DK176062B1 - Fremgangsmåde til at transformere plantevæv - Google Patents

Fremgangsmåde til at transformere plantevæv Download PDF

Info

Publication number
DK176062B1
DK176062B1 DK199002855A DK285590A DK176062B1 DK 176062 B1 DK176062 B1 DK 176062B1 DK 199002855 A DK199002855 A DK 199002855A DK 285590 A DK285590 A DK 285590A DK 176062 B1 DK176062 B1 DK 176062B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
tissue
shoot
plants
plant tissue
plant
Prior art date
Application number
DK199002855A
Other languages
English (en)
Other versions
DK285590D0 (da
DK285590A (da
Inventor
Roberta H Smith
Jean H Gould
Eugenio C Ulian
Original Assignee
Texas A & M Univ Sys
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Texas A & M Univ Sys filed Critical Texas A & M Univ Sys
Publication of DK285590D0 publication Critical patent/DK285590D0/da
Publication of DK285590A publication Critical patent/DK285590A/da
Application granted granted Critical
Publication of DK176062B1 publication Critical patent/DK176062B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
    • C12N15/8201—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation
    • C12N15/8202—Methods for introducing genetic material into plant cells, e.g. DNA, RNA, stable or transient incorporation, tissue culture methods adapted for transformation by biological means, e.g. cell mediated or natural vector
    • C12N15/8205—Agrobacterium mediated transformation

