JPS6129462B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPS6129462B2 JPS6129462B2 JP53093835A JP9383578A JPS6129462B2 JP S6129462 B2 JPS6129462 B2 JP S6129462B2 JP 53093835 A JP53093835 A JP 53093835A JP 9383578 A JP9383578 A JP 9383578A JP S6129462 B2 JPS6129462 B2 JP S6129462B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hydrogen peroxide
- coloring
- oxidase
- dye
- compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/26—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase
- C12Q1/28—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving oxidoreductase involving peroxidase
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N31/00—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods
- G01N31/22—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators
- G01N31/228—Investigating or analysing non-biological materials by the use of the chemical methods specified in the subgroup; Apparatus specially adapted for such methods using chemical indicators for peroxides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2326/00—Chromogens for determinations of oxidoreductase enzymes
- C12Q2326/90—Developer
- C12Q2326/96—4-Amino-antipyrine
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
- Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
- Y10T436/144444—Glucose
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/20—Oxygen containing
- Y10T436/206664—Ozone or peroxide
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本発明は過酸化水素、水素供与体、電子もしく
はラジカル受容体をパーオキシダーゼの存在下に
反応せしめて色素を生成せしめる反応系を利用す
る過酸化水素、又は電子もしくはラジカル受容体
の定量法の改良に関する。さらに詳しくはこの反
応系で水素供与体として一般式（）： （但し、R1はCH3、C2H5、CH2OH、
CH2CH2OH、CH2CH2NH2又はCOCH3、R2は
CH2OH、CH2CH2OH、CH2CH2NH2、
CH2NHCOCH3、CH2CH2NHCOCH3又は
COCH3、R3はＨ、CH3、C2H5又はOCH3、R4は
Ｈ又はCH3を示す）で表わされる置換アニリン化
合物を用いる方法に関する。 最近試料中のある化合物に、この化合物に作用
するオキシダーゼを作用せしめて生成する過酸化
水素を定量することによつて試料中のその化合物
を定量する方法が多く用いられる、この目的のた
めに過酸化水素をより迅速且つより正確に定量す
る方法が望まれている。 従来過酸化水素はこれと反応することによつて
定量的に色素を生成しうる化合物（水素供与体お
よび電子もしくはラジカル受容体）と反応せしめ
て色素を生成せしめ、この色素の生成量と可視部
における吸収度との関係から定量する方法が行わ
れる。 かゝる定量方法において用いられる水素供与体
としてフエノール、ジメチルアニリン、ジエチル
アニリン、オルトトリジン、オルトトルイジン、
ｐ−トルイジン、Ｏ−フエニレンジアミン、Ｎ・
N′−ジメチル−ｐ−フエニレンジアミン、ベン
ジン、Ｏ−アニシジン、ｐ−アニシジン、ジアニ
シジン、Ｏ−クレゾール、ｍ−クレゾール、αお
よびβ−ナフトール、カテコール、グアニアコー
ル、ピロガロール、２・７−ジアミノフルオレ
ン、ロイコインドフエノールなどの化合物が用い
られている。 しかるにこれらの化合物を用いる場合(1)微量成
分の定量に際して感度が低い (2)試料中のヘモグ
ロビン、ビリルビン、アスコルビン酸等の色素生
成阻害成分の影響を受けやすい、あるいは(3)色素
生成後の呈色安定性が悪い等の欠点があり、さら
に優れた発色系が求められている。 この目的のために発明者らが検討した結果、前
記一般式（）で表わされる化合物を発色系に用
いる場合には過酸化水素、又は電子もしくはラジ
カル受容体の濃度を正確に定量することできるこ
とを見出した。 本発明によれば過酸化水素が存在もしくは生成
する系に前記一般式（）で表わされる置換アニ
リン化合物、電子もしくはラジカル受容体、及び
パーオキシダーゼを加えて生成する色素による呈
