JPH0761279B2 - α−アミラ−ゼ活性の測定試薬 - Google Patents
α−アミラ−ゼ活性の測定試薬Info
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- JPH0761279B2 JPH0761279B2 JP13935287A JP13935287A JPH0761279B2 JP H0761279 B2 JPH0761279 B2 JP H0761279B2 JP 13935287 A JP13935287 A JP 13935287A JP 13935287 A JP13935287 A JP 13935287A JP H0761279 B2 JPH0761279 B2 JP H0761279B2
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Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ヒト体液中のα−アミラーゼ活性の測定試薬
に関する。
に関する。
（従来の技術） 血清、尿、膵液、唾液等の体液中のα−アミラーゼ活性
の測定は、急性或いは慢性膵炎、膵臓癌、唾液腺疾患等
の診断の重要な指標となっている。最近、α−アミラー
ゼ活性測定用基質として、構造の明確なマルトオリゴ
糖、例えばマルトテトラオース、マルトペンタオース、
マルトヘキサオース等が使用されるようになってきた。
これらについて、マルトペンタオースを基質として使用
する場合の測定原理は、下記の式による。
の測定は、急性或いは慢性膵炎、膵臓癌、唾液腺疾患等
の診断の重要な指標となっている。最近、α−アミラー
ゼ活性測定用基質として、構造の明確なマルトオリゴ
糖、例えばマルトテトラオース、マルトペンタオース、
マルトヘキサオース等が使用されるようになってきた。
これらについて、マルトペンタオースを基質として使用
する場合の測定原理は、下記の式による。
ここで生成したグルコースは、公知の方法、例えばグル
コースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、色素系、又は
ヘキソキナーゼ、ATP、グルコース−６−リン酸脱水素
酵素、NADH系等で測定される。しかし、この測定系は、
マルトース、グルコースを中間体とするため、体液中の
内因性のこれらの物質の影響を受けるという欠点があ
り、精度の高いα−アミラーゼ活性測定値が得られな
い。
コースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、色素系、又は
ヘキソキナーゼ、ATP、グルコース−６−リン酸脱水素
酵素、NADH系等で測定される。しかし、この測定系は、
マルトース、グルコースを中間体とするため、体液中の
内因性のこれらの物質の影響を受けるという欠点があ
り、精度の高いα−アミラーゼ活性測定値が得られな
い。
他方、マルトオリゴ糖の還元末端に４−ニトロフェノー
ル或いはその誘導体を結合した基質が合成され、α−ア
ミラーゼ活性測定用試薬として使用され始めた。これら
には、次のようなものが提案されている。
ル或いはその誘導体を結合した基質が合成され、α−ア
ミラーゼ活性測定用試薬として使用され始めた。これら
には、次のようなものが提案されている。
ｐ−ニトロフェニルマルトペンタオサイド （特公昭57−53079号公報参照） ｐ−ニトロフェニルマルトヘキサオサイド （特公昭57−53079号公報参照） ｐ−ニトロフェニルマルトヘプタオサイド （特開昭54−51892号公報参照） ハロゲン化ｐ−ニトロフェニルマルトオリゴ糖 （特開昭61−28400号公報参照） これらの化合物を基質とするα−アミラーゼ活性の測定
原理は、β−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）マル
トペンタオサイドを基質として使用する例によると次の
よになる。
原理は、β−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）マル
トペンタオサイドを基質として使用する例によると次の