Description

DK 176062 B1
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til transformation af planter, hvorved opnås et højt niveau af hurtig regeneration og lav risiko for vævskulturinduce-5 ret genetisk variation. Ved fremgangsmåden anvendes der specielt isolerede skudapekser fra kimplanter eller akselknopper fra intakte planter som målvæv for transformation og til efterfølgende anvendelse ved regeneration af planter.
10 Manglen på rutinemæssig, gentagelig regeneration fra plantecelle-kultursystemer for afgrøder, der er vigtige for landbruget, er et stort problem ved udførelsen af gensplejsningsteknologi på planter. Endvidere er der som rapporteret af Larkin og Scowcroft, Theor. Appl. Genet. 60:197 (1981) en mulighed for somaklonal variation, når planter regenereres adventivt in vitro.
15 Somaklonale varianter kan være en følge af A. tumefaciens-medieret genoverførsel. Somaklonal variation er den genetiske variabilitet, man ser hos planter, der er afledt fra et kallus-mellemprodukt. Hvor det er af afgørende betydning at opretholde transformerede planters oprindelige genetiske integritet, er dette fænomen uønsket.
20
Man har foretrukket Agrobacterium tumefaciens til bladskiver, epidermisstrip eller andre eksplantater i et cokultiveringssystem til genoverførsel. A. tumefaciens-medieret overførsel af gener er udviklet ved anvendelse af Solana-ceae-familien, fordi denne familie er let at manipulere med i kultur, og fordi 25 Agrobacterium-arter har en god infektionsevne i denne familie. Skønt mange andre tokimbladede arter er kendt for at være egnede værter for Agrobacte-rium, så er planter fra kun få af disse arter med held blevet transformeret, hovedsageligt på grund af manglende regenerationssystemer.
30 Udvikling af bladskive-transformationssystemet af Horsch et al., Ann. Rev.
Plant Physiol. 38:467 (1987) tillod næsten rutinemæssig overførsel af frem- DK 176062 B1 2 med genetisk materiale, men kun til et begrænset antal plantearter. Dette modelsystem blev demonstreret ved anvendelse af medlemmer af Solana-ceae-familien: petunia-, tobaks- og tomatarter, som er forholdsvis nemme at regenerere ud fra bladeksplantatmateriale. Ved bladskiveteknikken blev 5 mange af de problemer, der er forbundet med protoplasttransformations-systemer overvundet, især den lange dyrkningstid der er påkrævet, og den begrænsede regeneration af planter ud fra protoplaster.
Imidlertid har bladskivesystemet sine store begrænsninger. Den alvorligste 10 begrænsning er, at få plantearter kan regenereres fra bladvæv. Selv for nogle dyrkede petunia-varieteter er regeneration fra bladskiver vanskelig. En anden begrænsning ved bladskivesystemet er, at adventive skudmeristemer differentierer fra epidermale og subepidermale bladvæv. Der er udviklet afledninger af bladskivemetoden, som omfatter brugen af kimplantevæv sam-15 men med induktion af somatisk embryogenese, såvel som kailus efterfulgt af skudinducering. I alle disse tilfælde er der imidlertid mulighed for somaklonal variation, fordi kimene såvel som skudmeristemerne skal udvikles adventivt.
Et andet system til plantetransformation er blevet udviklet af Trinh et al., Bio-
V
20 technology 5:1081 (1987). Systemet indebærer brug af epidermisstrip-systemet i tobaksplanter og cokultivering med Agrobacterium. Fordelen ved dette system var den direkte dannelse af blomster og frø på otte uger. Også ved dette system er vigtige ulemper den begrænsede adaptation af denne teknik til afgrødearter og muligheden for somaklonal variation, da planterne 25 opstår ved adventiv organogenese.
Den foreliggende opfindelse overvinder hindringerne fra den kendte teknik ved at anvende skudapeksvæv, som det væv, der underkastes genoverførsel. Brugen af et sådant væv tillader hurtig propagering af planter, samtidig 30 med at den transformerede plantes unikke klonale og genetiske egenskaber bevares. Ved udførelsen af fremgangsmåden ifølge opfindelsen foretrækkes ! 3 DK 176062 B1 skudmeristemvæv, inkl. skudspidskultur og akselknop-proliferering. Til plantetransformation er skudapekset det mest foretrukne eksplantat, da de fleste urteagtige to- og enkimbladede planter kan regenereres til intakte planter ved brug af denne eksplantatkilde. Desuden udvikles skudkulturer direkte og hur-5 tigt til rodplanter. Foruden skudapekset, kan andre ikke-adventive væv, såsom akselknoppen, anvendes ved udførelsen af opfindelsen.
Ved anvendelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen i forbindelse med skudapekser dyrkes skudapekser udskåret fra udvalgte planter i et passende 10 medium. Efter apekseme er blevet udskåret eller dyrket i nogle dage, udsættes de for en passende vektor, såsom Agrobacterium tumefaciens. De inoku-lerede skudapekser dyrkes derpå i yderligere nogle dage. Efter dyrkning overføres skudapekseme til et selektionsmedium for at skelne transformerede fra ikke-transformerede plantevæv. Derefter selekteres transformerede 15 væv, og de dyrkes i et roddannende medium. Rodplanter kan herefter dyrkes under normale betingelser.
Ved denne fremgangsmåde fås hurtig regeneration af transformerede plan ter. Forsøg med petunia har for eksempel ført til resultater inden for seks 20 uger. Planter dannet ved den ovenfor beskrevne fremgangsmåde er blevet selvbestøvet og de herved fremkomne frø spiret under aseptiske betingelser.
Det fandtes, at 90 % af de dannede kimplanter var i besiddelse af det nye indsatte gen, hvilket var bevis for kønnet overførsel af den nye genetiske information.
25
Ved udførelsen af opfindelsen foretrækkes bakterier af slægten Agrobacte-rium, men andre vektorer, der kan foretage genetisk transformation i planter, kan anvendes til indsættelse af andre bakterier, plasmider, viruser og DNA-fragmenter.
30 4 DK 176062 B1
Figur 1 viser resultaterne af et fluorometisk GUS-assay af transformerede planter og angiver forløbet af GUS-aktivitet over et tidsrum på 5 timer. Den dannede mængde methyl-umbelliferon blev kvantificeret med et Kontron spektrofluorimeter. Dette viser den vellykkede transformation af petunia ved 5 anvendelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen.
I efterfølgende diskussion og eksempler beskrives i detaljer den bedst kendte fremgangsmåde til udførelse af opfindelsen. Det vil forstås, at variationerne af denne fremgangsmåde kan omfatte andre kulturmedier eller andre vekto-10 rer i afhængighed af målplantemes art og de egenskaber, der skal overføres til målplanteme. Petunia, soyabønne, lucerne, solsikke, bomuld, hvede og majs blev valgt som målplanter i de efterfølgende eksempler, men den nedenfor beskrevne fremgangsmåde kan imidlertid overføres til andre planter, der kan regenerere fra skudapekser eller akselknopper uden væsentlig eks-15 perimentering eller afvigelse fra opfindelsens rækkevidde.
Selektion ved brug af kanamycinresistens foretrækkes, men indsættelse af gensekvenser, der koder for resistens over for andre antibiotika, såsom G418, neomycin, hygromycin eller chloramphenicol, eller over for herbicider, 20 såsom glyphosat, kan bruges, såvel som andre selekterbare gener, der vil være kendt for fagmanden. Yderligere kan der bruges visse tilsætningsstoffer til at fremme vellykket infektion af skudarteme. Disse omfatter acetosyringon og visse opiner, såsom, men ikke begrænset til, octapin, nopalin og leucino-pin.
25 EKSEMPEL 1 Spiring af eksplantatkilde 30 Frø fra den kommercielle petunia-varietet "Rose Flash", en Frhybrid af Single Grandiflora og Deep Rose, blev opnået fra Ball Seed Co., West Chicago, 5 DK 176062 B1 IL. Frøene blev overfladesteriliseret i 20 vol.-% kommercielt blegemiddel, hvortil var sat et befugtningsmiddel som Tween-20 eller opvaskemiddel, i 30 minutter. Frøene blev derpå skyllet fem gange med sterilt vand.
5 De steriliserede frø blev derpå spiret aseptisk på Murashige og Skoog-salte med 30 vægt/vol.-% sucrose. Murashige og Skoog-saltene blev fremstillet som følger: Der blev fremstillet stamopløsninger af nedenstående salte (i g/l stamopløsning): 10 (1) Nitrater: ammoniumnitrat (NH4N03), 165; kaliumnitrat (KNO3), 190; (2) Sulfater: magnesiumsulfat (MgS04.7H20), 37; mangansulfat (MnS04-H20), 1,690; zinksulfat (ZnSC>4.7H20), 0,860; cuprisulfat (Cu- SO4.5 H20), 0,0025; (3) Halogenider: calciumchlorid (CaCI2.2H20), 44; kaliumiodid (Kl), 0,083; 15 cobaltchlorid (CoCI2.6H20), 0,0025; (4) . P04, BO3, M0O4: kaliumphosphat (ΚΗ2Ρ04), 17; borsyre (H3B03)t 0,620; natriummolybdat (Na2Mo04.2H20), 0,025; (5) Na2FeEDTA: ferrosulfat (FeS04-7H20), 2784; ethylen-diamin- tetraeddikesyre, dinatriumsalt (Na2EDTA), 3724.
20
Til 1 liter fremstillet medium blev sat 10 ml af hver af de fem ovenstående stamopløsninger.
Udskæring oa inokulerina af skudapekser 25
Efter en uges spiring blev skudapekser udskåret fra planterne, der var spiret i henhold til den ovenfor beskrevne procedure. Skudapekserne havde en størrelse på 0,3 x 0,6 mm og bestod af det apikale afrundede område og to primærblade. De udskårne skudapekser blev derpå dyrket på de ovenfor be-30 skrevne Murashige og Skoog-salte, hvortil var sat følgende komponenter 0,1 6 DK 176062 B1 mg/l N6-benzyladenin, 30 000 mg/l sucrose og 2 000 mg/l gel-rite fra KC Biological, Kansas City, MO.
Efter to dages dyrkning blev isolerede skudapekser inokuleret med en 5 μΙ 5 dråbe Agrobacterium tumefaciens-suspension beskrevet nedenfor. Pladerne henstod åbne, indtil dråben var tørret. Dyrkningspladen med skudapekserne blev derpå forseglet og inkuberet i to døgn ved 25 °C med en lys-/mørkeperiode på 16:8 timer.
10 Fremstilling af A. tumefaciens til inokulerina
Den til inokulering af skudapekserne anvendte Agrobacterium-suspension blev fremstillet som følger: En binær vektor pRGUS2 blev fremstillet af dr.
Terry Thomas, Texas A&M University, ved at klone et BamHI-Sstl-15 restriktionsfragment indeholdende området, der koder for β-glucuronidase (GUS), isoleret fra pGUS1, ind i polylinker-stedet i pROK2, en udtrykkel-sesvektor afledt fra pROK1(20) ved indsættelse af en polylinker. Herved placeredes GUS-genet mellem CaMV 35S-promotoren og nopalin-synthase-polyadenyleringssignalet i T-DNA’et. pRGUS-plasmidet blev konjugeret fra E.
