JPS5913199B2 - アミラ−ゼ活性測定法 - Google Patents
アミラ−ゼ活性測定法Info
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- JPS5913199B2 JPS5913199B2 JP11313879A JP11313879A JPS5913199B2 JP S5913199 B2 JPS5913199 B2 JP S5913199B2 JP 11313879 A JP11313879 A JP 11313879A JP 11313879 A JP11313879 A JP 11313879A JP S5913199 B2 JPS5913199 B2 JP S5913199B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明はアミラーゼ活性測定法に関するものである。
体液中のアミラーゼ活性の測定は最近各種の疾病との関
連から注目されてきており、各種の方法が発表され、ま
た各種の定量用キットが発売されている。
連から注目されてきており、各種の方法が発表され、ま
た各種の定量用キットが発売されている。
従来のアミラーゼ活性測定法としては、たとえぱ天然物
たる澱粉を使用する方法、濁度法、色素法、糖化法、螢
光法などがある。これらの方法の中で澱粉を使用する方
法はヨード澱粉複合体にアミラーゼが作用するとその複
合体の色の消失を利用するものであり、昔から行なわれ
ている方法であるが、各種の欠点があり、し５ かも分
析の自動化が困難である。
たる澱粉を使用する方法、濁度法、色素法、糖化法、螢
光法などがある。これらの方法の中で澱粉を使用する方
法はヨード澱粉複合体にアミラーゼが作用するとその複
合体の色の消失を利用するものであり、昔から行なわれ
ている方法であるが、各種の欠点があり、し５ かも分
析の自動化が困難である。
濁度法はアミロペクチンがアミラーゼの作用を受けて濁
度の減少を測定する方法であるが、基質溶液の均一化と
分析値の基準化に問題がある。色素法は澱粉、アミロー
スに色素を結合させたものを基質として使用１０する。
この方法ではアミラーゼの作用を受けて遊離する色素を
測定するが、この方法は操作が煩雑で、分析の自動化が
困難であるといわれている。糖化法はアミラーゼの作用
を受けて生成する還元糖を測定する方法である。最近こ
の方法が注目１５されてきており、各種の方法が発表さ
れている。この方法には生成したマルトースを測定する
方法、また生成したグルコースを測定する方法などがあ
る。マルトースを測定する方法は血糖であるグルコース
の補正を必要としないので、優れた方法で９０あるが、
マルトースホスホリラーゼを使用する関係上から一般的
でない。生成するグルコースを測定する方法は血中のグ
ルコースの影響を補正する必要がある。特開昭５３−１
１０９２号公報によるとパラニク５ トロフエノールの
結合したマルトペンタオースもしくはマルトヘキサオー
スをアミラーゼの基質とし、アミラーゼの作用によつて
生成したパラニトロフェノールの結合したマルトース、
マルトトリオース、グルコースなどにα−グルコシダー
ゼを３０作用させて生成するパラニトロフェノールを測
定する方法がある。
度の減少を測定する方法であるが、基質溶液の均一化と
分析値の基準化に問題がある。色素法は澱粉、アミロー
スに色素を結合させたものを基質として使用１０する。
この方法ではアミラーゼの作用を受けて遊離する色素を
測定するが、この方法は操作が煩雑で、分析の自動化が
困難であるといわれている。糖化法はアミラーゼの作用
を受けて生成する還元糖を測定する方法である。最近こ
の方法が注目１５されてきており、各種の方法が発表さ
れている。この方法には生成したマルトースを測定する
方法、また生成したグルコースを測定する方法などがあ