よになる。
ここに遊離した２−クロロ−４−ニトロフェノールの生
成量によって、α−アミラーゼ活性が測定される。
成量によって、α−アミラーゼ活性が測定される。
（発明が解決しようとする問題点） 上記の系では、内因性マルトース、グルコースの影響
は、ほとんど受けないが、遊離基である２−クロロ−４
−ニトロフェノールの極大吸収が400nmであり、この付
近の吸光度変化を利用してα−アミラーゼ活性を定量す
るため、検体中のヘモグロビンの吸収が重なり、そして
ヘモグロビンの吸収及び吸光度が経時的に変化するた
め、見掛け上、遊離基の吸収及び吸光度の変化として光
学的にとらえられ、従って、α−アミラーゼ活性測定値
に対して正又は負の誤差を与えてしまう。このため、溶
血等によりヘモグロビンが共存している検体中のα−ア
ミラーゼ活性の測定値は、信頼性の薄いものであった。
は、ほとんど受けないが、遊離基である２−クロロ−４
−ニトロフェノールの極大吸収が400nmであり、この付
近の吸光度変化を利用してα−アミラーゼ活性を定量す
るため、検体中のヘモグロビンの吸収が重なり、そして
ヘモグロビンの吸収及び吸光度が経時的に変化するた
め、見掛け上、遊離基の吸収及び吸光度の変化として光
学的にとらえられ、従って、α−アミラーゼ活性測定値
に対して正又は負の誤差を与えてしまう。このため、溶
血等によりヘモグロビンが共存している検体中のα−ア
ミラーゼ活性の測定値は、信頼性の薄いものであった。
上記のような影響は、上記の遊離基に限らず、４−ニト
ロフェノールやその誘導体等、400nm付近に極大吸収を
持つ遊離基の場合にも同様に発現する。
ロフェノールやその誘導体等、400nm付近に極大吸収を
持つ遊離基の場合にも同様に発現する。
従って、本発明は、検体中にヘモグロビンが共存して
も、その影響を受けることなく、高い精度でα−アミラ
ーゼ活性を測定しうる試薬を提供することを目的とす
る。
も、その影響を受けることなく、高い精度でα−アミラ
ーゼ活性を測定しうる試薬を提供することを目的とす
る。
（問題点を解決するための手段） 本発明は、（ａ）α−グルコシダーゼ又はα−グルコシ
ダーゼ及びβ−グルコシダーゼ、（ｂ）色素生成性少糖
類基質並びに（ｃ）フェリシアン化カリウムを含有して
なるα−アミラーゼ活性の測定試薬に関する。
ダーゼ及びβ−グルコシダーゼ、（ｂ）色素生成性少糖
類基質並びに（ｃ）フェリシアン化カリウムを含有して
なるα−アミラーゼ活性の測定試薬に関する。
上記フェリシアン化カリウムは、最終濃度（試料及び試
薬を混合し、測定する状態での濃度）が１〜500mg/dlに
なるように使用するのが好ましく、特に４〜50mg/dlに
なるように使用するのが好ましい。フェリシアン化カリ
ウムが少なすぎると、これを使用した効果がなく、多す
ぎると、黄色に着色しやすくなる。
薬を混合し、測定する状態での濃度）が１〜500mg/dlに
なるように使用するのが好ましく、特に４〜50mg/dlに
なるように使用するのが好ましい。フェリシアン化カリ
ウムが少なすぎると、これを使用した効果がなく、多す
ぎると、黄色に着色しやすくなる。
本発明のα−アミラーゼ活性測定方法で使用する基質と
は、α−アミラーゼとα−グリコシダーゼ又はα−グリ
コシダーゼ及びβ−グリコシダーゼの作用を順次受けて
色素を生成する物質であり、還元末端に色素がα−結合
又はβ−結合したマルトオリゴ糖を使用することがで
き、繰り返し単位数が４〜10であるマルトオリゴ糖の還
元末端ヒドロキシ基に対して色素がグリコシド結合した
ものであり、グリコシド結合はα−結合又はβ−結合及
びこれらの混合したものであってもよい。
は、α−アミラーゼとα−グリコシダーゼ又はα−グリ
コシダーゼ及びβ−グリコシダーゼの作用を順次受けて
色素を生成する物質であり、還元末端に色素がα−結合
又はβ−結合したマルトオリゴ糖を使用することがで
き、繰り返し単位数が４〜10であるマルトオリゴ糖の還
元末端ヒドロキシ基に対して色素がグリコシド結合した
ものであり、グリコシド結合はα−結合又はβ−結合及
びこれらの混合したものであってもよい。
マルトオリゴ糖としては、マルトテトラオース、マルト
ペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオー
ス等がある。色素としては、４−ニトロフェノール、２
−クロロ−４−ニトロフェノール等、350〜600nm、特に
400nm付近に極大吸収を有する化合物で、マルトオリゴ
糖の還元末端のヒドロキシ基に対してグリコシド結合可
能な任意の化合物を使用することができるが、４−ニト
ロフェノール、２−クロロ−４−ニトロフェノールを使
用するのが好ましい。
ペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオー
ス等がある。色素としては、４−ニトロフェノール、２
−クロロ−４−ニトロフェノール等、350〜600nm、特に
400nm付近に極大吸収を有する化合物で、マルトオリゴ
糖の還元末端のヒドロキシ基に対してグリコシド結合可
能な任意の化合物を使用することができるが、４−ニト
ロフェノール、２−クロロ−４−ニトロフェノールを使
用するのが好ましい。
本発明において使用する共役酵素は、α−グルコシダー
ゼ又はα−グルコシダーゼ及びβ−グルコシダーゼであ
る。α−グルコシダーゼは、いかなる起源のものでもよ
く、例えばサッカロマイセス・カルロスペルゲンシス、
酵母等から得られたものがある。また、β−グルコシダ
ーゼも、いかなる起源のものでもよく、例えばアーモン
ドから得られたものがある。
ゼ又はα−グルコシダーゼ及びβ−グルコシダーゼであ
る。α−グルコシダーゼは、いかなる起源のものでもよ
く、例えばサッカロマイセス・カルロスペルゲンシス、
酵母等から得られたものがある。また、β−グルコシダ
ーゼも、いかなる起源のものでもよく、例えばアーモン
ドから得られたものがある。
α−アミラーゼを賦活化するため、本発明の測定試薬に
無機酸又は有機酸のカルシウム塩及び／又はナトリウム
塩を必要に応じて組み合わせることができる。無機酸又
は有機酸のカルシウム塩としては、塩化カルシウム、炭
酸カルシウム、蓚酸カルシウム、酢酸カルシウム、クエ
ン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、乳酸カルシウ
ム、リン酸二水素カルシウム、リン酸水素カルシウム、
リン酸三カルシウム、硫酸カルシウム等がある。
無機酸又は有機酸のカルシウム塩及び／又はナトリウム
塩を必要に応じて組み合わせることができる。無機酸又
は有機酸のカルシウム塩としては、塩化カルシウム、炭
酸カルシウム、蓚酸カルシウム、酢酸カルシウム、クエ
ン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、乳酸カルシウ
ム、リン酸二水素カルシウム、リン酸水素カルシウム、
リン酸三カルシウム、硫酸カルシウム等がある。
また、無機酸又は有機酸のナトリウム塩としては、塩化
ナトリウム、酢酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウ
ム、アジ化ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸水素ナト
リウム、亜硫酸水素ナトリウム、酒石酸水素ナトリウ
ム、ホウ酸ナトリウム、ｎ−酪酸ナトリウム、炭酸ナト
リウム、クエン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウ
ム、プロピオン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、グルコ
ン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素二ナ
トリウム、硫酸水素ナトリウム等がある。
ナトリウム、酢酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウ
ム、アジ化ナトリウム、硫酸ナトリウム、硫酸水素ナト
リウム、亜硫酸水素ナトリウム、酒石酸水素ナトリウ
ム、ホウ酸ナトリウム、ｎ−酪酸ナトリウム、炭酸ナト
リウム、クエン酸ナトリウム、リン酸二水素ナトリウ
ム、プロピオン酸ナトリウム、ギ酸ナトリウム、グルコ