20 coli stamme HB101 over i den avirulente A. tumefaciens-stamme LBA 4404 som beskrevet af Simpson et al., Plant Mol. Biol. 6:403-415. Resultatet var en A. tumefaciens-stamme, som indeholdt generne for kanamycin-resistens og for β-glucuronidase. Dette tillod nem differentiering og detektering af transformerede væv.
25 A. tumefaciens LBA 4404 (pRGUS2) blev dyrket i et medium, der var fremstillet som følger: Der blev fremstillet en 100 ml saltopløsning indeholdende 3,9 g dibasisk kaliumphosphat.3H20, 1 g natrium monobasisk phosphat, 1 g NH4CI2 og 0,15 g kaliumchlorid. Saltopløsningen blev derefter autoklaveret 30 ved 121 °C og ca. 124 kPa i 15 minutter. Der blev fremstillet en separat 900 ml medieopløsning indeholdende 0,59 g/l sucrose, 13 mg calciumchlorid, 0,5 7 DK 176062 B1 g/l magnesiumsulfat, 10 μΙ ferrisulfat-stamopløsning (250 mg/ml Fe-SO4.7H2O). Hvor bakterien blev dyrket i stamkulturer, tilsattes 15 g agar tii medieopløsningen, ved suspensions- eller flydende kulturer blev agar udeladt. Medieopløsningen blev derpåautoklaveret i 25 minutter og afkølet. Salt-5 og medieopløsningeme blev derpå kombineret og 50 mg kanamycin sat til mediet. A. tumefaciens LBA 4404 (pRGUS2) blev dyrket på 3 ml medium i 2 dage. Mediet og dyrket A. tumefaciens blev derpå anvendt til inokulering af skudapekserne som beskrevet ovenfor.
10 Selektion oa kloning af transformerede apekser
Efter inokulering og inkubation blev skudapekserne overført til frisk medium indeholdende Murashige og Skoog-saltene beskrevet ovenfor med 0,1 mg/l N6-benzyladenin, 30 000 mg/l sucrose og 2 000 mg/l gel-rite og dyrket i yder-15 ligere to dage. Skudapekserne blev derpå subkultiveret på et medium indeholdende Murashige og Skoog-salte som beskrevet ovenfor, 0,1 mg/l N6-benzyladenin, 30 000 mg/l sucrose, 2 000 mg/l gel-rite, 200 mg/l kanamycin og 500 mg/l carbenicillin, (sidstnævnte opnået fra Sigma, St. Louis. MO).
20 Efter tre ugers inkubation var alle eksplantaterne vokset. Ikke-transformerede væv udviste afblegning i nærvær af mediet indeholdende 200 mg/l kanamycin. Transformerede skud fremstod som grønne områder ved basis af afble-gede blade. De afblegede blade blev derpå fjernet og det grønne væv rekul-tiveret på medium indeholdende 100 mg/l kanamycin. Grønne enkeltskud 25 udvikledes fra eksplantaterne efter 1 uge og blev overført til roddannende medium indeholdende Murashige og Skoog-salte, 3% sucrose, 100 mg/l kanamycin og 500 mg/l carbenicillin. Alle eksplantaterne udviste roddannelse.
Rodplanterne blev derpå undersøgt ved assay for tilstedeværelsen af GUS-30 genet på følgende måder. Ca. 50 mg plantevæv blev homogeniseret i et Ep-pendorf-rør med en pistil i 200 μΙ 50 mM NaP04, pH 7,0, 10 mM EDTA, 0,1% 8 DK 176062 B1
Triton X-100 (Sigma Chemical), 0,1% Sarkosyl (Sigma Chemical), 10 mM β-mercaptoethanol. 100 μΙ af ekstrakten blev sat til 100 μ! 2 mM 4-methyl-umbelliferil-glucuronid opløst i den samme buffer. Reaktionsblandingen blev inkuberet ved 37 °C i 5 timer og derpå standset med 1 ml 0,2 M Na2CC>3.
5 Dannelsen af methyl-umbelliferon blev kvantificeret med et Kontron spek-trofluorimeter med intervaller på en time. Resultatet af dette assay kan ses i figur 1.
EKSEMPEL 2 10
Sammenligning af skudapeks- og bladskivekultursystemer.
Der blev foretaget en sammenligning mellem bladskivekulturmetoden og skudapeksmetoden ifølge opfindelsen.
15 113 skudapekser fra Petunia hybrida cv. "Rose Flash" blev cokultiveret med A. tumefaciens og dyrket på selektivt medium som beskrevet ovenfor. Skud med grønne baser blev isoleret (tabel 1) og overført til medium indeholdende 100 mg kanamycin/l i 1 uge og derpå overført til roddannende medium som 20 beskrevet ovenfor.
Der blev også taget bladskiver fra Petunia hybrida cv. "Rose Flash", som blev transformeret ifølge proceduren beskrevet af Horsch et al., Science 227:1229 (1985). De selektive medier bestod af MS medium indeholdende 25 1,0 mg/l Ne-benzyladenin, 0,1 mg/l naphthalen-eddikesyre, 100 mg/l, 200/mg/l eller 300 mg/l kanamycin og 500 mg/l carbenicillin. Tabel 1 angiver de opnåede resultater.
TABEL 1 DK 176062 B1 g
Bladskive Skudapeks
Kanamycin-5 koncentration (mg/l) 100 300 200
Kallusdannelse 13/28a (46%) 25/25 (100%) 3/113 (3%)
Skuddannelse 13/28 (46%) 0/25 (0%) 7/113 (6%) 10 Skud med roddannelse 2/13 (15%) - 5/7 (71%) GUS-positive planter 2/2 (100%) - 5/5 (100%) 15 a Antal oprindelige eksplantater.
Kallusdannelse ud fra bladskive-eksplantater var høj ved 100 og 300 mg ka-namycin/l (46% og 100%) og meget begrænset ud fra skudapeks-eksplantater (3%). Skuddannelse fra skudapeks-eksplantater dyrket på ka-20 namycin var lav (6%) i sammenligning med bladskive-eksplantater (46%).
Der var imidlertid større sandsynlighed for, at de skud, der blev dannet ud fra skudapeks-eksplantater, blev transformeret (71%), end dem, der var dannet ved bladskive-eksplantatet (15%).
25 Som det kan ses ud fra disse data, er den væsentligste forskel mellem de to teknikker den næsten universale regenerering af planter ud fra skudapekset. Lignende resultater kan opnås med eksplantater af laterale knopper.
Til bestemmelse af, om der dannedes kimære planter ved skudapek-30 seksplantat-metoden, blev der udført GUS-assays af den ovenfor beskrevne type på blade, støvdragere, frugtknuder og væv fra frøanlæg fra forskellige 10 DK 176062 B1 områder af GUS-positive planter. Alle de assay-undersøgte væv udviste GUS-genudtrykkelse.
EKSEMPEL 3 - Stabilitet af inkorporering.
5
Det vigtige punkt ved transformation af planter er stabil inkorporering af egenskaben i kimbanen og udtrykkelse i afkommet. Hvis dette sker, er spørgsmålet om den kimære natur af den primære transformant mindre vigtig.
10
Til bestemmelse af, om egenskaben med held var blevet overført til den næste generation i eksempel 2, blev blomster af GUS-positive planter selvbe-støvet. 307 frø fra 20 blomster af fire forskellige GUS-positive planter blev spiret som beskrevet ovenfor, og kimplanteme blev ved assay undersøgt for 15 GUS-aktivitet. Som vist i tabel 2 var ca. 90% af kimplanteme GUS-positive.
TABEL 2 11 DK 176062 B1 % Konfidens-
Antal udtrykkelse grænser
Plante Blomst frø GUS+ GUS- (GUS+/total) (95%) 1 1 15 14 1 93,3 (73-100) 2 15 14 1 93,3 (73-100) 3 15 14 1 93,3 (73-100) 4 15 13 2 86,7 (60-98) 5 15 15 0 100.0 (78-100)
Total 75 70 5 x =93,3 2 1 15 14 1 93,3 (73-100) 2 15 13 2 87,0 (60-100) 3 23 20 3 87,0 (65-100) 4 16 14 2 87,5 (61-100) 5 13 12 1 92,0 (58-100)
Total 82 73 9 x = 89 3 1 15 13 2 86,7 (58-98) 2 15 15 0 100,0 (78-100) 3 15 14 1 93,3 (73-100) 4 15 14 1 93,3 (73-100) 5 15 13 2 86J_ (60-98)
Total 75 69 6 x = 92 4 1 15 10 5 66,6 (37-88) 2 15 12 3 80 (52-97) 3 15 11 4 73 (43-93) 4 15 12 3 80 (52-97) 5 15 12 3 80_ (52-97)
Total 75 57 18 x = 76 x = gennemsnitlig værdi.
12 DK 176062 B1
Med henvisning til tabel 3 indikerede beregnede x2-værdier for udtrykkeisen af GUS-genet i afkommet hos én plante et 3:1 udspaltningsmønster af en monohybrid, hvilket indikerer indsættelse på et enkelt chromosom. χ2-5 værdier for tre af planterne indikerede et 15:1 udspaltningsmønster af dobbelt dominant dihybrid udspaltning, hvilket indikerer indsættelse af kopier på to uafhængige chromosomer.
TABEL 3 10
Udspaltningsforhold (3:1) (15:1) 15 X2a p χ2 p
Plante 1 13,44 <0,001 0,03 >0,80
Plante 2 9,84 <0,01 3,12 >0,05
Plante 3 11,56 <0,001 0,39 >0,5 20 Plante 4 0,04 >0,8 40,32 <0,01
Data beregnet med df=1, med et 95% konfidensniveau.
EKSEMPEL 4 25
Yderligere to petunia-kultivarer, V23xR51 fra T. Gerats og "White Flash" (Ft hybrid: Grandiflora x Pure White, Ball Seed, Co., Chicago, IL) blev transformeret under anvendelse af den ovenfor beskrevne skudapeksmetode. Som vist i tabel 4 opnås der ved transformation af disse sorter lignende resultater 13 DK 176062 B1 som dem fundet i tabel 1. Dette indikerer, at proceduren med lignende held kan bruges ved andre plantesorter.
Den transformerede Petunia hybrida sort V23xR51 blev selvbestøvet og frø-5 ene opsamlet og dyrket. Som vist i tabel 5 udviser 70% til 90% af afkommet GUS-aktivitet, hvilket tyder på, at genet med held var overført til den næste generation.
TABEL 4 10 Sammenligning af transformation af Petunia hybrida cv.
"V23xR51" og "White Flash" ved brug af bladskive- og skudapekssystemet som i eksempel 1
Bladskive Skudapeks 15 Kanamycin (mg/l) 100 300 200 V23xR51 20
Antal eksplantater 26 34 18
Kallusdannelse x3 14 0
Skuddannelse - 14 8
Skud med 25 roddannelse 9 8 GUS-positive planter_-_5_^_2_
White Flash 30
Antal eksplantater 30 33 102 kallusdannelse 30 12 0
Skuddannelse 0 11 10
Skud med 35 roddannelse - 11 4 GUS-positive planter_-_Vj_4_ 3 Meget stort antal skud, ikke optalt.
TABEL 5 14 DK 176062 B1
Udspaltning for GUS-genet i afkommet af selvbestøvede GUS+ planter af cv. ”V23xR51" som i eksempel 2 5
Plante Antal frø GUS(+) GUS(-) % udtrykkelse Ϊ 40 28 Ϊ2 700 2 40 36 4 90,0 10
Disse data sammenholdt med de i eksempel 3 viste data fremhæver en af de væsentlige egenskaber ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen - transformationen af kimcelleme såvel som af de somatiske celler i målplanten, hvilket tillader nedarvning af den nye egenskab i kommende generationer. Den 15 af andre anvendte teknik danner sterile planter, manglende evne til at transformere kimcelleme, eller en meget lavere procentdel af kimcelleme transformeres, hvilket resulterer i, at færre afkom udtrykker den ønskede egenskab.
20 x2-værdier for udtrykkeisen af GUS-genet i afkommet fra de transformerede "V23XR51"-planter indikerede en monohybrid 3:1 udspaltning, hvilket indikerer indsættelse på et enkelt chromosom. x2-værdier for den anden plante indikerede et 15:1 udspaltningsmønster med dobbelt dominant dihybrid udspaltning, hvilket indikerer indsættelse af kopier af GUS-genet på to uafhæn-25 gige chromosomer.
TABEL 6 15 DK 176062 B1
Evaluering af udspaltningsmønstret af GUS-udtrykkelse i afkom af transformerede planter af cv. ”V23xR51" 5
Udspaltningsforhold (3iT) (ϊδϋ) _x2a P_χ2 p_ 10 Plante 1 0,533 >0,30 : 38,5 <0,01
