CZ20012804A3 - Léčivo pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárních lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poąkození balónkovou angioplastií a pro léčené pacientů po implantaci stentů - Google Patents
Léčivo pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárních lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poąkození balónkovou angioplastií a pro léčené pacientů po implantaci stentů Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20012804A3 CZ20012804A3 CZ20012804A CZ20012804A CZ20012804A3 CZ 20012804 A3 CZ20012804 A3 CZ 20012804A3 CZ 20012804 A CZ20012804 A CZ 20012804A CZ 20012804 A CZ20012804 A CZ 20012804A CZ 20012804 A3 CZ20012804 A3 CZ 20012804A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- group
- alkyl
- carbon atoms
- flavopiridol
- smooth muscle
- Prior art date
Links
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 71
- 230000006378 damage Effects 0.000 title claims abstract description 42
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 title claims abstract description 38
- 208000014674 injury Diseases 0.000 title claims abstract description 38
- 230000003902 lesion Effects 0.000 title claims abstract description 30
- 231100000216 vascular lesion Toxicity 0.000 title claims abstract description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 12
- 238000002513 implantation Methods 0.000 title claims description 12
- 230000006715 negative regulation of smooth muscle cell proliferation Effects 0.000 title 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims abstract description 23
- 150000004777 chromones Chemical class 0.000 claims abstract description 14
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 97
- -1 cycloalkyl radical Chemical class 0.000 claims description 52
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 48
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 22
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 18
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 18
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 17
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 claims description 17
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 17
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 15
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 14
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 12
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 10
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 10
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 10
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 claims description 9
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 9
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 8
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 8
- 125000002023 trifluoromethyl group Chemical group FC(F)(F)* 0.000 claims description 8
- 125000001316 cycloalkyl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 claims description 6
- 125000001544 thienyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 3
- 125000004182 2-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(Cl)=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 claims description 3
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 claims description 3
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000002861 (C1-C4) alkanoyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004453 alkoxycarbonyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000304 alkynyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003435 aroyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001691 aryl alkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001769 aryl amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004799 bromophenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000068 chlorophenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004986 diarylamino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004188 dichlorophenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004464 hydroxyphenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003944 tolyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 150000005840 aryl radicals Chemical class 0.000 claims 1
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 claims 1
- BIIVYFLTOXDAOV-YVEFUNNKSA-N alvocidib Chemical compound O[C@@H]1CN(C)CC[C@@H]1C1=C(O)C=C(O)C2=C1OC(C=1C(=CC=CC=1)Cl)=CC2=O BIIVYFLTOXDAOV-YVEFUNNKSA-N 0.000 abstract description 107
- 229950010817 alvocidib Drugs 0.000 abstract description 106
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 49
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 abstract description 41
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 abstract description 20
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 abstract description 17
- 230000012010 growth Effects 0.000 abstract description 15
- 230000008692 neointimal formation Effects 0.000 abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 9
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 abstract description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 abstract description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 abstract description 7
- 208000024248 Vascular System injury Diseases 0.000 abstract description 6
- 208000012339 Vascular injury Diseases 0.000 abstract description 6
- 229940043378 cyclin-dependent kinase inhibitor Drugs 0.000 abstract description 6
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 abstract description 6
- 102000003903 Cyclin-dependent kinases Human genes 0.000 abstract description 5
- 108090000266 Cyclin-dependent kinases Proteins 0.000 abstract description 5
- 238000010171 animal model Methods 0.000 abstract description 5
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000002875 cyclin dependent kinase inhibitor Substances 0.000 abstract description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 abstract description 2
- 229940126074 CDK kinase inhibitor Drugs 0.000 abstract 2
- 102100034770 Cyclin-dependent kinase inhibitor 3 Human genes 0.000 abstract 2
- 101000945639 Homo sapiens Cyclin-dependent kinase inhibitor 3 Proteins 0.000 abstract 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 abstract 1
- 210000005119 human aortic smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 36
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 35
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 28
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 description 17
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 description 17
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 14
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 12
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 12
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 9
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 9
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 9
- 208000037803 restenosis Diseases 0.000 description 9
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 8
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 8
- 101150024075 Mapk1 gene Proteins 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 101150018665 MAPK3 gene Proteins 0.000 description 7
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 7
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 7
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 7
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 5
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JVJFIQYAHPMBBX-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxynonenal Chemical compound CCCCCC(O)C=CC=O JVJFIQYAHPMBBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 4
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 101000817629 Homo sapiens Dymeclin Proteins 0.000 description 4
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 101150073031 cdk2 gene Proteins 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 230000006369 cell cycle progression Effects 0.000 description 4
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 4
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 4
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 4
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000016736 Cyclin Human genes 0.000 description 3
- 108050006400 Cyclin Proteins 0.000 description 3
- 102000003910 Cyclin D Human genes 0.000 description 3
- 108090000259 Cyclin D Proteins 0.000 description 3
- 108010093502 E2F Transcription Factors Proteins 0.000 description 3
- 102000001388 E2F Transcription Factors Human genes 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000034827 Neointima Diseases 0.000 description 3
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 3
- 238000013074 in-gel kinase assay Methods 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- NQVIIUBWMBHLOZ-UHFFFAOYSA-N 2-[2-hydroxyethyl-[6-[(4-methoxyphenyl)methylamino]-9-propan-2-ylpurin-2-yl]amino]ethanol Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1CNC1=NC(N(CCO)CCO)=NC2=C1N=CN2C(C)C NQVIIUBWMBHLOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006311 Cyclin D1 Human genes 0.000 description 2
- 108010058546 Cyclin D1 Proteins 0.000 description 2
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006947 Histones Human genes 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000006386 Myelin Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010083674 Myelin Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N Piperidine Chemical compound C1CCNCC1 NQRYJNQNLNOLGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940124639 Selective inhibitor Drugs 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000003433 aortic smooth muscle cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 108010052344 histone H1 kinase Proteins 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000000021 kinase assay Methods 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 230000002297 mitogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005012 myelin Anatomy 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 2
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 2
- 230000006911 nucleation Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 2
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 2
- 125000003386 piperidinyl group Chemical group 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 230000003966 vascular damage Effects 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- NZUUXQSBKZPFKK-UHFFFAOYSA-N 4-piperazin-1-ylmorpholine Chemical compound C1CNCCN1N1CCOCC1 NZUUXQSBKZPFKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010003162 Arterial injury Diseases 0.000 description 1
- KYNSBQPICQTCGU-UHFFFAOYSA-N Benzopyrane Chemical group C1=CC=C2C=CCOC2=C1 KYNSBQPICQTCGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108091007914 CDKs Proteins 0.000 description 1
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229940123587 Cell cycle inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 102000008130 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108010049894 Cyclic AMP-Dependent Protein Kinases Proteins 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100035964 Gastrokine-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710205776 Gastrokine-2 Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical class Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000044589 Mitogen-Activated Protein Kinase 1 Human genes 0.000 description 1
- 108700015928 Mitogen-activated protein kinase 13 Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000003923 Protein Kinase C Human genes 0.000 description 1
- 108090000315 Protein Kinase C Proteins 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 108050002653 Retinoblastoma protein Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 1
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 1
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 239000010775 animal oil Substances 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 125000006615 aromatic heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003143 atherosclerotic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 125000004181 carboxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 230000025084 cell cycle arrest Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000003026 cod liver oil Substances 0.000 description 1
- 235000012716 cod liver oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 125000001511 cyclopentyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(*)C1([H])[H] 0.000 description 1
- 125000001559 cyclopropyl group Chemical group [H]C1([H])C([H])([H])C1([H])* 0.000 description 1
- 125000004186 cyclopropylmethyl group Chemical group [H]C([H])(*)C1([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 1
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000008753 endothelial function Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000002344 fibroplastic effect Effects 0.000 description 1
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 1
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L fumarate(2-) Chemical class [O-]C(=O)\C=C\C([O-])=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-L 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009422 growth inhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 125000001188 haloalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 1
- 150000003840 hydrochlorides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002768 hydroxyalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000003701 inert diluent Substances 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 125000001972 isopentyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 125000001449 isopropyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])(*)C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002688 maleic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 230000000394 mitotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009826 neoplastic cell growth Effects 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 125000001147 pentyl group Chemical group C(CCCC)* 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009520 phase I clinical trial Methods 0.000 description 1
- 125000003884 phenylalkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940080469 phosphocellulose Drugs 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001436 propyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000022983 regulation of cell cycle Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000007781 signaling event Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 230000026799 smooth muscle cell apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000005477 standard model Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003892 tartrate salts Chemical class 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002100 tumorsuppressive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N xylazine Chemical compound CC1=CC=CC(C)=C1NC1=NCCCS1 BPICBUSOMSTKRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001600 xylazine Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
- A61K31/436—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a six-membered ring having oxygen as a ring hetero atom, e.g. rapamycin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
- A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
- A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
- A61K31/453—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a six-membered ring with oxygen as a ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
Description
Léčivo pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárnich lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poškození balónkovou angioplastií a pro léčení pacientů po implantaci stentů
Oblast techniky
Vynález se týká léčiva pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárnich lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčeni lézi po poškozeni balónkovou angioplastií a pro léčení pacientů po implantaci stentů
Dosavadní stav techniky
Buněčné odezvy na vaskulární poškození, mezi které patří buněčná dysfunkce, aktivace, dediferenciace, proliferace a migrace, kulminují v klinických příhodách, jakými jsou restenózy, ke kterým dochází -po balónkové angioplastií a uložení stentu v rámci léčení humánních aterosklerotických onemocnění. Proliferace buněk hladkých svalů (SMC - Smooth Muscle Cell) je společným a patrně i jednotícím znakem modelů vaskulárního poškození a SMC jsou hlavní celulární složkou neointímálních lézí. Obnovený zájem o inhibici proliferace buněk hladkých svalů doprovázelo četnější používání stentů při léčení koronárních onemocnění, poněvadž restenózy způsobené stenty (restenózy in-stent) jsou téměř výlušně závislé na neointimální formaci a hyperplazii (zvětšení počtu buněk) SMC. Odhaduje se, že v samotném roce 1997 vyžadovalo léčení až 100 000 pacientů s restenózami in-stent. V důsledku toho by snadno aplikovatelný účinný inhibitor hyperplazie SMC mohl mít značný klinický a ekonomický dopad.
Pokusy inhibovat proliferaci SMC v modelech
| 9 | • 9 | 9* | 99 | 99 | 99 | |||||
| ♦ 9 9 | 9 | • | 9 | 9 | 9 | 9 | 9 * | |||
| • 9 | • | 9 | * | 999 | * | 9 | 9 | |||
| 9 · | 9 | 9 | • | 9 * | 9 | 9 | 9 | |||
| 99 ♦ | 99 | ♦ · | • 9 | 99 | 9999 |
vaskulárního poškozeni buď modulací buněčných mediátorů proliferačni odezvy nebo přímou interferencí s mechamismem buněčného cyklu poskytly zajímavé pohledy na neointimální formaci. Progrese buněčné cyklu je pečlivě kontrolovaným dějem pozitivně regulovaným cyklin-dependentními kinázami (Sdks) a jejich cyklinovými regulačními podjednotkami a negativně regulovaným inhibitory Cdk a nádor-supresivními geny, jakými jsou retinoblastomový protein (Rb) a p53. Adenovirálně mediovaná nadměrná exprese endogenní Cdk-inhibitorů p21 a p27kip 1 nebo konstitučně aktivní forma Rb blokují neointimální tvorbu v modelu poškození krysí karotidy; stejně tak inhibice aktivity transkripčního faktoru E2F kompetitivní nadměrnou expresi příbuzných DNA vazebných míst rovněž inhubuje proliferaci SMC a neointimální tvorbu. Tyto studie podporují hypotézu, že inhibice buněčného cyklu představuje přitažlivý způsob intervence do tvorby vaskulárních lézí.
I když genetické intervence napomáhaly při rozrušení mechanismu regulujícího neointimální tvorbu, jsou nicméně nevýhodné vzhledem k tomu, že v současné době nejsou ještě vhodné pro klinické léčení vaskulárních chorob u lidí.
