DK153335B - Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af alfa-amylase - Google Patents
Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af alfa-amylase Download PDFInfo
- Publication number
- DK153335B DK153335B DK372178AA DK372178A DK153335B DK 153335 B DK153335 B DK 153335B DK 372178A A DK372178A A DK 372178AA DK 372178 A DK372178 A DK 372178A DK 153335 B DK153335 B DK 153335B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- liter
- mmol
- glucose
- reagent
- amylase
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims description 47
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 43
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 title claims description 10
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 title claims description 9
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 title claims description 9
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 title claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 42
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 claims description 36
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 claims description 36
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 36
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 claims description 35
- BNABBHGYYMZMOA-AHIHXIOASA-N alpha-maltoheptaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H](O[C@@H]5[C@H](O[C@H](O[C@@H]6[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]6O)CO)[C@H](O)[C@H]5O)CO)[C@H](O)[C@H]4O)CO)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O BNABBHGYYMZMOA-AHIHXIOASA-N 0.000 claims description 34
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 claims description 31
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 claims description 31
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 22
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 22
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 22
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 21
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 20
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical group OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 15
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 14
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 14
- 108010057899 Maltose phosphorylase Proteins 0.000 claims description 10
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims description 9
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 9
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 8
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 claims description 8
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 claims description 8
- FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N UNPD130147 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(OC4C(OC(O)C(O)C4O)CO)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N malto-pentaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N maltopentaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N 0.000 claims description 8
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 8
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 claims description 7
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 claims description 7
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 7
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 7
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 claims description 7
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 claims description 7
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 claims description 6
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 6
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 5
- -1 3-methyl-6-sulfonyl-benzthiazolone hydrazone Chemical class 0.000 claims description 5
- BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 6-Phospho-D-gluconate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 0.000 claims description 5
- 101000935015 Emericella nidulans (strain FGSC A4 / ATCC 38163 / CBS 112.46 / NRRL 194 / M139) N-acetyl-6-hydroxytryptophan oxidase ivoB Proteins 0.000 claims description 5
- NEZJDVYDSZTRFS-RMPHRYRLSA-N Phenyl beta-D-glucopyranoside Chemical group O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1 NEZJDVYDSZTRFS-RMPHRYRLSA-N 0.000 claims description 5
- RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1O RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 5
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 108010021382 Gluconokinase Proteins 0.000 claims description 4
- 102100024009 Probable gluconokinase Human genes 0.000 claims description 4
- HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 4
- 229950010772 glucose-1-phosphate Drugs 0.000 claims description 4
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 claims description 4
- 150000008131 glucosides Chemical group 0.000 claims description 4
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 4
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 claims description 4
- RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 5-methylphenazinium methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 108090001003 Beta-phosphoglucomutases Proteins 0.000 claims description 3
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 claims description 3
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 claims description 3
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 claims description 3
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 claims description 3
- 108020001657 6-phosphogluconate dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004567 6-phosphogluconate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 claims description 2
- NFBQIWJDUKFHJP-SQOUGZDYSA-N (2r,3s,4r,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxy-2-phosphonooxyhexanoic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C(O)=O)OP(O)(O)=O NFBQIWJDUKFHJP-SQOUGZDYSA-N 0.000 claims 1
- 101001023866 Arabidopsis thaliana Mannosyl-oligosaccharide glucosidase GCS1 Proteins 0.000 claims 1
- 102100029236 Hexokinase-3 Human genes 0.000 claims 1
- 101710198398 Hexokinase-3 Proteins 0.000 claims 1
- 102000009569 Phosphoglucomutase Human genes 0.000 claims 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 claims 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims 1
- 108091000115 phosphomannomutase Proteins 0.000 claims 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims 1
- 239000011800 void material Substances 0.000 claims 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 21
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 19
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 16
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 9
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 9
- LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N UNPD55895 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N malto-tetraose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N maltotetraose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 9
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 8
- DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 32-alpha-galactosyl-3-alpha-galactosyl-galactose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(CO)OC(O)C2O)O)OC(CO)C1O DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N D-maltotriose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N mannotriose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N β-1,4-galactotrioside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N 0.000 description 6
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 4
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001450 Alpha-Cyclodextrin Polymers 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical compound [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010025880 Cyclomaltodextrin glucanotransferase Proteins 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N alpha-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO HFHDHCJBZVLPGP-RWMJIURBSA-N 0.000 description 3
- 229940043377 alpha-cyclodextrin Drugs 0.000 description 3
- GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N bromine Substances BrBr GDTBXPJZTBHREO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052794 bromium Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 3
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 239000005457 ice water Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710125031 6-phosphogluconate dehydrogenase, NAD(+)-dependent, decarboxylating Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100459440 Caenorhabditis elegans nac-3 gene Proteins 0.000 description 2
- FNZLKVNUWIIPSJ-UHNVWZDZSA-N D-ribulose 5-phosphate Chemical compound OCC(=O)[C@H](O)[C@H](O)COP(O)(O)=O FNZLKVNUWIIPSJ-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010020056 Hydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 2
- 241000178960 Paenibacillus macerans Species 0.000 description 2
- 108010073135 Phosphorylases Proteins 0.000 description 2
- 102000009097 Phosphorylases Human genes 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 2
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- OCIBBXPLUVYKCH-QXVNYKTNSA-N alpha-maltohexaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H](O[C@@H]5[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]5O)CO)[C@H](O)[C@H]4O)CO)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O OCIBBXPLUVYKCH-QXVNYKTNSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 244000309464 bull Species 0.000 description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 2
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- DJMVHSOAUQHPSN-UHFFFAOYSA-N malto-hexaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 DJMVHSOAUQHPSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 2
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 2
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 1,4-Dioxane Chemical compound C1COCCO1 RYHBNJHYFVUHQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 2-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006306 4-iodophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C([H])C([H])=C1I 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-M 4-nitrophenolate Chemical compound [O-]C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IFBHRQDFSNCLOZ-ZIQFBCGOSA-N 4-nitrophenyl alpha-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 IFBHRQDFSNCLOZ-ZIQFBCGOSA-N 0.000 description 1
- OLGGVYJRMKGTGP-UHFFFAOYSA-N 7-oxabicyclo[4.1.0]hepta-2,4-dien-6-ol Chemical compound C1=CC=CC2(O)C1O2 OLGGVYJRMKGTGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100033770 Alpha-amylase 1C Human genes 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 description 1
- 238000005727 Friedel-Crafts reaction Methods 0.000 description 1
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000188250 Idas Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 239000001358 L(+)-tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 101150057104 MCIDAS gene Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010029785 Pancreatic alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102100026367 Pancreatic alpha-amylase Human genes 0.000 description 1
- CYTYCFOTNPOANT-UHFFFAOYSA-N Perchloroethylene Chemical group ClC(Cl)=C(Cl)Cl CYTYCFOTNPOANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FNZLKVNUWIIPSJ-UHFFFAOYSA-N Rbl5P Natural products OCC(=O)C(O)C(O)COP(O)(O)=O FNZLKVNUWIIPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010026386 Salivary alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000001744 Sodium fumarate Substances 0.000 description 1
- 239000007980 Sørensen’s phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L barium dihydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[Ba+2] RQPZNWPYLFFXCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910001863 barium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 description 1
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 description 1
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003610 charcoal Substances 0.000 description 1
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 125000004395 glucoside group Chemical group 0.000 description 1
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 1
- 125000003147 glycosyl group Chemical group 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- NBTOZLQBSIZIKS-UHFFFAOYSA-N methoxide Chemical compound [O-]C NBTOZLQBSIZIKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 238000006396 nitration reaction Methods 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000006501 nitrophenyl group Chemical group 0.000 description 1
- RBXVOQPAMPBADW-UHFFFAOYSA-N nitrous acid;phenol Chemical class ON=O.OC1=CC=CC=C1 RBXVOQPAMPBADW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012434 nucleophilic reagent Substances 0.000 description 1
- 125000001209 o-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(*)=C(C([H])=C1[H])[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- ZKGFCAMLARKROZ-UHFFFAOYSA-N oxozinc;hydrate Chemical compound O.[Zn]=O ZKGFCAMLARKROZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 230000004203 pancreatic function Effects 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000009790 rate-determining step (RDS) Methods 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 1
- 239000012262 resinous product Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229950011008 tetrachloroethylene Drugs 0.000 description 1
- 238000006276 transfer reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 description 1
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 description 1
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/40—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/10—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases p-Nitrophenol derivatives
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
DK 153335B
Opfindelsen angår en fremgangsmåde til bestemmelse af a-amylase ved enzymatisk spaltning af et α-amylasesubstrat og måling af et spaltningsprodukt og et reagens til brug ved denne fremgangsmåde.
j Bestemmelsen af α-amylasespejlet i serum er en vigtig klinisk para= meter for bugspytkirtlens funktion. De i handelen værende reagenser til bestemmelse af α-amylase er overvejende baseret på et system, ved .hvilket stivelse nedbrydes af a-amylasen, og de dannede brudstykker bestemmes i det synlige område eller i UV-området, alt efter om man an-I vender farvet stivelse eller nativ stivelse som amylasesubstrat ved prøven. En væsentlig ulempe ved denne fremgangsmåde eller dette reagens
2 DK 153335 B
beror på, at stivelsen som makromolekyle kun kan karateriseres og standardiseres utilstrækkeligt, således at omsætningsgraden af de enkelte partier falder meget forskelligt ud, og at der ved målingerne altid må medføres en standard. For at opnå bedre resultater ville et mere 5 ensartet substrat være nødvendigt, som giver pålidelige resultater ved spaltningen.
