JP2003508489A

JP2003508489A - 創傷治癒の増進

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Publication number: JP2003508489A
Application number: JP2001521322A
Authority: JP
Inventors: パインズ，マーク; ブロダブスキ，イスラエル; ナグラー，アーノン
Original assignee: ハダジツト・メデイカル・リサーチ・サービシズ・アンド・デベロツプメント・カンパニー・リミテツド
Priority date: 1999-09-09
Filing date: 1999-09-09
Publication date: 2003-03-04
Also published as: AU764435B2; EP1210086A1; WO2001017531A1; DE69934336D1; HUP0300845A2; DE69934336T2; EP1210086B1; US20060293351A1; IL148246A0; CA2384331A1; EP1210086A4; AU5299599A; CA2384331C

Abstract

(57)【要約】創傷治癒のプロモーターおよび特にその領域における外科的介入もしくは感染後の尿道狭窄形成のインヒビター。具体的には、本発明のもっとも好適な化合物、ハロフギノンは、そのような外傷後の尿道の管腔内にコラーゲン蓄積が生じるのを防ぎ、それによって尿道狭窄形成を抑制するために使用することができる。また、ハロフギノン、および関連化合物は、外傷後、例えば外科処置後の創傷治癒の増進のために有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野および背景本発明は、創傷治癒の増進のための組成物および方法、ならびに加えて、狭窄
、例えば尿道狭窄の形成の予防のための組成物および方法に関する。

【０００２】創傷治癒は、細胞、細胞外基質（ＥＣＭ）成分および細胞の微環境のような因
子を伴う複雑な過程である。本質的に、すべての創傷治癒は、損傷組織の修復ま
たは置換を伴う。すべてそのような過程は、ある種の基本成分を必要とするけれ
ども、そのような修復または置換の厳密な性質は関与する組織に依存する。これ
らの成分、皮膚の（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、または皮膚（ｓｋｉｎ）を具体的に
説明するためには、創傷治癒が述べられ、そしてまた、議論はすべての種類の創
傷修復にまで及ぶと理解される。

【０００３】皮膚は、３層、ケラチン、表皮および真皮をもつ。もっとも小さい損傷におけ
るように、表皮のみが損傷される場合は、ケラチン細胞が傷の縁から移動し、そ
して最後にはそれを覆って表皮およびケラチンを再生する［Ｄ．Ｒ．Ｋｎｉｇｈ
ｔｏｎａｎｄＶ．Ｄ．Ｆｉｅｇｅｌ，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．，Ｖｏ
ｌ２６，ｐ．６０４−６１１，１９９１］。したがって、瘢痕形成のリスクは
、そのような小さい損傷については比較的低い。

【０００４】全３種の皮膚層が損傷または破壊される場合は、肉芽組織と呼ばれる新しい結
合組織が、最初に創傷間隙を満たさねばならない。この組織は、創傷間隙中に移
動する繊維芽細胞によるＥＣＭ成分の蓄積によって形成される［Ｄ．Ｒ．Ｋｎｉ
ｇｈｔｏｎａｎｄＶ．Ｄ．Ｆｉｅｇｅｌ，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｒａｄｉｏｌ．，
Ｖｏｌ２６，ｐ．６０４−６１１，１９９１］。肉芽組織の形成は、明らかに
重要な保護メカニズムであるけれども、また、そのような組織の形成は瘢痕の形
成をもたらすことがある。ＥＣＭ成分、例えばコラーゲンの生産は、特に瘢痕形
成に結びつけられてきた。皮膚上の瘢痕は、美容整形上および機能上の両問題で
もある。例えば、重い火傷の後の瘢痕形成は、関節の運動を制約する。他の種類
の組織、例えば細菌感染後の肺、または外科処置後の多くの器官組織における瘢
痕形成は、極度に危険であることがある。器官組織内の瘢痕がそのように危険で
ある１つの理由は、瘢痕が本来の器官組織の機能を再回復せず、その結果、創傷
の治癒が、器官の性能および機能の完全な回復をもたらさないことである。

【０００５】病理学的および潜在的に臨床的な両損傷である瘢痕形成の１つの例は、狭窄の
形成であり、これは、瘢痕組織の不柔順な部分による生物学的な通路の縮小を特
徴とする共通の臨床症状である。そのような狭窄の１つの例は尿道狭窄である。
そのような瘢痕組織は、典型的には傷害への反応として起こり、尿道の機械使用
およびカテーテル導入の結果；外傷の結果；または特にＮ．ゴノルレア（Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｅａ）のような微生物によって引き起こされた場合の尿道炎の結果
として、元来自然発生的な病的状態である。狭窄による尿道の閉鎖は、放尿の躊
躇、尿道流の弱化、中断および不完全な尿排泄感のような症候をもたらす。その
上、そのような閉鎖は、膀胱、尿管および腎臓への損傷をもたらすこともある。

【０００６】もっとも普通の処置、外科的拡張は、通路への傷害および瘢痕組織生成を伴う
こともあり、これらが、順に、管腔の遮断および処置の失敗を惹起するので、狭
窄は、一般に治癒または軽減することすら困難である。もっとも成功した処置、
通路の開口外科処置は、複雑であり、特殊な訓練を要する。したがって、現在利
用できる処置は、一般に、狭窄を治癒することが不可能である。

【０００７】特に、外科処置または外傷後のそのような狭窄の出現に関して、狭窄の病因が
与えられた場合には、過剰なコラーゲン合成によって惹起される繊維形成を必然
的に起すことが示唆された。例えば、尿道狭窄瘢痕形成において、コラーゲンＩ
型の含量は増加することが分かっており、一方、コラーゲンＩＩＩ型は減少した
（Ｂａｓｋｉｎｅｔａｌ．，Ｊ．Ｕｒｏｌ．，１５７：３７１，１９９７）
。さらにまた、そのような狭窄から採取された生検は密なコラーゲンを示した（
ＳｉｎｇｈａｎｄＳｃｏｔｔ，Ｂｒ．Ｊ．Ｕｒｏｌ．，４７：８７１，１９
７５）。かくして、明白に、コラーゲン、特にＩ型コラーゲンは、狭窄形成の病
理における重要な因子である。

【０００８】しかしながら、ＥＣＭ成分、例えばコラーゲンの蓄積は、また、創傷の治癒の
ためにも重要であると今日では信じられている。事実、先行技術は、治癒しつつ
ある傷の強度は、最後にはコラーゲン蓄積に依存することを示している［Ｈａｕ
ｋｉｐｕｒｏ，Ｋ．，ｅｔａｌ．，Ａｎｎ．Ｓｕｒｇ．，Ｖｏｌ．２１３，ｐ
．７５−８０，１９９１］。かくして、先行技術によれば、コラーゲン蓄積は、
治癒しつつある傷の強度および支持を与えるのに十分なレベルにおいて存在しな
ければならないが、瘢痕形成を惹起するような高いレベルでは存在してはならな
い。コラーゲン蓄積が妨げられた場合は、耐久性の瘢痕は形成されないであろ
う。したがって、これらの病理過程は、少なくとも一部は、過剰なコラーゲンの
合成によって惹起される。さらにまた、他の臨床症状、例えば繊維症におけるコ
ラーゲンの極めて重要な役割が、その蓄積を抑制する薬物を開発する試みを促進
した［Ｋ．Ｉ．Ｋｉｖｉｒｉｋｋｏ，ＡｎｎａｌｓｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，
Ｖｏｌ．２５，ｐｐ．１１３−１２６（１９９３）］。

