JPS63255000A - α−アミラ−ゼアイソザイム分別定量方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は１体液中のα−アミラーゼアイソザイムの分別
定量方法に関する。

α−アミラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，２，１，ｔ）　　は、
澱粉やグリコーゲンのα−１，４−グリコシド結合を不
規則に加水分解する酵素であり、主に膵臓と唾液藻で生
産され消化管に外分泌される。臨床検査では、血液や尿
などの体液中のα−アミラーゼ活性の測定が急性膵炎や
耳下腺炎などの疾病の診断に広く利用されている。

α−アミラーゼには、主として唾液腺由来のα−アミラ
ーゼ（以下Ｓ型アミラーゼと略記する）と膵臓由来のα
−アミラーゼ（以下Ｐ型アミラーゼと略記する）の二種
のアイソザイムが存在し、急性膵炎などの膵疾患の場合
には主にＰ型アミラーゼ活性値が変動し、急性耳下腺炎
などの唾液腺疾患の場合にはＳ型アミラーゼ活性値が変
動する。

従って、単に体液中のα−アミラーゼ活性値を測定する
だけでは疾病の診断においては不十分であり、詳しく病
態を把握するうえで、Ｓ型アミラーゼおよびＰ型アミラ
ーゼをそれぞれ分別定量することが必要とされつつある
。

［従来の技術］ α−アミラーゼアイソザイムの分別定量法には、ａ）電
気泳動による方法、ｂ）ゲルろ過による方法、Ｃ）イオ
ン交換クロマトグラフィーによる方法、ｄ）酵素免疫測
定法およびｅ）阻害物質を用いる方法などがあるが、ａ
）〜ｄ）の方法は操作が煩雑で時間がかかり熟練を要す
るものである。

また、それぞれの方法に対して専用の器具、装置が必要
であり、自動化しにくく大量処理が困難であるという欠
点を有する。

ｅ）の方法は、Ｓ型アミラーゼあるいはＰ型アミラーゼ
を特異的に阻害する阻害物質を用いる方法であり、試料
のα−アミラーゼ活性値（総括性値）と試料に阻害物質
を作用させた後のα−アミラーゼ活性値（残存活性値）
を比較してアイソザイムの分別定量を行うものであるが
、この方法は、従来行われているα−アミラーゼ活性測
定法の延長上にあるものであり、操作が簡便であり、特
別な器具、装置を必要とせず、日常検査に適している方
法である。なお、Ｓ型アミラーゼあるいはＰ型アミラー
ゼを特異的に阻害する阻害物質としては、小麦やソバな
どの穀物、植物由来のもの（Ｊ。

ＣＬ遊離、Ｃｈｅｍ、２３．５６０　（１９７７）、特
開昭５７−１４０７２７号公報〕や微生物由来のもの〔
特開昭５９−１０１９３号公報〕号公報上ノクローナル
抗体などの抗体〔特開昭５８−１８３０９８号公報〕等
が現在知られている。なかでも小麦由来の阻害物質は、
製造および入手の容易さ、安定性に優れることおよび価
格が安いことなどの利点を持つ。

ところで、阻害物質を用いてα−アミラーゼアイソザイ
ムの分別定量を行う場合は前に述べたように、阻害物質
添加および無添加時の試料のα−アミラーゼ活性測定を
行う必要がある。従来よりα−アミラーゼ活性測定法に
ついては以下のような各種の方法論が知られている。す
なわち、１）ヨード澱粉反応を利用し、有色の減退を測
定するヨード澱粉法、２）澱粉溶液の還元性の増加を測
定する糖化法、３）色素を結合させた澱粉を基質とし、
加水分解により遊離した色素を測定する色素法、〔生物
試料分析、　Ｖｏｌ、７．　Ｎｏ、２．２５−４４（１
９８４））　Ｌかし、１〕の方法では基質である澱粉が
必ずしも均一でなく、澱粉の種類により呈色の感度が異
なるなどの開運点があり、２）の方法では試料中の還元
糖により正の誤差を生じ、また操作が煩雑である等の欠
点を有し、３）の方法では。

