NO330512B1 - Anvendelse av 4-H-1-benzopyran-4-on-derivater for fremstilling av et farmasoytisk preparat for inhibering av glatt muskelcelle proliferering - Google Patents
Anvendelse av 4-H-1-benzopyran-4-on-derivater for fremstilling av et farmasoytisk preparat for inhibering av glatt muskelcelle proliferering Download PDFInfo
- Publication number
- NO330512B1 NO330512B1 NO20013335A NO20013335A NO330512B1 NO 330512 B1 NO330512 B1 NO 330512B1 NO 20013335 A NO20013335 A NO 20013335A NO 20013335 A NO20013335 A NO 20013335A NO 330512 B1 NO330512 B1 NO 330512B1
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- flavopiridol
- alkyl
- proliferation
- cell
- smooth muscle
- Prior art date
Links
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title claims description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 3
- 150000004777 chromones Chemical class 0.000 title description 9
- 230000006715 negative regulation of smooth muscle cell proliferation Effects 0.000 title description 2
- BIIVYFLTOXDAOV-YVEFUNNKSA-N alvocidib Chemical compound O[C@@H]1CN(C)CC[C@@H]1C1=C(O)C=C(O)C2=C1OC(C=1C(=CC=CC=1)Cl)=CC2=O BIIVYFLTOXDAOV-YVEFUNNKSA-N 0.000 claims description 105
- 229950010817 alvocidib Drugs 0.000 claims description 104
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 claims description 50
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims description 41
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 34
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 18
- 230000003902 lesion Effects 0.000 claims description 17
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 8
- 231100000216 vascular lesion Toxicity 0.000 claims description 7
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 claims description 5
- -1 COO-Ci-C6- alkyl Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 claims description 4
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 3
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004799 bromophenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 claims description 2
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 2
- 125000000068 chlorophenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004188 dichlorophenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 150000002367 halogens Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 2
- 125000004464 hydroxyphenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 238000002513 implantation Methods 0.000 claims description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 2
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 51
- 210000005119 human aortic smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 38
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 36
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 33
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 32
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 32
- 102000003974 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 28
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 28
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 21
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 20
- 230000008692 neointimal formation Effects 0.000 description 19
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 17
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 16
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 16
- 102000009339 Proliferating Cell Nuclear Antigen Human genes 0.000 description 14
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 14
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 14
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 14
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 13
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 13
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 10
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 101150073031 cdk2 gene Proteins 0.000 description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 9
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 9
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 8
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 8
- 101150018665 MAPK3 gene Proteins 0.000 description 8
- 101150024075 Mapk1 gene Proteins 0.000 description 8
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 8
- 208000034827 Neointima Diseases 0.000 description 7
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 7
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- 102000016736 Cyclin Human genes 0.000 description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 6
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 102000003903 Cyclin-dependent kinases Human genes 0.000 description 5
- 108090000266 Cyclin-dependent kinases Proteins 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- 208000024248 Vascular System injury Diseases 0.000 description 5
- 208000012339 Vascular injury Diseases 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 5
- 238000000021 kinase assay Methods 0.000 description 5
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 5
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 4
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 4
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 4
- 230000006369 cell cycle progression Effects 0.000 description 4
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 4
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101150012716 CDK1 gene Proteins 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000018199 S phase Effects 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 229940043378 cyclin-dependent kinase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 3
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 3
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000022983 regulation of cell cycle Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091007914 CDKs Proteins 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010093502 E2F Transcription Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000001388 E2F Transcription Factors Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000817629 Homo sapiens Dymeclin Proteins 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 239000002875 cyclin dependent kinase inhibitor Substances 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 108010052344 histone H1 kinase Proteins 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 2
- 238000013392 nude mouse xenograft model Methods 0.000 description 2
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- NQVIIUBWMBHLOZ-UHFFFAOYSA-N 2-[2-hydroxyethyl-[6-[(4-methoxyphenyl)methylamino]-9-propan-2-ylpurin-2-yl]amino]ethanol Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1CNC1=NC(N(CCO)CCO)=NC2=C1N=CN2C(C)C NQVIIUBWMBHLOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 2-[[2-[[6-amino-2-[[2-[[2-[[5-amino-2-[[2-[[1-[2-[[6-amino-2-[(2,5-diamino-5-oxopentanoyl)amino]hexanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)p Chemical compound C1CCN(C(=O)C(CCCN=C(N)N)NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CCC(N)=O)C1C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)NC(CO)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(=O)NC(CC(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 KISWVXRQTGLFGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- KYNSBQPICQTCGU-UHFFFAOYSA-N Benzopyrane Chemical group C1=CC=C2C=CCOC2=C1 KYNSBQPICQTCGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940123587 Cell cycle inhibitor Drugs 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 102000008130 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010049894 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Proteins 0.000 description 1
- 108010058546 Cyclin D1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100024165 G1/S-specific cyclin-D1 Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical compound Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000012820 MEK1 Inhibitor Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000044589 Mitogen-Activated Protein Kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108700015928 Mitogen-activated protein kinase 13 Proteins 0.000 description 1
- 102000047918 Myelin Basic Human genes 0.000 description 1
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710107068 Myelin basic protein Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 1
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 description 1
- 108050002653 Retinoblastoma protein Proteins 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-KNYAHOBESA-N [[(2r,3s,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] dihydroxyphosphoryl hydrogen phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)O[32P](O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KNYAHOBESA-N 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003026 cod liver oil Substances 0.000 description 1
- 235000012716 cod liver oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000007887 coronary angioplasty Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 238000013156 embolectomy Methods 0.000 description 1
- 230000008753 endothelial function Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 125000004387 flavanoid group Chemical group 0.000 description 1
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 1
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000001640 fractional crystallisation Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000006951 hyperphosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000002608 intravascular ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 238000010150 least significant difference test Methods 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N maleic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UPHRSURJSA-N 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 208000030613 peripheral artery disease Diseases 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 239000012660 pharmacological inhibitor Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 231100000161 signs of toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000013222 sprague-dawley male rat Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 229940095064 tartrate Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009750 upstream signaling Effects 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 230000003966 vascular damage Effects 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
- A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
- A61K31/453—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Description
O ppfinnelsens område
Foreliggende oppfinnelse angår anvendelse av 4-H-l-benzopyran-4-one-derivater for fremstilling av et farmasøytisk preparat for inhibering av glatt muskelcelle (SMC) proliferering.
O ppfinnelsens bakgrunn
Den cellulære respons på vaskulær skade - cellulær dysfunksjon, aktivering, dedifferensiering, proliferering og migrering - kulminerer i kliniske hendelser slik som restenoser, som oppstår etter ballongangioplasti og plassering av stenter for behandling av human aterosklerotisk sykdom \ Glatt muskelcelle (SMC)-proliferering er et vanlig og muligens ensartet trekk ved modeller for vaskulær skade, og SMC er hovedcellekomponenten ved neointimale lesjoner<2>'<3>. Ny interesse for å inhibere SMC-proliferering har fulgt økningen i anvendelse av stenter ved behandling av koronar sykdom, siden restenoser ved stenter nesten utelukkende er avhengig av neointimal dannelse og SMC-hyperplasi<4>. Det er beregnet at så mange som 100 000 pasienter med stentrestenoser krevde behandling bare i 1997<5>; derfor ville en lett administrerbar effektiv inhibitor av SMC-hyperplasi ha store kliniske og økonomiske følger<6>.
Forsøk på å inhibere SMC-proliferering i modeller for vaskulær skade, enten ved å modulere cellemediatorer av den proliferative respons, eller ved direkte å interferere med cellesyklusmaskineriet, har medført viktig innsikt i neointimal dannelse. Cellesyklusprogresjon er en tett kontrollert hendelse regulert positivt ved syklinavhengige kinaser (Cdk) og deres syklinregulerende subenheter<7>, og negativt ved Cdk-inhibitorer og tumorsupressorgener slik som retinoblastomprotein ((Rb) og p53<8>. Adenovirus-mediert overekspresjon av endogene Cdk-inhibitorer p21 og ^ 27^ eller av en konstitutiv aktiv form av Rb blokkerer neointimal dannelse i en rotte carotis skademodell9-1 1; tilsvarende inhiberer også inhibisjon av den aktive transkripsjonsfaktoren E2F ved kompetitiv overekspresjon av liknende DNA-bindingsseter SMC-proliferasjon og neointimal dannelse<12>. Slike studier støtter den generelle hypotese at cellesyklusinhibisjon er et attraktivt mål for intervensjon i vaskulær lesjonsdannelse.
Mens intervensjoner har bistått analysen av mekanismene som regulerer neointimal dannelse, lider de av den utilstrekkelighet av for tiden ikke å være klinisk egnet for behandling av vaskulær sykdom hos menneske. En vannløselig, lavmolekylær forbindelse med spesielle cellesyklusregulerende effekter, i særdeleshet en med oral aktivitet, ville ha bred anvendelse både eksperimentelt og eventuelt klinisk. Det nylig identifiserte flavon, flavopiridol, er en Cdk-inhibitor som sterkt blokkerer aktiviteten til Cdk2, Cdc2og CdLt<13>"<16>.1 motsetning til andre farmakologiske inhibitorer av Cdk utmerker flavopiridol seg med sin kinasespesifisitet, sin orale tilgjengelighet og sin styrke ved å være effektiv i nanomolare konsentrasjoner<16>. Disse unike trekk resulterer i en fordelaktig bivirkningsprofil som har ført til utprøving av flavopiridol i fase 1 kliniske studier for behandling av refraktære neoplasmaer 17. Gitt disse egenskaper er flavopiridols evne til å inhibere SMC-proliferering in vitro og etter ballongskade på carotisarterien hos rotte nå undersøkt. Det er funnet at flavopiridol er en potent og selektiv inhibitor av cellesyklusprogresjon og at den arresterer SMC-prolifereringen både in vivo og in vitro; videre blokkeres den neointimale dannelse effektivt ved orale doser av flavopiridol lavere enn de som er kjent for å ha toksiske effekter hos menneske.
Det er nå overraskende blitt funnet at 4-H-l-benzopyran-4-one-derivater er egnede SMC-prolifereringsinhibitorer. Det er kjent at 4-H-l-benzopyran-4-one-derivater er egnede for å kontrollere tumorer. Imidlertid er det overraskende at 4-H-l-benzopyran-4-one-derivater som anvendes ved foreliggende oppfinnelse effektivt virker som en SMC-prolifereringsinhibitor ved dosenivåer lavere enn dosenivåene som anvendes ved kontroll av tumorvekst.
