CS236765B2 - Agent for determining of alpha amylase - Google Patents
Agent for determining of alpha amylase Download PDFInfo
- Publication number
- CS236765B2 CS236765B2 CS798241A CS824179A CS236765B2 CS 236765 B2 CS236765 B2 CS 236765B2 CS 798241 A CS798241 A CS 798241A CS 824179 A CS824179 A CS 824179A CS 236765 B2 CS236765 B2 CS 236765B2
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- amylase
- mmol
- substrate
- reagent
- alpha
- Prior art date
Links
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 title claims abstract description 34
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 title claims abstract description 34
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 title claims abstract description 34
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 title description 20
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 35
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 33
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- -1 maltoheptaose compound Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- NEZJDVYDSZTRFS-RMPHRYRLSA-N Phenyl beta-D-glucopyranoside Chemical group O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1 NEZJDVYDSZTRFS-RMPHRYRLSA-N 0.000 claims abstract description 3
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 claims abstract description 3
- 150000008131 glucosides Chemical group 0.000 claims abstract description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 12
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 12
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 claims description 6
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims 1
- 125000004395 glucoside group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 abstract description 11
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 abstract description 8
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 abstract description 8
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 abstract description 8
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 8
- 230000004992 fission Effects 0.000 abstract description 6
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 abstract description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 34
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 description 19
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 description 19
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 18
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 description 13
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 10
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 10
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 10
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 description 9
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 description 9
- BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N NAD zwitterion Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 BAWFJGJZGIEFAR-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 9
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 9
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 8
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 description 7
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 7
- XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O NADP(+) Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@H]2[C@@H]([C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-NNYOXOHSSA-O 0.000 description 6
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 229950006238 nadide Drugs 0.000 description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 6
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 5
- 108010057899 Maltose phosphorylase Proteins 0.000 description 5
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 5
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010021382 Gluconokinase Proteins 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 4
- 102100024009 Probable gluconokinase Human genes 0.000 description 4
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 229940101270 nicotinamide adenine dinucleotide (nad) Drugs 0.000 description 4
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 4
- 101000935015 Emericella nidulans (strain FGSC A4 / ATCC 38163 / CBS 112.46 / NRRL 194 / M139) N-acetyl-6-hydroxytryptophan oxidase ivoB Proteins 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N Maltopentose Chemical compound OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(OC4C(OC(O)C(O)C4O)CO)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1O RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 3
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 3
- 150000002972 pentoses Chemical class 0.000 description 3
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 3
- 150000003538 tetroses Chemical class 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 32-alpha-galactosyl-3-alpha-galactosyl-galactose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(CO)OC(O)C2O)O)OC(CO)C1O DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 5'-adenylphosphoric acid Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O XTWYTFMLZFPYCI-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 5-methylphenazinium methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 6-Phospho-D-gluconate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- 108020001657 6-phosphogluconate dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 102000004567 6-phosphogluconate dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N Adenosine diphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O XTWYTFMLZFPYCI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N D-maltotriose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 2
- 108010009384 L-Iditol 2-Dehydrogenase Proteins 0.000 description 2
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 2
- 102100026974 Sorbitol dehydrogenase Human genes 0.000 description 2
- JRIZSBGDMDSKRF-DEGSGYPDSA-N [(2s,3s,4s,5s)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-diphosphonooxyoxolan-2-yl]methyl dihydrogen phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1O[C@@H](COP(O)(O)=O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1OP(O)(O)=O JRIZSBGDMDSKRF-DEGSGYPDSA-N 0.000 description 2
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 2
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N mannotriose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-M 4-nitrophenolate Chemical compound [O-]C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101710125031 6-phosphogluconate dehydrogenase, NAD(+)-dependent, decarboxylating Proteins 0.000 description 1
- 102100033770 Alpha-amylase 1C Human genes 0.000 description 1
- 108090001003 Beta-phosphoglucomutases Proteins 0.000 description 1
- 235000002566 Capsicum Nutrition 0.000 description 1
- 102000028526 Dihydrolipoamide Dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108010028127 Dihydrolipoamide Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001358 L(+)-tartaric acid Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N Magnesium ion Chemical compound [Mg+2] JLVVSXFLKOJNIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101100317378 Mus musculus Wnt3 gene Proteins 0.000 description 1
- ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N NADPH Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 ACFIXJIJDZMPPO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 108010029785 Pancreatic alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102100026367 Pancreatic alpha-amylase Human genes 0.000 description 1
- 239000006002 Pepper Substances 0.000 description 1
- 235000016761 Piper aduncum Nutrition 0.000 description 1
- 235000017804 Piper guineense Nutrition 0.000 description 1
- 244000203593 Piper nigrum Species 0.000 description 1
- 235000008184 Piper nigrum Nutrition 0.000 description 1
- FNZLKVNUWIIPSJ-UHFFFAOYSA-N Rbl5P Natural products OCC(=O)C(O)C(O)COP(O)(O)=O FNZLKVNUWIIPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010026386 Salivary alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 description 1
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 description 1
- VFRROHXSMXFLSN-VANKVMQKSA-N [(2s,3s,4r,5s)-2,3,4,5-tetrahydroxy-6-oxohexyl] dihydrogen phosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O VFRROHXSMXFLSN-VANKVMQKSA-N 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 229910001514 alkali metal chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 239000011229 interlayer Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001425 magnesium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 239000012434 nucleophilic reagent Substances 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000004203 pancreatic function Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 1
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012475 sodium chloride buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N β-1,4-galactotrioside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/40—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/10—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases p-Nitrophenol derivatives
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Description
Vynález se týká činidla ke stanovení a-amylázy.
Stanovení hladiny -α-amylázy v séru je důležitým klinickým ukazatelem pro- funkci slinivky břišní. Komerční činidla ke stanovení -α-amylázy se zakládají převážně na postupu, při němž se škrob odbourá a-amylázou ' a vzniklé štěpné produkty se stanoví ve viditelném nebo ultrafialovém rozsahu, podle toho, zda se při stanovení použije obarveného nebo přírodního škrobu jako substrátu pro amylázu. Podstatnou nevýhodou těchto způsobů popřípadě činidel je, že škrob jakožto makromolekulu lze jen nedostatečně charakterizovat a standardizovat, takže stupeň konverze jednotlivých sázek vychází velmi rozdílný a při stanovení měřením je nutno vždy použít zároveň standardu. Pro získání lepších výsledků by bylo zapotřebí jednotnějšího· substrátu, který při štěpení skýtá spolehlivé výsledky.