Plante 2 4,8 <0,05 0,96 >0,30
Data beregnet med df=1, med et 95% konfidensniveau.
15 EKSEMPEL 5
Transformation ved skudapeks har også været anvendt på bomuld, især Gossypium hirsutum, var. Coker 312. Tamcot CAB-CS. og Gossypium bar-badense, var. Pima 5-6. Trinnene, der blev anvendt, var de samme som be-20 skrevet ovenfor, dog med følgende variationer.
Frø blev desinficeret ved at skylle dem med destilleret vand i 10 minutter og derefter lagt i blød i 20% kommercielt blegemiddel med 1 dråbe Tween 20 i 15 minutter. Frøene blev derpå skyllet tre gange med sterilt vand.
25
Efter desinfektion blev frøene overført til sterile petriskåle med chalaza-enden nedad. Der blev anbragt 5 frø på hver skål. Pladerne indeholdt en opløsning, som indeholdt MS-halogenider og var størknet med 0,8% agar. Pladerne blev i uforseglet tilstand inkuberet i mørke ved 30 °C i 4 dage. Plader-30 ne blev derpå, i én dag før de blev isoleret, underkastet et regime med 16 timers dag.
16 DK 176062 B1
For at sikre, at skudapekseme blev udskåret fra planter på omtrent samme udviklingstrin, anvendtes de mest ensartede frøpopulationer. Langsommere spirende kimplanter eller kontaminerede kimplanter blev bortkastet.
5 Skudapekser fra 5 dage gamle kimplanter blev isoleret ved hjælp af et dissektionsmikroskop. I nogle tilfælde blev der til udførelse af dissektionen anvendt sterile kanyler, 22 og 27 gauge, monteret på et plastic nålehylster.
Apekset blev skåret ud ved først at fjerne et af de to kimblade ved dets basis.
10 Derpå fjernedes skudområdet fra kimplanten. Man trimmede derpå basis af skudområdet for at blotlægge den basale flade af det apikale meristem. Der blev også brugt en modifikation af denne teknik til fjernelse af det største blad og underliggende væv, hvorved den laterale flade af det apikale meristem såvel som den basale flade blotlægges.
15
Skudapekser isoleret fra 3-4 dage gamle kimplanter bestod af det meristematiske afrundede område og to kimblade. Hvor kimplanterne var ældre (5-7 dage) indeholdt apekseme ofte mere end de to bladanlæg.
20 De isolerede apekser blev derpå dyrket på et basalt MS-medium (beskrevet nedenfor) uden hormoner ved 28-30 °C med en 16-timers fotoperiode. Der blev tilvejebragt lys ved at anvende en kontinuation af Gro-Lux® og køligt fluorescerende lys ved 50 pE/m2sek. Apekseme blev rekultiveret på frisk medium.
25
Mediet indeholdt basal MS-saltformulering beskrevet af Murashige og Skoog (Murashige og Skoog, 1962, ovenfor) med tilsætning af følgende: sucrose, 15 000 mg/l; thiamin, 6,4 mg/l; TC agar, 8 000 mg/l. Mediet blev før brugen steriliseret ved standard autoklaveringsmetoder og udhældt i sterile petriskå-30 le.
DK 176062 B1 ; 17
Apekseme blev inokuleret med Agrobacterium tumefaciens inden for to dage efter udskæringen. Inokulering blev udført ved at skrabe bakterierne fra dyrkningspladen og påføre denne plak på skårne overflader af skudapekserne ved brug af enten en kanylenål eller en tandstikke.
5
Apekseme blev inokuleret med én ud af to A. tumefaciens-stammer. Den første er stamme LBA 4404 "GUS2" beskrevet ovenfor. Den anden er stamme EHA1, som indeholder et lignende Ti-plasmid som GUS2. Dette plasmid blev indsat i EHA1-stammen og benævnt "GUS3" af dr. T. McKnight, Texas 10 A&M University. Stamme EHA1 antages at indeholde et hypervirulent område, som forøger størrelsesordenen af A. tumefaciens-værter.
Ud over anvendelsen af A. tumefaciens stamme EHA1 blev følgende tilsætningsstoffer brugt for at fremme vellykket infektion: acetosyringon, 10-30 μΜ, 15 og nopalin, 10-100 μΜ. (Veluthambi et al., indleveret).
Efter to dages kontakt med A. tumefaciens blev eksplantateme overført til medium indeholdende 500 mg/l carbenecillin i én uge. Eksplantateme blev derpå overført til medium indeholdende 7,5 mg/l kanamycin og 500 mg/l car-20 benecillin i endnu en uge. Til slut blev eksplantateme en gang om ugen overført til medium indeholdende 500 mg/l carbenecillin.
Når skuddene indeholdt 4 blade eller derover, blev skudbaseme dyppet i steril rootone og overført til sterilt vermiculit i ca. 7,5 cm lerpotter og dækket til.
25
Eksplantateme og småplanterne blev som ovenfor beskrevet ved assay undersøgt for GUS-genet og fandtes at være GUS-positive.
18 DK 176062 B1 EKSEMPEL 6
Solsikke, Heleanthus annus, var. Triumph 560.
Frø blev spiret, skud isoleret og inkuberet med A. tumefaciens EHA1, aceto-5 syringon og nopalin (1) under anvendelse af procedurerne beskrevet for bomuld, men med følgende modifikationer. Frøene blev inkuberet i 2-3 dage før isolering af skud. Det for bomuld beskrevne basalmedium blev suppleret med 1 mg/l IAA (indoleddikesyre).
10 Fire solsikkeplanter blomstrede og dannede frø. Disse frøblev bragt til spiring, og mange af kimplanteme herfra var GUS-positive.
EKSEMPEL 7 15 Sojabønne, Glycine max, var. Dowling & Bragg.
Steriliserede planter fik lov at spire i 1 dag, hvorpåkimknoppen blev udskåret og dyrket som beskrevet ovenfor. Der opnåedes også skudapekser fra frø, der havde fået lov at trække vand i 1 time.
20 Der anvendtes samme dyrkningsmedier som for bomuld med undtagelse af, at de til skudkultivering anvendte medier blev suppleret med 0,1 mg/l kinetin for at fremme væksten af apekseme, og der tilsattes 1,0 mg/l kinetin for at fremme adventiv skuddannelse.
25 Cokultivering med A. tumefaciens EHA1, nopalin og acetosyringon var den samme som for bomuld ovenfor.
Efter 2 dages cokultivering med Agrobacterium blev eksplantaterne overført til medier indeholdende 25 eller 50 mg/l kanamycin ocj 500 mg/l carbenicillin i 30 1 uge. Eksplantaterne blev derpå overført til hormonfrit medium med 500 mg/l carbenicillin.
19 DK 176062 B1
Der sås spontan roddannelse i mange af eksplantateme dyrket på medium indeholdende carbenicillin. De eksplantater, hvor der ikke sås rødder, blev dyppet i steril rootone. Planterne blev derpå aseptisk overført til sterilt vermi-culit i ca. 7,5 cm lerpotter og dækket til.
5
Et signifikant antal skud fandtes at være GUS-positive ved dyrkning i kultur.
Af de kimplanter, der overlevede overførsel til jord, var alle GUS-positive.
EKSEMPEL 8 10
Lucerne, Medicago sativa var. Southern Special.
Frø blev spiret og skud isoleret som beskrevet for bomuld. Væv blev cokulti-veret med A. tumefaciens EHA1, acetosyringon og nopalin.
15 Der blev dannet adskillige GUS-positive væv in vitro og 10 planter etableret i potter. Ud af disse var mindst fire GUS-positive.
EKSEMPEL 9 20 Majs (varietet Funks 6-90) og hvede (varietet Chinese spring) blev skyllet med destilleret vand i 10 minutter, lagt i blød i 20% kommercielt blegemiddel indeholdende én dråbe Tween 20 i 15 minutter og skyllet tre gange i sterilt vand. De desinficerede frø blev overført til medium, som indeholdt MS-halogenider og sulfater og var størknet med 0,8% agar. Frøenes embryonal-25 område blev anbragt i kontakt med agar. Uforseglede plader blev inkuberet i mørke ved 30 °C i én dag.
Skudapekser blev isoleret ved hjælp af et dissektionsmikroskop. Bladet og det underliggende væv blev bortskåret til blotlæggelse af den laterale flade af 30 det apikale meristem såvel som af den basale flade.
DK 176062 B1 20
Isolerede apekser blev dyrket på et basalt MS-medium uden hormoner. Væv blev rekultiveret på frisk medium en gang om ugen. Mediet bestod af den basale MS-saltformulering (Murashige og Skoog, 1962) og de følgende (i mg/l): sucrose 15 000; thiamin 0,4; TC agar 8 000. Mediet blev steriliseret 5 ved autoklavering under standard betingelser og dispenseret i sterile plastic petriskåle. Kulturerne blev holdt ved 28-30 °C i 16 timer under anvendelse af en kombination af Gro-lux og køligt hvidt fluorescerende lys, 50 pE/m2sek.
Skudspidseksplantater blev enten inokuleret samme dag, som de blev isolert, 10 eller en til to dage efter isolering. Der blev anvendt Agrobacterium tumefa-ciens, stamme EHA1, indeholdende "GUS3"-konstruktionen fra dr. Tom McKnight. Denne stamme antages at indeholde et hyperaktivt virulensområde, som kan øge størrelsesordenen af arter, der kan inficeres (og transformeres) af denne stamme (Tom McKnight, meddelt personligt). Agrobacteria blev 15 skrabet fra en konfluent plade, inokuleret 2-3 dage tidligere, indeholdende passende vækstmedium og antibiotikum. De skårne overflader af skuddene blev inokuleret med Agrobacterium med en steril kanylenål eller steril tandstikker.
20 Udover anvendelsen af den hypervirulente "GUS3"-stamme af Agrobacte-rium tumefaciens, blev nopalin og acetosyringon blandet med Agrobacterium før inokuleringstrinnet for at forøge virulens og udløse andre responser forbundet med vellykket infektion.
25 Efter to dages kontakt med Agrobacterium blev eksplantateme overført til medium indeholdende 500 mg/l carbenicillin i én uge, derpå overført til medium indeholdende 7,5 mg/l kanamycin og 500 mg/l carbenicillin i én uge og til slut med ugentlige intervaller overført til nyt medium indeholdende 500 mg/l carbenicillin.
Fremkomne majs- og hvedeskud slog spontant rødder efter 2-3 uger.
30 21 DK 176062 B1
Som beskrevet i Ulian et al., 1988 indeholder majs og andre enkimbladede tilsyneladende et enzym, der spalter GUS-substratet og derved frembringer en svag, positiv reaktion. Dette svage GUS-positive respons i enkimbladede er derfor ikke tegn på vellykket transformation. Et stærkt GUS-positivt re-5 spons, såsom det er observeret ved nogle af majs- og hvedevævene, kan være tegn på vellykket transformation.
DNA blev ekstraheret ifølge Rogers og Bendich (Plant Molec. Biol. 5:69-76 (1985)), restriktionsskåret med Hindlll (Boehringer Mannheim Inc.) ifølge fa-10 brikantens angivelser og separeret ved elektroforese natten over. Overførsel af DNA fra gel til nylonfilter blev udført i henhold til Southern (J. Molec. Biol.
98:503 (1975)) ved brug af den alkaliske overførselsmodifikation ifølge Reed og Mann (Nucleic Acid Res. 13:7207-7221 (1985)). DNA blev hybridiseret til 32P-mærket GUS-sonde bestående af den tidligere beskrevne 35S-promotor-, 15 GUS-sekvens- og polyadenyleringskodende områder. Southern analyse af majsplanterne bekræftede vellykket transformation.