【０００９】そのような薬物は、プロコラーゲンポリペプチド鎖の合成を変えることによっ
て、または特異的な翻訳後の進行を阻害することによって作用することができ、
これらは、細胞外コラーゲン繊維の形成低下や、または変化した性質をもつ繊維
の蓄積をもたらすであろう。不幸にも、支持組織の強度や種々の障害のその環境
におけるこのタンパク質の重要性にもかかわらず、コラーゲン合成および蓄積の
インヒビターはわずか数種しか利用することができない。さらにまた、多くの利
用できるインヒビターは、コラーゲンの代謝経路に対する特異性を欠如している
。かくして、多数の今日利用できる薬物は有害な副作用をもつ。

【００１０】例えば、細胞毒性薬物が、コラーゲン生産繊維芽細胞の増殖を緩和する試みに
おいて試験された［Ｊ．Ａ．Ｃａｓａｓ，ｅｔａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｈｅｍ．Ｄ
ｉｓ．，Ｖｏｌ．４６，ｐ．７６３（１９８７）］、例えばコルヒチン、これは
細胞外基質中へのコラーゲン分泌を緩和する［Ｄ．Ｋｅｒｓｈｅｎｏｂｉｃｈ，
ｅｔａｌ．，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｏｌ．３１８，ｐ．１７０９（１
９８８）］。他の薬物は、鍵となるコラーゲン代謝酵素のインヒビターとして作
用する［Ｋ．Ｋａｒｖｏｎｅｎ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，Ｖ
ｏｌ．２６５，ｐ．８４１４（１９９０）；Ｃ．Ｊ．Ｃｕｎｌｉｆｆｅ，ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，Ｖｏｌ．３５，ｐ．２６５２（１９９２）］
。しかしながら、これらのインヒビターのいずれも、特定の種類のコラーゲンの
代謝および蓄積について特異的効果をもたない。また、これらの薬物は、他の生
死にかかわるコラーゲン性分子、例えば古典的な補体経路におけるＣｌｑ、神経
筋肉連結端板のアセチルコリンエステラーゼ、コングルチニンおよび肺の表面活
性物質アポタンパク質の生合成を妨げる。そのような干渉および特異性の欠如は
、潜在的に深刻な逆効果をもつことがある。

【００１１】コラーゲン合成を抑制できる他の薬物、例えばニフェジピンおよびフェニトイ
ンは、同様に他のタンパク質の合成も抑制するので、コラーゲン生合成経路を非
特異的に遮断する［Ｔ．Ｓａｌｏ，ｅｔａｌ．，Ｊ．ＯｒａｌＰａｔｈｏｌ
．Ｍｅｄ．，ｖｏｌ．１９，ｐ．４０４（１９９０）］。タンパク質合成の非特
異的抑制は、薬物が患者に投与された場合に悪い副作用をもたらすので、特異性
の欠如は、これらの薬物の臨床的使用を明らかに低下させる。かくして、それが
毒性の副作用を惹起するのに十分非特異的である場合は、狭窄形成を単純に防ぐ
ことだけでは、化合物を有用なものにはしない。

【００１２】事実また、コラーゲン架橋のインヒビター、例えばβ−アミノ−プロピオニト
リルを含む臨床的に利用できる抗繊維形成薬物は非特異的である。不幸にも、こ
れらのコラーゲン架橋インヒビターの特異性の欠如は、最後には、長期使用後に
重篤な副作用をもたらす。これらの副作用は、ラスリティック（ｌａｔｈｒｉｔ
ｉｃ）症候群ならびに弾力性生成（ｅｌａｓｔｏｇｅｎｅｓｉｓ）の破壊を含む
。後者の副作用は、エラスチン、その他の繊維結合組織タンパク質の架橋の破壊
の結果である。さらに、これらの薬物のコラーゲン架橋抑制効果は２次的であり
、それ故、コラーゲンは、コラゲナーゼによる分解前に先ず過剰生産されるに違
いない。かくして、コラーゲンの合成の型−特異的インヒビターそれ自体が明ら
かに要求される。

【００１３】そのような型−特異的コラーゲン合成インヒビターは、極端に高レベルのコク
シジウム剤ハロフギノン（Ｈａｌｏｆｕｇｉｎｏｎｅ）を飼料添加されたニワト
リを観察することによって発見された。これらのニワトリは、コラーゲン合成の
抑制によって惹起される、皮膚裂離の増強によって立証されるように、もろい、
弱められた皮膚をもつことが見い出された［Ｇｒａｎｏｔ，Ｉ．ｅｔａｌ．，
ＰｏｕｌｔｒｙＳｃｉ．，Ｖｏｌ．７０，ｐ．１５５９−１５６３，１９９１
］。ハロフギノンおよび関連化合物は、ある種の繊維症状、例えば強皮症および
移植片対宿主疾患の治療に関して米国特許第５，４４９，６７８号において開示
されている。これらの症状は両方とも過剰なコラーゲン蓄積に関連していて、こ
れはハロフギノンによって抑制することができる。この特定のインヒビターは、
式：

【００１４】

【化８】

【００１５】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；Ｒ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；ｎは、１もしくは２のいずれかである］の製薬学的に活性な化合物および製薬学的に許容しうるそれらの塩の製薬学的有
効量を含む組成物である。この群の化合物のうち、ハロフギノンは、そのような
治療のために特に効果があることが見い出された。

【００１６】ＰＣＴ特許出願ＷＯ９６／０６６１６は、さらに、これらの化合物は、血管平
滑筋細胞の増殖を妨げることによって再狭窄（ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ）を有効に
治療するできることを開示している。再狭窄は、血管傷害に応答して影響を受け
た血管の管腔内の平滑筋細胞増殖および細胞外基質蓄積を特徴とする［Ｃｈｏｉ
ｅｔａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｓｕｒｇ．，Ｖｏｌ．１３０，ｐ．２５７−２６１
（１９９５）］。そのような平滑筋細胞増殖の１つの目立つ特質は、正常な収縮
性表現型から接合（ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ）表現型までの表現型の変化である。Ｉ
型コラーゲンは、ハロフギノンによってブロックできるそのような表現型の変化
を支持することが分かった［Ｃｈｏｉｅｔａｌ．，Ａｒｃｈ．Ｓｕｒｇ．，
Ｖｏｌ．１３０，ｐ．２５７−２６１（１９９５）；ＰＣＴ特許出願ＷＯ９６／
０６６１６］。かくして、ハロフギノンは、Ｉ型コラーゲンの合成をブロックす
ることによって血管傷害後の平滑筋細胞のそのような異常な再分化を防ぐことが
できる。

【００１７】しかしながら、これらの研究されたモデルのどれも、多くの理由について創傷
治癒の増進または瘢痕の形成の予防におけるハロフギノンの作用を十分に予測し
ていない。

【００１８】第１に、先行技術は、前記のように、ハロフギノンの使用に対して創傷治癒を
増進することを教え、先行技術は、コラーゲンが創傷治癒には必要であることを
教えている。先行技術によれば、コラーゲンは、傷の強度には特に必要である。
かくして、瘢痕形成を低下させるかまたは防ぐためのハロフギノンのいずれかの
使用は、傷の治癒もまた妨げることが予想されるであろう。

【００１９】第２に、ハロフギノンまたは関連化合物による創傷治癒の増進は、先行技術に
よって教えられることも、または示唆されることもない。事実、ハロフギノンお
よび関連化合物に関する知識、および創傷治癒および瘢痕形成の予想されるメカ
ニズムが示されれば、普通の当業者は、創傷治癒が増進されるよりもむしろ、ハ
ロフギノンを投与されている患者において遅延されるのを予想するであろう。か
くして、ハロフギノンが実際に瘢痕形成なしに創傷治癒を増進するという発見は
、当該技術分野における教示には反している。

【００２０】かくして、非特異的な影響を惹起することなく、瘢痕形成のような病理過程を
実質的に抑制する創傷治癒のプロモーターに対する広く認識されたニーズがあり
、そしてそれを得ることは著しく有利であろう。

