JPH0824598B2 - アミラ−ゼ定量用試験試薬 - Google Patents

アミラ−ゼ定量用試験試薬

Info

Publication number
JPH0824598B2
JPH0824598B2 JP62226247A JP22624787A JPH0824598B2 JP H0824598 B2 JPH0824598 B2 JP H0824598B2 JP 62226247 A JP62226247 A JP 62226247A JP 22624787 A JP22624787 A JP 22624787A JP H0824598 B2 JPH0824598 B2 JP H0824598B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
amylase
albumin
solution
mmol
aqueous
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP62226247A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS6471498A (en
Inventor
ペーター・ビツト
Original Assignee
アクゾ・エヌ・ヴエ−
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by アクゾ・エヌ・ヴエ− filed Critical アクゾ・エヌ・ヴエ−
Publication of JPS6471498A publication Critical patent/JPS6471498A/ja
Publication of JPH0824598B2 publication Critical patent/JPH0824598B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • C12Q1/40—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving amylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/96—Stabilising an enzyme by forming an adduct or a composition; Forming enzyme conjugates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
    • C12Q2334/10—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases p-Nitrophenol derivatives

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、液体試料中のα‐アミラーゼの量を測定す
るために使用される水性安定化酵素製剤に係る。
生物学的流体、特に尿及び血清中のα‐アミラーゼの
測定は、すい臓疾患の診断において臨床上非常に重要で
ある。
少なくとも３つのグルコース単位を含むオリゴ糖を使
用する多数のアッセイが知られており、その還元性末端
グルコース単位は、グルコシダーゼにより開裂可能であ
り且つ開裂後に測定可能な変化を示すラベルに結合され
ており、末端グルコース単位はブロックされており、細
胞外酵素により開裂を受けない。
α‐又はβ‐結合により還元性末端グルコース単位に
結合されるラベルは、p-又はo-ニトロフェノールのよう
な発色団、クマリン誘導体のような発蛍光団、又はルシ
フェリンのような化学もしくは生物発光置換基であり得
る。
末端グルコース単位のブロッキングは、過ヨウ素酸塩
酸化により、あるいはアセタール、ケタール又は他の任
意のそれ自体既知のブロッキング置換基を導入すること
により実施され得る。
測定すべきα‐アミラーゼの基質であるオリゴ糖は、
少なくとも３つのグルコース単位、好ましくは６〜８の
グルコース単位を有している。
液体試料、例えば尿又は血清中のα‐アミラーゼの測
定は、α‐及び／又はβ‐グルコシダーゼとグルコアミ
ラーゼとの２種の細胞外酵素の存在下で試料を前記オリ
ゴ糖基質と接触させることにより実施される。
α‐アミラーゼが不在の場合、ブロッキング基は細胞
外酵素が基質を分解するのを阻止するので、測定可能な
変化は生じない。
一方、試験すべき試料中にα‐アミラーゼが存在して
