοκρкο^у1ак^οи апб йдиаЛид. Се11, 1995; 80:225-236.
(25) Рауие ОМ, Кοκκοтаибο А1, МагЛто Р, Ейскади АК, Нег 1-Н, 8каЬаиοте^кζ 1, Ниик ОР, МеЬег М1, 8кшд111 ТМ. Iбеик^ί^сак^οи οί кке геди1аЮту ρкοκρкο^у1ак^οи кткек ίπ ρρ42/ш^кοдеи асйуа1ей рто1еш кшаке (МАР-кшаке). ЕМВО 1., 1991; 10:885-892.
(26) Кошд А, 8с11\\'аПх СК, Мокаттай ЯМ, А1-КайЬ А, СаЬп1оуе 1Ь. Тке поуе1 сус1шйереийеи! кшаке тЫЬког йауоршйо1 йоуигеди1а1ек Вс1-2 апй шйисек дгоу1к аггек! апй арор!ок1к ίη сйгошс В-се11 1еикет1а 1шек. В1оой, 1997; 90:4307-4312.
(27) Бгеек М, Беид1ег №А. Яо1к Т, БаЬоШе Н, Мауо 1, Ма1кре1к Ь, Стеует М, 8аику111е ЕА, Е1еЬегд НН. Е1ауортйо1 (Б86-8275): 8е1есйуе апШитог асйуйу ίη уйго апй асйуйу ίη у1уо Гог ргок1а1е сагсшота се11к. ΟίηΟι^Γ Яек., 1997; 3:273-279.
(28) Рагк Б8, ЯагшеШ 8Е, Сгееие ЬА. ΙηЫЬйогк оГ сусНи-йереийеШ к таке ргото1е кигУ1уа1 оГ рок1-тйойс πеи^оπа11у й^ГГе^еπ1^а1ей РС12 се11к аий кутра1кейс иеигоик. 1. Вю1.Скет., 1996; 271:8161-8169.
(29) Рагкег В№, Каиг С, №еуек-№ега V, Та1т1 М, Кок1кадеи С, 81ιίιηίζιι Т, Бок1е\\'1с/ МБ, Ротт1ег Υ, 8аику111е ЕА, 8еийегоу^ АМ. Еаг1у шйисйоп оГ арор1окк ίη кета1оро1ейс се11 1шек айег ехрокиге 1о Г1ауортйо1. В1оой, 1998; 91:458465.
(30) Сеид Υ1, №и О, Ми^уикк! М, Наиккои СК, Ь1ЬЬу Р. АрорЮкй оГ уакси1аг ктоо1к тикс1е се11к шйисей Ьу ίη уйго ШтиНкои уйк ш1егГс^оη-датта. 1итог иесгокк Гас1ог-а1рка, аий ίη1ег1еикш-1 Ье1а. Айепокс1ег.ТктотЬ.Вю1., 1998; 16:19-27.
(31) 8с\уагР 8М, йеВ1ок Б, О'Впеи ЕЯМ. ТНе шйта: кой Гог айкегокс1егок1к аий гейеиокк. Сйс.Яек., 1995; 77:445-465.
(32) №е! СЬ, Кгак1пккк1 К, Кеатеу М, 1киег 1М, №а1к11 К, Аийгек V. Тетрога11у аий крайайу соогйша1ей ехртеккюи оГ се11 сус1е геди1а1огу Гас1огк айег аидюр1ак!у. Сйс. Яек., 1997; 80:418426.
(33) йе Υоипд МВ, Бюкек БА. Сеие 1кегару Гог гсз'^позхз. Сйс. Яек., 1997; 82:306-313.
(34) Вгоокк ЕЕ, Сгау N8, 1о1у А, Кегуаг 88, Бит Я, Масктаи ЯБ, №гтаи ТС, Яоке1е 1, Яоуе М, 8скоу 8Я, 8ски1Б ТС, XV а ид X, №1ск ММ, 81ιίΠιηηη Б. θνΓ-313, а кресШс аий ро1еи1 ίηЫЬйог оГ СБК2 1ка1 ргеуеик пео^п1^та1 Гогтайои. ТБюБСкет., 1997; 272:299207-299211.