Et skridt fremad i retning af et mere ensartet substrat gav anvendelsen af maltopentaose. Dette spaltes af a-amylasen til en maltotriose og mal= 10 tose, og maltotriose og maltose omdannes af α-glucosidase til glucose, som så kan bestemmes efter ønskede metoder, f.eks. med den kendte hexo= kinasemetode.
Foruden maltopentaose er også maltotetraose og maltohexaose foreslået 15 som substrat (amerikanske patenter nr. 3.879.263 og 4.000.042). Herved blev dog med tetraosen opnået tydeligt dårligere resultater end med pentaosen, og med hexaosen endnu dårligere resultater end med tetraosen. Således angives for maltotetraose og -pentaose endnu en støchiometrisk reaktion, medens der for hexaosen blev konstateret lige netop tolerer= 20 bare afvigelser fra den støchiometriske reaktion.
En ulempe ved maltopentaosen, der også haves ved tetraosen, er imidlertid, at der optræder en betydelig reagenstomværdi, dvs. at målereaktionen forløber allerede før den prøve, som skal bestemmes, tilsættes.
25 Hertil kommer, at også denne reagenstomværdi ikke er konstant ved højere substratkoncentrationer, men forandrer sig i mere end 25 minutter, før der fås konstans af denne sidereaktion. Det viste sig også, at den antagne forskellige spaltning af maltopentaosen med pankreas-a-amylase 30 og spyt-a-amylase, som havde muliggjort en adskillelse, faktisk ikke er til stede (J. BC, 1970, 245 3917 til 3927 J. Biochem. 51 p.XVIII 1952).
Det er derfor den foreliggende opfindelses opgave at tilvejebringe en 35 fremgangsmåde og et reagens til bestemmelse af α-amylasen, ved hvilke der anvendes et substrat, som har en bedre renhed og. ensartethed end de kendte substrater, er let tilgængeligt og med hensyn til tomværdi uden serum, varighed af LAG-fasen, dvs. den tid der går før der optræder en lineær kinetik, og opnåelig maksimal aktivitet tilfredsstiller kravene. Endvidere skal en simpel måling uden dyre og komplicerede 40 apparater være mulig, og egnethed til hurtige diagnostika, såsom prø-
3 DK 153335B
Ifølge opfindelsen løses denne opgave ved en fremgangsmåde til bestemmelse af a-amylase ved enzymatisk spaltning af et a-amylasesubstrat og måling af et spalteprodukt, 0g som er ejendommelig ved, at der som substrat anvendes en forbindelse med den almene formel I
CH2OH CH2°h HO OH OH 5 hvor R er en glucosid-, pbenylglucosid-, mononitrophenylglucosid-, sorbit- eller gluconsyregruppe.
Overraskende har det vist sig, at maltoheptaosen har overlegne egenskaber som substrat for a-amylasen, selv om der hos de til dette for- 10 mål allerede foreslåede oligomaltoser kunne konstateres et væsentligt fald i egnethed fra maltopentaose til maltohexaose, da der med den opnås væsentligt dårligere resultater end med pentaosen. Man skulle derfor have ventet, at med en yderligere forlængelse af maltose-oligosac-charidkæden ville der optræde fejl, som ikke mere kunne tolereres.
15 Overraskende opnås imidlertid bedre resultater end med pentaosen. Således er reagenstomværdien ved 0,02 ml prøve med maltopentaose som substrat 73%, med maltoheptaose derimod kun 13% beregnet på slutværdien af bestemmelsen i normalområdet.
20 Desuden viste det sig, at i stedet for maltoheptaose selv kan der også anvendes bestemte maltoheptaosederivater, som ved indvirkning af a-amylasen danner et derivatiseret spalteprodukt, som særligt fordelagtigt kan bestemmes.
25 Fremgangsmåden ifølge opfindelsen egner sig i særlig grad til bestemmelse af spalteprodukterne ved hjælp af α-glucosidase eller maltose= phosphorylase.
Ved bestemmelsen med a-glucosidase og en forbindelse af den almene 30 formel I, hvor R = glucosid, bliver maltoheptaosens spaltningsprodukter maltotetraose og maltotriose viderespaltet til glucose og sidstnævnte så målt på i og for sig kendt måde. Til måling af den dannede alucose foretrækkes herved i nærværelse af α-alucosidase især hexo=
4 DK 153335B
ifølge opfindelsen kan gengives ved følgende ligninger:
Ma 11 ohept ao s e + H^O -- Maltotriose + Maltotetraose
Malto triose + 2H20 a-?lucos3-dase^ 3 Glucose Maltotetraose + 3H20 -~-^lucos-idas.^>4 Glucose τιν
5 7 Glucose + 7 ATP 7 Glucose-6-P
7 Glucose-6-P + 7NAD+ — 6 PDI^>7 Gluconat-6-P+7NADH + 7H+
Til denne udførelsesform egner sig især også de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendte maltoheptaosederivater, altså forbindelserne med den almene for- 10 mel I, hvor R ikke er en glucosid gruppe. Ved indvirkning af de to enzymer α-amylase og α-glucosidase bliver substituenten altså en phenylgruppe, eller mononitrophenylgruppe eller den endestillede sorbit- eller glu- consyrerest fraspaltet og kan let bestemmes. Phenylgruppen kan stå i a- eller β-stilling. Drejer det sig om α-stillingen, sker fraspalt-15 ningen ved indvirkning af α-amylase og α-glycosidase alene, og de fraspaltede substituerede eller usubstituerede phenoler kan så bestemmes let ved kendte farvereaktioner. Opfindelsen kan imidlertid også anvendes til β-stillede substituenter. I sidstnævnte tilfælde anvendes endvidere ved siden af α-glucosidasen endvidere /3-glucosidase.
De ved fraspaltning af nitrogruppeholdige substituenter frigjorte ni-trophenoler er selv farvede forbindelser, som uden videre kan bestem-^ mes optisk. Hvis phenol selv fraspaltes, kan denne bestemmes efter kendte metoder, f.eks. ved omsætning med et nucleophilt middel, såsom 3-methyl-6-sulfonyl-benzthiazolon-hydrazon-(2) (HSK) i nærværelse af monophenoloxidase. Ved denne reaktion dannes et rødt farvestof, som kan måles.
30
Ved fraspaltning af sorbit kan dette oxideres, f.eks. med sorbitdehy= drogenase til fruktose, og samtidig tilstedeværende NAD til NADH. Dannelsen af sidstnævnte kan let bestemmes på kendt måde i UV-spektro= 35 fotometer. Hvis et sådant ikke står til rådighed, kan der ved omsæt= ning med tetrazoliumsalt, f.eks. INT (2-(p-jodphenyl)-3-(p-nitrophe=
5 DK 153335B
anden eléktronoverfører også dannes en farvet formazan, der kan måles i det synlige område.
På analog måde kan frigjort gluconsyre bestemmes på i og for sig kendte måder, f.eks. med gluconat-kinase, 6-phosphogluconsyre-dehydrogena= 5 se og NADP, samt eventuelt tetrazoliumsalt og elektronoverfører.
Til udførelse af fremgangsmåden ifølge opfindelsen er i almindelighed pH-værdier mellem 5 og 9 egnede. Fortrinsvis arbejdes ved pH-værdier mellem 7 og 7,5, da der herved opnås de bedste resultater og den korte-10 ste reaktionstid. Hvis der ifølge opfindelsen anvendes nitrophenylfor-bindelser, er området for de velegnede pH-værdier noget snævrere og ligger i almindelighed mellem pH 6 og pH 8,5.
Som stødpude egner sig sådanne, som er virksomme i de anvendte enzymers 15 hovedaktivitetsområde. Der foretrækkes phosphat HEPES (N-(2-hydroxy= ethyl)-piperazin-N-2-ethansulfonsyre) og glycylglycin. Foretrukne koncentrationer ligger mellem 10 og 200 mmol pr. liter.
α-glucosidasen anvendes i almindelighed i mængder mellem 0,1 og 5000 20 U pr. ml. Det er en særlig fordel ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen, at der kan anvendes forholdsvis store mængder af dette enzym, således at α-amylasespaltningen er det hastighedsbestemmende trin. Det er naturligvis også muligt at anvende endnu højere mængder af dette enzym, men herved opnås ingen yderligere fordele.
25
De ifølge opfindelsen anvendte forbindelser med den almene formel I benyttes i prøven i almindelighed i mængder mellem 0,1 og 250 mmol pr. liter. Ifølge opfindelsen foretrækkes mængder mellem 0,5 og 100 mmol pr. liter.
30
Substratmætning af a-amylasen med maltoheptaose foreligger ved en koncentration på 8 til 10 mmol pr. liter. Hensigtsmæssigt anvendes derfor en mindste koncentration på 8 mmol pr. liter maltoheptaose, hvis der skal arbejdes under substratmætningsbetingelser, hvilket i reglen er tilfældet.