いるなら、エンド酵素がオリゴ糖基質をより小さいフラ
グメントに切断し、これが前記細胞外酵素の作用を受け
て発色団のようなラベルを放出し、これを測定すること
が可能である。
基質、細胞外酵素及びその他の添加成分から成る既知
の試薬は、常に凍結乾燥形態にある。
このような試薬を水溶液の形態で提供することは久し
い以前から望まれているが、残念ながら既知の試薬の水
溶液の安定性はかなり小さい。
発明者らが確認した処によると、水に溶解した既知の
凍結乾燥試薬の安定性は４℃の温度で２〜20日間と非常
に短いので、このような水性試験試薬は市販用として適
していない。
本発明は液体試料中のα‐アミラーゼの量を測定する
ために使用される水性安定化酵素製剤の製造に係り、該
製剤は、 a.還元性末端グルコース単位が、α‐又はβ‐グルコシ
ダーゼにより開裂可能であり且つ開裂後に測定可能な変
化を示すラベルに結合されており、末端グルコース単位
がブロックされて細胞外酵素による開裂が阻止されてい
る、少なくとも３つのグルコース単位を含むα‐アミラ
ーゼのオリゴ糖基質と、 b.グルコアミラーゼとα‐又はβ‐グルコシダーゼであ
る２種の細胞外酵素と、 c.安定剤として 1.緩衝剤、 2.タウロコール酸の水溶性金属塩、 3.アルブミン及び 4.多価アルコールから構成される組成物と を含む。
安定剤組成物中の緩衝液は濃度1.5〜6.0mmol/lのPIPE
S-緩衝液であり得るが、リン酸塩緩衝液が好適である。
タウロコール酸誘導体は好ましくはタウロコール酸の
アルカリ金属塩、例えばタウロコール酸ナトリウムであ
り、濃度は0.3〜1.5mmol/lである。
アルブミンは好ましくは濃度0.5〜4.0g/lのウシアル
ブミンである。
多価アルコールは任意の多価アルコールでよいが、好
ましくは濃度40〜200mmol/lのグリセロールが使用され
る。
上記水溶液に、例えばアジ化ナトリウムのような保存
剤、又は例えばアルカリ金属塩化物のような酵素活性化
剤等の他の成分を加えてもよい。
本発明の試験試薬は、α‐アミラーゼの定量前に相互
に結合される２種の別個の水溶液として提供されること
が好ましい。この場合、試験試薬は、緩衝水溶液中のブ
ロック及びラベルされたオリゴ糖基質から成る溶液Ａ
と、 1.濃度0.3〜1.5mmol/lのタウロコール酸の水溶性金属
塩、好ましくはアルカリ金属のタウロコール酸塩、 2.濃度0.5〜4.0g/lのアルブミン、好ましくはウシアル
ブミン、及び 3.濃度40〜200mmol/lの多価アルコール、好ましくはグ
リセロール から構成される組成物を安定剤として加えた緩衝水溶液
中の細胞外酵素から成る溶液Ｂとから構成される。
本発明の水性安定化試験試薬は、既知の試験試薬より
も非常にすぐれている。
水に溶解した既知の凍結乾燥試薬の安定性は４℃の温
度で平均７日未満であるが、本発明の水性試験試薬の安
定性は４℃の温度で少なくとも２〜３年である。
これ以外の驚くべき利点を挙げると、最終試薬がタウ
ロコール酸の水溶性金属塩、アルブミン及び多価アルコ
ールを含んでいる場合、試薬ブランクの吸収増加はこれ
らの物質を含まない同一の試薬に比較して２倍よりも小
さい。
更に別の利点として、本発明の試験試薬は既知の試薬
に比較して所要インキュベーション時間が実質的に短
い。
実施例 I.試験試薬（１溶液） ブロックされたp-ニトロフェニル‐α‐D-マルトヘプタ
オシド0.395mmol/l α‐グルコシダーゼ6.650U/l グルコアミラーゼ2.700U/l リン酸塩緩衝液66.7mmol/l タウロコール酸ナトリウム0.745mmol/l アジ化ナトリウム7.69mmol/l ウシアルブミン1.00g/l グリセロール87mmol/l pH7.1 II.試験試薬（２溶液） 溶液Ａ ブロックされたp-ニトロフェニル‐α‐D-マルトヘプタ
オシド0.79mmol/l リン酸塩緩衝液66.7mmol/l アジ化ナトリウム7.69mmol/l 塩化ナトリウム34mmol/l 溶液Ｂ α‐グルコシダーゼ13.500U/l グルコアミラーゼ5.400U/l リン酸塩緩衝液1.3mmol/l アジ化ナトリウム7.69mmol/l タウロコール酸ナトリウム1.49mmol/l ウシアルブミン2.0g/l グリセロール174mmol/l テストアッセイ 30μｌの血清に1000μｌの試験試薬を加えた後、夫々
25、30及び37℃で２分間インキュベートした。450nmに
おける毎分の吸収の変化を、計算式α‐アミラーゼ（U/
l）＝係数×ΔE405nm／分に従って決定した。