(35) 8йок МС, 81тоик М, Ейе1тап ЕЯ. АиОкеике о1^допис1еоййе шЫЬйюп оГ РБСЕЯ-Ь гесер1ог киЬиий ехртеккюи ййес1к кирргеккюи оГ ш11та1 Ннскетид. С1гси1айои, 1997; 95:669-676.
(36) Яайе Л, 8скикск АН, νίηηηηί Я, Б1скек БА. Боса1 айеиоу1га1-тей1а1ей ехгреккюи оГ гесотЬшагИ кйийш гейисек иеошЕта Гогтайои айег айепа1 т)игу. №11иге Мей., 1996; 2:293-298.
(37) 8а1а М, Рег1таи Н, Мигиуе БА, 8йуег М, 1кеЬе М, БлЬегтаии ТА, Оейдеи Р, №а1кк К. Еак Ндаий деие йаикГег 1о 1ке уекке1 уа11 1ик1Ьйк иеошЕта Гогтайои аий оуетйек 1ке айеиоуйик тей1а1ей Т се11 гекроике. Ргос.№-И1.Асай.8ст И8А, 1998; 95:1213-1217.
(38) Маии М1, С1ЬЬоик СН, Ткао Р8, уоп йег Беуеи НЕ, Сооке 1Р, Вийтадо Я, КетоГГ Я, βζηυ VI. Се11 сус1е шдФйюи ргекегуек еийоФей-й Гипсйоп ίη деиейсайу еидшеегей гаЬЬй уеш дгайк. 1. Ски^уей., 1997; 99:1295-1301.
(39) Агдие11о Е, А1ехаийег М, 81еггу 1А, Тийог С, 8тйк ЕМ, Ка1ауаг №, Сгееие 1Е, Кокк V, Могдаи СБ, 8йпкоп 8Е, 8Гогй Т1, А1уогй №С, К1аЬаикку ЯБ, 8аику111е ЕА. Е1ауортйо1 шйисек арор1ок1к оГ иогта1 1утрко1й се11к, саикек 1ттиηокирр^екк^оη. аий как ро1еи1 аШйитог асйуйу ίη У1уо адашк! китаи 1еикет1а аий 1утркота хеиодгайк. В1оой, 1998; 91:2482-2490.
(40) О'Впеи ЕЯ, А1регк СЕ, 81еуай БК, Еегдикои М, Тгаи Ν, Согйоп Б, Веийй! ЕР, Ншокага Т, 81тркои 1В, 8скуайх 8М. РгокГегайои ίη рптагу аий гек1еиойс согоиагу а1кегес1оту йккие; 1трНса11оик Гог аий-ргокГегакуе 1кегару. Сйс.Яек., 1993; 73:223-231.
(41) Мшй С8, Рорта Л, Яюкагй АБ, Кеи! КМ, 8а11ег БЯ, №оид 8С, Ноид МБ, Коуаск 1А, Беои МВ. Айепа1 гетойекид айег согоиагу аид1ор1ак!у: а кепа1 ш1гауакси1аг икгакоиий к1ийу. СпсиЫюи, 1996; 94:35-43.
Claims (5)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Способ ингибирования пролиферации клеток гладких мышц, включающий введение пациенту эффективного количества соединения (-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3гидрокси-1-метил)пиперидинил]-4Н-бензопиран-4-она (флавопиридола), причем указанное эффективное количество составляет менее 70%, предпочтительно менее 60%, или, в частности, менее 50% дозировки, которая была бы необходимой для подавления роста опухоли.
- 2. Применение (-)-цис-5,7-дигидрокси-2(2-хлорфенил)-8-[4-(3 -гидрокси-1-метил)пиперидинил]-4Н-бензопиран-4-она (флавопиридола) для получения фармацевтического препарата для ингибирования пролиферации клеток гладких мышц, причем дозировка указанного соединения составляет менее 70%, предпочтительно менее 60%, или, в частности, менее 50% дозировки, которая была бы необходимой для подавления роста опухоли.
