JPH06220080A - オリゴ糖化合物およびその製法 - Google Patents
オリゴ糖化合物およびその製法Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【目的】 α−アミラーゼを検出する活性測定に有用で
ある新規な保護されたオリゴ糖化合物。 【構成】 一般式： 〔Ｒは、一般式 Ｒ3 、Ｒ4 、Ｒ5 Ｓi − から成る直
鎖状または分岐状のアルキル基またはアリール基で置換
されたシリル基。Ｒ1 は水素原子。Ｒ3 、Ｒ4 、Ｒ5 は
アルキル鎖ならば、１〜６個の炭素原子を含むアルキル
鎖等。Ｒ2 は少なくとも２個のグルコース単位を含むオ
ルゴグルコシド残基。Ｘは光学的に測定可能な変化を示
す標識基。〕の化合物。
ある新規な保護されたオリゴ糖化合物。 【構成】 一般式： 〔Ｒは、一般式 Ｒ3 、Ｒ4 、Ｒ5 Ｓi − から成る直
鎖状または分岐状のアルキル基またはアリール基で置換
されたシリル基。Ｒ1 は水素原子。Ｒ3 、Ｒ4 、Ｒ5 は
アルキル鎖ならば、１〜６個の炭素原子を含むアルキル
鎖等。Ｒ2 は少なくとも２個のグルコース単位を含むオ
ルゴグルコシド残基。Ｘは光学的に測定可能な変化を示
す標識基。〕の化合物。
Description
【０００１】
【発明の背景】本発明は、新規なオリゴ糖化合物、その
製法およびα−アミラーゼの活性の測定のための改良さ
れた基質としてのその使用に関する。
製法およびα−アミラーゼの活性の測定のための改良さ
れた基質としてのその使用に関する。
【０００２】尿および血清中のα−アミラーゼの測定
は、膵臓疾患の診断において広く行われている。伝統的
にそのような活性測定はオリゴ糖α−アミラーゼ基質を
利用している。これらの基質は、α−アミラーゼと、例
えばα−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼまたはグ
ルコアミラーゼのようなエキソ酵素との共働作用によっ
て切断されて小さなフラグメントになる。
は、膵臓疾患の診断において広く行われている。伝統的
にそのような活性測定はオリゴ糖α−アミラーゼ基質を
利用している。これらの基質は、α−アミラーゼと、例
えばα−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼまたはグ
ルコアミラーゼのようなエキソ酵素との共働作用によっ
て切断されて小さなフラグメントになる。
【０００３】ブレア(Blair) の米国特許第４，６４９，
１０８号は、α−アミラーゼの活性測定法を記述してい
る。その測定法は、還元末端に色原体を有し、かつ非還
元末端「ブロック（保護）する」置換基（例えば、カル
ボン酸エステル（例えば、アセチルまたはベンゾイ
ル）；リン酸エステル；スルホン酸エステル（例えば、
トルエンスルホニルまたはメタンスルホニル）；エーテ
ル（例えば、ベンジル、シリルおよびトリフェニルメチ
ル）およびα−１，４−結合したグルコース以外の単糖
類）を有し、少なくとも３つのグルコース単位の鎖長か
ら成るオリゴ糖、好適にブロックされた基質として４，
６−Ｏ−ベンジリデン、を利用する。
１０８号は、α−アミラーゼの活性測定法を記述してい
る。その測定法は、還元末端に色原体を有し、かつ非還
元末端「ブロック（保護）する」置換基（例えば、カル
ボン酸エステル（例えば、アセチルまたはベンゾイ
ル）；リン酸エステル；スルホン酸エステル（例えば、
トルエンスルホニルまたはメタンスルホニル）；エーテ
ル（例えば、ベンジル、シリルおよびトリフェニルメチ
ル）およびα−１，４−結合したグルコース以外の単糖
類）を有し、少なくとも３つのグルコース単位の鎖長か
ら成るオリゴ糖、好適にブロックされた基質として４，
６−Ｏ−ベンジリデン、を利用する。
【０００４】ラウシャー(Rauscher)等の米国特許第４，
７０９，０２０号は、ブレアの米国特許第４，６４９，
１０８号に関連し、包含されている化合物およびその製
