JPH01157996A - マルトオリゴ糖誘導体およびアミラーゼ活性測定用試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新規なマルトオリゴｔ１！誘導体および当該マ
ルトオリゴ＃Ｊ！誘導体を基質として用いるα−アミラ
ーゼの活性測定試薬に関する。

〔従来技術〕

膵液や尿などの体液に含有されるα−アミラーゼの活性
を測定することにより、各種疾患の診断が行われている
。α−アミラーゼの活性測定法には、例えばマルトオリ
ゴ糖（マルトテトラオース、マルトペンタオース、マル
トヘキサオースなど）を基質とする方法がある。この方
法では、α−アミラーゼ含有試料に該マルトオリゴ糖と
α−グルコシダーゼとを作用させて基質からグルコース
を遊離させ、グルコースの量を測定することにより、α
−アミラーゼの活性値を知る。

生成したグルコースは、例えばグルコースオキシダーゼ
／パーオキシダーゼ／色素系を利用する定徹法；へキラ
キナーゼ／ホスフォグルコムターゼ／グルコース−６−
ホスフェートデヒドロゲナーゼ／ＮＡＤＨ系を利用する
測定法などにより測定される。α−グルコシダーゼはマ
ルトペンタオースなどの四糖以上のオリゴ糖に作用しに
くくマルトースやマルトトリオースなどの三糖以下のオ
リゴ糖に良好に作用するため、上記基質を使用してグル
コースを測定することによりα−アミラーゼの活性を測
定することができる。しかし、α−グルコシダーゼはわ
ずかではあるが基質であるマルトペンタオースに作用す
るため、測定のブランク値が上昇し、その結果、測定値
の誤差が大きくなるという欠点がある。α−グルコシダ
ーゼの基質分解作用のため、α−グルコシダーゼと基質
とを一液化することは、試薬としての安定性が損なわれ
るため好ましくない。

マルトオリゴ糖の還元性末端にフェニル基、ナフチル基
、またはそれらの誘導体をアグリコンとして結合させた
基質を用いる方法も提案されている。例えば、基質とし
てｐ−ニトロフェニルマルトペンタオシド（特公昭５７
−５３０７９号公報）、ｐ−ニトロフェニルマルトへキ
サオシド（特公昭５７−５３０７９号公報）、ｐ−二ト
ロフェニルマルトへブタオシド（特開昭５４−５１８９
２号公報）、２．４−ジクロロフェニルマルトペンタオ
シド（特開昭５６−３５９９８号公報）などが利用され
ている。これらの基質を用いると、アグリコンが遊離し
、遊離したアグリコン、例えばｐ−ニトロフェノールを
光学的に測定することにより、α−アミラーゼの活性を
容易に測定することができる。

上記方法においても、α−グルコシダーゼがわずかでは
あるが基質に作用するため、ブランク値が上昇する欠点
がある。α−グルコシダーゼの基質分解作用のため、前
記グルコースを測定する方法と同様にα−グルコシダー
ゼと基質とを一液化することは難しい。

このような欠点を解消するため、マルトオリゴＩＪＭの
非還元性末端のグルコースの６位のヒドロキシル基が修
飾されたタイプの基質を用いる方法が提案されている。

例えば特開昭６０−２３７９９８号公報には非還元性末
端のグルコースの６位のＯＨ基を、例えばハロゲン原子
、−ＯＲ，−０ＣＯＲ１−ＯＳＯ□Ｒ１−ＮＨＲ（Ｒは
アルキル基、フェニル基、ピリジル基など）で置換し、
還元性末端のグルコースに置換または未置換のフェニル
基がアグリコンとして結合したマルトオリゴシトが基質
として開示されている。非還元性末端グルコースの６位
のＯＨ基が置換されているとα−グルコシダーゼによる
基質の分解が起こらない。