- 3. Применение по п.2, при котором фармацевтический препарат предназначен для лечения повреждений сосудов, богатых клетками гладких мышц.
- 4. Применение по п.2 или 3, при котором фармацевтический препарат предназначен для лечения повреждений после повреждений баллоном.
- 5. Применение по п.2 или 3, при котором фармацевтический препарат предназначен для лечения пациентов после имплантации стента.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US24338099A | 1999-02-01 | 1999-02-01 | |
| US09/468,665 US6399633B1 (en) | 1999-02-01 | 1999-12-21 | Use of 4-H-1-benzopryan-4-one derivatives as inhibitors of smooth muscle cell proliferation |
| PCT/US2000/001104 WO2000044362A2 (en) | 1999-02-01 | 2000-01-18 | The use of 4-h-1-benzopyran-4-one derivatives as inhibitors of smooth muscle cell proliferation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA200100742A1 EA200100742A1 (ru) | 2001-12-24 |
| EA004786B1 true EA004786B1 (ru) | 2004-08-26 |
Family
ID=22918541
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA200100742A EA004786B1 (ru) | 1999-02-01 | 2000-01-18 | Применение (-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3-гидрокси-1-метил)пиперидинил]-4-бензопиран-4-она в качестве ингибитора пролиферации клеток гладких мышц |
Country Status (38)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6399633B1 (ru) |
| EP (1) | EP1150746B1 (ru) |
| JP (1) | JP4755759B2 (ru) |
| KR (1) | KR100793047B1 (ru) |
| CN (1) | CN1219556C (ru) |
| AP (1) | AP1469A (ru) |
| AR (1) | AR042569A1 (ru) |
| AT (1) | ATE275428T1 (ru) |
| AU (1) | AU777368B2 (ru) |
| BG (1) | BG65151B1 (ru) |
| BR (1) | BR0007911A (ru) |
| CA (1) | CA2360668C (ru) |
| CR (1) | CR6448A (ru) |
| CZ (1) | CZ300395B6 (ru) |
| DE (1) | DE60013555T2 (ru) |
| DK (1) | DK1150746T3 (ru) |
| EA (1) | EA004786B1 (ru) |
| EE (1) | EE04851B1 (ru) |
| ES (1) | ES2226792T3 (ru) |
| HK (1) | HK1042445B (ru) |
| HR (1) | HRP20010521A2 (ru) |
| HU (1) | HU229263B1 (ru) |
| ID (1) | ID30180A (ru) |
| IL (1) | IL144668A (ru) |
| ME (1) | MEP10508A (ru) |
| NO (1) | NO330512B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ512822A (ru) |
| OA (1) | OA11755A (ru) |
| PL (1) | PL197693B1 (ru) |
| PT (1) | PT1150746E (ru) |
| RS (1) | RS50242B (ru) |
| SI (1) | SI1150746T1 (ru) |
| SK (1) | SK286747B6 (ru) |
| TR (1) | TR200102223T2 (ru) |
| TW (1) | TWI273907B (ru) |
| UA (1) | UA73110C2 (ru) |
| WO (1) | WO2000044362A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA200105596B (ru) |
Families Citing this family (58)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0102480D0 (en) * | 2001-01-31 | 2001-03-14 | Cyclacel Ltd | Marker |
| KR101052816B1 (ko) * | 2002-04-17 | 2011-07-29 | 스미스 클라인 비참 코포레이션 | 화합물, 조성물 및 방법 |
| US7425618B2 (en) | 2002-06-14 | 2008-09-16 | Medimmune, Inc. | Stabilized anti-respiratory syncytial virus (RSV) antibody formulations |
| US7132100B2 (en) | 2002-06-14 | 2006-11-07 | Medimmune, Inc. | Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations |
| US20040082613A1 (en) * | 2002-06-28 | 2004-04-29 | Schneider Michael D. | Modulators of Cdk9 as a therapeutic target in cardiac hypertrophy |
