DK157552B

DK157552B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af thieno (3,2-c) pyridinderivater

Info

Publication number: DK157552B
Application number: DK304183A
Authority: DK
Inventors: Daniel Aubert; Claude Ferrand; Jean-Pierre Maffrand
Original assignee: Sanofi Sa
Priority date: 1982-07-13
Filing date: 1983-07-01
Publication date: 1990-01-22
Also published as: HU187111B; IL69049A; FI832543A0; PL242965A1; PL142272B1; SG95287G; YU150683A; FI73218C; KR840005448A; IL69049A0; DK157552C; JPS5927895A; NZ204874A; SU1272994A3; MA19843A1; JPS64955B2; US4529596A; ES523943A0; DK304183A; ATE25384T1

Description

DK 157552 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogi fremgangsmåde til fremstilling af hidtil ukendte thieno [3,2-cJ pyridiner. De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser har følgende almene formel:

5 % C/Y

I (I)

_CH

i°

X

hvori Y betegner en OH-gruppe eller en OR-gruppe, hvori R er 15 en ligekædet eller forgrenet lavere alkylgruppe, eller Y betegner en gruppe med formlen

Ri /

N

20 \ R2

hvori Rj og R2 uafhængigt af hinaden betegner hydrogen eller en ligekædet eller forgrenet lavere alkylgruppe, eller Rj og R2 sammen med det nitrogenatom, hvortil de er knyttet, danner 25 en pyrrolidino-, morpholino-, piperidino- eller 4-benzyl-pi-perazinogruppe, og X betegner hydrogen, et halogenatom eller en lavere alkylgruppe, eller er additionssalte deraf med farmaceutisk acceptable uorganiske eller organiske syrer, hvis Y

/Rl 30 betegner en OR-gruppe eller N , eller med uorganiske XR2 baser, hvis Y betegner OH.

Disse forbindelser, der indeholder et asymmetrisk carbonatom, 35 kan eksistere i form af to enantiomerer.

Med lavere alkylgruppe skal især forstås en mættet Cj-C* hy-drocarbonkæde.

. ' DK 157552 B

z

De omhandlede forbindelser kan indgå i et terapeutisk middel, der især har en inhiberende virkning på blodpladeaggregation og en anti thrombose virkning, i hvilket middel den aktive bestanddel er et derivat med formlen (I) eller et additionssalt 5 deraf med en farmaceutisk acceptabel uorganisk eller organisk syre, hvis Y betegner grupperne OR eller

Ri / N , og med en uorganisk base, 10 \ R2 hvis Y er OH.

Forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen kan administreres oralt i form af tabletter, overtrukne tabletter, kapsler, 15 dråber, granulater eller sirup. Forbindelserne kan også bringes til at indgå i suppositorier til rektal administration eller i en injektionsopløsning til parenteral administration.

Hver enhedsdosis indeholder fordelagtigt fra 0,005 til 0,250 g 20 af et derivat fremstillet ifølge opfindelsen, idet den daglige doseringsbehandling varierer inden for et interval fra 0,005 g til 1,00 g aktiv bestanddel i overensstemmelse med patientens alder og alvorligheden af den lidelse, der skal behandles.

25

De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser er blevet sammenlignet med forbindelsen fremstillet ifølge eksempel 1 i DK-fremlæggelsesskrift nr. 136.651, som er et kommercielt produkt, hvis internationale navn er "Ticlopi- din" ifølge side 1351 i Merck Index fra 1983.

30

Nedenfor er vist en tabel med toksikologiske data og fire tabeller med farmakologiske resultater opnået ved de fire forsøg, der er omtalt sidst i beskrivelsen.

35

. . DK 157552B

3

Toksikologiske resultater

Eksempel nr. DL 50, i.v., Adfærd ved _ mus _200 mq/kq/3 dage p.o.

1 (*) {> 1200 i.p.) spontan aktivitet 5 2 220 tåles godt 3 - tåles godt 4 - tåles godt 5 203 tåles godt 6 - tåles godt 7 42 spontan aktivitet 8 57 tåles godt 10 9 - tåles godt 10 130 tåles godt 11 42 tåles godt 12 - tåles godt 13 109 tåles godt 14 - tåles godt 15 51 muskulær hypotoni 16 - tåles godt 15 17 - tåles godt 18 201 tåles godt 19 125 tåles godt 20 74 tåles godt 21 - tåles godt

Ticlopidin___55_ 20 (*) Undersøgelserne af subakut toksicitet gør det muligt at påvise, at forbindelsen er blottet for toksisk virkning.

- rotte, 4 uger (100, 200, 400, 800 mg/kg/dag p.o.) - bavian, 4 uger (50, 100, 200, 400 mg/kg/dag p.o.).

25 A.D.P.-induceret blodpladeaggregation ex vivo

Forbindelse Dosis Administra- Resulta- __mg/kg/dag ti onsve i__ter*__p**

Kontrolgruppe p.o. 6 +/- 0 30 Ticlopidin 300 " 6 +/- 1 n.s.

Kontrolgruppe " 14 +/- 2

Derivat nr. 1 25 " ' 91 +/- 4 0,001

Derivat nr. 1 12,5 " 80 +/- 7 0,001

Derivat nr. 15 " 34 +/- 6 0,05 35 ---J-- * Procent frie blodplader: middelværdi +/- gennemsnitlig statistisk afvigelse (n * 5) t-studenterforsøg.