しかし、このように６位のみに置換基が導入された基質
は、合成が困難であり、収率も悪いという欠点がある。

また特開昭６０−５４３９５号公報には非還元性末端の
グルコースの４位および６位のＯＨ基をアルキル基、ア
ルコイル基またはフェニル基で置換し、還元性末端のグ
ルコースにアグリコンを結合させたマルトオリゴシトを
基質として用いることが開示されている。非還元性末端
グルコースの４位および６位のＯＨ基が置換されている
とα−グルコシダーゼによる基質の分解が生じ難い。し
かし、このような基質は２つのＯＨ基が置換されている
ため、水溶性が悪く高濃度溶液の調製が不可能であり、
α−アミラーゼ活性測定に十分な濃度を溶解することが
できないという欠点がある。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は上記従来のα−アミラーゼ活性測定基質の欠点
、従来のα−アミラーゼ活性測定試薬の欠点などを解消
しようとするものであり、その目的とすることろは、基
質と追随酵素の一液化条件において、α−グルコシダー
ゼなどの追随酵素の作用を受けず、合成が容易であり、
かつ水溶性に優れた基質としての新規マルトオリゴ糖誘
導体を提供することであり、また当該新規マルトオリゴ
糖誘導体を基質として用いて体液中のα−アミラーゼ活
性を精度よく簡単な操作で測定する試薬を提供すること
にある。

〔問題点を解決するための手段および作用〕本発明は、
次の通りである。

（１）一般式： （式中、Ｒ’　、Ｒ”の少なくとも一方は次式で表され
る基： Ｒ３−３（０）、−Ｒ’または Ｒ３−Ｃｏ−Ｒ’ を示し、残りは水素原子、炭素数１〜６のアルキル基ま
たはフェニル基を示す。ここでＲ３は炭素数１〜５のア
ルキル基を示し、Ｒ４は炭素数１〜５のアルキレン基を
示し、ｍは１または２を示す。

Ｒ５は置換または未置換のフェニル基を示す、ｎは１〜
８の整数を示す。）で表わされるマルトオリゴ糖誘導体
〔以下、マルトオリゴ糖誘導体（１）という］。

（２）マルトオリゴ糖誘導体（１）を含有することを特
徴とするα−アミラーゼ活性測定用試薬。

本発明に用いる基質としてのマルトオリゴ糖誘導体（１
）の骨格となるマルトオリゴ糖は３〜１０個の糖〔式（
１）のｎ＝１〜８に相当〕から形成される。マルトオリ
ゴ糖としては、マルトトリオース、マルトテトラオース
、マルトペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘ
プタオースなどがある。特にマルトテトラオース、マル
トペンタオース、マルトヘキサオース、マルトヘプタオ
ースが好適である。

マルトオリゴ糖の非還元性末端グルコースの置換基であ
るＲ１およびＲ２は同一の基であっても異なる基であっ
てもよい。

Ｒ１およびＲ茸の少なくとも一方は次式で表される基： ＲコーＳ　（０）、−Ｒ’または Ｒ”　−Ｃｏ−Ｒ’ を示し、残された基は水素原子または炭素数１〜６のア
ルキル基（例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプ
ロピル、ブチル、第３級ブチル、ペンチル、ヘキシルな
ど）あるいはフェニル基を示す。Ｒ５は置換または未置
換のフェニル基を示す。

ｎは１〜８である。Ｒ″は炭素数１〜５のアルキル基（
たとえば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、
ブチル、第３級ブチル、ペンチルなど）を示し、Ｒ４は
炭素数１〜５のアルキレン基（たとえば、メチレン、エ
チレン、トリメチレン、プロピレン、ブチレン、テトラ
メチレン、ペンタメチレンなど）を示し、ｍは１または
２を示す。

Ｒ３−５（０）、−Ｒ’で示される基としては、たとえ
ばメチルスルフィニルエチル、エチルスルフィニルエチ
ル、メタンスルホニルエチル、エタンスルホニルエチル
などが例示される。また、Ｒ３−Ｃｏ−Ｒ’で示される
基としては、たとえば２−ケトプロピル、２−ケトブチ
ル、３−ケトブチル、２−ケトペンチル、３−ケトペン
チル、４−ケトペンチルなどが例示される。

修飾マルトオリゴシトのアグリコンに相当するＲ５は置
換または未置換のフェニル基である　Ｒ５は還元性末端
のグルコースの１位のＯＨ基にα型で結合していてもよ
く、β型で結合していてもよい。置換フェニル基とは、
ハロゲン原子、ヒドロキシ基、炭素原子数１〜６のアル
キル基、アルコキシ基、アルコキシカルボニル基、ニト
ロ基などを置換基として有するフェニル基、即ち、フェ
ノール残基である。このような基を形成しつる置換フェ
ノール類としては、たとえばクロロフェノール、ジクロ
ロフェノール、ヒドロキシフェノール、アルキルフェノ
ール、アルコキシフェノール、ヒトＯキシ安息香Ｍ、ニ
トロフェノール、ハロゲン化ニトロフェノール、アルキ
ル化ニトロフェノール、アルコキシ化ニトロフェノール
、ニトロ化ヒドロキシ安息香酸、ジニトロフェノールな
どが挙げられる。特に少なくとも１個のニトロ基を有す
るフェノール類、たとえば４−二トロフェノール、２−
クロロ−４−二トロフェノール、２．６−ジクロロ−４
−二トロフェノール、２−フルオロ−４−二トロフェノ
ール、２．６−ジフルオロ−４−二トロフェノール、２
−ブロモ−４−二トロフェノール、２，６−ジプロモー
４−ニトロフェノール、２−二トロフェノール、２−ヒ
ドロキシ−４−ニトロフェノール、３−ヒ）’ワキシー
４−二トロフェノールなどが好適である。