| US20040106647A1 (en) * | 2002-06-28 | 2004-06-03 | Schneider Michael D. | Modulators of Cdk9 as a therapeutic target in cardiac hypertrophy |
| JP4596916B2 (ja) * | 2002-09-05 | 2010-12-15 | メディミューン，エルエルシー | Ｃｄ２拮抗薬を投与することによりｔ細胞悪性腫瘍を予防または治療する方法 |
| US7563810B2 (en) | 2002-11-06 | 2009-07-21 | Celgene Corporation | Methods of using 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydroisoindol-2-yl)-piperidine-2,6-dione for the treatment and management of myeloproliferative diseases |
| US8034831B2 (en) | 2002-11-06 | 2011-10-11 | Celgene Corporation | Methods for the treatment and management of myeloproliferative diseases using 4-(amino)-2-(2,6-Dioxo(3-piperidyl)-isoindoline-1,3-dione in combination with other therapies |
| KR20120035234A (ko) | 2003-04-11 | 2012-04-13 | 메디뮨 엘엘씨 | 재조합 ｉｌ?９ 항체 및 그의 용도 |
| US20060228350A1 (en) * | 2003-08-18 | 2006-10-12 | Medimmune, Inc. | Framework-shuffling of antibodies |
| WO2005042743A2 (en) | 2003-08-18 | 2005-05-12 | Medimmune, Inc. | Humanization of antibodies |
| AU2005299355A1 (en) | 2004-10-27 | 2006-05-04 | Medimmune, Llc | Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens |
| JP5153613B2 (ja) | 2005-03-18 | 2013-02-27 | メディミューン，エルエルシー | 抗体のフレームワーク・シャッフル |
| CA2613512A1 (en) | 2005-06-23 | 2007-01-04 | Medimmune, Inc. | Antibody formulations having optimized aggregation and fragmentation profiles |
| CA2617728A1 (en) * | 2005-07-15 | 2007-01-25 | Sahajanand Biotech Private Limited | Implantable medical devices comprising a flavonoid or derivative thereof for prevention of restenosis |
| JP2008255008A (ja) * | 2005-07-19 | 2008-10-23 | Tokyo Medical & Dental Univ | 滑膜細胞増殖抑制剤 |
| AU2006275514B2 (en) * | 2005-07-29 | 2012-04-05 | Resverlogix Corp. | Pharmaceutical compositions for the prevention and treatment of complex diseases and their delivery by insertable medical devices |
| MY162024A (en) | 2006-08-28 | 2017-05-31 | La Jolla Inst Allergy & Immunology | Antagonistic human light-specific human monoclonal antibodies |
| CN101641339B (zh) | 2007-02-01 | 2013-07-17 | 雷斯韦洛吉克斯公司 | 用于预防和治疗心血管疾病的化合物 |
| EP2068923A4 (en) | 2007-03-30 | 2010-11-24 | Medimmune Llc | ANTIBODIES HAVING REDUCED DEAMIDATION PROFILES |
| KR101629356B1 (ko) | 2008-06-26 | 2016-06-13 | 리스버로직스 코퍼레이션 | 퀴나졸리논 유도체의 제조방법 |
| AU2010204106B2 (en) | 2009-01-08 | 2014-05-08 | Resverlogix Corp. | Compounds for the prevention and treatment of cardiovascular disease |
| MX2021012876A (es) | 2009-03-18 | 2022-06-23 | Resverlogix Corp | Nuevos agentes anti-inflamatorios. |
| ES2821018T3 (es) | 2009-04-22 | 2021-04-23 | Resverlogix Corp | Nuevos agentes antiinflamatorios |
| WO2012007327A1 (en) | 2010-07-12 | 2012-01-19 | Dkfz Deutsches Krebsforschungszentrum | Wogonin for the prevention and therapy of cardiac hypertrophy |
| EP2668210B1 (en) | 2011-01-26 | 2020-06-17 | Celldex Therapeutics, Inc. | Anti-kit antibodies and uses thereof |
| PT2773354T (pt) | 2011-11-01 | 2019-07-17 | Resverlogix Corp | Formulações orais de libertação imediata para quinazolinonas substituídas |