反応時間が長く、ろ過または遠心分離の操作が必要であ
るなどの開運点を有している。そして、これらの方法は
、自動分析装置で測定を行わせることが難しく、基質の
構造や生成物などが明確でないため理論的解析が困難で
あるなどの問題が存在する。

これらの問題点を解決するため、マルトオリゴ糖やその
誘導体などの構造、組成の均一な合成基質と共役酵素を
組み合わせる酵素法が近年開発されてきた。これらの方
法のうち、４）マルトテトラオース、マルトペンタオー
ス等のマルトオリゴ糖を基質として用いる方法〔特開昭
５０−５６９９８号公報〕では、生成する糖は主として
マルトース。

グルコース等であり、試料中古まれるこれらの糖質によ
り正の誤差を受けてしまう、また、酵素反応で生成する
グルコースをグルコースオキシダーゼ（ＧＯＤ）、ペル
オキシダーゼ（ＰＯＤ）、クロモゲン系を用いて測定す
る場合には、試料中に存在するアスコルビン酸やビリル
ビン、グルコース等の還元物質の影響をまぬがれない等
々の開運点を有している。修飾マルトオリゴ糖を用いる
方法では、５）ハロゲン化フェニル基結合マルトオリゴ
糖を基質とする方法〔特開昭５６−３５９９８号公報〕
があるが、遊離するハロゲン化フェノールを、４−アミ
ノアンチピリンと酸化縮合させ、生成する色素の呈色強
度を５００ｎｍ付近で測定するため、この波長域に光学
的な吸収を有する溶血血清中のヘモグロビンの影響を受
は易く、更に、この方法で尿を試料として尿中のα−ア
ミラーゼ活性の測定を行うと、尿中にしばしば認められ
るフェノール類似物質が呈色試薬により発色するため、
正誤差を与えるという問題点を有している。６）Ｐ−ニ
トロフェニルマルトへブタオシドやｐ−ニトロフェニル
マルトペンタオシドなどのｐ−ニトロフェニル基結合マ
ルトオリゴ糖を基質とする方法〔特公昭５７−５３０７
９号公報〕があるが、この方法は遊離したｐ−ニトロフ
ェノールを４１０ｎｍ付近における吸光度で測定してそ
の量を算出するものであり、このｐ−ニトロフェノール
の発色度は、測定ｐＨや測定温度そしてタンパク質濃度
などの測定条件の変動の影響を受は易く、また、溶血な
どの共存物質により影響を受ける。測定条件による発色
度の変動が小さいという、２−クロロ−４−ニトロフェ
ニル基結合マルトオリゴ糖が。

近年基質として開発されたが、〔特開昭６０−２１９９
号公報〕この方法では、測定ｐＨによる変動ななどにつ
いては改善があったものの、先に記した欠点が完全に克
服されたわけではない。

そして、４）および６）の方法はレート法であるので、
用手法で測定を行う場合は、類推で時間がかかり大量処
理には適していない。自動分析装置を使用する場合は、
これらの問題点はｍ消されるもののこれらの装置は大変
高価である。

そこで、本発明者らは、従来のα−アミラーゼ活性測定
法の問題点を克服した、７）ｐ−アミノフェニル基を還
元性末端に結合したマルトオリゴ糖を基質とする方法を
発明した。〔特開昭６１−２２７８００号公報〕この方
法は、基質の構造や反応生成物が明確であり、原理的に
グルコースやマルトースなどの糖類の影響を受けず、６
００ｎｍ以上の波長で測光するため溶血やビリルビンな
どの有色物質の影響も無く、還元物質などの内因性の干
渉物質の影響や測定ｐＨや温度などの測定条件の変動の
影響を受けないという長所を持ち、さらに、この方法は
自動分析装置への適用が容易であって。