DK 157552 B

4

Collageninduceret blodpladeaggregation ex vivo

Forbindelse Dosis Administra- Resulta- mg/kq/daq tionsvej__ter*__p**

Kontro l - gruppe p.o. 10,30 +/- 1,17 5 Ticlopidin 300 7,94 +/- 1,33 n.s.

Kontrolgruppe - " 2,62 +/- 0,17

Derivat nr. 1 12,5 ” 0,24 +/- 0,08 0,001

Derivat nr. 15 " 0,96 +/- 0,06 0,001 * Indledningsvis aggregationshastighed (stigende): middel værdi +/- gennemsnitlig statistisk afvigelse (n = 5) ** t-studenterforsøg.

Blødningstid målt for rotte 15 Forbindelse Dosis Administra- Resulta-

__mg/kg/dag tionsvei__ter (sek.)__P

Kontrolgruppe p.o. 600 (465-960)

Derivat nr. 1 25x1 dag " 1980 (1560- over 3600) 0,02

Kontrolgruppe " 735 (510-930) 20 Ticlopidin 200x1 dag " 720 (480-780) n.s.

Resultater i sekunder: median og afvigelse (n = 5} U-forsøg ifølge Hann og Whitney 25 SiIketråd-thromboseforsøg

Forbindelse Dosis Administra- Thrombe- For- __mq/kq/daq tionsvei__vægt_ skeII p

Kontrolgruppe p.o. 40,18±1,83

Derivat nr. 1 25x1 dag " 32,10±1,79 -20% 0,032 30 Kontrol- " 41,00±2,13 gruppe

Ticlopidin 200x1 dag " 39,8413,62 -3% n.s.

Resultater i mg, middelværdi ± gennemsnitlig statistisk afvigelse (n = 10) 35 U-forsøg ifølge Mann og Whitney

Disse resultater viser, at de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser og især forbindelse nr. 1,

DK 157552 B

5 som strukturelt er nærmest beslægtet med Ticlopidin, er aktive i meget lavere doser end Ticlopidin, medens deres toksicitet generelt er meget mindre.

5 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved, at man kondenserer 4,5,6,7-tetrahydro-thieno [3,2-c]-pyridin med følgende formel: i-NH (II) 10 med et α-chlorphenylacetat med følgende formel

Ov OR

16 \/ C\ (XXI)

CH

xO

x hvori R og X har de ovenfor anførte betydninger, til dannelse af en ester med formlen I, der om ønsket hydrolyseres til den tilsvarende syre med formlen I, som eventuelt efter akti-25 vering ved dannelse af et mere reaktionsdygtigt derivat af syren, omdannes til et amid eller en anden ester med formlen (I) ved behandling med ammoniak eller en amin med formlen /Rl 30

HN

\ R2 hvori Ri og R2 er som ovenfor defineret, eller med en alkohol R-OH, hvori R er som ovenfor defineret, men dog forskellig fra 35 Ri forbindelsen med formlen (III), hvorpå man eventuelt danner additionssalte af den opnåede forbindelse med formlen (I).

DK 157552 B

6

Prosser, Organic Syntheses, Coll. Vol. IV, J. Wiley and Sons, Inc. New York, 1963, side 169).

Selv om det er muligt at opnå alle esterne med formlen (I) ved 5 hjælp af omsætningen mellem forbindelserne med formlerne (II) og (III), foretrækkes det af økonomiske grunde at fremstille visse estere med formlen (I) udfra syren med formlen (I) og den tilsvarende alkohol (R-OH).

10 Kondensationen af tetrahydro-thieno-pyridinen med esteren med formlen (III) kan udføres i nærværelse af et alkalimetalcarbo-nat, såsom kaliumcarbonat, i et indifferent opløsningsmiddel, såsom dimethylformamid, tetrahydrofuran eller 1,2-dimethoxy-ethan, ved temperaturer mellem 60eC og opløsningsmidlets koge-15 punkt.

Hydrolysen af esteren med formlen (I), hvori R er methyl eller ethyl, kan foretages ved hjælp af et alkalimetalhydroxid, såsom natrium- eller kaliumhydroxid, i et vandigt- alkoholisk 20 opløsningsmiddel ved temperaturer mellem stuetemperatur og op løsningsmidlets kogepunkt.

Aktivering af syren med formlen (I) kan opnås ved behandling med ethylchlorformiat i nærværelse af et ringe overskud af 25 triethylamin ved temperaturer mellem -5’C og <TC i et Indifferent opløsningsmiddel, såsom chloroform, 1,2-dimethoxyethan eller tetrahydrofuran.

Et blandet anhydrid med føl9ende forme1·

30 -O

O o - 5 - O - Et %c/ (IV!

35 ksJY

DK 157552B

7 dannes, og hvis det behandles in situ med et ringe overskud af enten alkohol, ammoniak eller amln ved temperaturer mellem 10°C og stuetemperatur, vil der blive dannet henholdsvis esterne eller amiderne med formlen (I).

5

Aktiveringen af syren med formlen (I) kan også opnås på forskellige andre måder. Amiderne med formlen (I) blev således også fremstillet ved kondensation af syren (I) ammoniak eller 10 aminen

Ri /

NH

\ R2 15 i nærværelse af dicyclohexylcarbodiimid opløst i 1,2-dichlor-ethan.

Esterne med formlen (I) kan også opnås på konventionel måde ved kondensation af den tilsvarende syre og alkohol (ROH) i 20 nærværelse af hydrogenchloridgas eller thionylchlorid.