る。マルトースを測定する方法は血糖であるグルコース
の補正を必要としないので、優れた方法で９０あるが、
マルトースホスホリラーゼを使用する関係上から一般的
でない。生成するグルコースを測定する方法は血中のグ
ルコースの影響を補正する必要がある。特開昭５３−１
１０９２号公報によるとパラニク５ トロフエノールの
結合したマルトペンタオースもしくはマルトヘキサオー
スをアミラーゼの基質とし、アミラーゼの作用によつて
生成したパラニトロフェノールの結合したマルトース、
マルトトリオース、グルコースなどにα−グルコシダー
ゼを３０作用させて生成するパラニトロフェノールを測
定する方法がある。
このパラニトロフェノールは４１０ｎｍの吸光度を測定
してその量を算出する。４１０ｎｍ附近に吸収を示す生
体物質としてはビリルビンがあり、このものは血中に存
在し、３５４５０〜４９０ｎｍに吸収を有するので、特
開昭５３−１１０９２号公報によるアミラーゼ活性の方
法ではこのビリルビンの影響を受けるのではないかと考
えられる。
してその量を算出する。４１０ｎｍ附近に吸収を示す生
体物質としてはビリルビンがあり、このものは血中に存
在し、３５４５０〜４９０ｎｍに吸収を有するので、特
開昭５３−１１０９２号公報によるアミラーゼ活性の方
法ではこのビリルビンの影響を受けるのではないかと考
えられる。
本発明等はこれらの状況を考慮して種々研究した結果、
・・ロゲン化フエニル基が還元性末端に結合したマルト
オリゴ糖を基質として使用すればこれらの欠点が克服さ
れることを知り本発明を完成するに到つた。
・・ロゲン化フエニル基が還元性末端に結合したマルト
オリゴ糖を基質として使用すればこれらの欠点が克服さ
れることを知り本発明を完成するに到つた。
すなわち本発明はハロゲン化フエニル基（但し核にニト
ロ基が置換した・・ロゲン化フエニル基を除く）が還元
性末端に結合したマルトオリゴ糖に試料を作用させた後
、α−グルコシダーゼ｝よびβ−グルコシダーゼを作用
？せるか、あるいは試料と同時にα−グルコシダーゼお
よびβ−グルコシダーゼを作用させ、遊離するハロゲン
化フエノールを呈色試薬により発色させて測定すること
によね、試料中のアミラーゼ活性を測定することを特徴
とするアミラーゼ活性測定法である。本発明においては
・・ロゲン化フエニル基が還元性末端に結合したマルト
オリゴ糖をアミラーゼの基質として使用し、アミラーゼ
の作用を受けて生成したハロゲン化フエニルグルコシド
、マルトシドもしくはマルトトリオシドにα−グルコシ
ダーゼ卦よびβ−グルコシダーゼを作用させて遊離する
ハロゲン化フエノールを定量することでアミラーゼ活性
値を知る。
ロ基が置換した・・ロゲン化フエニル基を除く）が還元
性末端に結合したマルトオリゴ糖に試料を作用させた後
、α−グルコシダーゼ｝よびβ−グルコシダーゼを作用
？せるか、あるいは試料と同時にα−グルコシダーゼお
よびβ−グルコシダーゼを作用させ、遊離するハロゲン
化フエノールを呈色試薬により発色させて測定すること
によね、試料中のアミラーゼ活性を測定することを特徴
とするアミラーゼ活性測定法である。本発明においては
・・ロゲン化フエニル基が還元性末端に結合したマルト
オリゴ糖をアミラーゼの基質として使用し、アミラーゼ
の作用を受けて生成したハロゲン化フエニルグルコシド
、マルトシドもしくはマルトトリオシドにα−グルコシ
ダーゼ卦よびβ−グルコシダーゼを作用させて遊離する
ハロゲン化フエノールを定量することでアミラーゼ活性
値を知る。
本発明におけるマルトオリゴ糖とはα−１，４グルコシ
ド結合でグルコースが２〜１０個程度結合した糖類をい
う。
ド結合でグルコースが２〜１０個程度結合した糖類をい
う。
たとえばマルトース、マルトトリオース、マルトテトラ
オース、マルトペンタオース、マルトヘキサオースなど
があり、特にマルトテトラオース、マルトペンタオース
およびマルトヘキサオースが好ましい。本発明に訃ける