| BR112015001459B1 (pt) | 2012-07-25 | 2023-02-14 | Celldex Therapeutics, Inc | Anticorpo isolado ou fragmento do mesmo, conjugado, usos dos mesmos, composição farmacêutica, polinucleotídeo, vetor, célula hospedeira, célula isolada, kit, método in vitro para inibir atividade da kit, método para produzir um anticorpo |
| WO2014059028A1 (en) | 2012-10-09 | 2014-04-17 | Igenica, Inc. | Anti-c16orf54 antibodies and methods of use thereof |
| WO2014080291A2 (en) | 2012-11-21 | 2014-05-30 | Rvx Therapeutics Inc. | Biaryl derivatives as bromodomain inhibitors |
| US9073878B2 (en) | 2012-11-21 | 2015-07-07 | Zenith Epigenetics Corp. | Cyclic amines as bromodomain inhibitors |
| AU2013365926B9 (en) | 2012-12-21 | 2019-01-17 | Zenith Epigenetics Ltd. | Novel heterocyclic compounds as bromodomain inhibitors |
| EP3003390B1 (en) | 2013-06-06 | 2021-07-07 | Pierre Fabre Médicament | Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof |
| RU2699289C2 (ru) | 2013-08-26 | 2019-09-04 | Байонтек Рисерч Энд Дивелопмент, Инк. | НУКЛЕИНОВЫЕ КИСЛОТЫ, КОДИРУЮЩИЕ АНТИТЕЛА ПРОТИВ СИАЛИРОВАННОГО АНТИГЕНА ЛЬЮИСАа ЧЕЛОВЕКА |
| GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
| AU2015271685B2 (en) | 2014-06-04 | 2021-02-18 | Biontech Research And Development, Inc. | Human monoclonal antibodies to ganglioside GD2 |
| US10766959B2 (en) | 2014-12-11 | 2020-09-08 | Pierre Fabre Medicament | Anti-C10ORF54 antibodies and uses thereof |
| CN114504652A (zh) | 2015-03-03 | 2022-05-17 | 科马布有限公司 | 抗体、用途和方法 |
| US10111885B2 (en) | 2015-03-13 | 2018-10-30 | Resverlogix Corp. | Compositions and therapeutic methods for the treatment of complement-associated diseases |
| AU2016252609B2 (en) | 2015-04-20 | 2022-06-30 | Sumitomo Pharma Oncology, Inc. | Predicting response to alvocidib by mitochondrial profiling |
| US9758539B2 (en) | 2015-05-18 | 2017-09-12 | Tolero Pharmaceuticals, Inc. | Alvocidib prodrugs having increased bioavailability |
| CN108289861B (zh) | 2015-08-03 | 2021-11-02 | 大日本住友制药肿瘤公司 | 用于治疗癌症的组合疗法 |
| EP3383908A1 (en) | 2015-12-02 | 2018-10-10 | Stsciences, Inc. | Antibodies specific to glycosylated btla (b- and t- lymphocyte attenuator) |
| EP3909983A1 (en) | 2015-12-02 | 2021-11-17 | STCube & Co. Inc. | Antibodies and molecules that immunospecifically bind to btn1a1 and the therapeutic uses thereof |
| CN109803684B (zh) | 2016-08-23 | 2022-08-23 | 卫材 R&D 管理有限公司 | 用于治疗肝细胞癌的组合疗法 |
| WO2018083248A1 (en) | 2016-11-03 | 2018-05-11 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods |
| US11279694B2 (en) | 2016-11-18 | 2022-03-22 | Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. | Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors |
| JP7219224B2 (ja) | 2017-03-16 | 2023-02-07 | エーザイ・アール・アンド・ディー・マネジメント株式会社 | 乳癌の治療のための組合せ療法 |
| JP2020522512A (ja) | 2017-05-31 | 2020-07-30 | ストキューブ アンド シーオー．， インコーポレイテッド | Ｂｔｎ１ａ１に免疫特異的に結合する抗体及び分子を用いて癌を治療する方法 |
| JP7369038B2 (ja) | 2017-05-31 | 2023-10-25 | ストキューブ アンド シーオー．， インコーポレイテッド | Ｂｔｎ１ａ１に免疫特異的に結合する抗体及び分子並びにその治療的使用 |
| JP2020522562A (ja) | 2017-06-06 | 2020-07-30 | ストキューブ アンド シーオー．， インコーポレイテッド | Ｂｔｎ１ａ１又はｂｔｎ１ａ１リガンドに結合する抗体及び分子を用いて癌を治療する方法 |
| JP7196160B2 (ja) | 2017-09-12 | 2022-12-26 | スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド | Ｍｃｌ－１阻害剤アルボシジブを用いた、ｂｃｌ－２阻害剤に対して非感受性である癌の治療レジメン |