Jo
Desuden tilsættes hensigtsmæssigt et aktiveringsmiddel for a-amylasen. Sådanne aktiveringsmidler er kendt. Foretrukne er natriumchlorid eller kaliumchlorid.
/1 Π T" ΛίΛ T T/3 /rs 1 Ί V· Λ ·£ Λ ·ν<* Λ 4· 1A« ¥ 7.» 7μ /sm <« J JT *>· mm 1 μα» £ mm ma**a JC a ma JC ma am* μ m ma mm mm* £ *3 a ma ·! JT At *1 μ m
6 DK 153335B
opfindelsen sker bestemmelsen af spaltningsprodukterne ved omsætning med maltosephosphorylase under dannelse af glucose-l-phosphat, som så bestemmes på i og for sig kendt måde. Ifølge en særlig foretrukken udførelsesform sker bestemmelsen af glucose-l-phosphat ved omdannelse 5 til glucose-6-phosphat ved hjælp af β-phosphoglucosemutase, oxidation af det dannede glucose-6-phosphat med NAD i nærværelse af glucose-6-phosphat-dehydrogenase under dannelse af gluconat-6-phosphat og NADH, idet dannelsen af sidstnævnte let kan ^|^^lfotometrisk. Målesignalet kan let forstærkes ved yderligere ox^^H^ \d NAD i nærværelse af 10 e-phosphogluconat-dehydTOjjgjiae·^1^^^^^ 1 af ribulose-5-phosphat og et.yderligere /
Princippet i denne vet af følgende ligninger:
Maltoheptaose + H^O ? amylase ^ Maltotriose + Maltotetraose -y
Maltose
Maltose + PO'*- Malkosephosphorylase^ Glucose + β-glucose-l-P 2ø β-glucose-l-P Glucose-6-P
Glucose-6-P + NAD+ — 'P-H--> Gluconat-6-P + NADH + H+
Gluconat-6-P+NAD+ 6-P—Ribulose-5-P+NADH + H+ 25 En fordel ved denne udførelsesform ligger i, at maltosephosphorylase er mere specifik end α-glucosidase og derfor ikke forstyrrer endogen glucose.
Med hensyn til stødpuden gælder det, der er anført til udførelsesfor-30 men for fremgangsmåden med α-glucosidase på samme måde.
Foruden de to ovennævnte udførelsesformer for fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan bestemmelsen af de dannede brudstykker af maltohepta= ose dvs. maltotetraose, maltotriose og deraf dannet maltose også ske 35 på andre hertil kendte fremgangsmåder, f.eks. via påvisning af de nyopstå-ede reducerende ender eller med maltosehydrogenase.
Opfindelsen angår endvidere et reagens til bestemmelse af a-amylase indeholdende et a-amylasesubstrat og et system til bestemmelse af et af a-amylasesubstratet med α-amylasen dannet spaltningsprodukt, og som er 40 ejendommeligt ved, at substratet består af en forbindelse med den almene formel I, i * «1 ♦ i . I_____T _*1_____1 -i ni ΗΛΛοΊ ΟητΚτΊ*-.
1 DK 153335B
Et foretrukket system til bestemmelse af spalteprodukterne er a-gluco= sidasesystemet, der indeholder a-glucosidase/ alkalichlorid og stødpude. Består substratet af maltoheptaose selv, kræves som enzymer endvidere hexokinase (HK) og glucose-6-phosphat-dehydrogenase (G6PDH) samt NAD, ATP og magn.es ium.
Fortrinsvis består et reagens på basis af α-glucosidasesystemet af 3 4 5 x 10 til 3 x 10 U/l a-glucosidase, 0 3 4 10 til 5 x 10* HK, 103 til 5 x 104 G6PDH, 0,5 til 8 mmol/1 NAD, 5 0,5 til 5 mmol/1 ATP, 1 til 3 mmol/1 25 til 100 mmol/1 NaCl eller KC1, 0 25 til 200 mmol/1 stødpude, pH 6,2 til 7,8, og 5 til 100 mmol/1 maltoheptaose eller et multiplum eller en brøkdel deraf i tørret eller opløst form.
!5 I en anden foretrukken udførelsesform består reagenset af a-glucosidase, KC1 eller NaCl,stødpude og substrat. Et sådant reagens indeholder især 1O3 til 5 x 10^ U/liter α-glucosidase, 1 til 100 mmol/liter NaCl eller KCl, 10 til 250 mmol/liter stødpude pH 5 til 9 og 0,1 til 250 mmol/liter maltoheptaosederivat med den almene formel I, beregnet på koncentrationen ved prøven. Reagenset kan foreligge i tør, især lyophilise-ret form, eller i form af en opløsning som blanding af alle bestanddele eller adskilt.
15
En yderligere udførelsesform indeholder et reagens ifølge opfindelsen af ovennævnte art, desuden Ø-glucosidase og/eller phenoloxidase og HSK.
^ Ifølge en yderligere udførelsesform ifølge opfindelsen indeholder reagenset ved siden af α-glucosidase NaCl eller KCl stødpude og substrat, Λ VI J VV<! J Λ «Α Μ Μ -u. 1». J X. J A Ία * · J U A ^ A Μ n A A A /V ΆΤ 7V t > A J 1 A «Α I *» ^ A A· W V« J· _ 1A « W A A* A 7V ΓΤ1 11 C__
8 DK 153335B
salt og diaphorase, henholdsvis phenazinmethosulfat (PMS).
2 6
Et foretrukket reagens af denne art indeholder 1 x 10 til 3 x 10 U/liter a-glucosidase, 2 x 10^ til 5 x 10^ U/liter sorbitdehydrogenase, q 4 1 x 10 til 5 x 10 ϋ/liter hexokinase, 0,5 til 50 mmol/liter ATP, 5 10 til 500 U/liter diaphorase (Chlostridium Kluyveri), 0,01 til 0,5 mmol/liter tetrazoliumsalt, 0,1 til 10 mmol/liter NAD, 0,2 til 5 mmol/ liter MgC^r 0,5 til 20 mmol/liter maltoheptit, 1 til 100 mmol/liter NaCl eller KC1 og 10 til 250 mmol/liter stødpude pH 5,5 til 8,5.
10 Eventuelt er der endvidere et ikke-ionisk overfladeaktivt middel til stede i en mængde mellem 5 og 50 mmol/liter.
g
En ligeledes foretrukken udførelsesform indeholder 100 til 3 x 10 4 U/liter a-glucosidase, 10 til 10 U/liter 6-phosphogluconat-dehydro= IC 4 genase, 20 til 2 x 10 U/liter gluconat-kinase, 0,5 til 25 mmol/liter ATP, 0,05 til 1,0 mmol/liter NADP, 1,0 til 20 mmol/liter maltohepta= gluconsyre, 0,5 til 5 mmol/liter MgCl^/ 1 til 100 mmol/liter NaCl og 10 til 250 mmol/liter stødpude, pH 5,5 til 8,5.
20 Et andet reagens ifølge opfindelsen indeholder 0,1 til 250 mmol/liter α-nitrophenyl-maltoheptaosid eller dinitrophenyl-maltoheptaosid.
2 6 1 x 10 til 2,5 x 10 U/liter a-glucosidase, 1 til 100 mmol/liter natriumchlorid eller kaliumchlorid og 10 til 250 mmol/literphosphatstødpude, pH 7,0 til 8,0.
25
Endnu en udførelsesform for reagenset ifølge opfindelsen indeholder: 0,1 til 250 mmol/liter a-phenylmaltoheptaosid, 2 6 1 x 10 til 1,5 x 10 U/liter a-glucosidase, 5 10 til 10 U/liter monophenoloxidase, 30 o,l til mmol/liter HSK, 1 til 100 mmol/liter NaCl eller KC1, og 10 til 250 mmol/liter stødpude.
Et andet foretrukket system til bestemmelse af spaltningsprodukterne 35 er maltosephosphorylasesystemet, som i det væsentlige består af mal= tosephosphorylase, β-phosphoglucomutase (β-PGlu-M), glucose-6-phosphat-de= hydrogenase (G6PDH), glucose-1,6-diphosphat (Gl,6DP), NAD, stødpude, maltoheptaose og eventuelt 6-phosphogluconat-6-dehydrogenase (6PGDH).
40 Et særligt foretrukket reagens til dette påvisningssystemt består af
9 DK 153335B
3 3 0,5 x 10 til 20 x 10 U/liter maltosephosphorylase, 1 x 102 til 1 x 104 β-PGluM, 2 4 2 x 10 til 3 x 10 U/liter glucose-6-phosphat-dehydrogenase, 0,5 til 10 mmol/liter NAD, j 0,001 til 1 mmol/liter glucose-l,6-diphosphat, 0,5 til 100 mmol/liter stødpude, pH 6,0 til 7,5, 5 til 50 mmol/liter raaltoheptaose og eventuelt 2 4 1 x 10 til 1 x 10 U/l 6-phosphoglukonat-dehydrogenase.