その上、エンドポイント法であるので特別な装置を使用
しない用手法においても簡便に測定を行うことができる
という利点を持つ有効な方法である。

［発明が解決しようとする問題点コ 阻害物質を用いてα−アミラーゼアイソザイムの分別定
量を行うには、阻害物質を添加して阻害をかけた場合（
残存活性）と、阻害をかけない場合（総括性）とでα−
アミラーゼ活性を測定するので、α−アミラーゼ活性測
定法が有する前記のような問題点が、アイソザイムの分
別定量の場合にも、そのまま現れてしまう、そして、各
アイソザイム活性値は、総活性値と残存活性値の二種の
値より算出されるので、得られた総活性値と残存活性値
に誤差がある場合には、各アイソザイム活性値は増幅さ
れた誤差を含むものとなってしまう。

また、残存活性値は総活性値より低く、検体のアイソザ
イム比によっては残存活性値が総活性値の二剤以下にな
ることもある。従って、得られる測定値が小さい場合に
は誤差の割合が大きくなってしまうため、測定法には、
特に、正確性、精密性が要求されている。従来のα−ア
ミラーゼ活性測定法（前記１）〜６））を用いて、阻害
物質によりα−アミラーゼアイソザイムの分別定量を行
った場合、前記のような欠点を有しており、そして誤差
を生じ易いなどの問題点が存在する。また。

阻害物質を用いるα−アミラーゼアイソザイム分別定量
方法においては、各アイソザイム間の阻害度の差が大き
い程好ましいのであるが、各アイソザイムの阻害度は、
酵素、阻害物質、そして基質の三つの因子が阻害反応に
係わってくるため、酵素と阻害物質によってのみ決まる
のではなく、基質に何を用いるかによって大きく影響を
受ける。

よって、ただ、従来のα−アミラーゼ活性測定法と阻害
物質を単に組み合わせただけでは、必ずしも十分な効果
を得ることはできない。

本発明は、ｐ−アミノフェニル基が還元性末端に結合し
たマルトオリゴ糖を基質として使用するα−アミラーゼ
活性測定法と阻害物質を使用して、前記の間謳点を克服
したα−アミラーゼアイソザイム分別定量法を提供する
ことを目的とする。

以下余白。

［開運点を解決するための手段］ 本発明は、試料中のα−アミラーゼアイソザイムを分別
定量するにあたり、特定のアイソザイムを特異的に阻害
する阻害物質とｐ−アミノフェニル基が還元性末端に結
合したマルトオリゴ糖を基質とするα−アミラーゼ活性
測定法を用いることを特徴とするα−アミラーゼアイソ
ザイム分別定量方法である。

本発明での試料として重要なものは、ヒトの体液であり
、とりわけ、血液、血清、血漿、および尿が特に重要で
ある。

本発明における、特定のアイソザイムを特異的に阻害す
る阻害物質としては、Ｓ型アミラーゼとＰ型アミラーゼ
の阻害度に差を有するものであれば良く、実用上はアイ
ソザイム間の阻害度の差が大きいものの方が精度が良く
なるので、特に好ましい、そして、α−アミラーゼ阻害
物質としては、現在、小麦やソバおよびインゲン豆など
の穀物、植物由来のもの、ストレプトミセス属（Ｓｔｒ
ｅｐｔｏｍｙｃｅｓ属）などの微生物由来のもの、およ
びα−アミラーゼ、α−アミラーゼアイソザイムに対す
るモノクローナル抗体等が知られているが、本方法では
これらを用いることが出来る。また、阻害物質そして阻
害物質溶液中には、各阻害物質に適し。

かつ、測定反応系に適している緩衝剤、安定化剤、賦活
化剤、防腐剤、賦形剤、ＰＨ調整剤、界面活性剤、およ
び本発明におけるα−アミラーゼ活性測定系の構成成分
等を含有することが出来る。そして、以上の含有するこ
とが出来る物質およびその濃度は、本発明におけるα−
アミラーゼ活性測定法に影響を及ぼさないものとするこ
とが特に好ましい。