ン酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、リン酸水素二ナ
トリウム、硫酸水素ナトリウム等がある。
無機酸又は有機酸のカルシウム塩は、最終濃度が0.01〜
10mMになるように使用するのが好ましく、無機酸又は有
機酸のナトリウム塩は、最終濃度が1mM〜1Mになるよう
に使用するのが好ましい。
10mMになるように使用するのが好ましく、無機酸又は有
機酸のナトリウム塩は、最終濃度が1mM〜1Mになるよう
に使用するのが好ましい。
更に、必要に応じて、他の成分、例えば抗生物質、化学
療法剤、エチレンジアミン四酢酸塩、チッ化ナトリウム
等のキレート剤、界面活性剤等を組み合わせることがで
きる。
療法剤、エチレンジアミン四酢酸塩、チッ化ナトリウム
等のキレート剤、界面活性剤等を組み合わせることがで
きる。
本発明においては、前記の（ａ）〜（ｃ）成分及び必要
に応じて使用できる成分は、予め混合しておく必要はな
く、α−アミラーゼ活性の測定にあたり、試料（検体）
に順次添加してもよく、また、試料と色素生成性少糖類
基質との反応と同時又は反応後に添加してもよい。
に応じて使用できる成分は、予め混合しておく必要はな
く、α−アミラーゼ活性の測定にあたり、試料（検体）
に順次添加してもよく、また、試料と色素生成性少糖類
基質との反応と同時又は反応後に添加してもよい。
また、前記の（ａ）〜（ｃ）成分及び必要に応じて使用
できる成分は、予め適宜の組み合わせで混合して使用し
てもよいが、色素生成性少糖類基質とα−グルコシダー
ゼ又はα−グルコシダーゼ及びβ−グルコシダーゼと
は、予め混合しない方がよい。これは、両者を混合した
場合に、貯蔵中に色素生成性少糖類基質が分解される危
険性を排除するためである。
できる成分は、予め適宜の組み合わせで混合して使用し
てもよいが、色素生成性少糖類基質とα−グルコシダー
ゼ又はα−グルコシダーゼ及びβ−グルコシダーゼと
は、予め混合しない方がよい。これは、両者を混合した
場合に、貯蔵中に色素生成性少糖類基質が分解される危
険性を排除するためである。
前記の（ａ）〜（ｃ）成分及び必要に応じて使用できる
成分は、蒸留水又は緩衝液中に溶解して使用されるのが
好ましい。緩衝液としては、pH6.6〜pH7.5の間で緩衝能
を示す緩衝剤、例えばリン酸緩衝剤、グッド緩衝剤等を
使用することができる。
成分は、蒸留水又は緩衝液中に溶解して使用されるのが
好ましい。緩衝液としては、pH6.6〜pH7.5の間で緩衝能
を示す緩衝剤、例えばリン酸緩衝剤、グッド緩衝剤等を
使用することができる。
測定原理は、前述したとおり公知のものと同様である。
ただし、グルコシダーゼとして、α−グルコシダーゼの
みを使用する場合は、色素生成性少糖類として色素がα
−結合した色素生成性少糖類を使用し、α−アミラーゼ
及びα−グルコシダーゼの作用を順次受けて、色素が遊
離する。
ただし、グルコシダーゼとして、α−グルコシダーゼの
みを使用する場合は、色素生成性少糖類として色素がα
−結合した色素生成性少糖類を使用し、α−アミラーゼ
及びα−グルコシダーゼの作用を順次受けて、色素が遊
離する。
グルコシダーゼとして、α−グルコシダーゼのみを使用
する場合、色素生成性少糖類としては色素がα−結合し
たもののみ又はα−結合したもの及びβ−結合したもの
を使用することができるが、α−結合したもののみを使
用するのが好ましい。また、グルコシダーゼとしてα−
グルコシダーゼ及びβ−グルコシダーゼを使用する場
合、色素生成性少糖類としては、色素がα−結合したも
の及び／又はβ−結合したものが使用できるが、β−結
合したものを使用するのが特に好ましい。
する場合、色素生成性少糖類としては色素がα−結合し
たもののみ又はα−結合したもの及びβ−結合したもの
を使用することができるが、α−結合したもののみを使
用するのが好ましい。また、グルコシダーゼとしてα−
グルコシダーゼ及びβ−グルコシダーゼを使用する場
合、色素生成性少糖類としては、色素がα−結合したも
の及び／又はβ−結合したものが使用できるが、β−結
合したものを使用するのが特に好ましい。