色の可視部における吸収を測ることによつて過酸
化水素を定量できる。 本発明で用いられる置換アニリン化合物の具体
例は第１表に示されるが、これらはいずれも既知
化合物である。
はラジカル受容体をパーオキシダーゼの存在下に
反応せしめて色素を生成せしめる反応系を利用す
る過酸化水素、又は電子もしくはラジカル受容体
の定量法の改良に関する。さらに詳しくはこの反
応系で水素供与体として一般式（）： （但し、R1はCH3、C2H5、CH2OH、
CH2CH2OH、CH2CH2NH2又はCOCH3、R2は
CH2OH、CH2CH2OH、CH2CH2NH2、
CH2NHCOCH3、CH2CH2NHCOCH3又は
COCH3、R3はＨ、CH3、C2H5又はOCH3、R4は
Ｈ又はCH3を示す）で表わされる置換アニリン化
合物を用いる方法に関する。 最近試料中のある化合物に、この化合物に作用
するオキシダーゼを作用せしめて生成する過酸化
水素を定量することによつて試料中のその化合物
を定量する方法が多く用いられる、この目的のた
めに過酸化水素をより迅速且つより正確に定量す
る方法が望まれている。 従来過酸化水素はこれと反応することによつて
定量的に色素を生成しうる化合物（水素供与体お
よび電子もしくはラジカル受容体）と反応せしめ
て色素を生成せしめ、この色素の生成量と可視部
における吸収度との関係から定量する方法が行わ
れる。 かゝる定量方法において用いられる水素供与体
としてフエノール、ジメチルアニリン、ジエチル
アニリン、オルトトリジン、オルトトルイジン、
ｐ−トルイジン、Ｏ−フエニレンジアミン、Ｎ・
N′−ジメチル−ｐ−フエニレンジアミン、ベン
ジン、Ｏ−アニシジン、ｐ−アニシジン、ジアニ
シジン、Ｏ−クレゾール、ｍ−クレゾール、αお
よびβ−ナフトール、カテコール、グアニアコー
ル、ピロガロール、２・７−ジアミノフルオレ
ン、ロイコインドフエノールなどの化合物が用い
られている。 しかるにこれらの化合物を用いる場合(1)微量成
分の定量に際して感度が低い (2)試料中のヘモグ
ロビン、ビリルビン、アスコルビン酸等の色素生
成阻害成分の影響を受けやすい、あるいは(3)色素
生成後の呈色安定性が悪い等の欠点があり、さら
に優れた発色系が求められている。 この目的のために発明者らが検討した結果、前
記一般式（）で表わされる化合物を発色系に用
いる場合には過酸化水素、又は電子もしくはラジ
カル受容体の濃度を正確に定量することできるこ
とを見出した。 本発明によれば過酸化水素が存在もしくは生成
する系に前記一般式（）で表わされる置換アニ
リン化合物、電子もしくはラジカル受容体、及び
パーオキシダーゼを加えて生成する色素による呈
色の可視部における吸収を測ることによつて過酸
化水素を定量できる。 本発明で用いられる置換アニリン化合物の具体
例は第１表に示されるが、これらはいずれも既知
化合物である。
【表】
【表】
【表】
電子もしくはラジカル受容体としては４−アミ
ノアンチピリン、２−チオフエンカルボキシリツ
クアシツドヒドラザイド、ベンチジン、３−メチ
ル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン等が用い
られる。 本発明方法を実施するに際しては、通常、予想
される過酸化水素の生成量と反応するに充分な
量、通常２〜５倍当量の置換アニリン化合物およ
び電子もしくはラジカル受容体にパーオキシダー
ゼを加えて反応させることによつて色素が反応液
中に生成する。色素の生成によつて生ずる色の吸
収を可視部450〜620nｍにおいて測定し、標準試
料による標準曲線と比較することによつて元の過
酸化水素量を知ることができる。 第１表に示される具体的化合物を用いて以下に
示される方法によつて呈色した液についての呈色
の度合、安定性、血清中の成分の影響について調
べた結果を第２表に示す。 試験は第２表の置換アニリン化合物0.4mg、４
−アミノアンチピリン0.6mg、パーオキシダーゼ
30Vを0.004ｍＭの過酸化水素液に加えて３mlと
して反応させる。反応式は次式で示される。 反応後、反応液の550nｍにおけるOD値をフエ
ノールを水素供与体として用いた場合のOD値を
100としたときの比較で呈色の度合を示す。血清
中の成分の影響はビリルビン４μｇ／３mlもしく
はアスコルビン酸２μｇ／３ml存在するとき３〜
６％の影響を±、６〜20％を＋、20％以上を〓と
して示す。色素安定性については、Ａは呈色完了
直後とその１時間後における呈色の度合に変化が
ないことを意味し、Ｂは上記１時間後における呈
色の度合が低下している場合を示す。 呈色の度合の数が大きい程、且つ安定性がＡの
ランクのものが水素供与体として優れている。
ノアンチピリン、２−チオフエンカルボキシリツ
クアシツドヒドラザイド、ベンチジン、３−メチ
ル−２−ベンゾチアゾリノンヒドラゾン等が用い
られる。 本発明方法を実施するに際しては、通常、予想
される過酸化水素の生成量と反応するに充分な
量、通常２〜５倍当量の置換アニリン化合物およ
び電子もしくはラジカル受容体にパーオキシダー
ゼを加えて反応させることによつて色素が反応液
中に生成する。色素の生成によつて生ずる色の吸
収を可視部450〜620nｍにおいて測定し、標準試
料による標準曲線と比較することによつて元の過
酸化水素量を知ることができる。 第１表に示される具体的化合物を用いて以下に
示される方法によつて呈色した液についての呈色
の度合、安定性、血清中の成分の影響について調
べた結果を第２表に示す。 試験は第２表の置換アニリン化合物0.4mg、４
−アミノアンチピリン0.6mg、パーオキシダーゼ
30Vを0.004ｍＭの過酸化水素液に加えて３mlと
して反応させる。反応式は次式で示される。 反応後、反応液の550nｍにおけるOD値をフエ
ノールを水素供与体として用いた場合のOD値を
100としたときの比較で呈色の度合を示す。血清