本発明における、ｐ−アミノフェニル基が還元性末端に
結合したマルトオリゴ糖を基質とするα−アミラーゼ活
性測定法とは、Ｐ−アミノフェニル基が還元性末端に結
合したマルトオリゴ糖を基質とし、α−アミラーゼを含
有する試料を作用させた後、遊離するｐ−アミノフェノ
ールを測定する方法である。ここでマルトオリゴ糖とは
、α−１，４−グルコシド結合でグルコースが２〜１０
個程度結合した糖類をいうが、特にマルトテトラオース
（Ｇ４　）　＋マルトペンタオース（Ｇ５）。

マルトヘキサオース（Ｇ６）、マルトヘプタオース（Ｇ
７）がα−アミラーゼ活性測定の基質として好ましい。

本発明において遊離するｐ−アミノフェノールは公知の
方法で測定する。例えば、ｐ−アミノフェノールはカプ
ラーとしてフェノール系、ナフトール系化合物の中から
フェノール、サリチル酸、０−クレゾール、ｍ−クレゾ
ール、２，３−キシレノール、２，５−キシレノール、
１−ナフトール、１−ナフトール−８−スルホン酸、１
−ナフトール−４−スルホン酸、１−ナフトール−２−
スルホン酸、２−ナフトール−６−スルホン酸、２−ナ
フトール−３，６−ジスルホン酸等およびこれらの塩か
ら選択した化合物と酸化剤の存在下でカップリングさせ
、生成するインドフェノール色素を比色定量することに
よりα−アミラーゼ活性値を求める。酸化剤としては、
メタ過ヨウ素酸ナトリウム、過ヨウ素酸カリウム、次亜
塩素酸ナトリウム、過硫酸アンモニウム、フェリシアン
化カリウム、過酸化水素等を用いることができる。

ｍ衝剤としては、リン酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、ジ
メチルグルタル酸塩、およびトリス−（ヒドロキシメチ
ル）−アミノメタンやピペラジン−Ｎ、Ｎ’−ビス（２
−エタンスルホン酸）−ナトリウム（ＰＩＰＥＳ−Ｎａ
）等のグツド緩衝液が用いられる。

本発明方法では通常、測定用共役酵素としてα−グルコ
シダーゼを作用させてｐ−アミノフェノールを遊離させ
る。このα−グルコシダーゼは試料中のα−アミラーゼ
と同時に作用させることも、成るいは基質のマルトオリ
ゴ糖と試料中のα−アミラーゼとの反応後作用させるこ
とも可能である。

しかし、グルコースが３〜４個程度結合した基質を用い
るときには、α−グルコシダーゼは特に用いなくてもよ
い。α−グルコシダーゼの起源は、動物、植物、および
微生物由来のものなどが使用でき、特に限定されるもの
ではない。

本発明における。α−アミラーゼ活性調定試薬中には、
前記の構成成分の他に、安定化剤、賦活化剤、防腐剤、
賦形剤、ＰＨ調整剤などとして。

塩、タンパク貿、糖類、脂質、界面活性剤などの有機化
合物、無機化合物を含有させることが出来る。

本発明方法において、試料に阻害物質を作用させる態様
については、測定者、測定装置および測定施設にそれぞ
れ適した方法を採用すれば良いのであるが、代表的なも
のとしては次の４方法が考えられる。

１）試料と阻害物質を混合し、これとα−アミラーゼ活
性北定試薬を混合して測定を行う方法０．２）試料と阻
害物質を混合し、この一部をとりα−アミラーゼ活性測
定試薬と混合して測定を行う方法、３）阻害物質をα−
アミラーゼ活性測定試薬に含有させ、これと試料を混合
して測定を行う方法、４）阻害物質をα−アミラーゼ活
性測定試薬の一部に含有させ、これと試料を混合した後
さらにα−アミラーゼ活性測定試薬の残りの成分を加え
て測定を行う方法、なお、本発明は以上の方法に限定さ
れるものではない。