本発明の測定試薬を適用しうる試料としては、血清、
尿、膵液、唾液等がある。
尿、膵液、唾液等がある。
（作用） 体液中のα−アミラーゼ活性を測定する際に、試薬中に
フェリシアン化カリウムを共存させると、検体（試料）
中にヘモグロビンが存在する場合、フェリシアン化カリ
ウムがヘモグロビンを酸化して、吸収及び吸光度が安定
であるメトヘモグロビンに変換する。これにより、ヘモ
グロビンの吸収と重なる350〜600nm、特に400nm付近に
極大吸収を有する化合物を遊離させ、その吸光度の変化
を測定する方法において、目的の遊離基の吸光度変化の
みを精度良く測定することが可能になり、正又は負の誤
差の発生が防止される。
フェリシアン化カリウムを共存させると、検体（試料）
中にヘモグロビンが存在する場合、フェリシアン化カリ
ウムがヘモグロビンを酸化して、吸収及び吸光度が安定
であるメトヘモグロビンに変換する。これにより、ヘモ
グロビンの吸収と重なる350〜600nm、特に400nm付近に
極大吸収を有する化合物を遊離させ、その吸光度の変化
を測定する方法において、目的の遊離基の吸光度変化の
みを精度良く測定することが可能になり、正又は負の誤
差の発生が防止される。
（実施例） 次に、実施例に基づいて本発明を詳述するが、本発明は
これに限定されるものではない。
これに限定されるものではない。
実施例１ 下記の試薬を用い、下記の方法によりヘモグロビンの共
存している試料中のα−アミラーゼ活性を測定した。
存している試料中のα−アミラーゼ活性を測定した。
（１）試薬 試薬 pH7.0の50mM PIPES〔ピペラジン−N,N′−ビス（２−エ
タンスルホン酸）ナトリウム塩〕水溶液にα−グルコシ
ダーゼを100U/ml、β−グルコシダーゼを5U/ml、NaClを
3.2mg/ml、CaCl2・2H2Oを20μg/ml、及びK3Fe(CN)6を80
μg/mlの濃度で溶解したもの。
タンスルホン酸）ナトリウム塩〕水溶液にα−グルコシ
ダーゼを100U/ml、β−グルコシダーゼを5U/ml、NaClを
3.2mg/ml、CaCl2・2H2Oを20μg/ml、及びK3Fe(CN)6を80
μg/mlの濃度で溶解したもの。
試薬 試薬からK3Fe(CN)6を除いたもの。
試薬 pH7.0の50mM PIPES水溶液に、β−（２−クロロ−４−
ニトロフェニル）マルトペンタオサイドを2.0mMの濃度
で溶解したもの。
ニトロフェニル）マルトペンタオサイドを2.0mMの濃度
で溶解したもの。
（２）試料 プール血清（α−アミラーゼ活性約200U/l）にヒト血球
を溶血処理した得たヘモグロビンを種々の濃度で添加し
たものを試料とした。
を溶血処理した得たヘモグロビンを種々の濃度で添加し
たものを試料とした。
試料A:ヘモグロビン0mg 試料B:ヘモグロビン100mg/dl 試料C:ヘモグロビン200mg/dl 試料D:ヘモグロビン300mg/dl 試料E:ヘモグロビン400mg/dl 試料F:ヘモグロビン500mg/dl （３）測定 各試料５μｌに試薬250μｌを加えて37℃で５分間加
温した後、試薬250μｌを加えて反応させ、血清の代
わりに生理食塩水を使用して得た結果（以下、試薬ブラ
ンクという）を対照に、試薬添加後３分から５分の間
の直線部の吸光度の変化量を主波長415nm、副波長700nm
で測定した。
温した後、試薬250μｌを加えて反応させ、血清の代
わりに生理食塩水を使用して得た結果（以下、試薬ブラ
ンクという）を対照に、試薬添加後３分から５分の間
の直線部の吸光度の変化量を主波長415nm、副波長700nm
で測定した。
比較例として、試薬の代わりに試薬を用いて同様の
測定を行った。
測定を行った。
得られた結果を第１表に示す。
第１表から明らかなように、比較例では、ヘモグロビン
含有量が多くなるに従って、吸光度の変化量が少なくな
るが、本発明の試薬を用いた場合には、ほとんど変動が
ない。
含有量が多くなるに従って、吸光度の変化量が少なくな
るが、本発明の試薬を用いた場合には、ほとんど変動が
ない。
実施例２ （１）試薬 試薬（ａ） pH7.1の51mMリン酸緩衝液に、α−グルコシダーゼを38.