法を記述している。ラウシャー等の特許は、α−アミラ
ーゼ測定法においてブレアにより記述される化合物と同
様の化合物（例えば、４，６−Ｏ−ベンジリデン−４−
ニトロフェニル−マルトヘプタオース）の利点を述べて
いる。
７０９，０２０号は、ブレアの米国特許第４，６４９，
１０８号に関連し、包含されている化合物およびその製
法を記述している。ラウシャー等の特許は、α−アミラ
ーゼ測定法においてブレアにより記述される化合物と同
様の化合物（例えば、４，６−Ｏ−ベンジリデン−４−
ニトロフェニル−マルトヘプタオース）の利点を述べて
いる。
【０００５】大道、池中の（１９８３年）J.Biochem.誌
１０５５頁は、非還元末端グルコースのＣ−６位を２−
ピリジルアミノ基で置換したα−アミラーゼのためのけ
い光オリゴ糖基質を記述する。この化合物はエキソ型の
グルコシダーゼによる分解に抵抗する。しかしながら、
この化合物は還元末端に色原体（例えば、Ｐ−ニトロフ
ェノール）を伴わず、そのアミラーゼ活性の測定は、好
ましくは避けられるべき欠点であるＨＰＬＣ（高速液体
クロマトグラフィー）による分析を必要とする。
１０５５頁は、非還元末端グルコースのＣ−６位を２−
ピリジルアミノ基で置換したα−アミラーゼのためのけ
い光オリゴ糖基質を記述する。この化合物はエキソ型の
グルコシダーゼによる分解に抵抗する。しかしながら、
この化合物は還元末端に色原体（例えば、Ｐ−ニトロフ
ェノール）を伴わず、そのアミラーゼ活性の測定は、好
ましくは避けられるべき欠点であるＨＰＬＣ（高速液体
クロマトグラフィー）による分析を必要とする。
【０００６】里村等の（１９８８年）Carbohydrate Re
s. 誌１０７頁は、非還元末端グルコースのＣ−６位に
ベンジル基を有するＰ−フェニル−α−マルトペンタオ
シドを記述している。この化合物は、α−アミラーゼの
測定においてベンジル置換基がエキソ型のグルコシダー
ゼの作用をブロックする基質として使用されるのに適し
ている（里村等（１９８８年）Clin. Chem. Acta．誌３
１５頁）。しかしながら、このブロックされた基質の合
成には、回避されるべき重大な欠点がある。すなわち、
非常に危険で爆発性で有毒の試薬（例えば、ジメチルア
ミノボラン）を伴う。
s. 誌１０７頁は、非還元末端グルコースのＣ−６位に
ベンジル基を有するＰ−フェニル−α−マルトペンタオ
シドを記述している。この化合物は、α−アミラーゼの
測定においてベンジル置換基がエキソ型のグルコシダー
ゼの作用をブロックする基質として使用されるのに適し
ている（里村等（１９８８年）Clin. Chem. Acta．誌３
１５頁）。しかしながら、このブロックされた基質の合
成には、回避されるべき重大な欠点がある。すなわち、
非常に危険で爆発性で有毒の試薬（例えば、ジメチルア
ミノボラン）を伴う。
【０００７】ドリスコル(Driscoll)等の米国特許第４，
１０２，７４７号は、還元末端に色原体（Ｐ−ニトロフ
ェノールまたは“ＰＮＰ”）を有する、鎖長４〜１０の
グルコース単位のオリゴ糖を用いる活性測定法を記述す
る。この鎖はα−グルコシダーゼによる切断に対して安
定であり、α−アミラーゼによる切断が「α−グルコシ
ダーゼの作用を受けて・・・・・Ｐ−ニトロフェノール
を放出する小フラグメント」を生ずる。
１０２，７４７号は、還元末端に色原体（Ｐ−ニトロフ
ェノールまたは“ＰＮＰ”）を有する、鎖長４〜１０の
グルコース単位のオリゴ糖を用いる活性測定法を記述す
る。この鎖はα−グルコシダーゼによる切断に対して安
定であり、α−アミラーゼによる切断が「α−グルコシ
ダーゼの作用を受けて・・・・・Ｐ−ニトロフェノール
を放出する小フラグメント」を生ずる。
【０００８】マーシャル(Marshall)等の（１９７７年）
Clin. Chimica Acta誌２７７頁は、「グルコシダーゼの
作用に対する保護を含む修飾デンプン状多糖」を記述