【００２１】発明の概要本発明によれば、化合物が、式：

【００２２】

【化９】

【００２３】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ群のメンバーおよび製薬学的に許容しうるそれらの塩である、化合物の製
薬学的有効量を製薬学的に許容しうるキャリヤーと組み合わせて含有する、創傷
治癒を増進するための組成物が提供される。

【００２４】本発明のその他の実施態様によれば、化合物が、式：

【００２５】

【化１０】

【００２６】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシからなる群のメンバーであり；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ群のメンバーおよび製薬学的に許容しうるそれらの塩である、化合物の製
薬学的有効量を製薬学的に許容しうるキャリヤー中に配置する段階を含む、創傷
治癒を増進するための薬物を製造する方法が提供される。

【００２７】本発明のその他の実施態様によれば、方法が、化合物が、式：

【００２８】

【化１１】

【００２９】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ群のメンバーおよび製薬学的に許容しうるそれらの塩である、化合物の製
薬学的有効量を製薬学的に許容しうるキャリヤー中に配置する段階を含む、創傷
治癒の増進のための、外科的操作の遂行前の投与のための薬物を製造する方法が
提供される。

【００３０】本発明のなおその他の実施態様によれば、組成物が、式：

【００３１】

【化１２】

【００３２】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ化合物および製薬学的に許容しうるそれらの塩の製薬学的有効量を含有す
る、創傷治癒の増進のための、実質的に外科的操作の遂行前の治療のための組成
物が提供される。

【００３３】本発明のなおその他の実施態様によれば、式：

【００３４】

【化１３】

【００３５】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ化合物および製薬学的に許容しうるそれらの塩の製薬学的有効量を含有す
る、患者における狭窄を治療するための組成物が提供される。

【００３６】好ましくは、狭窄は尿道狭窄である。より好ましくは、尿道狭窄は外科的操作
が患者において遂行された後に起きる。もっとも好ましくは、外科的操作は、患
者の尿道のカテーテル導入である。

【００３７】あるいはまた、そして好ましくは、尿道狭窄は、患者の尿道の感染後に起きる
。

【００３８】本発明の好適な実施態様によれば、化合物は、尿道狭窄の治療のために経尿道
投与をとおして患者に投与される。

【００３９】本発明のなおその他の実施態様によれば、式：

【００４０】

【化１４】

【００４１】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ化合物および製薬学的に許容しうるそれらの塩の製薬学的有効量を患者に
投与する段階を含む、患者における狭窄を治療するための方法が提供される。

【００４２】本発明のなおその他の実施態様によれば、式：

【００４３】

【化１５】

【００４４】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり、Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよ
び低級アルコキシからなる群のメンバーであり、そしてＲ₃は、水素および低級
アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであり；そしてｎは、１もし
くは２のいずれかである］をもつ化合物および製薬学的に許容しうるそれらの塩
の製薬学的有効量を含有する、創傷の強度（ｓｔｒｅｎｇｔｈ）を維持しながら
患者における瘢痕（ｃｉｃａｔｒｉｘ）形成を防ぐための組成物であって、該化
合物が患者の創傷の強度が減少されないように患者に投与される組成物が提供さ
れる。

【００４５】これらの実施態様のすべてでは、好ましくは、化合物はハロフギノンである。
これ以降、用語「ハロフギノン」は、式：

【００４６】

【化１６】

【００４７】をもつ化合物および製薬学的に許容しうるそれらの塩として定義される。

【００４８】好ましくは、先に言及された化合物のすべては、式によって述べられる化合物
それ自体、そして／または製薬学的に許容しうるそれらの塩のいずれでもよい。

【００４９】これ以降、用語「瘢痕」は、瘢痕、狭窄、肥大瘢痕、ならびに実質的にすべて
の他のタイプの瘢痕を含む。以下により詳細に記述されるように、狭窄に関する
本発明の効力の例は、尿道狭窄について示されるけれども、これは、単に記述の
目的のための例であり、そしていかなる点でも限定することを意味しないと理解
される。

【００５０】好適な実施態様の記述予期せぬことに、本発明による組成物は、創傷治癒それ自体を増進しながら、
創傷治癒から発生する病理過程、例えば瘢痕形成のインヒビターとして作用する
ことが見い出された。また、本発明は、狭窄の形成のインヒビターでもある。

【００５１】具体的には、本発明のもっとも好適な化合物、ハロフギノンは、コラーゲン蓄
積が創傷間隙内に生じることを防ぐことによって、瘢痕形成を抑制し、そして創
傷治癒を増進するために使用することができる。以下に詳述される実施例におい
て、ハロフギノンは、カテーテル導入に続く尿道内のコラーゲン蓄積を抑制し、
それによって尿道狭窄の形成を抑制することが示された。

【００５２】以下に示される他の実施例では、ハロフギノンは、創傷治癒を妨げないことが
示される。そのような効果は、特に、ハロフギノンがコラーゲン蓄積を減少する
ので予測されない。しかしながら、コラーゲン蓄積は治癒しつつある創傷を強化
するために必要である。さらにまた、高レベルのハロフギノンは、皮膚強度を減
少させ、そして皮膚の列離を増大させる。先行技術に基づくと、ハロフギノンは
、創傷治癒を妨げることが予測されるであろう。しかし、先行技術の教えとは反
対に、ハロフギノンは、創傷治癒を増進することが具体的に示され、この効果は
新規で、そして非自明であった。

【００５３】これらの新規で、非自明の、そして完全に予期されない結果に基づいて、ハロ
フギノンは、創傷治癒の増進のため、ならびに創傷治癒の過程において創傷の強
度を維持するために、多くの方法において明らかに使用することができるであろ
う。例えば、ハロフギノンは、形成された狭窄および一般に瘢痕として述べられ
る他の瘢痕、例えば外科処置後の瘢痕または炎症疾患を治療するため、あるいは
それらの狭窄または他の瘢痕、または瘢痕の他の例の形成を実質的に抑制するた
めのいずれかに使用できるであろう。

【００５４】ハロフギノンは、また、瘢痕の形成を実質的に防ぐために外科処置前に患者に
投与される前治療として使用できる。もちろん、そのような前治療は、ハロフギ
ノンが、もっとも効果的である外科処置前の十分な期間投与されるので、計画さ
れた外科処置にとってもっとも効果的であろう。

【００５５】本発明は、次の具体的に説明される実施例および図面に関してより容易に理解
される。引用はもっぱらハロフギノンに対してなされるが、米国特許第３，３２
０，１２４号（この教示は引用によって本明細書に組み入れられている）におい
て記述され、そして特許請求される他のキナゾリノン誘導体は類似の性質を有す
ると考えられることに注意すべきである。

【００５６】実施例１創傷治癒に及ぼすハロフギノンの影響創傷治癒に及ぼすハロフギノンの影響が、最初に照射され、次いで傷害されたマ
ウスを用いて試験された。図１に示すように、ハロフギノン処置は、傷害および
照射された皮膚のコラーゲン含量における減少を惹起するが、創傷は、なお治癒
した。

【００５７】実験は次のように実施された。第１に、年齢１２−１４週のＣ３Ｈ、一定フロ
ーラ（ｄｅｆｉｎｅｄ−ｆｌｏｒａ）、病原体フリーのメスマウスが、ナトリウ
ムフェノバルビタール６０ｍｇ／ｋｇにより麻酔された。次いで、マウスは毛を
剃られた。次いで、マウスの１群が、次のように照射された。第１に、皮膚弁約
４０ｍｍ長および約２０ｍｍ幅が放射ジグのリードカバー中にスリットをとおし
て押し込まれ、そしてテープにより固定されて、皮膚弁のみが露出された。次い
で、この露出された皮膚が、２ｍｍＣｕフィルターを用い線量割合１．０Ｇｙ／
ｍｉｎにおいて１７５ｋＶｐ／２０ｍＡｏｒｔｈｏｖｏｌｔａｇｅＸ線源を使用
することによって照射された。標準線量１８Ｇｙが加えられた。