Følgelig er en hensikt ifølge oppfinnelsen å anvende 4-H-l-benzopyran-4-one-derivater som inhibitorer på glatt muskel proliferering.
Figur 1. Effekt av flavopiridol på HASMC DNA- syntese. A. Hvilende HASMC ble behandlet i fravær (-) eller nærvær (+) av bFGF (10 ng/ml) og med de antydede konsentrasjoner av flavopiridol (nmol/1) i 24 timer. BrdU-inkorporering som et mål på proliferering ble bestemt ved en ELISA-basert analyse og uttrykt som prosent inkorporering i fravær av bFGF-behandling.<*>p < 0,05 i forhold til ubehandlede celler.
■ fp < 0,05 i forhold til behandling med bFGF i fravær av flavopiridol. B. HASMC ble behandlet med bFGF (10 ng/ml), trombin (2U/ml), eller vehikkel i nærvær eller fravær av flavopiridol (75nmol/l) og BrdU-inkorporering ble målt. * p < 0,05 i forhold til ubehandlede celler. ** p< 0,05 i forhold til behandling med bFGF alene, fø < 0,05 i forhold til behandling med trombin alene.
Figur 2. Effekt av flavopiridol på HASMC- proliferering. Hvilende HASMC ble behandlet med bFGF (10 ng/ml) alene (□), bFGF og flavopiridol (75nmol/l) (□), eller vehikkel (□) i den antydede tid og celleantall etter behandling ble bestemt. Resultater er uttrykt som celleantall pr. brønn (x IO<3>).
Figur 3. Effekt av flavopiridol på cyklin- avhengig kinaseaktivitet i HASMC. Hvilende HASMC ble behandlet med bFGF (10 ng/ml), trombin (2 U/ml) eller vehikkel i nærvær eller fravær av flavopiridol (75 nmol/1), og fosforylering av histon Hl ble kvantifisert som et mål på Cdk-aktivitet og uttrykt som en prosent av Cdk-aktivitet i fravær av bFGF-behandling. * p < 0,05 i forhold til ubehandlede celler. ** p < 0,05 i forhold til behandling med bFGF alene, fø < 0,05 i forhold til behandling med trombin alene. Figur 4. Regulering av cellesyklusrelaterte proteiner av flavopiridol. Hvilende HASMC ble behandlet i nærvær (+) eller fravær (-) av bFGF (10 ng/ml), trombin (2 U/ml) og/eller flavopiridol (75nmol/l) i 24 timer. Immunblått av cellelysater ble utført med spesifikke antistoffer som gjenkjenner cyklin Di ( øvre del), PCNA ( midtre del) og fosforylert ( pRb) og hyperfosforylert ( ppRb) Rb ( nedre del). Figur 5. Effekter av flavopiridol på MAP kinaseaktivitet i HASMC. Hvilende HASMC ble behandlet i nærvær (+) eller fravær (-) av bFGF (10 ng/ml), trombin (2 U/ml), PD98059 (30 nmol/1) og/eller flavopiridol (75 nmol/1) i 30 minutter. Nivåer av fosforylert Erkl (pErkl) og Erk2 (pErk2) ble målt ved immunblotting med et fosforylerings-spesifikt antistoff som gjenkjenner begge proteiner (øvre del). MAP-kinase aktiviteten ble målt med en "in-gel" kinaseanalyse, som anvender basisk myelinprotein som et substrat (nedre del). Figur 6. Levedyktigheten til HASMC etter behandling medflavopiridol. Hvilende HASMC ble behandlet med flavopiridol (75nmol/l), TNF-a (50 ng/ml), eller vehikkel for tidsperiodene antydet. Cellelevedyktighet ble vurdert ved eksklusjon av trypanblått. Resultatene uttrykkes som prosent av levedyktige celler i forhold til det totale celleantall. Figur 7. Inhibisjon av neointimal dannelse i rottecarotisarterie ved flavopiridol etter ballongskade. Neointima/media-forholdene ble målt i histologiske snitt av rotte carotisarterier behandlet med eller uten flavopiridol (5 mg/kg) i 5 dager etter skade. Arteriene ble undersøkt 7 ( n = 12) og 14 ( n = 12) dager etter skade. Prosentandelen av PCNA-positive kjerner (± SEM, uttrykt som en prosent av antall talte kjerner) i neointima til arteriene fra hvert tidspunkt og behandlingstype er også gitt. * p < 0,05 sammenliknet med behandling med vehikkel. Figur 8. Histologiske snitt fra rotte carotis arterier. Snittene er fra arteriene 7 ( A og B) og 14 (C og D) dager etter skade. Arteriene vist i A og C er fra rotter behandlet med flavopiridol (5 mg/kg) ved sondeforing; arteriene i B og D er fra rotter behandlet med bare vehikkel. Opprinnelig forstørrelse x 100. Figur 9. Cdk2- ekspresjon etter ballongskade i rotte carotis arterier. Snittene er fira arterier 7 ( A og B) og 14 (C og D) dager etter skade. Arteriene vist i A og C er fira rotter behandlet med flavopiridol (5 mg/kg) ved sondeforing; arteriene i B og D er fra rotter behandlet med bare vehikkel. Cdk2-positive kjerner, lokalisert hovedsakelig i neointima, farges med vektorblått ifølge den alkaliske fosfatasemetoden. Opprinnelig forstørrelse x 100.
Foreliggende oppfinnelse omfatter følgelig anvendelse av en forbindelse av formel Ia
R5
I
OH O Formel Ia
der Ri er hydrogen, Ci-C3-alkyl, naftyl, fenyl; fenyl mono- eller polysubstituert med halogen, Ci-C4-alkyl, Ci-C4-alkoksy, hydroksyl, karboksyl, COO-Ci-C6- alkyl, CONH2, CONH-C1-C6- alkyl, CON(Ci-C6-alkyl)2, nitro, trifluormetyl, amino, Ci-C4-alkylamino, di-Ci-C4-alkylamino, eller fenyl; pyridyl eller tienyl;
R2er hydrogen eller Ci-C3-alkyl;
R5er Ci-C3-alkyl, C3-C5-sykloalkyl, eller C3-C5-sykloalkyl-Ci-C4-alkyl,
eller et farmasøytisk akseptabelt syreaddisjonssalt derav, for fremstilling at et farmasøytisk preparat for inhibering av glattmuskel-proliferering, hvor dosen av forbindelsen i følge formel Ia er mindre enn 70 %, fortrinnsvis mindre enn 60 %, i
særdeleshet mindre enn 50 % av doseringen som er nødvendig for å kontrollere tumorvekst.
Forbindelsene som anvendes ifølge oppfinnelsen har to asymmetriske sentre, ett der den heterosykliske ring inneholdende nitrogen er fusert til benzopyranenheten (C-4'), den
andre ved karbonatom som bærer OH-gruppen på samme ring (C-3'), hvilket betyr at to par optiske isomerer er mulig. Definisjonen av forbindelsen ifølge oppfinnelsen omfatter alle mulige stereoisomerer og deres blandinger. Spesielt omfatter den racemiske former og de isolerte, optiske isomerer med spesiell aktivitet. De to racematene kan oppløses ved fysikalske metoder slik som for eksempel fraksjonskrystallisering. De enkelte optiske isomerer kan oppnås fra racematene ved konvensjonelle fremgangsmåter, slik som for eksempel saltdannelse med en optisk aktiv syre etterfulgt av krystallisering. Eksempel på alkylgrupper som er egnet for Ri til R5er rettkjedete eller forgrenede radikaler.
Egnede eksempler på salter av forbindelsene som anvendes ifølge oppfinnelsen med uorganiske eller organiske syrer er hydroklorid, hydrobromid, sulfat, fosfat, acetat, oksalat, tartrat, citrat, maleat eller fumarat.
Særlig foretrukket er anvendelsen av forbindelser med formel Ia, der Ri er fenyl, tienyl, pyridyl, klorfenyl, diklorfenyl, metylfenyl, aminofenyl, bromfenyl, hydroksyfenyl eller naftyl;
R2er hydrogen og
R5er metyl.
En særlig viktig forbindelse er (-)-cis,-5,7-dihydroksy-2-(2-klorfenyl)-8-[4-(3-hydroksyl-metyl)-pipeirdinyl]-4H-benzopyran-4-one(Flavopiridol), spesielt i form av hydroklorid.
Forbindelsene som anvendes ifølge oppfinnelsen kan fremstilles ifølge beskrivelsen i U.S. patent nr. 4 900 727 og U.S. patent nr. 5 284 856. Eksemplene i disse U.S. patenter er også viktige for foreliggende oppfinnelse.
Forbindelsene som anvendes ifølge foreliggende oppfinnelse inhiberer glatt muskelcelleproliferering. De kan følgelig finne anvendelse som farmasøytiske preparater for inhibisjon av glatt muskelcelleproliferering, som inneholder minst en forbindelse med formel Ia, definert ovenfor eller minst ett av dens farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter. Typiske anvendelsesområder for forbindelsene som anvendes ifølge oppfinnelsen er sykdommer/forstyrrelser/skader forbundet med vaskulære lesjoner som er rike på glatte muskelceller. Et svært viktig eksempel er derfor lesjoner etter ballongskader. Et annet viktig anvendelsesområde er forebyggelse av restenose etter implantering av stenter.
For de farmasøytiske preparatene som oppnås ved oppfinnelsen anvendes en effektiv mengde av den nevnte aktive substans, enten pr. se eller eventuelt i kombinasjon med egnede farmasøytiske hjelpestoffer i form av tabletter, belagte tabletter, kapsler, stikkpiller, emulsjoner, suspensjoner eller løsninger, der innholdet av aktiv forbindelse er opptil 95 %, fortrinnsvis mellom 10 og 75 %.