Krok vpřed k jednotnějšímu substrátu přineslo použití maltopentózy. Maltopentóza je štěpena α-amylázou v maltotriózu a maltózu, - maltotrióza a maltóza se převedou působením -α-glukozidázy v glukózu, kterou je pak - možno stanovit libovolnými postupy, například známou metodou používající hexokinázy.
Kromě maltopentózy byla jako substrát již navržena maltotetróza a maltohexóza (patentové spisy USA 3 879 263 a 4 000 042). Přitom však bylo s tetrózou dosaženo^ zřetelně horších výsledků než s pentózou a s hexózou ještě horších výsledků než s tetrózou. Tak se pro- maltotetrózu a maltopentózu uvádí ještě stechiometrlcká reakce, zatímco· pro hexózu byly již zjištěny odchylky od stechiometřické reakce, které jsou právě tak ještě tolerovatelné.
Nevýhodou maltopentózy, která byla zjištěna i u tetrózy, však je, že vzniká značná slepá hodnota činidla, tj. že měřící reakce probíhá již dříve, než se přidá vzorek, - jenž se má stanovit.
K tomu přistupuje, že ani tato slepá hodnota činidla není při vyšších koncentracích substrátu konstantní, nýbrž se mění po dobu delší než 25 minut, dříve než se dosáhl ne konstantností této vedlejší reakce. Též se ukázalo, že k předpokládanému rozdílnému štěpení maltopentózy α-amylázou ze slinivky břišní a α-amylázou ze slin, kteréžto- štěpení by bylo umožnilo rozlišení obou těchto amyláz, ve skutečnosti nedochází (J. Bc. 1970, 245, str. 3917 až 3927; J. Biochem. 51, str. - XVIII, 1952).
Podnětem k vynálezu byl proto- úkol, poskytnout činidlo ke stanovení α-amylázy, jehož složkou je substrát, vyznačující se lep236765 ší čistotou a jednotností než · známé substráty, který by byl snadno dostupný a ’ odpovídal by potřebným požadavkům, pokud jde o slepou hodnotu bez séra, dobu trvání fáze lag a dosažitelnou maximální aktivitu. Dále má být tímto · činidlem umožněn · jednoduchý postup stanovení bez drahé a složité aparatury, jakož i vhodnost pro okamžité stanovení, například zkušebními proužky.
Vynález řeší tento úkol činidlem ke stanovení α-amylázy, obsahujícím substrát pro α-amylázu a soustavu ke stanovení štěpného produktu, vzniklého působením a-amylázy na substrát pro α-amylázu, kteréžto činidlo’ se vyznačuje tím, že substrátem je sloučenina obecného vzorce I
R znamená glukózidovou, fenylglukózidovou, mononitrofenylglukózidovou, dinitrofenylglukózidovou nebo sorbitolovou skupinu nebo· zbytek kyseliny glukonové.
Překvapivě se ukázalo, že se maltoheptóza jako substrát pro- α-amylázu vyznačuje lepšími vlastnostmi, i když u oligomaltóz, navržených již pro tento· účel, byl od · maltopentózy k maltohexóze zjištěn podstatný pokles vhodnosti, ’ protože · se jejím použitím dosáhne · podstatně horších výsledků· · než použitím pentózy. Bylo . · proto možno očekávat, že .pří dalším· prodloužení maltózoroligosacharidového řetězce dojde k · chybám, které již . nebude · možno tolerovat. Překvapivě. se .však · použitím maltoheptózy dosáhne. ... lepších výsledků než. použitím pentózy. Tak dosahuje slepá hodnota ’ Činidla u vzorku. 0,02 ml při použití maltopentózy jako substrátu 73 %, zatímco· při použití · maltoheptózy · jen 13 %·, · vztaženo na koncovou hodnotu stanovení v normálním rozsahu.
Kromě toho· bylo zjištěno, že místo maltohepótzy · samotné je možno použít · i určitých derivátů maltoheptózy, které při působení α-amylázy tvoří derivatizovaný štěpný produkt, který je možno obzvláště výhodně stanovit.
Výhodnou soustavou pro stanovení štěpných produktů je· α-glukózidázová soustava, která obsahuje α-glukózidázu, chlorid alkalického kovu a · pufru. Sestává-li substrát ze samotné maltoheptózy, obsahuje činidlo jako· · enzymy ještě · hexokinázu (HK) a glukózo-6-f osf át-dehydrogenázu (G6PDH) jakož i NAD (oxidovaný nikotinamidadenindinukleotid), ATP (adenosintrifosfát j a hořčík. Z pufrů jsou vhodné ty, · které · jsou ú činné v oblasti hlavní ’ aktivity použitých enzymů. Výhodně se používá fosfátu, HEPES [ kyselina N- (2-hydroxyethyl )piperazin-N-2-ethansulfonová) a glycylglycinu. Výhodné koncentrace iontů jsou v rozmezí od 10 do· 200 mmolů/1.
Sloučenin obecného vzorce I se v činidle podle vynálezu používá obvykle v množství od 0,1 do· 250 mmolů/1. Výhodná množství jsou v rozmezí od 0,5 do 100 mmolů/1.
Nasycení substrátu pro α-amylázu maltoheptózou odpovídá koncentraci 8 až 10 mmolů. Účelně se proto· používá minimální koncentrace maltoheptózy 8 mmolů, má-li se pracovat za podmínek nasycení substrátu, jak tomu zpravidla je.
Kromě toho· obsahuje činidlo podle vynálezu účelně aktivační prostředek pro a-amylázu. Takovéto aktivační prostředky jsou známy. S výhodou se používá chloridu sodného· nebo chloridu draselného.