【００５８】次いで、全マウスが、下部背面の中線に沿って皮膚に約２５ｍｍ長の完全な深
さの切開をあたえることによって傷害された。照射された動物では、創傷は、照
射後直ちに、照射領域内に与えられたことに注意。全マウスでは、切開は、３−
４個の金属製傷閉鎖クリップによって直ちに閉じられ、これは２日後に除去され
た。

【００５９】傷害された後、マウスは、ハロフギノン１ｍｇ／マウスまたは対照としての食
塩水のいずれかを隔日にｉ．ｐ．注射された。１４日後、最後の注射後２日目に
、マウスは犠牲にされ、皮膚サンプルがリン酸バッファー食塩水（ＰＢＳ）中に
収集され、４℃でＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド中で固定された。サンプル
が、勾配をつけたエタノール溶液中で脱水され、クロロホルム中で洗浄され、そ
してパラフィンに包埋された後、連続５μｍの切片が調製された。切片は、キシ
レン中で脱パラフィンされ、一連の勾配エタノール溶液をとおして再加水され、
蒸留水中で洗浄され、そして５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，５ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ
７．５中プロナーゼ０．１２５ｍｇ／ｍｌを用いて１０分間処理された。消化後
、スライドは蒸留水中で洗浄され、ＰＢＳ中１０％ホルマリン中で後固定され、
０．２％グリシン中でブロックされ、蒸留水中で再び洗浄され、勾配エタノール
溶液をとおして急速脱水され、そして数時間風乾された。次いで、サンプルは、
ヘマトキシリン−エオシンにより染色された（図１Ａ−Ｄ）。免疫組織化学は、
ラット・コラーゲンＩ型に対して特異的なウサギ免疫血清（Ｌａｂｏｒａｔｏｉ
ｒｅｄｅＰａｔｈｏｌｏｇｉｅＣｅｌｌｕｌａｉｒｅ，Ｉｎｓｔｉｔｕｔ
ＰａｓｔｅｕｒｄｅＬｙｏｎ，Ｌｙｏｎ，Ｆｒａｎｃｅ）および２次のラ
ット抗ウサギＦＩＴＣ共役ＭｃＡｂを用いて実施された（図１Ｅ−Ｈ）。

【００６０】図１Ａおよび１Ｅは、食塩水で処置されたマウスの創傷から採取された組織を
示す。図１Ｂおよび１Ｆは、ハロフギノンで処置されたマウスの創傷から採取さ
れた組織を示す。図１Ｃおよび１Ｇは、食塩水で処置された照射マウスの創傷か
ら採取された組織を示す。図１Ｄおよび１Ｈは、ハロフギノンで処置された照射
マウスの創傷から採取された組織を示す。本質的に、図１Ｇは、コラーゲン含量
が照射されたマウスの創傷において比較的高いことを示している。しかしながら
、図１Ｈは、コラーゲン含量がハロフギノンでの処置によって有意に低下された
ことを示している。しかし、コラーゲン含量にかかわらず、これらの創傷のすべ
たは治癒した。

【００６１】ラットの１群（照射されない）が、傷害後にハロフギノンの注射１回を受けた
だけであったことを除いて、創傷の強度は、実質的に先に記述したようにラット
を作成することによって検査された。創傷の強度は次のように測定された。最初
に、約２０ｍｍ長および約１６ｍｍ幅であり、そして創傷の主要部分を含む四角
い皮膚が、犠牲にされた皮膚から切り取られた。次に、皮膚は、傷に垂直に切断
されて、各２ｍｍ幅である皮膚の帯７個を得た。皮膚の帯は、紙で補強されたフ
レーム間に固定され、そして一定速度２５ｍｍ．ｍｉｎにおいて伸ばすためのＩ
ｎｓｔｒｏｎテンションメーター上に装填された。次いで、破裂点が記録された
。データは、ハロフギノンを受けなかった非照射動物（１列）、ハロフギノンの
注射１回（２列）または６回（３列）を受けた非照射動物、ハロフギノンを受け
なかった照射動物（４列）、およびハロフギノンの注射６回を受けた照射動物（
５列）について図２において示される。

【００６２】図２は、動物が照射されたか、または照射されなかったかによらず、ハロフギ
ノンが創傷の強度を低下させなかったことを明らかに例証している。しかしなが
ら、先に注目されたように、先行技術は、創傷強度についてコラーゲンの重要性
を教示しているので、ハロフギノンがそのような創傷強度を低下させることが予
測されたであろう。かくして、図１および２において得られた結果は、ハロフギ
ノンが創傷強度を低下させなかったので、明らかに、新規で、非自明であり、そ
して先行技術とは異なる知見である。

【００６３】実施例２ハロフギノンは腫瘍をもつマウスにおける創傷治癒を改善するＣ６ラット膠腫細胞からの腫瘍が調製され、そしてヌードマウスに移植された
。あるマウスは、経口的またはｉ．ｐ．（腹腔内）投与のいずれかでハロフギノ
ンを受けた。結果は、ハロフギノンを受けたマウスでは、創傷治癒が実質的に瘢
痕形成なしに増進されたことを示した。実験法は次のとおりである。

【００６４】Ｃ６膠腫細胞は、５％ＦＣＳ、ペニシリン５０ユニット／ｍｌ、ストレプトマ
イシン５０μｇ／ｍｌおよびフンギゾン１２５μｇ／ｍｌを補足されたＤＭＥＭ
において培養された。約１５０ミクロンの小楕円体への細胞の凝集は、集密培養
物からの細胞を寒天コーティングされた細菌プレート上へ置き換えることによっ
て開始された。培養４−５日後、懸濁液が２５０ｍｌ撹拌フラスコ（Ｂｅｌｌｃ
ｏ，ＵＳＡ）に移され、そして培地が３０−４０日間隔日に変えられた。全培養
操作は３７℃および５％ＣＯ₂において行われた。他の条件は、従来報告された
とおりであった（Ａｂｒａｍｏｖｉｔｃｈｅｔａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃ
ｅｒ，７７：４４０−４４７，１９９８；Ａｂｒａｍｏｖｉｔｃｈｅｔａｌ
．，ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，５５：１９５６−６２，１９９５）。

【００６５】細胞の移植では、オスＣＤ−１ヌードマウス２か月齢および体重３０ｇが麻酔
された。１個の腫瘍直径約１ｍｍが、既に報告されたように、テフロン（登録商標）管挿入を用いて、各マウスにおいて４ｍｍ切開部位の下部背面の皮下に移植された（Ａｂｒａｍｏｖｉｔｃｈｅｔａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７７：４４０−４４７，１９９８）。切開は、微小外科鋏を用いて形成され、そして粘着バンドで閉じられた。

【００６６】次いで、マウスは、６群に分けられた。１群は先に記述されたように経口投与
によってハロフギノンを受けた。４群は、隔日にｉ．ｐ．注射により異なる濃度
のハロフギノン（１注射当たり０．１，０．５，２および４μｇハロフギノン）
を受けた。１群は、虚偽の注射（ハロフギノンなし）を受けた。