Fagpersonen vil vite hvilke hjelpestoffer som er egnede for den ønskede formuleringen av farmasøytisk preparat fordi dette ligger innenfor hans kunnskapsområde. Ved siden av hjelpestoffer for tabletter eller løsningsmidler, gelformer, baser for stikkpiller og andre eksipienser for den aktive substans, er det mulig og anvende for eksempel antioksidanter, dispergeringsmidler, emulgeringsmidler, skumhindrende midler, smaksstoffer, konserveringsmidler, oppløseliggjørende midler eller fargestoffer.
Den aktive substans kan administreres oralt, parenteralt, intravenøst eller rektalt, oral administrering er fordelaktig. For en form for oral administrering kan den aktive substans blandes med andre forbindelser sammen med hjelpestoffene som er egnet i dette henseendet, slik som eksipienser, stabilisatorer og inerte fortynningsmidler, og vanlige fremgangsmåter kan anvendes for å overføre den til egnede administrasjonsformer, slik som tabletter, belagte tabletter, harde gelatinkapsler og vandige alkoholiske eller oljeformige suspensjoner eller løsninger. Eksempler på inerte eksipienser som kan anvendes er gummiarabicum, magnesiumoksid, laktose, glukose eller stivelse, i særdeleshet maisstivelse. I denne sammenheng kan formuleringen fremstilles som tørt granulat eller fuktig granulat. Eksempler på egnede oljeeksipienser eller løsningsmidler er vegetabilske eller animalske oljer, slik som solsikkeolje eller torskeleverolje.
Ved subkutan eller intravenøs administrering dannes en løsning, suspensjon eller emulsjon av den aktive substans, om nødvendig anvendes substanser som er konvensjonelle i denne hensikt, slik som oppløseliggjørende stoffer, emulgeringsmidler og andre hjelpestoffer. Eksempler på egnede fortynningsmidler er vann, fysiologisk natriumkloridløsning eller alkoholer, for eksempel etanol, propanol eller glyserol, og også sukkerløsninger slik som glykoseløsninger eller mannitolløsninger, eller en blanding av ulike løsningsmidler som er nevnt.
Dosen av 4H-l-benzopyran-4-one-derivater som kan administreres daglig utvelges for å tilpasses den ønskede effekt. 4H-l-benzopyran-4-one-derivatene kan administreres i en dose som er mindre enn 70 %, fortrinnsvis mindre enn 60 %, i særdeleshet mindre enn 50 % av dosen, som anvendes for å kontrollere tumorvekst i det enkelte pattedyr. Et eksempel vil være - i en naken mus - xenograft modell - en dose på ca. 5 mg/kg kroppsvekt administrert oralt en gang daglig. Dette er halvparten av dosen som inhiberer tumorvekst i den samme dyremodell (Drees et al. Clin. Cancer Res. 1997; 3; 273-279).
De farmakokinetiske egenskaper til 4H-l-benzopyran-4-one-derivatene kan gjøre det nødvendig å administrere forbindelsen flere ganger om dagen eller å velge langsomme frigivelsesformuleringer.
Eksempler
1. Flavopiridol inhiberer glatt muskelcelleproliferering og neointimal dannelse in vivo i en rotte carotismodell for vaskulær skade.
Den veletablerte rotte carotis skademodellen, der dannelse av neointimal lesjon etter kateterindusert skade er kritisk avhengig av SMC-proliferering (Clowes et al. Lab. Invest. 1983; 49:327-333, Clowes et al. Circ. Res. 1985; 56:139-145) ble anvendt for å undersøke om flavopiridol induserer vekststans i SMC in vivo, som det gjør in vitro. Flavopiridol ble administrert oralt ved en dose på 5 mg/kg en gang daglig, begynnende på skadedagen og forsatt 4 dager deretter, siden denne tidsperiode dekker den initielle induksjon av Cdk2 og den første bølge av SMC-proliferering i denne modell (Circ. Res. 1995; 77:445-465, Circ. Res. 1997; 80:418-426). Gjennomsnittlig intimalt og medialt areal ble kvantifisert 7 og 14 dager etter skaden, og neointimal lesjonsstørrelse ble uttrykt som forholdet mellom det neointimale og det mediale areal. Den behandlede og ubehandlede gruppen besto av 12 dyr. Forholdet på dag 7 var 1,00 ± 0,05 i arteriene hos vehikkelbehandlede rotter, og 0,65 ± 0,04 i flavopiridolbehandlede rottearterier, en reduksjon på 35 %. På dag 14 var det neointimale/mediale forholdet 1,08 ± 0,04 i vehikkelbehandlede rotter, og 0,66 ± 0,03 i flavopiridolbehandlede rotter, en reduksjon på 38,9 %. Disse effekter var statistisk signifikante ved begge tidspunkter (P < 0,05).
Metoder
Materialer - Flavopiridol (L86-8275, (-)- cis, -5,7 -dihydroksy-2-(2-klorfenyl)-8-[4-(3-hydroksy-l-metyl)-piperidinyl]-4H-benzopyran-4-one) ble skaffet fra Hoechst Marion Roussel, Inc., og ble oppløst i dimetylsulfoksid som en stamløsning på 50 mmol/1 for cellekultureksperimenter eller i vann for in vivo eksperimenter. Basisk fibroblastvekstfaktor (bFGF) ble levert fra Collaborative Biochemical og trombin fra Sigma. MEK1-inhibitoren PD98059 ble skaffet fra New England Biolabs.
Cellekultur - Glatte muskelceller fra human aorta (HASMC) ble skaffet fra Clonetics og ble dyrket som tidligere beskrevet<18>. Celler ble anvendt ved passasjene 5-9. Før eksperimentene ble utført ble veksten stoppet ved 80 % konfluens i 48 timer med medium inneholdende 0,2 % føtalt bovint serum.
Celleprolifererings ELISA - Celleproliferasjon ble målt ved ELISA (Amersham Life Science). HASMC ble dyrket i gelatinbelagte 96-brønns plater og gjort hvilende. Celler ble behandlet med 10 ng/ml bFGF, 2 U/ml trombin, eller vehikkel i 24 timer. Flavopiridol (75 nmol/1) ble administrert 1 time før vekstfaktorbehandling. 5-brom-2'-deoksyuridin (BrdU) ble tilsatt til en sluttkonsentrasjon på 10 pmol/1 under de 2 siste timene av eksperimentet. BrdU-inkorporering ble målt som beskrevet<19>. Resultatene uttrykkes som gjennomsnitt ± standardfeil for 12 prøver pr. betingelse for to uavhengige eksperimenter.
Celleantall - Vekststansede HASMC, dyrket til 50 % konfluens i 6-brønns plater ble behandlet med eller uten flavopiridol (75 nmol/1) eller bFGF (10 ng/ml). Ved intervaller etter behandling ble celler trypsinert og celleantall bestemt ved anvendelse av et hemocytometer.
Western blot analyser - Hvilende HASMC ble behandlet i nærvær eller fravær av vekstfaktorer og/eller flavopiridol som antydet. Western blot analyser ble utført som tidligere beskrevet<18>. De primære antistoffer var: Et polyklonalt antihumant syklin Dl-antistoff (M-20, Santa Cruz), et monoklonalt antihumant prolifererende cellekjerne antigen (PCNA)-antistoff (PC 10, Sigma), et fosforyleringsspesifikt p44/42 (Erkl/Erk2) MAP-kinase monoklonalt antistoff (New England Biolabs), og et monoklonalt anti-Rb-antistoff (G3-245, Pharmigen), som gjenkjenner de fosforylerte (pRb) og de høyt fosforylerte (ppRb) Rb-typene. For immunblottingsstudier ble eksperimentet gjentatt minst tre ganger.
Cdk- aktivitet - Hvilende HASMC ble behandlet med agonister og inhibitorer i 24 timer og totalt cellelysat ble tilberedt som beskrevet for Western blotting. Kinaseanalysen ble utført med et histon og et kinase-analysesett (Upstate Biotechnology) ifølge produsentens bruksanvisning. I korthet ble 10 pl peptidinhibitorer for protein kinase C (2 pmol/1) og protein kinase A (2 pmol/1), 100 ug cellelysat, 10 jol analysebuffer og 10 pl av en blanding inneholdende 75 pmol/1 magnesiumklorid, 500 pmol/1 ATP og 1 pCi/ml [y -<32>P]ATP blandet i et mikrosentrifugerør. Etter inkubering ved 30 °C i 10 minutter ble alikvoter pipettert på fosforcellulosepapir. Papirene ble vasket i 0,75 % fosforsyre, etterfulgt av målinger av cpm i en scintillasjonsteller (Beckman). Resultatene uttrykkes som gjennomsnitt ± standardfeil for 3 prøver og er representative for tre uavhengige eksperimenter.
" In- gel"- kinaseanalyse - Hvilende HASMC ble behandlet med vekstfaktorer i 30 minutter og totalt cellelysat ble tilberedt som beskrevet for Western blotting. I noen eksperimenter ble HASMC forbehandlet i 60 minutter med 30 nmol/1 PD98059, flavopiridol eller vehikkel. Like mengder av proteiner (50 ng/felt) ble oppløst på en polyakrylamidgel som ble ko-polymerisert med 350 ng/ml basisk myelinprotein. Gelen ble behandlet med[y-32P]ATP og autoradiografi ble utført som beskrevet<19>.
Trypanblå- eksklusjon - HASMC ble dyrket i 5-cm skåler ved lav konfluens og veksten arrestert som beskrevet. Celler ble behandlet med flavopiridol (75 nmol/1) eller tumornekrosefaktor-a (TNF-a; 50 ng/ml) for de antydede tidspunkter. Etter fjerning av mediet ble 0,4 % trypanblått i fosfatbufret saltvann tilsatt skålene. Etter 5 minutter ble cellene i skålen telt under mikroskop. Blå celler ble telt som ikke levedyktige celler.