中の成分の影響はビリルビン４μｇ／３mlもしく
はアスコルビン酸２μｇ／３ml存在するとき３〜
６％の影響を±、６〜20％を＋、20％以上を〓と
して示す。色素安定性については、Ａは呈色完了
直後とその１時間後における呈色の度合に変化が
ないことを意味し、Ｂは上記１時間後における呈
色の度合が低下している場合を示す。 呈色の度合の数が大きい程、且つ安定性がＡの
ランクのものが水素供与体として優れている。
【表】
【表】
【表】
本発明方法によれば従来用いられているフエノ
ール等を用いる場合に比べ過酸化水素あるいは電
子もしくはラジカル受容体の定量が阻害物の影響
を受けることが少なく正確に行える。 殊に種々のオキシダーゼを用いて過酸化水素を
生成せしめ生成した過酸化水素を定量する臨床検
査薬への応用において著しい効果を示す。 例えばコレステロールの定量にコレステロー
ル・オキシダーゼ、リン脂質の定量にコリン・オ
キシダーゼ、グルコースの定量にグルコース・オ
キシダーゼ、尿酸にウリカーゼ等の酵素を用いて
生成する過酸化水素を発色系に導いて呈色した反
応液の可視部吸収を測ることによつてコレステロ
ール、リン脂質等の含量を定量することが知られ
ている。この発色系に本発明に係る置換アニリン
化合物を用いることは公知方法に比べて有利をも
たらす。 かゝる臨床検査薬は生体成分もしくはその処理
物に作用するオキシダーゼ、生成する過酸化水素
を色素へ導びく発色系からなるキツトを意味す
る。 オキシダーゼは生体成分もしくはその処理物に
作用して定量的に過酸化水素を生成するオキシダ
ーゼを意味する。 生体成分の処理物とは生体成分を化学的、ある
いは酵素的処理等によつてオキシダーゼの作用に
よつて定量的に過酸化水素を生成するように変換
された物質をいう。 発色系は一般式（）で表わされる化合物、電
子もしくはラジカル受容体およびパーオキシダー
ゼからなる。ラジカル受容体としては前述のもの
が用いられる。 以下に本発明の態様を示す実施例を示す。但し
用いられる酵素の活性表示は国際単位である。 実施例 １ (イ) 試薬の調整 (1) 酵素溶液 ウリカーゼ30単位、パーオキシダーゼ5000
単位、４−アミノアンチピリン300mg、トリ
トン×100（イソオクチルフエノキシポリエ
トキシエタノール、ローム・アンド・ハース
社製）300mgを0.1Mリン酸ナトリウム−カリ
ウム緩衝液（PH6.6）に溶解して300mlとす
る。 (2) 発色液 フエノール600mg、ジメチルアニリン
600mg、ジエチルアニリン600mg、ｍ−メ
チル−（Ｎ−エチル−N′−アセトアミノエチ
ル）アニリン（化合物No.28）20mgをそれぞ
れ30mlの0.1Mリン酸ナトリウム−カリウム
緩衝液に溶解する。 (3) 標準液 尿酸10mgを0.1Mリン酸ナトリウム−カリ
ウム緩衝液（PH6.6）に溶解して100mlとす
る。 (ロ) 操作法 酵素溶液３mlずつを含有する試験管に発色液
〜のそれぞれ0.3mlをとり、５種類の血清
0.02mlを別々に加えて、37℃15分反応させる。
反応液フエノールの場合は500nｍで他は550n
ｍで吸光度を測定し比色する。別に標準液
（0.02ml）の吸光度及び試薬のブランクテスト
による検査線を作成し血清中の尿酸量を算出す
る。 比較対象のためにウリカーゼ紫外分光々度法
で測定した値を併せ第３表に示す。
ール等を用いる場合に比べ過酸化水素あるいは電
子もしくはラジカル受容体の定量が阻害物の影響
を受けることが少なく正確に行える。 殊に種々のオキシダーゼを用いて過酸化水素を
生成せしめ生成した過酸化水素を定量する臨床検
査薬への応用において著しい効果を示す。 例えばコレステロールの定量にコレステロー
ル・オキシダーゼ、リン脂質の定量にコリン・オ
キシダーゼ、グルコースの定量にグルコース・オ
キシダーゼ、尿酸にウリカーゼ等の酵素を用いて
生成する過酸化水素を発色系に導いて呈色した反
応液の可視部吸収を測ることによつてコレステロ
ール、リン脂質等の含量を定量することが知られ
ている。この発色系に本発明に係る置換アニリン
化合物を用いることは公知方法に比べて有利をも
たらす。 かゝる臨床検査薬は生体成分もしくはその処理
物に作用するオキシダーゼ、生成する過酸化水素
を色素へ導びく発色系からなるキツトを意味す
る。 オキシダーゼは生体成分もしくはその処理物に
作用して定量的に過酸化水素を生成するオキシダ
ーゼを意味する。 生体成分の処理物とは生体成分を化学的、ある
いは酵素的処理等によつてオキシダーゼの作用に
よつて定量的に過酸化水素を生成するように変換
された物質をいう。 発色系は一般式（）で表わされる化合物、電
子もしくはラジカル受容体およびパーオキシダー
ゼからなる。ラジカル受容体としては前述のもの
が用いられる。 以下に本発明の態様を示す実施例を示す。但し
用いられる酵素の活性表示は国際単位である。 実施例 １ (イ) 試薬の調整 (1) 酵素溶液 ウリカーゼ30単位、パーオキシダーゼ5000
単位、４−アミノアンチピリン300mg、トリ
トン×100（イソオクチルフエノキシポリエ
トキシエタノール、ローム・アンド・ハース
社製）300mgを0.1Mリン酸ナトリウム−カリ
ウム緩衝液（PH6.6）に溶解して300mlとす
る。 (2) 発色液 フエノール600mg、ジメチルアニリン
600mg、ジエチルアニリン600mg、ｍ−メ
チル−（Ｎ−エチル−N′−アセトアミノエチ
ル）アニリン（化合物No.28）20mgをそれぞ
れ30mlの0.1Mリン酸ナトリウム−カリウム
緩衝液に溶解する。 (3) 標準液 尿酸10mgを0.1Mリン酸ナトリウム−カリ
ウム緩衝液（PH6.6）に溶解して100mlとす
る。 (ロ) 操作法 酵素溶液３mlずつを含有する試験管に発色液
〜のそれぞれ0.3mlをとり、５種類の血清
0.02mlを別々に加えて、37℃15分反応させる。