【００６７】移植腫瘍のＭＲＩ微細画像作成は、既に報告されたように、アクティブリーＲ
Ｆデカップルドサーフェイスコイル（ａｃｔｉｖｅｌｙＲＦｄｅｃｏｕｐｌ
ｅｄｓｕｒｆａｃｅｃｏｉｌ）、直径２ｃｍ、およびバードケージトランス
ミッションコイル（ｂｉｒｄ−ｃａｇｅｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎｃｏｉｌ
）を使用して水平４．４ＴＢｕｒｋｅｒ−Ｂｉｏｓｐｅｃ分光計において実施
された（Ａｂｒａｍｏｖｉｔｃｈｅｔａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７７：４４０−４４７，１９９８；およびＡｂｒａｍｏｖｉｔｃｈｅｔａｌ．
，Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ．，３９：８１３−８２４，１９９８）。マウ
スは麻酔され、そしてサーフェイスコイルの中心に位置する腫瘍とともに仰臥に
置かれた。傾斜エコー画像は、１１０ミクロンのイン・プレーン（ｉｎ−ｐｌａ
ｎｅ）共鳴をもたらす切片の厚さ０．５ｍｍ、ＴＥ１０ｍｓ、ＴＲ２３０ｍｓお
よび２５６ｘ２５６ピクセルマトリックス（ｐｉｘｅｌｓｍａｔｒｉｘ）によ
り得られた。毛細血管床の成長は、腫瘍を囲む１ｍｍの問題の領域における平均
強度の低下によって反映された（Ａｂｒａｍｏｖｉｔｃｈｅｔａｌ．，Ｂｒ
．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，７７：４４０−４４７，１９９８；およびＡｂｒａｍｏｖ
ｉｔｃｈｅｔａｌ．，Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｍｅｄ．，３９：８１３−８
２４，１９９８）。

【００６８】実験期間の最後に、マウスは犠牲にされ、そして切片が得られ、そして先に既
述されたように調製された。

【００６９】結果は図３において示される。列１は腫瘍の外面の写真であり、列２は切開部
位の写真であり、列３はＭＲＩであり、列４はコラーゲンα１（Ｉ）遺伝子発現
であり、列５はコラーゲン含量を示し、そして列６は切開の組織学的状態である
。これらの結果から、ハロフギノンは、経口的に投与されても、またｉ．ｐ．注
射１回当たり４μｇとして投与されても、腫瘍の存在にもかかわらず（図３）、
瘢痕形成が創傷の部位において見いだされないほど、有意に、マウスにおいて創
傷治癒を改善した。腫瘍移植部位から１ｍｍ未満に位置する創傷は、従来、急速
には治癒しないことが示されていたので、そのような結果は驚くべきことである
。例えば、上皮の再形成は、切開が行われた後３週目のそのような創傷において
も完全ではなく、そして創傷部位は、なおも炎症細胞および血液凝塊を特色とす
ることが見いだされていた（Ａｂｒａｍｏｖｉｔｃｈｅｔａｌ．，Ｂｒ．Ｊ
．Ｃａｎｃｅｒ，７７：４４０−４４７，１９９８）。これに対して、腫瘍の組
織学的切片は、ハロフギノンが、経口的に投与されても、またｉ．ｐ．注射１回
当たり４μｇとして投与されても、各群のマウス５匹中４匹において完全な上皮
再形成を誘導したが、一方、すべての他の群では、上皮再形成は各群５マウス中
１匹のみに起きた。

【００７０】列４と５は、コラーゲンα１（Ｉ）遺伝子の発現およびコラーゲン含量の両方
が、ハロフギノンを特に最高用量（ｉ．ｐ．注射１回当たり４μｇ）において受
けたラットにおいて減少したことを示している。かくして、ハロフギノンを受け
たマウスにおけるコラーゲン含量の減少は、驚くべきことに、創傷の上皮再形成
の増強および創傷治癒の増進を伴う。

【００７１】同様な目に見える結果は、Ｔ５０膀胱がん腫腫瘍を移植されたマウスにより得
られた（図４）。実験結果は次のとおりであった。Ｃ３Ｈマウスが各６マウスの
２群に分けられた。実験群は、Ｔ５０膀胱がん腫細胞の注入３日前およびその後
２週間、ハロフギノン１０ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇのいずれかを受けた。
培養されたＴ５０細胞、化学的に誘発されたＭＢＴ２マウス膀胱がん腫の攻撃性
のより強い変異株は、増殖培地においてトリプシン／ＥＤＴＡにより分離されて
単一細胞懸濁液（１０⁶細胞／ｍｌ）にされ、そしてマウスの背中の２部位にｓ
．ｃ．移植された。右側は０．４＊１０⁵細胞を受け、そして左側は２＊１０⁵細
胞を受けた。実験は１７日目に終了した。

【００７２】図４は、代表的な膀胱がん腫を担持している、ハロフギノンにより処置されな
かったマウス（上）または処置されたマウス（下）の写真である。明らかに、ハ
ロフギノンにより処置されたマウスは、ハロフギノンを受けなかったマウスより
も大きい創傷治癒をもった。ハロフギノンは、明らかに、膀胱がん腫腫瘍を移植
されたマウスにおいて創傷治癒を増進することができる。かくして、ハロフギノ
ンを受けたマウスにおける減少したコラーゲン含量は、驚くべきことに、創傷の
上皮再形成の増強および創傷治癒の増進を伴う。

【００７３】実施例３狭窄形成に及ぼすハロフギノンの影響ラットにおける傷害後の狭窄形成においてハロフギノンの効果が研究された。
簡単に言えば、尿道狭窄は、ラットの尿道へのカテーテル導入および電流適用に
よって誘発された。ラットは４群に分けられた：対照としての未処置ラット（図
５Ａ）；ハロフギノンで処置されたが凝固電流で処置されなかったラット（図５
Ｂ）；凝固電流のみで処置されたラット（図５Ｃ）；およびハロフギノンと凝固
電流両方で処置されたラット（図５Ｄ−５Ｆ）。凝固電流のみを受けたラットは
、明らかな狭窄を有したが、一方、ハロフギノンと凝固電流両方で処置されたラ
ットはそのような狭窄を有しなかった。

【００７４】実験は次のとおり実施された。最初に、尿道カテーテル導入が、２３ＧＱｕ
ｉｋ−Ｃａｔｈ（Ｂａｘｔｅｒ，Ｉｒｅｌａｎｄ）鞘を用いて麻酔されたラット
において実施された。脊髄針が鞘中に挿入され、そしてこれが使用されて、尿道
狭窄を生成するために、道から８，１０および１２ｍｍの３カ所において１秒間
、針の外の端に１０Ｗレベルで凝固電流を適用した。ハロフギノンは、狭窄形成
の日に開始して７日間、飼料中濃度１ｐｐｍおよび５ｐｐｍにおいて経口的に、
または２％リグノカイン中に溶解された０．０３％ハロフギノンの尿道中への１
日１回の直接注入によって与えられた。尿道の肉眼的形態は、狭窄形成３週後の
透視診断下で、２３ＧＱｕｉｋ−Ｃａｔｈ鞘をとおして麻酔されたラット中に
造影剤（ＴｅｌｅｂｒｉｘＭｅｇａｌｕｍｉｎｅ３００ｍｇ／ｍｌ，Ｌａｂ
ｏｒａｔｏｒｉｅ，Ｇｕｅｒｂｅｔ，ＡｕｌｎａｙＳｏｕｓＢｉｏｓ，Ｆｒ
ａｎｃｅ）を注入した後、尿道造影によって評価された。

【００７５】対照的に、局所的に投与されたハロフギノンおよび凝固処置の両方を受けたラ
ットは狭窄をもたなかったし、また凝固処置とともに飼料中ハロフギノン５ｐｐ
ｍを受けたラットももたなかった（図５Ｅおよび５Ｆ）。飼料中ハロフギノン１
ｐｐｍのみの投与は狭窄形成に影響しなかった（図５Ｄ）。かくして、狭窄が誘
導された後７日間経口的に十分なハロフギノンの投与、またはハロフギノンの局
所投与は、凝固処置後の狭窄形成を防ぐことが可能であった。

【００７６】実施例４尿道狭窄形成におけるコラーゲンの関与およびハロフギノンの影響ラットにおいて傷害後の尿道狭窄形成における、コラーゲンの関与ならびにハ
ロフギノンの影響が研究された。簡単に言えば、コラーゲン特異的染色技術、な
らびに標識されたコラーゲン特異的遺伝プローブとのハイブリダイゼーションが
、図６および７Ａ−７Ｄにおいて示されるように、尿道狭窄の成分としてコラー
ゲンの重要性を例証した。