し、「エキソ酵素の作用に対するこのような保護が、・
・・・・制限付き過ヨウ素酸塩酸化によって・・・・・
または単糖残基の置換によって通常導入される」との述
べている。
Clin. Chimica Acta誌２７７頁は、「グルコシダーゼの
作用に対する保護を含む修飾デンプン状多糖」を記述
し、「エキソ酵素の作用に対するこのような保護が、・
・・・・制限付き過ヨウ素酸塩酸化によって・・・・・
または単糖残基の置換によって通常導入される」との述
べている。
【０００９】
【発明の要旨】一般に、本発明は、次の一般式を有する
一連の新規な「保護された」オリゴ糖基質を特徴とす
る。
一連の新規な「保護された」オリゴ糖基質を特徴とす
る。
【００１０】
【化３】
【００１１】上記一般式において、Ｒは、式Ｒ3 Ｒ4 Ｒ
5 Ｓi −を有する直鎖状もしくは分岐状のアルキルまた
はアリール置換されたシリル基を表わし：Ｒ1 は水素原
子を表わし、あるいはＲ1 とＲはたがいに独立して各々
が直鎖状もしくは分岐状のアルキルまたはアリール置換
されたシリル基、またはＲとＲ1 は一緒になってケイ素
が直鎖状もしくは分岐状のアルキルもしくはアリール基
で置換されたシリル橋を形成し；Ｒ2 は少なくとも２つ
のグルコース単位を含むオリゴ糖残基を表わし；Ｘは水
素原子またはＲ2 とＸ間のグルコシド結合の切断に際し
光学的に測定可能な変化を現わす標識基（ラベル）を表
わす。本発明の最も好ましい実施例は、６−Ｏ−テキシ
ルジメチルシリル−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マル
トヘプタオシドと、６−Ｏ−テキシルジメチルシリル−
４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトペンタオシドから
成る。
5 Ｓi −を有する直鎖状もしくは分岐状のアルキルまた
はアリール置換されたシリル基を表わし：Ｒ1 は水素原
子を表わし、あるいはＲ1 とＲはたがいに独立して各々
が直鎖状もしくは分岐状のアルキルまたはアリール置換
されたシリル基、またはＲとＲ1 は一緒になってケイ素
が直鎖状もしくは分岐状のアルキルもしくはアリール基
で置換されたシリル橋を形成し；Ｒ2 は少なくとも２つ
のグルコース単位を含むオリゴ糖残基を表わし；Ｘは水
素原子またはＲ2 とＸ間のグルコシド結合の切断に際し
光学的に測定可能な変化を現わす標識基（ラベル）を表
わす。本発明の最も好ましい実施例は、６−Ｏ−テキシ
ルジメチルシリル−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マル
トヘプタオシドと、６−Ｏ−テキシルジメチルシリル−
４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトペンタオシドから
成る。
【００１２】本発明者は、本発明の化合物がα−グルコ
シダーゼの存在下においてさえも、何ら変化せず、それ
故長期間経過後でも正確なα−アミラーゼの値を与える
ことを発見した。更に本発明は、予期せずに、本発明の
化合物が記述したオリゴ糖基質、特にラウシャー等の米
国特許第４，７０９，０２０とブレアの米国特許第４，
６４９，１０８の基質に比べ際立った利点をもたらすこ
とを見い出した。これらの利点は、α−アミラーゼの改
善されたＶ／Ｋ値を引き出し、部分的にα−アミラーゼ
に対する感度を明らかに改善し、それによりアッセイ毎
の基質使用量を減少させるかもしくはα−アミラーゼの
検出感度を向上させる。更に本発明者は後述されるよう
に、本発明の化合物が、エンド酵素であるαアミラーゼ
の作用を受ける際、ユニークな切断パターンを示すこと
を発見した。
シダーゼの存在下においてさえも、何ら変化せず、それ
故長期間経過後でも正確なα−アミラーゼの値を与える
ことを発見した。更に本発明は、予期せずに、本発明の
化合物が記述したオリゴ糖基質、特にラウシャー等の米