| US11707522B2 (en) | 2017-10-13 | 2023-07-25 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Human antibodies to Tn antigen |
| AU2019306165A1 (en) | 2018-07-20 | 2021-02-25 | Pierre Fabre Medicament | Receptor for vista |
| MX2021006544A (es) | 2018-12-04 | 2021-07-07 | Sumitomo Pharma Oncology Inc | Inhibidores de cinasa dependiente de ciclina 9 (cdk9) y polimorfos de los mismos para uso como agentes para el tratamiento de cancer. |
| WO2020191326A1 (en) | 2019-03-20 | 2020-09-24 | Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. | Treatment of acute myeloid leukemia (aml) with venetoclax failure |
| CN113559244B (zh) * | 2021-08-02 | 2023-12-26 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | Ctrp13脂肪因子的新用途 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IN164232B (ru) * | 1986-04-11 | 1989-02-04 | Hoechst India | |
| US5284856A (en) * | 1988-10-28 | 1994-02-08 | Hoechst Aktiengesellschaft | Oncogene-encoded kinases inhibition using 4-H-1-benzopyran-4-one derivatives |
| US5733920A (en) | 1995-10-31 | 1998-03-31 | Mitotix, Inc. | Inhibitors of cyclin dependent kinases |
| US5849733A (en) | 1996-05-10 | 1998-12-15 | Bristol-Myers Squibb Co. | 2-thio or 2-oxo flavopiridol analogs |
| US5908934A (en) | 1996-09-26 | 1999-06-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Process for the preparation of chiral ketone intermediates useful for the preparation of flavopiridol and analogs |
| JP2001509805A (ja) | 1997-02-05 | 2001-07-24 | ワーナー−ランバート・コンパニー | 細胞増殖阻害剤としてのピリド〔２，３−ｄ〕ピリミジンおよび４−アミノピリミジン |
-
1999
- 1999-12-21 US US09/468,665 patent/US6399633B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-01-18 AT AT00909918T patent/ATE275428T1/de active
- 2000-01-18 PL PL350735A patent/PL197693B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 IL IL14466800A patent/IL144668A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 SI SI200030517T patent/SI1150746T1/xx unknown
- 2000-01-18 OA OA1200100196A patent/OA11755A/en unknown
- 2000-01-18 CN CNB008032513A patent/CN1219556C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-18 SK SK1086-2001A patent/SK286747B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 CZ CZ20012804A patent/CZ300395B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 AP APAP/P/2001/002218A patent/AP1469A/en active
- 2000-01-18 ID IDW00200101696A patent/ID30180A/id unknown
- 2000-01-18 AU AU32098/00A patent/AU777368B2/en not_active Ceased
- 2000-01-18 DK DK00909918T patent/DK1150746T3/da active
- 2000-01-18 WO PCT/US2000/001104 patent/WO2000044362A2/en active IP Right Grant
- 2000-01-18 CA CA002360668A patent/CA2360668C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-18 ME MEP-105/08A patent/MEP10508A/xx unknown
- 2000-01-18 HU HU0200804A patent/HU229263B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 NZ NZ512822A patent/NZ512822A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 JP JP2000595666A patent/JP4755759B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-18 BR BR0007911-1A patent/BR0007911A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-01-18 DE DE60013555T patent/DE60013555T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-18 EE EEP200100385A patent/EE04851B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 TR TR2001/02223T patent/TR200102223T2/xx unknown