Proto by ve vodě rozpustná nízkomolekulární sloučenina se specifickým regulačním účinkem na buněčný cyklus, zejména v případě orálního podání, měla širokou jak experimentální, tak potenciálně klinickou aplikovatelnost. Nedávno identifikovaný flavon, flavopiridol je který potentně blokuje aktivitu Cdk2, rozdíl od ostatních inhibitorů Cdk inhibitorem Cdk, Cdc2 a Cdk4. Na je flavopiridol pozoruhodný pro svojí specifičnost vůči kináze, jeho biodostupnost při orálním podání a jeho potenci vzhedem k tomu, že je účinný při nanomolárních koncentracích. Tyto jedinečné charakteristiky mají za následek příznivý profil vedlejších účinků, který vedl k testování flavopiridolu ve fázi I klinických testů v rámci léčení neoplazmů vzdorujících léčbě.
| 0 | 00 | W « | 04 | 00 | 00 | ||||
| 00 0 | 0 | • | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 0 | ||
| • 0 | 0 | a | 0 | • 00 | 0 | 0 | 0 | ||
| 0 | |||||||||
| • · | 0 | • | 0 | 0 0 | 0 | 0 | 0 | ||
| 000 | 00 | 00 | 0* | 0« | 0000 |
Vzhledem k těmto vlastnostem byla nyní v rámci vynálezu zkoumána schopnost flavopiridolu inhibovat proliferaci SMC in vitro a po poškození krysí karotidy následkem balónkové angioplastie. Bylo prokázáno, že flavopiridol je potentním a selektivním inhibitorem progrese buněčného cyklu a že zastavuje proliferaci SMC jak in vivo, tak in vitro; kromě toho orální dávky flavopiridolu, které jsou nižší než dávky, o kterých je známo, že mají na člověka toxický účinek, účinně blokují neointimální tvorbu.
Nyní bylo s překvapením zjištěno, že
4-H-l-benzopyran-4-onové deriváty jsou vhodné j ako inhibitory proliferace
SMC.
Je známo, že
4-H-l-benzopyran-4-onové deriváty jsou vhodné pro kontrolu nádorů. Je však překvapující, že 4-H-l-benzopyran-4-onové deriváty podle vynálezu působí účinně jako inhibitor proliferace SMC v dávkových úrovních nižších, než jsou dávkové úrovně, které musí být použity pro kontrolu nádorového růstu.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu je použití
4-H-l-benzopyran-4-onového derivátu obecného vzorce I
(I) ve kterém
znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až
| • | 99 | • 9 | ·· | 99 | 99 |
| • · 9 | • | • | 9 9 | 9 9 | • 9 |
| • 9 | • | 9 | • 999 | 9 9 | 4 |
| • | |||||
| • · | 9 | 9 | 9 9 9 | 9 9 | 9 |
| 99 9 | ft | 99 | 99 | 99 | 9 99 9 |
uhlíkových atomů, arylalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, alkylovouskupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů a substituovanou halogenem, hydroxy-skupinou nebo karboxy-skupinou, cykloalkylovou skupinu obsahující 3 až 6 uhlíkových atomů, pyridylovou skupinu, thienylovou skupinu, cykloalkylalkylovou skupinu, ve které cykloalkylový zbytek obsahuje 3 až 6 uhlíkových atomů a alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, alkenylovou skupinu obsahující 2 až 6 uhlíkových atomů, alkynylovou skupinu obsahující 2 až 6 uhlíkových atomů, fenylovou skupinu, fenylovou skupinu mono- nebo polysubstituovanou halogenem, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkoxy-skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, hydroxylovou skupinou, karboxylovou skupinou, COO-alkylovou skupinou, skupinou CONH2, CONH-alkylovou skupinou, CON (alkyl)2~ovou skupinou, nitro-skupinou, trifluormethylovou skupinou, aminovou skupinou, alkylamino-skupinou, ve které alkylový zbytek obsahuje až 4 uhlíkové atomy, dialkylamino-skupinou, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy nebo fenylovou skupinou, naftylovou skupinu, karboxylovou skupinu, skupinu -CHO, COO-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, primární amino-skupinu, alkylamino-skupinu, aralkylamino skupinu, dialkylamino-skupinu, amido-skupinu, arylamino-skupinu, diarylamino-skupinu nebo CH20-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy,
R2 znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, arylovou skupinu, nitro-skupinu, amino-skupinu, dialkylaminovou skupinu, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, alkoxy-skupinu, skupinu -COOH, -COO-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, skupinu -CHO,
| • ·· ·· · · • · · | ·· • 9 9 9 | «* | • to • · • · | ·· e · • • |
| • to · ·· | 99 | *♦ | 99 9 9 |
skupinu -CH2OH nebo -CH20-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy,
R3 znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až uhlíkové atomy, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy a substituovanou halogenem, hydroxy-skupinou nebo karboxyskupinou, hydroxylovou skupinu, karboxylovou skupinu, nitro-skupinu, amino-skupinu, alkylamino-skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, dialkylamino-skupinu, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, atom halogenu, -O-alkyl-C(0)-alkylovou skupinu, skupinu -CHO, skupinu -CH2OH, -CH20-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo skupinu (R) 2N-C(0)-0-, ve které R znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, cykloalkylovou skupinu, -O-alkyl-C(0)-alkylovou skupinu nebo arylovou skupinu,
R4 znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu, alkoxy-skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkanoyloxy-skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkoxykarbonylovou skupinu, ve které alkoxy-zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, aryloxy-skupinu, amino-skupinu, alkylamino-skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, di-alkylamino-skupinu, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo skupinu (R')2-N-C(O)-0-, ve které R' znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových aromů, cykloalkylovou skupinu nebo arylovou skupinu,
R5 znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až uhlíkových atomů, arylalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, cykloalkylovou skupinu obsahující 3 až 6 uhlíkových atomů, cykloalkylalkylovou skupinu, ve které cykloalkylový zbytek obsahuje 3 až 6 uhlíkových atomů a alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, alkylamino-skupinu, t · ♦ · 4 · • ·· ·· *· alkanoylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, -C(0)-0-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo aroylovou skupinu, přičemž arylová skupina ve významech Rx, R2, R3, R4 a R5 znamená nesubstituovanou fenylovou skupinu nebo fenylovou skupinu, která je mono- nebo polysubstituovaná halogenem, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkoxy-skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, hydroxylovou skupinou, karboxylovou skupinou, C00-alkylovou skupinou, skupinou CONH2, CONH-alkylovou skupinou, CON(alkyl)2ovou skupinou, nitro-skupinou, trifluormethylovou skupinou, amino-skupinou, alkylamino-skupinou, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, di-alkylamino-skupinou, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo fenylovou skupinou, m znamená celé číslo 0 až 3 a n znamená 1, nebo jeho farmakologicky přijatelné adiční soli s kyselinou pro výrobu léčiva určeného pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárních lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poškozeni balónkovou angioplastii a pro léčení pacientů po implantaci stentů.
Předmětem vynálezu je zejména použití
4-H-l-benzopyran-4-onového derivátu obecného vzorce Ia
| • | ·· | vv | ·· | |||||||
| * · · | • | 9 | • | • | • | • « | ||||
| • · | • | • | t | ··· | ♦ | • | • | |||
| • · | e | • | • | • · | • | • | • | |||
| · | ·· | «··» | ll> | ···· |
ve kterém
Rx znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 uhlíkové atomy, naftylovou skupinu, fenylovou skupinu, fenylovou skupinu mono- nebo polysubstituovanou halogenem, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkoxy-skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, hydroxylovou skupinou, karboxylovou skupinou, C00alkylovou skupinou, skupinou CONH2, CONH-alkylovou skupinou, CON (alkyl)2ovou skupinou, nitro-skupinou, trifluormethylovou skupinou, amino-skupinou, alkylaminovou skupinou, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, di-alkylaminovou skupinou, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo fenylovou skupinou, pyridylovou skupinu nebo thienylovou skupinu,
R2 znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 uhlíkové atomy, a
Rs znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 uhlíkové atomy, cykloalkylovou skupinu obsahující 3 až 5 uhlíkových atomů nebo cykloalkylalkylovou skupinu, ve které cykloalkylový zbytek obsahuje 3 až 5 uhlíkových atomů a alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo jeho farmakologicky přijatelné adiční soli s kyselinou pro výrobu léčiva určeného pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárních lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poškození balónkovou angioplastií a pro léčení pacientů po implantaci stentů.
Předmětem vynálezu je obzvláště použití
4-H-l-benzopyran-4-onového derivátu obecného vzorce Ia, ve kterém
Rx znamená fenylovou skupinu, thienylovou skupinu, pyridylovou skupinu, chlorfenylovou skupinu, dichlorfenylovou skupinu, methylfenylovou skupinu, aminofenylovou skupinu, bromfenylovou skupinu, hydroxyfenylovou skupinu ne-
| • <· | • V | ·· | ·· | |||
| ·· · | • | • | • | • · | • « | |
| • · | • | • | ··· | * · | ||
| • | ||||||
| • · | • | 9 | • | • · | • · | • |
| ··· ·« | 4* | ·· | ·· | ···· |
bo naftylovou skupinu,
R2 znamená atom vodíku a
R3 znamená methylovou skupinu, nebo jeho farmakologicky přijatelné adiční soli s kyselinou pro výrobu léčiva určeného pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárních lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poškození balónkovou angioplastií a pro léčení pacientů po implantaci stentů.
Předmětem vynálezu je specifiyky použiti (-)-cis-5,7dihydroxy-2-) (2-chlorfenyl)-8-[ 4[ - (3-hydroxy-l-methyl)piperidinyl] -4H-benzopyran-4-onu pro výrobu léčiva určeného pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárních lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poškození balónkovou angioplastií a pro léčení pacientů po implantaci stentů.
Sloučeniny podle vynálezu mají dvě asymetrická centra, a sice jedno v místě, kde je heterocyklický kruh obsahující dusík kondenzován s benzopyranovým zbytkem (C-4'), a druhé v R4-substituovaném uhlíkovém atomu ((3-3'), což znamená, že jsou v tomto případě možné dva páry optických izomerů. Definice sloučenin podle vynálezu zahrnuje všechny možné stereoizomery a jejich směsi. Tato definice zejména zahrnuje racemické formy a izolované optické izomery mající specifikovanou účinnost. Oba racemáty mohou být štěpeny fyzikálními metodami, mezi které patří zejména frakcionační krystalizace. Individuální optické mohou být získány z racemátů konvenčními postupy, mezi které například patří vytvoření solí s opticky aktivní kyselinou a následná krystalizace.
Příklady alkylových skupin, které jsou vhodné jako významy pro Rx až R5, jsou přímé nebo rozvětvené skupiny obsahující až 6, výhodně až 5, uhlíkových atomů, přičemž těmito skupinami jsou například methylová skupina, ethylová skupina, propylová skupina, isopropylová skupina, terč.butylová skupina, pentylová skupina nebo isopentylová skupina.
Příklady substituovaných alkylových skupin, které jsou vhodné jako významy pro Rx až R5, jsou halogenalkylová skupina, jako například trifluormethylová skupina, hydroxyalkýlová skupina, jako například hydroxyethylová skupina, nebo karboxyalkylová skupina, jako například karboxyethylová skupina.
Vhodné příklady cykloalkylové až 6 uhlíkových atomů a je vhodná jsou cyklopropylová skupina, cyklopentylová skupina Cyklopropylmethylová cykloalkylalkylové skupiny.
skupiny, nebo skupina která obsahuje 3 jako význam pro cyklobutylová cyklohexylová je
Rx až R5, skupina, skupina. příkladem
Příkladem aralkylové skupiny, která je vodná jako význam pro Rx až R5, nesubstituovaná je fenylalkylová skupina, která je nebo monosubstituovaná nebo polysubstituovaná alkylová skupina substituenty, obsahující 1 jakými jsou halogen, až 4 uhlíkové atomy, alkoxy-skupina obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy nebo nitro-skupina, nebo trifluormethylovou skupinou, amino-skupinou a substituovanou amino-skupinou.