国特許第４，７０９，０２０とブレアの米国特許第４，
６４９，１０８の基質に比べ際立った利点をもたらすこ
とを見い出した。これらの利点は、α−アミラーゼの改
善されたＶ／Ｋ値を引き出し、部分的にα−アミラーゼ
に対する感度を明らかに改善し、それによりアッセイ毎
の基質使用量を減少させるかもしくはα−アミラーゼの
検出感度を向上させる。更に本発明者は後述されるよう
に、本発明の化合物が、エンド酵素であるαアミラーゼ
の作用を受ける際、ユニークな切断パターンを示すこと
を発見した。
【００１３】
【表の簡単な説明】表１は、α−アミラーゼを伴う本発
明の化合物の結合・動的パラメータを記述するデータを
示す。
明の化合物の結合・動的パラメータを記述するデータを
示す。
【００１４】表２は、α−アミラーゼを伴う本発明の化
合物の切断パターンを記述するデータを示す。
合物の切断パターンを記述するデータを示す。
【００１５】
【詳細な説明および最良の形態】表１のデータは、本発
明のシリルオリゴ糖と従来の４，６−Ｏ−ベンジリデン
誘導体との間で知見されるα−アミラーゼに関する動的
・結合の値における差を示す。例えば、６−Ｏ−ｔ−ブ
チルジメチルシリル−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マ
ルトヘプタオシド（シリル−Ｇ7 −ＰＮＰ）の結合定数
（Ｋｍ）は、従来の４，６−Ｏ−ベンジリデン誘導体
（Ｂz −Ｇ7 −ＰＮＰ）の値９７μＭと比べて、８１μ
Ｍである。またシリル−Ｇ7 −ＰＮＰは、Ｖmax に関し
１．１５×１０-2μＭｏｌｅｓ ｍｉｎ-1で、Ｂz −Ｇ
7 −ＰＮＰより４６％速い。本発明の実施例であるシリ
ル−Ｇ5 −ＰＮＰは、従来のＢz −Ｇ5 −ＰＮＰの１８
３μＭと比して８７μＭのＫｍを示し、Ｂz −Ｇ5 −Ｐ
ＮＰよりも１９％大きい最終のＶ／Ｋ値を有する。この
シリル−Ｇ7 −ＰＮＰ誘導体の改善されたＫｍおよびＸ
max 値は、この実施例を用いα−アミラーゼのアッセイ
において、（ｉ）基質使用量を節約し得る、（ｉi ）α
−アミラーゼに対する感度が増加する、という利点が得
られることを示す。
明のシリルオリゴ糖と従来の４，６−Ｏ−ベンジリデン
誘導体との間で知見されるα−アミラーゼに関する動的
・結合の値における差を示す。例えば、６−Ｏ−ｔ−ブ
チルジメチルシリル−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マ
ルトヘプタオシド（シリル−Ｇ7 −ＰＮＰ）の結合定数
（Ｋｍ）は、従来の４，６−Ｏ−ベンジリデン誘導体
（Ｂz −Ｇ7 −ＰＮＰ）の値９７μＭと比べて、８１μ
Ｍである。またシリル−Ｇ7 −ＰＮＰは、Ｖmax に関し
１．１５×１０-2μＭｏｌｅｓ ｍｉｎ-1で、Ｂz −Ｇ
7 −ＰＮＰより４６％速い。本発明の実施例であるシリ
ル−Ｇ5 −ＰＮＰは、従来のＢz −Ｇ5 −ＰＮＰの１８
３μＭと比して８７μＭのＫｍを示し、Ｂz −Ｇ5 −Ｐ
ＮＰよりも１９％大きい最終のＶ／Ｋ値を有する。この
シリル−Ｇ7 −ＰＮＰ誘導体の改善されたＫｍおよびＸ
max 値は、この実施例を用いα−アミラーゼのアッセイ
において、（ｉ）基質使用量を節約し得る、（ｉi ）α
−アミラーゼに対する感度が増加する、という利点が得
られることを示す。
【００１６】表２に示されるデータは、従来のベンジリ
デン誘導体と比べ、本発明のシリル誘導体のα−アミラ
ーゼとの反応性の差を示している。これらの差は、膵臓
と唾液双方のα−アミラーゼを用いた加水分解の間に観
察される分解パターンで明示される。例えば、シリル−
Ｇ7 −誘導体は、主として３位と４位のグルコース間で
切断される（６６〜６７％）のに対し、ベンジリデン−
Ｇ7 は２位と３位のグルコース間で切断される（６３〜
７４％）。シリル−Ｇ5 誘導体は、１位と２位および２
位と３位のグルコース単位間でほぼ等しく切断される
（膵臓および唾液α−アミラーゼに対し、それぞれ４０