Claims (16)

1. Fremgangsmåde til transformation af plantevæv fra enkimbladede planter omfattende 5 a) dyrkning af udskåret skudmeristemvæv i et egnet vækstmedium, og b) inokulering af skudmeristemvævet med en egnet vektor, der kan transformere dette væv,
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvorved vævet er skudapekset udskåret fra en plante.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, hvorved skudapekset omfatter det apikale afrundede område og to eller flere primærblade udskåret fra planten. 15
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvorved vævet er en akselknop.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvorved vektoren er Agrobacterium tume-faciens. 20
6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvorved vektoren indeholder den genetiske kode for en selektionsegenskab eller markøregenskab.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, hvorved selektionsegenskaben er antibio-25 tisk resistens.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 5, hvorved Agrobacterium tumefaciens er stamme LBA 4404 omfattende en binær vektor indeholdende generne for kanamycinresistens og for β-glucuronidase. 30 DK 176062 B1 23
9. Fremgangsmåde ifølge krav 5, hvorved Agrobacterium tumefaciens er hy-pervirulent stamme EHA1 omfattende en binær vektor indeholdende generne for kanamycinresistens og for β-glucuronidase.
10. Fremgangsmåde ifølge krav 5, hvortil yderligere er føjet et trin til tilsæt ning af acetosyringon og en opin under transformationstrinet.
11. Fremgangsmåde ifølge krav 10, hvor opinen er nopalin.
12. Fremgangsmåde ifølge krav 1, som yderligere omfatter trinnene til: a) selektering for det transformerede plantevæv, og b) dyrkning af det transformerede plantevæv til inducering af rod vækst.
13. Fremgangsmåde til transformation af plantevæv fra enkimbladede planter omfattende: a) dyrkning af udskåret apikalt skudvæv i et egnet vækstmedium, b) inokulering af det apikale skudvæv med Agrobacterium tumefaciens til 20 transformation af vævet, c) selektering for det transformerede plantevæv, og d) dyrkning af det transformerede plantevæv til inducering af rodvækst.
14. Fremgangsmåde ifølge krav 13, hvortil yderligere er føjet et trin til tilsæt-25 ning af acetosyringon og en opin under transformationstrinnet.
15. Fremgangsmåde ifølge krav 13, hvorved Agrobacterium er stamme LBA 4404 eller hypervirulent stamme EHA1 omfattende en binær vektor indeholdende generne for kanamycinresistens og for β-glucuronidase. 30 24 DK 176062 B1
16. Plantevæv transformeret i henhold til fremgangsmåderne ifølge ethvert af kravene 1 til 15.
DK199002855A 1988-06-01 1990-11-30 Fremgangsmåde til at transformere plantevæv DK176062B1 (da)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US20156888A 1988-06-01 1988-06-01
US20156888 1988-06-01
US32266089A 1989-03-13 1989-03-13
US32266089 1989-03-13
PCT/US1989/002258 WO1989012102A1 (en) 1988-06-01 1989-05-23 Method for transforming plants via the shoot apex
US8902258 1989-05-23

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK285590D0 DK285590D0 (da) 1990-11-30
DK285590A DK285590A (da) 1991-01-31
DK176062B1 true DK176062B1 (da) 2006-03-06

Family

ID=26896880

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK199002855A DK176062B1 (da) 1988-06-01 1990-11-30 Fremgangsmåde til at transformere plantevæv

Country Status (12)

Country Link
US (1) US5164310A (da)
EP (1) EP0419533A1 (da)
JP (1) JP2996995B2 (da)
CN (1) CN1042638A (da)
AU (1) AU3756889A (da)
DK (1) DK176062B1 (da)
ES (1) ES2017024A6 (da)
IE (1) IE65516B1 (da)
IL (1) IL90440A (da)
NZ (1) NZ229340A (da)
PT (1) PT90709B (da)
WO (1) WO1989012102A1 (da)