De følgende eksempler illustrerer nærmere fremgangsmåden ifølge opfindelsen.

^ ® Eksempel' 1;

Methyl-a-[4,5,6, 7^tetrahydro-thieno [3,2^-cJ -5-pyridyl] -ro-chlorphenylacetat (Y = X = 2-Cl), derivat nr. 1.

3,47 g (0,144 mol) methyl-a-chlor-o-chlorphenylacetat og 19,8 2 g (0,144 mol) kaliumcarbonat sættes til en 20 g (0,144 mol opløsning af 4,5,6,7-rtetrahydro-thieno[3,2-c]pyridin i 200 ml dimethylformamid. Opløsningen opvarmes derpå i 4 timer til 90°C. Reaktionsblandingen køles til stuetemperatur, de uorganiske salte filtreres fra, og opløsningsmidlet afdampes.

3 5

Resten optages i vand og ekstraheres derpå med ethylether. Etherekstrakterne vaskes med vand, tørres over natriumsulfat og inddampes til opnåelse af en gul olie, som renses via hydrochloridet deraf. Hvide krystaller med smeltepunkt 130-140°C (ethylacetat, isopropanol) i et udbytte på 45%.

Eksempel 2

V

DK 157552 B

8

Methyl-a- [4,5,6,7-tetrahydro-thieno [3,2-c] -5-pyridyl] 5 phenylacetat (Y = GCH^, X = H), derivat nr. 2.

Denne forhindelse fremstilles ved hjælp af den samme procedure som den i eksempel 1 beskrevne ved alkylering af 4,5,6,7 -tetrahydro-thieno [3,2-c]pyridinen med methyl-a-chlorphenylacetat. 10 Hydrochlorid; hyide krystaller med smeltepunkt 2Q0°C (ethanol) i et udbytte på 50%.

Eksempel 3 15 Methyl-a- [4,5,6,7-tetrahydro-thieno [3,2-c] -5-pyridyl] -o- fluor-phenylacetat (Y = OCH3, X = 2-F] , derivat nr. 3.

Denne forbindelse fremstilles ved hjælp af den samme procedure som den i eksempel 1 beskrevne ved alkyiering af 4,5,6, 20 7-tetrahydro-thieno 13,2-c]pyridin med methyl-a-ehlor-o-flour- phenylacetat. Hydrochlorid: hvide krystaller med smeltepunkt 100QC i et udbytte på 76,5%.

Eksempel 4 25

Et hyl-a- [4,5,6,7 —tetrahydro-thieno [3,2-c] —5-pyridyl] -o-methyl-phenylacetat (Y = 0-CH2-CH3, X = 2-CH3), derivat nr. 4.

Denne forbindelse fremstilles ved hjælp af den samme procedure som den i eksempel 1 beskrevne ved alkyiering af 4,5,6, 3 0 7-tetrahydro-thieno [3,2-c] pyridin med ethyl- Oi-chlor-o-methyl-phenylacetat.

Bisulfat: hvide krystaller med smeltepunkt 188-190°C (isopro- panol) i et udbytte på 54%, 3 5

Eksempel 5 a-[4,5,6,7-tetrahydro-thieno[3,2-c]-5-pyridyl]-o-chlorphenyl eddikesyre (Ύ =CH, X = 2-C1), derivat nr. 5.

DK 157552 B

9

En blanding af 157,9 g ethyl-a-[4, 5,6,7-tetrahydro-thieno [3,2-c]-5-pyridyl]-o-chlor-phenylacetat og 100 ml 30% natrium hydroxidopløsning i 6Q0. ml ethanol opvarmes under tilbagesva-5 ling i 2 timer og 30 min. Efter afdampning af ethanolen syrnes blandingen med iseddikesyre og ekstraheres med methylenchlorid. Den organiske fase vaskes med vand, tørres over natriumsulfat og inddampes derpå,

Efter rekrystallisation i vand isoleres produktet i monohydrat-form. Hvide krystaller med blødgøringspunkt 125°C (vand) i et udbytte på 46%.

Eksempel 6 15 a- [4,5,6,7~tetrahydrOTthieno [3,2-c] ?-5-pyridyl] ^phenyleddike-Syre (Y = OH, X = H) , derivat nr, 6.

Denne forbindelse fremstilles ved hjælp af proceduren beskrev 20 vet i eksempel 5 ved hydrolyse af ethyl-a-[4,5,6,7-tetrahydro- thieno[3,2-c]-5-pyridyl]-phenylacetat. Dette produkt renses via natriumsaltet. Hvide krystaller med smeltepunkt 210-215°C (ethanol, methanol), i et udbytte på 74%.

25 Eksempel 7 n-propyl-a-[4,5,6,7-tetrahydpo-thieno[3,2-c]-5-pyridyl]-o-chlorphenylacetat (Y = -O-c^-C^-CH^, X = 2-C1), derivat nr. 7.

30 En strøm af hydrogenchloridgas bobles gennem en lo g (0,0306 mol) opløsning af <x-[4,5,6,7-tetrahydro-thienp[3,2,-c]-5- pyridyl]-o-chlorphenyleddikesyremonohydrat (eksempel 5) i 12 timer i 100 ml n-propanol, der opvarmes under tilbagesvaling.

Blandingen inddampes, og resten optages i vand, gøres basisk 3 5 med natriumbicarbonat og ekstraheres med ethylether. Ether-ekstraterne vaskes med vand, tørres over natriumsulfat og inddampes til opnåelse af en gul olie, som renses via bisulfatet deraf. Hvide krystaller med smeltepunkt 146°C (rå) i et udbytte på 78%.