〜６０％）のに対し、ベンジリデン−Ｇ5誘導体は、主
として３位と４位のグルコース間で切断される（７８〜
８４％）。これらのデータは、本発明のシリルオリゴ糖
が従来の４，６−Ｏ−ベンジリデン誘導体と比べ、基本
的に異なる基質としてα−アミラーゼの作用を受け、そ
れゆえ均等物としてふるまわないという発明者の確信を
裏付ける。
デン誘導体と比べ、本発明のシリル誘導体のα−アミラ
ーゼとの反応性の差を示している。これらの差は、膵臓
と唾液双方のα−アミラーゼを用いた加水分解の間に観
察される分解パターンで明示される。例えば、シリル−
Ｇ7 −誘導体は、主として３位と４位のグルコース間で
切断される（６６〜６７％）のに対し、ベンジリデン−
Ｇ7 は２位と３位のグルコース間で切断される（６３〜
７４％）。シリル−Ｇ5 誘導体は、１位と２位および２
位と３位のグルコース単位間でほぼ等しく切断される
（膵臓および唾液α−アミラーゼに対し、それぞれ４０
〜６０％）のに対し、ベンジリデン−Ｇ5誘導体は、主
として３位と４位のグルコース間で切断される（７８〜
８４％）。これらのデータは、本発明のシリルオリゴ糖
が従来の４，６−Ｏ−ベンジリデン誘導体と比べ、基本
的に異なる基質としてα−アミラーゼの作用を受け、そ
れゆえ均等物としてふるまわないという発明者の確信を
裏付ける。
【００１７】シリル基のＲ3 、Ｒ4 、Ｒ5 の各々に対す
るアルキル置換基の他の具体例は、メチル、エチル、ｎ
−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、
ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル基、これらの異性体、ｎ−ヘ
キシル、この異性体、並びにシクロヘキシル基を含む。
シリル基のＲ3 、Ｒ4 、Ｒ5 の各々に対するアリール置
換基の具体例は、個々に、フェニル、ｏ，ｐまたはｍ−
トリル、ｏ，ｐまたはｍ−メトキシフェニル、並びにジ
−およびトリ−メチル置換されたフェニル異性体の各々
を含む。本発明の好ましい化合物は、Ｒ1 がＨで、Ｒが
アルキル置換された基、特に好ましくはテキシルジメチ
ルシリルであるものである。
るアルキル置換基の他の具体例は、メチル、エチル、ｎ
−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、
ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル基、これらの異性体、ｎ−ヘ
キシル、この異性体、並びにシクロヘキシル基を含む。
シリル基のＲ3 、Ｒ4 、Ｒ5 の各々に対するアリール置
換基の具体例は、個々に、フェニル、ｏ，ｐまたはｍ−
トリル、ｏ，ｐまたはｍ−メトキシフェニル、並びにジ
−およびトリ−メチル置換されたフェニル異性体の各々
を含む。本発明の好ましい化合物は、Ｒ1 がＨで、Ｒが
アルキル置換された基、特に好ましくはテキシルジメチ
ルシリルであるものである。
【００１８】Ｒ2 から成る適用可能なオリゴグルコシド
残基の内、３，４および６個のグルコース単位からなる
ものが好ましい。なぜなら、これらの基質はアッセイに
おいてα−アミラーゼに対する好ましい性質を示すから
である。
残基の内、３，４および６個のグルコース単位からなる
ものが好ましい。なぜなら、これらの基質はアッセイに
おいてα−アミラーゼに対する好ましい性質を示すから
である。
【００１９】好ましいラベル、Ｘは、４−ニトロフェノ
ール、２−ニトロフェノール、２−クロロ−４−ニトロ
フェノール（色原体）、４−メチルウンベリフェロンの
ようなクマリン誘導体（けい光源）およびルシフェリン
（化学発光置換基）であり、特に４−ニトロフェノー
ル、２−クロロ−４−ニトロフェノールが好ましい。
ール、２−ニトロフェノール、２−クロロ−４−ニトロ
フェノール（色原体）、４−メチルウンベリフェロンの
ようなクマリン誘導体（けい光源）およびルシフェリン