Výhodně sestává činidlo na bázi a-glukczidázové soustavy z x 103 až 3 x 104 j./l a-glukózidázy,
103 až 5 x 104 hexokinázy (HK),
103 až 5 x 104 glukózo-6-fosfát-dehydrogenázy (G6PDH),
0,5 až 8 mmolů/1 oxidovaného nikotinamidadenindinukleotidu (NAD)
0,5 až · 5 mmolů/1 adenosintrifosfátu (ATP) 1 až 3 Mg2+, až 100 mmolů chloridu sodného nebo chloridu draselného, až 200 mmolů/1 pufru o pH v rozmezí od
6,2 do 7,8 a až 100 mmolů/1 maltoheptózy nebo z násobku nebo· zlomku těchto množství v suchém nebo rozpuštěném· stavu.
Při jiném výhodném provedení sestává činidlo· podle vynálezu z α-glukózidázy, chloridu draselného· nebo chloridu sodného, pufru a substrátu. Takovéto činidlo obsahuje ’ zejména 102 až 5 x 106 j./l a-glukózidázy, 1 až 100 mmolů/1 chloridu sodného nebo chloridu draselného, 10 až 250 mmolů/1 pufru ’ o pH 5 až 9 a 0,1 až 250 mmolů/1 derivátu maltoheptózy obecného vzorce I, vztaženo· na · koncentraci při testu. Činidlo může být v suché, zejména lyofilizované podobě, nebo· v podobě roztoku, jako· směs všech složek nebo· v podobě oddělených složek.
Podle dalšího· provedení obsahuje činidlo· podle vynálezu výše uvedeného· typu navíc ještě · β-glukózidázu a/nebo fenoloxidázu a
3-méthyl-6-sulfonblbenéihiozolon-hrdrazon-(2) (HSK). -
Podle ještě jiného· provedení obsahuje činidlo podle vynálezu kromě ·a-glukózidázy, chloridu sodného nebo chloridu draselného, pufru a substrátu · ještě sorbitol-dehydrogenázu a oxidovaný nikotinamidadenindinukleotid (NAD) nebo glukonát-kinázu, adenosintrifosfát (ATP), dehydrogenázu kyseliny 6-fosfoglukonové a oxidovaný nikotinamidadenindinukleotid-fosfát (NADP) jakož · popřípadě i tetrazoliovou sůl a diaforázu popřípadě · fenazinmethosulfát (PMS).__________
Výhodné činidlo tohoto druhu obsahuje 1 χ 102 až 3 χ 106 j./l a-glukózidázy, 2 x χ 103 až 5 x 104 j./l sorbitol-dehydrogenázy, 1 χ 103 až 5 χ 104 j./l hexokinázy, 0,5 až 50 mmolů/1 ATP, 10 až 500 j./l diaforázy (Chlostridium a Kluyveri), 0,01 až 0,5 mmolů/1 tetrazoliové soli, 0,1 až 10 mmolů/1 NAD, 0,2 až 5 mmolů/1 chloridu horečnatého MgCl2, 0,5 až 20 mmolů/1 maltoheptitu, 1 až 100 mmolů/1 chloridu sodného nebo chloridu draselného! a 10 až 250 mmolů/1 pufru o pH 5,5 až 8,5.
Popřípadě je ještě přítomna neiontová povrchově aktivní látka v množství 5 až 50 mmolů/1.
Rovněž výhodné provedení obsahuje 100 až 3 χ 106 j./l of-glukózidázy, 10 až 104 j./l
6-fosfoglukónát-dehydrogenázy, 20 až 2 x χ 104 j./l glukonát-kinázy, 0,5 až 25 mmolů/1 ATP, 0,05 až 1,0 mmolů/1 NADP, 1,0 až 20 mmolů/1 kyseliny maltoheptaglukonové, 0,5 až 5 mmolů/1 chloridu hořečnatého, 1 až 100 mmolů/1 chloridu sodného a 10 až 250 mmolů/1 pufru o pH 5.5 až 8,5.
Další činidlo podle vynálezu obsahuje 0,1 až 250 mmolů/1 a-nitrofenylmaltoheptózidu nebo dinitrofenylmaltoheptózidu, 1 χ 102 až 2,5 x 10tí j./l a-glukózidázy, 1 až 100 mmolů/1 chloridu sodného nebo chloridu draselného a až 250 mmolů/1 fosfátového pufru o pH v romezí 7,0 až 8,0.
Podle opět jiného provedení činidlo podle vynálezu obsahuje:
0,1 až 250 mmolů/1 a-fenylmaltoheptozidu, 1 χ 102 až 1,5 x 10G j./l a-glukózidázy, 10 až 10δ j./l monofenoxidázy,
0,1 až 10 mmolů/1 3-methyl-6-sulfonyl-benzthiazolonhydrazonu-(2) (HSK), až 100 mmolů/1 chloridu sodného nebo chloridu draselného a až 250 mmolů/1 pufru.
Další výhodnou soustavou pro stanovení štěpných produktů je maltózofosforylázová soustava, která sestává v podstatě z maltózyfosforylázy, β-ϊosfoglukomutázy (^PGM. ], glukózo-6-f osf át-dehydrogenázy [ G6PDH), glukózo-l,6-difosfátu (Gl, 6DP), oxidovaného nikotinamidadenindinukleotidu (NAD), pufru, maltoheptózy a popřípadě 6-fosfoglukonát-dehydrogenázy (6PGDH).
Obzvlášť výhodné činidlo s toutou důkazovou soustavou sestává z
0,5 χ 103 až 20 χ 103 j./l maltózofosforylázy, χ 102 až 1 x 10ú /3-fosforglukomutázy, χ 102 až 3 χ 104 j./l glukózo-6-fosfát-dehydrogenázy,
0,5 až 10 mmolů/1 oxidovaného nikotinamidadenindinukleotidu (NAD),
0,001 až 1 mmol/1 glukózo-l,6-difosfátu, 0,5 až 100 mmolů/1 pufru o pH v rozmezí
6,0 až 7,5, až 50 mmolů/1 maltoiieptózy, a popřípadě
1,0 χ 102 až 1,0 χ 104 j./l 6-fosfoglukonát-dehydrogenázy.