本発明の基質であるマルトオリゴ糖誘導体（１）は新規
な化合物であり、下式（ＩＩ）で表される化合物（ｎ）
と下式（ＩＩＩ−１）で表されるカルボニル化合物（Ｉ
［１−１）または当該カルボニル化合物のアセタールで
ある下式（１−２）で表されるアセタール化合物（［［
［−２）とを反応させることによって製造することがで
きる。

（式中、ＲＳおよびｎは前記と同意義。）（ＩＩＩ−１
）　　　　　　　　（Ｉ［［−２）（上記両式中、Ｒ１
およびＲｚは前記と同意義であり、Ｒ６およびＲ７は同
一または異なって低級アルキル基を表す。） 式（ＩＩＩ−１）および（Ｉ［［−２）に関して、それ
ぞれＲ６およびＲ７で表される低級アルキル基は好まし
くは炭素数１−１０であり、たとえばメチル、エチル、
プロピル１、イソプロピル、ブチル、イソブチル、第３
級ブチル、ペンチル、イソペンチル、イソヘキシルなど
が例示される。

上記反応は一般に非反応性溶媒中で行われ該非反応性溶
媒としては、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキ
サイド、エチレングリコールジメチルエーテル等が例示
され、必要により上記化合物（ＩＩＩ−１）、（Ｉ［ｌ
−２）自体を溶媒として用いる場合もある０反応塩度は
特に制限されないが、通常０°Ｃから溶媒の沸点までの
範囲で行うことが推奨され、更に好ましい範囲は４０〜
１００°Ｃである。更に減圧上還流加熱したり、あるい
は副生アルコール類を蒸発除去しながら反応させるのも
効果的である。反応の促進のために触媒、たとえば少量
の純硫酸、塩酸ガス、ｐ−）ルエンスルホン酸あるいは
無水塩化亜鉛などが用いられることもある。

前記製造方法によれば、マルトオリゴ糖の非還元性末端
グルコース残基に環状アセタール保護基を選択的に結合
させることが可能である。長谷用らの複環状アセクール
に関する研究報告（Ｃａｒｂｏ−ｈｙｄ、　Ｒｅｓ　２
９２０９　（１９７３））およびその他の研究報告によ
れば単＊ｉのグルコースの４位および６位のＯＨ基に対
し、選択的に環状アセタールを結合させる方法が発表さ
れている。しかしより高分子量の核置換フェニルマルト
オリゴサイドについて非還元性末端グルコース残基の４
位または６位のＯＨ基に環状アセタールを選択的に結合
させる方法は全く新規な発明であってその有用性は大き
い。

原料物質である化合物（■）、即ち核置換フェニルマル
トオリゴシトは、核置換芳香族化合物とマルトオリゴ糖
を通常の方法に従って反応させることによって合成する
ことが出来る。化学的にはマルトオリゴ糖をアセチル化
し、このアセチル化マルトオリゴ糖と核置換芳香族化合
物を結合させた後、脱アセチル化することにより合成で
きる（実験化学講座第２４巻第３０４頁、１９５８年参
照）。生化学的にはサイクロデキストリン、グリコシル
トランスフェラーゼル置換芳香族化合物と可溶性デンプ
ン（またはα−サイクロデキストリンまたは白色デキス
トリン）とを反応させて、核置換フェニルマルトオリゴ
シトを合成することができる。

例えば、メチルチオエチリデン　２−クロロ−４−ニト
ロフェニル−β−マルトペンタオシドは少量の酸性触媒
の存在下にメチルチオアセトアルデヒドジメチルアセク
ールを作用させることによって得られる。

本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬は、上記マルト
オリゴ＄１　誘導体（１）を基質として含有するもので
あり、通常さらにα−グルコシダーゼ、グルコアミラー
ゼおよびβ−グルコシダーゼを適宜組み合わせた酵素系
（追随酵素性）、および必要に応じてその他の添加剤を
含有するものである。