4U/ml、NaClを2.98mg/ml、及びK3Fe(CN)6を100μg/mlの
濃度で溶解したもの。
4U/ml、NaClを2.98mg/ml、及びK3Fe(CN)6を100μg/mlの
濃度で溶解したもの。
試薬（ｂ） 試薬（ａ）からK3Fe(CN)6を除いたもの。
試薬（ｃ） pH7.1の51mMリン酸緩衝液にα−（４−ニトロフェニ
ル）マルトヘプタオサイドを28.2mMの濃度で溶解したも
の。
ル）マルトヘプタオサイドを28.2mMの濃度で溶解したも
の。
試料（２） 実施例１と同様に調製した試料を用いた。
（３）測定 各試料10μｌに試薬（ａ）350μｌを加えて、37℃で５
分間加温した後、試薬（ｃ）70μｌを加えて反応させ、
試薬ブランクを対照に、試薬（ｃ）を添加後２分20秒か
ら５分の間の直線部の吸光度の変化量を主波長415nm、
副波長660nmで測定した。
分間加温した後、試薬（ｃ）70μｌを加えて反応させ、
試薬ブランクを対照に、試薬（ｃ）を添加後２分20秒か
ら５分の間の直線部の吸光度の変化量を主波長415nm、
副波長660nmで測定した。
比較例として、試薬（ａ）の代わりに試薬（ｂ）を用い
て同様の測定を行った。
て同様の測定を行った。
得られた結果を第２表に示す。
第２表から明らかなように、比較例では、ヘモグロビン
含有量が多くなるに従って、吸光度の変化量が少なくな
るが、本発明の試薬を用いた場合には、ほとんど変動が
ない。
含有量が多くなるに従って、吸光度の変化量が少なくな
るが、本発明の試薬を用いた場合には、ほとんど変動が
ない。
実施例３ （１）試薬 試薬（Ａ） pH7.0の50mM PIPES水溶液に、α−グルコシダーゼを50U
/ml、β−グルコシダーゼを2.5U/ml、β−（２−クロロ
−４−ニトロフェニル）−マルトペンタオサイドを1.0m
M、NaClを3.2mg/ml、CaCl2・2H2Oを20μg/ml、及びK3Fe
(CN)6を100μg/mlの濃度で溶解したもの。
/ml、β−グルコシダーゼを2.5U/ml、β−（２−クロロ
−４−ニトロフェニル）−マルトペンタオサイドを1.0m
M、NaClを3.2mg/ml、CaCl2・2H2Oを20μg/ml、及びK3Fe
(CN)6を100μg/mlの濃度で溶解したもの。
試薬（Ｂ） 試薬（Ａ）からK3Fe(CN)6を除いたもの。
（２）試料 実施例１と同様に調製した試料を用いた。
（３）測定 各試料５μｌに試薬（Ａ）400μｌを加えて、37℃で反
応させ、試薬ブランクを対照に、３分から５分の間の直
線部の吸光度の変化量を主波長415nm、副波長700nmで測
定した。
応させ、試薬ブランクを対照に、３分から５分の間の直
線部の吸光度の変化量を主波長415nm、副波長700nmで測
定した。
比較例として、試薬（Ａ）の代わりに試薬（Ｂ）を用い
て同様の測定を行った。
て同様の測定を行った。
得られた結果を第３表に示す。
第３表から明らかなように、比較例では、ヘモグロビン
含有量が多くなるに従って、吸光度の変化量が少なくな
るが、本発明の試薬を用いた場合には、ほとんど変動が
ない。
含有量が多くなるに従って、吸光度の変化量が少なくな
るが、本発明の試薬を用いた場合には、ほとんど変動が
ない。
実施例４ （１）試薬 試薬（実施例１と同じ） 試薬（ 〃 １と同じ） 試薬（ｂ）（ 〃 ２と同じ） 試薬（ｃ）（ 〃 ２と同じ） （２）試料 ヒト血清（溶血していないもの）37検体及び溶血してい
るヒト血清33検体を用いた。
るヒト血清33検体を用いた。
（３）測定 各試料５μｌに試薬250μｌを加えて37℃で５分間加
温した後、試薬250μｌを加えて反応させ、試薬ブラ
ンクを対照に、試薬添加後３分から５分の間の直線部
の吸光度の変化量を主波長415nm、副波長700nmで測定し
た。また、既知濃度のヒト血清を試料とし、同様に操作
して得られた検量線からα−アミラーゼ活性を求めた。
温した後、試薬250μｌを加えて反応させ、試薬ブラ
ンクを対照に、試薬添加後３分から５分の間の直線部
の吸光度の変化量を主波長415nm、副波長700nmで測定し
た。また、既知濃度のヒト血清を試料とし、同様に操作
して得られた検量線からα−アミラーゼ活性を求めた。
比較例として、各試料10μｌに試薬（ｂ）350μｌを加
えて、37℃で５分間加温した後、試薬（ｃ）70μｌを加
えて反応させ、試薬ブランクを対照に、試薬（ｃ）を添
加後２分20秒から５分の間の直線部の吸光度の変化量を
主波長415nm、副波長660nmで測定した。また、既知濃度
のヒト血清を試料とし、同様に操作して得られた検量線
からα−アミラーゼ活性を求めた。