・・ロゲン化フエノールとしては上記マルトオリゴ糖と
その還元性末端にα−またはβ一結合し、かつα−グル
コシダーゼ卦よびβグルコシダーゼにより容易に遊離し
、定量が容易なものであればいずれでもよい。
オース、マルトペンタオース、マルトヘキサオースなど
があり、特にマルトテトラオース、マルトペンタオース
およびマルトヘキサオースが好ましい。本発明に訃ける
・・ロゲン化フエノールとしては上記マルトオリゴ糖と
その還元性末端にα−またはβ一結合し、かつα−グル
コシダーゼ卦よびβグルコシダーゼにより容易に遊離し
、定量が容易なものであればいずれでもよい。
このような化合物としてはたとえばｐ−クロロフエノー
ル、０ークロロフエノール、ｍ−クロロフエノール、２
，４−ジクロロフエノール、２，３−ジクロロフエノー
ル、０−プロモフエノール、２，４−ジプロモフエノー
ル、２−クロロ−３−メチルフエノールなどがある。上
記化合物は例えば４−アミノアンチピリンと酸化縮合さ
せた場合の発色強度が大であり、生体中の微量のアミラ
ーゼ活性を測定するのに適している。本発明に用いる・
・ロゲン化フエニル基が還元性末端に結合したマルトオ
リゴ糖は上記ハロゲン化フエノールとマルトオリゴ糖を
通常の方法に従つて合成する。
ル、０ークロロフエノール、ｍ−クロロフエノール、２
，４−ジクロロフエノール、２，３−ジクロロフエノー
ル、０−プロモフエノール、２，４−ジプロモフエノー
ル、２−クロロ−３−メチルフエノールなどがある。上
記化合物は例えば４−アミノアンチピリンと酸化縮合さ
せた場合の発色強度が大であり、生体中の微量のアミラ
ーゼ活性を測定するのに適している。本発明に用いる・
・ロゲン化フエニル基が還元性末端に結合したマルトオ
リゴ糖は上記ハロゲン化フエノールとマルトオリゴ糖を
通常の方法に従つて合成する。
たとえば化学的にマルトオリゴ糖をアセチル化し、この
アセチル化マルトオリゴ糖とハロゲン化フエノールを結
合させた後、脱アセチルすることにより合成できる（実
験化学講座第２４巻第３０４頁、１９５８年参照）。し
かしアセチル化マルトオリゴ糖とハロゲン化フエノール
をα一またはβ一結合のいずれか一方のみに化学的に結
合させることは困難であり、混合物からいずれか一方の
みを純粋に分離採取することも非常に困難である。とこ
ろが、本発明ではα−グルコシダーゼとβ−グルコシダ
ーゼの両者を使用しているため混合物であつてもアミラ
ーゼ活性の１００％を検出することができる。
アセチル化マルトオリゴ糖とハロゲン化フエノールを結
合させた後、脱アセチルすることにより合成できる（実
験化学講座第２４巻第３０４頁、１９５８年参照）。し
かしアセチル化マルトオリゴ糖とハロゲン化フエノール
をα一またはβ一結合のいずれか一方のみに化学的に結
合させることは困難であり、混合物からいずれか一方の
みを純粋に分離採取することも非常に困難である。とこ
ろが、本発明ではα−グルコシダーゼとβ−グルコシダ
ーゼの両者を使用しているため混合物であつてもアミラ
ーゼ活性の１００％を検出することができる。
本発明に使用するα−グルコシダーゼは動物、植物、微
生物など如何なる起源のものを用いてもよいが、特に酵
母から得たものがその基質特異性の点で好ましい。
生物など如何なる起源のものを用いてもよいが、特に酵
母から得たものがその基質特異性の点で好ましい。
すなわち酵母起源のα−グルコシダーゼはアグリコン特
異性が広く、さらにマルトトリオシド以下のグリコシド
にはよく作用するが、マルトテトラオシド以上のグリコ
シドには作用しない点で特に本発明の目的に適合してい
る。β−グルコシダーゼも如何なる起源のものを用いて
もよく、例えばアーモンドから得たものが使用できる。
α−グルコシダーゼとβ−グルコシダーゼの配合割合は
基質の種類、基質のα，β一存在比率によつて異なる。
異性が広く、さらにマルトトリオシド以下のグリコシド