DK 157552 B

Eksempel 8 10 n-butyl-a-[4,5,6,7-tetrahydro-thieno[3,2-c]-5-pyridyl]-o-chlorphenylacetat (Y = OCI^-CH^-CH^-CH^, X = 2-C1) , derivat nr. 8.

5 Denne forbindelse fremstilles yed hjælp af proceduren beskre vet i eksempel .7 ved esterifikation af a-[4,5,6,7-tetrahydro-thieno [3, 2-c]-5-pyridyl]-o-chlorphenyleddikesyremonohydrat (eksempel 5) med en n-butanol« Der renses ved anvendelse af bisulfatet. Hvide krystaller med smeltepunkt 155°C i et ud-10 bytte på 79,5%.

Eksempel' 9

Isopropyls-[4,5,6,7-tetrahydro-thieno [3,2-c] -5-pyridyl] -o- chlorphenylacetat „„ /CH3 (R = -CH^ , X = 2-Cl) , ch3 ^ derivat nr. 9.

2 ml thionylchlorid sættes dråbevis til en 1 y (0,0031 mol) suspension af a-[4,5,6,7—tetrahydro-thieno[3,2-c]-5-pyridyl]-o-chlorphenyleddikesyremonohydrat_(eksempel 5) i 20 ml iso-propanol, der er kølet til -10°C. Reaktionsblandingen opvarmes 2Q derpå under tilbagesvaling i 6 timer. Efter inddampning op tages resten i vand, gøres basisk med natriumbicarbonat og ekstraheres med methylenchlorid. Den organiske fase vaskes med vand, tørres over natriumsulfat og inddampes. En faveløs harpiks opsamles og renses ved anvendelse af bisulfatet.

25 Hvide krystaller med blødgøringspunkt 140-15Q°C i et udbytte på 44%.

Eksempel 10

DK 157552B

11

Ethyl-a-[4,5,6,7-tetrahydro-thieno[3,2-c]-5-pyridyl]-o-chlorphenylacetat (R = -C^-CH^, X = 2-Cl), derivat nr. 10.

4,86 ml (0,051 mol) ethylchlorformiat sættes dråbevis til 5 en 15 g (0,046 mol) opløsning af α-[4,5,6,7-tetrahydro-thieno [3,2-c]-5-pyridyl]-o-phenyleddikesyremonohydrat (eksempel 5) og 7,12 ml (0,051 mol) triethylamin i 150 ml chloroform, der er kølet til en temperatur mellem -5°C og 0°C. Man lader derpå blandingen komme op på stuetemperatur og omrører den 1Q i 30 min. Reaktionsblandingen køles derpå til en temperatur på ca. 10°C, og 30 ml ethanol tilsættes dråbevis. Reaktionsblandingen omrøres yed stuetemperatur natten over og vaskes derpå med vand. Den organiske fase tørres over natriumsulfat og inddampes til opnåelse af en farveløs olie, som renses 15 via hydrobromidet. Hvide krystaller med smeltepunkt 180°C i et udbytte på 94%.

Eksempel 11 N,N-dimethyl-a- (4,5,6,7-tetrah.ydro-th.ienQ- (3,2-c) -5-pyridyl) -o-chlorphenylacetamid ^ CH3 20 (R = , X = 2-Cl) , ^-ch3 derivat nr. 11.

9,72 ml (0,102 mol) ethylchlorformiat sættes dråbevis til en 30 g (0,092 mol) opløsning af a-(4,5,6,7-tetrahydro-thieno (3,2-c)-5-pyridyl)-o-ch.lorphenyleddikesyremonohydrat og 14,24 m.' 25 (0,102 mol] triethylamin i 300 ml chloroform, der er kølet til en temperatur mellem -5°C og 0°C. Blandingen lades derpå komme op på stuetemperatur og omrøres i 30 min. Reaktionsblandingei %

DK 157552 B

12 køles derefter til en temperatur på ca. 10°C, og 4,57 ml (0,102 mol) dimethylamin tilsættes dråbevis i 60 ml chloroform, og blandingen omrøres ved stuetemperatur natten over.

Vand tilsættes, blandingen dekanteres, og den organiske fase 5 tørres over natriumsulfat og inddampes. En farveløs harpiks opsamles og krystalliserer derpå. Hvide krystaller med smeltepunkt 95-^100°C (isopropy lether I i et udbytte på 49%.

Eksempel 12 lH(2^chlorphenyll- (4,5,6,7-tetrahydro-^thieno (3,2-c) -5-pyridyl) -10 acetyl]-pyrrolidin (R = , X = 2-C1), derivat nr. 12.

Denne forbindelse fremstilles ved hjælp af proceduren beskre·'-vet i eksempel 11 ved kondensation af a~(4,5,6,7-tetrahydro-15 thieno (2,3-^o) -S^pyridyl] -o-chlorphenyleddlkesyremonohydrat med pyrrolidin. Hvide krystaller med smeltepunkt 130°C (iso-propylether) i et udbytte på 61,5%.