LO
Reagenset ifølge opfindelsen kan foreligge i tør eller opløst form, og det kan også foreligge imprægneret på en bladformet bærer, f.eks. en folie, et sugedygtigt papir eller lignende. I sidstnævnte tilfælde består det hensigtsmæssigt af mindst tre lag, idet et første lag in-15 deholder substratet, det andet lag tjener som spærrelag, og det tredie lag indeholder svstemet til bestemmelse af snaltninasorodukterne. Hvis et sådant flerlaas reaaensmateriale, der egner sig til en simpel hurtig prøve på a-amylase, bringes i berøring med en flydende <x-amylase= holdig prøve, spalter α-amylasen substratet, og brudstykker diffunde--0 rer gennem mellemlaget ind i det tredie lag indeholdende bestemmelsessystemet. Som påvisningsreaktion anvendes i dette tilfælde hensigtsmæssigt en farvedannende reaktion for ved hjælp af den optrædende farvning at gøre koncentrationen af α-amylasen visuelt synlig, hvis spaltningsprodukterne ikke selv allerede er farvede.
>5 De til fremgangsmåden ifølge opfindelsen anvendte maltoheptaosederivater kan fremstilles på forskellige måder. Hvis det drejer sig am de phenylerede derivater, kan der anvendes både kemiske og enzymatiske metoder. Den kemiske syntese er i princippet baseret på omsætning af peracetyleret maltohep= taose med den pågældende phenol i nærværelse af en Friedel-Crafts-i0 katalysator. Denne metode egner sig både til phenol sely og til mononitrophenol. Alternativt er det også muligt først at fremstille phenylderivatet og derpå nitrere dette, f.eks. ved den i Bull. Chem. Soc. Japa 1934 (1961) 718 beskrevne måde. Denne måde egner sig især til mononitroderivatet, idet der under visse omstændigheder kan Ϊ5 foretages en adskillelse af de opståede o- og p-nitrophenylderivater.
Fortrinsvis udføres denne omsætning ved smeltning eller kogning under tilbagesvaling i et upolært opløsningsmiddel med ZnC^, SnCl^ eller TiCl^ som Friedel-Crafts katalysator. Efter indføringen af phenolen 40 eller nitrophenolen fraspaltes beskyttelsesgrupperne på i og for sig 10
DK 153335B
methoxid i methanolisk opløsning med vandigt bariumhydroxidopløsning osv.
Den enzymatiske fremstilling af phenylderivater sker ved transglucosi= 5 dering af phenylglucosidet eller det tilsvarende nitrerede phenylglu= cosid med α-cyklodextrin, amylase eller opløseligt stivelse i nærværelse af en specifik mikrobiel transferase. Fortrinsvis anvendes hertil en transferase af bacillus macerans. Derved kan til denne transgluco= sidering anvendes den kendte amylase fra bacillus macerans (E.C. 2.4.1. 10 19. DSM 24; isolering: J.A. de Pinto L.L. Campbell, Biochemistry 7, (1968) 114; transfer-reaktion: Methods in Carbohydr. Chemistry, bind il, (1963.)! 347), som ved siden af sin hydrolytiske og cykliserende virkning vitterlig også har en glucosyltransfererende virkning.
15 Den forbindelse af formel I, hvori R er en sorbitrest, kan fremstilles af maltoheptaosen ved reduktion med natriumborhydrid (NaBH^) under milde betingelser.
Endelig kan forbindelsen af formel I, hvori R er en gluconsyregruppe, 20 fremstilles kemisk eller enzymatisk på kendte måder til fremstilling af gluconsyre af maltoheptaose, f.eks. ved oxidation med brom (Methods in Carbohydr. Chemistry, bind II, (1963) 13).
Som allerede nævnt skaffes der gennem opfindelsen ikke blot en hurtig 25 og specifik fremgangsmåde til bestemmelse af α-amylase, men især bliver lag-fasen· fjernet helt eller vidtgående, hvilket er af særlig betydning ved anvendelse af fremgangsmåden til analyseautomater. Desuden kan fremgangsmåden ifølge opfindelsen udføres i mange udførelsesformer uden kompliceret apparatur og egner sig derfor især til hurtige diag-30 nostica og til optisk bestemmelse i det synlige område. Samtidig kan de forskellige udførelsesformer for fremgangsmåden ifølge opfindelsen imidlertid også bestemmes med UV-måleapparatur. Yderligere fordele er streng proportionalitet og ingen forstyrrelser som følge af kemisk beslægtede indholdsstoffer i blodet.
35 De ifølge opfindelsen anvendte substrater er let tilgængelige og i høj renhed. En simpel fremgangsmåde til fremstilling af maltosehepta= ose er beskrevet i J. Am. Chem. Soc. 71,-356 (1949). Fremgangsmåden egner sig til bestemmelse af α-amylase i biologiske væsker, såsom se= rum, heparinplasma, urin og lignende eller i andre flydende eller fa= >in cfo Tnafciri al
11 DK 153335 B
De følgende eksempler belyser opfindelsen.
Eksempel 1
Maltogen metode (a-glucosidasesystem)
En reagensblanding indeholdende α-glucosidase, G6PDH, HK, NAD, ATP,
2_L
5 maltoheptaose, Mg NaCl og phosphatstødpude opløses i 2,0 ml destil= leret vand. Reagensets holdbarhed ved stuetemperatur er ca. 1 time, ved temperaturer under 8°C 6 timer.
Den fremkomne opløsning har følgende koncentration af reagenserne: LO Phosphatstødpude 50 mmol/liter; pH 7,0
NaCl 50 mmol/liter
Mg^+ 2 mmol/liter
Maltoheptaose 10 mmol/liter ATP 1,2 mmol/liter 15 NAD 2 mmol/liter HK — 2 U/liter G6PDH — 2 U/liter a-glukosidase —10 U/liter 20 Ved 25°C sættes der til opløsningen 0,02 ml serumprøve, og opløsningen fyldes i en kuvette med en lagtykkelse på 1 cm, og derefter bestemmes extinktionen ved Hg 365 nm, 340 nm eller Hg 334 nm i et fotometer. Efter 10 minutter aflæses extinktionen, og derefter gentages aflæsnin-5 gange med mellemrum på hver et minut.
25
Af de således konstaterede extinktionsforskelle pr. minut (ΔΕ/minut) dannes middelværdien, reagenstomværdién . subtraheres, og den korrigerede værdi anvendes til beregningen.
30 Beregningen sker som følger: U/liter 25°C = 4244 x Δ E 365 nm/min = 2290 x Δ e 340 nm/min = 2335 x Δ E 334 nm/min 35
12 DK 153335B
Tegningens fig. 1 viser resultaterne af en fortyndingsrække af human= serum med fysiologisk kogsaltopløsning fremkommet ved denne metode:
Hvis reagenset opdeles i to partier, hvoraf den ene indeholder malto= 5 heptaosen og den anden blandingen af alle øvrige reagenser, kan holdbarheden af de dermed fremstillede opløsninger forøges. Den er for blandingen af reagenserne ved temperaturer indtil 8°C 30 timer, ved stuetemperatur ca. 8 timer. Holdbarheden af maltoheptaoseopløsningen er tilsvarende 6 uger, henholdsvis ca. 1 uge.
10
Eksempel 2
Bestemmelse, med maltosephosporylasesystem.
15 Der blev fremstillet to reagenser bestående af amylasesubstratet og maltosephosphorylasesystemet, Det ene reagens indeholdt malto= heptaosesubstrat, det andet opløseligt stivelse ifølge teknikkens standpunkt. Reagenskoncentrationen efter opløsning i vand var følgende : 20
Opfindelsen Sammenligning
Phosphatstødpude 20 mmol; pH 6,5 20 mmol; pH 6,5 NAD 2 mmol 2 mmol
Maltoheptaose 10 mmol 25
Opløselig stivelse - 5 mg/ml
Glucose-l,6-diphosphat spor spor
Maltosephosphorylase 3 U/ml 3 U/ml (mikroorg.) β-phosphorglucomutase 1 U/ml 1 U/ml 30 (mikroorg.) G6PDH (Leuconostoc mesent) 9 U/ml 9 U/ml 6PGDH (Leuconostoc mesent) 1 U/ml 1 U/ml
Den fremkomne opløsning blev inkuberet ved 30°C, prøveopløsningen 35 blev tilsat, og i et fotometer blev extinktionsforskellen ved
Hg 334 nm bestemt. Efter 10 minutters forinkubation måles extinktionsforskellen i 10 minutter. For 2,0 ml reagens og 0,10 ml prøve fås så følgende beregningsformel: 40 ΔE/min x I4PX '''ί?0?-;r-^=AE/min x 1699 U/l 6,18 x 0,1 x 0,2 7
13 DK 153335 B
Ved anvendelse af fem forskellige humansera blev med ovenstående reagenser fundet følgende værdier:
Serum Opfindelsen Stivelse 5 1 37,4 U/l 15,3 U/l 2 61,2 U/l 27,3 U/l 3 95,1 U/l 39,1 U/l 4 114 U/l 44,2 U/l 5 374 U/l 161 U/l
Disse resultater viser, at der er god korrelation mellem de ifølge opfindelsen målte 10 værdier og de værdier, der fås ved den kendte sammenligningsmetode ved anvendelse af stivelse son substrat.
Eksempel 3
Fremstilling af a-phenylmaltoheptaosid.
,_ a) tridecosacetyl-S-D-maltoheptaose.
