JPH0631293B2 - マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬 - Google Patents
マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬Info
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- JPH0631293B2 JPH0631293B2 JP62314379A JP31437987A JPH0631293B2 JP H0631293 B2 JPH0631293 B2 JP H0631293B2 JP 62314379 A JP62314379 A JP 62314379A JP 31437987 A JP31437987 A JP 31437987A JP H0631293 B2 JPH0631293 B2 JP H0631293B2
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- substrate
- group
- glucosidase
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
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- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
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- Molecular Biology (AREA)
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- Saccharide Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規なマルトオリゴ糖誘導体および当該マルト
オリゴ糖誘導体を基質として用いるα−アミラーゼの活
性測定試薬に関する。
オリゴ糖誘導体を基質として用いるα−アミラーゼの活
性測定試薬に関する。
膵液や尿などの体液に含有されるα−アミラーゼの活性
を測定することにより、各種疾患の診断が行われてい
る。α−アミラーゼの活性測定法には、例えばマルトオ
リゴ糖（マルトテトラオース、マルトペンタオース、マ
ルトヘキサオースなど）を基質とする方法がある。この
方法では、α−アミラーゼ含有試料に該マルトオリゴ糖
とα−グルコシダーゼとを作用させて基質からグルコー
スを遊離させ、グルコースの量を測定することにより、
α−アミラーゼの活性値を知る。
を測定することにより、各種疾患の診断が行われてい
る。α−アミラーゼの活性測定法には、例えばマルトオ
リゴ糖（マルトテトラオース、マルトペンタオース、マ
ルトヘキサオースなど）を基質とする方法がある。この
方法では、α−アミラーゼ含有試料に該マルトオリゴ糖
とα−グルコシダーゼとを作用させて基質からグルコー
スを遊離させ、グルコースの量を測定することにより、
α−アミラーゼの活性値を知る。
生成したグルコースは、例えばグルコースオキシダーゼ
／パーオキシダーゼ／色素系を利用する定量法；ヘキソ
キナーゼ／ホスフォグルコムターゼ／グルコース−６−
ホスフェートデヒドロゲナーゼ／ＮＡＤＨ系を利用する
測定法などにより測定される。α−グルコシダーゼはマ
ルトペンタオースなどの四糖以上のオリゴ糖に作用しに
くくマルトースやマルトトリオースなどの三糖以下のオ
リゴ糖に良好に作用するため、上記基質を使用してグル
コースを測定することによりα−アミラーゼの活性を測
定することができる。しかし、α−グルコシダーゼはわ
ずかではあるが基質であるマルトペンタオースに作用す
るため、測定のブランク値が上昇し、その結果、測定値
の誤差が大きくなるという欠点がある。α−グルコシダ
ーゼの基質分解作用のため、α−グルコシダーゼと基質
とを一液化することは、試薬としての安定性が損なわれ
るため好ましくない。
／パーオキシダーゼ／色素系を利用する定量法；ヘキソ
キナーゼ／ホスフォグルコムターゼ／グルコース−６−
ホスフェートデヒドロゲナーゼ／ＮＡＤＨ系を利用する
測定法などにより測定される。α−グルコシダーゼはマ
ルトペンタオースなどの四糖以上のオリゴ糖に作用しに
くくマルトースやマルトトリオースなどの三糖以下のオ
リゴ糖に良好に作用するため、上記基質を使用してグル
コースを測定することによりα−アミラーゼの活性を測
定することができる。しかし、α−グルコシダーゼはわ
ずかではあるが基質であるマルトペンタオースに作用す
るため、測定のブランク値が上昇し、その結果、測定値
の誤差が大きくなるという欠点がある。α−グルコシダ
ーゼの基質分解作用のため、α−グルコシダーゼと基質
とを一液化することは、試薬としての安定性が損なわれ
るため好ましくない。
マルトオリゴ糖の還元性末端にフェニル基、ナフチル
基、またはそれらの誘導体をアグリコンとして結合させ
た基質を用いる方法も提案されている。例えば、基質と
してｐ−ニトロフェニルマルトペンタオシド（特公昭５
７−５３０７９号公報）、ｐ−ニトロフェニルマルトヘ
キサオシド（特公昭５７−５３０７９号公報）、ｐ−ニ
トロフェニルマルトヘプタオシド（特開昭５４−５１８
９２号公報）、２，４−ジクロロフェニルマルトペンタ
オシド（特開昭５６−３５９９８号公報）などが利用さ
れている。こらの基質を用いると、アグリコンが遊離
し、遊離したアグリコン、例えばｐ−ニトロフェノール
を光学的に測定することにより、α−アミラーゼの活性
を容易に測定することができる。
基、またはそれらの誘導体をアグリコンとして結合させ
た基質を用いる方法も提案されている。例えば、基質と
してｐ−ニトロフェニルマルトペンタオシド（特公昭５
７−５３０７９号公報）、ｐ−ニトロフェニルマルトヘ
キサオシド（特公昭５７−５３０７９号公報）、ｐ−ニ
トロフェニルマルトヘプタオシド（特開昭５４−５１８
９２号公報）、２，４−ジクロロフェニルマルトペンタ
オシド（特開昭５６−３５９９８号公報）などが利用さ
れている。こらの基質を用いると、アグリコンが遊離
し、遊離したアグリコン、例えばｐ−ニトロフェノール
を光学的に測定することにより、α−アミラーゼの活性
を容易に測定することができる。
上記方法においても、α−グルコシダーゼがわずかでは
あるが基質に作用するため、ブランク値が上昇する欠点
がある。α−グルコシダーゼの基質分解作用のため、前
記グルコースを測定する方法と同様にα−グルコシダー
ゼと基質とを一液化することは難しい。
あるが基質に作用するため、ブランク値が上昇する欠点
がある。α−グルコシダーゼの基質分解作用のため、前
記グルコースを測定する方法と同様にα−グルコシダー
ゼと基質とを一液化することは難しい。
このような欠点を解消するため、マルトオリゴ糖の非還
元性末端のグルコースの６位のヒドロキシル基が修飾さ
れたタイプの基質を用いる方法が提案されている。例え
ば特開昭６０−２３７９９８号公報には非還元性末端の
グルコースの６位のＯＨ基を、例えばハロゲン原子、−
ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＯＳＯ２Ｒ、−ＮＨＲ（Ｒはアル
キル基、フェニル基、ピリジル基など）で置換し、還元
性末端のグルコースに置換または未置換のフェニル基が
アグリコンとして結合したマルトオリゴシドが基質とし
て開示されている。非還元性末端グルコースの６位のＯ
Ｈ基が置換されているとα−グルコシダーゼによる基質
の分解が起こらない。
元性末端のグルコースの６位のヒドロキシル基が修飾さ
れたタイプの基質を用いる方法が提案されている。例え
ば特開昭６０−２３７９９８号公報には非還元性末端の
グルコースの６位のＯＨ基を、例えばハロゲン原子、−
ＯＲ、−ＯＣＯＲ、−ＯＳＯ２Ｒ、−ＮＨＲ（Ｒはアル
キル基、フェニル基、ピリジル基など）で置換し、還元
性末端のグルコースに置換または未置換のフェニル基が
アグリコンとして結合したマルトオリゴシドが基質とし
て開示されている。非還元性末端グルコースの６位のＯ
Ｈ基が置換されているとα−グルコシダーゼによる基質
の分解が起こらない。
しかし、このように６位のみに置換基が導入された基質
は、合成が困難であり、収率も悪いという欠点がある。
は、合成が困難であり、収率も悪いという欠点がある。
また特開昭６０−５４３９５号公報には非還元性末端の
グルコースの４位および６位のＯＨ基をアルキル基、ア
ルコイル基またはフェニル基で置換し、還元性末端のグ
ルコースにアグリコンを結合させたマルトオリゴシドを
基質として用いることが開示されている。非還元性末端
グルコースの４位および６位のＯＨ基が置換されている
とα−グルコシダーゼによる基質の分解が生じ難い。し
かし、このような基質は２つのＯＨ基が置換されている
ため、水溶性が悪く高濃度溶液の調製が不可能であり、
α−アミラーゼ活性測定に十分な濃度を溶解することが
できないという欠点がある。
グルコースの４位および６位のＯＨ基をアルキル基、ア
ルコイル基またはフェニル基で置換し、還元性末端のグ
ルコースにアグリコンを結合させたマルトオリゴシドを
基質として用いることが開示されている。非還元性末端
グルコースの４位および６位のＯＨ基が置換されている
とα−グルコシダーゼによる基質の分解が生じ難い。し
かし、このような基質は２つのＯＨ基が置換されている
ため、水溶性が悪く高濃度溶液の調製が不可能であり、
α−アミラーゼ活性測定に十分な濃度を溶解することが
できないという欠点がある。
本発明は上記従来のα−アミラーゼ活性測定基質の欠
点、従来のα−アミラーゼ活性測定試薬の欠点などを解
消しようとするものであり、その目的とするところは、
基質と追随酵素の一液化条件において、α−グルコシダ
ーゼなどの追随酵素の作用を受けず、合成が容易であ
り、かつ水溶性に優れた基質としての新規マルトオリゴ
糖誘導体を提供することであり、また当該新規マルトオ
リゴ糖誘導体を基質として用いて体液中のα−アミラー
ゼ活性を精度よく簡単な操作で測定する試薬を提供する
ことにある。
点、従来のα−アミラーゼ活性測定試薬の欠点などを解
消しようとするものであり、その目的とするところは、
基質と追随酵素の一液化条件において、α−グルコシダ
ーゼなどの追随酵素の作用を受けず、合成が容易であ
り、かつ水溶性に優れた基質としての新規マルトオリゴ
糖誘導体を提供することであり、また当該新規マルトオ
リゴ糖誘導体を基質として用いて体液中のα−アミラー
ゼ活性を精度よく簡単な操作で測定する試薬を提供する
ことにある。
本発明は、次のりである。
(1) 一般式： （式中、Ｒ１、Ｒ２の少なくとも一方は次式で表される
基： Ｒ３−ＣＯ−Ｒ４ を示し、残りは水素原子、炭素数１〜６のアルキル基ま
たはフェニル基を示す。ここでＲ３は炭素数１〜５のア
ルキル基を示し、Ｒ４は炭素数１〜５のアルキレン基を
示す。Ｒ５は置換または未置換のフェニル基を示す。ｎ
は１〜８の整数を示す。）で表わされるマルトオリゴ糖
誘導体〔以下、マルトオリゴ糖誘導体（Ｉ）という〕。
基： Ｒ３−ＣＯ−Ｒ４ を示し、残りは水素原子、炭素数１〜６のアルキル基ま
たはフェニル基を示す。ここでＲ３は炭素数１〜５のア
ルキル基を示し、Ｒ４は炭素数１〜５のアルキレン基を
示す。Ｒ５は置換または未置換のフェニル基を示す。ｎ
は１〜８の整数を示す。）で表わされるマルトオリゴ糖
誘導体〔以下、マルトオリゴ糖誘導体（Ｉ）という〕。
(2) マルトオリゴ糖誘導体（Ｉ）を含有することを特
徴とするα−アミラーゼ活性測定用試薬。
徴とするα−アミラーゼ活性測定用試薬。
本発明に用いる基質としてのマルトオリゴ糖誘導体
（Ｉ）の骨格となるマルトオリゴ糖は３〜１０個の糖
〔式（Ｉ）のｎ＝１〜８に相当〕から形成される。マル
トオリゴ糖としては、マルトトリオース、マルトテトラ
オース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マ
ルトヘプタオースなどがある。特にマルトテトラオー
ス、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルト
ヘプタオースが好適である。
（Ｉ）の骨格となるマルトオリゴ糖は３〜１０個の糖
〔式（Ｉ）のｎ＝１〜８に相当〕から形成される。マル
トオリゴ糖としては、マルトトリオース、マルトテトラ
オース、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マ
ルトヘプタオースなどがある。特にマルトテトラオー
ス、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルト
ヘプタオースが好適である。
マルトオリゴ糖の非還元性末端グルコースの置換基であ
るＲ１およびＲ２は同一の基であっても異なる基であっ
てもよい。
るＲ１およびＲ２は同一の基であっても異なる基であっ
てもよい。
Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方は次式で表される基： Ｒ３−ＣＯ−Ｒ４ を示し、残された基は水素原子または炭素数１〜６のア
ルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプ
ロピル、ブチル、第３級ブチル、ペンチル、ヘキシルな
ど）あるいはフェニル基を示す。Ｒ５は置換または未置
換のフェニル基を示す。ｎは１〜８である。Ｒ３は炭素
数１〜５のアルキル基（たとえば、メチル、エチル、プ
ロピル、イソプロピル、ブチル、第３級ブチル、ペンチ
ルなど）を示し、Ｒ４は炭素数１〜５のアルキレン基
（たとえば、メチレン、エチレン、トリメチレン、プロ
ピレン、ブチレン、テトラメチレン、ペンタメチレンな
ど）を示す。Ｒ３−ＣＯ−Ｒ４で示される基としては、
たとえば２−ケトプロピル、２−ケトブチル、３−ケト
ブチル、２−ケトペンチル、３−ケトペンチル、４−ケ
トペンチルなどが例示される。
ルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプ
ロピル、ブチル、第３級ブチル、ペンチル、ヘキシルな
ど）あるいはフェニル基を示す。Ｒ５は置換または未置
換のフェニル基を示す。ｎは１〜８である。Ｒ３は炭素
数１〜５のアルキル基（たとえば、メチル、エチル、プ
ロピル、イソプロピル、ブチル、第３級ブチル、ペンチ
ルなど）を示し、Ｒ４は炭素数１〜５のアルキレン基
（たとえば、メチレン、エチレン、トリメチレン、プロ
ピレン、ブチレン、テトラメチレン、ペンタメチレンな
ど）を示す。Ｒ３−ＣＯ−Ｒ４で示される基としては、
たとえば２−ケトプロピル、２−ケトブチル、３−ケト
ブチル、２−ケトペンチル、３−ケトペンチル、４−ケ
トペンチルなどが例示される。
修飾マルトオリゴシドのアグリコンに相当するＲ５は置
換または未置換のフェニル基である。Ｒ５は還元性末端
のグルコースの１位のＯＨ基にα型で結合していてもよ
く、β型で結合していてもよい。置換フェニル基とは、
ハロゲン原子、ヒドロキシ基、炭素原子数１〜６のアル
キル基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、ニト
ロ基などを置換基として有するフェニル基、即ち、フェ
ノール残基である。このような基を形成しうる置換フェ
ノール類としては、たとえばクロロフェノール、ジクロ
ロフェノール、ヒドロキシフェノール、アルキルフェノ
ール、アルコキシフェノール、ヒドロキシ安息香酸、ニ
トロフェノール、ハロゲン化ニトロフェノール、アルキ
ル化ニトロフェノール、アルコキシ化ニトロフェノー
ル、ニトロ化ヒドロキシ安息香酸、ジニトロフェノール
などが挙げられる。特に少なくとも１個のニトロ基を有
するフェノール類、たとえば４−ニトロフェノール、２
−クロロ−４−ニトロフェノール、２，６−ジクロロ−
４−ニトロフェノール、２−フルオロ−４−ニトロフェ
ノール、２，６−ジフルオロ−４−ニトロフェノール、
２−ブロモ−４−ニトロフェノール、２，６−ジブロモ
−４−ニトロフェノール、２−ニトロフェノール、２−
ヒドロキシ−４−ニトロフェノール、３−ヒドロキシ−
４−ニトロフェノールなどが好適である。
換または未置換のフェニル基である。Ｒ５は還元性末端
のグルコースの１位のＯＨ基にα型で結合していてもよ
く、β型で結合していてもよい。置換フェニル基とは、
ハロゲン原子、ヒドロキシ基、炭素原子数１〜６のアル
キル基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、ニト
ロ基などを置換基として有するフェニル基、即ち、フェ
ノール残基である。このような基を形成しうる置換フェ
ノール類としては、たとえばクロロフェノール、ジクロ
ロフェノール、ヒドロキシフェノール、アルキルフェノ
ール、アルコキシフェノール、ヒドロキシ安息香酸、ニ
トロフェノール、ハロゲン化ニトロフェノール、アルキ
ル化ニトロフェノール、アルコキシ化ニトロフェノー
ル、ニトロ化ヒドロキシ安息香酸、ジニトロフェノール
などが挙げられる。特に少なくとも１個のニトロ基を有
するフェノール類、たとえば４−ニトロフェノール、２
−クロロ−４−ニトロフェノール、２，６−ジクロロ−
４−ニトロフェノール、２−フルオロ−４−ニトロフェ
ノール、２，６−ジフルオロ−４−ニトロフェノール、
２−ブロモ−４−ニトロフェノール、２，６−ジブロモ
−４−ニトロフェノール、２−ニトロフェノール、２−
ヒドロキシ−４−ニトロフェノール、３−ヒドロキシ−
４−ニトロフェノールなどが好適である。
本発明の基質であるマルトオリゴ糖誘導体（Ｉ）は新規
な化合物であり、下式（II）で表わされる化合物（II）
と下式（III−１）で表されるカルボニル化合物（III−
１）または当該カルボニル化合物のアセタールである下
式（III−２）で表されるアセタール化合物（III−２）
とを反応させることによって製造することができる。
な化合物であり、下式（II）で表わされる化合物（II）
と下式（III−１）で表されるカルボニル化合物（III−
１）または当該カルボニル化合物のアセタールである下
式（III−２）で表されるアセタール化合物（III−２）
とを反応させることによって製造することができる。
（式中、Ｒ５およびｎは前記と同意義。） （上記両式中、Ｒ１およびＲ２は前記と同意義であり、
Ｒ６およびＲ７は同一または異なって低級アルキル基を
表す。） 式（III−１）および（III−２）に関して、それぞれＲ
６およびＲ７で表される低級アルキル基は好ましくは炭
素数１〜１０であり、たとえばメチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第３級ブチ
ル、ペンチル、イソペンチル、イソヘキシルなどが例示
される。
Ｒ６およびＲ７は同一または異なって低級アルキル基を
表す。） 式（III−１）および（III−２）に関して、それぞれＲ
６およびＲ７で表される低級アルキル基は好ましくは炭
素数１〜１０であり、たとえばメチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第３級ブチ
ル、ペンチル、イソペンチル、イソヘキシルなどが例示
される。
上記反応は一般に非反応性溶媒中で行われ該非反応性溶
媒としては、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキ
サイド、エチレングリコールジメチルエーテル等が例示
され、必要により上記化合物（III−１）、（III−２）
自体を溶媒として用いる場合もある。反応温度は特に制
限されないが、通常０℃から溶媒の沸点までの範囲で行
うことが推奨され、更に好ましい範囲は４０〜１００℃
である。更に減圧下還流加熱したり、あるいは副生アル
コール類を蒸発除去しながら反応させるのも効果的であ
る。反応の促進のために触媒、たとえば少量の純硫酸、
塩酸ガス、ｐ−トルエンスルホン酸あるいは無水塩化亜
鉛などが用いられることもある。
媒としては、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキ
サイド、エチレングリコールジメチルエーテル等が例示
され、必要により上記化合物（III−１）、（III−２）
自体を溶媒として用いる場合もある。反応温度は特に制
限されないが、通常０℃から溶媒の沸点までの範囲で行
うことが推奨され、更に好ましい範囲は４０〜１００℃
である。更に減圧下還流加熱したり、あるいは副生アル
コール類を蒸発除去しながら反応させるのも効果的であ
る。反応の促進のために触媒、たとえば少量の純硫酸、
塩酸ガス、ｐ−トルエンスルホン酸あるいは無水塩化亜
鉛などが用いられることもある。
前記製造方法によれば、マルトオリゴ糖の非還元性末端
グルコース残基に環状アセタール保護基を選択的に結合
させることが可能である。長谷川らの糖環状アセタール
に関する研究報告〔Carbohyd.Res29 209(1973)〕および
その他の研究報告によれば単糖類のグルコースの４位お
よび６位のＯＨ基に対し、選択的に環状アセタールを結
合させる方法が発表されている。しかしより高分子量の
核置換フェニルマルトオリゴサイドについて非還元性末
端グルコース残基の４位または６位のＯＨ基に環状アセ
タールを選択的に結合させる方法は全く新規な発明であ
ってその有用性は大きい。
グルコース残基に環状アセタール保護基を選択的に結合
させることが可能である。長谷川らの糖環状アセタール
に関する研究報告〔Carbohyd.Res29 209(1973)〕および
その他の研究報告によれば単糖類のグルコースの４位お
よび６位のＯＨ基に対し、選択的に環状アセタールを結
合させる方法が発表されている。しかしより高分子量の
核置換フェニルマルトオリゴサイドについて非還元性末
端グルコース残基の４位または６位のＯＨ基に環状アセ
タールを選択的に結合させる方法は全く新規な発明であ
ってその有用性は大きい。
原料物質である化合物（II）、即ち核置換フェニルマル
トオリゴシドは、核置換芳香族化合物とマルトオリゴ糖
を通常の方法に従って反応させることによって合成する
ことが出来る。化学的にはマルトオリゴ糖をアセチル化
し、このアセチル化マルトオリゴ糖と核置換芳香族化合
物を結合させた後、脱アセチル化することにより合成で
きる（実験化学講座第２４巻第３０４頁、１９５８年参
照）。生化学的にはサイクロデキストリン、グリコシル
トランスフェラーゼル置換芳香族化合物と可溶性デンプ
ン（またはα−サイクロデキストリンまたは白色デキス
トリン）とを反応させて、核置換フェニルマルトオリゴ
シドを合成することができる。
トオリゴシドは、核置換芳香族化合物とマルトオリゴ糖
を通常の方法に従って反応させることによって合成する
ことが出来る。化学的にはマルトオリゴ糖をアセチル化
し、このアセチル化マルトオリゴ糖と核置換芳香族化合
物を結合させた後、脱アセチル化することにより合成で
きる（実験化学講座第２４巻第３０４頁、１９５８年参
照）。生化学的にはサイクロデキストリン、グリコシル
トランスフェラーゼル置換芳香族化合物と可溶性デンプ
ン（またはα−サイクロデキストリンまたは白色デキス
トリン）とを反応させて、核置換フェニルマルトオリゴ
シドを合成することができる。
例えば、メチルチオエチリデン２−クロロ−４−ニトロ
フェニル−β−マルトペンタオシドは少量の酸性触媒の
存在下２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトペ
ンタオシドにメチルチオアセトアルデヒドジメチルアセ
タールを作用させることによって得られる。
フェニル−β−マルトペンタオシドは少量の酸性触媒の
存在下２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトペ
ンタオシドにメチルチオアセトアルデヒドジメチルアセ
タールを作用させることによって得られる。
本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬は、上記マルト
オリゴ糖誘導体（Ｉ）を基質として含有するものであ
り、通常さらにα−グルコシダーゼ、グルコアミラーゼ
およびβ−グルコシダーゼを適宜組み合わせた酵素系
（追随酵素性）、および必要に応じてその他の添加剤を
含有するものである。
オリゴ糖誘導体（Ｉ）を基質として含有するものであ
り、通常さらにα−グルコシダーゼ、グルコアミラーゼ
およびβ−グルコシダーゼを適宜組み合わせた酵素系
（追随酵素性）、および必要に応じてその他の添加剤を
含有するものである。
本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬に用いられるα
−グルコシダーゼの起源は、特に限定されない。動物、
植物、微生物などから得られるα−グルコシダーゼが利
用され得る。特に、酵母起源のα−グルコシダーゼは、
マルトトリオシド以下のグリコシドによく作用し、かつ
マルトテトラオシド以上のグルコシドには作用しにくい
点、およびアグリコンの特異性が広い点から好適に使用
されうる。
−グルコシダーゼの起源は、特に限定されない。動物、
植物、微生物などから得られるα−グルコシダーゼが利
用され得る。特に、酵母起源のα−グルコシダーゼは、
マルトトリオシド以下のグリコシドによく作用し、かつ
マルトテトラオシド以上のグルコシドには作用しにくい
点、およびアグリコンの特異性が広い点から好適に使用
されうる。
本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬に用いられるβ
−グルコシダーゼおよびグルコアミラーゼの起源も特に
限定されない。たとえば、アーモンドから得られるβ−
グルコシダーゼやリゾプスデレマーから得られるグルコ
アミラーゼが好適に使用されうる。
−グルコシダーゼおよびグルコアミラーゼの起源も特に
限定されない。たとえば、アーモンドから得られるβ−
グルコシダーゼやリゾプスデレマーから得られるグルコ
アミラーゼが好適に使用されうる。
本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬を使用するα−
アミラーゼ活性の測定は、たとえば次のように行われ
る。即ち、アルキル活性測定用試薬にα−アミラーゼを
含む試料を作用させる。たとえば、アグリコンがα型に
結合した基質（α型基質）を用いる場合には、追随酵素
系としてはα−グルコシダーゼおよび／またはグルコア
ミラーゼが使用される。アグリコンがβ型に結合した基
質（β型期質）を用いる場合には、追随酵素系として
は、α−グルコシダーゼおよび／またはグルコシダーゼ
およびβ−グルコシダーゼが使用される。
アミラーゼ活性の測定は、たとえば次のように行われ
る。即ち、アルキル活性測定用試薬にα−アミラーゼを
含む試料を作用させる。たとえば、アグリコンがα型に
結合した基質（α型基質）を用いる場合には、追随酵素
系としてはα−グルコシダーゼおよび／またはグルコア
ミラーゼが使用される。アグリコンがβ型に結合した基
質（β型期質）を用いる場合には、追随酵素系として
は、α−グルコシダーゼおよび／またはグルコシダーゼ
およびβ−グルコシダーゼが使用される。
本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬を使用する測定
方法における基質分解の反応式を３−ケトブチリデン
２−クロロ−４−ニトリフェニル−β−マルトペンタオ
シドを例に挙げて説明する。
方法における基質分解の反応式を３−ケトブチリデン
２−クロロ−４−ニトリフェニル−β−マルトペンタオ
シドを例に挙げて説明する。
(1)３−ケトブチリデン ２−クロロ−４−ニトロフェ
ニル−β−マルトペンタオシドを基質とする場合 上記反応にて遊離したフェノール系化合物（上記例にお
いては２−クロロ−４−ニトロフェノール）を適当な手
段により測定することにより、α−アミラーゼの活性を
測定することができる。遊離するフェノール系化合物が
基質とは異なるスペクトル吸収を示す場合には、反応混
合物のスペクトルを直接測定する。基質から遊離したフ
ェノール系化合物が基質とほぼ同じスペクトル吸収を示
す場合には、該フェノール化合物を呈色試薬、例えば４
−アミノアンチピリンなどの色原体と過酸化水素とをペ
ルオキシダーゼの存在下に酸化縮合させ、その発色強度
を測定する。
ニル−β−マルトペンタオシドを基質とする場合 上記反応にて遊離したフェノール系化合物（上記例にお
いては２−クロロ−４−ニトロフェノール）を適当な手
段により測定することにより、α−アミラーゼの活性を
測定することができる。遊離するフェノール系化合物が
基質とは異なるスペクトル吸収を示す場合には、反応混
合物のスペクトルを直接測定する。基質から遊離したフ
ェノール系化合物が基質とほぼ同じスペクトル吸収を示
す場合には、該フェノール化合物を呈色試薬、例えば４
−アミノアンチピリンなどの色原体と過酸化水素とをペ
ルオキシダーゼの存在下に酸化縮合させ、その発色強度
を測定する。
フェノール系化合物の測定方法としては、α−アミラー
ゼの反応を連続的に追跡するレート法および一定時間反
応させた後、反応を止めて測定するエンドポイント法の
いずれもが使用されうる。
ゼの反応を連続的に追跡するレート法および一定時間反
応させた後、反応を止めて測定するエンドポイント法の
いずれもが使用されうる。
本発明方法における酵素反応時には、グルコアミラーゼ
はα−グルコシダーゼとほぼ同等の働きを有する。ただ
し、α−グルコシダーゼがマルトトリオシド以下の低分
子グリコシドにはよく作用するが、マルトテトラオシド
以上のグルコシドには作用しにくいのに対して、グルコ
アミラーゼはマルトテトラオシド以上のグルコシドにも
作用する。たとえば、基質としてマルトヘプタオシド以
上の高分子グルコシドを用いると、α−アミラーゼの作
用によりマルトテトラオシド以上のグルコシドが生成す
ることがある。このようなマルトテトラオシド以上のグ
ルコシドは、α−グルコシダーゼでは分解されにくい
が、グルコアミラーゼを用いるとグルコース単位にまで
容易に分解される。そのため測定系の感度が上昇する。
α−グルコシダーゼおよびグルコアミラーゼを共存させ
た追随酵素系好適に利用される。
はα−グルコシダーゼとほぼ同等の働きを有する。ただ
し、α−グルコシダーゼがマルトトリオシド以下の低分
子グリコシドにはよく作用するが、マルトテトラオシド
以上のグルコシドには作用しにくいのに対して、グルコ
アミラーゼはマルトテトラオシド以上のグルコシドにも
作用する。たとえば、基質としてマルトヘプタオシド以
上の高分子グルコシドを用いると、α−アミラーゼの作
用によりマルトテトラオシド以上のグルコシドが生成す
ることがある。このようなマルトテトラオシド以上のグ
ルコシドは、α−グルコシダーゼでは分解されにくい
が、グルコアミラーゼを用いるとグルコース単位にまで
容易に分解される。そのため測定系の感度が上昇する。
α−グルコシダーゼおよびグルコアミラーゼを共存させ
た追随酵素系好適に利用される。
本発明の試薬および測定方法によれば非還元性末端グル
コースの４位および６位のＯＨ基が修飾されたα−又は
β−マルトオリゴシド、即ちマルトオリゴ糖誘導体を基
質として利用するため、α−グルコシダーゼやグルコア
ミラーゼなどの追随酵素系と基質を一液化した試薬を調
製、保存してもこれらの酵素が基質を分解することがほ
とんどない。そのため、試薬ブランク値の上昇が抑制さ
れ、精度よくα−アミラーゼ活性を測定することができ
る。
コースの４位および６位のＯＨ基が修飾されたα−又は
β−マルトオリゴシド、即ちマルトオリゴ糖誘導体を基
質として利用するため、α−グルコシダーゼやグルコア
ミラーゼなどの追随酵素系と基質を一液化した試薬を調
製、保存してもこれらの酵素が基質を分解することがほ
とんどない。そのため、試薬ブランク値の上昇が抑制さ
れ、精度よくα−アミラーゼ活性を測定することができ
る。
本発明の基質であるマルトオリゴ糖誘導体（Ｉ）は、式
（Ｉ）中のＲ１およびＲ２が水溶性基であり、水に対す
る溶解性が優れており、また合成が容易であるため安価
に提供され得る。
（Ｉ）中のＲ１およびＲ２が水溶性基であり、水に対す
る溶解性が優れており、また合成が容易であるため安価
に提供され得る。
さらに、本発明試薬は自動分析機を用いての連続測定も
可能であり、簡便かつ安価にα−アミラーゼ活性の測定
がなされれうる。
可能であり、簡便かつ安価にα−アミラーゼ活性の測定
がなされれうる。
以下に本発明を実施例で説明する。
実施例１−１（合成例） ３−ケトブチリデン ２−クロロ−４−ニトロフェニル
−β−マルトペンタオシドの製造例： ３００mlのフラスコに２−クロロ−４−ニトロフェニル
−β−マルトペンタオシド１０ｇ、１，３−ジメチル−
２−イミダゾリジノン１５０ml、ｐ−トルエンスルホン
酸１００mg、４，４−ジメトキシ−２−ブタノン2.7ml
を均一な溶液とし室温で２４時間攪拌した。弱塩性イオ
ン交換樹脂２２ｇを加えて２時間攪拌後濾過し濾液を３
００mlナス型フラスコに移しロータリーエバポレータで
減圧下（２mmHg）外温を８５℃に保ちながらすばやく濃
縮を行った。
−β−マルトペンタオシドの製造例： ３００mlのフラスコに２−クロロ−４−ニトロフェニル
−β−マルトペンタオシド１０ｇ、１，３−ジメチル−
２−イミダゾリジノン１５０ml、ｐ−トルエンスルホン
酸１００mg、４，４−ジメトキシ−２−ブタノン2.7ml
を均一な溶液とし室温で２４時間攪拌した。弱塩性イオ
ン交換樹脂２２ｇを加えて２時間攪拌後濾過し濾液を３
００mlナス型フラスコに移しロータリーエバポレータで
減圧下（２mmHg）外温を８５℃に保ちながらすばやく濃
縮を行った。
残査13.9ｇを蒸留水５６mlに溶解し、蒸留水に分散させ
たセファデックスＧ−２５ゲル４８を充填した内径２
０cmのカラムに負荷し、蒸留水を溶離液としてゲル濾過
を行い３−ケトブチリデン−２−クロロ−４−ニトロフ
ェニル−β−マルトペンタオシドのリッチなフラクショ
ンを集めて濃縮脱水を行い淡黄結晶3.8ｇを得た。この
結晶をメタノール１０mlに溶解し、冷却下ジエチルエー
テル４０mlを加え結晶を晶出させ濾過乾燥後、３−ケト
ブチリデン−２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マ
ルトペンタオシドの白色結晶を3.0ｇを得た（ＨＰＬＣ
分析により純度９９％）。
たセファデックスＧ−２５ゲル４８を充填した内径２
０cmのカラムに負荷し、蒸留水を溶離液としてゲル濾過
を行い３−ケトブチリデン−２−クロロ−４−ニトロフ
ェニル−β−マルトペンタオシドのリッチなフラクショ
ンを集めて濃縮脱水を行い淡黄結晶3.8ｇを得た。この
結晶をメタノール１０mlに溶解し、冷却下ジエチルエー
テル４０mlを加え結晶を晶出させ濾過乾燥後、３−ケト
ブチリデン−２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マ
ルトペンタオシドの白色結晶を3.0ｇを得た（ＨＰＬＣ
分析により純度９９％）。
融点１８８〜１９２℃ ＮＭＲ；δ値（分裂型、相対プロトン数） 2.2（１重線，３） 2.9（２重線，２） 3.2〜〜4.2（多重線，３１） 4.7（１重線，１４） ５〜5.6（多重線，５） 7.3（２重線，Ｊ＝９Hz，１） 8.15（ダブル２重線，Ｊ＝３Hz，Ｊ＝９Hz，１） 8.21（２重線，Ｊ＝３Hz，１） δ2.2（３Ｈ）のシングルピークおよびδ2.9（２Ｈ）の
ダブレットピークはそれぞれＣＨ３ＣＯ−基および−Ｃ
ＯＣＨ２−基に基づく吸収であり３−ケトブチリデン−
２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトペンタオ
シド１分子中に１個存在する。
ダブレットピークはそれぞれＣＨ３ＣＯ−基および−Ｃ
ＯＣＨ２−基に基づく吸収であり３−ケトブチリデン−
２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトペンタオ
シド１分子中に１個存在する。
実施例１−２〜１−８（合成例） 実施例１に準じて次の化合物が製造される。
・２−ケトブチリデン ２−クロロ−４−ニトロフェニ
ル−β−マルトペンタオシド ・２−ケトプロピリデン ２−クロロ−４−ニトロフェ
ニル−β−マルトペンタオシド ・４−ケトペンチリデン ２−クロロ−４−ニトロフェ
ニル−β−マルトペンタオシド ・メチルスルフィニルエチリデン ２−クロロ−４−ニ
トロフェニル−β−マルトペンタオシド ・エチルスルフィニルエチリデン ２−クロロ−４−ニ
トロフェニル−β−マルトペンタオシド ・メタンスルホニルエチリデン ２−クロロ−４−ニト
ロフェニル−β−マルトペンタオシド ・エタンスルホニルエチリデン ２−クロロ−４−ニト
ロフェニル−β−マルトペンタオシド 実施例２・比較例１（試薬・測定方法） 下記組成の試薬を調製した。
ル−β−マルトペンタオシド ・２−ケトプロピリデン ２−クロロ−４−ニトロフェ
ニル−β−マルトペンタオシド ・４−ケトペンチリデン ２−クロロ−４−ニトロフェ
ニル−β−マルトペンタオシド ・メチルスルフィニルエチリデン ２−クロロ−４−ニ
トロフェニル−β−マルトペンタオシド ・エチルスルフィニルエチリデン ２−クロロ−４−ニ
トロフェニル−β−マルトペンタオシド ・メタンスルホニルエチリデン ２−クロロ−４−ニト
ロフェニル−β−マルトペンタオシド ・エタンスルホニルエチリデン ２−クロロ−４−ニト
ロフェニル−β−マルトペンタオシド 実施例２・比較例１（試薬・測定方法） 下記組成の試薬を調製した。
試薬組成： ５０ｍＭグッドバッファー（pH7.0） α−グルコシダーゼ ８０Ｕ／ml β−グルコシダーゼ １０Ｕ／ml 基質（表１参照） ２ｍＭ 試薬調製直後、１０分後、２０分後および３０分後にこ
の試薬の４００ｎｍにおける吸光度を測定した（試薬３
ml；３７℃）。吸光度の変化（ブランク値の経時変化）
を後記表１に示す。
の試薬の４００ｎｍにおける吸光度を測定した（試薬３
ml；３７℃）。吸光度の変化（ブランク値の経時変化）
を後記表１に示す。
表１から、本発明の非還元製末端が修飾された化合物を
基質として含有する試薬は、非還元製末端が修飾されて
いない化合物を基質として含有する試薬に比べてブラン
ク値が低く、その経時的な上昇の度合も極めて小さいこ
とがわかる。
基質として含有する試薬は、非還元製末端が修飾されて
いない化合物を基質として含有する試薬に比べてブラン
ク値が低く、その経時的な上昇の度合も極めて小さいこ
とがわかる。
実施例３−１（試薬・測定方法） 下記組成の試薬を調製した。
試薬組成： ５ｍＭグッドバッファー（pH7.0） α−グルコシダーゼ ８０Ｕ／ml β−グルコシダーゼ １０Ｕ／ml グルコアミラーゼ １０Ｕ／ml 基質（後記表１参照） ２ｍＭ この試薬を用い、実施例２と同様に吸光度の変化を測定
した。次に、上記試薬３mlを試料血清５０mlに添加し、
３７℃にて５〜６分間放置した後、４００ｎｍにおける
吸光度の変化を測定し、１分間あたりの吸光度の変化
（アミラーゼ活性の指標となる）を算出した。試薬ブラ
ンク値の経時変化および１分間あたりの吸光度の変化を
後記表２に示す。
した。次に、上記試薬３mlを試料血清５０mlに添加し、
３７℃にて５〜６分間放置した後、４００ｎｍにおける
吸光度の変化を測定し、１分間あたりの吸光度の変化
（アミラーゼ活性の指標となる）を算出した。試薬ブラ
ンク値の経時変化および１分間あたりの吸光度の変化を
後記表２に示す。
実施例３−２（試薬・測定方法） 下記組成の試薬を調製した。
試薬組成： ５０ｍＭグッドバッファー（pH7.0） α−グルコシダーゼ ８０Ｕ／ml β−グルコシダーゼ １０Ｕ／ml 基質（後記表２参照） ２ｍＭ この試薬を用い、実施例３−１と同様に操作を繰り返し
た。その結果を後記表２に示す。
た。その結果を後記表２に示す。
比較例２ 下記組成の試薬を調製した。
試薬組成： ５０ｍＭグッドバッファー（pH7.0） α−グルコシダーゼ ８０Ｕ／ml β−グルコシダーゼ １０Ｕ／ml グルコアミラーゼ １０Ｕ／ml 基質（後記２参照） ２ｍＭ この試薬を用い、実施例３−１と同様に操作を繰り返し
た。その結果を後記表２に示す。
た。その結果を後記表２に示す。
後記表２から、本発明試薬（実施例３−１，３−２）は
非還元性末端が修飾されていない化合物を基質として含
有する試薬（比較例２）に比べてブランク値が低く、そ
の経時的上昇の度合も極めて小さい。実施例３−１にお
いてはグルコアミラーゼが試薬中に含有されているた
め、実施例３−２に比べて測定感度が高くなっているの
が確認される。
非還元性末端が修飾されていない化合物を基質として含
有する試薬（比較例２）に比べてブランク値が低く、そ
の経時的上昇の度合も極めて小さい。実施例３−１にお
いてはグルコアミラーゼが試薬中に含有されているた
め、実施例３−２に比べて測定感度が高くなっているの
が確認される。
比較例３ 実施例３−２における基質を下記表３に記載される基質
に代えて使用することを試みたが、該基質は実施例３−
２における試薬（実施例３−２の基質を除く）に溶解し
なかった。
に代えて使用することを試みたが、該基質は実施例３−
２における試薬（実施例３−２の基質を除く）に溶解し
なかった。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 林 勇藏 福井県敦賀市東洋町10番24号 東洋紡績株 式会社敦賀酵素工場内 (56)参考文献 特開 昭60−87297（ＪＰ，Ａ)
Claims (3)
- 【請求項１】一般式： （式中、Ｒ１、Ｒ２の少なくとも一方は次式で表わされ
る基： Ｒ３−ＣＯ−Ｒ４ を示し、残りは水素原子、炭素数１〜６のアルキル基ま
たはフェニル基を示す。ここでＲ３は炭素数１〜５のア
ルキル基を示し、Ｒ４は炭素数１〜５のアルキレン基を
示す。Ｒ５は置換または未置換のフェニル基を示す。ｎ
は１〜８の整数を示す。）で表わされるマルトオリゴ糖
誘導体。 - 【請求項２】一般式： （式中、Ｒ１、Ｒ２の少なくとも一方は次式で表わされ
る基： Ｒ３−ＣＯ−Ｒ４ を示し、残りは水素原子、炭素数１〜６のアルキル基ま
たはフェニル基を示す。ここでＲ３は炭素数１〜５のア
ルキル基を示し、Ｒ４は炭素数１〜５のアルキレン基を
示す。Ｒ５は置換または未置換のフェニル基を示す。ｎ
は１〜８の整数を示す。）で表わされるマルトオリゴ糖
誘導体を含有することを特徴とするα−アミラーゼ活性
測定用試薬。 - 【請求項３】α−グルコシダーゼおよび／またはグルコ
アミラーゼならびに必要によりβ−グルコシダーゼを含
有する特許請求の範囲第２項記載のα−アミラーゼ活性
測定用試薬。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62314379A JPH0631293B2 (ja) | 1987-12-11 | 1987-12-11 | マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬 |
| US07/279,105 US4987067A (en) | 1987-12-11 | 1988-12-02 | Maltooligosaccharide derivatives and reagents for determination of amylase activity |
| DE3889718T DE3889718T2 (de) | 1987-12-11 | 1988-12-09 | Maltooligosaccharid-Derivate und -Reagenzien für die Bestimmung von Amylase-Aktivität. |
| EP88120609A EP0319993B1 (en) | 1987-12-11 | 1988-12-09 | Maltooligosaccharide derivatives and reagents for determination of amylase activity |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62314379A JPH0631293B2 (ja) | 1987-12-11 | 1987-12-11 | マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01157996A JPH01157996A (ja) | 1989-06-21 |
| JPH0631293B2 true JPH0631293B2 (ja) | 1994-04-27 |
Family
ID=18052635
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62314379A Expired - Lifetime JPH0631293B2 (ja) | 1987-12-11 | 1987-12-11 | マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4987067A (ja) |
| EP (1) | EP0319993B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0631293B2 (ja) |
| DE (1) | DE3889718T2 (ja) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5043436A (en) * | 1986-11-20 | 1991-08-27 | Kurita Water Ind., Ltd. | Substrate for measurement of alpha-amylase activity |
| DE3929355A1 (de) * | 1989-09-04 | 1991-03-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung von pankreas-(alpha)-amylase |
| US5300634A (en) * | 1991-05-07 | 1994-04-05 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for producing maltooligosaccharide derivative |
| JP2770891B2 (ja) * | 1991-06-26 | 1998-07-02 | キッコーマン株式会社 | マルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα‐アミラーゼ活性の測定方法 |
| JP3075377B2 (ja) * | 1991-11-06 | 2000-08-14 | 東洋紡績株式会社 | α−アミラーゼ活性の測定法およびα−アミラーゼ活性測定用試薬 |
| JPH05294984A (ja) * | 1992-04-15 | 1993-11-09 | Wako Pure Chem Ind Ltd | マルトオリゴ糖誘導体の新規な製造方法 |
| FR2697842B1 (fr) * | 1992-11-12 | 1995-01-13 | Oreal | Monoesters de 4-hydroxy-phényl-beta-D-glucose, leur procédé de préparation et leurs utilisations dans les domaines cosmétique, pharmaceutique, bucco-dentaire et alimentaire. |
| JP3087891B2 (ja) | 1998-03-31 | 2000-09-11 | 東洋紡績株式会社 | 電解質測定用試薬組成物 |
| US6387646B1 (en) | 1998-12-11 | 2002-05-14 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Reagent compositions for measuring electrolyte |
| DE10118554A1 (de) * | 2001-04-14 | 2002-10-24 | Henkel Kgaa | Enzymabbauketten |
| US20150234139A1 (en) | 2012-05-02 | 2015-08-20 | Fujikura Ltd. | Round and small diameter optical cables with a ribbon-like optical fiber structure |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3328616A1 (de) * | 1983-08-08 | 1985-02-28 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Oligoglucosidderivate |
| JPS6087297A (ja) * | 1983-10-19 | 1985-05-16 | Toyobo Co Ltd | α，β−核置換フエニルマルトオリゴサイドの環状アセタ−ル誘導体，その製造方法並びに該基質を用いるアミラ−ゼ活性の測定方法 |
| US4649108A (en) * | 1984-07-26 | 1987-03-10 | Genzyme Corporation | Alpha amylase assay |
| EP0259521A1 (en) * | 1986-09-10 | 1988-03-16 | Akzo N.V. | Test reagent for amylase determination |
| JPH0779718B2 (ja) * | 1987-05-15 | 1995-08-30 | 東洋紡績株式会社 | α−アミラ−ゼの活性測定法 |
-
1987
- 1987-12-11 JP JP62314379A patent/JPH0631293B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-12-02 US US07/279,105 patent/US4987067A/en not_active Expired - Lifetime
- 1988-12-09 DE DE3889718T patent/DE3889718T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1988-12-09 EP EP88120609A patent/EP0319993B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3889718D1 (de) | 1994-06-30 |
| EP0319993A2 (en) | 1989-06-14 |
| JPH01157996A (ja) | 1989-06-21 |
| EP0319993A3 (en) | 1991-07-03 |
| US4987067A (en) | 1991-01-22 |
| DE3889718T2 (de) | 1994-09-29 |
| EP0319993B1 (en) | 1994-05-25 |
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