【００７７】実験は次のとおり実施された。最初に、尿道カテーテル導入が、２３ＧＱｕ
ｉｋ−Ｃａｔｈ（Ｂａｘｔｅｒ，Ｉｒｅｌａｎｄ）鞘を用いてラットにおいて実
施された。脊髄針が鞘中に挿入され、そしてこれが使用されて、尿道狭窄を生成
するために、管から８，１０および１２ｍｍの３カ所において１秒間、針の外の
端に１０Ｗレベルで凝固電流を適用した。ハロフギノンは、狭窄形成の日に開始
して７日間、飼料中濃度１ｐｐｍおよび５ｐｐｍにおいて経口的に、または２％
リグノカイン中に溶解された０．０３％ハロフギノンの尿道中への１日１回の直
接注入によって与えられた。２１日後、ラットは犠牲にされ、そして縫合が再開
口されて、尿道狭窄形成のレベルを決定し、その時点で組織の生検が採取された
。

【００７８】組織は、組織学的研究が遂行できるように切片にされた。簡単に言えば、組織
サンプルがリン酸バッファー食塩水（ＰＢＳ）中に収集され、そして４℃でＰＢ
Ｓ中４％パラホルムアルデヒド中で一夜固定された。サンプルが、勾配をつけた
エタノール溶液中で脱水され、クロロホルム中で洗浄され、そしてＰａｒａｐｌ
ａｓｔ中に包埋された後、連続５μｍの切片が調製された。コラーゲンおよび非
コラーゲンタンパク質の分別染色は、０．１％Ｓｉｒｉｕｓｒｅｄおよびピク
リン酸中対比染色として０．１％ファーストグリーンを用いて実施された。この
操作は、コラーゲンを赤色に染色する［Ｇａｓｃｏｎ−Ｂａｒｒｅ，Ｍ．，ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．Ｖｏｌ３７，ｐ．３
７７−３８１，１９８９］。結果は図７Ａ−７Ｄに示される。

【００７９】遺伝プローブとのハイブリダイゼーションでは、切片は、キシレン中で脱パラ
フィンされ、一連の勾配エタノール溶液をとおして再加水され、蒸留水中で５分
間洗浄され、次いで、３０分間７０℃で２ＸＳＳＣにおいてインキュベートさ
れた。次いで切片は、蒸留水中で洗浄され、そして５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ，
５ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．５中プロナーゼ０．１２５ｍｇ／ｍｌを用いて１０分
間処理された。消化後、スライドは蒸留水中で洗浄され、ＰＢＳ中１０％ホルマ
リン中で後固定され、０．２％グリシン中でブロックされた。ブロック後、スラ
イドは、蒸留水中で洗浄され、勾配エタノール溶液をとおして急速脱水され、そ
して数時間風乾された。次いで、切片は、遺伝プローブとハイブリダイズされた
。

【００８０】ハイブリダイゼーション前に、遺伝プローブは、元来のプラスミド、ｐＵＣ１
８から１６００ｂｐラット・コラーゲンα１（Ｉ）インサートを切り取ることに
よって調製された。１６００ｂｐインサートは、次に、ｐＳａｆｙｒｅプラスミ
ド中に挿入された。次いで、切片が、ジゴキシゲニン標識後このプローブとハイ
ブリダイズされた。アルカリホスファターゼ活性は、既に記述されているように
切片において検出された［Ｋｎｏｐｏｖ，Ｖ．，ｅｔａｌ．，Ｂｏｎｅ，Ｖｏ
ｌ１６，ｐ．３２９Ｓ−３３４Ｓ，１９９５］。結果は図６に示される。

【００８１】図６は、尿道狭窄から採取された生検中の細胞が、コラーゲンＩ型の存在を指
示するコラーゲンα１（Ｉ）遺伝子を特異的に発現していることを示している。
各褐色斑点がコラーゲンα１（Ｉ）遺伝子を発現している細胞を表すことに注目
。対照的に、ハロフギノンを経口的に投与されたラット、ならびに凝固処置を受
けなかったラットから採取された組織は、コラーゲンα１（Ｉ）遺伝子の有意に
低下した発現レベルをもった。事実、結果の画像解析（各種の処置について３生
検）は、凝固処置による処置後、コラーゲンα１（Ｉ）遺伝子の発現における６
．８倍の増加を例証した。これに反して、ハロフギノン処置は、コラーゲンα１
（Ｉ）遺伝子の発現における５．３倍の減少をもたらし、これは、増加した発現
のほとんど完全な撤廃である。かくして、明らかに、凝固電流のみを受けたラッ
トからの狭窄組織は高レベルのコラーゲンα１（Ｉ）遺伝子を発現したが、一方
、ハロフギノンおよび凝固電流を受けたラットはほとんど正常な発現レベルを有
した。

【００８２】コラーゲンα１（Ｉ）遺伝子の発現増大は、図７に示されるように、組織のコ
ラーゲン含量の増加を伴った。図７Ｂは、狭窄の１つから採取され、Ｓｉｒｉｕ
ｓｒｅｄで染色された組織切片を示し、一方図７Ａは、対照の未処置ラットか
ら採取された組織のそのような切片を示す。明らかに、狭窄組織におけるコラー
ゲンの存在を指示する、非常に高いレベルのＳｉｒｉｕｓｒｅｄによる染色が
図７Ｂにおいて見いだされる。経口的（図７Ｃ）にも、また局所的（図７Ｄ）に
も与えられたハロフギノン処置は、生検におけるコラーゲン量を低下させ、そし
て管腔がコラーゲンで満たされるのを防いだ。かくして、明らかに高レベルのコ
ラーゲンＩ型は、ラットにおいて誘導される尿道狭窄の管腔中に存在するが、一
方そのような高レベルは、ハロフギノンの投与によって撤廃される。

【００８３】実施例５ハロフギノンはコラーゲンＩＩＩ型のレベルを変化させないコラーゲンＩＩＩ型に対する抗体の免疫組織化学が、対照、未処置ラット、凝
固電流のみで処置されたラットおよび凝固電流処置後ハロフギノンを含有する飼
料を与えられたラットから採取された生検において実施された。有意な変化は、
種々の群のラット間のコラーゲンＩＩＩ型のレベルにおいて観察されなかった（
図８）。実験方法は次のとおりである。

【００８４】実施例４において既に述べたようにラットは処置され、そして生検組織の切片
が調製された。免疫組織化学は、コラーゲンＩＩＩ型（ＢｉｏＧｅｎｅｘ，Ｓａ
ｎＲａｍｏｎ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）に対する１次抗体および２次
抗体ではＨｉｓｔｏｍｏｕｓｅＳＰキット（ＺｙｍｅｄＬａｂｏｒａｔｏｒ
ｉｅｓＩｎｃ．，ＳｏｕｔｈＳａｎＦｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒ
ｎｉａ，ＵＳＡ）を用いて実施された。１次抗体は、１：１０００希釈において
使用され、そして検出は、ＨｉｓｔｏｍｏｕｓｅＳＰキットを用いて製造者の
指示にしたがって実施された。

【００８５】図８Ａは、対照、未処置ラットから採取された生検における免疫組織化学を示
し；図８Ｂは、凝固電流のみで処置されたラットにおける免疫組織化学を示し；
そして図８Ｃは、凝固電流処置後ハロフギノンを含有する飼料を与えられたラッ
トにおける免疫組織化学を示す。有意な変化は、種々の群のラット間のコラーゲ
ンＩＩＩ型のレベルにおいて観察されなかった。かくして、明らかに、コラーゲ
ンＩＩＩ型のレベルは、尿道狭窄の誘導によって、またはハロフギノンの投与に
よって変化されなかった。