反応液フエノールの場合は500nｍで他は550n
ｍで吸光度を測定し比色する。別に標準液
（0.02ml）の吸光度及び試薬のブランクテスト
による検査線を作成し血清中の尿酸量を算出す
る。 比較対象のためにウリカーゼ紫外分光々度法
で測定した値を併せ第３表に示す。
【表】
第３表においてウリカーゼUV法は複雑であ
るための臨床検査薬等に応用されないが正確な
分析が可能であり、化合物No.28を用いる場合
の結果はウリカーゼUV法と比較して遜色がな
い。 実施例 ２ １ 試薬の調整 (1) 酵素溶液 コリステロール・エステラーゼ300単位、
コレステロール・オキシダーゼ550単位、パ
ー・オキシダーゼ1700単位、４−アミノアン
チピリン600mg、トリトン×100 300mgを
0.1Mトリスアミノメタン−塩酸緩衝液（PH
6.8）に溶解して正解に300mlにする。 (2) 発色液 フエノール600mg、ジメチルアニリン
600mg、ジエチルアニリン600mg、３・５
−ジメチル−（Ｎ−エチル−N′−アセトトア
ミノエチル）アニリン（化合物No.29）26mg
をそれぞれ30mlの0.1Mトリスアミノメタン
−塩酸緩衝液（PH6.8）に溶解する。 (3) 標準液 コレステロール300mgをイソプロピルアル
コール10部、トリトン×100部、蒸留水80部
からなる溶媒に溶解して正確に100mlにす
る。 ２ 操作法 酵素溶液３ml、発色液0.3mlをとり、５種類
の血清（検体）0.02mlを加え37℃、15分反応を
行なわせる。 フエノール発色液の場合は500nｍで、他の
発色液の場合は550nｍの吸光度を測定し比色
する。別に、標準液の比色結果および試薬ブラ
ンクを用いて、検量線を作成し、これに前記測
定結果を用いて検体中のコレステロール含量を
計算する。結果をガスクロマト法を用いて測定
した結果と対比して第４表に併記する。
るための臨床検査薬等に応用されないが正確な
分析が可能であり、化合物No.28を用いる場合
の結果はウリカーゼUV法と比較して遜色がな
い。 実施例 ２ １ 試薬の調整 (1) 酵素溶液 コリステロール・エステラーゼ300単位、
コレステロール・オキシダーゼ550単位、パ
ー・オキシダーゼ1700単位、４−アミノアン
チピリン600mg、トリトン×100 300mgを
0.1Mトリスアミノメタン−塩酸緩衝液（PH
6.8）に溶解して正解に300mlにする。 (2) 発色液 フエノール600mg、ジメチルアニリン
600mg、ジエチルアニリン600mg、３・５
−ジメチル−（Ｎ−エチル−N′−アセトトア
ミノエチル）アニリン（化合物No.29）26mg
をそれぞれ30mlの0.1Mトリスアミノメタン
−塩酸緩衝液（PH6.8）に溶解する。 (3) 標準液 コレステロール300mgをイソプロピルアル
コール10部、トリトン×100部、蒸留水80部
からなる溶媒に溶解して正確に100mlにす
る。 ２ 操作法 酵素溶液３ml、発色液0.3mlをとり、５種類
の血清（検体）0.02mlを加え37℃、15分反応を
行なわせる。 フエノール発色液の場合は500nｍで、他の
発色液の場合は550nｍの吸光度を測定し比色
する。別に、標準液の比色結果および試薬ブラ
ンクを用いて、検量線を作成し、これに前記測
定結果を用いて検体中のコレステロール含量を
計算する。結果をガスクロマト法を用いて測定
した結果と対比して第４表に併記する。
【表】
実施例 ３
１ 試薬の調整
(1) 酵素溶液
フオスフオリパーゼ−Ｄ 36単位、コリン
オキシダーゼ1000単位、パーオキシダーゼ
1800単位、４−アミノアンチピリン600mg、
トリトン×100 300mgを0.1Mリン酸ナトリウ
ム−カリウム緩衝液（PH7.0）に溶解し、300
mlにする。 (2) 発色液 フエノール600mg、ジメチルアニリン
600mg、ジエチルアニリン600、ｍ−メト
キシ−（Ｎ−エチル−N′−アセトアミノエチ
ル）アニリン（化合物No.63）20mgをそれぞ
れ30mlの0.1Mリン酸カリウム−ナトリウム
緩衝液（PH7.0）に溶解する。 (3) 標準液 リン脂質換算として300mgとなるように塩
化コリンを0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH7.0）に溶解して、正確に100mlとする。 ２ 操作法 酵素液３ml、発色液0.3mlをとり、血清（検
体）0.02mlを加え、37℃、５分反応を行なわせ
る。フエノール発色液の場合は500nｍで、他
の場合は550nｍの吸光度を測定する。別に、
標準液（0.02ml）の比色および試薬盲検の結果
を用いて検量線を作成し、これを用いて検体中
のリン脂質含量を計算で求める。 ガスクロマト法を用いて測定したリン脂質含
量を対照に結果を第５表に示した。
オキシダーゼ1000単位、パーオキシダーゼ
1800単位、４−アミノアンチピリン600mg、
トリトン×100 300mgを0.1Mリン酸ナトリウ
ム−カリウム緩衝液（PH7.0）に溶解し、300
mlにする。 (2) 発色液 フエノール600mg、ジメチルアニリン
600mg、ジエチルアニリン600、ｍ−メト
キシ−（Ｎ−エチル−N′−アセトアミノエチ
ル）アニリン（化合物No.63）20mgをそれぞ
れ30mlの0.1Mリン酸カリウム−ナトリウム
緩衝液（PH7.0）に溶解する。 (3) 標準液 リン脂質換算として300mgとなるように塩
化コリンを0.1Mリン酸ナトリウム緩衝液
（PH7.0）に溶解して、正確に100mlとする。 ２ 操作法 酵素液３ml、発色液0.3mlをとり、血清（検
体）0.02mlを加え、37℃、５分反応を行なわせ
る。フエノール発色液の場合は500nｍで、他
の場合は550nｍの吸光度を測定する。別に、
標準液（0.02ml）の比色および試薬盲検の結果
を用いて検量線を作成し、これを用いて検体中
のリン脂質含量を計算で求める。 ガスクロマト法を用いて測定したリン脂質含