Příkladem arylové skupiny, která je vhodná jako význam pro Rx až R5, je fenylová skupina, která je nesubstituovaná nebo monosubstituovaná nebo polysubstituovaná substituenty, jakými jsou halogem, alkylová skupina obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkoxy-skupina obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, hydroxylová skupina, karboxylové skupina, COO-alkylová skupina, skupina CONH2, CONH-alkylová skupina, CON (alkyl)2alkylová skupina, nitro-skupina nebo trifluoraminová skupina, amino-skupina, alkylamino-skupina, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, di-alkylamino-skupina, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, aromatické heterocyklické
skupiny, jako například pyridylová skupina, a polycyklické aromatické skupiny, jako například naftylová skupina.
Vhodným příkladem alkylamino-skupiny ve významech R1 až R5 je skupina (CH2) n~NR6R7, ve které n znamená 1 až 3 a R6 a R7 znamenají alkylovou skupinu a mají výše uvedený význam pro případ, kdy Rx až R5 znamenají alkylovou skupinu; kromě toho R6 a R? mohou tvořit společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, heterocyklickou skupinu obsahující jeden nebo více heteroatomů. Vhodnými příklady heterocyklických skupin, které jsou tvořeny Rg a R? společně s atomem dusíku, ke kterému jsou vázány, jsou piperidinová skupina, pyrrolidinová skupina, morfolinová skupina, piperazinová skupina nebo imidazolová skupina, přičemž všechny tzyto skupiny mohou být nesubstituované nebo substituované v jedné nebo několika polohách alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkoxy-skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy nebo arylovou skupinou nebo hydroxylovou skupinou nebo amino-skupinou.
Vhodnými příklady solí sloučenin anorganickými nebo organickými hydrochloridy, hydrobromidy, sulfáty, podle vynálezu s kyselinami jsou fosfáty, acetáty, oxaláty, tartráty, citráty, maleáty nebo fumaráty.
Přehled obrázků na výkresech
Na připojených výkresech:
Obr.l znázorňuje účinek flavopiridolu na syntézu HASMC DNA. IA: Kviescentní HASMC byly ošetřeny v nepřítomnosti (-) nebo přítomnosti (+) bFGF (10 ng/ml) a při indikovaných koncentracích flavopiridolu (nmol/L) po dobu 24 hodin. Inkorporace BrdU jako měřítko proliferace byla určena stanovením na bázi ELISA a vyjádřena jako inkorporace při absenci ošetření bFGF. *p<0,05, ve srovnání s neošetřenými buňkami. fp<0,05, ve srovnání s ošetřením bFGF při absenci flavopiridolu. 1B: HASMC byly ošetřeny bFGF (10 ng/ml), trombinem (2U/ml) nebo vehikulem v přítomnosti nebo absenci • · flavopiridolu (75 nmol/1) a byla měřena inkorporace BrdU.
*p<0,05, ve srovnání s neošetřenými buňkami. **p<0,05, ve srovnání se samotným ošetřením bFGF. ýp<0a05, ve srovnání s ošetřením samotným trombinem.
Obr. 2 znázorňuje účinek flavopiridolu na proliferaci HASMC. Kviescentní HASMC byly ošetřeny samotným bFGF (10 ng/ml) (A), bFGF a flavopiridolem (75 nmol/1) (·) nebo vehikulem ( ) po indikované doby a po ošetření byly stanoveny počty buněk. Výsledky jsou vyjádřeny jako počty 3 buněk na jamku (xlO ) .
Obr. 3 znázorňuje účinek flavopiridolu na aktivitu cyklin-dependentní kinázy v HASMC. Kviescentní HASMC byly ošetřeny bFGF (10 ng/1), trombinem (2 U/ml) nebo vehikulem v přítomnosti nebo při absenci flavopiridolu (75 mmol/1), přičemž byla kvantifikována fosforylace histonu H1 jako měřítko aktivity Cdk a vyjádřena jako procentická aktivita Cdk při absenci ošetření bFGF. *p<0,05, ve srovnání s neošetřenými buňkami. **p<0,05, ve srovnání s ošetřením samotným bFGF. fP<0,05, ve srovnání s ošetřením samotným trombinem.
Obr.4 znázorňuje regulaci proteinů vztahujících se k buněčnému cyklu flavopiridolem. Kviescentní HASMC byly ošetřeny v přítomnosti (+) nebo v nepřítomnosti (-) bFGF (10 ng/ml), trombinem (10 ng/ml) nebo/a flavopiridolem (75 mmol(l) po dobu 24 hodin. Za použití specifických protilátek pro cyklin Dx (horní řada), PCNA (střední řada) a fosforylovaný (pRb) a hyperfosforylovaný (ppRb) Rb (spodní řada) byl proveden imunoblotting buněčných lyzátů.
Obr.5 znázorňuje účinky flavopiridolu na aktivitu kinázi MAP v HASMC. Kviescentní HASMC byly ošetřeny v přítomnosti ( + ) nebo v nepřítomnosti (-) bFGF (10 ng/ml·) trombinem (2U/ml), PD98059 (30 pmol/l) nebo/a flavopiridolem (75 nmol/1). Hladiny fosforylovaného Erkl (pErkl) a Erk2 (pErk2) byly měřeny imunoblottingem s fosforylačně specifickou protilátkou rozpoznávající oba proteiny (horní řada). Aktivita kinázy MAP byla měřena in-gel kinázovým stanovením za použití myelinového básálního proteinu ve funkci substrátu (spodní řada).
Obr. 6 znázorňuje životnost HASMC po léčení flavopiridolem flavopiridolem vehikulem po
Kviescentní (75 nmol/1) , uvedené doby.
HASMC byly ošetřeny
TNF-Π (50 ng/ml) nebo
Buněčná životnost byla vyhodnocena za použití vybarvení tryptanovou modří. Získané výsledky jsou vyjádřeny jako procentický podíl živých buněk vztažený na celkový počet buněk.
Obr. 7 znázorňuje inhibici neointimální tvorby v krysí karotidě po poškození způsobeném balónkovou angioplastií flavopiridolem. Neointimální/mediální poměry byly měřeny v histologických řezech nebo krysích karotídách neošetřených nebo ošetřených flavoparidolem (5 mg/kg) po dobu 5 dnů po poškození. Artérie byly zkoumány 7 (n=12) a 14(n=12) dnů po poškození. Rovněž je uveden procentický podíl PCNA-pozitivních nukleí (± SEM, vyjádřeno jako procentický podíl počítaných nukleí) v neointimách arterií pro každý časový úsek a ošetřovanou skupinu. *p<0,05, ve srovnání s ošetřením vehikulem.
Obr. 8 znázorňuje histologické řezy krysích karotíd. Řezy jsou získány 7 dní (Obr.8A a 8B) a 14 dní (Obr.8C a 8D) po poškození. Artérie zobrazené na Obr.8A a 8C byly získány z krys ošetřených flavopyridolem (5 mg/kg) podávaným v potravě; artérie na Obr.8b a 8D byly získány z krys ošetřovaných pouze vehikulem. Řezy jsou na obrázcích zvětšeny 100 krát.
Obr. 9 znázorňuje expresi Cdk2 po poškození krysích karotíd balónkouvou angiplastií. Řezy artérií jsou získány dní (Obr.9A a Obr.9B) a 14 dní (Obr.9C a Obr.9D) po poškození. Artérie zobrazené na Obr.9A a Obr.9B byly získány z krys ošetřených flavopiridolem (5 mg/kg) podávaným v potravě, zatímco artérie zobrazené na Obr.9B a
Obr.9D byly zísány z krys, které byly ošetřeny pouze samotným vehikulem. Cdk2-pozitivní nuklea, nacházející se převážnou měrou na neointimě, se obarví Vektorovou modří za použití alkalickofosfatázové metody. Řezy jsou na obrázcích zvětšeny 100 krát
Sloučeniny, které se používají podle vynálezu, mohou být připraveny postupy popsanými v patentových dokumentech US 4,900,727 a 5,284,856. Konkrétní postupy příprav těchto sloučenin jsou uvedeny v příkladových částech těchto patentových dokumentů.
Sloučeniny používané podle vynálezu inhibují proliferaci buněk hladkých svalů. Dalšími předměty vynálezu jsou proto farmaceutické přípravky pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, jejichž podstata spočívá v tom, že obsahují alespoň jednu výše definovanou sloučeninu obecného vzorce I nebo alespoň jednu z jejích farmakologicky přijatelných adičních solí s kyselinami, a použití výše definované sloučeniny obecného vzorce I pro přípravu farmaceutického přípravku majícího proliferaci buněk hladkých oblastmi sloučenin choroby/poruchy/poškození, vaskulárními lézemi buněk příkladem uvedených stavů poškozeních inhibiční účinek vůči Typickými aplikačními vynálezu jsou jsou doprovázena svalů. Velmi důležitým ke kterým dochází po Dalšítou svalů.
podle která hladkých jsou léze, způspbených balónkovou angioplastií.
aplikační oblastí je prevence restenózy po implantaci stentů.
4H-l-Benzopyran-4-onové deriváty se používají podle vynálezu obecně obvyklým způsobem, který je odborníkům v daném oboru znám. Ve farmaceutických přípravcích se používá účinné množství uvedené účinné látky buď samotné nebo výhodně v kombinaci s vhodnými farmaceutickými pomocnými látkami ve formě tablet, povlečených tablet, kapslí, čípků, suspenzí nebo roztoků, přičemž obsah účinné sloučeniny činí v uvedených galenických formách až 95 %,výhodně 10 až 75 %.
Pro odborníka v daném oboru je zřejmé, které pomocné látky jsou vhodné pro žádoucí formulování farmaceutického přípravku, což pramení z jeho profesionálních znalostí. Vedle pomocných látek pro tablety nebo rozpouštědel, gelotvorných látek a bází pro čípky a ostatních pomocných látek pro účinnou látku je možné použít antioxidační činidla, dispergační činidla, činidla, odpěňovače, látky korigující vůní například emulgační a chuť, konzervační činidla, solubilizační činidla nebo barvící přísady.
Uvedená účinná látka může být podávána orálně, parenterálně, intravenózně nebo rektálně, přičemž výhodným podáním je orální podání. Za účelem vytvoření přípravku pro orální podání může být účinná látka smíšena s ostatními přísadami, které jsou vhodné pro daný účel a podání a kterými jsou například pomocné látky , stabilizátory nebo inertní ředidla, přičemž k převedení takto získaných směsí do vhodné aplikační formy se použijí obvyklé postupy, přičemž těmito aplikačními formami jsou zejména tablety, povlečené tablety, tvrdé želatinové kapsle a vodné, alkoholické nebo olejové suspenze nebo roztoky. Příklady použitelných inertních pomocných látek jsou arabská guma, oxid horečnatý, laktóza, glukóza nebo škrob, zejména kukuřičný škrob. V tomto kontextu může být formulace připravena jako suché granule nebo vlhké granule. Příklady vhodných olej ovitých pomocných látek nebo rozpouštědel jsou rostlinné nebo živočišné oleje, jakými jsou například slunečnicový olej nebo olej z tresčích jater.
Pro subkutánní nebo intravenózní podání se formuluje roztok, suspenze nebo emulze účinné látky za použití pomocných látek, které se pro daný účel konvenčně používají a kterými jsou zejména solubilizační činidla, emulgační činidla a další pomocné látky. Příklady vhodných rozpouštědel jsou voda, fyzilogický roztok chloridu sodného nebo alkoholy, například ethanol, propanol nebo glycerol, ale také roztoky cukrů, jakými jsou například roztoky glukózy nebo roztoky mannitolu, nebo směsi různých výše zmíněných rozpouštědel.