Families Citing this family (174)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5350689A (en) * 1987-05-20 1994-09-27 Ciba-Geigy Corporation Zea mays plants and transgenic Zea mays plants regenerated from protoplasts or protoplast-derived cells
US5416011A (en) * 1988-07-22 1995-05-16 Monsanto Company Method for soybean transformation and regeneration
US6803499B1 (en) 1989-08-09 2004-10-12 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US5550318A (en) * 1990-04-17 1996-08-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US7705215B1 (en) 1990-04-17 2010-04-27 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US6946587B1 (en) * 1990-01-22 2005-09-20 Dekalb Genetics Corporation Method for preparing fertile transgenic corn plants
WO1991010725A1 (en) * 1990-01-22 1991-07-25 Dekalb Plant Genetics Fertile transgenic corn plants
US6329574B1 (en) 1990-01-22 2001-12-11 Dekalb Genetics Corporation High lysine fertile transgenic corn plants
US6777589B1 (en) 1990-01-22 2004-08-17 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US5484956A (en) * 1990-01-22 1996-01-16 Dekalb Genetics Corporation Fertile transgenic Zea mays plant comprising heterologous DNA encoding Bacillus thuringiensis endotoxin
US6025545A (en) * 1990-01-22 2000-02-15 Dekalb Genetics Corporation Methods and compositions for the production of stably transformed, fertile monocot plants and cells thereof
US6395966B1 (en) * 1990-08-09 2002-05-28 Dekalb Genetics Corp. Fertile transgenic maize plants containing a gene encoding the pat protein
US7060876B2 (en) 1992-07-07 2006-06-13 Japan Tobacco Inc. Method for transforming monocotyledons
DE69334225D1 (de) * 1992-07-07 2008-07-31 Japan Tobacco Inc Verfahren zur transformation einer monokotyledon pflanze
BR9306802A (pt) * 1992-07-27 1998-12-08 Pioneer Hi Bred Int Processo independente de genótipos para produção de planta de soja transgénica e processo de regeneração de plantas de soja a partir de nodos cotiledonais
US5320961A (en) * 1992-11-16 1994-06-14 Board Of Trustees Operating Michigan State University Method for asexual in vitro propagation of fertile corn plants
US6326527B1 (en) 1993-08-25 2001-12-04 Dekalb Genetics Corporation Method for altering the nutritional content of plant seed
US6281411B1 (en) 1993-08-25 2001-08-28 Dekalb Genetics Corporation Transgenic monocots plants with increased glycine-betaine content
US6118047A (en) * 1993-08-25 2000-09-12 Dekalb Genetic Corporation Anthranilate synthase gene and method of use thereof for conferring tryptophan overproduction
FR2709496B1 (fr) * 1993-08-30 1995-11-03 Limagrain Holding Groupe Procédé de production de plantes transgéniques, entièrement transformées en génération T0, à partir de méristèmes.
PT687730E (pt) * 1993-12-08 2007-07-02 Japan Tobacco Inc Método de transformação de plantas e vector para esse fim
DE69429012T2 (de) * 1993-12-09 2002-08-22 Texas A & M Univ Sys Transformation von musa-arten durch verwendung von agrobacterium tumefaciens
US5736369A (en) * 1994-07-29 1998-04-07 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Method for producing transgenic cereal plants
US6177614B1 (en) 1995-03-16 2001-01-23 Cold Spring Harbor Laboratory Control of floral induction in plants and uses therefor
ZA974176B (en) * 1996-05-16 1998-09-01 Univ North Texas A rapid in-vitro regeneration scheme of cotton (gossypium hirsutum l.) plants compatible with agrobacterium-mediated transformation
CZ86798A3 (cs) 1996-06-21 1999-03-17 Monsanto Company Fertilní transgenní rostlina pšenice, způsob její přípravy, buňky a semena této rostliny
US5981840A (en) 1997-01-24 1999-11-09 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for agrobacterium-mediated transformation
WO1998037212A1 (en) * 1997-02-20 1998-08-27 Plant Genetic Systems, N.V. Improved transformation method for plants
US7102056B1 (en) 1997-04-29 2006-09-05 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for plant transformation and regeneration
US6235529B1 (en) 1997-04-29 2001-05-22 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for plant transformation and regeneration
US6570068B1 (en) 1997-06-06 2003-05-27 Mississippi State University Methods for maize transformation coupled with adventitious regeneration utilizing nodal section explants and mature zygotic embryos
US6140555A (en) * 1997-06-06 2000-10-31 Mississippi State University Methods for maize transformation coupled with adventitious regeneration utilizing nodal section explants and mature zygotic embryos
US6183959B1 (en) 1997-07-03 2001-02-06 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Method for target site selection and discovery
US7161064B2 (en) * 1997-08-12 2007-01-09 North Carolina State University Method for producing stably transformed duckweed using microprojectile bombardment
EP1017268A1 (en) * 1997-09-24 2000-07-12 The Regents Of The University Of California Methods and compositions for transformation of cereals using cultured shoot meristematic tissue
EP1019517B2 (en) 1997-09-30 2014-05-21 The Regents of The University of California Production of proteins in plant seeds
WO1999019497A1 (en) 1997-10-10 1999-04-22 Yeda Research And Development Co. Ltd. Transgenic lemnaceae
IL137410A0 (en) 1998-02-19 2001-07-24 Cotton Inc A method for the production of transgenic plants using apical shoot tips
ES2160019B1 (es) * 1998-09-11 2002-05-01 Consejo Superior Investigacion Procedimiento para la propagacion vegetativa y transformacion genetica de tomate, pimiento y otras dicotiledoneas, mediante agrobacterium tumefaciens.
US6483013B1 (en) 1999-05-19 2002-11-19 Bayer Bioscience N.V. Method for agrobacterium mediated transformation of cotton
BR0113156A (pt) 2000-08-11 2003-07-08 Syngenta Participations Ag Método para produzir um planta dicotiledÈnea transformada, célula de planta transformada, cultura de múltiplos brotos, planta transformada, semente produzida pela planta transformada, método para produzir uma planta compreendendo um genoma de plastìdeo transformado, genoma de plastìdeo transformado, e, plastìdeo
AU2002245266A1 (en) * 2001-01-16 2002-09-12 Monsanto Technology Llc Novel mutilple shoot proliferation and regeneration system for plants
WO2002057407A2 (en) * 2001-01-17 2002-07-25 Avestha Gengraine Technologies Pvt. Ltd. Novel method for transgenic plants by transformation & regeneration of indica rice plant shoot tips
US20040172672A1 (en) * 2001-05-15 2004-09-02 Wilkinson Theresa C. Method for producing transgenic monocotyledonous plants
EP2390256A1 (en) 2001-05-30 2011-11-30 Agrisoma, Inc. Plant artificial chromosomes, uses thereof and methods of preparing plant artificial chromosomes
EP1455568A2 (en) * 2001-06-15 2004-09-15 The University Of Toledo Method for transformation of mono- and di- cotyledonous plants using meristematic tissue and nodal callus from dycotiledonous plants
US20030135891A1 (en) * 2001-12-04 2003-07-17 The Texas A&M University System Method of transforming intact plants
ATE509111T1 (de) * 2002-03-20 2011-05-15 Simplot Co J R Verfeinerte pflanzentransformation
US20050034188A1 (en) * 2002-03-20 2005-02-10 J. R. Simplot Company Refined plant transformation
US20060005282A1 (en) * 2002-04-23 2006-01-05 Activx Biosciences, Inc Production and use of salt tolerant and culture density tolerant organisms
CA2494626A1 (en) 2002-08-07 2004-03-04 Basf Plant Science Gmbh Nucleic acid sequences encoding proteins associated with abiotic stress response
WO2004022707A2 (en) * 2002-09-03 2004-03-18 The Regents Of The University Of California Method and compositions for transformation and regeneration of maize
EP2322633A3 (en) 2003-02-17 2011-08-17 Metanomics GmbH Preparation of organisms with faster growth and/or higher yield
WO2004081184A2 (en) 2003-03-07 2004-09-23 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Markerless transformation
EP1641930B1 (en) 2003-04-15 2011-06-29 BASF Plant Science GmbH Nucleic acid sequences encoding proteins associated with abiotic stress response and plant cells and plants with increased tolerance to environmental stress
BRPI0413118A (pt) 2003-08-01 2006-10-03 Basf Plant Science Gmbh construção de ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, processo para a produção de um polipeptìdeo, polipeptìdeo, anticorpo, tecido vegetal, material de propagação, material coletado ou uma planta, método para a avaliação de agonistas e antagonistas de uma atividade de um poliptìdeo codificado pela molécula de ácido nucleico, processo para a identificação de um composto que confere produção de produto quìmico fino aumentada em uma planta ou microorganismo, método para a identificação de um produto genético que confere um aumento na produção de produto quìmico fino em uma célula, método para a produção de uma composição agrìcola, composição, e, uso da molécula de ácido nucleico, do polipeptìdeo, ou da construção de ácido nucleico, ou do produto genético identificado
US7150993B2 (en) 2003-08-05 2006-12-19 Monsanto Technology Llc Method for excision of plant embryos for transformation
US7560611B2 (en) 2003-08-05 2009-07-14 Monsanto Technology Llc Method and apparatus for substantially isolating plant tissues
AU2005321630A1 (en) 2004-07-02 2006-07-06 Metanomics Gmbh Process for the production of fine chemicals
CN104178511A (zh) 2004-07-31 2014-12-03 梅坦诺米克斯有限公司 制备具有更快生长和/或更高产量的生物
CA2579927A1 (en) 2004-09-24 2006-03-30 Basf Plant Science Gmbh Plant cells and plants with increased tolerance to environmental stress
CN103289961A (zh) 2004-09-24 2013-09-11 巴斯福植物科学有限公司 编码与非生物性胁迫反应相关的蛋白质的核酸序列和环境胁迫抗性增加的植物细胞和植物
EP2096177A3 (en) 2004-12-17 2010-01-13 Metanomics GmbH Process for the production of lutein
CA2598792A1 (en) 2005-03-02 2006-09-08 Metanomics Gmbh Process for the production of fine chemicals
US20140199313A1 (en) 2005-03-02 2014-07-17 Metanomics Gmbh Process for the Production of Fine Chemicals
CN101203611B (zh) 2005-04-19 2013-08-14 巴斯福植物科学有限公司 控制基因表达的改良方法
EP2573179A1 (en) 2005-09-15 2013-03-27 CropDesign N.V. Plants having increased yield and method for making the same
WO2007039454A1 (en) 2005-09-20 2007-04-12 Basf Plant Science Gmbh Methods for controlling gene expression using ta-siran
US8853492B2 (en) 2005-11-07 2014-10-07 Cropdesign N.V. Plants having improved growth characteristics and a method for making the same
BRPI0618328A2 (pt) 2005-11-07 2011-09-20 Cropdesign Nv método para melhorar caracterìsticas de crescimento de planta em relação às plantas do tipo selvagem correspondentes, construção, célula hospedeira, método para produzir uma planta transgênnica, parte de planta ou célula de planta tendo caracterìsticas de crescimento de planta melhoradas em relação às plantas do tipo selvagem correspondentes, e, usos de uma construção e de um ácido nucleico
EP2166086A3 (en) 2005-12-01 2010-10-20 CropDesign N.V. Plants having improved growth characteristics and methods for making the same
US20090172834A1 (en) 2006-03-24 2009-07-02 Basf Plant Science Gmbh Proteins Associated With Abiotic Stress Response And Homologs
WO2007113237A2 (en) 2006-03-31 2007-10-11 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CA2644273A1 (en) 2006-04-05 2008-03-27 Metanomics Gmbh Process for the production of a fine chemical
EP2441839A1 (en) 2006-05-30 2012-04-18 CropDesign N.V. Plants with reduced expression of REVOLUTA (REV) having enhanced yield-related traits and a method for making the same
US20090300794A1 (en) 2006-05-31 2009-12-03 Metanomics Gmbh Manipulation Of The Nitrogen Metabolism
US20070283455A1 (en) * 2006-05-31 2007-12-06 Gray Dennis J Genetic Transformation of Grapevines
MX2008016047A (es) 2006-06-15 2009-05-22 Cropdesign Nv Plantas que tienen rasgos mejorados relacionados con el crecimiento y un metodo para obtener las mismas.
CN105087634A (zh) 2006-06-15 2015-11-25 克罗普迪塞恩股份有限公司 具有增强的产量相关性状的nac转录因子受调节表达的植物和用于产生该植物的方法
EP2543733A1 (en) 2006-08-02 2013-01-09 CropDesign N.V. Plants having improved characteristics and a method for making the same
EP2189533A1 (en) 2006-08-02 2010-05-26 CropDesign N.V. Plants having improved characteristics and a method for making the same
ATE497008T1 (de) * 2006-08-31 2011-02-15 Monsanto Technology Llc Verfahren zur herstellung transgener pflanzen
CN101589148B (zh) 2006-10-13 2014-07-02 巴斯福植物科学有限公司 产量提高的植物
WO2008059048A1 (en) 2006-11-16 2008-05-22 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same using consensus sequences from the yabby protein family
BRPI0718977A2 (pt) 2006-11-24 2014-02-04 Cropdesign Nv Método para aumentar rendimento de sementes em plantas em relação às plantas de controle, construção, uso da mesma, planta, parte de planta ou célula de planta, método para a produção de uma planta transgênica tendo redimento aumentado de sementes em relação às plantas de controle, planta transgênica, partes colhíveis de uma planta, produtos, e, uso de um ácido nucleico