本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬に用いられるα
−グルコシダーゼの起源は、特に限定されない。動物、
植物、微生物などから得られるα−グルコシダーゼが利
用され得る。特に、酵母起源のα−グルコシダーゼは、
マルトトリオシト以下のグリコシドによく作用し、かつ
マルトテトラオシド以上のグルコシドには作用しにくい
点、およびアグリコンの特異性が広い点から好適に使用
されうる。

本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬に用いられるβ
−グルコシダーゼおよびグルコアミラーゼの起源も特に
限定されない。たとえば、アーモンドから得られるβ−
グルコシダーゼやりシブスプレマーから得られるグルコ
アミラーゼが好適に使用されうる。

本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬を使用するα−
アミラーゼ活性の測定は、たとえば次のようにして行わ
れる。即ち、アミラーゼ活性測定用試薬にα−アミラー
ゼを含む試料を作用させる。

たとえば、アグリコンがα型に結合した基質（α型基質
）を用いる場合には、追随酵素系としてはα−グルコシ
ダーゼおよび／またはグルコアミラーゼが使用される。

アグリコンがβ型に結合した基質（β型基質）を用いる
場合には、追随酵素系としては、α−グルコシダーゼお
よび／またはグルコアミラーゼおよびβ−グルコシダー
ゼが使用される。

本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬を使用する測定
方法における基質分解の反応式を３−ケトブチリデン　
２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトペンタオ
シドを例に挙げて説明する。

（１）３−ケトブチリデン　２−クロロ−４−二トロフ
ェニルーβ−マルトペンタオシドを基質とする場合 ■３−ケトブチリデン　２−クロロ−４−二トフェニル
−β−マルトペンタオシド 運 ２−１０ロー４−ニトロフェニル−β−マルトシド＋３
−ケトブチリデントリオース ■２−１０ロー４−ニトロフェニル−β−マルトシド＋
３−ケトブチリデントリオース２−１０ロー４−ニトロ
フェニル−β−グルコシド＋グルコース＋３−ケトブチ
リデントリオース ■２−クロロー４−ニトロフェニル−β−グルコシド ２−クロロ−４−二トロフェノール 十グルコース 上記反応にて遊離したフェノール系化合物（上記例にお
いては２−クロロ−４−二トロフェノール）を適当な手
段により測定することにより、α−アミラーゼの活性を
測定することができる。遊離するフェノール系化合物が
基質とは異なるスペクトル吸収を示す場合には、反応混
合物のスペクトルを直接測定する。基質から遊離したフ
ェノール系化合物が基質とほぼ同じスペクトル吸収を示
す場合には、該フェノール化合物を呈色試薬、例えば４
−アミンアンチピリンなどの色原体と過酸化水素とをペ
ルオキシダーゼの存在下に酸化縮合させ、その発色強度
を測定する。

フェノール系化合物の測定方法としては、α−アミラー
ゼの反応を連続的に追跡するレート法および一定時間反
応させた後、反応を止めて測定するエンドポイント法の
いずれもが使用されうる。

本発明方法における酵素反応時には、グルコアミラーゼ
はα−グルコシダーゼとほぼ同等の（ＩＩきを有する。

ただし、α−グルコシダーゼがマルトトリオシト以下の
低分子グリコシドにはよく作用するが、マルトテトラオ
シド以上のグルコシドには作用しにくいのに対して、グ
ルコアミラーゼはマルトテトラオシド以上のグルコシド
にも作用する。たとえば、基質としてマルトヘプタオシ
ド以上の高分子グルコシドを用いると、α−アミラーゼ
の作用によりマルトテトラオシド以上のグルコシドが生
成することがある。このようなマルトテトラオシド以上
のグルコシドは、α−グルコシダーゼでは分解されにく
いが、グルコアミラーゼを用いるとグルコース単位にま
で容易に分解される。

そのため測定系の感度が上昇する。α−グルコシダーゼ
およびグルコアミラーゼを共存させた追随酵素系好適に
利用される。

〔効果］ 本発明の試薬および測定方法によれば非還元性末端グル
コースの４位および６位のＯＨ茫が修飾されたα−又は
β−マルトオリゴシト、即ちマルトオリゴ糖誘導体を基
質として利用するため、α−グルコシダーゼやグルコア
ミラーゼなどの追随酵素系と基質を一液化した試薬を調
製、保存してもこれらの酵素が基質を分解することがほ
とんどない、そのため、試薬ブランク値の上昇が抑制さ
れ、精度よくα−アミラーゼ活性を測定することができ
る。