【００８６】実施例６尿道由来の繊維芽細胞に及ぼすハロフギノンの影響正常なラット尿道から得られた繊維芽細胞に及ぼすハロフギノンの影響が試験
された。繊維芽細胞は、尿道組織の切片から培養され、次いでハロフギノンの存
在または不在下でインキュベートされた。図９に示されるように、低濃度のハロ
フギノンでさえ、コラゲナーゼ消化性タンパク質（ＣＤＰ）のレベルを減少した
が、一方非−コラゲナーゼ消化性タンパク質（ＮＣＤＰ）のレベルには影響しな
かった。ＣＤＰの減少したレベルは、コラーゲンα１（Ｉ）遺伝子の減少した発
現によって惹起されることが示された。実験方法は次のとおりである。

【００８７】尿道繊維芽細胞は、３匹の正常なオスのラットから得られ、そして無菌条件下
で処理された。尿道は１−２ｍｍ片に切断され、ペニシリン／ストレプトマイシ
ン０．２ｍｌ／１０ｍｌおよびゲンタマイシン５０μｇ／ｍｌを含有する溶液中
で数回洗浄された。各尿道片は、２４穴プレート（ＧｒｅｉｎｅｒＬａｂｏｒ
ｔｔｃｈｎｉｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の１ｍｌウェル中に置かれた。各ウェルは、
Ｄ−グルコース４．５ｇ／ｍｌ、２５％ＦＣＳ（胎児ウシ血清）、ペニシリン／
ストレプトマイシン０．１ｍｌ／１０ｍｌ、グルタミン０．１ｍｌ／１０ｍｌ、
ゲンタマイシン５０μｇ／ｍｌおよびアンホテリシンＢ２．５μｇ／ｍｌを含有
する、ＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＭｏｄｉｆｉｅｄＥａｇｌｅ’ｓ
Ｍｅｄｉｕｍ）を満たされた。ウェルは５％ＣＯ₂含有のインキュベーター中で
３７℃で培養された。培地の半分が１０日後に置換された。２〜３日後、培養物
はトリプシン−ＥＤＴＡ培地でトリプシン消化された。ウェルの各ペアの内容物
が合わされ、ＤＭＥＭ中に再懸濁され、そして培地５ｍｌを含有する２５０ｍｌ
フラスコ１個に入れられた。細胞培養物が集密に達した時点で、それらは、旧培
地対新培地１：５により新しいフラスコに移された。次いで、ＦＣＳ濃度は１０
％に減少された。

【００８８】ＣＤＰおよびＮＣＤＰの合成の評価のために、細胞は、５％ＦＣＳ、アスコル
ビン酸（５０μｇ／ｍｌ）、β−アミノプロピオニトリル（５０μｇ／ｍｌ）お
よび［³Ｈ］プロリン２ミクロキューリーを含有する０．５ｍグルタミン不含の
ＤＭＥＭ中で種々の濃度のハロフギノンとともに２４時間培養された。培養期間
の終了時点で、培地はデカントされ、そしてコラゲナーゼ添加または無添加で１
８時間インキュベートされ、続いてＴＣＡ沈殿された。放射線標識されたコラー
ゲン量は、総［³Ｈ］プロリン含有タンパク質およびコラゲナーゼ消化後に残っ
ているタンパク質の間の差異として評価された。結果は図９に示される。

【００８９】次に、総ＲＮＡが、グアニジニウム−チオシアネート−フェノール技術を用い
て単離された（Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉ，Ｐ．ａｎｄＮ．Ｓａｃｃｈｉ，Ａｎ
ａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１６２：１５６，１９８７）。ＲＮＡは１％アガロー
ス変性ゲル電気泳動にかけられ、続いてナイロンフィルター（ＧｅｎｅＳｃｒｅ
ｅｎＰｌｕｓ，ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＮｕｃｌｅａｒ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍ
ａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）上にブロットされた。コラーゲンα１（Ｉ
）遺伝子に対するプローブは、市販のキット（Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ，Ｇｅｒｍ
ａｎｙ）によるランダムプライマー操作を用いてラベルされた。ハイブリダイゼ
ーションは、１０％硫酸デキストラン、１％ＳＤＳ、１ＭＮａＣｌ、４０％ホル
ムアミドおよび変性ニシン精子ＤＮＡを含有する溶液中で４０℃で一夜実施され
た。ハイブリダイゼーションは、２ｘＳＳＣ（１ｘＳＳＣは、０．１５ＭＮ
ａＣｌおよび０．０１５Ｍクエン酸ナトリウムを含有する）、１％ＳＤＳにおけ
る２回の３０分洗浄、および１ｘＳＳＣ、０．１％ＳＤＳにおける２回の２０
分洗浄が続いた。フィルターは、増感スクリーンを使用して、−７０℃において
Ｘ線フィルム（Ａｇｆａ−Ｃｕｒｉｘ）に露光された。

【００９０】図９に示される結果から、ハロフギノンは、１０^-8Ｍハロフギノンくらい低い
濃度においてさえＣＤＰのレベルを４０％抑制した。タンパク質のレベルは、培
養繊維芽細胞によって培地中に出されるタンパク質量から決定したが、これの５
２％がＣＤＰであり、一方残りは定義によってＮＣＤＰであった。ハロフギノン
の抑制効果は、ＮＣＤＰの出現または細胞数には影響を与えなかった。ＣＤＰに
対するハロフギノンの特異的抑制効果は、ノザンブロット解析によって例証され
るように、コラーゲンα１（Ｉ）遺伝子の発現における減少の結果であることが
示された。かくして、ハロフギノンは、尿道組織から採取された繊維芽細胞にお
けるコラーゲンα１（Ｉ）遺伝子の発現を特異的に減少させ、それによってＣＤ
Ｐ量を減少させるが、ＮＣＤＰには影響しなかった。

【００９１】実施例７ハロフギノンの投与のために適当な製剤ハロフギノンは、当業者には周知である多くの方法において患者に投与するこ
とができる。これ以降では、用語「患者（ｓｕｂｊｅｃｔ）」は、ハロフギノン
が投与されるヒトまたは下等動物を指す。例えば、投与は、局所的（眼、膣、肛
門、鼻内に）、経口的、または非経口的に、例えば静脈内滴注または腹腔内、皮
下もしくは筋肉内注射によって行われた。尿道狭窄の治療または予防のための特
に好適な投与経路は経尿道投与である。

【００９２】局所投与のための製剤は、限定されるものではないがローション剤、軟膏剤、
ゲル剤、クリーム剤、坐剤、ドロップ剤、液剤、スプレー剤および散剤を含んで
もよい。慣用の製薬学的キャリヤー、水性、粉末もしくは油性基剤、増粘剤など
が、必要または望ましいこともある。さらに、局所投与は、化合物を含む媒質に
浸漬されるか、または他の方法でそれを含有するバンデージに助けられてもよい
。バンデージは、閉鎖性（ｏｃｃｌｉｓｉｖｅ）または非閉鎖性（ｎｏｎ−ｏｃ
ｃｌｉｓｉｖｅ）であってもよい。さらにまた、特定の道具が化合物を適用する
ために使用されてもよい。本発明の道具は、化合物および製薬学的に許容しうる
キャリヤーを含む組成物、および組成物を含有する容器を含む。好ましくは、容
器は、実質的に密封され、無菌的な容器、例えばエアゾル散布ポンプまたはスプ
レー缶である。その他には、そして好ましくは、容器は、実質的に無菌のバンデ
ージである。また、その他には、そして好ましくは、容器は、圧搾可能なチュー
ブまたはゲル散布ポンプである。当業者は、好適なキャリヤーの性質に応じて組
成物に適当な容器を容易に選別することができる。

【００９３】経口投与のための組成物は、散剤もしくは顆粒剤、水もしくは非水性媒質中の
懸濁剤もしくは液剤、サッシェ剤、カプセル剤もしくは錠剤を含む。増粘剤、希
釈剤、香味剤、分散助剤、乳化剤もしくは結合剤が望ましいこともある。