Eksempel 13 1- [ (2-chlorphenyl). - (4,5,6,7-tetrahydro-thieno (3,2 -c) -5 ^-pyri-20 dyl)-acetyl]-morpholin (R = ^ ' X = 2"C;L) ' derivat nr, 13, t

DK 157552B

13 2,67 g (0,031 mol) morpholin sættes til en 10 g (0,031 mol) opløsning af a-[4,5,6,7-tetrahydo-thieno (3,2-c)-5-pyridylΙο -chlorphenyleddikesyremonohydrat og 13,3 g (0,065 mol) dicyclohexylcarbodiimid i 100 ml 1,2-dichlorethan, og blandingen 5 omrøres ved stuetemperatur natten over. Blandingen inddampes og optages derefter i 2N saltsyre og ethylether. Efter fra-filtrering af det dannede dicyclohexylurinstof dekanteres filtratet, og den vandige fase gøres basisk med 2N natriumhydroxid og ekstraheres derpå med methylenchlorid. Den or-10 ganiske fase vaskes med vand, tørres over natriumsulfat og inddampes til opnåelse af en gul harpiks, der renses ved hjælp af hydrochloridhemihydra/tet deraf. Hvide krystaller med smeltepunkt 215-255°C (isopropanol) i et udbytte på 71%.

Eksempel 14 15 1-[ (2-chlorphenylI--(4,5,6,7-tetrahydro-thieno(3,2-c)-5-pyridyl) -acetyl] -·piper idin (R = \ , X = 2-Cl) , derivat nr. 14,

Denne forbindelse fremstilles ved hjælp af proceduren beskre-2Q vet i eksempel 13 ved kondensation af a-[4,5,6,7-tetrahydro- thieno (3,2-c)-5-pyridyl]-o-chlorphenyleddikesyremonohydrat med piperidin. Hvide krystaller med smeltepunkt 139°C (isopropanol) i et udbytte på 51,5%.

Følgende forbindelser blev fremstillet ved hjælp af fremgangs-25 måden beskrevet i eksempel 11; - [a-(4,5,6,7-tetrahydro—thieno(3,2-c)-5-pyridyl]-o-chlorphe-nylacetamid (R = -NH2f X = 2-C1), derivat nr. 15. Hvide krystaller med smeltepunkt 126-128°C (isopropylether - isopropanol) i et udbytte på 46%,

DK 157552 B

14 4- benzyl-l-[(2-chlorphenyl)"(4,5,6,7-tetrahydro-thieno(3,2-c)- 5- pyridyl)acetyl]-piperazin (R = ' X = 2~C1) ' derivat nr. 16.

Oxalat i form af hvide krystaller med smeltepunkt 178°C 5 (ethanol) i et udbytte på 82,5%.

Ν,Ν-dimethyl [a- (4,5,6,7-tetrahydro-thieno(3,2-c) -5-pyridyl) -o-fluorphenylacetamid /CH3 (R = -N^ , X = 2-F) , CH3 derivat nr. 17.

Syagt gulligt pulver med smeltepunkt 125°C (isopropylether-10 isopropanol) i et udbytte på 41%.

-Ν'-methyl-[α-(4,5,6,7-tetrahydro-thieno(3,2-c)-5-pyridyl)-ο-chlorphenylacetamid (R = NH-CH^, X = 2-C1), derivat nr. 18. Hvide krystaller med smeltepunkt 137°C (isopropanol) i et udbytte på 85,5%.

15 N-butyl[a-(4,5,6,7-tetrahydro-thieno(3,2-c)-5-pyridyl)-o- chlorphenylacetamid (R = -NH-(CH2)3-CH3, X = 2-C1), derivat nr. 19.

Hvide krystaller med smeltepunkt 101°C (isopropylether) i et udbytte på 65%.

Ν,Ν-dimethyl [a-(4,5,6,7-tetrahydro-thieno(3,2-c)-5-pyridyl)-20 phenylacetamid CH3 (R = -N ^ , X = H) , \ch3 derivat nr. 20.

OK 157552 B

15

Hvide krystaller med smeltepunkt 138°C (isopropylether) i et udbytte på 39%.

5 Ν,Ν-dimethyl [a-(4,5,6,7-tetrahydro-thieno(3,2-c)-5-pyridyl)-o^methylphenylacetamid

Ch3 (R = , X = 2-CH0) ,

10 J

ch;3 derivat nr. 21..

15 Hvide krystaller med smeltepunkt 119°c (hexan) i et udbytte på 15%.

Resultaterne af farmakologiske og toksikolpgiske forsøg, der er omtalt i det følgende, viser egenskaberne af derivaterne fremstillet 20 ifølge opfindelsen, både i henseende til toksicitet og tole- rans, samt derivaternes virkningsstyrker, især deres inhiberende Virkning på blodpladeaggregation og deres antithrombose virkning.

25

Toks ikolo gi sk under s øgel se

Forbindelserné fremstillet ifølge opfindelsen-udviser en fortrinlig tolerans og en lav toksicitet.

30

Endvidere viste forsøg, der blev udført med forskellige dyrearter med hensyn til akut, kronisk, subkronisk og forsinket toksicitet, ingen lokal eller generel reaktion og ingen forstyrelser eller unormaliteter ved de biokemiske, makroskopiske 35 og mikroskopiske undersøgelser, der blev udført under dette eksperiment.

DK 157552 B

16

Farmakologisk undersøgelse 1) Inhiberende virkning på brodpladeaggregation 5

Dette forsøg blev udført med rotter. Forsøgsforbindelsen blev administreret oral i form af en suspension i gummiarabicum til rotterne i løbet af en periode på 3 dage 48 timer, 24 timer og 2 timer før udtagelse af en blodprøve på 4 ml fra dyrerne under anvendelse af Renaud’s metode, idet blodprøverne blev udtaget fra dyrernes halsvener under bedøvelse. Det citratbehandlede blod blev benyttet til aggregationsbestemmelserne.