WO2008071767A1 (en) 2006-12-15 2008-06-19 Cropdesign N.V. Plants having enhanced seed yield-related traits and a method for making the same
US8569575B2 (en) 2006-12-21 2013-10-29 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CA2674740A1 (en) 2007-01-30 2008-08-07 Cropdesign N.V. Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
AU2008209677B2 (en) 2007-01-31 2013-05-23 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and/or increased abiotic stress resistance, and a method for making the same
BRPI0806951A2 (pt) 2007-02-08 2014-05-06 Basf Plant Science Gmbh MOLÉCULA DE dsRNA, COLEÇÃO DE MOLÉCULAS DE dsRNA, PLANTA TRANSGÊNICA, E, MÉTODO DE PREPARAR UMA PLANTA TRANSGÊNICA.
AU2008220715B8 (en) 2007-02-28 2014-06-12 Crop Functional Genomics Center Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
US8044260B2 (en) 2007-03-09 2011-10-25 Monsanto Technology Llc Method of meristem excision and transformation
DE112008001044T5 (de) 2007-05-03 2010-09-02 Basf Plant Science Gmbh Pflanzen mit verbesserten Ertragsmerkmalen und Verfahren zu ihrer Herstellung
WO2008142036A2 (en) 2007-05-22 2008-11-27 Basf Plant Science Gmbh Plant cells and plants with increased tolerance and/or resistance to environmental stress and increased biomass production-ko
DE112008001452T5 (de) 2007-05-22 2010-12-16 Basf Plant Science Gmbh Pflanzen mit erhöhter Toleranz und/oder Resistenz gegen Umweltstress und erhöhter Biomasseproduktion
WO2008142163A2 (en) 2007-05-23 2008-11-27 Cropdesign N.V. Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
DE112008001730T5 (de) 2007-06-29 2010-06-02 Basf Plant Science Gmbh Pflanzen mit verbesserten Ertragsmerkmalen und Verfahren zu ihrer Herstellung
AR067633A1 (es) 2007-07-20 2009-10-21 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen rasgos aumentados relacionados con el rendimiento y un metodo para producirlas
AR067748A1 (es) 2007-07-31 2009-10-21 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen rasgos mejorados relacionados con el rendimiento y un metodo para obtenerlas
AU2008281698B2 (en) 2007-07-31 2014-02-20 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
DE112008002458T5 (de) 2007-09-14 2011-06-01 Basf Plant Science Gmbh Pflanzen mit erhöhten ertragsbezogenen Eigenschaften und Verfahren zur Herstellung derselben
MX2010002931A (es) 2007-09-18 2010-06-01 Basf Plant Science Gmbh Plantas con rendimiento incrementado.
DE112008002456T5 (de) 2007-09-21 2011-01-13 Basf Plant Science Gmbh Pflanzen mit erhöhtem Ertrag
ES2390523T3 (es) 2007-09-21 2012-11-13 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen características incrementadas relacionadas con el rendimiento y un método para elaboración de las mismas
US20110179526A1 (en) 2007-10-29 2011-07-21 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CN103773795A (zh) 2007-11-22 2014-05-07 克罗普迪塞恩股份有限公司 具有增强的产量相关性状的植物及其生产方法
MX2010005697A (es) 2007-11-26 2010-06-11 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen rasgos mejorados relacionados con el rendimiento y un metodo para obtenerlas.
BRPI0821748A2 (pt) * 2007-12-19 2019-09-24 Basf Plant Science Gmbh método para produzir uma planta com rendimento aumentado, molécula isolada de ácido nucleico, construção de ácido nucleico, vetor, processo para produzir um polipeptídeo, polipeptídeo, anticorpo, núcleo de célula de planta, célula de planta, tecido de planta, material de propagação, semente, pólen, progênie, ou uma parte de planta, ou uma planta com rendimento aumento, processo para a indentificação de um composto, método para a produção de uma composição agrícola, composição, polipeptídeo ou molécula de ácido nucleico, uso dos ácidos nucléicos, e, método para a indentificação de uma planta com um rendimento aumentado
AU2008339968A1 (en) 2007-12-20 2009-07-02 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
AU2008340002A1 (en) 2007-12-21 2009-07-02 Basf Plant Science Gmbh Plants with increased yield (KO NUE)
US20110209241A1 (en) 2008-01-25 2011-08-25 Basf Plant Science Gmbh Plants Having Enhanced Yield-Related Traits and a Method for Making the Same
MX2010009010A (es) * 2008-02-27 2010-09-09 Basf Plant Science Gmbh Plantas con mayor rendimiento.
CN102066568A (zh) 2008-04-16 2011-05-18 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物和用于产生该植物的方法
WO2009135810A1 (en) 2008-05-05 2009-11-12 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
US20110099669A1 (en) 2008-06-20 2011-04-28 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2304037A1 (en) 2008-06-26 2011-04-06 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
BRPI0915368B1 (pt) 2008-07-03 2019-01-15 Monsanto Technology Llc composição compreendendo glifosato ou um sal ou um ester de glifosato e método de controlar crescimento de planta
CN102143971A (zh) 2008-07-04 2011-08-03 巴斯夫植物科学有限公司 通过过表达编码tfl-1 样蛋白的多核苷酸而具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
BRPI0916207A2 (pt) 2008-07-17 2015-08-04 Basf Plant Science Gmbh Métodos para melhorar as características relacionadas com rendimento em plantas em relação às plantas de controle, e para produzir uma planta transgênica, construto, uso de um construto, planta, parte de planta ou célula de planta, planta trangênica, partes colhíveis de uma planta, produtos, uso de um ácido nucleico, molécula de ácido nucleico isolada, e, polipeptídeo isolado
EP2669379A3 (en) 2008-07-31 2014-03-19 BASF Plant Science GmbH Plants having modified growth characteristics and a method for making the same
CN103923892A (zh) 2008-08-19 2014-07-16 巴斯夫植物科学有限公司 通过在植物或其部分中提高或产生一种或更多活性具有提高产量的植物
EP2441773A1 (en) 2008-08-20 2012-04-18 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
US20110195843A1 (en) 2008-09-23 2011-08-11 Basf Plant Science Gmbh Plants with Increased Yield (LT)
BRPI0918991A2 (pt) 2008-09-24 2017-09-19 Basf Plant Science Gmbh Métodos para intensificar traços relacionados com o rendimento em plantas em relação ás plantas de controle, e para produzir uma planta transgênica, planta, parte de planta ou célula de planta, construção, uso de uma construção, partes colhíveis de uma planta, produtos, uso em um ácido nucleico, molécula de ácido nucleico isolada, e, polipeptídeo isolado
WO2010046423A2 (en) 2008-10-22 2010-04-29 Basf Se Use of sulfonylurea herbicides on cultivated plants
AR075466A1 (es) 2008-10-22 2011-04-06 Basf Se Uso de herbicidas tipo auxina en plantas cultivadas
AU2009306369A1 (en) 2008-10-23 2010-04-29 Basf Plant Science Gmbh A method for producing a transgenic cell with increased gamma-aminobutyric acid (GABA) content
EP2350289A1 (en) 2008-10-23 2011-08-03 BASF Plant Science GmbH Plants with increased yield (nue)
MX2011004785A (es) 2008-11-12 2011-06-16 Basf Plant Science Gmbh Plantas que tienen mejor tolerancia al estres abiotico y/o mejores rasgos relacionados con el rendimiento y un metodo para producirlas.
EP2373796A1 (en) 2008-12-03 2011-10-12 BASF Plant Science GmbH Plants having enhanced abiotic stress tolerance and/or enhanced yield-related traits and a method for making the same
WO2010069847A1 (en) 2008-12-17 2010-06-24 Basf Plant Science Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and/or abiotic stress tolerance and a method for making the same
WO2010086221A1 (en) 2009-01-28 2010-08-05 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CN102482333A (zh) 2009-02-25 2012-05-30 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
DE112010001805T5 (de) 2009-04-29 2012-09-06 Basf Plant Science Company Gmbh Pflanzen mit gesteigerten Ertragsmerkmalen und Verfahren zu deren Herstellung
WO2010124953A1 (en) 2009-04-29 2010-11-04 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
US20120096593A1 (en) 2009-05-06 2012-04-19 Yves Hatzfeld Plants Having Enhanced Yield-Related Traits And/Or Enhanced Abiotic Stress Tolerance And A Method For Making The Same
CN104762316A (zh) 2009-06-19 2015-07-08 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物和用于产生该植物的方法
AU2010275363A1 (en) 2009-07-23 2012-02-02 Basf Plant Science Company Gmbh Plants with increased yield
US8367913B2 (en) 2009-07-30 2013-02-05 Pioneer Hi-Bred International, Inc. Methods for increasing transformation frequency through the foliar application of copper amino acid chelate
WO2011020746A1 (en) 2009-08-19 2011-02-24 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EA201290168A1 (ru) 2009-09-25 2013-10-30 Басф Плант Сайенс Компани Гмбх Растения, обладающие повышенными урожайностными свойствами, и способ создания таких растений
WO2011036160A1 (en) 2009-09-25 2011-03-31 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
BR112012009566A2 (pt) 2009-10-22 2017-05-09 Basf Plant Science Co Gmbh plantas que possuem caracteristicas relativas a rendimento aprimoradas e método de sua elaboração
MX2012005508A (es) 2009-11-13 2012-07-23 Basf Plant Science Co Gmbh Plantas que tienen mejores rasgos relacionados con el rendimiento y un metodo para producirlas.
EP2501816A4 (en) 2009-11-17 2013-07-03 Basf Plant Science Co Gmbh PLANTS WITH INCREASED PERFORMANCE
AU2011219990A1 (en) 2010-02-24 2012-08-16 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
WO2011104155A2 (en) 2010-02-24 2011-09-01 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2361985A1 (en) 2010-02-26 2011-08-31 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2361927A1 (en) 2010-02-26 2011-08-31 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EA201290930A1 (ru) 2010-03-18 2013-04-30 Басф Плант Сайенс Компани Гмбх Растения с улучшенными характеристиками урожайности и способ их получения
CN103037682A (zh) 2010-03-18 2013-04-10 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物及其制备方法
AU2011228665A1 (en) 2010-03-19 2012-11-08 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and method for making the same
AU2011228664A1 (en) 2010-03-19 2012-11-08 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and method for making same
EP2371845A1 (en) 2010-03-22 2011-10-05 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
CA2801422A1 (en) 2010-06-24 2011-12-29 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and method for making the same
KR101429476B1 (ko) 2010-06-25 2014-08-22 바스프 플랜트 사이언스 컴퍼니 게엠베하 향상된 수확량 관련 형질을 갖는 식물 및 이의 제조 방법
AU2011277925A1 (en) 2010-07-16 2013-02-21 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and method for making the same
CN103154254A (zh) 2010-08-24 2013-06-12 巴斯夫植物科学有限公司 具有增强的产量相关性状的植物和产生该植物的方法
MX2013005236A (es) 2010-11-10 2013-06-28 Basf Plant Science Co Gmbh Plantas que tienen mejores rasgos relacionados con el rendimiento y un metodo para producirlas.
EP2665819A4 (en) 2011-01-20 2014-09-10 Basf Plant Science Co Gmbh PLANTS HAVING AMPLIFIED YIELD CHARACTERS AND PROCESS FOR PRODUCTION THEREOF
CA2826591A1 (en) 2011-02-28 2012-09-07 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and producing methods thereof
AU2012222999A1 (en) 2011-02-28 2013-09-19 Basf Plant Science Company Gmbh Plants having enhanced yield-related traits and producing methods thereof
BR112013022227A2 (pt) 2011-03-01 2017-09-19 Basf Plant Science Co Gmbh plantas possuindo características relacionadas ao rendimento melhoradas e métodos de produção das mesmas
CN102337295A (zh) * 2011-10-18 2012-02-01 甘肃省农业科学院蔬菜研究所 一种农杆菌介导的甜瓜苗端转化方法
CN102321563B (zh) 2011-10-24 2013-04-03 江南大学 一株拟无枝酸菌及利用其全细胞转化制备香草醛的方法
EP2677035A1 (en) 2012-06-22 2013-12-25 BASF Plant Science Company GmbH Plants having enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2816115A1 (en) 2013-06-17 2014-12-24 BASF Plant Science Company GmbH Plants having one or more enhanced yield-related traits and a method for making the same
EP2896698A1 (en) 2014-01-17 2015-07-22 BASF Plant Science Company GmbH Plants having one or more enhanced yield-related traits and a method for making the same
CA3124395A1 (en) 2018-12-20 2020-06-25 Basf Plant Science Company Gmbh Native delivery of biomolecules into plant cells using ionic complexes with cell-penetrating peptides
WO2021049388A1 (ja) * 2019-09-10 2021-03-18 株式会社カネカ 腋芽メリステムを用いた植物の改変方法
US11779020B2 (en) 2021-03-11 2023-10-10 LPC Naturals, LLC Honey-based rooting gel composition and method of preparing the same
CN114788495B (zh) * 2022-04-07 2023-04-14 南充市农业科学院 一种草莓茎尖无激素培养方法
CN114885837B (zh) * 2022-04-07 2023-04-25 南充市农业科学院 一种柑橘茎尖无激素培养方法
CN116103337B (zh) * 2023-04-12 2023-07-11 中国热带农业科学院三亚研究院 一种农杆菌介导的西番莲遗传转化方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4459355A (en) * 1982-07-12 1984-07-10 International Paper Company Method for transforming plant cells
IL83348A (en) * 1986-08-26 1995-12-08 Du Pont Nucleic acid fragment encoding herbicide resistant plant acetolactate synthase
EP0267159A3 (de) * 1986-11-07 1990-05-02 Ciba-Geigy Ag Verfahren zur genetischen Modifikation monokotyler Pflanzen
GB2211204B (en) * 1987-10-20 1992-05-20 Oji Paper Co Process for production of plant transformant