Dávka 4H-l-benzopyran-4-onových derivátů, která je určena pro denní podání, bude zvolena tak, aby odpovídala « ·» ·· ·· ·· ··
9 · · · 9 · · » 99 • · · 9 9 999 9 99
9 9 9 9 9 9 9 9 9 99 požadovanému účinku. 4H-l-Benzopyran-4-onové deriváty mohou být podány v dávce, která je nižší než 70 %, výhodně nižší než 60 %, zejména nižší než 50 % dávky, která se používá pro kontrolu nádorového růstu u daného savce. Příkladem by byla v rámci myšího modelu cancer mouše s xenoroubem dávka asi 5 mg/kg tělesné hmotnosti podaná orálně jednou denně. Tato dávka je polovinou dávky, která inhibuje u stejného zvířecího modelu nádorový růst (Drees a kol., Clin.Cancer Res. 1997,3:273-279).
Farmakokinetické vlastnosti 4H-l-benzopyran-4-onových derivátů by mohly učinit nezbytným podávat uvedenou sloučeninu několikarát denně anebo použit formulaci s pozvolným uvolňováním účinné látky.
V následující části popisu bude vynález blíže objasněn pomoci konkrétních příkladů jeho provedení, přičemž tyto příklady mají pouze ilustrační charakter a nikterak neomezují vlastni rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen definicí patentových nároků a obsahem popisné části.
• φ φφ φ ·· φφ φφ • · ·· φφφφ φ • · φ φφφφ φφφ φφ φφφ φφ φφφφ φ Φφφ φφφφ φφφ •Φ φφφ φφφφ φφ φφφ
Příklady provedení vynálezu
1. Flavopiridol inhibuje proliferaci buněk hladkých svalů a neointimální tvorbu in vivo v rámci modelu vaskulárního poškození krysí katotidy.
Standardní model poškození krysí karotidy, při kterém je tvorba neointimální léze po katetrem indukovaném poškození je kriticky závislá na proliferaci SMC (Clowes a kol.Lab.invest.1983, 49:327-333, Clowes a kol.,
Circ.Res.1985, 56:139-145) pro zkoumání, zda flavopiridol způsobí zastavení růstu SMC in vivo stejně tak, jako je toho schopen in vitro.
Flavopiridol byl podáván orálně v dávce 5 mg/kg jednou denně, přičemž se s jeho podáváním započne v den, ve kterém došlo k poškození, a pokračuje po dobu čtyř následujících dnů, poněvadž tato časová etapa pokrývá prvotní indukci Cdk2 a první vlnu proliferace SMS při tomto modelu (Circ.Res.1995, 77:445-465, Circ. Res.1997, 80:418-426).
Střední intimální a mediální oblasti byly kvantifikovány 7 a 14 dnů po uvedeném poškození a neointimální léze byla vyjádřena jako poměr neointimální oblasti k mediální oblasti. V každé ošetřené a neošetřené skupině bylo po dvanácti zvířatech. Uvedený poměr v sedmém dni byl 1,00+/-0,05 v arteriích zvířat ošetřených vehikulem, zatímco tento poměr činil 0,65+/-0,04 v arteriích zvířat ošetřených flavopiridolem, což představuje snížení rovné 35 %. Ve čtrnáctý den byl poměr neointimální/mediální oblast roven 1,08+/-0,04 v arteriích krys ošetřených vehikulem, zatímco stejný poměr činil 0,66+/0,03 v arteriích krys ošetřených flavopiridolem, což představuje snížení rovné 38,9 %. Tyto účinky byly statisticky významné pro oba časové údaje (P<0,05).
Metody
Materiály
Flavopiridol (L86-8275, (-)-cis-5,7-dihydroxy-2-(2-chlorfenyl)-8-[ 4-(3-hydroxy-1-methyl)piperidinyl] -4Hbenzopyran-4-one) byl poskytnut společnosti Hoechst Marion Russel, lne. a byl rozpuštěn v dimethylsulfoxidu za účelem získání zásobního roztoku s koncentrací 50 mmol/1 pro experimenty s buněčnými kulturami nebo ve vodě za účelem získání zásobního roztoku pro experimenty in vivo. Bazální fibroplastový růstový faktor (bFGF) je komerčně dostupný u společnosti Collaborative Biochemical, zatímco trombin je komerčně dostupný u společnosti New England Biolabs.
Buněčná kultura: buňky hladkého svalu lidské aorty (HASMC - Human Aortic Smooth Muscle Cells) byly získány od společnosti Clonetics a byly kultivovány způsobem popsaným v Ruef J. a kol, Induction of vascular endothelial growth in ballon-injured baboon arteries, Circ.Res.1997,81:24-33. Buňky byly použity při pasážích 5-9. Ještě před provedením experimentů byl růst buněk zastaven při 80% konfluenci po dobu 48 hodin za použití média obsahujícího 0,5 % fetálního bovinního séra.
Měření buněčné proliferace stanovením ELISA: buněčná proliferace byla měřena stanovením ELISA (Amersham Life Science). HASMC byly kultivovány na želatinou ovrstvených 96 jamkových plotnách a převedeny do kviescentního stavu. Tyto buňky byly potom ošetřeny 10 ng/ml bFGF, 2 U/ml trombinu nebo vehikulem po dobu 24 hodin. Flavopiridol byl podán (75 nmol/1) 1 hodinu před ošetřením růstovým faktorem. 5-brom-2'-deoxyuridin (BrdU) byl přidán k dosažení finální koncentrace 10 gmol/l v průběhu posledních dvou hodin ošetření. Inkorporace BrdU byla měřena způsobem • φ • ΦΦΦ · φ φ · φ φ φφ • · · · · φφ φφφ • · φφφφφφφφφ φ • φφ · φ · φ φφφ ·· ··♦ φφ ·· ·· φφφ popsaným v Ruef J. a kol., Induction of rat aortic smooth muscle cell growth by the lipid peroxidation product 4-hydroxy-2-nonenal, Circulation 1998, 97:1071-1078. Získané výsledky jsou vyjádřeny jako střední hodnota plus/minus SEM pro 12 vzorků při dvou nezávislých experimentech.
Počítání buněk: růstově zastavené buňky HASMC narostlé do 50% konfluence na 6-jamkových plotnách byly ošetřeny nebo neošetřeny flavopiridolem (75 mmol/1) nebo bFGF (10 ng/ml). V intervalech po ošetření byly buňky trypsinizovány a počty buněk byly stanoveny za použití hemocytometru.
Analýza Western blot: Kviescentni buňky HASMC byly ošetřeny nebo neotřeny růstovým faktorem nebo/a flavopiridolem, jak to již bylo uvedeno. Analáza Western blot byla provedena způsobem popsaným v Ruef J. a kol, Induction of vascular endothelial growth in ballon-injured baboon arteries, Circ.Res.1997,81:24-33 . Primárními protilátkami byly: polyklonální protilátka anti-humánního cyklinu Dl (M-20, Santa Cruz), monoklonální protilátka anti-humánního jádrového antigenu proliferace buněk (PCNA) komerčně dostupná u společnosti Sigma pod označením PC10, monoklonální protilátka fosforýlačně specifické p44/42 (Erkl/Erk2) kinázy MAP (New England Biolabs) a monoklonální protilátka anti-Rb (G3-245, Pharmigen), které jsou specifické pro fosforylované (pRb) a vysoce fosforylované (ppRb) druhy Rb. Při imunoblottingových studiích byly experimenty prováděny alespoň třikrát.
Aktivita Cdk: Kviescentni buňky HASMC byly ošetřeny agonisty a inhibitory po dobu 24 hodin, přičemž celkové buněčné lyzáty byly připraveny způsobem uvedeným v souvislosti s analýzou Werstern blottin. Kinázová stanovení byla provedena za použití soupravy Histone Ηχ kinase assay kit (Upstate Biotechnology) podle instrikcí výrobce.
Stručně specifikováno: 10 μΐ peptidového inhibitoru pro protein kinázu C (2 gmol/l) a protein kinázu A (2 gmol/l), 100 μς buněčného lyzátu, 10 μΐ testového pufru a 10 μΐ směsi obsahující 75 μτηοΐ/ΐ chloridu horečnatého, 500 μπιο1/1 ATP a 1 μθί/ιη1 [ γ-32Ρ] ATP se smísí v mikroodstředivkové kyvetě. Po inkubaci při teplotě 30 °C po dobu 10 minut se odpipetují alikvoty na fosfocelulózové papíry. Tyto papíry se promyjí v 0,75% kyselině fosforečné, načež se změří rozpady za minutu ve scintilačním čítači (Beckman). Získané výsledky jsou vyjádřeny jako plus/minus SEM pro tři vzorky, přičemž výsledky jsou získány ze tří nezávislých měření.
Kinázové stanovení in-gel: Kviescentní buňky HASMC byly ošetřeny růstovým faktorem po dobu 30 minut, načež se připraví celkové buněčné lyzáty způsobem, který již byl popsán v souvislosti s analýzou Western blotting. V některých experimentech byly buňky HASMC předběžně zpracovány po dobu 60 minut 30 μηιοί/ΐ PD98059, flavopiridolem nebo vehikulem. Stejná množství proteinu (50 Bg/linie) byla rozpuštěna na polyakrylamidovém gelu, který byl kopolymerován s 350 μg/ml myelinového bazálního proteinu. Tento gel byl potom ošetřen [ γ- P] ATP a podrobem autoradiografii způsobem popsaným v Ruef J. a kol., Induction of rat aortic smooth muscle cell growth by the lipid peroxidation product 4-hydroxy-2-nonenal, Circulation 1998, 97:1071-1078.
Vybarvení trypanovou modří: Buňky HASMC byly kultivovány v 5 cm Petriho miskách při nízké konfluenci a zastaveném růstu již výše popsaným způsobem. Tyto buňky byly potom ošetřeny flavopiridolem (75 nmol/1) nebo nádorovým nekrózním fakrorem-α (TNF-a; 50 ng/ml) po uvedené doby. Po odstranění média se do Petriho misek přidá 0,4% trypanová modř ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku. Po 5 minutách se buňky v Petriho miskách spočítají pod mikroskopem. Modré buňky jsou počítány jako buňky
| *0 | • | 00 | 4· | ||||
| • · | ·· | • | • | • 4 | * | 0 | • 0 |
| • 0 | • | • | • | 40 | 0 | 4 | |
| 00 | ·>· | • 4 | • 0 | 00 | 00 |
neživé.
Model poškození krysí karotidy: Poškození krysí karotidy bylko v podstatě provedeno způsobem popsaným v Clowes AW a kol., Kinetics of cellular proliferation after arterial injury, Lab.Invest. 1983, 49:327-333. Dospělí krysí samečkové Sprague-Dawlwy (tělesná hmotnost 400 až 500 g, Zivic-Miller) byli anestetizování intraperitoneální injekcí ketaminu (2 mg/kg) a xylazinu (4 mg/kg). Levá vnitřní karotida byla potom kanulována embolektomickým katetrem 2F. Balónek byl nafouknut fyziologickým roztokem a tažen třikrát skrze artérii s cílem vytvořit rozšířené a obnažené poškození. Pravá karotida se nepoškodí a slouží jako kontrolní subject pro každé zvíře. Bezprostředně po probrání se zvířat z anestezie a potom ještě po dobu čtyř následujících dnů byl krysám v potravě podáván flavopiridol (5 mg/kg ve vodě) nebo pouze voda jako slepý pokus. Všechny krysy zákrok přežily a nejevily žádnou známku otravy po podáni účinné látky při použitých dávkách. Ve specifikovaných časových intervalech po poškození karotidy byly krysy anestetizovány výše uvedeným způsobem a podrobeny perfuzně fixní systemické infuzi 4% paraformaldehydem ve fosfátem pufrovaném fyziologickém roztoku. Pravá i levá karotida byly vyjmuty a rozšířeny injekcí 4% paraformaldehydu skrze průsvit artérie, načež byly dehydratovány a přechovávány v 70% ethanolu při teplotě 4 °C.
Imunohistochemie byla provedena způsobem popsaným v Ruef J. a kol, Induction of vascular endothelial growth in ballon-injured baboon arteries, Circ.Res.1997,81:24-33 za použití monoklonální protilátky PCNA a polyklonální anti-humánní protilátky Cdk2 (M2-G, Santa Cruz).