15 57,6 g (50 mmol) maltoheptaose og 41 g (500 mmol) natriumacetat vandfrit suspenderes i 543 ml (5,75 mol) eddikesyreanhydrid og omrø= res i 4 timer kraftigt ved 100°C under udelukkelse af fugtighed. Ef= 2Q ter afkøling til 60°C indrøres i ca. 1 liter isvand og videre røres natten over ved 4°C, hvorved der fremkommer en sej halvkrystallinsk masse. Efter afhældning af den overstående væske udrøres remanensen igen med isvand. Derved gennemkrystalliserer produktet. Det fraskilles, vaskes og tørres.
25 Udbytte 80,7 g (76% af det teoretiske) farveløse krystaller [(1)^= + 137,5° (c = 1,15 chloroform) smeltepunkt 150° (uskarpt).
Moderluden (dekantatet) inddampes til tørhed i vakuum, og remanensen udrives ligeledes med isvand og bringes til krystallisation.
30
Udbytte 22,3 g
pm A
[cx]p = 136 (c = 1, chloroform) smeltepunkt 150 C.
Samlet udbytte 103 g = 97% af det teoretiske.
35 Produktet kan omkrystalliseres af ethanol, idet dog smeltepunkt og drejningsværdi ikke ændrer sig selv efter flere ganges omkrystallisation. Produktet er derfor ved C^-atomet (β) konfigureret optisk som et enkelt stof.
14 DK 153335 B
9,54 g (4,5 mmol) tridecosacetyl-3-maltoheptaose, 0,61 g (4,5 mmol) frisk smeltet ZnCl2 og 4,23 g (45 mmol) destilleret phenol omrøres i 2,5 timer ved 100°C under udelukkelse af fugtighed. Derefter opløses varmt i ethylacetat og vaskes med 2 x 100 ml E^O, 3 x 100 ml 1 N 5 NaOH, 100 ml 1 N eddikesyre og 100 ml mættet NaCl-opløsning. Den i begyndelsen brune opløsning bliver derved lysegul. Efter tørring over MgSO^ inddampes til tørhed og optages i varm methanol (30 ml). Efter henstand natten over udskiller der sig et sirupagtigt materiale, som omkrystalliseres af ethanol.
10
Udbytte: 8,7 g (90% af det teoretiske) smeltepunkt 155-165°C under
Q
dekomponering [a]D = + 147 (c = 8 i chloroform).
c) phenyl-a-D-maltoheptaosid.
15 10,8 g (5 mmol) peracetyl-l-phenyl-a-D-maltoheptaosid opløses varmt i 200 ml absolut methanol, og ved stuetemperatur og under tilsætning af noget dioxan tilsættes under omrøring 30 ml 0,1 N natriummethylat og omrøres i 16 timer ved stuetemperatur. Efter 20 minutter begynder 20 produktet at udskille sig halvkrystallinsk. Til slut tilsættes 200 ml acetone, afkøles til 4°C og frasuges. Produktet opløses i vand (160 ® 4- ml), affarves med aktive kul og afsaltes med kationbytter (Dowex 50 H ).
Udbytte 5,6 g (91% af det teoretiske) farveløs lyofilisat 25 [a]*T = + 176° (c = 10 i H20).
Produktet indeholder endnu noget fri maltoheptaose og ifølge HPLC-ana= lyse(sporing ved 254 nm), endvidere 2 UV-positive forureninger. Disse fraskilles ved kromatografi på tværbundet dextran (Sephadex LH20) med 30 vand som elueringsmiddel.
Eksempel 4
Fremstilling af p-nitrophenyl-a-D-maltoheptaosid.
35 a) Peracetyl-p-nitrophenyl-a-D-maltoheptaosid.
13,6 g (20 mmol) peracetyl-maltoheptaose fremstillet ifølge eksempel 3.a bliver sammen med 11,9 g (100 mmol) p-nitrophenol opløst i 90 ml 40 absolut benzol og under omrøring og udelukkelse af fugtighed tilsæt= tes 10,4 g = 4,5 ml (40 mmol) SnCl^. Derved fremkommer en voluminøs
15 DK 153335B
opløsning efter tilsætning af 30 ml ethylacetat. Ved indrøring af opløsningen i 180 ml 2 N Na2C0^-opløsning udfældes zinkoxidhydrat. Dette fraskilles under tilsætning af noget aktive kul. Den vandige fase fraskilles, og den organiske fase vaskes godt til sidst med 5 mættet NaCl-opløsning. Efter tørring og inddampning af opløsningen får man et harpiksagtigt produkt, som krystalliserer af ethanol.
Udbytte 6,2 g (41% af det teoretiske) smeltepunkt 100°C under dekom-ponering.
10 [α]q+ 131° (c = 1 i chloroform).
Produktet får man også, når man udfører reaktionen i chloroform eller med TiCl^ i stedet for SnCl^.
15 b) p-nitrophenyl-a-D-maltoheptaosid.
5,5 g (7 mmol) peracetyl-p-nitrophenyl-maltoheptaosid opslemmes i 100 ml absolut methanol, og der tilsættes 5 ml af en ca. IN natrium= methylatopløsning. Udgangsmaterialet bliver honningagtigt og opløser 20 sig langsomt. Efter nogen tid begynder den krystallinske udskillelse af det acetylerede produkt, som er fuldstændigt efter omrøring natten over. Der frasuges, vaskes med methanol og tørres.
Udbytte 2,8 g (86% af det teoretiske) [α]^Τ = + 124° (c = 0,6 i H20), 25
Produktet renses på tværbundet dextran (Sephadex@LH20) med vand som elueringsmiddel. Man får 1,2 g (45%) af ovenfor beskrevne forbindelse, som er aktivt ved den enzymatiske prøve. Desuden fremkom forbindelsen også ved nitrering af a-phenylmaltoheptaosid fra eksempel 3 med nitrer= 30 syre ifølge Bull. Chem. Soc. Japan 34 (1961) 718.
35 Eksempel 5 p-nitrophenyl-a-maltooligosaccharid ved enzymatisk syntese med ba= cillus macerans-amylase (E.C.2,4.1.19 af Bac. mac. DSM 24).
40 Bacillus Macerans-amylase har foruden hydrolytisk og cykliserende virkning også glycosyl-transferende egenskaber, som kan udnyttes til
16 DK 153335B
Chemistry IIf (1963) 347).Til syntese af para-nitrophenyl-oligosaccharider blev denne fremgangsmåde optimeret som følger: 680 mg bacillus macerans-amylase (E.C.2.4.1.19 af Bac. mac. DSM 24) (lyofilisat) (0,46 U/mg afvejning, proteindhold af afvejningen 28,5%, 5 fri for p-nitrophenyl-a-D-glucosidspaltende aktivitet).
400 mg a-D-nitrophenylglucosid 3.5 g a-cyklodekstrin, og 70 ml Sørensen phosphatstødpude, pH 6,2 0,01 M sammenblandes.
Materialet inkuberes i 24 timer ved 37°C. Med henblik på rensning 10 bliver så a- og opstået β-cyklodekstrin først fraskilt via tetrachlor= ethylen-indeslutningsforbindelsen. Efter kromatografi på tværbundet © dekstran (sephadex LH20) får man 50 mg lyofilisat af p-nitrophenyl-maltoheptaosid, som er højvirksomt ved amylaseprøven.
15 Eksempel 6
Fremstilling af maltoheptait.
10 g maltoheptaose opløses i 50 ml ^0, og dertil sætter man portions^ 20 vis 2 g NaBH^ og omrører i 75 minutter ved stuetemperatur (prøve for reducerende sukker negativ). Ved kromatografi på kationbytter (Dowex® •j- 50 H ) fjernes Na (ρΗ-værdi af opløsningen efter ionbytterpassagen 3,5). Gennemløbet inddampes i vakuum og optages flere gange med metha= nol/vand (vandtilsætning til opløsning af produktet) og inddampes til 25 fjernelse af borsyre som methylester. Den til slut neutrale opløsning lyofiliseres.
Udbytte 9 g (90% af det teoretiske) fri for reducerende sukkerarter. Indhold (enzymatisk bestemt) af glucose 86,1% 30 af sorbit 89,0% vand 8,5%.
Eksempel 7 35 Fremstilling af maltoheptonsyre.
11.5 g (0,01 mol) maltoheptaose og 6 g Ba-benzoat blev indført i 150 ml vand. Under omrøring og afkøling blev der tilsat 1 ml brom og rørt videre i 36 timer. Efter afdrivning af overskydende brom med nitrogen, 40 blev der tilsat 4 ml 4 N H^SO^ og noget aktivt kul, filtreret, og fil=
4· K* ^ 4- Λ i· A Lm « |L Μ η Λ V Λ ^ V« Λ <4 A· Χ-» Π Λ Λ ΧΖ A ΧΖ A U> 4· ΧΖ -ί A. Ukw. Α. Ία α Μ A A A AVV-U. AM ΓΠ J 1 «3 A. M
17 DK 153335 B
vandige opløsning blev sat 3:T2 g Ag2C0^ og omrørt (pH: neutral) .
De uopløselige salte blev frafiltreret, og den klare opløsning pas= seret over 20 ml Amberlite®JR H . Det sure eluat blev straks neutraliseret med NaOH og lyofiliseret.