にはよく作用するが、マルトテトラオシド以上のグリコ
シドには作用しない点で特に本発明の目的に適合してい
る。β−グルコシダーゼも如何なる起源のものを用いて
もよく、例えばアーモンドから得たものが使用できる。
α−グルコシダーゼとβ−グルコシダーゼの配合割合は
基質の種類、基質のα，β一存在比率によつて異なる。
一般的にα−アミラーゼによつて生成したマルトトリオ
ース、ハロゲン化フエニルマルトースを非常にはやく分
解する量あればよいことになる。例えば実施例１の条件
ではα−グルコシダーゼが２０単位以上、β−グルコシ
ダーゼが４単位以上存在する様に混合すれば任意の混合
比率でよい。本発明方法はハロゲン化フエニル基が還元
性末端に結合したマルトオリゴ糖に活性値が未知である
アミラーゼを作用させる。
ース、ハロゲン化フエニルマルトースを非常にはやく分
解する量あればよいことになる。例えば実施例１の条件
ではα−グルコシダーゼが２０単位以上、β−グルコシ
ダーゼが４単位以上存在する様に混合すれば任意の混合
比率でよい。本発明方法はハロゲン化フエニル基が還元
性末端に結合したマルトオリゴ糖に活性値が未知である
アミラーゼを作用させる。
次いでα−グルコシダーゼとβ−グルコシダーゼを作用
させ、ハロゲン化フエノールを遊離させる。グルコシダ
ーゼはアミラーゼと同時に使用させてもよい。本発明に
お・いて遊離するハロゲン化フエノールは通常の方法で
測定する。
させ、ハロゲン化フエノールを遊離させる。グルコシダ
ーゼはアミラーゼと同時に使用させてもよい。本発明に
お・いて遊離するハロゲン化フエノールは通常の方法で
測定する。
即ち呈色試薬、たとえば４−アミノアンチピリンなどの
化合物と酸化縮合させ、その発色強度を測定することに
よりアミラーゼ活性を求めることができる。４−アミノ
アンチピリンを使用する方法の他に臭素溶液による滴定
法、２，６−ジブロムキノンクロルイミドによる比色分
析法（６５０−６７０ｎｍの吸光度の測定）がある。
化合物と酸化縮合させ、その発色強度を測定することに
よりアミラーゼ活性を求めることができる。４−アミノ
アンチピリンを使用する方法の他に臭素溶液による滴定
法、２，６−ジブロムキノンクロルイミドによる比色分
析法（６５０−６７０ｎｍの吸光度の測定）がある。
本発明方法では低分子量のマルトオリゴ糖を骨格とする
基質を用いることにより基質問のバラツキがなく、さら
に糖以外の物質、すなわち・・ロゲン化フエノールを測
定することにより試料中の還元糖の妨害がない。
基質を用いることにより基質問のバラツキがなく、さら
に糖以外の物質、すなわち・・ロゲン化フエノールを測
定することにより試料中の還元糖の妨害がない。
したがつて本発明方法は血液の如く試料中に多量のグル
コースを含有する場合にも試料から糖類を除く前処理な
しでアミラーゼ活性を測定することができる。本発明方
法は自動分析機にも容易にかけられる優れた方法である
。以下実施例を用いて本発明を説明する。実施例 １ 下記溶液を混合してアミラーゼ活性測定試薬とした０Ｖ
）＼ｒ轟辱▼―▼′ 上記測定試薬に各種濃度（０〜５００ソモギ一単位／ｄ
′）に希釈した血清０．０５ｍｔを加え、３７℃におい
て１０分間反応させた後、０．３６％ＮＡＩＯ４Ｏ．５
ｍｅを添加し、５分間放置後５００ｎｍにおける吸光度
の変化を測定した。
コースを含有する場合にも試料から糖類を除く前処理な
しでアミラーゼ活性を測定することができる。本発明方
法は自動分析機にも容易にかけられる優れた方法である
。以下実施例を用いて本発明を説明する。実施例 １ 下記溶液を混合してアミラーゼ活性測定試薬とした０Ｖ
）＼ｒ轟辱▼―▼′ 上記測定試薬に各種濃度（０〜５００ソモギ一単位／ｄ
′）に希釈した血清０．０５ｍｔを加え、３７℃におい
て１０分間反応させた後、０．３６％ＮＡＩＯ４Ｏ．５
ｍｅを添加し、５分間放置後５００ｎｍにおける吸光度