Obrazová analáza: Okrajové distální a proximální oblasti každé arterie byly odstraněny (přibližně 500 gm). Z • · každé artérie bylo analyzováno deset intermediárních průřezů (každý 8 μτη) odebraných 500 pm od sebe. Řezy byly fixovány a obarveny hematoxylinem a eosinem způsobem popsaným v Ruef J. a kol, Induction of vascular endothelial growth in ballon-injured baboon arteries, Circ.Res.1997,81:24-33. Za použiti mikroskopu Nikon Diaphot 300 a 4 násobného objektivu byl každý průřez artérií zaznamenám jako digitální obraz pomocí videokamery Hamamatsu C5985 a TCPro 2.41 (Coreco, lne.). Mediální a neointimální oblasti byly stanoveny za použití softwaru NIH Image. Hranice mediálních a neointimálních oblastí byly stanoveny jedním prohlížečem (A.M) a ověřeny slepou zkouškou pomocí druhého prohlížeče (C.P.). Velikost léze byla vyjádřena jako neointimální/mediální poměr. Výsledky pro každou skupinu byly vyjádřeny jako střední plus/minus SEM. 92 % nebo ještě více obrazů každé skupiny bylo interpretovatelných; zbylé obrazy byly poznamenány pozměněnou strukturou buněk a nebyly analyzovány.
Statistická analýza: V případech, kdy to bylo vhodné, byly údaje z kvantitativních studií vyjádřeny jako střední plus/minus SEM. U násobně ošetřených skupin byl použit faktoriál ANOVA a následný test alespoň jedné významné Fischerovy diference. Statistický význam byl akceptován při p<0,05.
Výsledky
Flavopiridol inhibuje proliferaci buněk HASMC: na základě schopnosti flavopiridolu inhibovat proliferaci různých nádorových buněčných řad byla testována hypotéza spočívající v tom, že flavopiridol by mohl blokovat také růst primární kultury lidských SMC. Růstově zastavené buňky HASMC byly ošetřeny za použití SMS mitogenu bFGF (10 ng/ml) po dobu 24 hodin v přítomnosti rostoucích koncentrací • · flavopiridolu a proliferace byla měřena stanovením na bázi ELISA. Ve srovnáni s neošetřenými buňkami byla proliferace buněk ošetřených bFGF zvýšena 5,4 krát (Obr.l) Předběžné jednohodinové ošetření za použití pouze 50 nmol/1 flavopiridolu významně snížilo proliferaci buněk HASMC (na 3,9 krát, p<0,05), přičemž téměř maximální účinek byl dosažen při koncentraci 75 nmol/1. Stejné výsledky byly získány za použití absorpce thymidinu, které představuje nezávislé měření syntézy DNA (nezobrazeno).
Za účelem testování obecného aspektu účinků flavopiridolu na proliferaci SMC byl zkoumán jeho účinek na mitogenezi indukovanou trombinem (2 U/min), který působí na s G proteinem kopulovaný receptor, na rozdíl od bFGF, který stimuluje člen skupiny receptorů tyrosin kinázy. Flavopiridol (75 nmol/1) významně a potentně inhibuje jak proliferaci buněk HASMC indukovanou bFGF, tak i proliferaci indukovanou trombinem 5,4 krát versus 1,8 krát resp. 2,4 krát versus 0,7 krát (p<0,05, Obr.lB). Bylo provedeno počítání buněk s cílem potvrdit, že účinek flavopiridolu na průběh buněčného cyklu u buněk HASMC skutečně odráží změny v proliferaci. bFGF (10 ng/mk) indukoval trojnásobné zvýšení počtu buněk po třech dnech ošetření (Obr.2). Shodně s výsledky získanými při stanovení na bázi ELISA flavopiridol (75 nmol/1) účinně blokuje proliferaci indukovanou bFGF.
Flavopiridol inhibuje aktivitu Cdk a genovou expresi související s buněčným cyklem u buněk HASMC: s cílem vyhodnotit specifický účinek flavopiridolu na mechanismus buněčného cyklu byla měřena histon H1 kinázová aktivita v buněčných lyzátech z buněk HASMC stimulovaných růstovým faktorem. Fosforylace histonu H1 je indikátorem aktivit Cdc2 a Cdk2. Ošetření buněk HASMC faktorem bFGF a trombinem má za následek 4,4 násobné resp. 3,6 násobné zvýšení histon H1 kinázové aktivity (Obr.3). Tato zvýšení aktivity • · cyklin-dependentní kinázy byla zcela blokována předběžným ošetřením flavopiridolem (75 nmol/1).
Použitím analýzy Western blott bylo rovněž zkoumáno, zda flavopiridol ovlivňuje růstovým faktorem indukovanou regulaci protejínů souvisejících s buněčným cyklem u buněk HASMC. Cyklin D1 je Gx fázový cyklin, který je směrem vzhůru regulován stimulací růstovým faktorem a rychle odbourán v průběhu odvedení z buněčného cyklu. Hladiny proteinu cyklin Dl byly regulovány směrem vzhůru 6,3 krát resp. 2,2 krát v odezvu na ošetření faktorem bFGF a trombinem po dobu 24 hodin (Obr.4), což je účinek, který by mohl být zcela blokován předběžným zpracování flavopiridolem. Stejně tak zvýšená exprese PCNA, který je převážně syntetizován v průběhu fáze S buněčného cyklu souběžně s replikací DNA, byl rovněž blokován předběžným ošetřením flavopiridolem. Jako finální aspekt proteinů souvisejících s buněčným cyklem byla zkoumána fosforylace Rb v odezvu na expresi růstového faktoru za použití protilátky specifické pro fosforylovaný Rb. Rb je regulátor buněčného cyklu, který se váže na transkripční faktor E2F a inaktivuje transkripční faktor E2F, když je Rb v nefosforylovaném stavu, a indukuje zastavení růstu SMC in vivo. Fosforylace inaktivuje Rb a umožňuje průběh fáze S buněčného cyklu. Analýza fosforylace Rb je obzvláště relevantní vzhledem k tomu, že Rb je cílem Cdk2 a Cdk4 in vivo. Jak trombin, tak i faktor bFGF indukuje hyperfosforylaci Rb, což je účinek, který byl inhibován flavopiridolem. Společně tyto výsledky ukazují, že flavopiridol ovlivňuje expresi a aktivitu Gx a regulačních prvků buněčného cyklu souvisejících s fází S tohoto cyklu u buněk HASMC a má takto růstově inhibiční účinky.
Flavopiridol nemá účinek na fosforylaci nebo aktivitu kinázy MAP: S cílem ujistit se, že flavopiridol působil specificky v úrovni buněčného cyklu a nikoliv nespecificky
na horní část kinázové schématu, byla měřena fosforylace a aktivita Erkl (p44 MAP kináza) a Erk2 (p42 MAP kináza), což jsou dva členy skupiny kinázy MAP. Pro uvedené měření byly zvoleny kinázy vzhledem k tomu, že se nachází bezprostředně před transkripčními ději, ke kterým dochází v odezvu na růstové stimuly, a bezprostředně za řadou kritických mitogenních signálních cest. Nedotčená odezva kinázou MAP ukazuje je, že jsou nedotčeny také předcházející mitogenní cesty. Byl měřen fosforylační statut Erkl a Erk2 za použití monoklonální protilátky, která specificky rozpoznává fosforylované a tudíž aktivované formy. Jako kontrolní subjekt při těchto experimentech byl použit PD98059, což je potentni a selektivní inhibitor aktivace kinázy MAP. Po ošetření buněk HASMC trombinem a faktorem bFGF po dobu 30 minut byla ve srovnání s neošetřenými buňkami detekována zvětšená množství fosforylovaných Erkl a Erk2 (Obr.5, horní řada). Fosforylace Erkl a Erk2 jak trombinem, tak i faktorem bFGF byla blokována předběžným ošetřením za použití PD98059, avšak nikoliv flavopiridolu. S cílem potvrdit tato zjištění byla měřena aktivita Erkl a Erk2 kinázovým stanovením in-gel (Obr.5, spodní řada). Znovu bylo nalezeno, že aktivity Erkl a Erk2 byly zvýšeny v odezvu na trombin a faktor bFGF, což je účinek, který byl inhibovatelný produktem PD98059, avšak nikoliv flavopiridolem. Tyto experimenty společně s experimenty, jejichž výsledky jsou zobrazeny na Obr.3 a Obr.4, poskytují důkaz toho, že účinky flavopiridolu na proliferaci buněk HASMC jsou způsobeny specifickým zastavením mechanismu buněčného cyklu blokováním aktivity Cdk, aniž by přitom byly ovlivněny předcházející signální děje.
Flavopiridol nesnižuje životnost buněk HASMC: dřívější studie týkající se aktivity flavopiridolu v ostatních typech buněk prokázaly, že v závislosti na buněčné řadě může flavopiridol buď indukovat zastavení růstu aniž by při tom ovlivnil životnost buněk, nebo může způsobit aptózu.
• · · · · · · 9 a ♦· ·· ···
Bylo proto nyní zjišťováno, zda flavopiridol snižuje životnost buněk HASMC, tím, že byla provedeno vybarvení vzorků buněčné kultury trypanovou modří v různých časových okažicích po léčení. Kviescentní buňky HASMC byly ošetřeny flavopiridolem (75 nmol/1), vehikulem nebo TNF-D (50 ng/ml) , což je cytokin, o kterém je známo, že indukuje apoptózu u tohoto typu buněk. Zatímco TNF-Π potentně snížil životnost buněk HASMC, což mělo za následek smrť v podstatě všech buněk po 24 hodinách, neměl flavopiridol takový účinek (Obr.6). Bylo zjištěno, že za použití vyšších koncentrací a delších inkubačních dob může dojít k určitému snížení životnosti buněk v přítomnosti flavopiridolu (není zobrazeno). Nicméně za podmínek testu flavopiridol především indukuje zastavení růstu buněk, aniž by přitom ovlivnil životnost SMC.
Flavopiridol inhubuje proliferaci buněk hladkých svalů a neointimální tvorbu in vivo v modelu vaskulárního poškození krysí karotidy: byl použit zavedený model poškození krysí karotidy, ve kterém je tvorba neointimální léze po poškození indukovaném katetrem kriticky závislá na proliferaci SMC s cílem zkoumat, zda flavopiridol indukuje zastavení růstu SMC in vivo, pakliže je toho schopen in vitro. Flavopiridol byl podáván v dávce 5 mg/kg jednou denně, přičemž se s podáním započne v den poškození a v podávání se pokračuje ještě po dobu čtyř následujících dnů, poněvadž tento časový interval pokrývá v tomto modelu prvotní indukci Cdk2 a první vlnu proliferace SMC. Kvantifikují se střední intimální a mediální oblasti 7 a 14 dnů po poškození, přičemž rozsah neointimální léze se vyjádří jako poměr neointimální oblasti k mediální oblasti. V každé ošetřené a neošetřené skupině bylo dvanáct zvířat. Neointimální/mediální poměr v sedmém dnu činil l,00±0,05 v artériích krys ošetřovaných vehikulem a 0,65±0,04 v artériích ošetřovaných flavopiridolem, což představuje snížení rovné 35,0 % (Obr.7). Ve čtrnáctý den činil
neointimální/mediální poměr l,08±0,04 u krys ošetřených vehikulem a 0,66±0,03 u krys ošetřených flavopiridolem, což představuje snížení rovné 38,9 %. Tyto výsledky byly statistický významné v obou uvedených časových údajích (p<0,05). Reprezentativní arteriální řezy jsou zobrazeny na Obr.8.