Rotte carotis skademodell - Skade på rotte carotisarterien ble utført i hovedsak som beskrevet . Voksne Sprague-Dawley hannrotter (400-500 g, Zivic-Miller) ble anestesert med en intraperitoneal injeksjon av ketamin (2 mg/kg) og xylazin (4 mg/kg). Venstre carotis interna ble deretter kanylert med et 2F embolectomikateter. Ballongen ble blåst opp med saltvann og trukket gjennom arterien tre ganger for å frembringe en utvidende og blottleggende skade. Den høyre carotisarterien forble uskadet og fungerte som en kontroll på skade for hvert dyr. Umiddelbart etter rekonstitusjon etter anestesi og i 4 påfølgende dager ble rottene administrert med flavopiridol (5 mg/kg i vann) eller vann ved sondeforing som blindtest. Alle rottene overlevde kirurgien og det var ingen tydelige tegn på toksisitet forbundet med medikamentadministreringen i de anvendte dosene. Ved særskilte tidspunkter etter carotisskaden ble rottene anestesert som ovenfor og perfusjonsfiksert systemisk med 4 % paraformaldehyd i fosfatbufret saltvann. Høyre og venstre carotisarterier ble fjernet og utspilt ved injeksjon av 4 % paraformaldehyd gjennom lumen, hvorpå de ble dehydrert og lagret i 70 % etanol ved 4 °C. Immunhistokjemi ble utført som beskrevet tidligere<18>, ved anvendelse av det monoklonale PCNA-antistoff og et polyklonalt antihumant Cdk2-antistoff (M2-G, Santa Cruz).
Billedanalyse - De ytterste distale og proksimale områder av hver arterie (ca. 500 pm) ble fjernet. Ti mellomliggende tverrsnitt (8 pm hver) tatt med 500 pm mellomrom ble analysert for hver arterie. Snitt ble fiksert og farget med hematoxilin og eosin som tidligere beskrevet<18>. Ved anvendelse av et Nikon Diaphot 300 mikroskop og et 4x objektiv, ble hvert tverrsnitt tatt vare på som et digitalt bilde ved hjelp av et Hamamatsu C5985 videokamera og TCPro 2,41 (Coreco, Inc.). Mediale og neointimale områder ble bestemt ved anvendelse av NIH Image programvare. Mediale og neointimale grenser ble bestemt av en snittavleser (A.M.) og bekreftet på en blind måte av en annen avleser (C.P.). Lesjonsstørrelsen ble uttrykt som neointima/media-forholdet. Resultater for hver gruppe ble uttrykt som gjennomsnitt ± standardfeil. 92 % eller mer av bildene kunne tydes i hver gruppe; de resterende ble ikke analysert pga. fikseringsartifakter.
Statistiske analyser - Dersom det var hensiktsmessig ble data fra kvantitative studier uttrykt som gjennomsnitt ± standardfeil. For multiple behandlingsgrupper ble en faktoriell ANOVA etterfulgt av Fisher's minste signifikans forskjellstest anvendt. Statistisk signifikans ble akseptert ved p < 0,05.
Resultater
Flavopiridol inhiberer HASMC- proliferering - På bakgrunn av flavopiridols evne til å inhibere proliferasjon av ulike tumorcellelinjer, ble hypotesen om at dens anvendelse ville blokkere vekst av primærkultur av humane SMC undersøkt. Vekststansede HASMC ble behandlet med SMC-mitogenet bFGF (10 ng/ml) i 24 timer i nærvær av økende konsentrasjoner av flavopiridol og proliferasjonen ble målt ved en ELISA-basert analyse. Sammenliknet med ubehandlede celler økte proliferasjonen av bFGF-behandlede celler 5,4 ganger (figur IA). Forbehandling i 1 time med så lite som 50 nmol/1 flavopiridol reduserte HASMC-proliferasjonen betydelig (til 3,9-ganger,/> < 0,05), en effekt som var omtrent maksimal ved konsentrasjoner på 75 nmol/1. Tilsvarende resultater ble oppnådd ved anvendelse av tymidinopptak som et uavhengig mål på DNA-syntese (ikke vist).
For å undersøke alminneligheten i flavopiridols effekt på SMC-proliferasjon, ble dens effekt på mitogenese fremkalt av trombin (2 U7ml), som virker gjennom en G-proteinkoplende reseptor, tilsvarende bFGF, som stimulerer et medlem av reseptortyrosinkinasefamilien undersøkt. Flavopiridol (75 nmol/1) inhiberte signifikant og kraftig, både bFGF- og trombinindusert HASMC- proliferering (henholdsvis 5,4-ganger vs. 1,8-ganger og 2,4-ganger vs. 0,7-ganger, p < 0,05, figur IB). Det ble utført celletellinger for å bekrefte at effekten av flavopiridol på cellesyklusprogresjonen i HASMC virkelig gjenspeilet endringer i proliferasjon. bFGF (10 ng/ml) induserte en 3-gangers økning i celleantall etter 3 dagers behandling (figur 2). Tilsvarende resultater ble vist i de ELISA-baserte analyser, flavopiridol (75 nmol/1) blokkerte effektivt bFGF-indusert proliferering.
Flavopiridol inhiberer Cdk- aktivitet og cellesyklusrelatert genekspresjon i HASMC - For å vurdere den spesifikke effekt til flavopiridol på cellesyklusmaskineriet, ble histon Hl-kinaseaktiviteten i cellelysater fra vekstfaktorstimulerte HASMC målt. Fosforylering av histon Hl gjenspeiler aktivitetene til Cdc2og Cdk2<20>. Behandling av HASMC med bFGF og trombin resulterte i henholdsvis 4,4-gangers og 3,6-gangers økning i histon Hl-kinaseaktivitet (figur 3). Disse økninger i syklinavhengig kinaseaktivitet ble totalt blokkert ved forbehandling med flavopiridol (75 nmol/1).
Ved Western blot analyse ble det også undersøkt om flavopiridol påvirket
vekstfaktorindusert regulering av cellesyklusrelaterte proteiner i HASMC. Syklin Di er et Gi-fase syklin som oppreguleres ved vekstfaktorstimulering og som raskt degraderes ved fjerning fra cellesyklus 21. Syklin Di-proteinnivåer ble oppregulert, henholdsvis 6,3-ganger og 3,2-ganger som respons på bFGF- og trombinbehandling i 24 timer (figur 4), en effekt som fullstendig kunne blokkeres ved forbehandling med flavopiridol. Tilsvarende ble økning i ekspresjon av PCNA, som hovedsakelig syntetiseres under S-fasen i forbindelse med DNA-replikasjon<22>, også blokkert ved flavopiridol forbehandling. Som et endelig mål på cellesyklusrelaterte proteiner ble Rb-fosforylering som respons på vekstfaktorekspresjon ved anvendelse av et antistoff som gjenkjenner fosforylert Rb undersøkt. Rb er en cellesyklusregulator som bindes til, og inaktiverer, transkripsjonsfaktoren E2F når Rb er i ufosforylert tilstand<23>og induserer SMC-vekststans in vivo n. Fosforylering inaktiverer Rb og tillater at progresjonen gjennom S-fasen fortsetter. Analyse av Rb-fosforylering er særlig relevant fordi Rb er et mål for Cdk2og Cdktin vivo. Både trombin- og bFGF-indusert hyperfosforylering av Rb var en effekt som ble inhibert av flavopiridol. Totalt antyder disse resultater at flavopiridol
påvirker ekspresjon og aktivitet av Gi og S-faserelaterte cellesykluskontrollelementer i HASMC forbundet med dens vekstinhibitoriske effekter.
Flavopiridol har ingen effekt på MAP- kinasefosforylering eller - aktivitet - For å sikre at flavopiridol virker spesielt på cellesyklusnivået, heller enn uspesifikt på oppstrøms kinase-reaksjonsveier, ble fosforylering og aktivitet av Erkl (p44 MAP-kinase) og Erk2 (p42 MAP-kinase), to medlemmer av MAP-kinasefamilien, målt. Disse kinaser ble valgt fordi de befinner seg umiddelbart oppstrøms for transkripsjonshendelsene som oppstår som respons på vekststimuli og nedstrøms for et antall kritiske mitogene signalreaksjonsveier<24>. En intakt respons av MAP kinaser antyder at de oppstrøms mitogene reaksjonsveier også er intakte. Fosforyleringsstatusen til Erkl og Erk2 ble målt med et monoklonalt antistoff som spesifikt gjenkjenner fosforyleringen - og - følgelig aktiverte former. Som en kontroll på disse eksperimenter ble PD98059, en potent og selektiv inhibitor for MAP kinaseaktiviteten, anvendt 25. Økte mengder av fosforylert Erkl og Erk2 ble påvist etter behandling av HASMC med trombin og bFGF
i 30 minutter, sammenliknet med ubehandlede celler (figur 5, øvre del). Fosforylering av Erkl og Erk 2 ved både trombin og bFGF ble blokkert ved forbehandling med PD98059, men ikke med flavopiridol. For å bekrefte disse funn ble Erkl - og Erk2-aktivitet målt ved en "in-gel" kinaseanalyse (figur 5, nedre del). Igjen ble det funnet at Erkl - og Erk2-aktivitetene økte som respons på trombin og bFGF, en effekt som kunne inhiberes av PD98059, men ikke av flavopiridol. Disse eksperimenter sammen med de som er representert i figur 3 og 4, frembringer bevis for at effektene av flavopiridol på HASMC-proliferering er forårsaket av en spesifikk arrest av cellesyklusmaskineriet ved blokkering av Cdk-aktiviteten uten å påvirke oppstrøms signaliseringshendelser.
Flavopiridol øker ikke HASMC- levedyktigheten - Tidligere rapporter vedrørende flavopiridolaktivitet i andre celletyper har vist at, avhengig av celletypen, kan flavopiridol enten indusere vekststans uten å påvirke levedyktigheten, eller den kan forårsake apoptose<16>'<26>'<29>. Det ble derfor vurdert om flavopiridol reduserte levedyktigheten til HASMC ved å måle trypanblått-eksklusjon ved ulike tidspunkter etter behandling. Hvilende HASMC ble behandlet med flavopiridol (75 nmol/1), vehikkel eller TNF-a (50 ng/ml), et cytokin kjent for å indusere apoptose i denne celletype<30>. Mens TNF-a reduserer levedyktigheten til HASMC kraftig, hvilket resulterer i død av hovedsakelig alle celler behandlet i 24 timer, hadde flavopiridol ingen slik effekt (figur 6). Det ble observert at med høyere konsentrasjoner og lengre inkuberinger kunne noe reduksjon i levedyktighet i nærvær av flavopiridol forekomme
(ikke vist). Imidlertid, under de undersøkte betingelser induserer flavopiridol hovedsakelig vekststans, uten å påvirke SMC-levedyktigheten.