の変化を測定した。
その結果を第１図に示す。血清濃度と吸光度の間には比
例関係が認められたＱ実施例 ２ 実施例１とほとんど同様であるが、基質に０．４％ｐ−
クロロフエニルマルトペンタオシド（α，β混合物）と
血清のかわりに各種濃度（０〜５００ソモギ一単位／ｄ
′）に希釈した唾液を用いた点がことなる。
例関係が認められたＱ実施例 ２ 実施例１とほとんど同様であるが、基質に０．４％ｐ−
クロロフエニルマルトペンタオシド（α，β混合物）と
血清のかわりに各種濃度（０〜５００ソモギ一単位／ｄ
′）に希釈した唾液を用いた点がことなる。
実施例１と同様にして測定した結果を第２図に示す。
唾液濃度と吸光度の間には比例関係が認め′らえ１た。
実施例 ３
０．４％ジクロロフエニルマルトペンタオシド（α，β
混合物）１．０ｍｅ０．０５０１）４−アミノアンチピ
リンを含む０．１Ｍグリセロリン酸緩衝液（ＰＨ６．９
）１．０ｍｅ上記混合液に血清を添加して３ｒＣ１０分
反応を行ない、沸騰水中に５分つけてα−アミラーゼを
失活させた。
混合物）１．０ｍｅ０．０５０１）４−アミノアンチピ
リンを含む０．１Ｍグリセロリン酸緩衝液（ＰＨ６．９
）１．０ｍｅ上記混合液に血清を添加して３ｒＣ１０分
反応を行ない、沸騰水中に５分つけてα−アミラーゼを
失活させた。
３７℃になつてから実施例１と同様にしてα−グルコシ
ダーゼ及びβ−グルコシダーゼを添加し、３７℃１０分
反応させた。
ダーゼ及びβ−グルコシダーゼを添加し、３７℃１０分
反応させた。
０．３６％ＮａＩＯ４Ｏ．５ｄ添加して反応を停止させ
た。
た。
５分放置後５００ｎｍの吸光度を測定した。
その結果実施例１と同様にして行なつたものと同一の結
果が得られた。即ちα−グルコシダーゼ及びβ−グルコ
シダーゼをα−アミラーゼと同時に作用させてもα−ア
ミラーゼの作用後、添加して作用させても同一の結果が
得られる。
果が得られた。即ちα−グルコシダーゼ及びβ−グルコ
シダーゼをα−アミラーゼと同時に作用させてもα−ア
ミラーゼの作用後、添加して作用させても同一の結果が
得られる。
α−グルコシダーゼ及びβ−グルコシダーゼは過剰に存
在し、α−アミラーゼの作用によつて生成したこれらの
酵素の基質がこれらの酵素によつて非常にはやく分解す
るのでα−アミラーゼと同時に作用させても差支えない
○比較例 １ 実施例１と同様にしてα−グルコシダーゼを単独で使用
してアミラーゼ測定を行なつたが、得られたアミラーゼ
の力価は実施例１に比較して６０％であつた。
在し、α−アミラーゼの作用によつて生成したこれらの
酵素の基質がこれらの酵素によつて非常にはやく分解す
るのでα−アミラーゼと同時に作用させても差支えない
○比較例 １ 実施例１と同様にしてα−グルコシダーゼを単独で使用
してアミラーゼ測定を行なつたが、得られたアミラーゼ
の力価は実施例１に比較して６０％であつた。
即ち基質はα，β型の混合物であるが、そのα型の存在
比率と一致した。比較例 ２ 実施例１と同様にしてβ−グルコシダーゼを単独で使用
してアミラーゼ測定を行なつたが、３７゜Ｃ、１０分反
応後も５００ｎｍの吸光度が増大せず、α−アミラーゼ
の活性が測定できなかつた。
比率と一致した。比較例 ２ 実施例１と同様にしてβ−グルコシダーゼを単独で使用
してアミラーゼ測定を行なつたが、３７゜Ｃ、１０分反
応後も５００ｎｍの吸光度が増大せず、α−アミラーゼ
の活性が測定できなかつた。
比較例 ３公知の方法（実験化学講座第２４巻３０４頁
、１９５８年参照）を参考にして、ｐ−ニトロフエニル
マルトペンタオシド（α，β一混合物）を化学合成し、
これをα−アミラーゼの基質とした。
、１９５８年参照）を参考にして、ｐ−ニトロフエニル
マルトペンタオシド（α，β一混合物）を化学合成し、
これをα−アミラーゼの基質とした。
即ち下記試薬を混合してα−アミラーゼ活性測定試薬と
した。０．４％ｐ−ニトロフエニルマルト １．０ｄ