量を対照に結果を第５表に示した。
【表】
実施例２、３において本発明方法はいずれも
ガスクロマト法の結果と、近似し正確であること
が理解される。
ガスクロマト法の結果と、近似し正確であること
が理解される。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 試料中の過酸化水素を定量する方法におい
て、試料に４−アミノアンチピリン、パーオキシ
ダーゼ及び一般式（）： （式中、R1はCH3、C2H5、CH2OH、CH2CH2OH
又はCH2CH2NH2を示し、R2はCH2NHCOCH3又
はCH2CH2NHCOCH3を示し、R3はＨ、CH3、
C2H5又はOCH3を示し、R4はＨ又はCH3を示
す。）で表される水素供与体を加えて反応させて
生成する色素を定量することを特徴とする試料中
の過酸化水素の定量法。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9383578A JPS5520471A (en) | 1978-08-01 | 1978-08-01 | Hydrogen peroxide quantifying method |
| EP79301457A EP0007787B1 (en) | 1978-08-01 | 1979-07-23 | Method and reagent for the quantitative determination of hydrogen peroxide |
| DE7979301457T DE2963973D1 (en) | 1978-08-01 | 1979-07-23 | Method and reagent for the quantitative determination of hydrogen peroxide |
| US06/062,742 US4260679A (en) | 1978-08-01 | 1979-08-01 | Method and reagent for the quantitative determination of hydrogen peroxide and precursors thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9383578A JPS5520471A (en) | 1978-08-01 | 1978-08-01 | Hydrogen peroxide quantifying method |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7092985A Division JPS60241899A (ja) | 1985-04-05 | 1985-04-05 | 過酸化水素定量法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5520471A JPS5520471A (en) | 1980-02-13 |
| JPS6129462B2 true JPS6129462B2 (ja) | 1986-07-07 |
Family
ID=14093439
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9383578A Granted JPS5520471A (en) | 1978-08-01 | 1978-08-01 | Hydrogen peroxide quantifying method |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4260679A (ja) |
| EP (1) | EP0007787B1 (ja) |
| JP (1) | JPS5520471A (ja) |
| DE (1) | DE2963973D1 (ja) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3037342A1 (de) * | 1980-01-09 | 1981-07-16 | Dojindo Laboratories, Kumamotoshi | N-sulfoalkylanilinderivate und ihre verwendung |
| JPS56117798A (en) * | 1980-02-21 | 1981-09-16 | Toyo Jozo Co Ltd | Kit for measuring lipoid peroxide |
| JPS6033479B2 (ja) * | 1980-07-30 | 1985-08-02 | 協和醗酵工業株式会社 | 過酸化水素の定量方法 |
| JPS5783287A (en) * | 1980-11-14 | 1982-05-25 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Elimination of hydrogen peroxide |
| JPS5794653A (en) * | 1980-12-04 | 1982-06-12 | Konishiroku Photo Ind Co Ltd | Element for analysis |
| US4391906A (en) * | 1981-02-12 | 1983-07-05 | Miles Laboratories, Inc. | System for the determination of glucose in fluids |
| US4391905A (en) * | 1981-02-12 | 1983-07-05 | Miles Laboratories, Inc. | System for the determination of glucose in fluids |