5 Udbytte: 8 g (72% af det teoretiske)
Indhold (enzymatisk bestemt) af glucose 85% af gluconsyre 80% vand 9,3%.
10 Eksempel 8 Påvisning af a-amylase med phenyl-a-maltoheptaosid som substrat.
Phenyl-a-maltoheptaosid spaltes af α-amylase til phenyl-a-maltotriid 15 eller -tetraid, som af a-glucosidase omsættes til phenol og glucose. Den frigjorte phenol bliver ved hjælp af monophenoloxidase koblet oxidativt med det nucleofile reagens 3-methyl-6-sulfonyl-benzthiazo= lon-hydrazon-(2) (HSK) til et rødt farvestof, hvis dannelseshastighed er proportional med amylaseaktiviteten i prøven og kan følges foto= 20 metrisk.
Prøveprincip: 1. a) Phenyl-a-maltoheptaosid + Η20a—e^> phenyl-a-D-tri-(tetra)-glucopyranosid + maltotetra-(tri)-ose 25 b) Phenyl-a-D-tri-(tetra)-glucopyranosid + 3 (4) ^0 α glucosidase^ phenoi + 3 (4) glucose o) Phenol + HSK 4· 02 monophenoloxida^ farvestof + 2 30 Målebetingelser: 25°C, målebølgelængde 492 nm, 1 cm kiivette. Reagens sammensætningen viser følgende tabel.
1 ο DK 153335Β
TABEL
Reagens Koncentration i prøven
Phosphatstødpude, pH 7,4 0,05 mol/1
Natriumchlorid 0,05 mol/1
Phenyl-a-D-maltohepfcaosid 10 mmol/1 5 HSK 1 mmol/1
Monophenoloxidase 1 U/ml a-glucosidase 10 U/ml
Prøverumfang: 2,0 ml 10 I stedet for phosphatstødpude viste også glycin-, glycylglycin-, hepes-, tris-y tra- og andre stødpuder sig brugbare.
Eksempel 9 15
Bestemmelse af a-amylase med p-nitrophenyl-maltoheptaosid. Prøveprincip: 20 p-nitrophenyl-a-maltoheptaosid a-amylase^,(gluoose) + p-nitrophenyl-α-(glucose) a~glucQsidase^ n giucose + 25 p-nitrophenol.
Efter spaltningen af maltoheptaosidet nedbrydes spaltningsprodukterne til glucose og p-nitrophenol. p-nitrophenolatanionen er gulfarvet i alkalisk opløsning og kan derfor måles optisk direkte. Prøvestystem: 30
Reaktionsblanding: 50 mmol/1 phosphatstødpude, pH 7,4 50 mmol/1 natriumchlorid 5 til 50 U/ml a-glucosidase 5 eller 10 mmol/1 p-nitrophenyl-a-malto-^ heptaosid
DK 153335B
Prøvemængde i 1 ml reaktionsblanding + 50 μΐ prøve (serum) temperatur: 30°C Bølgelængde: 405 nm 5 Serumstart efter opnåelse af måletemperaturen (10 minutters forinku= bation).
Eksempel 10 -*•0 a-amylasebestemmelse med maltoheptit.
Prøveprincip:
Maltoheptait + H20 α —^a-se-^> maltotriit + maltotetraose 15 Maltotriit + H20 - sorbit + maltose
Sorbit + NAD+ -S-D^ Fructose + NADH + H+ NADH + INT + H+ ff^pk°£a.g-e^ formazan + NAD+ SDH = Sorbitdehydrogenase.
20
Prøvesystem:
Reaktionsmateriale ml Koncentration i prøven
Na-/K-P04-stødpude 0,02 mol/1 1,92 12,8 mmol/1 PO^ + Triton X100 2 ml/100 ml + NaCl 10 mmol/1, pH 6,9 6,4 mmol/1
MgCl2 0,3 mol/1 0,01 1,0 mmol/1
Maltoheptit 100 mmol/1 0,10 3,3 mmol/1 NAD c = 40 mg/ml 0,05 1,0 mmol/1 30 INT c = 0,6 mg/ml 0,20 0,09 mmol/1
Diaforase (Clostr.Kluyveri) 0,05 167 U/l' 5 mg/ml+ ATP c = 50 mg/ml 0,10 3,29 mmol/1
Hexokinase 280 U/ml+ 0,05 4666 U/l 35 SDH 180 U/ml+ 0,30 18000 U/l a-glucosidase 1120 U/ml+ 0,20 74670 U/l
Prøve (serum) 0,02 + i prøvestødpuden 40
Start ved nrdvetilsætnina: målina sker ved 492 nm.
20
DK 153335B
Eksempel 11 α-amylasebestemmelse med maltoheptagluconsyre.
Prøveprincip:
Maltoheptagluconsyre + H20 ^"araylase^ maltotriogluconsyre 5 + maltotetraose
Maltotriogluconsyre + H20 — ...^^uco5^dase^ gluconsyre + maltose
Gluconsyre + ATP gluconat~kinase^ gluconsyre-6-P + ADP
Gluconsyre-6-P + NADP* ribulose 5-P + 10 NADPH + C02 + H+
Prøvesystem:
Reaktionsmateriale ml Koncentration i prøven 15 Na-/K-P04-Puffer o,02 mol/1 2,19 14,6 mmol/1 phosphat + NaCl 10 mmol/1,pH 6,9 7,3 mmol/1 NaCl
MgCl2 1 mol/1 0,01 3,3. mmol/1
Maltoheptagluconsyre 0,10 5 mmol/1 ^ 150 mmol/1 NADP c = 10 mg/ml 0,10 0,38 mmol/1 ATP c = 50 mg/ml 0,10 2,7 mmol/1 25
Gluconat-kinase 40 U/ml 0,03 1066 U/l 6-phosphogluconsyre-dehy- 0,10 800 U/l drogenase 24 U/ml 2g a-glucosidase 1120 U/ml 0,30 11,2 x 10^ U/l
Prøve (serum) 0,02
Start ved prøvetilsætning. Måling sker ved 340 nm eller 365 nm.
35 o
Temperatur: 25 C, prøverumfang: 3,00 ml.
Claims (22)
- 2i DK 153335 B Sammenligningseksempel På grund af reagenstomværdien,, som er lavere for maltoheptaose end for maltopentaose , fås der for maltoheptaose bedre resultater (præcisere, 5 med mindre svingninger i rækken). Ved en bestemmelse analog med eksempel 1 får man ved dobbeltbestemmelser følgende resultater:
- 10 Inkubationstemperatur Maltopentaose Δ Maltoheptaose Δ __AE,/min.___AmE/min___ 37°C 87,,4 2,4 75,9 1,2 __8 50___74/7___ 25°C 51,, 3 1,7 46,6 0,8 49,6 45,8 15 -1-- Det vil ses, at på grund af den formindskede tomværdi er svingningerne i måleresultaterne ved anvendelse af maltoheptaose væsentligt mindre end med maltopentaose som substrat. 20 Patentkrav .
- 1. Fremgangsmåde til bestemmelse af α-amylase ved enzymatisk spalt= 25 ning af et α-amylasesubstrat og måling af et spaltningsprodukt, k e n = detegnet ved, at der som substrat anvendes en forbindelse med den almene formel I 30 ch2oh ch2oh —·--1 OH 5
- 35 HO hvor R er en glucosid-, phenylglucosid-, mononitrophenylglucosid-, sorbit- eller gluconsyregruppe, 40 DK 153335 B
- 2. Fremgangsmåde ifølge krav lf kendetegnet ved, at spaltningsprodukterne ved hjælp af α-glucosidase omdannes til glu= cose, og dette så bestemmes på i og for sig kendt måde.
- 3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, kendetegnet ved, at der arbejdes ved pH-værdier mellem 5 og 9.
- 4. Fremgangsmåde ifølge krav 2 eller 3, kendetegnet ved, at der anvendes 0,1 til 250 mmol pr. liter forbindelse af formel I. 10 5, Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at spalt= ningsprodukterne omsættes ved hjælp af maltosephosphorylase under dannelse af glucose-l-phosphat, og sidstnævnte bestemmes.
- 5. Fremgangsmåde ifølge krav 5, kendetegnet ved, at be= 15 stemmeisen af det dannede glucose-l-phosphat sker ved, at dette ved hjælp af phosphoglucomutase omdannes til glucose-6-phosphat, og at NAD med sidstnævnte i nærværelse af glucose-6-phosphat-dehydrogenase reduceres til NADH, som måles. 2o 7. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, kendeteg= net ved, at når R er en phenylglucosidgruppe, bestemmes fraspaltet phenol med 3-methyl-6-sulfonyl-benzthiazolon-hydrazon-(2) i nærværelse af monophenoloxidase.
- 3. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til 6r kendetegnet ved, at når R er en sorbitgruppe, bestemmes fraspaltet sorbit med sorbit-de= hydrogenase og NAD.
- 9. Fremgangsmåde ifølge krav 1 til g, kendetegnet ved, 30 at når R er en gluconsyregruppe, bestemmes fraspaltet gluconsyre med gluconat-kinase, 6-phosphogluconsyre-dehydrogenase og NADP.