- 2000-01-18 KR KR1020017009716A patent/KR100793047B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 UA UA2001075481A patent/UA73110C2/uk unknown
- 2000-01-18 ES ES00909918T patent/ES2226792T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-18 RS YU54401A patent/RS50242B/sr unknown
- 2000-01-18 EA EA200100742A patent/EA004786B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 PT PT00909918T patent/PT1150746E/pt unknown
- 2000-01-18 EP EP00909918A patent/EP1150746B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-25 TW TW089101215A patent/TWI273907B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-02-01 AR ARP000100420A patent/AR042569A1/es not_active Application Discontinuation
-
2001
- 2001-07-05 NO NO20013335A patent/NO330512B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-07-06 ZA ZA200105596A patent/ZA200105596B/en unknown
- 2001-07-11 HR HR20010521A patent/HRP20010521A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2001-07-27 BG BG105751A patent/BG65151B1/bg unknown
- 2001-08-23 CR CR6448A patent/CR6448A/es not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-05-31 HK HK02104062.3A patent/HK1042445B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA004786B1 (ru) | Применение (-)-цис-5,7-дигидрокси-2-(2-хлорфенил)-8-[4-(3-гидрокси-1-метил)пиперидинил]-4-бензопиран-4-она в качестве ингибитора пролиферации клеток гладких мышц | |
| US6887853B2 (en) | Use of geldanamycin and related compounds for treatment of fibrogenic disorders | |
| AU2019338896B2 (en) | Composition for treating fibrotic diseases, comprising benzhydryl thioacetamide compound as active ingredient | |
| KR20210073743A (ko) | 벤즈히드릴 티오 아세트아미드 화합물을 유효성분으로 포함하는 섬유화 질환의 치료용 조성물 | |
| JP2005526768A (ja) | 炎症関連遺伝子を調節するデキサナビノール及びデキサナビノール類似体 | |
| CN110575540A (zh) | Pdgf抑制剂用于制备治疗肠道炎症疾病的药物方面的用途 | |
| Sun | F-box and WD repeat domain-containing 7 (FBXW7) mediates the hypoxia inducible factor-1α (HIF-1α)/vascular endothelial growth factor (VEGF) signaling pathway to affect hypoxic-ischemic brain damage in neonatal rats | |
| JPWO2003024446A1 (ja) | 酸化ストレス抑制剤および酸化ストレスの測定方法 | |
| US9457016B2 (en) | Methods for treating polycystic kidney disease | |
| KR101734937B1 (ko) | ERRγ 역작동제를 유효성분으로 함유하는 암의 치료를 위한 방사성 요오드 요법에 적용되는 효능 증진제 | |
| WO2008106524A1 (en) | Use of histone deacetylase inhibitors for the treatment of central nervous system metastases | |
| US7056908B2 (en) | Pharmaceutical compositions and methods for preventing skin tumor formation and causing regression of existing tumors | |
| KR102371269B1 (ko) | VEGFR-3 발현 조절을 통한 mTOR 관련 질환의 예방 또는 치료 방법 | |
| US10344065B2 (en) | Method for treating Alzheimer's disease and method for downregulating protein aggregation in brain | |
| JP2003508489A (ja) | 創傷治癒の増進 | |
| WO2020262527A1 (ja) | 筋再生促進剤 | |
| WO2019146621A1 (ja) | ペリオスチンの発現量増加またはスプライシングバリアントの変化を伴う疾患の治療用医薬組成物 | |
| JP2014141472A (ja) | １，３，５−トリアジン誘導体を有する線維化予防又は治療剤 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |
|
| MK4A | Patent expired |
Designated state(s): RU |