ペンタオシドα，β一混合物 ゜上記測定試薬に
ビリルピンが１０ワ／ｄ′含有されていることが判明し
ている人尿０．０５ｒ１Ｉ！を添加１７、３７℃に蕊・
いて１０分間反応後、１ＭＮａ２Ｃ０３水溶液１．０ｍ
ｅを添加し、水を対照として日立１８１型分光光電光度
計で４００ｎｍの吸光度を測定した。
した。０．４％ｐ−ニトロフエニルマルト １．０ｄ
ペンタオシドα，β一混合物 ゜上記測定試薬に
ビリルピンが１０ワ／ｄ′含有されていることが判明し
ている人尿０．０５ｒ１Ｉ！を添加１７、３７℃に蕊・
いて１０分間反応後、１ＭＮａ２Ｃ０３水溶液１．０ｍ
ｅを添加し、水を対照として日立１８１型分光光電光度
計で４００ｎｍの吸光度を測定した。
この吸光度をＥＡとした。次に上記の人尿のかわりに蒸
溜水０．０５ｒ７１ｅを上記測定試薬に添加・し、以下
同様の処理を行ない、同様にして４００ｎｍの吸光度を
求めた。
溜水０．０５ｒ７１ｅを上記測定試薬に添加・し、以下
同様の処理を行ない、同様にして４００ｎｍの吸光度を
求めた。
この吸光度をＥＢとした。人尿のα−アミラーゼ活性は
次武を利用して求めた。
次武を利用して求めた。
今ＥＡ＝０．３８０，ＥＢ＝０．０５０であるから、２
０６ソモギ一単位／ｄ′となつた。
０６ソモギ一単位／ｄ′となつた。
なおｐ−ニトロフエニルマルトペンタオシドをα−アミ
ラーゼの基質として測定する前記の方法でＥＢを求める
操作で次の様な操作を行なつて検体ブランクを求めた。
ラーゼの基質として測定する前記の方法でＥＢを求める
操作で次の様な操作を行なつて検体ブランクを求めた。
前記測定試薬を３ｒＣに１０分間放置後、１ＭＮａ２ｃ
０３水溶液１．０ｍ！を添加し、次に前記人尿０．０５
ＴＬｅを添加、混和した。
０３水溶液１．０ｍ！を添加し、次に前記人尿０．０５
ＴＬｅを添加、混和した。
水を対照として日立１８１型分光光電光度計で４００ｎ
ｍの吸光度を測定した。この吸光度をＥＢ′とした。式
（１）でＥＢをＥＢ′と置き換え、今ＥＢ２＝０．１２
７であるから人尿のα−アミラーゼ活性を求めると１５
８ソモギ一単位／Ｄｌ．となつた。実施例 ４ 実施例１と同様な方法で比較例３で用いた尿検体を測定
した。
ｍの吸光度を測定した。この吸光度をＥＢ′とした。式
（１）でＥＢをＥＢ′と置き換え、今ＥＢ２＝０．１２
７であるから人尿のα−アミラーゼ活性を求めると１５
８ソモギ一単位／Ｄｌ．となつた。実施例 ４ 実施例１と同様な方法で比較例３で用いた尿検体を測定
した。
即ち下記溶液を混合してアミラーゼ活性測定試薬とした
。
。
上記測定試薬に前記人尿０．０５Ｔ１ｅを添加し、３７
℃にち・いて１０分間反応させた後、０．３６％ＮａＩ
Ｏ４Ｏ．５ｄを添加し、５分間放置後、水を対照として
日立１８１型分光光電尤度計で５００ｎｍの吸尤度を測
定した。
℃にち・いて１０分間反応させた後、０．３６％ＮａＩ
Ｏ４Ｏ．５ｄを添加し、５分間放置後、水を対照として
日立１８１型分光光電尤度計で５００ｎｍの吸尤度を測
定した。
この吸光度をＥｃとした。次に上記人尿のかわりに蒸溜
水０．０５ｍｅを上記測定試薬に添加し、以下同様の処
理を行ない、同様にして５００ｎｍの吸光度を求めた。
水０．０５ｍｅを上記測定試薬に添加し、以下同様の処
理を行ない、同様にして５００ｎｍの吸光度を求めた。
この吸光度をＥＤとした。人尿のα−アミラーゼ活性は
次式を利用して求めた。
次式を利用して求めた。
今Ｅｃ＝０．３３５，ＥＤ＝０．０４０であるから、１
５８ソモギ一単位／Ｄｌ．となつた。
５８ソモギ一単位／Ｄｌ．となつた。
ｐ−ニトロフエニルマルトペンタオシドをαアミラーゼ
の基質に使用する比較例３ではビリルピンが１０即／ｄ
拵在する場合、本願発明の方法に比べてアミラーゼの力
価が３０％高く出た。
の基質に使用する比較例３ではビリルピンが１０即／ｄ
拵在する場合、本願発明の方法に比べてアミラーゼの力