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】血清又は尿のような液体試料中のα‐アミ
    ラーゼの量を測定するために使用される水性安定化酵素
    製剤であって、 a.還元性末端グルコース単位が、α‐又はβ‐グルコシ
    ダーゼにより開裂可能であり且つ開裂後に測定可能な変
    化を示すラベルに結合されており、末端グルコース単位
    がブロックされて細胞外酵素による開裂が阻止されてい
    る、少なくとも３つのグルコース単位を含むα‐アミラ
    ーゼのオリゴ糖基質と、 b.グルコアミラーゼ及びα‐又はβ‐グルコシダーゼで
    ある２種の細胞外酵素と、 c.安定剤として緩衝液、タウロコール酸の水溶性金属
    塩、アルブミン及び多価アルコールから構成される組成
    物と から成る水性安定化酵素製剤。
  2. 【請求項２】緩衝水溶液中のブロック及びラベルされた
    オリゴ糖基質から成る溶液Ａと、濃度0.3〜1.5mmol/lの
    タウロコール酸の水溶性金属塩好ましくはアルカリ金属
    タウロコール酸塩、濃度0.5〜4.0g/lのアルブミン好ま
    しくはウシアルブミン、及び濃度40〜200mmol/lの多価
    アルコール好ましくはグリセロールから構成される組成
    物を安定剤として加えた緩衝水溶液中の細胞外酵素から
    成る溶液Ｂとから成り、α‐アミラーゼの定量前に相互
    に結合される２種の別個の水溶液から構成される特許請
    求の範囲第１項に記載の水性安定化酵素製剤。
  3. 【請求項３】緩衝液がリン酸塩緩衝液であり、タウロコ
    ール酸誘導体がタウロコール酸のアルカリ金属塩であ
    り、アルブミンがウシアルブミンであり、多価アルコー
    ルがグリセロールである特許請求の範囲第１項又は第２
    項に記載の酵素製剤。
JP62226247A 1986-09-10 1987-09-09 アミラ−ゼ定量用試験試薬 Expired - Lifetime JPH0824598B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP86201556A EP0259521A1 (en) 1986-09-10 1986-09-10 Test reagent for amylase determination
EP86201556.7 1986-09-10

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS6471498A JPS6471498A (en) 1989-03-16
JPH0824598B2 true JPH0824598B2 (ja) 1996-03-13

Family

ID=8195791

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP62226247A Expired - Lifetime JPH0824598B2 (ja) 1986-09-10 1987-09-09 アミラ−ゼ定量用試験試薬

Country Status (6)

Country Link
US (1) US4902621A (ja)
EP (2) EP0259521A1 (ja)
JP (1) JPH0824598B2 (ja)
DE (1) DE3778471D1 (ja)
ES (1) ES2031494T3 (ja)
GR (1) GR3005232T3 (ja)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5229270A (en) * 1986-11-17 1993-07-20 Kanto Kagaku Kabushiki Kaisha Reagent for the determination of chlorine ion
JP2542251B2 (ja) * 1987-07-17 1996-10-09 エンドレ モドロビッチ，アイバン 安定な一液性α―アミラ―ゼ検定用試薬
JPH0631293B2 (ja) * 1987-12-11 1994-04-27 東洋紡績株式会社 マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬
US5384245A (en) * 1992-05-04 1995-01-24 Ivan E. Modrovich Stable, single-liquid alpha-amylase reagent
US10845346B2 (en) 2015-05-29 2020-11-24 Water Lens, LLC Compositions, apparatus, and methods for determining hardness of water and magnesium ion in an analyte composition