L5 a) Bestemmelse af A.D.P. ^'induceret blodpladeaggregation 2 ml citratbehandlet blod blev hurtigt udhældt i et lille bægerglas, der var anbragt i en magnetisk omrører udstyret med en magnetisk stang. Efter nogle få sekunders omrøring >ø blev 0,4 ml af en opløsning indeholdende 0,66 y g adenosin- diphosphat (ADP) pr. ml anbragt i bægerglasset. Efter 90 sek. omrøring blev to 0,5 ml blodprøver udtaget; 25 30 35

DK 157552B

17 - den første bley blandet med 0,5 ml af en EDTA-formaldehyde-opløsning t den andet blev blandet med 0,5 ml af en opløsning af EDTA alene.

5 Formålet med tilsætning af EDTA^formaldehyd. er at stabilisere blodet og således fiksere aggr©gationen, hvorimod EDTA alene forårsager desaggregation af alle blodpladeaggregaterne.

Efter henstand af blandingerne i 10 min. og centrifugering af de to blandinger ved lav hastighed i 5 min. til fraskillelse 10 af de røde blodlegemer, blev den ovenstående blodpladerige plasma (PRP) fjernet, fortyndet, og en blodpladetælling bley foretaget.

Intensiteten af aggregationen blev bestemt ved hjælp af følg*-ende forhold; 15 antal blodplader 1 EPTA-forimaldehyd x iq0s% ikke-aggregerede antal blodplader i EDTA blodplader

Den blodpladeaggregations inhiberende virkning af forsøgsforbindelsen forøges, når forholdet nærmer sig 100.

20 Resultaterne, der viser middelprocenten af ikke-aggregerede blodplader i grupper på 5 rotter (behandlede grupper og referencegrupper) er vist i tabel I.

18 DK 157552 B

I Referencegruppe .1 I - I 23 ^+ 15 I

10 I Derlvatnr. 1 1 3 x 2.5 | - I 56 + 17 I

I Referencegruppe | I - 1 8 + 0 I

I Derlvatnr. 10 | 3 x 25 | - I 66 + 2 I

I Derivat nr. 10 . | 3x12.5 | - | 49 + 11 | 15 i i i i i I Referencegruppe I 1-18^+11 I Derlvatnr. 10 | 3 x 10 | - \ 24+5 |

I Referencegruppe | 1 - 1 11 _+ 0 I

20 I Derivat nr. 9 I . 3 x 60 j - j 65 + 7 I

I Referencegruppe | . I - | 13 + 3 I

I Deri vat nr .4 J . 3 x 100 I - I 89 + 1 I

25 I Referencegruppe I I - I 3 1 1 I Derivat nr. 4 j 3 x 100 I - I 89 + 4 |

I Referencegruppe I I - j 4 _+ 0 I

I Derivat nr. 2 . I 3 x 100 | - | 72 + 12 I

30 I I II i

I Referencegruppe | I - 1 4 + 0 I

I Derivat nr.-12 .1 3 x 100 | - | 27 + 5 I

I Referencegruppe | I - | 2+0 I

35 I Derivat nr. 17 | 3 x 100 I - I 11 + 3 I

I I I I I

Administrationsvej

DK 157552 B

19 b) Bestemmelse af collagen induceret blodpladeaggr egat ion 0,10 ml af en opløsning indeholdende 10 μ g collagen pr. ml blev sat til 1,5 ml citratbehandlet blod. Under blandingens omrøring blev blodpladerne talt kontinuerligt.

5 Formindskelsen af antallet af frie blodplader med tiden blev kontinuerligt målt, og en kurve blev optegnet visende den indledningsvise aggregationshastighed.

Resultaterne, der repræsenterer middelværdier bestemt for hver gruppe på 5 rotter (behandlede grupper og reference 10 grupper) er vist i tabel II.

DK 157552 B

20 TABELH: Collagenforsøg" I Forbindelse_ Dosis mg/kg I Vej * I Resultat

j Referencegruppe j I P.0. I 3,12 + 0.47 I

I Derivat nr. 1 1 j 3 x 25 j - | 0,14 jf 0.03 |

5 j Referencegruppe j I - I 2,17 _+ 0.64 I

I Derivat nr. 1 J 3x5 I - I 0,19 + 0.04 I

i Referencegruppe j I - j 5,00 + 1.02 1 I Derivat nr. , 1 i j 3 x 2.5 | - I 0,60 + 0.20 1 10 I I I I “ i

I Referencegruppe j | - | 3,92 + 0.63 I

I Derivatnr. 10 j 3.x 25 | - j 0,16 _+ 0.07 |

I Deri vat nr. 10 j 3x12.5 I - I 0,54 + 0.12 I

15 1 Referencegruppe | I - i 2,00 + 0.35 j j Derivatnr. 7 j 3 x 100 | - | 0,66 +0.18 j