Flavopiridol inhiberer glatt muskelcelleproliferering og neointimal dannelse in vivo i en rotte carotis skademodell på vaskulær skade - Den veletablerte rotte carotis skademodell ble anvendt der dannelse av neointimale lesjoner etter kateterindusert skade er kritisk avhengig av SMC-proliferering<2>'<3>, for å undersøke om flavopiridol induserer vekststans av SMC in vivo, slik det gjør in vitro. Flavopiridol ble administrert oralt ved en dose på 5 mg/kg en gang daglig, begynnende på skadedagen og fortsatte de 4 neste dagene, siden denne tidsperiode dekker den initielle injeksjon av Cdk2og den første bølge av SMC-proliferering i denne modell<31>'<32>. Gje<n>nomsnittlige intimale og medialarealer ble kvantifisert 7 og 14 dager etter skade, og neointimal lesjonsstørrelse ble uttrykt som forholdet mellom det neointimale areal og det mediale areal. Det var 12 dyr i både den behandlede og ubehandlede gruppe. Det neointimale/mediale forholdet ved 7 dager var 1,00 ± 0,05 i arteriene hos vehikkelbehandlede rotter, og 0,65 ± 0,04 i flavopiridolbehandlede rottearterier, en reduksjon på 35,0 % (figur 7). På dag 14 var det neointimale/mediale forhold 1,08 ± 0,04 i vehikkelbehandlede rotter, og 0,66 ± 0,03 i flavopiridolbehandlede rotter, en reduksjon på 38,9 %. Disse effekter var statistisk signifikante ved begge tidspunkter ( p < 0,05). Representative arteriesnitt er vist i figur 8.
For direkte å demonstrere at flavopiridol inhiberer glatt muskelcelleproliferering, ble snitt farget for PCNA-ekspresjon i representative områder fira hver arterie og prosentandelen av PCNA-positive kjerner i neointima ble bestemt. På dag 7 var 31,1 7,2 % av kjernene i skadede områder fra ubehandlede rotter PCNA-positive, mens bare 11,8 ± 1,5 % av skadete arterier i flavopiridolbehandlede rotter var PCNA-positive (figur l;p < 0,05). På dag 14 var PCNA-positive kjerner til stede i 10,4 ± 2,0 % av neointimale celler fra behandlede, men bare i 4,2 ± 0,5 % av neointimale celler fra ubehandlede, uskadde rottearterier ( p < 0,05). (PCNA-positive kjerner ble sjelden sett i uskadde arterier, uavhengig av behandling.) Tilsvarende var Cdk2-positive celler langt mindre vanlige i neointima av flavopiridolbehandlede rotter (figur 9, A og Q, sammenliknet med arterier fra ubehandlede rotter ( B og D), ved både 7 og 14 dager etter skade.
Diskusjon
I foreliggende studie er det undersøkt om den nye Cdk-inhibitoren, flavopiridol, den mest potente og spesifikke inhibitor av Cdk som er kjent, er en egnet kandidat for å inhibere SMC-proliferering in vivo, spesielt innenfor området vaskulær skade. Tidligere forsøk på å styre cellesyklusmaskineriet terapeutisk ved behandling av vaskulære sykdommer har frembrakt et rasjonale for de foreliggende studier<9>"<12>; imidlertid er fremgangsmåter som frem til nå er anvendt bygget på genoverføringsteknologi for å inhibere cellesyklusprogresjon. Store kliniske vanskeligheter hindrer for tiden anvendelse av disse teknikker<33>. Under disse studier ble det rapportert at CVT-313, en nylig identifisert forbindelse som også har Cdk-inhibitoriske egenskaper, men ved mikromolare konsentrasjoner, også kan inhibere neointimal dannelse; imidlertid var det nødvendig at CVT-313 ble tilført carotisarterien på skadetidspunktet for å frembringe denne effekt<34>.1 motsetning ble det vist at oralt administrert flavopiridol, kraftig kan inhibere intimal dannelse til et nivå sammenliknbart med andre klinisk relevante midler<n>'<35>'<36>. Den orale aktivitet til flavopiridol gjør den unik blant midler som har blitt vist å være aktive i dyremodeller på vaskulær skade. Dens selektivitet, styrke og enkle administrering gjør flavopiridol til en utmerket kandidat for å undersøke de terapeutiske fordeler ved cellesyklusinhibisjon in vivo ved humane, vaskulære lesjoner.
Det ble valgt å administrere flavopiridol oralt i en konsentrasjon på 5 mg/kg, halvparten av den dose som inhiberer tumorvekst i en naken mus xenograft modell 21. Det er bemerkelsesverdig at flavopiridolkonsentrasjoner på 75 nmol/1 resulterer i tilnærmet fullstendig inhibisjon av SMC-proliferasjon i foreliggende studier, mens midlere serumkonsentrasjoner på 425 nmol/1 ble oppnådd ved doser under den toksiske grense i fase 1 humane studier på refraktært karsinom<17>. Foreliggende resultater antyder at langt lavere doser av cellesyklusinhibitorer enn de som anvendes ved neoplasier, kan være effektive innenfor området vaskulære sykdommer, slik som restenoser, med den samtidige gunstige effekt av øket toleranse.
Mens det er vist at flavopiridol induserer vekststans uten å påvirke levedyktigheten til HASMC i kultur, og er vist redusert neointimaldannelse etter flavopiridolbehandling in vivo, kan man ikke være sikker på at cellesyklusarrestasjon er den eneste faktor som reduserer neointimaldannelse ved carotislesjoner. Flavopiridol kan indusere vekststans med eller uten å indusere apoptose, avhengig av celletypen som observeres<29>. Interessant er det at flavopiridol inhiberer apoptose i PC12-celler som er endelig differensiert, mens den induserer apoptose i udifferensierte PC12-celler som er prolifererende<28>. Selv om foreliggende in vitro eksperimenter ble utført under betingelser som etterlikner fenotypen til SMC før skade, er det mulig at SMC kan respondere forskjellig på flavopiridol etter skade og kan til og med gjennomgå apoptose. Mens rollen til apoptose ved vaskulære lesjoner er uklar, induserer ekspresjon av Fas-liganden i SMC apoptose og blokkerer neointimaldannelse hos rotter etter ballongskade<37>, hvilket antyder at dersom flavopiridol virkelig induserer apoptose i SMC in vivo, som den gjør i prolifererende PC12-celler, kan dette være et gunstig fenomen innenfor rammen av neointimaldannelse. Andre mekanismer kan også bidra til effekten av flavopiridol på lesjonsdannelse. For eksempel forbedrer antisense-oligodeoksynukleotidmediert cellesyklusinhibisjon endotelfunksjonen i kaninvenetransplantat<38>. Ytterligere studier vil være nødvendige for å studere mekanismene til flavopiridols effekter, andre enn vekstarrestasjon, på SMC in vivo.
Gitt den demonstrerte rolle til SMC-proliferering ved lesjonsdannelse etter rotte carotisskade<2>'<3>, er det interessant å bemerke at, til tross for den tydelige effekt av flavopiridol in vitro, var dens evne til å inhibere neointimaldannelse, selv om den var signifikant; mer moderat under betingelser ifølge foreliggende in vivo eksperimenter. Flere ulike forklaringer er vurdert for denne observasjon. Det er usannsynlig at akselerert SMC-proliferering foregår etter opphør av flavopiridol, siden forskjeller i proliferativ indeks vedvarer så lenge som 14 dager etter skade (figur 7 og 9). Det er mer sannsynlig at enten andre komponenter ved lesjonsdannelse, slik som SMC-migrering og ekstracellulær matriksproduksjon, fortsatt bidrar til lesjonsdannelse, selv i fravær av betydelig SMC-proliferering, eller at avlevering av flavopiridol en gang daglig er utilstrekkelig for å arrestere proliferasjonen fullstendig i denne modell. Nylige data antyder at den biologiske halveringstid på flavopiridol er så kort som 2,5 timer, hvilket antyder at den sistnevnte hypotese kan være korrekt; flere studier kan gjøre det mulig å identifisere et enda mer effektivt doseregime<39>.
Foreliggende resultater antyder at flavopiridol kan inhibere SMC-proliferering og derfor neointimaldannelse i en vel akseptert modell for vaskulær sykdom i smådyr. Det må poengteres at relevansen av inhibisjon av SMC-proliferering er kontroversiell ved humane, vaskulære lesjoner, og kan være forskjellig avhengig av egenskapene til lesjonen og tidspunktet for når observasjoner på proliferasjon er utført. Den proliferative indeks til SMC i humane aterektomiprøver er bemerkelsesverdig lav<40>, selv om disse prøver ikke nødvendigvis gjenspeiler proliferative endringer ved tidligere, mer kritiske, stadier av lesjonsutviklingen. I tillegg kan remodellering av arterier uavhengig av neointimal vekst utgjøre en betydelig andel av den luminale obstruksjon etter angioplasti hos menneske<41>.1 motsetning er mitotisk aktivitetsindeks i SMC langt høyere (25 % PCNA-positive) i aterektomiprøver fra menneskelige lesjoner med "in-stent" restenoser, hvilket er konsistent med den etablerte rolle til SMC-hyperplasi, men ikke remodellering i denne prosess<4>. Ettersom plassering av stenter og kliniske problemer ved restenoser med stenter øker, vil det være behov for en effektiv metode for å stanse SMC-hyperplasi og neointimaldannelse. Siden flavopiridol er et potent, oralt tilgjengelig medikament med spesifikk Cdk-inhibitorisk aktivitet, og siden sikre doser av flavopiridol er kjent for menneske, kan flavopiridol vurderes som en farmasøytisk kandidat for forebyggelse av restenoser ved stenter hos mennesker.
Fremgangsmåter og resultater: Ved anvendelse av dyrkede, humane aorta muskelceller ble det funnet at flavopiridol i konsentrasjoner så lave som 75 nmol/1 resulterte i nesten fullstendig inhibisjon av basisk fibroblastvekstfaktor og trombinindusert proliferering. Ved denne dose inhiberte flavopiridol syklinavhengig kinaseaktivitet, målt ved histon Hi-fosforylering, men hadde ingen effekt på MAP-kinaseaktivitet. Induksjon av det cellesyklusrelaterte protein syklin Di, prolifererende cellekjerneantigen og fosforylert retinablastomprotein ble også blokkert av flavopiridol. Flavopiridol hadde ingen effekt på cellelevedyktighet. For å teste om flavopiridol hadde en tilsvarende aktivitet in vivo når den ble administrert oralt, ble neointimaldannelse i rotte carotisarterier etter ballongskade undersøkt. Flavopiridol (5 mg/kg) administrert ved sondeforing reduserte det neointimale området med 35 % og 39 %, henholdsvis 7 og 14 dager etter skade.