Činidlo podle vynálezu může být v suchém nebo rozpuštěném stavu, může též být naneseno na nosiči v podobě listu, například na fólii, nebo jím může být napuštěn savý papír apod. V posledně uvedeném případu sestává účelně z alespoň tří vrstev popřípadě nánosů, přičemž první vrstva obsahuje substrát, druhá vrstva slouží jako krycí vrstva a třetí vrstva obsahuje soustavu pro stanovení štěpných produktů. Uvede-li se takovýto vícevrstvý reagenční materiál, který se hodí pro jednoduchou rychlou zkoušku ke stanovení α-amylázy, ve styk s kapalným vzorkem obsahujícím « amylázu, dojde ke štěpení substrátu a-amylázou a štěpné produkty difundují mezivrstvou do třetí vrstvy obsahující soustavu pro stanovení štěpných produktů. Jako důkazové reakce se v tomto případě účelně používá barvotvorné reakce, aby na základě vzniklého zbarvení byla koncentrace .a-amylázy učiněna vizuálně viditelnou, když štěpné produkty ]iž samy nejsou barevné.
Deriváty maltoheptózy, použité v činidle podle vynálezu, je možno vyrobit podle postupů, popsaných v německých zveřejňovacích spisech DOS 27 41 191 a 27 41 192. Níže uvedené příklady vynález blíže objasňují.
Příklad 1
Maltogenní metoda (α-glukózidázová soustava) ...
Směs reagencií, obsahující a-glukózidázu, glukózo-6-fosfát-dehydrogenázu, hexokinázu, oxidovaný nikotinamidadenindinukleotid, adenosintrifosfát, maltoheptózu, hořečnatý ion Mg2h, chlorid sodný a fosfátový pufr, se rozpustí ve 2,0 ml destilované vody. Trvanlivost činidla při teplotě místnosti je asi 1 hodinu, při teplotě pod 8 °C 6 hodin.
Vzniklý roztok obsahuje tyto· látky v níže uvedených koncentracích:
| fosfátový pufr | 50 mmolů/1; pH 7,0 |
| NaCl | 50 mmolů/1 |
| Mg2+ | 2 mmoly/1 |
| maltoheptóza | 10 mmolů/1 |
| adenosintrifosfát | 1,2 mmolu/1 |
| oxidovaný nikotinamid- | |
| adenindinukleotid | 2 mmoly/1 |
| hexokináza | 12 j./l |
| glukózo-6-fosfát- | |
| dehydrogenáza | 12 j./l |
| a-glukózidáza | 110 j./l |
К roztoku se při teplotě 25 °C přidá 0,02 mililitru vzorku séra, směs se přenese do kyvety o tloušťce vrstvy 1 cm a pak se ve fotometru určí extinkce při Hg 365 nm, 340 nm nebo Hg 334 nm. Po 10 minutách se extinkce odečte a pak se odečet pětkrát opakuje v intervalech 1 minuty.
Z takto určených rozdílů extinkce za minutu (ΔΕ/min.) se vypočte průměrná/ hodnota, od ní se odečte slepá hodnota činidla a takto opravená hodnota se použije pro výpočet.
Výpočet se provádí takto:
j./l 25 °C = = 4244 x ΔΕ 365 nm/min.
= 2290 x ΔΕ 340 nm/min.
= 2355 x ΔΕ 334 nm/min.
Na grafu v připojeném výkresu jsou znázorněny výsledky u zřeďovací řady lidského séra za použití fyziologického roztoku soli, které byly získány tímto činidlem. Na ose X tohoto grafu je vyneseno složení vzorku: horní řada (1 až 10) představuje počet objemových dílů lidského séra, dolní řada (9 až 0) představuje počet objemových dílů 0,9% roztoku chloridu sodného (fyziologický roztok soli). Na ose Y jsou vyneseny rozdíly extinkce za minutu (ΔΕ/min.).
Rozdělí-li se činidlo ve dvě vsázky, z nichž jedna obsahuje maltoheptózu a*druhá obsahuje směs všech zbývajících reagencií, je možno trvanlivost roztoků z nich vyrobených zvýšit. Tato trvanlivost je pro směs reagencií při teplotách od 8 °C 30 hodin, při teplotě místnosti přibližně 8 hodin. Trvanlivost roztoku maltoheptózy činí analogicky 6 týdnů, popřípadě přibližně 1 týden.
Příklad 2
Stanovení maltózofosforylázovou soustavou
Připraví se dvě činidla, sestávající z amylázového substrátu a z maltózoíosforylázové soustavy. Jedno1 činidlo obsahuje maltoheptózový substrát, druhé činidlo obsahuje rozpustný škrob podle dosavadního stavu techniky. Koncentrace činidel po rozpuštění ve vodě je tato:
činidlo podle vynálezu činidlo podle dosavadního . stavu techniky
| fosfátový pufr | 20 mmolů; pH 6,5 | 20 mmolů; pH 6,5 |
| oxidovaný nikotinamidadenin- | ||
| dinukleotid | 2 mmoly | 2 mmoly |
| maltoheptóza | 10 mmolů | — |
| rozpustný škrob | — | 5 mg/ml |
| glukózo-l,6-difosfát | stopy | stopy |
| maltózofosforyláza | 3 j./ml | 3 j./ml |
| (mikroorg. ] | ||
| β-fosforoglukomutáza | 1 j./ml | 1 j./ml |
| (mikroorg.) | ||
| glukózo-6-fosfátdehydrogenáza | 9 j./ml | 9 j./ml |
| (Leuconostoc mesent) | ||
| 6-fosfoglukonát-dehydroge- | 1 j./ml | 1 j./ml |
náza (Leuconostoc mesent)
Vzniklý roztok se inkubuje při teplotě 30 stupňů Celsia, načež se к němu přidá roztok vzorku a stanoví se fotometrem extinkční rozdíl při Hg 334 nm. Po lOminu tové předběžné inkubaci se extinkční roz díl měří po dobu 10 minut. Pro 2,0 ml či nidla a 0,10 ml vzorku plyne pak tento vý početní vzorek:
ΔΕ/min x -Q~—-W- = ΔΕ/min x 1699 j./l
6,18 x 0,1 x 0,2
Při použití pěti různých lidských sér byly pomocí výše uvedených činidel stanoveny tyto hodnoty:
sérum podle vynálezu škrob
| 1 | 37,4 j./l | 15,3 j./l |
| 2 | 61,2 j./l | 27,3 j./l |
| 3 | 95,1 j./l | 39,1 j./l |
| 4 | 114 j./l | 44,2 j./l |
| 5 | 374 j./l | 161 j./l |
о
Příklad 3
Důkaz α-amylázy pomocí fenyl-α maltoheptozidu jakožto substrátu
Fenyl-a-maltoheptozid se rozštěpí a-amy- lázou na fenyl-a-maltotriid nebo fenyl-a-maltotetraid, které se pomocí a-glukózidázy přemění na fenol a glukózu. Uvolněný fenol se monofenoloxidázou. oxidačně kopuluje s nukleofilním činidlem, S-methyl-6-sulfonylbenzthiazolon-hydrazonem-(2) (HSK) za vzniku červeného barviva, jehož rychlost tvorby je úměrná amylázové aktivitě ve vzorku a může být rotometricky sledována.