I Derivatnr. 8 j 3 x 100 j - j 0,86^0.18 I

I Referencegruppe I I - I 2,25 + 0.32 j 20 j Derivatnr. 9- I 3 x 60 j - | 0,11 + 0.01 i

i Referencegruppe ] I - i 3,41 0.55 I

I Derivatnr. 4 J 3 x 100 1 - | 0,12 + 0.02 I

25 I Referencegruppe | j - I 4,73 + 0.55 ! j Derivatnr. A f J 3 x 100 | - I 0,30 + 0.02 1

1 Referencegruppe } j . - | 5,00 + 1.06 I

j Derivatnr. 2 j 3 x 100 j - 1 0,51 + 0.18 | 30 j I II i

j Referencegruppe ! 1*1 2,25 0.32 I

I Derivatnr. 11 | 3 x 100 | - | 0,83 0.02 I

I Referencegruppe j I - j 2,77 + 0.32 I

35 I Derivatnr. 14'"." | 3 x 100 I - I 1^89 _+ 0.13 1

I Referencegruppe | 1-1 3,99 + 0.40 I

I Derivatnr; 17 .· | 3x100 I - I 2,22 + 0.10 I

40 I Referencegruppe j I - I 5,01 _+ 0.79 I

I Derivatnr. 21 j 3 x 100 1 - I 3,04^0.22 I

45 i_j_J_i__i ★ ’

Administrationsvej

DK 157552 B

21 c) Bestemmelse af blødningstid

Undersøgelsen af den blodpladeaggregatigns inhiberende virkning omhandlede også virkningen af forbindelsen fremstillet ifølge.opfindelsen på blødningstid.

5 Den benyttede metode er en tillempning af metoden ifølge L. Stella, M.B, Donati og G, de Gaetano, Thromb, Res,, 1975, 7, 709-716,

Forsøget blev udført med rotter, Forsøg^forbindelsen bley administreret til dyrerne pr. os suspenderet i 1Q rol/kg af 2^g en 5% vandig opløsning af gurnrauarabicum 65 timer, 41 timer og 17 timer før bestemmelsen. Efter bedøvelse af dyrerne med pentobarbital blev deres haler skåret oyer 5 mm f;ra enderne. Blodet blev omhyggeligt suget op med mellemrum på 15 sek.„ idet man sørgede for ikke at berøre såret.

2_5 Hæmostagls bley nået, når blødningen var standset i et minut,

Resultater repræsenterende middelblødningstider i sekunder, som blev bestemt for hver gruppe på 5 røtter (referencegrupper og behandlingsgrupper), er anført i tabel XXI, Tider på mere end 1200 sek., (20 min.) blev ikke optalt.

4 I

DK 157552 B

22 t

Tabel III: Blødningstid i Forbindelse- Doslb ntg/3cg Vej * | Resultat j

I Referencegruppe I I P.0. I 600 I

j Deri vat nr. 10 j 3 x 200 j - j 1 200 I

5 I Derivat nr. 2 | 3 x 200 | - j 1 200 |.

I Referencegruppe j I - i 420 I

I Derivatnr. 1 | 3 x 25 | - | 1 200 I

I Derivat nr.‘1 \ I 3 x 5 j ^ I 1 080 i

I Referencegruppe | I - I 435 I

10 I Oerivatnr. 1 I 3 x 12.5 | | 1 200 I

I Referencegruppe | I - j 780 I

I Derivatnr. 3 1 3 x 200 | - | 1 200 I

I Referencegruppe ( I - I 600 I

1 Derivat nr. 18 1 3 x 200 | - | 1 200 1

I I I I I

15 1 Referencegruppe I 1 - 1 600 | I Derivat nt. 12 I 3 x 200 1 I 1 200 j

I_!_I_j_I

*

Administratibnsvej 23

DK 157552 B

2) Antithrombo:se'virkninq

Denne virkning blev undersøgt med silketråd~thromboseforsøgs-metoden.

Princippet i denne undersøgelse er en tillempning af den 5 eksperimentelle thromhosemetode, der anvender cardiopulmo- nært omløb som beskrevet af Teruhiko Urnetsu og Kauzuko Sanai (Thromb. Haemost,, 39, 1, 19.781 ,

Dyrernes venstre halsvener og højre ydre hal spul sårer bley blottet (dyrerne blev bedøvet med en intraperitoneal ind-10 sprøjtning af pentobarbital),

Den arteriovenøse shunt består af et centralt kateter og tQ tværgående katetre. En hvid råsilketråd indføre? i den cen-trale del, og cirkulation genoprettes i 20 min. Efter stands^ ning af cirkulationen ved hjælp af klemning fjernes tråden 15 forsigtigt og vejes øjeblikkelig. Eftersom gennemsnitsvægten af en våd silketråd forinden var blevet bestemt, bestemmes thrombens vægt ved beregning af forskellen.

Behandlingen foretages 48 timer, 24 timer/ 2 timer før startten af blodstrømningen i shunten ved hjælp af Oral administra,~ 20. tion af forsøgsforbindelsen suspenderet i 10 ml/kg 5% gummi- arabicum, medens kun den 5% gummiarabicumopløsning administreres til referencegruppen. Resultaterne visende thrombens yægt i mg er anført i tabel IV.