- 10. Fremgangsmåde ifølge krav 3 eller 9, kendetegnet ved, at NADH dannet ved reduktion af NAD omsættes med et tetrazoliumsalt i 35 nærværelse af en elektronoverfører til formazan, og sidstnævnte bestemmes . DK 153335B
- 11. Fremgangsmåde ifølge krav kendetegnet ved, at der som elektronoverfører anvendes diaphorase eller phenazinmethosulfat.
- 12. Reagens til bestemmelse af a-amylase ved fremgangsmåden ifølge krav 1, hvilket reagens indeholder et a-amylasesubstrat og et system til 5 bestemmelse af et af amylasesubstratet med α-amylase dannet spaltningsprodukt, kendetegnet ved, at substratet består af en forbindelse med den almene formel I , SH20H fH20H 7>~Λ| γΐ W i H0 ]-f -o--OH I-o--1 OH I 5 hvori R er en glucosid-, phenylglucosid mononitrophenylglucosid-, sorbit- eller gluconsyregruppe.
- 13. Reagens ifølge krav 12, kendetegnet ved, at det i det væsentlige består af α-glucosidase, hexokinase, glucose-6-phosphat-de-hydrogenase, NAD, ATP, Mg, NaCl, phosphatstødpude og maltoheptaose som substrat.
- 14. Regagens ifølge krav 13, kendetegnet ved, at det be-15 står af o 4 5 x 10 til 3 x 10 U/liter α-glucosidase 10^ til 5 x 104 U/liter hexokinase 3 4 20 10 til 5 x 10 U/liter glucose-6-phosphat-dehydrogenase 0,5 til 8 mmol/liter NAD 0,5 til 5 mmol/liter ATP DK 153335B 1 til 3 mmol/liter Mg^+ 25 til 100 mmol/liter NaCl eller KC1 25 til 100 mmol/liter stødpude, pH 6,2 til 7,8 og 5 til 100 mmol/liter maltoheptaose eller 5 et multiplum eller en brøkdel deraf i tør eller opløst form. ^ 15. Reagens ifølge krav 12, kendetegnet ved, at det i det væsentlige består af maltosephosphorylase, Ø-phosphoglucomutase, glu-cose-6-phosphat-dihydrogenase, glucose-1,6-diphosphat, NAD, stødpude, substrat og eventuelt 6--,phosphogluconat-(jihydrogenase og maltoheptaose som substrat.
- 16. Reagens ifølge krav 15, kendetegnet ved, at det be= står af 3 4 0,5 x 10 til 2 x 10 U/liter maltose-phosphorylase 2 4 1 x 10 til 1 x 10 U/liter β-phospho-gluco-mutase 2 4 20. x 10 til 3 x 10 U/liter glucose-6-phosphat-dehydrogenase 0,5 til 10 mmol/liter NAD 0,001 til 1 mmol/liter glucose-1,6-diphosphat 0,5 til 100 mmol/liter stødpude pH 6,0 til 7,5 5 til 50 mmol/liter maltoheptaose 25 og eventuelt 2 4 1 x 10 til 1 x 10 U/liter 6-phospho-gluconat-dehydrogenase.
- 17. Reagens ifølge krav I2v kendetegnet ved, at reagenset består af α-glucosidase, NaCl eller KC1, stødpude og forbindelse med 30 den almene formel I. DK 153335 B
- 18. Reagens ifølge krav 12.'eller 17, kendetegnet ved, Λ r at det indeholder 10 til 5 x 10° U/l a-glucosidase 1 til 100 mmol/liter NaCl eller KC1, 10 til 250 mmol/liter stødpude, pH 5 til 9, og 5 0,1 til 250 mmol/liter forbindelse med den almene formel I, beregnet på koncentrationen i prøven.
- 19- Reagens ifølge krav 12 eller 17-18 ,kendetegnet ved, at det yderligere indeholder sorbit-dehydrogenase eller gluco= 10 nat-kinase og 6-phosphogluconsyre-dehydrogenase samt NAD.
- 20· Reagens ifølge krav 19,kendetegnet ved, at det yderligere indeholder tetrazoliumsalt og diaphorase eller PMS.
- 21. Reagens ifølge krav 19 eller 20, kendetegnet ved, at det indeholder et overfladeaktivt middel.
- 22. Reagens ifølge krav 12 til 21, kendetegnet ved, at det foreligger imprægneret eller inkorporeret i et bladformet bære= 20 materiale.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DK149186A DK167365B1 (da) | 1977-09-13 | 1986-04-02 | Fremgangsmaade til fremstilling af maltoheptaosederivat |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2741192 | 1977-09-13 | ||
| DE2741192A DE2741192C2 (de) | 1977-09-13 | 1977-09-13 | Verfahren zur Bestimmung von alpha- Amylase |
| DE2755803 | 1977-12-14 | ||
| DE19772755803 DE2755803A1 (de) | 1977-12-14 | 1977-12-14 | Verfahren und reagens zur bestimmung von alpha-amylase |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK372178A DK372178A (da) | 1979-03-14 |
| DK153335B true DK153335B (da) | 1988-07-04 |
| DK153335C DK153335C (da) | 1988-11-28 |
Family
ID=25772710
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK372178A DK153335C (da) | 1977-09-13 | 1978-08-23 | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af alfa-amylase |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4544631A (da) |
| JP (1) | JPS5451892A (da) |
| AR (1) | AR217476A1 (da) |
| AT (1) | AT362526B (da) |
| AU (1) | AU521908B2 (da) |
| CA (1) | CA1120836A (da) |
| CH (1) | CH651590A5 (da) |
| CS (1) | CS236765B2 (da) |
| DD (1) | DD138921A5 (da) |
| DK (1) | DK153335C (da) |
| ES (2) | ES473296A1 (da) |
| FI (1) | FI61916C (da) |
| FR (1) | FR2402872A1 (da) |
| GB (2) | GB2004646B (da) |
| HK (1) | HK54785A (da) |
| HU (1) | HU182005B (da) |
| IE (1) | IE47953B1 (da) |
| IL (2) | IL55408A (da) |
| IT (1) | IT1099451B (da) |
| LU (1) | LU80213A1 (da) |
| MY (1) | MY8600101A (da) |
| NL (1) | NL190818C (da) |
| SE (2) | SE433857B (da) |
| SG (1) | SG21085G (da) |
| YU (1) | YU44180B (da) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2741192C2 (de) * | 1977-09-13 | 1982-07-01 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur Bestimmung von alpha- Amylase |
| JPS60997B2 (ja) * | 1978-01-31 | 1985-01-11 | 東洋紡績株式会社 | アミラ−ゼ活性測定法 |
| EP0005867B2 (en) * | 1978-06-06 | 1986-07-09 | Cooperbiomedical, Inc. | An alpha-amylase assay, a reagent composition and a reagent system therefor |
| JPS5768798A (en) * | 1980-10-14 | 1982-04-27 | Toyo Jozo Co Ltd | Novel measurement of amylase activity |
| EP0104047B1 (en) * | 1982-09-16 | 1987-07-29 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Modified oligosaccharides used as substrate for measuring alpha-amylase activity |
| DE3323245A1 (de) * | 1983-06-28 | 1985-01-10 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Verfahren und reagenz zur bestimmung von (alpha)-amylase |
| DE3328616A1 (de) * | 1983-08-08 | 1985-02-28 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Oligoglucosidderivate |
| JPS60114193A (ja) * | 1983-11-22 | 1985-06-20 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規なマルトースデヒドロゲナーゼおよびその製法それを用いる分析法 |
| US4794078A (en) * | 1984-07-26 | 1988-12-27 | Genzyme Corporation | Alpha amylase assay |
| US4649108A (en) * | 1984-07-26 | 1987-03-10 | Genzyme Corporation | Alpha amylase assay |
| JPS6183195A (ja) * | 1984-08-24 | 1986-04-26 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 新規なオリゴサツカライド誘導体、及びこれを基質として用いるα−アミラ−ゼ活性測定法 |
| JPS61124397A (ja) * | 1984-11-22 | 1986-06-12 | Toyobo Co Ltd | α−アミラ−ゼの活性測定用試薬 |
| DE3508384A1 (de) * | 1985-03-08 | 1986-11-06 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Hemmung humaner speichel- und pankreasamylase durch monoklonale antikoerper |
| SE451849B (sv) * | 1985-12-11 | 1987-11-02 | Svenska Sockerfabriks Ab | Sett att syntetisera glykosidiska bindningar samt anvendning av pa detta sett erhallna produkter |
| US4782018A (en) * | 1986-01-17 | 1988-11-01 | Eastman Kodak Company | Detection of hydrolyzing enzymes |
| DE3621271A1 (de) * | 1986-06-25 | 1988-01-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von alpha-amylase |
| US4963479A (en) * | 1986-10-07 | 1990-10-16 | Hoechst Celanese Corporation | Reagent system for an alpha-amylase assay containing aromatic substituted glycoside |
| US5158872A (en) * | 1986-10-07 | 1992-10-27 | Hoechst Celanese Corporation | Aromatic substituted glycoside |
| JP2542251B2 (ja) * | 1987-07-17 | 1996-10-09 | エンドレ モドロビッチ，アイバン | 安定な一液性α―アミラ―ゼ検定用試薬 |
| US4932871A (en) * | 1987-11-20 | 1990-06-12 | Miles Inc. | Rapid method for preparing chromogenic alpha-amylase substrate compounds at high preparative yields |
| DE3743908A1 (de) * | 1987-12-23 | 1989-07-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue oligoglucoside |
| DE3929355A1 (de) * | 1989-09-04 | 1991-03-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung von pankreas-(alpha)-amylase |