Also Published As

Publication number Publication date
CN1042638A (zh) 1990-06-06
IE65516B1 (en) 1995-11-01
IL90440A (en) 1996-10-16
WO1989012102A1 (en) 1989-12-14
AU3756889A (en) 1990-01-05
JPH03504800A (ja) 1991-10-24
IL90440A0 (en) 1990-01-18
US5164310A (en) 1992-11-17
DK285590D0 (da) 1990-11-30
IE891738L (en) 1989-12-01
PT90709A (pt) 1989-12-29
DK285590A (da) 1991-01-31
PT90709B (pt) 1995-07-18
JP2996995B2 (ja) 2000-01-11
ES2017024A6 (es) 1990-12-16
EP0419533A1 (en) 1991-04-03
NZ229340A (en) 1991-08-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK176062B1 (da) Fremgangsmåde til at transformere plantevæv
Horsch et al. Leaf disc transformation
Deo et al. Factors affecting somatic embryogenesis and transformation in modern plant breeding
Clarke et al. High-frequency transformation of Arabidopsis thaliana by Agrobacterium tumefaciens
CN101528934B (zh) 生产转基因植物的方法
AU2002213081B2 (en) Enhanced transformation and regeneration of transformed embryogenic pine tissue
García-Sogo et al. Efficient transformation of Kalanchoe blossfeldiana and production of male-sterile plants by engineered anther ablation
MX2007002083A (es) Metodos para regeneracion, transformacion y produccion de plantas de abelmoschus esculentus transgenica resistente a insectos.
CA2566868A1 (en) A method for producing direct in vitro flowering and viable seed from cotyledon, radicle, and leaf explants and plants produced therefrom
US8481319B2 (en) Compositions and methods for modulating oxidative burst in plant transformation
JP7121442B2 (ja) Ｔａｒａｘａｃｕｍ属植物の形質転換植物の製造方法
JP4463456B2 (ja) 葉柄移植片を使用する綿の高効率アグロバクテリア菌仲介形質転換
EP1745132B1 (en) Methods for high efficiency transformation and regeneration of plant suspension cultures
US20030046733A1 (en) Transformation of soybeans
AU720610B2 (en) Genetic transformation of trees
AU747514B2 (en) A method for the production of transgenic plants using apical shoot tips
Shiba et al. Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of highly regenerable cell suspension cultures in Dianthus acicularis
Balogun et al. Expression of mannose-binding insecticidal lectin gene in transgenic cotton (Gossypium) plant
Kuo et al. Correction to: Shoot regeneration process and optimization of Agrobacterium-mediated transformation in Sinningia speciosa
Lindsey et al. Regeneration and transformation of sugarbeet by Agrobacterium tumefaciens
Klocke et al. Somatic hybridisation as a potential tool for Pelargonium improvement
Yakandawala et al. Transient expression of uida reporter gene in regenerable callus tissues of Anthurium andraeanum lind. by agrobacterium mediated transformation
JP2012110274A (ja) 植物の遺伝子導入方法及び形質転換植物の作出方法
Abrie Regeneration and biotransformation of some members of the Cucurbitaceae.
Tang et al. Chapter V A two-step protocol for improving shoot regeneration frequency from hypocotyl explants of oilseed rape (Brassica napus L.) and its application for Agrobacterium-mediated transformation

Legal Events

Date Code Title Description
PUP Patent expired