Princip testu:
rx-amyláza
a) fenyl-α maltoheptozid 4- H2O ----------->
-> fenyl-a-D-tri- (tetra) -glukopyranozid 4- maltotetra-(tri)-óza
b] fenyl-α D-tri- [ tetra )-glukopyranozid 4- tt-glukózidáza
4- 3 (4) H2O---------------> fenol 44 3(4) glukózy ni o n o f e η ol ox i d á z a
c) fenol 4- HSK 4- O2------------->
-+ barvivo 4- 2 H2O
Podmínky při měření:
°C, délka, vlny 492 nm, 1 cm kyvety; složení činidla je uvedeno v následující tabulce:
T a b u 1 к a činidlo koncentrace při testu fosfátový pufr, pH 7,4 chlorid sodný fenyl-a-D-maltohepto-zid HSK monofenoloxidáza a-glukózidáza
0,05 molu/1
0,05 molu/1 mmolů/1 mmol/l
j./ml
j./ml
Obejm směsi při testu: 2,0 ml.
Příklad 4
Stanovení a amylázy pomocí p-nitrofenylmaltoheptozidu
Princip testu:
a-amyláza p-nitrofenyl-a-maltoheptozid------> (glukóza )n 4- p-nitrofenyl-a-( glukóza )ni -> a-glukózidáza
-------->n glukóza + p-nitrofenol.
Po rozštěpení maltoheptozidu se štěpné produkty odbourají na glukózu a p-nitrofenol. Vzniklý p-nitrofenolátový anion je v alkalickém roztoku zbarven žlutě a lze jej tudíž měřením stanovit přímo opticky.
Testovací soustava:
Reagenční směs:
mmolů/1 fosfátového pufru, pH 7,4 mmolů/1 chloridu sodného až 50 j./ml a-glukózidázy pepř. 10 mmolů/1 p-nitrofenyl-a-maltoheptozidu
Násada při testu:
ml reagenční směsi ψ 50 ul vzorku (sérum) teplota 30 °C, vlnová délka 405 nm zahájení testu přidáním séra po dosažení měřicí teploty (10 minut předběžné inkubace).
Příklad 5
Stanovení α-amylázy pomocí maltoheptitu
Princip testu:
•a-amyláza maltoheptil 4- H2O.........—-> maltotriit 44- maltotetróza ír-glukózidáza inalíotriit 4- H2O----------> sorbitol 4J maltóza
SDH scrbiLol 4- NAD 1---> fruktóza 4- NADH 44- Hb diaforáza
NADH + INT 4- H4'-------> formazan +
4- NAD ·
Místo fosfátového pufru je možno použít i glycinového, glycylglycinového, hepesového, tris, tra- a jiných pufrů.
SDH = sorbitoddehydrogenáza
Testovací soustava:
Reagenční násada
Na-/K—PO4-pufr 0,02 molu/1 + triton x 100 2 ml/100 ml + NaCl 10 mmolů/1, pH 6,9
MgCl2 0,3 molu/1 roaltoheptit 100 mmolů/1
NAD c -= 40 mg/ml
INT c — 0,6 mg/ml diaforáza (Clostr. Kluyveri) 5 mg/ml+) ATP c = 50 mg/ml hexokináza 280 j./ml+)
SDH 180 j./ml+) a-glukózidáza 1120 j./ml+) vzorek (sérum) + ) v testovém· pufru
Zahájení testu přidáním vzorku: měření se provádí při délce vlny 492 nm; teplota 25 °C.