価が３０％高く出た。
また２，４−ジクロロフエニルマルトペンタオシドをα
−アミラーゼの基質として使用する方法で検体ブランク
を求めた。前記測定試薬を３７゜Ｃに１０分間放置後、
０．３６％ＮａＩＯ４Ｏ，５ｄを添加混和し、次いで前
記人尿０．０５ｍｅを添加混和し、５分間放置後、水を
対照として日立１８１型分光光電光度計で５００ｎｍの
吸光度を測定した。
−アミラーゼの基質として使用する方法で検体ブランク
を求めた。前記測定試薬を３７゜Ｃに１０分間放置後、
０．３６％ＮａＩＯ４Ｏ，５ｄを添加混和し、次いで前
記人尿０．０５ｍｅを添加混和し、５分間放置後、水を
対照として日立１８１型分光光電光度計で５００ｎｍの
吸光度を測定した。
この吸光度をＥＤ′とした。式（３）でＥＤをＥＤ′と
置き換え、今ＥＤ′二０．０５０であつて、式（３）の
ＥＤと同じ値となるので、１５８ソモギ一単位／ｄ′と
なる〇即ちｐ−ニトロフエニルマルトペンタオシドをα
−アミラーゼの基質にしてα−アミラーゼの酵素活性を
測定する方法は、検体中のビリルピンの影響を受けて、
検体中のα−アミラーゼの力価が見かけ上高くでる。
置き換え、今ＥＤ′二０．０５０であつて、式（３）の
ＥＤと同じ値となるので、１５８ソモギ一単位／ｄ′と
なる〇即ちｐ−ニトロフエニルマルトペンタオシドをα
−アミラーゼの基質にしてα−アミラーゼの酵素活性を
測定する方法は、検体中のビリルピンの影響を受けて、
検体中のα−アミラーゼの力価が見かけ上高くでる。
従つてその数値を見て病体を診断する場合誤つた判断を
下すことが無きに−しもあらずであるのに反し、本願発
明の方法は検体中のビリルピンの影響がないので、検体
中のα−アミラーゼの力価が正確に測定でき、その数値
を見て病状を診断する場合、誤つた判断を下すことはな
い。比較例 ４、実施例 ５ 人血清にビリルピンの濃度が２０即／ｄｌになる様に添
加し溶解させた。
下すことが無きに−しもあらずであるのに反し、本願発
明の方法は検体中のビリルピンの影響がないので、検体
中のα−アミラーゼの力価が正確に測定でき、その数値
を見て病状を診断する場合、誤つた判断を下すことはな
い。比較例 ４、実施例 ５ 人血清にビリルピンの濃度が２０即／ｄｌになる様に添
加し溶解させた。
これを検体として比較例３と同様にして、α−アミラー
ゼの力価を測定した。その結果を次に記す。１ｐ−ニト
ロフエニルマルトペンタオシドを基質に使用する方法（
比較例４）（１）検体ブランク未測定の場合 ３４８ソモギ一単位／ｄｌ （２）検体ブランク測定の場合 ２００ソモギ一単位／ｄ′２２，４−ジクロロフエニル
マルトペンタオシドを基質に使用する方法 （実施例５） （１）検体ブランク未測定の場合 ２００ソモギ一単位／ｄ′ （２）検体ブランク測定の場合 ２００ソモギ一単位／ｄ′ 比較例３と同様にｐ−ニトロフエニルマルトペンタオシ
ドを基質に使用する方法は、ビリルピンの影響を受ける
が、本願発明の方法は影響を受けないＯ
ゼの力価を測定した。その結果を次に記す。１ｐ−ニト
ロフエニルマルトペンタオシドを基質に使用する方法（
比較例４）（１）検体ブランク未測定の場合 ３４８ソモギ一単位／ｄｌ （２）検体ブランク測定の場合 ２００ソモギ一単位／ｄ′２２，４−ジクロロフエニル
マルトペンタオシドを基質に使用する方法 （実施例５） （１）検体ブランク未測定の場合 ２００ソモギ一単位／ｄ′ （２）検体ブランク測定の場合 ２００ソモギ一単位／ｄ′ 比較例３と同様にｐ−ニトロフエニルマルトペンタオシ
ドを基質に使用する方法は、ビリルピンの影響を受ける
が、本願発明の方法は影響を受けないＯ
第１図は各種濃度の血清と吸光度との関係を示す。
Claims (1)
- １ ハロゲン化フェニル基（但し核にニトロ基が置換し
たハロゲン化フェニル基を除く）が還元性末端に結合し
たマルトオリゴ糖に試料を作用させた後、α−グルコシ