えて、37℃で５分間加温した後、試薬（ｃ）70μｌを加
えて反応させ、試薬ブランクを対照に、試薬（ｃ）を添
加後２分20秒から５分の間の直線部の吸光度の変化量を
主波長415nm、副波長660nmで測定した。また、既知濃度
のヒト血清を試料とし、同様に操作して得られた検量線
からα−アミラーゼ活性を求めた。
以上の試薬＋と試薬（ｂ）＋（ｃ）を用いた測定値
を、溶血していない試料については第４表に、溶血して
いる試料については第５表に示す。
を、溶血していない試料については第４表に、溶血して
いる試料については第５表に示す。
上記の結果から明らかなとおり、溶血していない試料
（ヘモグロビンなし）では、比較例と非常に良い相関を
示している（第４表）が、溶血している試料（ヘモグロ
ビン含有）では、比較例の測定値は本発明の試薬を用い
た場合より低くなっている（第５表）。これは、比較例
の試薬では、ヘモグロビンの影響で吸光度変化量が低下
するのに対し、本発明の試薬を用いた場合には、ヘモグ
ロビンの影響を受けず、正確なα−アミラーゼ活性を示
していることを示す。
（ヘモグロビンなし）では、比較例と非常に良い相関を
示している（第４表）が、溶血している試料（ヘモグロ
ビン含有）では、比較例の測定値は本発明の試薬を用い
た場合より低くなっている（第５表）。これは、比較例
の試薬では、ヘモグロビンの影響で吸光度変化量が低下
するのに対し、本発明の試薬を用いた場合には、ヘモグ
ロビンの影響を受けず、正確なα−アミラーゼ活性を示
していることを示す。
（発明の効果） 本発明の試薬を用いると、ヘモグロビンの影響を受ける
ことなく、体液中のα−アミラーゼ活性を高い精度で測
定することができる。
ことなく、体液中のα−アミラーゼ活性を高い精度で測
定することができる。
Claims (2)
- 【請求項１】（ａ）α−グルコシダーゼ又はα−グルコ
シダーゼ及びβ−グルコシダーゼ、（ｂ）色素生成性少
糖類基質並びに（ｃ）フェリシアン化カリウムを組み合
わせてなるα−アミラーゼ活性の測定試薬。 - 【請求項２】色素生成性少糖類基質として、350〜600nm
の範囲内に極大吸収を有する物質を遊離する物質を用い
る特許請求の範囲第１項記載の試薬。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13935287A JPH0761279B2 (ja) | 1987-06-03 | 1987-06-03 | α−アミラ−ゼ活性の測定試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP13935287A JPH0761279B2 (ja) | 1987-06-03 | 1987-06-03 | α−アミラ−ゼ活性の測定試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63305000A JPS63305000A (ja) | 1988-12-13 |
| JPH0761279B2 true JPH0761279B2 (ja) | 1995-07-05 |
Family
ID=15243328
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13935287A Expired - Lifetime JPH0761279B2 (ja) | 1987-06-03 | 1987-06-03 | α−アミラ−ゼ活性の測定試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0761279B2 (ja) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3929355A1 (de) * | 1989-09-04 | 1991-03-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung von pankreas-(alpha)-amylase |
| CN105044167B (zh) * | 2015-05-06 | 2017-11-17 | 东南大学 | 一种基于电位法的α‑唾液淀粉酶检测装置及制备使用方法 |
-
1987
- 1987-06-03 JP JP13935287A patent/JPH0761279B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63305000A (ja) | 1988-12-13 |
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