【００９４】非経口投与のための製剤は、限定されるものではないがバッファー、希釈剤お
よび他の適当な添加物を含有してもよい無菌水性液剤を含んでもよい。

【００９５】経尿道投与のための製剤は、限定されるものではないが、場合によっては媒質
中に添加されたバッファー化合物とともに、水もしくは非水性媒質中の懸濁剤も
しくは液剤を含んでもよい。

【００９６】用法は、症候の重篤度およびハロフギノンに対する患者の応答性に依存する。
当業者は、最適な用量、用法手段および反復度を容易に決定することができる。

【００９７】実施例８瘢痕の治療および創傷治癒の増進の方法先に注目したように、ハロフギノンは、有効な創傷治癒のプロモーターおよび
狭窄を含む瘢痕形成のインヒビター、ならびに種々のタイプの瘢痕の一般的イン
ヒビターであることが示された。次の例は、ハロフギノンによる、尿道狭窄を含
む瘢痕のような瘢痕の形成を治療および予防する方法、ならびに創傷治癒を増進
する方法のみを具体的に説明するものであり、そして限定することを意図しない
。

【００９８】方法は、先の実施例７に記述された製薬学的許容しうるキャリヤー中のハロフ
ギノンを治療される患者に投与する段階を含む。ハロフギノンは、有効な用法手
段にしたがって、好ましくは予定された終点に到達するまで、例えば患者におい
て臨床症候がなくなるまで投与される。例えば、患者が既に創傷を有する場合は
、終点は、創傷のサイズにおける低下または創傷の完全な治癒である。

【００９９】また、ハロフギノンは、実質的に、瘢痕のような瘢痕および狭窄の形成を予防
するため、ならびに創傷治癒を増進するために、外科処置前に患者に投与される
前治療として使用することができる。もちろん、そのような前治療は、ハロフギ
ノンがもっとも有効である外科処置前の十分な期間投与されるので、計画された
外科処置にとってもっとも有効であろう。ハロフギノンは、瘢痕形成の抑制が特
に重要である美容整形上の外科処置のために特に有用であろう。

【０１００】以降では、用語「治療」は、病理症状が起きる前の前治療、および症状が起き
た後の治療の両方を含む。例えば、創傷の治療は、創傷の生成前後両方のハロフ
ギノンの両投与を含む。用語「治療する」は、病理症状が起きた後に患者を治療
すること、および病理症状の発達を防ぐことの両方を含む。

【０１０１】実施例９ハロフギノンを含有している医薬の製造方法次は、ハロフギノンを製造する方法の例である。最初に、ハロフギノンは、医
薬品の製造および品質管理に関する基準にしたがって合成される。ハロフギノン
および関連キナゾリノン誘導体を合成する方法の例は、米国特許第３，３３８，
９０９号において与えられる。次に、ハロフギノンが、再び医薬品の製造および
品質管理に関する基準にしたがって、先の実施例７において記されたように、適
当な製薬学的キャリヤー中に入れられる。

【０１０２】本発明は、限られた数の実施態様に関して記述されたが、本発明の多くの改変
、修飾および他の応用が実施できることは理解される。

【図面の簡単な説明】

本発明は、付随する図面に関して、例のみの方法によってここに記述される：

【図１Ａ−１Ｈ】創傷治癒に及ぼすハロフギノンの影響を図示している。

【図２】創傷の強度に及ぼすハロフギノンの影響を図示している。

【図３】腫瘍を移植した後の創傷治癒の増進に及ぼすハロフギノンの影響を図示してい
る。

【図４】膀胱がんを移植した後の創傷治癒の増進に及ぼすハロフギノンの影響を図示し
ている。

【図５Ａ−５Ｄ】尿道における狭窄形成に及ぼすハロフギノンの影響を図示している。

【図６】狭窄部位におけるコラーゲンα１（Ｉ）遺伝子発現に及ぼすハロフギノンの影
響を図示している。

【図７Ａ−７Ｄ】狭窄部位におけるコラーゲン含量に及ぼすハロフギノンの影響を図示している
。

【図８Ａ−８Ｃ】狭窄部位におけるコラーゲンＩＩＩ型に及ぼすハロフギノンの影響の欠如を図
示している。

【図９】ラット尿道由来の繊維芽細胞によるコラーゲン合成に及ぼすハロフギノンの影
響を図示している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ナグラー，アーノンイスラエル74381エルサレム・スデロトヘルツル46 Ｆターム(参考） 4C063 AA01 BB04 CC31 DD10 EE01 4C086 AA01 AA02 BC46 GA07 GA16 MA01 MA02 MA03 MA04 MA05 NA14 ZA81 ZA89

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式：【化１】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシからなる群のメンバーであり；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ群のメンバーおよび製薬学的に許容しうるそれらの塩である、化合物の製
薬学的有効量を製薬学的に許容しうるキャリヤーと組み合わせて含有する、創傷
治癒を増進するための組成物。
【請求項２】該化合物がハロフギノンおよび製薬学的に許容しうるそれら
の塩である、請求項１記載の組成物。
【請求項３】式：【化２】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ群のメンバーおよび製薬学的に許容しうるそれらの塩である、化合物の製
薬学的有効量を製薬学的に許容しうるキャリヤー中に配置する段階を含む、創傷
治癒を増進するための薬物を製造する方法。
【請求項４】式：【化３】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ群のメンバーおよび製薬学的に許容しうるそれらの塩である、化合物の製
薬学的有効量を製薬学的に許容しうるキャリヤー中に配置する段階を含む、創傷
治癒の増進のための、外科的操作の遂行前の投与のための薬物を製造する方法。
【請求項５】式：【化４】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ化合物および製薬学的に許容しうるそれらの塩の製薬学的有効量を含有す
る、創傷治癒の増進のための、実質的に外科的操作の遂行前の治療のための組成
物。
【請求項６】式：【化５】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ化合物および製薬学的に許容しうるそれらの塩の製薬学的有効量を含有す
る、患者における狭窄を治療するための組成物。
【請求項７】狭窄が尿道狭窄である、請求項６の組成物。
【請求項８】尿道狭窄が外科的操作が患者において遂行された後に起きる
、請求項７の組成物。
【請求項９】該外科的操作が患者の尿道のカテーテル導入である、請求項
８の組成物。
【請求項１０】尿道狭窄が患者の尿道の感染後に起きる、請求項７の組成
物。
【請求項１１】該化合物が経尿道投与をとおして患者に投与される、請求
項７の組成物。
【請求項１２】式：【化６】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり；そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ化合物および製薬学的に許容しうるそれらの塩の製薬学的有効量を患者に
投与する段階を含む、患者における狭窄を治療するための方法。
【請求項１３】狭窄が尿道狭窄である、請求項１２の方法。
【請求項１４】尿道狭窄が外科的操作が患者において遂行された後に起き
る、請求項１３の方法。
【請求項１５】該外科的操作が患者の尿道のカテーテル導入である、請求
項１４の方法。
【請求項１６】尿道狭窄が患者の尿道の感染後に起きる、請求項１３の方
法。
【請求項１７】該化合物が経尿道投与をとおして患者に投与される、請求
項１３の方法。
【請求項１８】式：【化７】［式中、Ｒ₁は、水素、ハロゲン、ニトロ、ベンゾ、低級アルキル、フェニルおよび低級
アルコキシからなる群のメンバーであり；Ｒ₂は、ヒドロキシ、アセトキシおよび低級アルコキシからなる群のメンバーで
あり、そしてＲ₃は、水素および低級アルケンオキシ−カルボニルからなる群のメンバーであ
り；そしてｎは、１もしくは２のいずれかである］をもつ化合物および製薬学的に許容しうるそれらの塩の製薬学的有効量を含有す
る、創傷の強度を維持しながら患者における瘢痕形成を防ぐための組成物であっ
て、該化合物が患者の創傷の強度が減少されないように患者に投与される、組成
物。