Za účelem přímého prokázání, že flavopiridol inhibuje proliferaci buněk hladkých svalů, byly řezy pro expresi PCNA v reprezentativních oblastech z každé artérie vybarveny a byl stanoven procentický podíl PCNA-pozitivních nukleí v neointimě. Sedmý den bylo 31,1±7,2 % nukleí v poškozených artérií neošetřených krys PCNA-pozitivní, zatímco pouze 11,8±1,5 % poškozených artérií krys ošetřených flavopiridolem bylo PCNA-pozitivní (Obr.7; p<0,05). Čtrnáctý den byla PCNA-pozitivní nuklea přítomna v 10,4±2,0 % neointimálních buněk u ošetřených poškozených krysích artérií, avšak v pouze 4,2±0,5 % neointimálních buněk u neošetřených krysích artérií (p<0,05). (PCNA-pozitivní nuklea byla zřídka pozorována u nepoškozených artérií a to bez ohledu na typ ošetření). Podobně byly Cdk2-pozitivní buňky mnohem méně běžné v neointimě krys ošetřených flavopiridolem (Obr.9, řada A a
| C) a to ve srovnání s artériemi neošetřených D) jak 7 dnů, tak i 14 dnů po poškození. | krys | (řada B a | |
| Diskuze | |||
| V uvedených studiích inhibitor, kterým je | bylo zkoumáno, flavopiridol | zda nový Cdk představuj ící |
nejpotentnější a specifický inhibitor Cdk, je vhodným kandidátem pro inhibici proliferace SMC in vivo, obzvláště doprovázející vaskulární poškození. Pro tyto studie poskytly racionální základ dřívější pokusy zasáhnout terapeuticky do mechanismu buněčného cyklu za účelem léčení
vaskulárnich onemocněni; nicméně metody použité za tímto účelem spočívaly v technologii přenosu genů použité s cílem inhibovat průběh buněčného cyklu. V současnosti klinickému použití těchto technik však brání zatím nepřekonatelné překážky. V průběhu studií souvisejících s touto přihláškou vynálezu bylo publikováno, že CVT-313, což je nedávno identifikovaná sloučenina, která má rovněž Cdk inhibiční vlastnosti, avšak při mikromolárních koncentracích, může rovněž inhibovat neointimální tvorbu; bylo však nezbytné, aby CVT-313 byl zaveden do karotidy v době, ve které dochází k poškození, aby se dosáhlo požadovaného účinku. Na rozdíl od toho bylo v rámci této přihlášky vynálezu prokázáno, že flavopiridol v případě, že je podán orálně, může potentně inhibovat neointimální tvorbu a to v míře, která je srovnatelná s mírou účinku ostatních relevantních klinických činidel. Tato orální účinnost flavopiridolu je mezi činidly, o kterých je známo, že jsou účinná ve zvířecích modelech vaskulárního poškození, výjimečná. Selektivita, potence a snadnost podání činí z flavopiridolu znamenitého kandidáta pro zkoumání terapeutických výsledků inhibice buněčného cyklu in vivo u humánních vaskulárnich lézí.
Bylo určeno podávat flavopiridol orálně v koncentraci, která je rovna (5 mg/kg) polovině koncentrace, která inhibuje nádorový růst u xenoroubů modelu cancer mouše. Je pozoruhodné, že flavopiridolové koncentrace 75 nmol/1 mají za následek téměř úplnou inhibici proliferace SMC, přičemž střední koncentrace v krevním séru rovné 425 nmol/1 byly dosaženy v dávkách, které leží pod prahem toxicity ve fázi I studií týkajících se léčení těžce léčitelných lidských karcinomů. Výsledky získané v rámci této přihlášky vedou k závěru, že při potlačení vaskulárnich onemocnění, mezi které patří restenózy, mohou být účinné mnohem nižší dávky inhibitorů buněčného cyklu, než jaké jsou dávky použité v rámci neoplasie, a při dosažení zvýšené tolerability.
I kdy se podařilo prokázat, že flavopiridol indukuje zastavení buněčného růstu bez ovlivnění životnosti buněk HASMC v buněčné kultuře a že dochází ke snížení neointimální tvorby po léčení flavopiridolem, nepodařilo se dosáhnout jistoty v tom, že zastavení buněčného cyklu je jediným faktorem omezujícím neointimální tvorbu u lézí karotidy. Flavopiridol je schopen indukovat zastavení buněčného růstu a to při současném indukování nebo bez současného indukování apoptózy a to v závislosti na pozorovaném typu buněk. Je zajímavé, inhibuje apoptózu u buněk PC12, které diferenciované a také indukuje že flavopiridol byly terminálně apoptózu u nediferenciovaných buněk PC12, kterém jsou proliferující. I když experimenty provedené v rámci této přihlášky vynálezu byly provedeny za podmínek, které by napodobovaly fenotyp SMC před poškozením, je možné, že SMC mohou mít odlišnou odezvu na flavopiridol po poškození a že u nich může dokonce dojít k apoptóze. Zatímco role apoptózy u vaskulárních lézí je nejasná, indukuje exprese ligandu Fas v SMC apoptózu a blokuje neointimální tvorbu u králíků po poškození způsobeném balónkovou angioplastií, což vede k závěru, že, jestliže flavopiridol skutečně indukuje apoptózu SMC in vivo, jako je tomu u proliferujících buněk PC12, potom může jít o užitečný jev v kontextu neointimální tvorby. I ostatní mechanismy mohou rovněž přispívat k účinkům flavopiridolu na tvorbu lézí. Tak například antimediátorová oligodeoxynukleotidem mediovaná inhibice buněčného cyklu zlepšuje endoteliální funkci u králičího žilního roubu. Za účelem objasnějí účinků flavopiridolu, odlišných od zastavení růstu buněk na SMC in vivo, bude ještě nezbytné realzovat další dplňující studie.
Vzhledem k demonstrované roli proliferace SMS při tvorbě lézí po poškození krysí karotidy je zajímavé úvést, že přes výrazné účinky flavopridolu in vitro, byla jeho schopnost inhibovat neointimální tvorbu (i když významná) skromnější pozorování nepravděpodobné, že by k docházelo po ukončení podávání v proliferačních indexech jsou trvalé v průběhu 14 dnů po poškození (Obr.7 a Obr.9). Je přijatelnějším vysvětlením že buď i další složky tvorby léze, jakými jsou SMC migrace a produkce extracelulární matrice, také přispívají k tvorbě léze a to dokonce i při absenci významné proliferace SMC, nebo že dodávka flavopiridolu jednou denně je nedostatečná za podmínek experimentů bylo zvažováno že by vivo. Pro vysvětlení. proliferaci toto
Je
SMS in několik urychlené flavopiridolu, neboť rozdíly k úplnému zastavení proliferace v uvedeném modelu. Nedávno zjištěné údaje ukazující, že biologický poločas f lavopiridolu činí pouze 2,5 hodiny vede k závěru, že pravděpodobně bude správnější spíše druhá z uvedených hypotéz. Provedením dalších studií bude možné zjistit pravděpodobně ještě účinnější dávkový režim.
Získané výsledky ukazují, že flavopiridol je schopen inhibovat proliferaci SMC a tudíž i neointimální tvorbu v obecně uznávaných malých zvířecích modelech vaskulárního onemocnění. Je třeba zdůraznit, že relevance inhibice proliferace SMC je diskutabilní u lidských vaskulárních lézí a může se lišit v závislosti na charakteru léze a na době, při které se provádí pozorování proliferace. Proliferační index SMC u humánních atheroktomických vzorků je pozoruhodně nízký, i když tyto vzorky nemusí odrážet proliferační změny v časnějších a kritičtějších stádiích rozvoje lézí. Kromě toho arteriální remodeling nezávislý na neointimálním růstu může být zodpovědný za významnou míru luminální obstrukce po angioplasti u lidí. Na rozdíl od toho, jsou indexy mitotické aktivity u SMC mnohem vyšší (25 % PCNA-pozitivních subjektů) v atheroktomických vzorcích lidských lézí s restenózou indukovanou zavedením stentů, což je konsistentní s přijatou rolí SMC hyperplasie, avšak nikoliv remodelingu. Vzhledem k tomu, že dochází k rostoucímu počtu aplikací stentů a tedy i k rostoucímu • ·
počtu klinických problémů souvisejících s restenózami po zavedení stentů, existuje potřeba mít k dispozici účinný prostředek k zastavení SMC hyperplasie a neointimální tvorby. Poněvadž flavopiridol je potentní orálně biodostupná účinná látka se specifickou Cdk-inhibiční účinnosti a poněvadž je známo, že dávky flavopiridolu jsou bezpečné pro lidské pacienty, může být flavopiridol považován za farmakologického kandidáta pro prevenci restenóz u lidí spojených se zavedením stentů.
Metody a výsledky
Při použití kultivovaných lidských buněk hladkého svalu aorty bylo zjištěno, že flavopiridol v koncentraci pouze 75 nmol/1 má za následek téměř úplnou inhibici proliferace indukovanou bazálním fibroplastovým růstovým faktorem a trombinem. Při uvedené dávce flavopiridol inhiboval aktivitu cyklin-dependentní kinázy, což bylo potvrzeno meřením histon fosforylace, avšak neměl vliv na aktivaci MA.P kinázy. Flavopiridolem byla rovněž blokována indukce proteinu cyklin Dx souvisejících s buněčným cyklem, jádrového antigenů proliferujících buněk a fosforylovaného retinablastomového proteinu. Flavopiridol neměl žádný účinek na životnost buněk. S cílem testovat, zda flavopiridol má obdobnou účinnost in vivo v případě, že je podáván orálně, byla zkoumána neointimální tvorba v krysích karotidách
Flavopiridol neointimální poškození.
po poškození balónkovou angioplastií. (5 mg/kg) podávaný v potravě redukoval oblast o 35 % a 39 % 7 resp. 14 dnů po
Závěry
Flavopiridol inhibuje SMS růst in vitro a in vivo. Jeho orální biodostupnost a selektivita pro cyklin-dependentní
kinázy z něj činí potenciální léčení SMC vaskulárnich lézí.