Konklusjon: Flavopiridol inhiberer SMC-vekst in vitro og in vivo. Dens orale tilgjengelighet og selektivitet for syklinavhengige kinaser, gjør den til et potensielt terapeutisk verktøy ved behandling av SMC-rike vaskulære lesjoner.
REFERANSER
1. Ross R. The pathogenesis of atherosclerosis: a perspective for the 1990s.
Nature 1993; 362:801-9. 2. Clowes AW, Reidy MA, Clowes MM. Kinetics of cellular proliferation after arterial injury. Lab. Invest. 1983; 49:327-333. 3. Clowes A, Schwartz S. Significance of quiescent smooth muscle migration in the injuried rat carotid artery. Circ. Res. 1985; 56:139-145. 4. Kearney M, Pieczek A, Haley L, Losordo DW, Andres V, Schainfeld R, Rosenfield K, Isner JM. Histopathology of in-stent restenosis in patients with peripheral artery disease. Circulation 1997; 95: 1998 -2002. 5. Mintz GS, Hoffmann R, Mehran R, Pichard AD, Kent KM, Satler LF, Popma JJ, Leon MB. In-stent restenosis: the Washington Hospital Center experience. Am. J.
Cardiol. 1998; 81:7E-13E.
6. Califf RM. Restenosis: the cost to society. Am. Heart J. 1995; 130:680-684.
7. Sherr CJ. Mammalian Gi cyclins. Cell 1993; 73:1059-1065.
8. Hunter T. Braking the cycle. Cell 1993; 75:839-841.
9. Chen D, Krasinski D, Chen D, Sylvester A, Chen J, Nisen PD, Andres V. Downregulation of cyclin-dependent kinase 2 activity and cyclin A promoter activity in vascular smooth muscle cells by p27<Kn>1>, an inhibitor of neointima
formation in the rat carotid artery. J. Clin. Invest. 1997; 99:2334-2341.
10. Chang MW, Barr E, Lu MM, Barton K,Leiden JM. Adenovirus-mediated overexpression of the cyclin/cyclin-dependent kinase inhibitor, p21 inhibits vascular smooth muscle cell proliferation and neointima formation in the rat carotid artery
model of balloon angioplasty. J. Clin. Invest. 1995; 96:2260-2268.
11. Chang MW, Barr E, Seltzer J, Jiang Y-Q, Nabel EG, Parmacek MS, Leiden JM. Cytostatic gene therapy for vascular proliferative disorders with a constitutively
active form of the retinoblastoma gene product. Science 1995; 267:518-522.
12. Morishita R, Gibbons GH, Horiuchi M, Ellison KE, Nakajima M, Zhang L, Kaneda Y, Ogihara T, Dzau VJ. A Gene therapy strategy using a transcription factor decoy of the E2F binding site inhibits smooth muscle proliferation in vivo. Proe. Nati.
Acad. Sei. USA 1995; 92:5855-5859. 13. Losiewitz MD, Carlson BA, Kaur G, Sausville EA, Worland PJ. Potent inhibition of Cdc2 kinase activity by the flavanoid, L86-8275. Biochem. Biophys. Res. Commun.
1994; 201:589-595.
14. Carlson BA, Dubay MM, Sausville EA, Brizuela L, Worland PJ. Flavopiridol induces Gi arrest with inhibition of cyclin-dependent kinase (CDK) 2 og cdk4 in
human breast carcinoma cells. Canc. Res.
15. de Azevedo WF, Mueller-Dieckmann H-J, Schuze-Gahmen U, Worland PJ, Sausville E, Kim S-H. Structual basis for specificity and potency of a flavanoid inhibitor of human Cdk2, a cell cycle kinase. Proe. Nati. Acad. Sei. USA 1996;
93:2735-2740.
16. Kaur G, Stetler-Stevenson M, Sebers S, Worland P, Sedlacek H, Myers C, Czech J, Naik R, Sausville E. Growth inhibition with reversible cell cycle arrest of carcinoma
cells by flavone L86-8275. J. Nati. Canc. Inst. 1992; 84:1736-1740.
17. Senderowicz AM, Headlee D, Stinson S, Lush RM, Figg WD, Pluda J, Sausville Ea. A Phase I trial of flavopiridol (FLA), a novel cyclin-dependent kinase inhibitor, in patients with refractory neoplasm. Proe. Am. Soc. Clin. Oncol. 1997; 16:226a.
Abstract.
18. Ruef J, Hu ZY, Yin L-Y, Wu Y, Hanson sr, Kelly AB, Harker LA, Rao Gn, Runge MS, Patterson C. Induction of vascular endothelial growth factor in ballooninjured
baboon arteries. Circ. Res. 1997; 81:24-33.
19. Ruef J, Rao Gn, Li F, Bode C, Patterson C, Bhatnagar A, Runge MS. Induction of rat aortic smooth muscle cell growth by the lipid peroxidation product 4-hydroxy-2-noneal. Circulation 1998; 97:1071-1078. 20. Swank Ra, T'ng Jp, Guo XW, Valdez J, Bradbury EM, Gurley LR. Four distinct cyclin-dependent kinases phosphorylate histone Hi at all of its growth related
phosphorylation sites. Biochemistry 1997; 36:13761-13768.
21. Matsushime H, Roussel MF, Ashmun RA, Sherr CJ. Colony-stimulating factor 1 regulates novel cyclins during the Gi phase of the cell cycle. Cell 1991; 65:701-713. 22. Bravo R. Synthesis of the nuclear protein (PCNA) and its relationships with DNA replication. Exp. Cell Res. 1986; 163:287-293. 23. Ewen ME, Sluss HK, Sherr CJ, Matsushime H, Kato JY, Livingston DM. Functional interaction of the retinoblastoma protein with mammalian D-type cyclins. Cell 1993; 7:487-497. 24. Hunter T. Protein kinases and phosphatases: The yin and yang of protein phosphorylation and signaling. Cell 1995; 80:225-236. 25. Payne DM, Rossomando AJ, Martino P, Erickson AK, Her J-H, Shabanowitz J, Hunt DF, Weber MJ, Sturgill TW. Identification of the regulatory phosphorylation sites in pp42/mitogen-activated protein kinase (MAP kinase). EMBOJ. 1991; 10:885-892. 26. Konig A, Schwartz GK, Mohammad RM, Al-katib A, Gabrilove JL. The novel cyclin-dependent kinase inhibitor flavopiridol downregulates Bcl-2 and induces growth arrest and apoptosis in chronic B-cell leukemia lines. Blood 1997; 90:4307-4312. 27. Drees M, Dengler WA, Roth T, Labonte H, Mayo J, Malspeis L, Grever M, Sausville EA, Fieberg HH. Flavopiridol (L86-8275): Selective antitumor activity in vitro and activity in vivo for prostate carcinoma cells. Clin. Cancer Res. 1997;
3:273-279.
28. Park DS, Rarinelli SE, Greene LA. Inhibitors of cyclin-dependent kinases promote survival of post-mitotic neuronally differentiated PC 12 cells and sympathetic
neurons. J. Biol. Chem. 1996; 271:8161-8169.
29. Parker BW, Kaur G, Nieves-Niera W, Taimi M, Kohlhagen G, Shimizu T, Losiewicz MD, Pommier Y, Sausville EA, Senderowicz AM. Early induction of apoptosis in hematopoetic cell lines after exposure to flavopiridol. Blood 1998;
91:458-465.
30. Geng YJ, Wu Q, Muszynski M, Hansson GK, Libby P. Apoptosis of vascular smooth muscle cells induced by in vitro stimaltion with interferon-gamma, tumor necrosis factor-alpha, and interleukin-1 beta. Arterioscler. Thromb. Biol. 1996; 16:19-27. 31. Schwartz SM, deBlois D, 0'Brien ERM. The intima: soil for atherosclerosis and restenosis. Circ. Res. 1995; 77:445-465. 32. Wei GL, Krasinkski K, Kearney M, Isner JM, Walsh K, Andres V. Temporally and spatially coordinated expression of cell cycle regulatory factors after angioplasty.
Circ. Res. 1997; 80:418-426. 33. de Young MB, Dichek DA. Gene therapy for restenosis. Circ. Res. 1997; 82:306-313. 34. Brooks EE, Gray NS, Joly A, Kerwar SS, Lum R, Mackman RL, Norman TC, Rosete J, Rowe M, Schow SR, Schultz TG, Wang X, Wick MM, Shiffman D. CVT-313, a specific and potent inhibitor of CDK2 that prevents neointimal formation. J.
Biol. Chem. 1997; 272:299207-29911.
35. Sirois MG, Simons M, Edelman ER. Antisense olignucleotide inhibition of PDGFR-b receptor subunit expression directs suppression of intimal thickening. Circulation
1997; 95:669-676. 36. Rade JJ, Schulick AH, Virmani R, Dichek DA. Local adenoviral-mediated expression of recombinant hirudin reduces neointima formation after arterial injury.
Nature Med. 1996;2:293-298.
37. Sata M, Perlman H, Muruve DA, Silver M, Ikebe M, Libermann TA, Oettgen P, Walsh K. Fas ligand gene transfer to the vessel wall inhibits neointima formation and overrides the adenovirus-mediated T cell response. Proe. Nati. Acad. Sei. USA
1998; 95:1213-1217.
38. Mann MJ, Gibbons GH, Tsao PS, von der Leyen HE, Cooke JP, Buitrago R, Kernoff R, Dzau VJ. Cell cycle inhibition preserves endothelial function in
genetically engineered rabbit vein grafts. J. Clin. Invest. 1997; 99:1295-1301.
39. Arguello F, Alexander M, Sterry JA, Tudor G, Smith EM, Kalavar NT, Greene JF, Koss W, Morgan CD, Stinson SF, Siforf TJ, Alvord WG, Klabansky RL, Sausville EA: Flavopiridol induces apoptosis of normal lymphoid cells, causes immunosuppression, and has potent antitumor activity in vivo against human
leukemia and lymphoma xenografts. Blood 1998; 91:2482-2490.