本発明の基質であるマルトオリゴ糖誘導体（１）は、式
（１）中のＲ１およびＲ，が水溶性基であり、水に対す
る溶解性が優れており、また合成が容易であるため安価
に堤供され得る。

さらに、本発明試薬は自動分析機を用いての連続測定も
可能であり、簡便かつ安価にα−アミラーゼ活性の測定
がなされうる。

〔実施例〕

以下に本発明を実施例で説明する。

実施例１−１　（合成例） ３−ケトブチリデン　２−クロロ−４−ニトロフェニル
−β−マルトペンタオシドの製造例：３００ｄのフラス
コに２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトペン
タオシＦｌｏｇ、１゜３−ジメチル−２−イミダゾリジ
ノン１５０ｄ、ｐ−）ルエンスルホン酸１１０ｍｇ、４
．４−ジメトキシ−２−ブタノン２．７ｄを均一な溶液
とし室温で２４時間撹拌した０弱酸性イオン交換樹脂２
２ｇを加えて２時間撹拌後濾過し濾液を３００−ナス型
フラスコに移しロータリーエバポレータで減圧下（２＋
ｎＩＩＩＨｇ）外温を８５“Ｃに保ちながらすばやく濃
縮を行った。

残香１３．９　ｇを蒸留水５６ｍに溶解し、蒸留水に分
散させたセファデックスＧ−２５ゲル４８１を充填した
内径２０ｃｍ０カラムに負荷し、蒸留水を溶離液として
ゲル濾過を行い３−ケトブチリデン−２−１０ロー４−
ニトロフェニル−β−マルトペンタオシドのリッチなフ
ラクションを集めて濃縮脱水を行い淡黄色結晶３．８ｇ
を得た。この結晶をメタノール５ｄに溶解し、冷却下ジ
エチルエーテル２０ｄを加え結晶を晶出させ濾過乾燥後
、３−ケトブチリデン−２−クロロ−４−ニトロフェニ
ル−β−マルトペンタオシドの白色結晶を３．０ｇ得た
（ＨＰ　Ｌ　Ｃ分析により純度９９％）。

融点１８８〜１９２°Ｃ ＮＭＲ、δ値（分裂型、相対プロトン数）２．２（１重
線、３） ２．９（２重線、３） ３．２〜４．２（多重線、３１） ４．７（１重線、１４） ５〜５．６（多重線、５） ７．３（２重線、Ｊ＝９Ｈｚ、１） ８．１５（ダブル２重線、Ｊ＝３Ｈｚ。

Ｊ＝９Ｈｚ、　　１） ８．２１（２重線、Ｊ＝３Ｈｚ、１） ６２．２（３Ｈ）のシングルピークおよび６２．９（２
Ｈ）のダブレットピークはそれぞれＣＨ３ＣＯ−基およ
び一〇ＯＣＲ，−基に基づく吸収であり３−ケトブチリ
デン−２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトペ
ンタオシド１分子中に１個存在する。

実施例１−２〜１−８（合成例） 実施例１に準じて次の化合物が製造される。

・２−ケトブチリデン　２−クロロ−４−二トａフェニ
ルーβ−マルトペンタオシド ・２−ケトプロピリデン　２−クロロ−４−ニトロフェ
ニル−β−マルトペンタオシド・４−ケトペンチリデン
　２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトペンタ
オシド・メチルスルフィニルエチリデン　２−クロロ−
４−二トロフェニルーβ−マルトペンタオシド・エチル
スルフィニルエチリデン　２−クロロ−４−ニトロフェ
ニル−β−マルトペンタオシド・メタンスルホニルエチ
リデン　２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルト
ペンタオシド・エタンスルホニルエチリデン　２−クロ
ロ−４−二トロフェニルーβ−マルトペンタオシド実施
例２・比較例１（試薬・測定方法）下記組成の試薬を調
製した。

試薬組成： ５０ｍＭグツドバッファ　　　（ｐＨ７，０）α−グル
コシダーゼ　　　８０　Ｕ／ｄβ−グルコシダーゼ　　
　１０　Ｕ／ｄ基質（表１参照）　　　　　　２ｍＭ 試薬調製直後、１０分後、２０分後および３０分後にこ
の試薬の４００　ｎｍにおける吸光度を測定した（試薬
３ｍｌ：３１°Ｃ）。吸光度の変化（ブランク値の経時
変化）を後記表１に示す。