| JP2576910B2 (ja) * | 1990-04-13 | 1997-01-29 | 富士写真フイルム株式会社 | 免疫分析要素および免疫分析方法 |
| US5300634A (en) * | 1991-05-07 | 1994-04-05 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for producing maltooligosaccharide derivative |
| JP3075377B2 (ja) * | 1991-11-06 | 2000-08-14 | 東洋紡績株式会社 | α−アミラーゼ活性の測定法およびα−アミラーゼ活性測定用試薬 |
| JP3512741B2 (ja) * | 1998-07-24 | 2004-03-31 | サムスン ファイン ケミカルズ カンパニー リミテッド | 光学的に純粋な（Ｓ）−３−ヒドロキシ−γ−ブチロラクトンの製造方法 |
| KR100374358B1 (ko) * | 2000-07-13 | 2003-03-04 | 주식회사 코메드 | 미생물 동정을 위한 비피검사법과 구연산염 검사법을대체하는 글루코시드 분해검사배지와 셀로비오스분해검사배지 및 그 검사법 |
| US20040096948A1 (en) * | 2002-11-15 | 2004-05-20 | Yunping Huang | Glycoprotein cleavage protocol for oligosaccharide analysis |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4000042A (en) * | 1973-09-06 | 1976-12-28 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Diagnostic reagent for the determination of amylase |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT986838B (it) * | 1972-05-12 | 1975-01-30 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Complesso di reagenti per la deter minazione enzimatica del glucosio sistema glucosio ossidasi perossi dasi con metodo manuale e automati co con lettura a termine o in cinetica |
| US3879263A (en) * | 1973-09-06 | 1975-04-22 | Du Pont | Method for the determination of amylase |
| US3867259A (en) * | 1973-11-08 | 1975-02-18 | American Cyanamid Co | Lactate dehydrogenase test material |
| DE2600526C3 (de) * | 1976-01-08 | 1981-06-19 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von mit Sauerstoff unter Oxidaseeinwirkung H↓2↓O↓2↓ bildenden Substanzen und Reagens zu seiner Durchführung |
| US4097336A (en) * | 1976-02-13 | 1978-06-27 | Beckman Instruments, Inc. | Reagent system for beta-amylase assay |
| US4036697A (en) * | 1976-02-13 | 1977-07-19 | Beckman Instruments, Inc. | Kinetic assay for alpha-amylase |
| US4059407A (en) * | 1976-04-14 | 1977-11-22 | Becton, Dickinson And Company | Disposable chemical indicators |
| NL179399C (nl) * | 1976-07-13 | 1986-09-01 | Du Pont | Werkwijze voor de bepaling van het amylase-gehalte van een monster en reagens-proefpakket daarvoor. |
| CA1096376A (en) * | 1976-07-13 | 1981-02-24 | William B. Farnham | Process for preparing nitroaromatic glycosides |
| US4071407A (en) * | 1976-11-16 | 1978-01-31 | The Board Of Trustees Of The University Of Alabama | Novel maltase enzyme produced by a new yeast strain |
| US4081326A (en) * | 1976-10-07 | 1978-03-28 | The Board Of Trustees Of The University Of Alabama | A method for removing maltotetraose and lower saccharides from solution |
| US4102747A (en) * | 1977-07-28 | 1978-07-25 | American Hospital Supply Corporation | Amylase determination |
| DE2748036C2 (de) * | 1977-10-26 | 1986-08-21 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur Gewinnung von Maltose-phosphorylase oder/und β-Phosphoglucose-mutase und Verwendung derselben |
| US4233403A (en) * | 1978-02-27 | 1980-11-11 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Amylase assay |
| US4219571A (en) * | 1978-06-15 | 1980-08-26 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Process for producing a sweetener |
| US4225672A (en) * | 1979-02-27 | 1980-09-30 | Hall Leo M | Method for producing maltooligosaccharide glycosides |
| US4932871A (en) * | 1987-11-20 | 1990-06-12 | Miles Inc. | Rapid method for preparing chromogenic alpha-amylase substrate compounds at high preparative yields |
-
1978
- 1978-08-14 AT AT589778A patent/AT362526B/de not_active IP Right Cessation
- 1978-08-16 CA CA000309495A patent/CA1120836A/en not_active Expired
- 1978-08-17 NL NL7808528A patent/NL190818C/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-08-22 IL IL55408A patent/IL55408A/xx active IP Right Grant
- 1978-08-23 DK DK372178A patent/DK153335C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-08-29 AR AR273483A patent/AR217476A1/es active
- 1978-08-30 IT IT27180/78A patent/IT1099451B/it active
- 1978-09-04 SE SE7809278A patent/SE433857B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-09-06 GB GB7835813A patent/GB2004646B/en not_active Expired
- 1978-09-06 GB GB8033088A patent/GB2058780B/en not_active Expired
- 1978-09-08 FR FR7825964A patent/FR2402872A1/fr active Granted
- 1978-09-11 LU LU80213A patent/LU80213A1/de unknown
- 1978-09-11 DD DD78207746A patent/DD138921A5/xx unknown
- 1978-09-11 AU AU39750/78A patent/AU521908B2/en not_active Expired
- 1978-09-11 CH CH9494/78A patent/CH651590A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-09-12 HU HU78BO1734A patent/HU182005B/hu unknown
- 1978-09-12 FI FI782789A patent/FI61916C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-09-12 IE IE1838/78A patent/IE47953B1/en not_active IP Right Cessation
- 1978-09-12 YU YU2162/78A patent/YU44180B/xx unknown
- 1978-09-13 JP JP11183678A patent/JPS5451892A/ja active Granted
- 1978-09-13 ES ES473296A patent/ES473296A1/es not_active Expired
-
1979
- 1979-04-27 ES ES480028A patent/ES480028A1/es not_active Expired
- 1979-11-29 CS CS798241A patent/CS236765B2/cs unknown
-
1981
- 1981-05-21 IL IL62923A patent/IL62923A0/xx unknown
- 1981-10-16 US US06/311,856 patent/US4544631A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-01-17 SE SE8400206A patent/SE454357B/sv not_active IP Right Cessation
-
1985
- 1985-03-21 SG SG210/85A patent/SG21085G/en unknown
- 1985-07-18 HK HK547/85A patent/HK54785A/xx not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-12-30 MY MY101/86A patent/MY8600101A/xx unknown
-
1990
- 1990-06-27 US US07/545,092 patent/US5108913A/en not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4000042A (en) * | 1973-09-06 | 1976-12-28 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Diagnostic reagent for the determination of amylase |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK153335B (da) | Fremgangsmaade og reagens til bestemmelse af alfa-amylase | |
| EP0270946B1 (en) | Chromogenic acridinone enzyme substrates | |
| EP0171960A1 (en) | An alpha-amylase assay method and reagent kit | |
| EP0486470B1 (en) | An aromatic substituted glycoside | |
| FI81359C (fi) | Glykosider av resorufin-derivat, foerfarande foer framstaellning daerav samt deras anvaendning foer bestaemning av aktiviteten av glykosidaser. | |
| DK162231B (da) | Phenolsulfonphthaleinyl-beta-d-galactosider, fremgangsmaade til deres fremstilling, anvendelse heraf til bestemmelse af beta-d-galactosidase samt et diagnostisk middel indeholdende disse | |
| JP2675835B2 (ja) | 色素原基質 | |
| US4932871A (en) | Rapid method for preparing chromogenic alpha-amylase substrate compounds at high preparative yields | |
| JPH0631293B2 (ja) | マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬 | |
| SI7812162A8 (sl) | Postopek za določitev alfa-amilaze | |
| EP0459536A1 (en) | Chromogenic acridinone enzyme substrates | |
| CS236751B2 (en) | Processing of substrates for determining of alpha-amylase | |
| US5792619A (en) | Assay using oxidative chromogenic reagent | |
| JP2770892B2 (ja) | アルコキシメチリデンマルトオリゴ糖誘導体、これを有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα‐アミラーゼ活性の測定方法 | |
| JPS6317895A (ja) | 新規なオリゴサツカライド誘導体、及びこれを用いるα−アミラ−ゼ活性測定法 | |
| JPH03200801A (ja) | アンヒドロマルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα―アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα―アミラーゼ活性の測定方法 | |
| IE47954B1 (en) | Process for the preparation of maltoheptaoside derivatives | |
| JPS637797A (ja) | α−アミラ−ゼの活性測定法 | |
| JPH0779718B2 (ja) | α−アミラ−ゼの活性測定法 | |
| JPH07126281A (ja) | 非還元末端修飾オリゴサッカライド誘導体の製造法 | |
| JPS63129997A (ja) | α−アミラ−ゼ活性測定用基質及び測定方法 | |
| JPH09289899A (ja) | α−アミラーゼ活性測定用基質、測定試薬及び測定方法 | |
| JPH069676A (ja) | 新規なオリゴサッカライド誘導体及びその製法、並びにこれを基質として用いるα−アミラーゼ活性測定法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |