JPS5974999A - アミラ−ゼ活性の測定方法 - Google Patents
アミラ−ゼ活性の測定方法Info
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- JPS5974999A JPS5974999A JP18435082A JP18435082A JPS5974999A JP S5974999 A JPS5974999 A JP S5974999A JP 18435082 A JP18435082 A JP 18435082A JP 18435082 A JP18435082 A JP 18435082A JP S5974999 A JPS5974999 A JP S5974999A
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- glucosidase
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- amylase
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- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、動物消化液、血清、微生物、植物種子、地下
茎等の各４１１ｉ ｉＸ科料中おけるアミラーゼ活性を
測定イる方法に関するものである。
茎等の各４１１ｉ ｉＸ科料中おけるアミラーゼ活性を
測定イる方法に関するものである。
従来のアミラーゼが１１定法は、主に２つの方法、囲ち
殿粉）゛＾；ｊ粕化カフ１Ｉｌ」定法と糖化力測定法に
分類され、夫々につき色々な方法及び変法が提案されて
いる。例えば特開昭５８−１１０９２号は、パワニトロ
フェノール等の結合シたマルトペンタオース等を基質と
し、これに７ミヲーゼ含有試料及びα−グルコシダーゼ
等を作用させてパワニトロフェノール等を遊離させ、こ
れを４１０ｎｍにおける吸光度測定にイ」シてアミラー
ゼ活性を測定する方法を開示している。ところが試料中
に混在する生体物質の中には、上記波長の近傍に吸収を
示す基質１例えばビリルビン（４５０〜４９０ｎｍに吸
収帯を有する）が存在しておシ、上記開示方法ではビリ
ルビンの彫物を受けて測定誤差を生じる恐れが強い。
殿粉）゛＾；ｊ粕化カフ１Ｉｌ」定法と糖化力測定法に
分類され、夫々につき色々な方法及び変法が提案されて
いる。例えば特開昭５８−１１０９２号は、パワニトロ
フェノール等の結合シたマルトペンタオース等を基質と
し、これに７ミヲーゼ含有試料及びα−グルコシダーゼ
等を作用させてパワニトロフェノール等を遊離させ、こ
れを４１０ｎｍにおける吸光度測定にイ」シてアミラー
ゼ活性を測定する方法を開示している。ところが試料中
に混在する生体物質の中には、上記波長の近傍に吸収を
示す基質１例えばビリルビン（４５０〜４９０ｎｍに吸
収帯を有する）が存在しておシ、上記開示方法ではビリ
ルビンの彫物を受けて測定誤差を生じる恐れが強い。
これに対し特開昭５６−８５９９８号は本出願人の出願
に係るものであるが、当該公報によって開示された方法
は、還元性末端にハロゲン化フェニル基を有するマルト
オリゴ糖を基質とし、アミラーゼ含有試料と共に、α−
グルコシダーゼ及びβ−グルコシダーゼを作用させ、′
１Ｆｉ：Ｒすれたハロゲン化フェノールを定量するもの
であシ、該定糸の為のＡ体重方法としてｔよ、４−アミ
ノアンチピリン等の呈色試薬による方法、臭素溶液によ
る滴定法、２．６−ジブロムキノンクロルイミドによる
比色分析法等が開示されている。この方法では、還元性
末端にハロゲン化フェニル基の結合シたマルトオリゴ糖
をアミラーゼの基質にしているので試料中に混在してい
るかも知れないグルコースやマルトース等の彫りを受け
ないという長所を有するが、分析法自体がエンドポイン
トに依存するものであり、臨床分析化学の進歩に伴うレ
イト法（Ｈａｔｅ Ａｓ５ａｙ ）に対応することは不
可能である。
に係るものであるが、当該公報によって開示された方法
は、還元性末端にハロゲン化フェニル基を有するマルト
オリゴ糖を基質とし、アミラーゼ含有試料と共に、α−
グルコシダーゼ及びβ−グルコシダーゼを作用させ、′
１Ｆｉ：Ｒすれたハロゲン化フェノールを定量するもの
であシ、該定糸の為のＡ体重方法としてｔよ、４−アミ
ノアンチピリン等の呈色試薬による方法、臭素溶液によ
る滴定法、２．６−ジブロムキノンクロルイミドによる
比色分析法等が開示されている。この方法では、還元性
末端にハロゲン化フェニル基の結合シたマルトオリゴ糖
をアミラーゼの基質にしているので試料中に混在してい
るかも知れないグルコースやマルトース等の彫りを受け
ないという長所を有するが、分析法自体がエンドポイン
トに依存するものであり、臨床分析化学の進歩に伴うレ
イト法（Ｈａｔｅ Ａｓ５ａｙ ）に対応することは不
可能である。
本発明はこの槌な状況に着目してなされたものであって
、フェノールオキシダーゼを作用させる１稈を付加すれ
ばレート法による分析を行なうことが可能であることを
知り、更に研究を重ね本発明を完成するに至った。即ち
本発明の要旨は、還元を生末端にフェノール骨格残基を
有するマルトオリゴ糖に、アミラーゼ含有試料を作用さ
せた後、又は該試料を作用させると同時に、α−グゲル
シダーセ単独貫たはα−グルコシダーゼ及びβ−グルコ
シダーゼを作用させ、ここで１ｊｆｊ ｌ’Ｉｉ（する
フェノ−／Ｉ／糸化金化合物必要によりカップラーの存
在下、フェノールオキシダーゼを作用させて、消費する
酸素ｉｔたｔよ生成する色素を測定することにより、前
記試料中のアミラーゼ活性をｎｉ時ビする様に描成した
点に存在する。即ち本発明は、前述のマルトオリゴ糖を
基質とし、アミラーゼの作用によって生成する反応混合
物（例えばフェノール系化合物をアグリコンとするグル
コシド、マルトシド、マルトトリオシト等）にα−グゲ
ルシダーゼ爪独またけａ−グルコシダーゼ及びβ−グル
コシダーゼを作用させてフェノール系化合物を遊離させ
、更にこれにフェノール類オキシダーゼを作用させるこ
とによってフェノール糸イヒ金物を定量し、その結果か
らアミラーゼ活性を知ることを要旨とするものである。
、フェノールオキシダーゼを作用させる１稈を付加すれ
ばレート法による分析を行なうことが可能であることを
知り、更に研究を重ね本発明を完成するに至った。即ち
本発明の要旨は、還元を生末端にフェノール骨格残基を
有するマルトオリゴ糖に、アミラーゼ含有試料を作用さ
せた後、又は該試料を作用させると同時に、α−グゲル
シダーセ単独貫たはα−グルコシダーゼ及びβ−グルコ
シダーゼを作用させ、ここで１ｊｆｊ ｌ’Ｉｉ（する
フェノ−／Ｉ／糸化金化合物必要によりカップラーの存
在下、フェノールオキシダーゼを作用させて、消費する
酸素ｉｔたｔよ生成する色素を測定することにより、前
記試料中のアミラーゼ活性をｎｉ時ビする様に描成した
点に存在する。即ち本発明は、前述のマルトオリゴ糖を
基質とし、アミラーゼの作用によって生成する反応混合
物（例えばフェノール系化合物をアグリコンとするグル
コシド、マルトシド、マルトトリオシト等）にα−グゲ
ルシダーゼ爪独またけａ−グルコシダーゼ及びβ−グル
コシダーゼを作用させてフェノール系化合物を遊離させ
、更にこれにフェノール類オキシダーゼを作用させるこ
とによってフェノール糸イヒ金物を定量し、その結果か
らアミラーゼ活性を知ることを要旨とするものである。
本発明にいうマルトオリゴ糖とは、一般にグルコースが
α−１，４−グルコシド結合を介して２〜１０個稈度結
合したものであル、特に制限的に解釈されるべきではな
いが、代表的な糖を例示するト、例えばマルトース、マ
ルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオ
ース、マルトヘキサオース等が孕けられる。これらのう
ち特に好適なのはマルトテトラオース、マルトペンタオ
ース、マルトヘキサオースである。上記のマルトすリボ
糖に対しアグリコンとして結合されるフェノール系化合
物としては、上記マルトオリゴ糖のｆＳ元性末端に対し
α−又はβ−結合することができると共にα−グルコシ
ダーゼまたはβ−グルコシダーゼの作用を受けで容易に
遊離し、且つフェノールオキシダーゼの作用を受けるも
のであれば全て利用することができる。この様な条件を
満足するフェノール系化合物としては、フェノール、〇
−クロロフェノール、２．４−ジクロロフェノール、ｍ
−メトキシフェノール、０−メトキシフェノール、Ｐ−
クロロフェノール ０ ７’ロモフエノール、０−Ｈ−
ドフェノール等を例示することができる。ここに例示し
た様なフェノール系化合物は。
α−１，４−グルコシド結合を介して２〜１０個稈度結
合したものであル、特に制限的に解釈されるべきではな
いが、代表的な糖を例示するト、例えばマルトース、マ
ルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオ
ース、マルトヘキサオース等が孕けられる。これらのう
ち特に好適なのはマルトテトラオース、マルトペンタオ
ース、マルトヘキサオースである。上記のマルトすリボ
糖に対しアグリコンとして結合されるフェノール系化合
物としては、上記マルトオリゴ糖のｆＳ元性末端に対し
α−又はβ−結合することができると共にα−グルコシ
ダーゼまたはβ−グルコシダーゼの作用を受けで容易に
遊離し、且つフェノールオキシダーゼの作用を受けるも
のであれば全て利用することができる。この様な条件を
満足するフェノール系化合物としては、フェノール、〇
−クロロフェノール、２．４−ジクロロフェノール、ｍ
−メトキシフェノール、０−メトキシフェノール、Ｐ−
クロロフェノール ０ ７’ロモフエノール、０−Ｈ−
ドフェノール等を例示することができる。ここに例示し
た様なフェノール系化合物は。
上記マルトオリゴ糖の１■九性末端に対してα−又はβ
−結合することができ、本発明における糸質として用い
られるが、前記＃ｔｉ Ａｙ：素の作用を受けで遊＃Ｉ
ｌ’ したフェノール系化合物は、フェノールオキシダ
ーゼと必要によシカツブラーの存在下作用させて、消費
する酸素量または生成する色素を測定する１、カップラ
ーとはフェノール翔と酸化縮合して色素を形成させるも
のであって、４−アミノアンチピリンの他に、ｐ−アミ
ノ−Ｎ、Ｎ−ジメチルアニリン、ｐ−アミノ−Ｎ、Ｎ−
ジエチルアニリン、Ｐ−アミノ−Ｎ−エチル−Ｎ−ヒド
ロキシエチルアニリン、８−メチル−４−アミノ−Ｎ。
−結合することができ、本発明における糸質として用い
られるが、前記＃ｔｉ Ａｙ：素の作用を受けで遊＃Ｉ
ｌ’ したフェノール系化合物は、フェノールオキシダ
ーゼと必要によシカツブラーの存在下作用させて、消費
する酸素量または生成する色素を測定する１、カップラ
ーとはフェノール翔と酸化縮合して色素を形成させるも
のであって、４−アミノアンチピリンの他に、ｐ−アミ
ノ−Ｎ、Ｎ−ジメチルアニリン、ｐ−アミノ−Ｎ、Ｎ−
ジエチルアニリン、Ｐ−アミノ−Ｎ−エチル−Ｎ−ヒド
ロキシエチルアニリン、８−メチル−４−アミノ−Ｎ。
Ｎ−ジエチルアニリンなどがある。カッブリーの不存在
下に生成するキノン類もｆｒｌ ＞ｉ ’ｌ能である。
下に生成するキノン類もｆｒｌ ＞ｉ ’ｌ能である。
カッｙ”ｙ−、！：して、例えば４−アミノアンチピリ
ンと酸化結合させると、極めて大きい発色強度が得られ
、アミラーゼ活性のｊｉｌＩ定にとって頗る有利である
。
ンと酸化結合させると、極めて大きい発色強度が得られ
、アミラーゼ活性のｊｉｌＩ定にとって頗る有利である
。
上記ハ賀は通常の化学的合成法に準じ１製造することが
でき、例えば丸善発行、日本化学会細：実験化学Ｎ座第
２４巻生物化学Ｈの第８０４頁（１９５８年）に記載さ
れた方法に従い、例えばマルトオリゴ１．！ｉをアセチ
ル化し、次いで触媒のイｒ在下フェノール系化合物を還
元性末喘に結合させ、最後に保ｉりｉアセチル基を脱離
させることによってａＱＪ飽する。尚この仲な方法では
、アセチル化マルトオリゴわ１とフェノール系化合物の
結合を、ｑ−又はβ−のいずれか一方のみ選択的に行な
わせることが困ψ１［であシ、又α−結合体とβ−結合
体の混合物から一方を綽粋に分Ｒ１＃することも困幡で
ある。しかし本発明ではα−グルコシダーゼとβ−グル
コシダーゼの両者を併用場合もあり、α−結合体とβ−
結合体が混在していても不都合はなく、アミラーゼ活性
を１００係検出することができる。。
でき、例えば丸善発行、日本化学会細：実験化学Ｎ座第
２４巻生物化学Ｈの第８０４頁（１９５８年）に記載さ
れた方法に従い、例えばマルトオリゴ１．！ｉをアセチ
ル化し、次いで触媒のイｒ在下フェノール系化合物を還
元性末喘に結合させ、最後に保ｉりｉアセチル基を脱離
させることによってａＱＪ飽する。尚この仲な方法では
、アセチル化マルトオリゴわ１とフェノール系化合物の
結合を、ｑ−又はβ−のいずれか一方のみ選択的に行な
わせることが困ψ１［であシ、又α−結合体とβ−結合
体の混合物から一方を綽粋に分Ｒ１＃することも困幡で
ある。しかし本発明ではα−グルコシダーゼとβ−グル
コシダーゼの両者を併用場合もあり、α−結合体とβ−
結合体が混在していても不都合はなく、アミラーゼ活性
を１００係検出することができる。。
−力木発明に用いるα−グルコシダーゼ及びβ−グルコ
シダーゼについては、動物超厚、４ｊ’ｉ物」超厚或は
鑓生物Ｊ超厚等のｊｕｌ＋何を問わないが、特に好適な
ものを説明すると、α−グゲルシターゼ圧ついでは、）
、（質特異性の面から見て酊１好起原のものが有利であ
る。即ちｒ＋！ ｉ’Ｊ起原超厚−グルコシダーゼは糸
質特異性が一般に広範囲であシ、アグリコンの違いＫよ
る影瞥が少ないと共に、マルトトリオシト以下のグリコ
シドには良く作用するが、マルトトリオシト以下のグリ
コシドには作用しないという特１牛があシ、アミラーセ
）古株の？１ｉＩＩ 丸という本発明の趣旨に適合し有
利である。一方β−クルコシダーゼについても、同１１
）；の趣旨から見て、例えばアーモンド超厚のものがも
っとも強（推奨される。
シダーゼについては、動物超厚、４ｊ’ｉ物」超厚或は
鑓生物Ｊ超厚等のｊｕｌ＋何を問わないが、特に好適な
ものを説明すると、α−グゲルシターゼ圧ついでは、）
、（質特異性の面から見て酊１好起原のものが有利であ
る。即ちｒ＋！ ｉ’Ｊ起原超厚−グルコシダーゼは糸
質特異性が一般に広範囲であシ、アグリコンの違いＫよ
る影瞥が少ないと共に、マルトトリオシト以下のグリコ
シドには良く作用するが、マルトトリオシト以下のグリ
コシドには作用しないという特１牛があシ、アミラーセ
）古株の？１ｉＩＩ 丸という本発明の趣旨に適合し有
利である。一方β−クルコシダーゼについても、同１１
）；の趣旨から見て、例えばアーモンド超厚のものがも
っとも強（推奨される。
これらα−グルコンダーゼ及びβ−クルコシダーゼの併
用割合は、基質のｆ！！！類、シ１（質中におけるα−
結合とβ−結合の存在比率等をｉリノ案して定めれば良
いが、一般的には、α−アミラーゼによるエンド加水分
解で生成し１ヒマルトリオース及びフェニール類マルト
ースを非常に早く分解できる比率であれば良く、通′帛
はα−グルコシダーゼを多めに配合する。
用割合は、基質のｆ！！！類、シ１（質中におけるα−
結合とβ−結合の存在比率等をｉリノ案して定めれば良
いが、一般的には、α−アミラーゼによるエンド加水分
解で生成し１ヒマルトリオース及びフェニール類マルト
ースを非常に早く分解できる比率であれば良く、通′帛
はα−グルコシダーゼを多めに配合する。
α−グルコシダーゼ及びβ−クルコシダーゼはアミラー
ゼ含有試料を作用させた後で作用させる様にしても良く
、又同時的に作用させても良い。
ゼ含有試料を作用させた後で作用させる様にしても良く
、又同時的に作用させても良い。
こうしてフェノール系化合物がｒ、９７離されると、〕
ｘ ／ −Ａｙ 、ｔキシダーゼを作用させてフェノー
ル系化合物の定量を行なうが、ここで用いられるフェノ
ールオキシダーゼとしては、必甥によシカツプヲー、例
えば４−アミノアンチピリンの存在下にフェノール系化
合物を酸化組合させて発色させ得るものであれば全て本
発明に適用することができる。尚特に好適なものを例示
しておくと、例えば担子菌から得られるラッカーゼやグ
ーロνナーゼ等を挙げることができる。
ｘ ／ −Ａｙ 、ｔキシダーゼを作用させてフェノー
ル系化合物の定量を行なうが、ここで用いられるフェノ
ールオキシダーゼとしては、必甥によシカツプヲー、例
えば４−アミノアンチピリンの存在下にフェノール系化
合物を酸化組合させて発色させ得るものであれば全て本
発明に適用することができる。尚特に好適なものを例示
しておくと、例えば担子菌から得られるラッカーゼやグ
ーロνナーゼ等を挙げることができる。
本発明は上記の様な構成からなっているので、例えば特
開昭５８−１１０９２号で述べた様な欠点（血中ビリル
ビンによるｄｌ定に（差）、あるいは特開昭５６−８５
９９８号で述べたような欠点（試料中のグルコースやマ
ルトースの影響により、レート法の採用が不可能になる
こと）等を伴なわずに、レート法によるアミラーゼ活性
の測定を行なうことがｎｌ能となった。
開昭５８−１１０９２号で述べた様な欠点（血中ビリル
ビンによるｄｌ定に（差）、あるいは特開昭５６−８５
９９８号で述べたような欠点（試料中のグルコースやマ
ルトースの影響により、レート法の採用が不可能になる
こと）等を伴なわずに、レート法によるアミラーゼ活性
の測定を行なうことがｎｌ能となった。
次罠本発明の実施例を酸、明する。
実施例１
下記溶液を混合してアミラーゼｌ占性測寛試薬とした。
（５）ｐ １１６．８ ＋ ０．０５ Ｍのグツドバッ
ファーにγＢ％した ０、４チフエニルマルトベン タオサイド（０，０５％の４ 一アミノアンチピリン舌有１ １．、５ ｍｅ（旬酵
素液（ｐＨ６，８、０，０５ Ｍのグツドバッファーにα 一グルコシダーゼ：１６０ 単位／ ｍｅとβ−クルコシダ ーゼ１０単位／ ｍｅを配合） １．５ ｍｅ（
Ｃ）ラッカーゼ（１９０爪位 ／ｍｅ ）０．０８ ｍｅ 上記ｎ１１］定拭＞’Ｘ４に、各神１ＢｋＪ５ （０〜
８ ｆｊ、 ００ソモギ一爪位／ｅ１に希釈した唾液（
０，０２０ｍｅ ）を添加した。８７°Ｃで８分間反応
させ、５ Ｑ Ｑｎ＋ｎの吸光度を測定し、５００””
における吸光度の１ ｌ）、）閤当りの増加上を求めた
ところ、第１図に示すｔ１４な関係が得られた。即ち唾
液濃度と吸光度の増加の間に相関々係が認められ、アミ
ラーゼ活性の４１１１定をレート法で高栖度に行なうこ
とがｉｉ７能であることを確認した。
ファーにγＢ％した ０、４チフエニルマルトベン タオサイド（０，０５％の４ 一アミノアンチピリン舌有１ １．、５ ｍｅ（旬酵
素液（ｐＨ６，８、０，０５ Ｍのグツドバッファーにα 一グルコシダーゼ：１６０ 単位／ ｍｅとβ−クルコシダ ーゼ１０単位／ ｍｅを配合） １．５ ｍｅ（
Ｃ）ラッカーゼ（１９０爪位 ／ｍｅ ）０．０８ ｍｅ 上記ｎ１１］定拭＞’Ｘ４に、各神１ＢｋＪ５ （０〜
８ ｆｊ、 ００ソモギ一爪位／ｅ１に希釈した唾液（
０，０２０ｍｅ ）を添加した。８７°Ｃで８分間反応
させ、５ Ｑ Ｑｎ＋ｎの吸光度を測定し、５００””
における吸光度の１ ｌ）、）閤当りの増加上を求めた
ところ、第１図に示すｔ１４な関係が得られた。即ち唾
液濃度と吸光度の増加の間に相関々係が認められ、アミ
ラーゼ活性の４１１１定をレート法で高栖度に行なうこ
とがｉｉ７能であることを確認した。
実施例
下「己溶ｌ伎を混合してアミワーゼｌ古株泪ＩＪ矩試薬
とした。
とした。
（Ａ）ｐ Ｈ６，８、０，０５Ｍのグツドバッファーに
浴ｌＩＪ〆した ０、４チの２．４−ジクロロフ ェニルマルトベンタオザイ ド（０，０５係の４−アミノ アンチピリン含有） １．５ ｒｒ＋
ｅ（Ｂ）ｇＸｒｌＺ（実施例１と同じ） １．
５ ｍｅ（Ｑ″７７ツカーゼ上） ０．０
８ｍｆ！上記＋１１１１定試薬に、各抑濃度（０〜１０
００ソモギ一ボ位／／）に希釈した人血Ｙｌ （０，０
２０ｒｎｅ ）をγイ１５加した。Ｊ１施例１と同様に
吸光度の測定をｆＴない、第２図に示す結果を得た。や
けシアミヲーゼ活性レート法による測定が可能であるこ
とを確認した。
浴ｌＩＪ〆した ０、４チの２．４−ジクロロフ ェニルマルトベンタオザイ ド（０，０５係の４−アミノ アンチピリン含有） １．５ ｒｒ＋
ｅ（Ｂ）ｇＸｒｌＺ（実施例１と同じ） １．
５ ｍｅ（Ｑ″７７ツカーゼ上） ０．０
８ｍｆ！上記＋１１１１定試薬に、各抑濃度（０〜１０
００ソモギ一ボ位／／）に希釈した人血Ｙｌ （０，０
２０ｒｎｅ ）をγイ１５加した。Ｊ１施例１と同様に
吸光度の測定をｆＴない、第２図に示す結果を得た。や
けシアミヲーゼ活性レート法による測定が可能であるこ
とを確認した。
実施例８
下記溶酸を混合してアミラーゼ活性測定試薬とした。
（５）ｐＨ７，５、０，０５Ｍのグツ
ドバッファーに溶解した
０、４％の８−メトキシフェ
ニルマルトペンタオサイド
（０，０５係の４−アミノア
ンチピリン含有） １．５ ｍｅσ
り酵素液（実加（例１と同じ） １．５
ｍｅ（Ｑチロシナーゼ（２００単位 ／ｍｅ ） ０．０８ｍｅ
上記潤定試薬を用い実施例２と同様の測定を行なうこと
によ勺、第８図に示す結果を得、アミラーゼ活性のレー
ト法による６＋１１定か可能であることを確認した。
り酵素液（実加（例１と同じ） １．５
ｍｅ（Ｑチロシナーゼ（２００単位 ／ｍｅ ） ０．０８ｍｅ
上記潤定試薬を用い実施例２と同様の測定を行なうこと
によ勺、第８図に示す結果を得、アミラーゼ活性のレー
ト法による６＋１１定か可能であることを確認した。
第１〜８図は、各種基質、試料及び酵素の組合わせにお
いて、試料濃ＪＪｔと吸光度増加量７分の間に比例的相
関々係があることを示すグラフである。 出廟人 東洋紡績株式会社 ｒ−１−、光ネ山 倉−１云−） （自発）昭和５８
年３月２３［１ １、・１）ｆｌの表示 昭和５７年ｑ旨１別第１８４３５０け ２、発明の名称 アミラーゼ活性の４１１１定力法 ３袖ｉｔをする者 ・ハｆ１との関係 特許出願人 大阪市北区堂島浜−丁１１２番８弓 （３１，６）東７Ｙ紡績株式会ン１ 代表者 宇 野 改 ４、代 理 人 〒５３０大阪市北区堂島
２１°１」３番７吟 ンンコーヒル 明細１１：のＩ−発明の詳細な説明」及び［図面の１ｉ
ｉＩＱ′Ｊな説明Ｊの各欄並ひに図面６補止の内容 （１）明細１１；イ目２頁第１４行目と第１５行［１の
間にＬ記の文宿を挿入します。 実施例４ 下記溶液を混合し−Ｃアミラーゼ活活性定試県としだ。 （Ａ）ｐＨＧ、３のグツドバッファーに溶角了した０、
４伜ノ２．４−ジクロロフェニルマルトペンタ刊−リイ
ド［０，０５係の３−メチル−２−ベンゾ−（２′−ス
ルホ）−チアゾロンヒドワゾン（ＭＢＴＩ（−５）を含
有、１］（１，５ｍ／り （ｎ）酵素液（実施例Ｊと同じ） （Ｃ）チロシナーゼ（２００単位 ｍ６）上記測定試薬
に各種ｖ１゛１度（０〜１０（）国際単位／ｌ）に希釈
した人血清（０，０２０７ｎｇ）を添加した。 ３７℃で反応を行かへ ５３０ ｎ ｍの吸光度を測定
し、５３０ Ｉｔ ｍにおける吸光度の１分間当りの増
加用、を求めた所、第４図に示す様な関係が得られた。 即ちアミラーゼ活性の測定がレート法で可能−あること
を確認した。 （２）同第１２頁第１６行［］の「１〜３」を「１〜４
」に５丁１１−シます。 （３）ｉ’ｌｉＡ図を心肺します。 Δ 第４図
いて、試料濃ＪＪｔと吸光度増加量７分の間に比例的相
関々係があることを示すグラフである。 出廟人 東洋紡績株式会社 ｒ−１−、光ネ山 倉−１云−） （自発）昭和５８
年３月２３［１ １、・１）ｆｌの表示 昭和５７年ｑ旨１別第１８４３５０け ２、発明の名称 アミラーゼ活性の４１１１定力法 ３袖ｉｔをする者 ・ハｆ１との関係 特許出願人 大阪市北区堂島浜−丁１１２番８弓 （３１，６）東７Ｙ紡績株式会ン１ 代表者 宇 野 改 ４、代 理 人 〒５３０大阪市北区堂島
２１°１」３番７吟 ンンコーヒル 明細１１：のＩ−発明の詳細な説明」及び［図面の１ｉ
ｉＩＱ′Ｊな説明Ｊの各欄並ひに図面６補止の内容 （１）明細１１；イ目２頁第１４行目と第１５行［１の
間にＬ記の文宿を挿入します。 実施例４ 下記溶液を混合し−Ｃアミラーゼ活活性定試県としだ。 （Ａ）ｐＨＧ、３のグツドバッファーに溶角了した０、
４伜ノ２．４−ジクロロフェニルマルトペンタ刊−リイ
ド［０，０５係の３−メチル−２−ベンゾ−（２′−ス
ルホ）−チアゾロンヒドワゾン（ＭＢＴＩ（−５）を含
有、１］（１，５ｍ／り （ｎ）酵素液（実施例Ｊと同じ） （Ｃ）チロシナーゼ（２００単位 ｍ６）上記測定試薬
に各種ｖ１゛１度（０〜１０（）国際単位／ｌ）に希釈
した人血清（０，０２０７ｎｇ）を添加した。 ３７℃で反応を行かへ ５３０ ｎ ｍの吸光度を測定
し、５３０ Ｉｔ ｍにおける吸光度の１分間当りの増
加用、を求めた所、第４図に示す様な関係が得られた。 即ちアミラーゼ活性の測定がレート法で可能−あること
を確認した。 （２）同第１２頁第１６行［］の「１〜３」を「１〜４
」に５丁１１−シます。 （３）ｉ’ｌｉＡ図を心肺します。 Δ 第４図
Claims (1)
- （１）Ｍ元性末喘にフェノール骨格残糸を有するマルト
オリゴ糖に、アミラーゼ含有試料を作用させた後、又は
該試料を作用させると同時に、α−グゲルシダーゼ単独
寸たはα−グルコシダーゼ及びβ〜グゲルシダーゼを作
用させ、ここで遊離するフェノ−／Ｌ’系化合物に必要
によりカップラーの存在下、フェノールオキシダーゼを
作用させて、消賀する酸紫昂捷たけ生成する色素を４１
１１定することにより、前記試料中のアミラーゼ活性を
ｆ用足することを特徴とするアミラーゼ活性の測定方法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18435082A JPS5974999A (ja) | 1982-10-20 | 1982-10-20 | アミラ−ゼ活性の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18435082A JPS5974999A (ja) | 1982-10-20 | 1982-10-20 | アミラ−ゼ活性の測定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5974999A true JPS5974999A (ja) | 1984-04-27 |
| JPH0367680B2 JPH0367680B2 (ja) | 1991-10-23 |
Family
ID=16151720
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18435082A Granted JPS5974999A (ja) | 1982-10-20 | 1982-10-20 | アミラ−ゼ活性の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5974999A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5635998A (en) * | 1979-09-03 | 1981-04-08 | Toyobo Co Ltd | Measurement of amylase activity |
-
1982
- 1982-10-20 JP JP18435082A patent/JPS5974999A/ja active Granted
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5635998A (en) * | 1979-09-03 | 1981-04-08 | Toyobo Co Ltd | Measurement of amylase activity |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0367680B2 (ja) | 1991-10-23 |
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