そして、試料に阻害物質を作用させない時の総活性値の
測定は、本発明におけるα−アミラーゼ活性測定方法に
より求めるものである。

試料に作用させる阻害物質の濃度は、阻害物質の種類や
具体的な測定方法により異なるものであるが、アイソザ
イム間の阻害度の差が大きく、阻害物質濃度が多少増減
しても阻害度が変化しにくい濃度域の濃度とすることが
望ましい。

阻害物質を試料に作用させる時間は、これも阻害物質の
種類や具体的な測定方法により異なるものであるが、１
分以上３０分以内が一般的な作用時間である。また、試
料および試料と阻害物質の混合物のα−アミラーゼ活性
測定試薬との反応時間は３分以上２ｏ分以内が好ましい
。

試料に阻初物質を作用させる時の温度は特に制限は無く
１作用時間中試料が温度により失活しないような温度で
あれば良い、α−アミラーゼ活性測定反応中の温度は、
通常の酵素反応の２０〜４０’Ｃが好ましい。

以上のようにして試料の総活性値および残存活性値を求
めるとともに、アイソザイム比既知の試料を測定して検
量線を作製しておくか、阻害物質により阻害を受けた場
合のＳ型アミラーゼおよびＰ型アミラーゼの活性の残存
率を求めておく必要がある。

試料中のＳ型アミラーゼ活性値をＳ、Ｐ型アミラーゼ活
性値をＰ、試料の総活性値をＴ、残存活性値をＲとし、
阻害物質を作用させたときのＳ型アミラーゼの活性の残
存率をａ、Ｐ型アミラーゼの活性の残存率をｂとすると
、以下のような式が得られる。

Ｔ＝：Ｓ＋Ｐ　　　　　　　　　　　　式（１）Ｒ＝　
ａ　Ｘ　Ｓ　＋　ｂ　Ｘ　Ｐ　　　　　　　　　式（２
）Ｓ＝Ｔ−Ｐ　　　　　　　　　　　　式（３）Ｒ／Ｔ
＝　（ｂ　　ａ）　Ｘ　（Ｐ／Ｔ）　＋ａ　　式（４）
Ｐ＝＝　（Ｒ−ａ　ＸＴ）　／　（ｂ−ａ）　　　　式
（５）アイソザイム比既知の試料より検量線を作製する
には、これらの試料を本発明方法により測定し総活性値
（Ｔ）と残存活性値（Ｒ）を求め、Ｐ型アミラーゼアイ
ソザイムの比率（Ｐ／Ｔ）を横軸に、総活性値に対する
残存活性値の比率（Ｒ／Ｔ）を縦軸としたグラフにプロ
ットして検ｍａを作製する。なお、この検量線は、式（
４）の−次式で示される直線である。アイソザイム比未
知の試料の分別定量を行うには、本発明方法によりＴ値
とＲ値を測定しＲ／Ｔ値を算出して、これに対応するＰ
／Ｔ値を検量線のグラフから求める。そしてこのＰ／Ｔ
値とＴ値より、Ｐ値とＳ値っまりＰ型アミラーゼ活性値
およびＳ型アミラーゼ活性値が求められる。

阻害物質により阻害を受けたときのＳ型アミラーゼおよ
びＰ型アミラーゼの活性の残存率（ａ。

ｂ）を、各アイソザイムを本発明方法により測定し、得
られた残存活性値を総活性値で除して求めておき、そし
て、試料の総活性値（Ｔ）と残存活性値（Ｒ）を測定し
、これらの値と各アイソザイムでの残存率（ａ、ｂ）を
前の式（５）、（３）に代入すれば、それぞれＰ型アミ
ラーゼおよびＳ型アミラーゼの活性値を得ることが出来
る。

なお１式（４）より、検量線のグラフの両端つまりＰ／
Ｔ値が０および１の時のｙ切片の値はａとｂである。従
って、アイソザイム比既知の試料を測定し検量線を作製
することにより、阻害作用を受けた時のＳ型アミラーゼ
およびＰ型アミラーゼの活性の残存率を求めることがで
き、これらの残存率が解れば検量線を作製することも出
来る。

そして１本発明方法で試料の総括性値と残存活性値を測
定する工程は自動分析装置などにより行うことも可能で
ある。そして、試料の総括性値および残存活性値より各
アイソザイムの活性値を算出する工程は、自動分析装置
やマイクロコンピュータなどの計算機により行うことも
できる。

［作用コ 本発明方法により、試料中のα−アミラーゼアイソザイ
ムの分別定量を行うには、以下の方法のように行う。

特定のアイソザイムを特異的に直置する阻害物質を試料
に作用させ、ｐ−アミノフェニル基が還元性末端に結合
したマルトオリゴ糖を基質とするα−アミラーゼ活性測
定法により阻害後の残存活性値を測定する。また、試料
に阻害物質を作用させない時の総括性値を測定する。阻
害作用を受けた時のＳ型アミラーゼおよびＰ型アミラー
ゼの活性の残存率を求めるか、アイソザイム比既知の試
料を測定し検量線を作製しておき、試料の総括性値と残
存活性値よりＳ型アミラーゼ活性値とＰ型アミラーゼ活
性値を算出する。

つぎに１本発明を実施例により説明するが、本発明はこ
れによりなんら限定されるものではない。

実施例１゜ １、試料 ヒトの唾液から精製して得た唾液型α−アミラーゼ（Ｓ
型アミラーゼ）とヒトの膵液から精製して得た膵液型α
−アミラーゼ（Ｐ型アミラーゼ）を下記の表のような活
性値の比率で混合して、アイソザイム比の異なる６種類
の試料を調製した。

以下余白。

表−１ ■、測定試薬 ■第１試液　　４０μｇ／ｍｉ’　（１０４０／＋ｎｌ
）小麦由来α−アミラーゼ阻害物質 〔オリエンタル酵母二業■製〕、 ５０　ｍ　Ｍ塩化ナトリウム、を含む ４０ｍＭＰ　ｌＰＥ５−Ｎａ緩衝液 （ｐＨ６，８）。

■第２試液　　７．８ｍＭｐ−アミノフェニルマルトへ
ブタオシド、１７８Ｕ／ 一α−グルコシダーゼ、１．４ｍ Ｍｌ−ナフトール−２−スルホン 酸カリウム、５０ｍＭ塩化ナ塩化 中ム、を含む４．０ｍＭＰＩＰＥＳ ・Ｎａ緩衝液（ＰＨ６，８）。

■第３試液　　０．０５Ｎ水酸化ナトリウム、０．０６
５％メタ過ヨウ素酸ナト リウム、を含有する溶液。

■第４試液　　５０ｍＭ塩化ナトリウムを含む４０ｍＭ
ＰＩＰＥＳ−Ｎａ緩衝液 （ｐＨ６，８）。

■、操作法 〔１〕　残存活性値の測定 表−１に示した試料をそれぞれＯ，１ｍｊとり。

これに第１試液を０．２−加えて混和し、室温で５分間
放置する。

これを０．１１Ｔ７とり、第２試液０．９ｍ＋＋に加え
、３７℃で正確に１０分間加温して酵素反応を行わせる
。

ついで、第３試液を２．０ｈＴ１１！加えて反応を停止
させ、室温で約５分間放置した後６３０ｎｍにおける吸
光度を測定して残存活性値を求める。

〔２〕　総活性値の測定 試料をそれぞれ０．１−とり、これに第４試液を０．２
−加えて混和し、室温で５分間放置する。

これをＯ，１ｍｌ：す、第２試液０．９ｍに加え、３７
℃で正確に１０分間加温する。

ついで、第３試液を２．０−加えて混和して。

室温で約５分間放置した後６３０ｎｍにおける吸光度を
測定して総活性値を求める。

〔３〕　検量線の作製 試料中のＰ型アミラーゼの比率（Ｐ／Ｔ）を横軸にとり
、総活性値に対する残存活性値の比率（Ｒ／Ｔ）を縦軸
にとった時の結果を第１図に示すす。

このように１本発明方法においては、Ｓ型アミラーゼと
Ｐ型アミラーゼに対する阻害塵の差が大であり、かつ、
検量線は直線を示しており、精度よくα−アミラーゼア
イソザイムの分別定量を正確に行うことが出来る。

以下余白。

［発明の効果コ 本発明方法では、特定のα−アミラーゼアイソザイムを
特異的に阻害する阻害物質とｐ−アミノフェニル基が還
元性末端に結合したマルトオリゴ塘を基質とするα−ア
ミラーゼ活性測定法を用いるため、従来法において見ら
れたような、グルコースやマルトースなどの内因性の糖
類や溶血、ビリルビンなどの有色物質、そして還元物質
の影響を受けず、また、測定ｐＨや温度などの測定条件
の変動の影響も受けない、　α−アミラーゼアイソザイ
ム活性値は、病態との関連で特に正確性が要求されるが
、阻害物質を用いたアイソザイム分別定量方法では、総
活性値と残存活性値の２つの値を計算して各アイソザイ
ム活性値を算出するため、もし元の測定値に誤差が含ま
れていると誤差が増幅されてしまう０本発明方法は、上
記のように各種の干渉物質の影響を受けず測定値の変動
も小さいため、測定値が誤差の影響を受けにくい。

よって、本発明方法では、特に正確かつ精密にα−アミ
ラーゼアイソザイムの分別定量を行うことが出来る。

そして、本発明方法は、自動分析装置への適用が容易で
あるが、エンドポイント法であるので、特別な装置を必
要としない用手法においても簡便に測定を行うことが出
来る。

【図面の簡単な説明】

第１図は、実施例１における、アイソザイム比既知の試
料を測定した時の検量線を表し、横軸は試料の総活性値
中のＰ型アミラーゼ活性値の比率（Ｐ／Ｔ）を、縦軸は
試料の総活性値に対する残存活性値の比率（Ｒ／Ｔ）を
示すものである。 特許出願人　株式会社ジノテスト研究所第１図 ０　０．２　　０．４　　０．６　　０．８　　１．Ｏ
Ｐ／Ｔ比

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）試料中のα−アミラーゼアイソザイムを分別定量
   するにあたり、特定のアイソザイムを特異的に阻害する
   阻害物質とｐ−アミノフェニル基が還元性末端に結合し
   たマルトオリゴ糖を基質とするα−アミラーゼ活性測定
   方法を用いることを特徴とするα−アミラーゼアイソザ
   イム分別定量方法。
2. （２）ｐ−アミノフェニル基が還元性末端に結合したマ
   ルトオリゴ糖を基質とするα−アミラーゼ活性測定方法
   が、ｐ−アミノフェニル基が還元性末端に結合したマル
   トオリゴ糖を基質とし、α−アミラーゼを含有する試料
   を作用させた後、遊離するｐ−アミノフェノールを測定
   することを特徴とするα−アミラーゼ活性測定方法であ
   る特許請求の範囲第１項記載のα−アミラーゼアイソザ
   イム分別定量方法。
3. （３）試料がヒトの体液であり、α−アミラーゼアイソ
   ザイムがヒト唾液型α−アミラーゼおよびヒト膵液型α
   −アミラーゼである特許請求の範囲第１項記載のα−ア
   ミラーゼアイソザイム分別定量方法。