| US4340669A (en) * | 1981-02-12 | 1982-07-20 | Miles Laboratories, Inc. | System for the determination of glucose in fluids |
| JPS57142562A (en) * | 1981-02-27 | 1982-09-03 | Fuji Photo Film Co Ltd | Quantitative analysis film and colorimetric quantitative analysis |
| JPS57144996A (en) * | 1981-02-27 | 1982-09-07 | Fuji Photo Film Co Ltd | Film for quantitative analysis |
| JPS57174099A (en) * | 1981-04-17 | 1982-10-26 | Fuji Photo Film Co Ltd | Color indicator composition for detecting hydrogen peroxide and quantitative analytical film having reagent layer containing the same |
| DE3124594A1 (de) * | 1981-06-23 | 1983-01-05 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Mittel und verfahren zum nachweis von wasserstoffperoxid |
| DE3124590A1 (de) * | 1981-06-23 | 1983-01-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisiertes reagenz zum nachweis von h(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts)o(pfeil abwaerts)2(pfeil abwaerts) |
| JPS58898A (ja) * | 1981-06-23 | 1983-01-06 | Shinotesuto Kenkyusho:Kk | 過酸化水素の定量方法 |
| IT1168043B (it) * | 1981-10-22 | 1987-05-20 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Cromogeno per la determinazione colorimetrica dei perossidi e metodo impiegante lo stesso |
| US4556640A (en) * | 1983-06-29 | 1985-12-03 | Miles Laboratories, Inc. | Stabilized test composition, device and method for the determination of peroxidatively active substances |
| DE3433946A1 (de) * | 1984-09-15 | 1986-03-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Mittel und verfahren zum nachweis von wasserstoffperoxid |
| US4672029A (en) * | 1984-12-06 | 1987-06-09 | Eastman Kodak Company | Color-forming couplers and their use in the analytical determination of hydrogen peroxide or other analytes |
| JPS60241899A (ja) * | 1985-04-05 | 1985-11-30 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 過酸化水素定量法 |
| US4828983A (en) * | 1986-07-10 | 1989-05-09 | Eastman Kodak Company | Use of phenols and anilines to increase the rate of peroxidase catalyzed oxidation of leuco dyes |
| JPS6339645U (ja) * | 1986-08-29 | 1988-03-15 | ||
| US4859607A (en) * | 1989-01-17 | 1989-08-22 | Kansas State University Research Foundation | Colorimetric detector for ozone and method of preparation |
| US5518891A (en) * | 1993-03-25 | 1996-05-21 | Actimed Laboratories, Inc. | Dye forming composition and detection of hydrogen peroxide therewith |
| US5710012A (en) * | 1993-08-25 | 1998-01-20 | Actimed Laboratories, Inc. | Salt of 6-carboxy-3-methylbenzothiazolone hydrazone hydrate in colorimetric determination of hydrogen peroxide |