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA940070A (en) * 1968-12-23 1974-01-15 Jim S. Berry Stabilized aqueous enzyme composition
US4310625A (en) * 1976-03-17 1982-01-12 Modrovich Ivan Endre Stabilized liquid enzyme compositions for diagnostic determinations
US4277562A (en) * 1976-09-13 1981-07-07 Modrovich Ivan Endre Stabilized liquid enzyme and coenzyme compositions
DE2911284C2 (de) * 1979-03-22 1982-01-28 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und Reagenz zur Aktivierung der Cholesterinesterase
US4259440A (en) * 1979-05-21 1981-03-31 Miles Laboratories, Inc. Hydrolysis and assay of triglycerides
DE3065827D1 (en) * 1979-08-23 1984-01-12 Ivan Endre Modrovich Method of stabilizing an enzyme solution for use in total cholesterol determination, stabilized solution and test kit therefor
US4378430A (en) * 1979-09-11 1983-03-29 Modrovich Ivan Endre Method of forming stabilized urease solutions
JPS5836954B2 (ja) * 1980-03-31 1983-08-12 栄研化学株式会社 酵素の安定化剤
US4622295A (en) * 1982-09-16 1986-11-11 Wako Pure Chemical Industries, Ltd. Modified oligosaccharides used as substrate for measuring α-amylase activity
DE3323245A1 (de) * 1983-06-28 1985-01-10 Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt Verfahren und reagenz zur bestimmung von (alpha)-amylase
US4649108A (en) * 1984-07-26 1987-03-10 Genzyme Corporation Alpha amylase assay
JPS6183195A (ja) * 1984-08-24 1986-04-26 Wako Pure Chem Ind Ltd 新規なオリゴサツカライド誘導体、及びこれを基質として用いるα−アミラ−ゼ活性測定法

Also Published As

Publication number Publication date
ES2031494T3 (es) 1992-12-16
DE3778471D1 (de) 1992-05-27
GR3005232T3 (ja) 1993-05-24
US4902621A (en) 1990-02-20
EP0262707B1 (en) 1992-04-22
EP0262707A1 (en) 1988-04-06
EP0259521A1 (en) 1988-03-16
JPS6471498A (en) 1989-03-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US4102747A (en) Amylase determination
US4649108A (en) Alpha amylase assay
CA1120836A (en) PROCESS AND A REAGENT FOR THE DETERMINATION OF .alpha.-AMYLASE
US4698300A (en) Process and reagent for the determination of α-amylase
Nelson et al. An investigation of the properties of rabbit muscle oligo-1, 4→ 1, 4-glucantransferase
JPH0824598B2 (ja) アミラ−ゼ定量用試験試薬
JP2807949B2 (ja) α−アミラーゼ活性測定用試薬および測定方法
US4794078A (en) Alpha amylase assay
US4812398A (en) Reagent for measuring amylase activity and measuring method thereof
WO1986000343A1 (en) Method of determining cystic fibrosis ciliostatic factor
JPS5931699A (ja) α−アミラ−ゼ活性の測定法
US5350678A (en) Method of differential assay for α-amylase isozymes and a kit for the same
WO1989000600A1 (en) Stable, single-liquid alpha-amylase reagent
JPH0113840B2 (ja)
JP3685268B2 (ja) α−アミラーゼ活性測定法および測定試薬組成物
JP3627817B2 (ja) α−アミラーゼ活性測定法およびその試薬組成物
JP3901990B2 (ja) α−アミラーゼ活性測定用試薬および測定方法
US4395487A (en) Method for assay of α-amylase activity
JP4171088B2 (ja) 新規オリゴ糖誘導体、それを含有するα−アミラーゼ活性測定試薬および測定方法
JPH0761279B2 (ja) α−アミラ−ゼ活性の測定試薬
JPH04229196A (ja) α‐アミラーゼアイソザイム活性の分別定量法
JPS6365313B2 (ja)
JPH0799997A (ja) α−アミラーゼ活性測定用試薬
JPH07163395A (ja) α‐アミラーゼアイソザイム活性の分別定量法
JPH06205699A (ja) α−アミラーゼ活性測定法及びα−アミラーゼ活性測定用試薬