DK 157552B

» 24 TABEL jy. Antithrombosevirkning |

- I

_ I

J J | ★ i Vægt af thrombe J % j i Forbindelse i Dosis mg/kg j Vej i i mg .Variaticj

5 I Referencegruppe I I P.O. | 38.56 _+2.42 | I

I Den vat.nr 8 j '3 x 200 j - j 29.99 + 3.05 | -22 I Referencegruppe I I - I 42.65 j+ 3.30 | j I Derivat nr. 3 | 3 x 200 | τ | 2.60 j* 0.24 | -94 10 | I li i I Referencegruppe | | - I 36.24 + 2.05 | I Derivat nr. 1 | 3 x 25 | - | 6.56 j+ 0.51 | -82 I Deri vat. nr. 1 | 3 x 12.5 | - | 15.98+1.81 | -56

I I .1 I I

15 I Referencegruppe |. I - I 40.86 ^2.02 | I Derivat nr. 1 | ' 3x5 i - | 27.7 ± 2.82 1 -32 I Referencegruppe I I — I 40.68 _+ 1.74 | I Derivat nr. 2 , | 3 x 200 | - | 8.42 + 3.28 | -79 20 I Derivat nr. 10 1 3 x 200 I - I 5.89 + 0.99 | -86 i 1 Referencegruppe | I - I 35.76 + 1.76 | | I Derivat nr. 11 ' j 3 x 200 | - | 21.38 + 2.92 | -40 25 ★

Administrationsvej i •.4

DK 157552 B

25

De ovenfor omtalte toksikologiske farmakologiske undersøgelser viser den lave toksicitet af forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen såvel som deres fortrinlige to-5 lerans og deres inhiberende egenskaber med hensyn til blod-pladeaggregation samt deres antithrombosevirkning, hvilket gør dem meget anvendelige til medicinsk-terapeutiske anven-elser.

10

Eksempler på farmaceutiske præparater indeholdende et derivat fremstillet ifølge opfindelsen er anført nedenfor.

1, Tabletter 15

Derivat nr. 1 .... 0/050 g

Ekscipiens: lactose/ flormelis, risstivelse, alginsyre, magnesiumstearat.

2. Overtrukne tabletter Derivat nr. 10 ... 0,100 g

Ekscipiens: magnesiumstearat, majsstivelse, gummiarabicum, shellac, hvis sukker, glycose, hvid yoks, carnaubavoks, paraffin, ny cochinealin.

25 3. Kapsler

Derivat nr. 17 ... 0,100 g

Ekscipiens: magnesiumstearat, majsstivelse, lactose 30 4. Injektionsopiøsning

Derivat nr, 4 ... 0,075 g

Isotoniskopløsningsmiddel, tilstrækkeligt .til fremstilling af 3 ml.

35 5. Suppositorier

Derivat nr. 21 .. 0,100 g

Halvsyntetiske triglycerider, tilstrækkeligt til fremstilling af 1 suppositorium.

Claims

1. Analogi fremgangsmåde til fremstilling af thieno [3,2-c] py-5 ridinderivater med formlen

0. Y (D CH ___ uO'p 15 hvori Y betegner en OH-gruppe eller en OR-gruppe, hvori R er en ligekædet eller forgrenet lavere alkylgruppe, eller Y betegner gruppen med formlen Ri 20 1 N \ R2 hvori Rj og R2 hver uafhængigt af hinanden er hydrogen eller en ligekædet eller forgrenet lavere alkylgruppe, eller R* og 25 R2 sammen med nitrogenatomet, hvortil de er knyttet, danner en pyrrolidino-, morpholino-, piperidino- eller 4-benzylpiperazi-nogruppe, og X betegner hydrogen, et halogenatom eller en lavere alkylgruppe, eller additionssalte deraf med farmaceutisk acceptable uorganiske eller organiske syrer, hvis Y betegner 30 en OR-gruppe eller Ri / N \

35 R2' eller med uorganiske baser, hvis Y betegner OH, kendetegnet ved, at man kondenserer 4,5,6,7-tetrahydro-thie-no(3,2-c)pyridin med følgende formel oGH (XII DK 157552 B 27 5 med et α-chlorphenylacetat med følgende formel °X?^R (III) i« x hvor R og X har de ovenfor anførte betydninger, til dannelse af en ester med formlen I, der om ønsket hydrolyseres til den 15 tilsvarende syre med formlen I, som eventuelt efter aktivering ved dannelse af et mere reaktionsdygtigt derivat af syren omdannes til et amid eller en anden ester med formlen (I) ved behandling med ammoniak eller en amin med formlen

20 R! / HN \ R2 hvori Ri og R2 er som ovenfor defineret, eller med en alkohol 25 R-OH, hvori R er som ovenfor defineret, men dog forskellig fra R i forbindelsen med formlen (III), hvorpå man eventuelt dan ner additionssalte af den opnåede forbindelse med formlen (I).

2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, 30 at kondensationsreaktionen mellem thienopyridinen med formlen (II) og esteren med formlen (III) udføres i nærværelse af et alkalimetalcarbonat i et indifferent opløsningsmiddel ved temperaturer mellem 60°C og opløsningsmidlets kogepunkt.

3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at hydrolysen af esteren med formlen (I), hvori R er methyl eller ethyl, udføres med et alkalimetalhydroxid i et vandigt-alkoholisk opløsningsmiddel ved temperaturer mellem stuetemperatur og opløsningsmidlets kogepunkt. r 28 DK 157552 B

4. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at syren med formlen (I) aktiveres med ethylchlorformiat i nærværelse af triethylamin ved temperaturer mellem -5°C og 0°C i et indifferent opløsningsmiddel, såsom chloroform, 1,2-dimeth- 5 oxyethan eller tetrahydrofuran.

5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at syren med formlen (I), der benyttes til fremstilling af amiderne, aktiveres med dicyclohexylcarbodiimid. 10

6. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at syren med formlen (I), der benyttes til fremstilling af esterne, aktiveres ved hjælp af en strøm af hydrogenchloridgas eller med thionylchlorid. 15 20 25 30 35