| US6040151A (en) | 1998-03-10 | 2000-03-21 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US5989845A (en) * | 1996-04-05 | 1999-11-23 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| US5776719A (en) * | 1997-07-07 | 1998-07-07 | Mercury Diagnostics, Inc. | Diagnostic compositions and devices utilizing same |
| DE60006954T2 (de) | 1999-05-10 | 2004-10-21 | Warner Lambert Co | Aromatische amide |
| RU2186370C1 (ru) * | 2000-12-26 | 2002-07-27 | Санкт-Петербургская общественная организация "Невская академия изобретателей" | Способ определения инвертных сахаров |
| WO2007079593A1 (en) * | 2006-01-13 | 2007-07-19 | Mcgill University | Novel melatonin ligands having antidepressant activity as well as sleep inducing properties |
| US8426213B2 (en) * | 2007-03-05 | 2013-04-23 | Advanced Liquid Logic Inc | Hydrogen peroxide droplet-based assays |
| CN104133057B (zh) * | 2009-07-23 | 2016-09-07 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 一种消除临床检验中抗坏血酸干扰的方法、试剂及试剂盒 |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3630847A (en) * | 1967-07-20 | 1971-12-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Diagnostic agent for use in the determination of hydroperoxides and of peroxidate-active substances |
| DE1767931C3 (de) * | 1967-10-26 | 1973-09-27 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Diagnostisches Mittel und Verfahren zum Nachweis von Urobilinogen-Körpern |
| US3642444A (en) * | 1969-05-02 | 1972-02-15 | Minnesota Mining & Mfg | Analytical reagent and method for carbohydrate analysis in body fluids |
| USRE29498E (en) * | 1972-05-12 | 1977-12-20 | Istituto Sieroterapico e Vaccinogeno Toscano "SCLAVO", S.p.A. | Process for the enzymatic determination of glucose with a glucose-oxydazed/peroxidazed enzyme system |
| DK678474A (ja) * | 1974-02-15 | 1975-10-13 | Hoffmann La Roche | |
| GB1479994A (en) * | 1974-03-04 | 1977-07-13 | Abbott Lab | Single reagent for the enzymatic determination of cholesterol and method therefor |
| JPS5188091A (en) * | 1975-01-30 | 1976-08-02 | Toshindanyoogu oyobi sonoseizoho | |
| US4089747A (en) * | 1976-08-09 | 1978-05-16 | Eastman Kodak Company | Compositions for the detection of hydrogen peroxide |
| IT1077056B (it) * | 1976-10-06 | 1985-04-27 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Composizione adatta alla determinazione di perossidi e metodo impiegante la stessa |
| IT1123670B (it) * | 1976-11-08 | 1986-04-30 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Composizione adatta alla determinazione enzimatica del glugosio |