40. 0'Brien ER, Alpers CE, Stewart DK, Ferguson M, Tran N, Gordon D, Benditt EP, Hinohara T, Simpson JB, Schwartz SM. Proliferation in primary and restenotic coronary atherectomy tissue: implications for anti-proliferative therapy. Circ. Res.
1993;73:223-231. 41. Mintz GS, Popma JJ, Pichard AD, Kent KM, Satler LR, Wong SC, Hong MD, Kovach JA, Leon MB. Arterial remodeling after coronary angioplasty: a serial intravascular ultrasound study. Circulation 1996; 94:35-43.
Claims (6)
1 .
Anvendelse av en forbindelse av formel Ia
der Ri er hydrogen, Ci-C3-alkyl, naftyl, fenyl; fenyl mono- eller polysubstituert med halogen, d-C4-alkyl, d-C4-alkoksy, hydroksyl, karboksyl, COO-Ci-C6- alkyl, CONH2, CONH-C1-C6- alkyl, CON(Ci-C6-alkyl)2, nitro, trifluormetyl, amino, Ci-C4-alkylamino, di-Ci-C4-alkylamino, eller fenyl; pyridyl eller tienyl;
R2er hydrogen eller Ci-C3-alkyl;
R5er Ci-C3-alkyl, C3-C5-sykloalkyl, eller C3-C5-sykloalkyl-Ci-C4-alkyl,
eller et farmasøytisk akseptabelt syreaddisjonssalt derav, for fremstilling at et farmasøytisk preparat for inhibering av glattmuskel-proliferering, hvor dosen av forbindelsen i følge formel Ia er mindre enn 70 %, fortrinnsvis mindre enn 60 %, i særdeleshet mindre enn 50 % av doseringen som er nødvendig for å kontrollere tumorvekst.
2.
Anvendelse ifølge krav 1, der substituentene i formel Ia har følgende betydning: Ri er fenyl, tienyl, pyridyl, klorfenyl, diklorfenyl, metylfenyl, aminofenyl, bromfenyl, hydroksyfenyl eller naftyl; R2er hydrogen og R5er metyl.
3.
Anvendelse ifølge krav 1, der forbindelsen er (-)- cis, -5,7 -dihydroksy-2-(2-klorfenyl)-8-[4-(3-hydroksy-1 -metyl)-piperidinyl]-4H-benzopyran-4-one (Flavopiridol).
4.
Anvendelse ifølge ett eller flere av kravene 1-3, der det farmasøytiske preparatet anvendes for behandling av glatt muskelcellerike vaskulære lesjoner.
5.
Anvendelse ifølge ett eller flere av kravene 1-3, der det farmasøytiske preparat anvendes for behandling av lesjoner etter ballongskade.
6.
Anvendelse ifølge ett eller flere av kravene 1 - 4, der det farmasøytiske preparat anvendes for å behandle pasienter etter stent-implantasjoner.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US24338099A | 1999-02-01 | 1999-02-01 | |
| US09/468,665 US6399633B1 (en) | 1999-02-01 | 1999-12-21 | Use of 4-H-1-benzopryan-4-one derivatives as inhibitors of smooth muscle cell proliferation |
| PCT/US2000/001104 WO2000044362A2 (en) | 1999-02-01 | 2000-01-18 | The use of 4-h-1-benzopyran-4-one derivatives as inhibitors of smooth muscle cell proliferation |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO20013335D0 NO20013335D0 (no) | 2001-07-05 |
| NO20013335L NO20013335L (no) | 2001-09-25 |
| NO330512B1 true NO330512B1 (no) | 2011-05-09 |
Family
ID=22918541
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO20013335A NO330512B1 (no) | 1999-02-01 | 2001-07-05 | Anvendelse av 4-H-1-benzopyran-4-on-derivater for fremstilling av et farmasoytisk preparat for inhibering av glatt muskelcelle proliferering |
Country Status (38)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6399633B1 (no) |
| EP (1) | EP1150746B1 (no) |
| JP (1) | JP4755759B2 (no) |
| KR (1) | KR100793047B1 (no) |
| CN (1) | CN1219556C (no) |
| AP (1) | AP1469A (no) |
| AR (1) | AR042569A1 (no) |
| AT (1) | ATE275428T1 (no) |
| AU (1) | AU777368B2 (no) |
| BG (1) | BG65151B1 (no) |
| BR (1) | BR0007911A (no) |
| CA (1) | CA2360668C (no) |
| CR (1) | CR6448A (no) |
| CZ (1) | CZ300395B6 (no) |
| DE (1) | DE60013555T2 (no) |
| DK (1) | DK1150746T3 (no) |
| EA (1) | EA004786B1 (no) |
| EE (1) | EE04851B1 (no) |
| ES (1) | ES2226792T3 (no) |
| HK (1) | HK1042445B (no) |
| HR (1) | HRP20010521A2 (no) |
| HU (1) | HU229263B1 (no) |
| ID (1) | ID30180A (no) |
| IL (1) | IL144668A (no) |
| ME (1) | MEP10508A (no) |
| NO (1) | NO330512B1 (no) |
| NZ (1) | NZ512822A (no) |
| OA (1) | OA11755A (no) |
| PL (1) | PL197693B1 (no) |
| PT (1) | PT1150746E (no) |
| RS (1) | RS50242B (no) |
| SI (1) | SI1150746T1 (no) |
| SK (1) | SK286747B6 (no) |
| TR (1) | TR200102223T2 (no) |
| TW (1) | TWI273907B (no) |
| UA (1) | UA73110C2 (no) |
| WO (1) | WO2000044362A2 (no) |
| ZA (1) | ZA200105596B (no) |
Families Citing this family (58)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0102480D0 (en) * | 2001-01-31 | 2001-03-14 | Cyclacel Ltd | Marker |
| CA2482041C (en) * | 2002-04-17 | 2012-06-05 | Cytokinetics, Inc. | 4-chromanone derivatives for treating cellular proliferative diseases and disorders |
| US7425618B2 (en) | 2002-06-14 | 2008-09-16 | Medimmune, Inc. | Stabilized anti-respiratory syncytial virus (RSV) antibody formulations |
| US7132100B2 (en) | 2002-06-14 | 2006-11-07 | Medimmune, Inc. | Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations |
| US20040106647A1 (en) * | 2002-06-28 | 2004-06-03 | Schneider Michael D. | Modulators of Cdk9 as a therapeutic target in cardiac hypertrophy |
| US20040082613A1 (en) * | 2002-06-28 | 2004-04-29 | Schneider Michael D. | Modulators of Cdk9 as a therapeutic target in cardiac hypertrophy |
| US20040265315A1 (en) * | 2002-09-05 | 2004-12-30 | Christine Dingivan | Methods of preventing or treating T cell malignancies by administering CD2 antagonists |
| US8034831B2 (en) | 2002-11-06 | 2011-10-11 | Celgene Corporation | Methods for the treatment and management of myeloproliferative diseases using 4-(amino)-2-(2,6-Dioxo(3-piperidyl)-isoindoline-1,3-dione in combination with other therapies |
| US7563810B2 (en) | 2002-11-06 | 2009-07-21 | Celgene Corporation | Methods of using 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydroisoindol-2-yl)-piperidine-2,6-dione for the treatment and management of myeloproliferative diseases |
| EP2316487B1 (en) | 2003-04-11 | 2014-06-11 | MedImmune, LLC | Recombinant IL-9 antibodies & uses thereof |
| US20060228350A1 (en) * | 2003-08-18 | 2006-10-12 | Medimmune, Inc. | Framework-shuffling of antibodies |
| EP1660186B1 (en) | 2003-08-18 | 2013-12-25 | MedImmune, LLC | Humanization of antibodies |
| WO2006047639A2 (en) | 2004-10-27 | 2006-05-04 | Medimmune, Inc. | Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens |
| AU2006227377B2 (en) | 2005-03-18 | 2013-01-31 | Medimmune, Llc | Framework-shuffling of antibodies |
| EP1893647A2 (en) | 2005-06-23 | 2008-03-05 | MedImmune, Inc. | Antibody formulations having optimized aggregation and fragmentation profiles |
| US20100068238A1 (en) * | 2005-07-15 | 2010-03-18 | Nandkishore Managoli | Implantable Medical Devices Comprising a Flavonoid or Derivative Thereof for Prevention of Restenosis |
| JP2008255008A (ja) * | 2005-07-19 | 2008-10-23 | Tokyo Medical & Dental Univ | 滑膜細胞増殖抑制剤 |
| AU2006275514B2 (en) * | 2005-07-29 | 2012-04-05 | Resverlogix Corp. | Pharmaceutical compositions for the prevention and treatment of complex diseases and their delivery by insertable medical devices |
| ES2439994T3 (es) | 2006-08-28 | 2014-01-27 | Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. | Anticuerpos antagonistas monoclonales humanos específicos de LIGHT humano |
| PT2118074E (pt) | 2007-02-01 | 2014-03-20 | Resverlogix Corp | Compostos para a prevenção e tratamento de doenças cardiovasculares |
| AU2008232902B2 (en) | 2007-03-30 | 2013-10-03 | Medlmmune, Llc | Antibody formulation |
| CA2711103C (en) | 2008-06-26 | 2016-08-09 | Resverlogix Corp. | Methods of preparing quinazolinone derivatives |
| CA2747417C (en) | 2009-01-08 | 2017-01-03 | Resverlogix Corp. | Compounds for the prevention and treatment of cardiovascular disease |
| CA3146333A1 (en) | 2009-03-18 | 2010-09-23 | Resverlogix Corp. | Phenyl-quinazolin-4(3h)-one and phenyl-pyrido[2,3-d]pyrimidin-4(3h)-one derivatives and compositions thereof useful as anti-inflammatory agents |
| LT2421533T (lt) | 2009-04-22 | 2018-12-27 | Resverlogix Corp. | Nauji priešuždegiminiai agentai |
| US20130225530A1 (en) | 2010-07-12 | 2013-08-29 | Dkfz Deutsches Krebsforschungszentrum | Wogonin for the prevention and therapy of cardiac hypertrophy |
| AR085091A1 (es) | 2011-01-26 | 2013-09-11 | Kolltan Pharmaceuticals Inc | Anticuerpos anti-kit y sus usos |
| JP5992049B2 (ja) | 2011-11-01 | 2016-09-14 | レスバーロジックス コーポレイション | 置換されたキナゾリノンのための経口速放性製剤 |
| EP4063391A1 (en) | 2012-07-25 | 2022-09-28 | Celldex Therapeutics, Inc. | Anti-kit antibodies and uses thereof |
| CA2887129A1 (en) | 2012-10-09 | 2014-04-17 | Igenica, Inc. | Anti-c16orf54 antibodies and methods of use thereof |
| US9073878B2 (en) | 2012-11-21 | 2015-07-07 | Zenith Epigenetics Corp. | Cyclic amines as bromodomain inhibitors |