Příklad 6
Stanovení α-amylázy pomocí kyseliny maltoheptaglukonové
Princip testu:
kyselina maltoheptaglukonová + H2O -> «-amyláza
-----+ kyselina maltotriglukonová + + maltotetróza kyselina maltotriglukonová + H2O a-glukózidáza
-------> kyselina glukonová + + maltóza
| ml | koncentrace při testu |
| 1,92 | 12,8 mmolu/1 PO4 |
| 6,4 mmolu/1 | |
| 0,01 | 1,0 mmol/1 |
| 0,10 | 3,3 mmolu/1 |
| 0,05 | 1,0 mmo>l/1 |
| 0,20 | 0,09 mmolu/1 |
| 0,05 | 167 j./l |
| 0,10 | 3,29 mmolu/1 |
| 0,05 | 4 666 j./l |
| 0,30 | 18 000 j./l |
| 0,20 | 74 670 j./l |
glukonát-kináza kyselina glukonová + ATP---------->
-> G-fosfát kyseliny glukonové. + adenosindifosfát (ADP)
6-f ostát kyseliny · glukonové + NADP + -> dehydrogenáza kyseliny
------------ ribulóza-5-fosfát +
6-f(fstogk^ko]vové + NADPH + CO2 + H +
ATP = adenosintrifosfát
NADP = oxidovaný nikotinamidadenindinukleotid-fosfát
NADPH = redukovaný niko-tinamidadenindinukleotid-fosfát
Testovací soustava:
Reagenční násada ml koncentrace při testu
Na-/K—PO4-pufr 0,02 molu/1 + NaCl 10 mmolů/1, pH 6,9 MgCla 1 mol/1 kyselina maltoheptaglukonová
150 mmolů/1
NADP c = 10 mg/ml
ATP c = 50 mg/ml glukonátkináza 40 j./l dehydrogenáza kyseliny O-fostoglukonové 24 j./ml a-glukozidáza 1120 j./ml vzorek (sérum)
| 2,19 | 14,6 mmolu/1 fosfátu |
| 7,3 mmolu/1 NaCl | |
| 0,01 | 3,3 mmolu/1 |
| 0,10 | 5 mmolů/1 |
| 0,10 | 0,38 mmolu/1 |
| 0,10 | 2,7 mmolu/1 |
| 0,03 | 1066 j./l |
| 0,10 | 800 j./l |
| 0,30 | 11,2 χ 104 j./l |
| 0,02 |
Zahájení testu přidáním vzorku; měření se provádí při délce vlny 340 nm nebo 365 nm; teplota: 25 °C objem směsi při zkoušce 3,00 ml.
Příklad 7 fosfátový pufr pH 7,4 0,05 mo-lu/litr
NaCl 0,05 molu/litr fenyl-a-D-maltoheptozid 10 molů/litr
HSK 1 mmol/litr monofenoloxidáza 1000 až 5000 j./litr a-glukózidáza 100 000 až 50 000 j./litr
Po rozřezání na proužky o· šířce 6 mm a upevnění na vhodnou nosnou fólii se z ní zhotoví diagnostické proužky o šířce 6 mm, které po nanesení přibližně 10 μΐ séra uVhodné rouno z plastické hmoty například Binzer VS 532 (vhodné jsou i jiné savé materiály, papír atd.) se napustí roztokem dále uvedeného, složení a pak se suší přibližně 30 minut při teplotě 50 °C:
3 6 7 6 5 možní podle různě intenzivního· červeného· zbarvení (Amax přibližně 500 nm) zjistit obsah .«-amylázy v séru. Vyhodnocení )e možno provést vizuálně, porovnáním s barevnými stupnicemi, měřením remise atd.
Příklad 8
Vhodný materiál, obdobný materiálu popsanému v příkladu 7, se napustí roztokem popsaným v příkladu 5, přičemž se však množství diaforázy zvýší na 2000 j./litr. Po napuštění se materiál suší 30 minut při teplotě 50 °C, načež se postupuje jako v příkladu 7. I zde vznikne po nakapání 10 μ\ séra červené zbarvení (Amax 500 nm), které je možno vyhodnotit jak uvedeno· v příkladu 7. Jako tetrazoliové soli je přirozeně možno použít i MTT, NBT apod.
Claims (4)
1. Činidlo ke stanovení α-amylázy, obsahující substrát pro α-amylázu a soustavu ke stanovení štěpného produktu, vzniklého působením α-amylázy na substrát pro a-amylázu, vyznačující se tím, že substrátem je sloučenina obecného vzorce I kde - '
R znamená glukózidovou, fenylglukózidovou, mononitrofenylglukózidovou, dinitrofenylglukózidovou nebo sorbitolovou skupinu nebo· zbytek kyseliny glukonové.
2. Činidlo podle bodu 1, obsahující substrát · pro α-amylázu a · soustavu ke stanovení štěpného produktu, vzniklého působením α-amylázy na substrát pro α-amylázu, vyznačující se tím, že substrátem je sloučenina obecného vzorce I, kde R znamená glukózidovou skupinu.
3. Činidlo· podle bodu 1, obsahující substrát pro· α-amylázu a soustavu ke stanovení štěpného· produktu, vzniklého působením α-amylázy na substrát pro· α-amylázu, vyznačující se tím, že substrátem je sloučenina obecného vzorce I, kde R znamená fenylglukózldovou, mononitrofenylglukózidovou, din.itrofen^y^l^g^l^L^k^č^z^i^c^c^vou nebo sorbitolovou skupinu · nebo zbytek kyseliny glukonové.