| JPS5425892A (en) * | 1977-07-29 | 1979-02-27 | Wako Pure Chem Ind Ltd | Quantitative determination of hydrogen peroxide |
| US4098574A (en) * | 1977-08-01 | 1978-07-04 | Eastman Kodak Company | Glucose detection system free from fluoride-ion interference |
| US4119405A (en) * | 1978-02-13 | 1978-10-10 | Miles Laboratories, Inc. | Test means and method for interference resistant determination of oxidizing substances |
-
1978
- 1978-08-01 JP JP9383578A patent/JPS5520471A/ja active Granted
-
1979
- 1979-07-23 DE DE7979301457T patent/DE2963973D1/de not_active Expired
- 1979-07-23 EP EP79301457A patent/EP0007787B1/en not_active Expired
- 1979-08-01 US US06/062,742 patent/US4260679A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0007787B1 (en) | 1982-11-03 |
| DE2963973D1 (en) | 1982-12-09 |
| EP0007787A1 (en) | 1980-02-06 |
| JPS5520471A (en) | 1980-02-13 |
| US4260679A (en) | 1981-04-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPS6129462B2 (ja) | ||
| US4743559A (en) | Method for the determination of redox reactions using iodate to eliminate ascorbic acid interference | |
| Spencer | Analytical reviews in clinical biochemistry: the estimation of creatinine | |
| Matsubara et al. | Spectrophotometric determination of hydrogen peroxide with titanium 2-((5-bromopyridyl) azo)-5-(N-propyl-N-sulfopropylamino) phenol reagent and its application to the determination of serum glucose using glucose oxidase | |
| CS250227B2 (en) | Testing system for substances' determination liquids | |
| CS244665B2 (en) | Method of enzymatic determination of enzyme substrates | |
| JPH0470000B2 (ja) | ||
| JPH0698032B2 (ja) | クレアチンもしくはクレアチニンの測定法及びこれらの測定用試薬 | |
| Jelikić-Stankov et al. | Determination of uric acid in human serum by an enzymatic method using N-methyl-N-(4-aminophenyl)-3-methoxyaniline reagent | |
| JP2796150B2 (ja) | フルクトサミンの測定方法 | |
| EP0121254B1 (en) | Process for determining substrate or enzymatic activity | |
| Scheibe et al. | Uric acid | |
| JPH0218840B2 (ja) | ||
| JPH0771514B2 (ja) | １，５−アンヒドログルシトールの定量法 | |
| US5436133A (en) | Enzyme assay of biochemical substances | |
| JPS60241899A (ja) | 過酸化水素定量法 | |
| Kamoun et al. | Ultramicromethod for determination of plasma uric acid. | |
| EP0386237B1 (en) | Enzyme assay of biological substances | |
| JP2618456B2 (ja) | ジヌクレオチドの定量法 | |
| EP0138530A2 (en) | Method for the estimation of salicylates or reduced Pyridine nucleotides | |
| JPH1099098A (ja) | トレハロース分析用試薬 | |
| JP3402487B2 (ja) | １，５−アンヒドログルシトールの定量法 | |
| JPH06237795A (ja) | １，５−アンヒドログルシトールの定量法 | |
| JPH0153040B2 (ja) | ||
| JPH08256794A (ja) | カルシウム測定用試薬 |