ダーゼおよびβ−グルコシダーゼを作用させるか、ある
いは試料と同時にα−グルコシダーゼおよびβ−グルコ
シダーゼを作用させ、遊離するハロゲン化フェノールを
呈色試薬により発色させて測定することにより、試料中
のアミラーゼ活性を測定することを特徴とするアミラー
ゼ活性測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11313879A JPS5913199B2 (ja) | 1979-09-03 | 1979-09-03 | アミラ−ゼ活性測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11313879A JPS5913199B2 (ja) | 1979-09-03 | 1979-09-03 | アミラ−ゼ活性測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5635998A JPS5635998A (en) | 1981-04-08 |
| JPS5913199B2 true JPS5913199B2 (ja) | 1984-03-28 |
Family
ID=14604515
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11313879A Expired JPS5913199B2 (ja) | 1979-09-03 | 1979-09-03 | アミラ−ゼ活性測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5913199B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63127489U (ja) * | 1987-02-13 | 1988-08-19 |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60997B2 (ja) * | 1978-01-31 | 1985-01-11 | 東洋紡績株式会社 | アミラ−ゼ活性測定法 |
| JPS5974999A (ja) * | 1982-10-20 | 1984-04-27 | Toyobo Co Ltd | アミラ−ゼ活性の測定方法 |
| DE3323245A1 (de) * | 1983-06-28 | 1985-01-10 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Verfahren und reagenz zur bestimmung von (alpha)-amylase |
| JPS6078994A (ja) * | 1983-10-06 | 1985-05-04 | Seishin Seiyaku Kk | β−（２−クロロ−４−ニトロフエニル）−マルトペンタオシド及びその製造法 |
| MX9206591A (es) * | 1991-11-19 | 1994-05-31 | Nippon Shinyaku Co Ltd | Proceso para la produccion de sacaridos. |
-
1979
- 1979-09-03 JP JP11313879A patent/JPS5913199B2/ja not_active Expired
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63127489U (ja) * | 1987-02-13 | 1988-08-19 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5635998A (en) | 1981-04-08 |
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