表１から、本発明の非還元製末端が修飾された化合物を
基質として含有する試薬は、非還元製末端が修飾されて
いない化合物を基質として含有する試薬に比べてブラン
ク値が低く、その経時的な上昇の度合も極めて小さいこ
とがわかる。

実施例３−１（試薬・測定方法） 下記組成の試薬を調製した。

試薬組成： ５０ｍＭグツドバッファ　−（ｐＨ１，０）α−グルコ
シダーゼ　　　８０　Ｕ／ｍβ−グルコシダーゼ　　　
１０　Ｕ／ｍグルコアミラーゼ　　　　１０　Ｕ／ｄ基
質（後記表１参照）　　　　２ｍＭ この試薬を用い、実施例２と同様に吸光度の変化を測定
した。次に、上記試薬３ｄを試料血清５〇−に添加し、
３７°Ｃにて５〜６分間放置した後、４００ｎｍにおけ
る吸光度の変化を測定し、１分間あたりの吸光度の変化
（アミラーゼ活性の指標となる）を算出した。試薬ブラ
ンク値の経時変化および１分間あたりの吸光度の変化を
後記表２に示す。

実施例３−２（試薬・測定方法） 下記組成の試薬を調製した。

試薬組成： ５０ｍＭグツドバッファ　−（ｐＨ７，０）α−グルコ
シダーゼ　　　８０　Ｕ／ｄβ−グルコシダーゼ　　　
Ｉ　ＯＵ／ｍＡ基質（後記表２参照）　　　　２ｍＭ この試薬を用い、実施例３−１と同様に操作を繰り返し
た。その結果を後記表２に示す。

比較例２ 下記組成の試薬を調製した。

試薬組成： ５０ｍＭグツドバッファー（ｐＨ７，０）α−グルコシ
ダーゼ　　　８０Ｕ／ｍｆｆ１β−グルコシダーゼ　　
　ＩＯＵ／ｄ グルコアミラーゼ　　　　１０Ｕ／ｄ 基質（ｅ記表２参照）　　　　２ｍＭ この試薬を用い、実施例３−１と同様に操作を繰り返し
た。その結果を後記表２に示す。

後記表２から、本発明試薬（実施例１−１．３−２）は
非還元性末端が修飾されていない化合物を基質として含
有する試薬（比較例２）に比べてブランク値が低く、そ
の経時的上昇の度合も極めて小さい。実施例３−１にお
いてはグルコアミラーゼが試薬中に含有されているため
、実施例３−２に比べて測定感度が高くなっているのが
確認される。

比較例３ 実施例３における基質を下記表３に記載される基質に代
えて使用することを試みたが、該基質は実施例３におけ
る試薬（実施例３の基質を除く）に溶解しなかった。

〔以下余白〕

表　　　３

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２の少なくとも一方は次式で表わ
   される基： Ｒ＾３−Ｓ（Ｏ）＿ｍ−Ｒ＾４または Ｒ＾３−ＣＯ−Ｒ＾４ を示し、残りは水素原子、炭素数１〜６のアルキル基ま
   たはフェニル基を示す。ここでＲ＾３は炭素数１〜５の
   アルキル基を示し、Ｒ＾４は炭素数１〜５のアルキレン
   基を示し、ｍは１または２を示す。 Ｒ＾５は置換または未置換のフェニル基を示す。ｎは１
   〜８の整数を示す。）で表わされるマルトオリゴ糖誘導
   体。
2. （２）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾１、Ｒ＾２の少なくとも一方は次式で表わ
   される基： Ｒ＾３−Ｓ（Ｏ）＿ｍ−Ｒ＾４または Ｒ＾３−ＣＯ−Ｒ＾４ を示し、残りは水素原子、炭素数１〜６のアルキル基ま
   たはフェニル基を示す。ここでＲ＾３は炭素数１〜５の
   アルキル基を示し、Ｒ＾４は炭素数１〜５のアルキレン
   基を示し、ｍは１または２を示す。 Ｒ＾５は置換または未置換のフェニル基を示す。ｎは１
   〜８の整数を示す。）で表わされるマルトオリゴ糖誘導
   体を含有することを特徴とするα−アミラーゼ活性測定
   用試薬。
3. （３）α−グルコシダーゼおよび／またはグルコアミラ
   ーゼならびに必要によりβ−グルコシダーゼを含有する
   特許請求の範囲第２項記載のα−アミラーゼ活性測定用
   試薬。