terapeutický nástroj při • ·· 44 44·· ·· • · · · 4 4 « 4 · ·4 • · · ♦ * ··· · ·* « « 444 4 4 444 ·4 • 44 4 · 4 4 4 44
999 99 99 99 99 9999 ?/ Ιΰΰΐ- Z Μ
Claims (4)
- PATENTOVÉNÁROKYPoužiti4-H-l-benzopyran-4-onového derivátu obecného vzorce I ve kterémRx znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až6 uhlíkových atomů, arylalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, alkylovouskupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů a substituovanou halogenem, hydroxy-skupinou nebo karboxy-skupinou, cykloalkylovou skupinu obsahující 3 až 6 uhlíkových atomů, pyridylovou skupinu, thienylovou skupinu, cykloalkylalkylovou skupinu, ve které cykloalkylový zbytek obsahuje 3 až 6 uhlíkových atomů a alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, alkenylovou skupinu obsahující 2 až 6 uhlíkových.atomů, alkynylovou skupinu obsahující 2 až 6 uhlíkových atomů, fenylovou skupinu, fenylovou skupinu mono- nebo polysubstituovanou halogenem, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkoxy-skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, hydroxylovou skupinou, karboxylovou skupi33
• • · • ·· • · • · 9» »· • · · • · ··· ·· * 9 • 9 99 9 9 9 9 • · · • · ·· ·♦ 9 9 9999 nou, C00-alkylovou skupinou, skupinou CONH2, CONH-alkylovou skupinou, CON (alkyl)2~ovou skupinou, nitro-skupinou, trifluormethylovou skupinou, aminovou skupinou, alkylamino-skupinou, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, dialkylamino-skupinou, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy nebo fenylovou skupinou, naftylovou skupinu, karboxylovou skupinu, skupinu -CHO, COO-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, primární amino-skupinu, alkylamino-skupinu, aralkylamino skupinu, dialkylamino-skupinu, amido-skupinu, arylamino-skupinu, diarylamino-skupinu nebo CH20-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy,R2 znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, arylovou skupinu, nitro-skupinu, amino-skupinu, dialkylaminovou skupinu, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, atom halogenu, hydroxylovou skupinu, alkoxy-skupinu, skupinu -COOH, -COO-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, skupinu -CHO, skupinu -CH2OH nebo -CH20-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy,R3 znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy a substituovanou halogenem, hydroxy-skupinou nebo karboxyskupinou, hydroxylovou skupinu, karboxylovou skupinu, nitro-skupinu, amino-skupinu, alkylamino-skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, dialkylamino-skupinu, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, atom halogenu, -O-alkyl-C(0)-alkylovou skupinu, skupinu -CHO, skupinu -CH2OH, -CH20-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo skupinu (R) 2N-C(0)-0-, ve které R znamená atom vodíku, φ ·· ·-· ·* ···· • · · · ··* · ·· · • # · ♦ · ··· ·· φ • · ··· ·· · · · · · alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových atomů, cykloalkylovou skupinu, -O-alkyl-C(0)-alkylovou skupinu nebo arylovou skupinu,R4 znamená atom vodíku, hydroxylovou skupinu, alkoxy-skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkanoyloxy-skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkoxykarbonylovou skupinu, ve které alkoxy-zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, aryloxy-skupinu, amino-skupinu, alkylamino-skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, di-alkylamino-skupinu, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo skupinu (R')2-N-C(0)-0-, ve které R' znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 6 uhlíkových aromů, cykloalkylovou skupinu nebo arylovou skupinu,R5 znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až6 uhlíkových atomů, arylalkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, cykloalkylovou skupinu obsahující 3 až 6 uhlíkových atomů, cykloalkylalkylovou skupinu, ve které cykloalkylový zbytek obsahuje 3 až 6 uhlíkových atomů a alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, alkylamino-skupinu, alkanoylovou skupinu obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, —C(0)-0-alkylovou skupinu, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo aroylovou skupinu, přičemž arylová skupina ve významech Rx, R2, R3, R4 a R5 znamená nesubstituovanou fenylovou skupinu nebo fenylovou skupinu, která je mono- nebo polysubstituovaná halogenem, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkoxy-skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, hydroxylovou skupinou, karboxylovou skupinou, C00-alkylovou skupinou, skupinou CONH2, CONH-alkylovou skupinou, CON(alkyl)2ovou skupinou, nitro-skupinou, trifluormethylovou skupinou, amino-skupinou, alkylamino-skupinou, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, di-alkylamino-skupinou, ve které každý • φφ Η »φ ···· • φφφ · · ··»·· • · · · · φφφ · «* • · · · · · φ a a · φφφ φφ φφ *· ·* φφ·φ alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo fenylovou skupinou, m znamená celé číslo 0 až 3 a n znamená 1, nebo jeho farmakologicky přijatelné adiční soli s kyselinou pro výrobu léčiva určeného pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárních lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poškození balónkovou angioplastií a pro léčení pacientů po implantaci stentů. - 2. Použití 4-H-l-benzopyran-4-onového derivátu obecného vzorce Ia „ ve kterémRx znamená atom vodíku, alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 uhlíkové atomy, naftylovou skupinu, fenylovou skupinu, fenylovou skupinu mono- nebo polysubstituovanou halogenem, alkylovou skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, alkoxy-skupinou obsahující 1 až 4 uhlíkové atomy, hydroxylovou skupinou, karboxylovou skupinou, C00alkylovou skupinou, skupinou CONH2, CONH-alkylovou skupinou, CON (alkyl)2ovou skupinou, nitro-skupinou, trifluormethylovou skupinou, amino-skupinou, alkylaminovou
• H 99 99 9* 99 • · 9 9 • 9 • 9 • 9 9 • 9 • 9 9 «·· 9 • 9 9 e * • 9 9 • 9 9 • • 99 9 re 99 • 9 • 9 999 9 skupinou, ve které alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, di-alkylaminovou skupinou, ve které každý alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo fenylovou skupinou, pyridylovou skupinu nebo thienylovou skupinu,R2 znamená atom vodíku nebo alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 uhlíkové atomy, aR5 znamená alkylovou skupinu obsahující 1 až 3 uhlíkové atomy, cykloalkylovou skupinu obsahující 3 až 5 uhlíkových atomů nebo cykloalkylalkylovou skupinu, ve které cykloalkylový zbytek obsahuje 3 až 5 uhlíkových atomů a alkylový zbytek obsahuje 1 až 4 uhlíkové atomy, nebo jeho farmakologicky přijatelné adiční soli s kyselinou pro výrobu léčiva určeného pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárních lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poškození balónkovou angioplastií a pro léčení pacientů po implantaci stentů. - 3. Použití 4-H-l-benzopyran-4-onového derivátu obecného vzorce Ia, ve kterémRx znamená fenylovou skupinu, thienylovou skupinu, pyridylovou skupinu, chlorfenylovou skupinu, dichlorfenylovou skupinu, methylfenylovou skupinu, aminofenylovou skupinu, bromfenylovou skupinu, hydroxyfenylovou skupinu nebo naftylovou skupinu,R2 znamená atom vodíku aR3 znamená methylovou skupinu, nebo jeho farmakologicky přijatelné adiční soli s kyselinou pro výrobu léčiva určeného pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárních lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poškození balónkovou angioplastií a pro léčení pacientů po implantaci stentů.
* V ♦ · ·· ·* • ♦ 9 ♦ » • « 9 • • · • • • • • i • % • « · • * * • · • · ♦ ♦ • · » · - 4. Použiti (-)-cis-5,7-dihydroxy-2-) (2-chlorfenyl)-8-[ 4(3-hydroxy-l-methyl)-piperidinyl] -4H-benzopyran-4-onu pro výrobu léčiva určeného pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárních lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poškození balónkovou angioplastií a pro léčení pacientů po implantaci stentů.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US24338099A | 1999-02-01 | 1999-02-01 | |
| US09/468,665 US6399633B1 (en) | 1999-02-01 | 1999-12-21 | Use of 4-H-1-benzopryan-4-one derivatives as inhibitors of smooth muscle cell proliferation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20012804A3 true CZ20012804A3 (cs) | 2002-08-14 |
| CZ300395B6 CZ300395B6 (cs) | 2009-05-06 |
Family
ID=22918541
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20012804A CZ300395B6 (cs) | 1999-02-01 | 2000-01-18 | Lécivo pro inhibici proliferace bunek hladkých svalu, pro lécení vaskulárních lézí bunkami bohatých hladkých svalu, pro lécení lézí po poškození balónkovou angioplastikou a pro lécení pacientu po implantaci stentu |
Country Status (38)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6399633B1 (cs) |
| EP (1) | EP1150746B1 (cs) |
| JP (1) | JP4755759B2 (cs) |
| KR (1) | KR100793047B1 (cs) |
| CN (1) | CN1219556C (cs) |
| AP (1) | AP1469A (cs) |
| AR (1) | AR042569A1 (cs) |
| AT (1) | ATE275428T1 (cs) |
| AU (1) | AU777368B2 (cs) |
| BG (1) | BG65151B1 (cs) |
| BR (1) | BR0007911A (cs) |
| CA (1) | CA2360668C (cs) |
| CR (1) | CR6448A (cs) |
| CZ (1) | CZ300395B6 (cs) |
| DE (1) | DE60013555T2 (cs) |
| DK (1) | DK1150746T3 (cs) |
| EA (1) | EA004786B1 (cs) |
| EE (1) | EE04851B1 (cs) |
| ES (1) | ES2226792T3 (cs) |
| HK (1) | HK1042445B (cs) |
| HR (1) | HRP20010521A2 (cs) |
| HU (1) | HU229263B1 (cs) |
| ID (1) | ID30180A (cs) |
| IL (1) | IL144668A (cs) |
| ME (1) | MEP10508A (cs) |
| NO (1) | NO330512B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ512822A (cs) |
| OA (1) | OA11755A (cs) |
| PL (1) | PL197693B1 (cs) |
| PT (1) | PT1150746E (cs) |
| RS (1) | RS50242B (cs) |
| SI (1) | SI1150746T1 (cs) |
| SK (1) | SK286747B6 (cs) |
| TR (1) | TR200102223T2 (cs) |
| TW (1) | TWI273907B (cs) |
| UA (1) | UA73110C2 (cs) |
| WO (1) | WO2000044362A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA200105596B (cs) |
Families Citing this family (58)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0102480D0 (en) * | 2001-01-31 | 2001-03-14 | Cyclacel Ltd | Marker |
| PL211300B1 (pl) * | 2002-04-17 | 2012-05-31 | Cytokinetics Inc | Związek i kompozycja zawierająca ten związek |
| US7132100B2 (en) | 2002-06-14 | 2006-11-07 | Medimmune, Inc. | Stabilized liquid anti-RSV antibody formulations |
| US7425618B2 (en) | 2002-06-14 | 2008-09-16 | Medimmune, Inc. | Stabilized anti-respiratory syncytial virus (RSV) antibody formulations |
| US20040106647A1 (en) * | 2002-06-28 | 2004-06-03 | Schneider Michael D. | Modulators of Cdk9 as a therapeutic target in cardiac hypertrophy |
| US20040082613A1 (en) * | 2002-06-28 | 2004-04-29 | Schneider Michael D. | Modulators of Cdk9 as a therapeutic target in cardiac hypertrophy |
| EP1539234A4 (en) * | 2002-09-05 | 2006-02-15 | Medimmune Inc | METHODS OF PREVENTING OR TREATING CELLULAR MALIGNITES BY ADMINISTERING CD2 ANTAGONISTS |
| US8034831B2 (en) | 2002-11-06 | 2011-10-11 | Celgene Corporation | Methods for the treatment and management of myeloproliferative diseases using 4-(amino)-2-(2,6-Dioxo(3-piperidyl)-isoindoline-1,3-dione in combination with other therapies |
| US7563810B2 (en) | 2002-11-06 | 2009-07-21 | Celgene Corporation | Methods of using 3-(4-amino-1-oxo-1,3-dihydroisoindol-2-yl)-piperidine-2,6-dione for the treatment and management of myeloproliferative diseases |
| EP2316487B1 (en) | 2003-04-11 | 2014-06-11 | MedImmune, LLC | Recombinant IL-9 antibodies & uses thereof |