4. Činidlo· podle bodů 1 až 3, vyznačující se tím, že je včleněno do listového nosíčového materiálu nebo je tento materiál jím napuštěn.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2741192A DE2741192C2 (de) | 1977-09-13 | 1977-09-13 | Verfahren zur Bestimmung von alpha- Amylase |
| DE19772755803 DE2755803A1 (de) | 1977-12-14 | 1977-12-14 | Verfahren und reagens zur bestimmung von alpha-amylase |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS236765B2 true CS236765B2 (en) | 1985-05-15 |
Family
ID=25772710
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS798241A CS236765B2 (en) | 1977-09-13 | 1979-11-29 | Agent for determining of alpha amylase |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4544631A (cs) |
| JP (1) | JPS5451892A (cs) |
| AR (1) | AR217476A1 (cs) |
| AT (1) | AT362526B (cs) |
| AU (1) | AU521908B2 (cs) |
| CA (1) | CA1120836A (cs) |
| CH (1) | CH651590A5 (cs) |
| CS (1) | CS236765B2 (cs) |
| DD (1) | DD138921A5 (cs) |
| DK (1) | DK153335C (cs) |
| ES (2) | ES473296A1 (cs) |
| FI (1) | FI61916C (cs) |
| FR (1) | FR2402872A1 (cs) |
| GB (2) | GB2004646B (cs) |
| HK (1) | HK54785A (cs) |
| HU (1) | HU182005B (cs) |
| IE (1) | IE47953B1 (cs) |
| IL (2) | IL55408A (cs) |
| IT (1) | IT1099451B (cs) |
| LU (1) | LU80213A1 (cs) |
| MY (1) | MY8600101A (cs) |
| NL (1) | NL190818C (cs) |
| SE (2) | SE433857B (cs) |
| SG (1) | SG21085G (cs) |
| YU (1) | YU44180B (cs) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2741192C2 (de) * | 1977-09-13 | 1982-07-01 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur Bestimmung von alpha- Amylase |
| JPS60997B2 (ja) * | 1978-01-31 | 1985-01-11 | 東洋紡績株式会社 | アミラ−ゼ活性測定法 |
| EP0048035B1 (en) * | 1978-06-06 | 1983-12-07 | Flow General, Inc. | Maltodextrin phosphorylase limit dextrin and method of producing it |
| JPS5768798A (en) * | 1980-10-14 | 1982-04-27 | Toyo Jozo Co Ltd | Novel measurement of amylase activity |
| EP0104047B1 (en) * | 1982-09-16 | 1987-07-29 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Modified oligosaccharides used as substrate for measuring alpha-amylase activity |
| DE3323245A1 (de) * | 1983-06-28 | 1985-01-10 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Verfahren und reagenz zur bestimmung von (alpha)-amylase |
| DE3328616A1 (de) * | 1983-08-08 | 1985-02-28 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Oligoglucosidderivate |
| JPS60114193A (ja) * | 1983-11-22 | 1985-06-20 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規なマルトースデヒドロゲナーゼおよびその製法それを用いる分析法 |
| US4794078A (en) * | 1984-07-26 | 1988-12-27 | Genzyme Corporation | Alpha amylase assay |
| US4649108A (en) * | 1984-07-26 | 1987-03-10 | Genzyme Corporation | Alpha amylase assay |
| JPS6183195A (ja) * | 1984-08-24 | 1986-04-26 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 新規なオリゴサツカライド誘導体、及びこれを基質として用いるα−アミラ−ゼ活性測定法 |
| JPS61124397A (ja) * | 1984-11-22 | 1986-06-12 | Toyobo Co Ltd | α−アミラ−ゼの活性測定用試薬 |
| DE3508384A1 (de) * | 1985-03-08 | 1986-11-06 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Hemmung humaner speichel- und pankreasamylase durch monoklonale antikoerper |
| SE451849B (sv) * | 1985-12-11 | 1987-11-02 | Svenska Sockerfabriks Ab | Sett att syntetisera glykosidiska bindningar samt anvendning av pa detta sett erhallna produkter |
| US4782018A (en) * | 1986-01-17 | 1988-11-01 | Eastman Kodak Company | Detection of hydrolyzing enzymes |
| DE3621271A1 (de) * | 1986-06-25 | 1988-01-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von alpha-amylase |
| US4963479A (en) * | 1986-10-07 | 1990-10-16 | Hoechst Celanese Corporation | Reagent system for an alpha-amylase assay containing aromatic substituted glycoside |
| US5158872A (en) * | 1986-10-07 | 1992-10-27 | Hoechst Celanese Corporation | Aromatic substituted glycoside |
| ATE124719T1 (de) * | 1987-07-17 | 1995-07-15 | Modrovich Ivan Endre | Stabiles alpha-amylase-reagenz. |
| US4932871A (en) * | 1987-11-20 | 1990-06-12 | Miles Inc. | Rapid method for preparing chromogenic alpha-amylase substrate compounds at high preparative yields |
| DE3743908A1 (de) * | 1987-12-23 | 1989-07-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue oligoglucoside |
| DE3929355A1 (de) * | 1989-09-04 | 1991-03-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung von pankreas-(alpha)-amylase |
| JP2576910B2 (ja) * | 1990-04-13 | 1997-01-29 | 富士写真フイルム株式会社 | 免疫分析要素および免疫分析方法 |
| US5300634A (en) * | 1991-05-07 | 1994-04-05 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for producing maltooligosaccharide derivative |
| JP3075377B2 (ja) * | 1991-11-06 | 2000-08-14 | 東洋紡績株式会社 | α−アミラーゼ活性の測定法およびα−アミラーゼ活性測定用試薬 |
| WO2000005398A1 (en) * | 1998-07-24 | 2000-02-03 | Samsung Fine Chemicals Co., Ltd. | Process for preparing alpha-(1,4) linked oligosaccharide |
| KR100374358B1 (ko) * | 2000-07-13 | 2003-03-04 | 주식회사 코메드 | 미생물 동정을 위한 비피검사법과 구연산염 검사법을대체하는 글루코시드 분해검사배지와 셀로비오스분해검사배지 및 그 검사법 |
| US20040096948A1 (en) * | 2002-11-15 | 2004-05-20 | Yunping Huang | Glycoprotein cleavage protocol for oligosaccharide analysis |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT986838B (it) * | 1972-05-12 | 1975-01-30 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Complesso di reagenti per la deter minazione enzimatica del glucosio sistema glucosio ossidasi perossi dasi con metodo manuale e automati co con lettura a termine o in cinetica |
| US3879263A (en) * | 1973-09-06 | 1975-04-22 | Du Pont | Method for the determination of amylase |
| US4000042A (en) * | 1973-09-06 | 1976-12-28 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Diagnostic reagent for the determination of amylase |
| US3867259A (en) * | 1973-11-08 | 1975-02-18 | American Cyanamid Co | Lactate dehydrogenase test material |