| WO2014080291A2 (en) | 2012-11-21 | 2014-05-30 | Rvx Therapeutics Inc. | Biaryl derivatives as bromodomain inhibitors |
| AU2013365926B9 (en) | 2012-12-21 | 2019-01-17 | Zenith Epigenetics Ltd. | Novel heterocyclic compounds as bromodomain inhibitors |
| SG10201708143QA (en) | 2013-06-06 | 2017-11-29 | Pierre Fabre Médicament | Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof |
| PT3041507T (pt) | 2013-08-26 | 2021-07-26 | Biontech Res And Development Inc | Ácidos nucleicos que codificam anticorpos humanos para sialil-lewis |
| GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
| HUE055189T2 (hu) | 2014-06-04 | 2021-11-29 | Biontech Res And Development Inc | Humán monoklonális antitestek a GD2 ganglioziddal ellen |
| PL3333191T3 (pl) | 2014-12-11 | 2021-05-04 | Pierre Fabre Médicament | Przeciwciała przeciwko c10orf54 i ich zastosowania |
| FI3265123T3 (fi) | 2015-03-03 | 2023-01-31 | Vasta-aineita, käyttöjä & menetelmiä | |
| WO2016147053A1 (en) | 2015-03-13 | 2016-09-22 | Resverlogix Corp. | Compositions and therapeutic methods for the treatment of complement-associated diseases |
| CA2982928A1 (en) | 2015-04-20 | 2016-10-27 | Tolero Pharmaceuticals, Inc. | Predicting response to alvocidib by mitochondrial profiling |
| EP3298021B1 (en) | 2015-05-18 | 2019-05-01 | Tolero Pharmaceuticals, Inc. | Alvocidib prodrugs having increased bioavailability |
| US10568887B2 (en) | 2015-08-03 | 2020-02-25 | Tolero Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapies for treatment of cancer |
| CN108925136B (zh) | 2015-12-02 | 2022-02-01 | 斯特赛恩斯公司 | 特异于糖基化的btla（b和t淋巴细胞衰减因子）的抗体 |
| WO2017096051A1 (en) | 2015-12-02 | 2017-06-08 | Stcube & Co., Inc. | Antibodies and molecules that immunospecifically bind to btn1a1 and the therapeutic uses thereof |
| CN109803684B (zh) | 2016-08-23 | 2022-08-23 | 卫材 R&D 管理有限公司 | 用于治疗肝细胞癌的组合疗法 |
| US11779604B2 (en) | 2016-11-03 | 2023-10-10 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses and methods |
| WO2018094275A1 (en) | 2016-11-18 | 2018-05-24 | Tolero Pharmaceuticals, Inc. | Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors |
| KR102517650B1 (ko) | 2017-03-16 | 2023-04-05 | 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 | 유방암의 치료를 위한 조합물 요법 |
| KR20200015602A (ko) | 2017-05-31 | 2020-02-12 | 주식회사 에스티큐브앤컴퍼니 | Btn1a1에 면역특이적으로 결합하는 항체 및 분자 및 이의 치료적 용도 |
| US20200131266A1 (en) | 2017-05-31 | 2020-04-30 | Stcube & Co., Inc. | Methods of treating cancer using antibodies and molecules that immunospecifically bind to btn1a1 |
| CN110997724A (zh) | 2017-06-06 | 2020-04-10 | 斯特库伯株式会社 | 使用结合btn1a1或btn1a1-配体的抗体和分子治疗癌症的方法 |
| US11497756B2 (en) | 2017-09-12 | 2022-11-15 | Sumitomo Pharma Oncology, Inc. | Treatment regimen for cancers that are insensitive to BCL-2 inhibitors using the MCL-1 inhibitor alvocidib |
| WO2019073069A1 (en) | 2017-10-13 | 2019-04-18 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | HUMAN ANTIBODIES AGAINST THOMSEN-NEW ANTIGEN (TN) |
| CN112740043A (zh) | 2018-07-20 | 2021-04-30 | 皮埃尔法布雷医药公司 | Vista受体 |
| KR20210099066A (ko) | 2018-12-04 | 2021-08-11 | 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. | 암의 치료를 위한 작용제로서 사용하기 위한 cdk9 억제제 및 그의 다형체 |
| JP2022525149A (ja) | 2019-03-20 | 2022-05-11 | スミトモ ダイニッポン ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド | ベネトクラクスが失敗した急性骨髄性白血病（ａｍｌ）の処置 |
| CN113559244B (zh) * | 2021-08-02 | 2023-12-26 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | Ctrp13脂肪因子的新用途 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IN164232B (no) * | 1986-04-11 | 1989-02-04 | Hoechst India | |
| US5284856A (en) * | 1988-10-28 | 1994-02-08 | Hoechst Aktiengesellschaft | Oncogene-encoded kinases inhibition using 4-H-1-benzopyran-4-one derivatives |
| US5733920A (en) | 1995-10-31 | 1998-03-31 | Mitotix, Inc. | Inhibitors of cyclin dependent kinases |
| US5849733A (en) | 1996-05-10 | 1998-12-15 | Bristol-Myers Squibb Co. | 2-thio or 2-oxo flavopiridol analogs |
| US5908934A (en) | 1996-09-26 | 1999-06-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Process for the preparation of chiral ketone intermediates useful for the preparation of flavopiridol and analogs |
| DE69839338T2 (de) | 1997-02-05 | 2008-07-10 | Warner-Lambert Company Llc | Pyrido (2,3-d) pyrimidine und 4-amino-pyrimidine als inhibitoren der zellulären proliferation |
-
1999
- 1999-12-21 US US09/468,665 patent/US6399633B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-01-18 ME MEP-105/08A patent/MEP10508A/xx unknown
- 2000-01-18 EP EP00909918A patent/EP1150746B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-18 ID IDW00200101696A patent/ID30180A/id unknown
- 2000-01-18 BR BR0007911-1A patent/BR0007911A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-01-18 SI SI200030517T patent/SI1150746T1/xx unknown
- 2000-01-18 UA UA2001075481A patent/UA73110C2/uk unknown
- 2000-01-18 PT PT00909918T patent/PT1150746E/pt unknown
- 2000-01-18 DK DK00909918T patent/DK1150746T3/da active
- 2000-01-18 NZ NZ512822A patent/NZ512822A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 IL IL14466800A patent/IL144668A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 OA OA1200100196A patent/OA11755A/en unknown
- 2000-01-18 AT AT00909918T patent/ATE275428T1/de active
- 2000-01-18 TR TR2001/02223T patent/TR200102223T2/xx unknown
- 2000-01-18 KR KR1020017009716A patent/KR100793047B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 AP APAP/P/2001/002218A patent/AP1469A/en active
- 2000-01-18 JP JP2000595666A patent/JP4755759B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-18 EE EEP200100385A patent/EE04851B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 SK SK1086-2001A patent/SK286747B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 DE DE60013555T patent/DE60013555T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-18 CZ CZ20012804A patent/CZ300395B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 HU HU0200804A patent/HU229263B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 WO PCT/US2000/001104 patent/WO2000044362A2/en active IP Right Grant
- 2000-01-18 PL PL350735A patent/PL197693B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 CA CA002360668A patent/CA2360668C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-18 CN CNB008032513A patent/CN1219556C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-18 ES ES00909918T patent/ES2226792T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-18 AU AU32098/00A patent/AU777368B2/en not_active Ceased
- 2000-01-18 RS YU54401A patent/RS50242B/sr unknown
- 2000-01-18 EA EA200100742A patent/EA004786B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-01-25 TW TW089101215A patent/TWI273907B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-02-01 AR ARP000100420A patent/AR042569A1/es not_active Application Discontinuation
-
2001
- 2001-07-05 NO NO20013335A patent/NO330512B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-07-06 ZA ZA200105596A patent/ZA200105596B/en unknown
- 2001-07-11 HR HR20010521A patent/HRP20010521A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2001-07-27 BG BG105751A patent/BG65151B1/bg unknown
- 2001-08-23 CR CR6448A patent/CR6448A/es not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-05-31 HK HK02104062.3A patent/HK1042445B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO330512B1 (no) | Anvendelse av 4-H-1-benzopyran-4-on-derivater for fremstilling av et farmasoytisk preparat for inhibering av glatt muskelcelle proliferering | |
| Li et al. | Epigallocathechin-3 gallate inhibits cardiac hypertrophy through blocking reactive oxidative species-dependent and-independent signal pathways | |
| US20080182853A1 (en) | Methods of neuroprotection by cyclin-dependent kinase inhibition | |
| CA2384982A1 (en) | Use of hymenialdisine or derivatives thereof in the manufacture of medicaments | |
| Liu et al. | Anti-angiogenic action of 5, 5-diphenyl-2-thiohydantoin-N10 (DPTH-N10) | |
| Kikuchi et al. | p27kip1 Antisense-induced proliferative activity of rat corneal endothelial cells | |
| US20050209299A1 (en) | Inhibition of mixed lineage kinases and uses therefor | |
| US20240082221A1 (en) | Compositions and methods for the identification of compounds that protect against lipofuscin cytotoxicity | |
| US6495588B2 (en) | Scytonemin and methods of using thereof | |
| MXPA01007278A (en) | The use of 4-h-1-benzopyran-4-one derivatives as inhibitors of smooth muscle cell proliferation | |
| Guo | REGULATION OF RIBOSOME BIOGENESIS AND |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM1K | Lapsed by not paying the annual fees |