| JP4934426B2 (ja) | 2003-08-18 | 2012-05-16 | メディミューン，エルエルシー | 抗体のヒト化 |
| US20060228350A1 (en) * | 2003-08-18 | 2006-10-12 | Medimmune, Inc. | Framework-shuffling of antibodies |
| EP2422811A2 (en) | 2004-10-27 | 2012-02-29 | MedImmune, LLC | Modulation of antibody specificity by tailoring the affinity to cognate antigens |
| JP5153613B2 (ja) | 2005-03-18 | 2013-02-27 | メディミューン，エルエルシー | 抗体のフレームワーク・シャッフル |
| KR20080025174A (ko) | 2005-06-23 | 2008-03-19 | 메디뮨 인코포레이티드 | 응집 및 단편화 프로파일이 최적화된 항체 제제 |
| WO2007010342A1 (en) * | 2005-07-15 | 2007-01-25 | Sahajanand Biotech Private Limited | Implantable medical devices comprising a flavonoid or derivative thereof for prevention of restenosis |
| JP2008255008A (ja) * | 2005-07-19 | 2008-10-23 | Tokyo Medical & Dental Univ | 滑膜細胞増殖抑制剤 |
| NZ566180A (en) * | 2005-07-29 | 2011-04-29 | Resverlogix Corp | Pharmaceutical compositions for the prevention and treatment of complex diseases and their delivery by insertable medical devices |
| JP5209625B2 (ja) | 2006-08-28 | 2013-06-12 | 協和発酵キリン株式会社 | アンタゴニストのヒトｌｉｇｈｔ特異的ヒトモノクローナル抗体 |
| PL2118074T3 (pl) | 2007-02-01 | 2014-06-30 | Resverlogix Corp | Związki chemiczne do celów profilaktyki i leczenia chorób układu sercowo-naczyniowego |
| AU2008232902B2 (en) | 2007-03-30 | 2013-10-03 | Medlmmune, Llc | Antibody formulation |
| ES2532402T3 (es) | 2008-06-26 | 2015-03-26 | Resverlogix Corporation | Métodos de preparación de derivados de quinazolinona |
| ES2542835T3 (es) | 2009-01-08 | 2015-08-12 | Resverlogix Corporation | Compuestos para la prevención y el tratamiento de enfermedades cardiovasculares |
| EP2408454A2 (en) | 2009-03-18 | 2012-01-25 | Resverlogix Corp. | Novel anti-inflammatory agents |
| JP5813626B2 (ja) | 2009-04-22 | 2015-11-17 | レスバーロジックス コーポレイション | 新規抗炎症剤 |
| US20130225530A1 (en) | 2010-07-12 | 2013-08-29 | Dkfz Deutsches Krebsforschungszentrum | Wogonin for the prevention and therapy of cardiac hypertrophy |
| DK2668210T3 (da) | 2011-01-26 | 2020-08-24 | Celldex Therapeutics Inc | Anti-kit antistoffer og anvendelser deraf |
| KR102011641B1 (ko) | 2011-11-01 | 2019-08-19 | 리스버로직스 코퍼레이션 | 치환된 퀴나졸리논을 위한 경구 즉시 방출 제형 |
| CN116574185A (zh) | 2012-07-25 | 2023-08-11 | 塞尔德克斯医疗公司 | 抗kit抗体及其用途 |
| CA2887129A1 (en) | 2012-10-09 | 2014-04-17 | Igenica, Inc. | Anti-c16orf54 antibodies and methods of use thereof |
| WO2014080290A2 (en) | 2012-11-21 | 2014-05-30 | Rvx Therapeutics Inc. | Cyclic amines as bromodomain inhibitors |
| US9765039B2 (en) | 2012-11-21 | 2017-09-19 | Zenith Epigenetics Ltd. | Biaryl derivatives as bromodomain inhibitors |
| MX2015007921A (es) | 2012-12-21 | 2016-03-03 | Zenith Epigenetics Corp | Compuestos heterociclicos novedosos como inhibidores de bromodominio. |
| SG11201509982UA (cs) | 2013-06-06 | 2016-04-28 | Igenica Biotherapeutics Inc | |
| DK3041507T3 (da) | 2013-08-26 | 2021-07-26 | Biontech Res And Development Inc | Nukleinsyrer, der koder for humane antistoffer mod sialyl-lewis a |
| GB201403775D0 (en) | 2014-03-04 | 2014-04-16 | Kymab Ltd | Antibodies, uses & methods |
| KR102614642B1 (ko) | 2014-06-04 | 2023-12-19 | 바이오엔테크 리서치 앤드 디벨롭먼트 인코포레이티드 | 강글리오사이드 ｇｄ２에 대한 사람 단클론 항체 |
| PT3333191T (pt) | 2014-12-11 | 2020-12-15 | Pf Medicament | Anticorpos anti-c10orf54 e suas utilizações |
| BR112017015880A2 (pt) | 2015-03-03 | 2018-07-31 | Kymab Ltd | anticorpos, usos e métodos |
| JO3789B1 (ar) | 2015-03-13 | 2021-01-31 | Resverlogix Corp | التراكيب والوسائل العلاجية المعتمدة لمعالجة الامراض المتعلقة بالمتممة |
| RU2717829C2 (ru) | 2015-04-20 | 2020-03-26 | Толеро Фармасьютикалз, Инк. | Прогнозирование ответа на альвоцидиб с помощью анализа профиля митохондрий |
| TR201911032T4 (tr) | 2015-05-18 | 2019-08-21 | Tolero Pharmaceuticals Inc | Artırılmış biyoyararlanıma sahip alvocıdıb ön ilaçları. |
| JP7083497B2 (ja) | 2015-08-03 | 2022-06-13 | スミトモ ファーマ オンコロジー， インコーポレイテッド | がんの処置のための併用療法 |
| EP3909983A1 (en) | 2015-12-02 | 2021-11-17 | STCube & Co. Inc. | Antibodies and molecules that immunospecifically bind to btn1a1 and the therapeutic uses thereof |
| KR20180100122A (ko) | 2015-12-02 | 2018-09-07 | 주식회사 에스티사이언스 | 당화된 btla(b- 및 t-림프구 약화인자)에 특이적인 항체 |
| CN109803684B (zh) | 2016-08-23 | 2022-08-23 | 卫材 R&D 管理有限公司 | 用于治疗肝细胞癌的组合疗法 |
| EP3534947A1 (en) | 2016-11-03 | 2019-09-11 | Kymab Limited | Antibodies, combinations comprising antibodies, biomarkers, uses & methods |
| US11279694B2 (en) | 2016-11-18 | 2022-03-22 | Sumitomo Dainippon Pharma Oncology, Inc. | Alvocidib prodrugs and their use as protein kinase inhibitors |
| EP4218820A3 (en) | 2017-03-16 | 2023-09-20 | Eisai R&D Management Co., Ltd. | Combination therapies for the treatment of breast cancer |
| CN111051346A (zh) | 2017-05-31 | 2020-04-21 | 斯特库伯株式会社 | 使用免疫特异性结合btn1a1的抗体和分子治疗癌症的方法 |
| KR20200015602A (ko) | 2017-05-31 | 2020-02-12 | 주식회사 에스티큐브앤컴퍼니 | Btn1a1에 면역특이적으로 결합하는 항체 및 분자 및 이의 치료적 용도 |
| EP3635007A1 (en) | 2017-06-06 | 2020-04-15 | STCube & Co., Inc. | Methods of treating cancer using antibodies and molecules that bind to btn1a1 or btn1a1-ligands |
| WO2019055579A1 (en) | 2017-09-12 | 2019-03-21 | Tolero Pharmaceuticals, Inc. | TREATMENT REGIME FOR CANCERS THAT ARE INSENSITIVE TO BCL-2 INHIBITORS USING THE MCL-1 ALVOCIDIB INHIBITOR |
| US11707522B2 (en) | 2017-10-13 | 2023-07-25 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Human antibodies to Tn antigen |
| EP3824287A1 (en) | 2018-07-20 | 2021-05-26 | Pierre Fabre Médicament | Receptor for vista |
| KR20210099066A (ko) | 2018-12-04 | 2021-08-11 | 스미토모 다이니폰 파마 온콜로지, 인크. | 암의 치료를 위한 작용제로서 사용하기 위한 cdk9 억제제 및 그의 다형체 |
| US11793802B2 (en) | 2019-03-20 | 2023-10-24 | Sumitomo Pharma Oncology, Inc. | Treatment of acute myeloid leukemia (AML) with venetoclax failure |
| CN113559244B (zh) * | 2021-08-02 | 2023-12-26 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | Ctrp13脂肪因子的新用途 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IN164232B (cs) * | 1986-04-11 | 1989-02-04 | Hoechst India | |
| US5284856A (en) * | 1988-10-28 | 1994-02-08 | Hoechst Aktiengesellschaft | Oncogene-encoded kinases inhibition using 4-H-1-benzopyran-4-one derivatives |
| US5733920A (en) | 1995-10-31 | 1998-03-31 | Mitotix, Inc. | Inhibitors of cyclin dependent kinases |
| US5849733A (en) | 1996-05-10 | 1998-12-15 | Bristol-Myers Squibb Co. | 2-thio or 2-oxo flavopiridol analogs |
| US5908934A (en) | 1996-09-26 | 1999-06-01 | Bristol-Myers Squibb Company | Process for the preparation of chiral ketone intermediates useful for the preparation of flavopiridol and analogs |
| ES2301194T3 (es) | 1997-02-05 | 2008-06-16 | Warner-Lambert Company Llc | Pirido 2,3-d pirimidinas y 4-aminopirimidinas como inhibidores de la proliferacion celular. |
-
1999
- 1999-12-21 US US09/468,665 patent/US6399633B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-01-18 EA EA200100742A patent/EA004786B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 AP APAP/P/2001/002218A patent/AP1469A/en active
- 2000-01-18 RS YU54401A patent/RS50242B/sr unknown
- 2000-01-18 NZ NZ512822A patent/NZ512822A/en not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 AU AU32098/00A patent/AU777368B2/en not_active Ceased
- 2000-01-18 DE DE60013555T patent/DE60013555T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-18 PL PL350735A patent/PL197693B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 TR TR2001/02223T patent/TR200102223T2/xx unknown
- 2000-01-18 ES ES00909918T patent/ES2226792T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-18 CZ CZ20012804A patent/CZ300395B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 EE EEP200100385A patent/EE04851B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 IL IL14466800A patent/IL144668A/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 BR BR0007911-1A patent/BR0007911A/pt not_active Application Discontinuation
- 2000-01-18 AT AT00909918T patent/ATE275428T1/de active
- 2000-01-18 UA UA2001075481A patent/UA73110C2/uk unknown
- 2000-01-18 WO PCT/US2000/001104 patent/WO2000044362A2/en active IP Right Grant
- 2000-01-18 CA CA002360668A patent/CA2360668C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-18 SK SK1086-2001A patent/SK286747B6/sk not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 HU HU0200804A patent/HU229263B1/hu not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 EP EP00909918A patent/EP1150746B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-18 SI SI200030517T patent/SI1150746T1/xx unknown
- 2000-01-18 JP JP2000595666A patent/JP4755759B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-18 OA OA1200100196A patent/OA11755A/en unknown
- 2000-01-18 ID IDW00200101696A patent/ID30180A/id unknown
- 2000-01-18 PT PT00909918T patent/PT1150746E/pt unknown
- 2000-01-18 ME MEP-105/08A patent/MEP10508A/xx unknown
- 2000-01-18 KR KR1020017009716A patent/KR100793047B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 DK DK00909918T patent/DK1150746T3/da active
- 2000-01-18 CN CNB008032513A patent/CN1219556C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-25 TW TW089101215A patent/TWI273907B/zh not_active IP Right Cessation
- 2000-02-01 AR ARP000100420A patent/AR042569A1/es not_active Application Discontinuation
-
2001
- 2001-07-05 NO NO20013335A patent/NO330512B1/no not_active IP Right Cessation
- 2001-07-06 ZA ZA200105596A patent/ZA200105596B/en unknown
- 2001-07-11 HR HR20010521A patent/HRP20010521A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2001-07-27 BG BG105751A patent/BG65151B1/bg unknown
- 2001-08-23 CR CR6448A patent/CR6448A/es not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-05-31 HK HK02104062.3A patent/HK1042445B/zh not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ20012804A3 (cs) | Léčivo pro inhibici proliferace buněk hladkých svalů, pro léčení vaskulárních lézí buňkami bohatých hladkých svalů, pro léčení lézí po poąkození balónkovou angioplastií a pro léčené pacientů po implantaci stentů | |
| CA2207333C (en) | Use of nebivolol as an anti-atherogenic | |
| JP2004500356A (ja) | 医薬品製造におけるヒメニアルディシンまたはその誘導体の使用 | |
| Premkumar et al. | Synergistic interaction between 17‐AAG and phosphatidylinositol 3‐kinase inhibition in human malignant glioma cells | |
| KR101201956B1 (ko) | 파카스트리사민을 유효성분으로 함유하는 과증식성 피부질환과 악성흑색종의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 | |
| WO2001021166A1 (en) | Treatment and prevention of hepatic disorders | |
| US20200155537A1 (en) | Pharmaceutical composition containing dusp1 inhibitor | |
| KR102191405B1 (ko) | 간 질환 예방 또는 치료용 조성물 | |
| KR101093930B1 (ko) | 스코파론의 신규 용도 | |
| CA2401016A1 (en) | Scytonemin and methods of using thereof | |
| US20040048845A1 (en) | Pharmaceutical compositions and methods for preventing skin tumor formation and causing regression of existing tumors | |
| WO2017069376A1 (ko) | ＩＫＫε 억제제를 함유하는 염증질환의 치료용 조성물 | |
| US20060241178A1 (en) | Compositions and methods for treating lung cancer | |
| MXPA01007278A (en) | The use of 4-h-1-benzopyran-4-one derivatives as inhibitors of smooth muscle cell proliferation | |
| US20110201618A1 (en) | Kmups inhibiting proliferation and obliteration of pulmonary artery | |
| US20130095059A1 (en) | Inhaled no donor kmups derivative preventing allergic pulmonary vascular and bronchial inflammation via suppressed cytokines, inos and inflammatory cell counts in asthma model | |
| Shapiro | Small molecule inhibitors of cyclin-dependent kinases | |
| Auricchio et al. | Therapeutic Trial of Metformin and Bortezomib in a Mouse Model of Tuberous |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20140118 |