| DE2600526C3 (de) * | 1976-01-08 | 1981-06-19 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von mit Sauerstoff unter Oxidaseeinwirkung H↓2↓O↓2↓ bildenden Substanzen und Reagens zu seiner Durchführung |
| US4036697A (en) * | 1976-02-13 | 1977-07-19 | Beckman Instruments, Inc. | Kinetic assay for alpha-amylase |
| US4097336A (en) * | 1976-02-13 | 1978-06-27 | Beckman Instruments, Inc. | Reagent system for beta-amylase assay |
| US4059407A (en) * | 1976-04-14 | 1977-11-22 | Becton, Dickinson And Company | Disposable chemical indicators |
| NL179399C (nl) * | 1976-07-13 | 1986-09-01 | Du Pont | Werkwijze voor de bepaling van het amylase-gehalte van een monster en reagens-proefpakket daarvoor. |
| NL188646C (nl) * | 1976-07-13 | 1992-08-17 | Du Pont | Werkwijze voor het bereiden van nitroaromatische glycosiden. |
| US4071407A (en) * | 1976-11-16 | 1978-01-31 | The Board Of Trustees Of The University Of Alabama | Novel maltase enzyme produced by a new yeast strain |
| US4081326A (en) * | 1976-10-07 | 1978-03-28 | The Board Of Trustees Of The University Of Alabama | A method for removing maltotetraose and lower saccharides from solution |
| US4102747A (en) * | 1977-07-28 | 1978-07-25 | American Hospital Supply Corporation | Amylase determination |
| DE2748036C2 (de) * | 1977-10-26 | 1986-08-21 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur Gewinnung von Maltose-phosphorylase oder/und β-Phosphoglucose-mutase und Verwendung derselben |
| US4233403A (en) * | 1978-02-27 | 1980-11-11 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Amylase assay |
| US4219571A (en) * | 1978-06-15 | 1980-08-26 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Process for producing a sweetener |
| US4225672A (en) * | 1979-02-27 | 1980-09-30 | Hall Leo M | Method for producing maltooligosaccharide glycosides |
| US4932871A (en) * | 1987-11-20 | 1990-06-12 | Miles Inc. | Rapid method for preparing chromogenic alpha-amylase substrate compounds at high preparative yields |
-
1978
- 1978-08-14 AT AT589778A patent/AT362526B/de not_active IP Right Cessation
- 1978-08-16 CA CA000309495A patent/CA1120836A/en not_active Expired
- 1978-08-17 NL NL7808528A patent/NL190818C/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-08-22 IL IL55408A patent/IL55408A/xx active IP Right Grant
- 1978-08-23 DK DK372178A patent/DK153335C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-08-29 AR AR273483A patent/AR217476A1/es active
- 1978-08-30 IT IT27180/78A patent/IT1099451B/it active
- 1978-09-04 SE SE7809278A patent/SE433857B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-09-06 GB GB7835813A patent/GB2004646B/en not_active Expired
- 1978-09-06 GB GB8033088A patent/GB2058780B/en not_active Expired
- 1978-09-08 FR FR7825964A patent/FR2402872A1/fr active Granted
- 1978-09-11 DD DD78207746A patent/DD138921A5/xx unknown
- 1978-09-11 LU LU80213A patent/LU80213A1/de unknown
- 1978-09-11 CH CH9494/78A patent/CH651590A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-09-11 AU AU39750/78A patent/AU521908B2/en not_active Expired
- 1978-09-12 IE IE1838/78A patent/IE47953B1/en not_active IP Right Cessation
- 1978-09-12 HU HU78BO1734A patent/HU182005B/hu unknown
- 1978-09-12 YU YU2162/78A patent/YU44180B/xx unknown
- 1978-09-12 FI FI782789A patent/FI61916C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-09-13 JP JP11183678A patent/JPS5451892A/ja active Granted
- 1978-09-13 ES ES473296A patent/ES473296A1/es not_active Expired
-
1979
- 1979-04-27 ES ES480028A patent/ES480028A1/es not_active Expired
- 1979-11-29 CS CS798241A patent/CS236765B2/cs unknown
-
1981
- 1981-05-21 IL IL62923A patent/IL62923A0/xx unknown
- 1981-10-16 US US06/311,856 patent/US4544631A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-01-17 SE SE8400206A patent/SE454357B/sv not_active IP Right Cessation
-
1985
- 1985-03-21 SG SG210/85A patent/SG21085G/en unknown
- 1985-07-18 HK HK547/85A patent/HK54785A/xx not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-12-30 MY MY101/86A patent/MY8600101A/xx unknown
-
1990
- 1990-06-27 US US07/545,092 patent/US5108913A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS236765B2 (en) | Agent for determining of alpha amylase | |
| EP0171960B1 (en) | An alpha-amylase assay method and reagent kit | |
| Lorentz et al. | Evaluation of a direct α-amylase assay using 2-chloro-4-nitrophenyl-α-D-maltotrioside | |
| CS244665B2 (en) | Method of enzymatic determination of enzyme substrates | |
| US4698300A (en) | Process and reagent for the determination of α-amylase | |
| CS273162B2 (en) | Diagnostic agent for glicosidases activity determination | |
| Dike et al. | Tegumentary phosphohydrolases of Hymenolepis diminuta | |
| US5962248A (en) | Quantitative determination method for chloride ions | |
| US4012286A (en) | Determination of creatine phosphokinase in body fluids | |
| US4794078A (en) | Alpha amylase assay | |
| JPH06315399A (ja) | α−アミラーゼ活性測定用試薬および測定方法 | |
| CS236758B2 (en) | Method of determining of alpha-amylase | |
| EP0557021A2 (en) | Oligosaccharide derivatives suitable for alpha-amylase determination | |
| JPH0824598B2 (ja) | アミラ−ゼ定量用試験試薬 | |
| JPS63109798A (ja) | α−アミラ−ゼの定量法及び定量用試薬 | |
| JPS60160898A (ja) | 無機燐酸塩の酵素による測定方法 | |
| SI7812162A8 (sl) | Postopek za določitev alfa-amilaze | |
| JP2000189194A (ja) | α―アミラ―ゼ活性測定試薬及び測定方法 | |
| Kirkeby et al. | A Multiple Enzyme Method for Maasurement of K, Na ATPase | |
| KR100715924B1 (ko) | 1,5-안하이드로글루시톨의 정량 분석법 및 시약 | |
| EP1008853A2 (en) | Reagent compositions for measuring electrolyte using alpha-amylase | |
| JPH08291A (ja) | α−アミラーゼ活性の測定方法及びα−アミラーゼ活性測定用試薬 | |
| JPH11196899A (ja) | クレアチンキナーゼ測定のための方法及び試薬 | |
| JPS60160897A (ja) | アミラーゼ・アイソザイム測定用試薬 | |
| JPH03200801A (ja) | アンヒドロマルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα―アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα―アミラーゼ活性の測定方法 |