（化学発光置換基）であり、特に４−ニトロフェノー
ル、２−クロロ−４−ニトロフェノールが好ましい。
【００２０】
【本発明の化合物の合成】本発明の化合物の製法は、下
記に示されるような非還元末端グルコースのＣ−６位ま
たはＣ−４／Ｃ−６位の水酸基に関するいくつかの保護
基を含むオリゴグルコシドを用いて優位に開始され得
る。４，６−Ｏ−ベンジリデンの保護基は開始物質とし
て好ましい。また、そのオリゴグルコシドでは上記した
ような光学的に測定可能な末端基Ｘを選択的に伴うこと
が可能である。
記に示されるような非還元末端グルコースのＣ−６位ま
たはＣ−４／Ｃ−６位の水酸基に関するいくつかの保護
基を含むオリゴグルコシドを用いて優位に開始され得
る。４，６−Ｏ−ベンジリデンの保護基は開始物質とし
て好ましい。また、そのオリゴグルコシドでは上記した
ような光学的に測定可能な末端基Ｘを選択的に伴うこと
が可能である。
【００２１】遊離の水酸基は、最初に、例えば酸塩化物
または酸無水物のいずれかを用いる処理によりアシル誘
導体に転化することで、反応性の水素原子を除去して保
護される。
または酸無水物のいずれかを用いる処理によりアシル誘
導体に転化することで、反応性の水素原子を除去して保
護される。
【００２２】適当なアシル基は、アセチル、プロピオニ
ル、ブタノイル、ヘキサノイルおよびベンゾイルを含
み、アセチルが最も好ましい。最も好ましいアシル化試
薬は無水酢酸である。
ル、ブタノイル、ヘキサノイルおよびベンゾイルを含
み、アセチルが最も好ましい。最も好ましいアシル化試
薬は無水酢酸である。
【００２３】次いで、４，６−Ｏ−保護基、特にベンジ
リデンは、アシル基と還元末端の色原体Ｘが、妨害され
ないような緩やかな酸性加水分解により除去される。当
業者に知られた標準的な酸のいずれかを使用でき、酢酸
が好適である。
リデンは、アシル基と還元末端の色原体Ｘが、妨害され
ないような緩やかな酸性加水分解により除去される。当
業者に知られた標準的な酸のいずれかを使用でき、酢酸
が好適である。
【００２４】次いで、遊離のＣ−６位の水酸基、そして
所望ならばＣ−４位の水酸基は、活性なシリル化試薬を
用いる反応によりシリルエーテル誘導体に転化される。
当業者に知られたシリル化試薬および反応システムのい
ずれかを使用できる。
所望ならばＣ−４位の水酸基は、活性なシリル化試薬を
用いる反応によりシリルエーテル誘導体に転化される。
当業者に知られたシリル化試薬および反応システムのい
ずれかを使用できる。
【００２５】使用可能なシリル化試薬の具体例は、クロ
ロトリメチルシラン、ビス−トリメチルシリルアセトア
ミド、クロロテキシルジメチルシラン、クロロトリフェ
ニルシランおよびジクロロジフェニルシランを含むが、
これらに限られない。これらの内、クロロテキシルジメ
チルシランが最も好ましい。
ロトリメチルシラン、ビス−トリメチルシリルアセトア
ミド、クロロテキシルジメチルシラン、クロロトリフェ
ニルシランおよびジクロロジフェニルシランを含むが、
これらに限られない。これらの内、クロロテキシルジメ
チルシランが最も好ましい。
【００２６】最後に、アシル基は塩基性加水分解により
除去される。当業者に知られたエステル加水分解の標準
方法のいずれかが使用でき、一般的にナトリウムメトキ
シドが好ましい。本発明者は、この工程におけるアシル
基の除去条件が最終生成物の収率を純度を定める点で重
要であることを発見した。特に、ナトリウムメトキシド
のアシル基に対するモル比率と、過アシル化合物の濃度
が、当該反応を成功させるのに重要である。本発明者
は、メトキシドの過アシル基に対するモル比率で少なく
とも０．０５から２．５当量までが必要とされ、メトキ
シドの当量対アシル基の比率で０．１対１が好適である
ことを知見した。過アシル化シリル化は、５から５０ｍ
Ｍの間の濃度で使用されるべきであり、３０ｍＭの濃度
が最も好ましい。
除去される。当業者に知られたエステル加水分解の標準
方法のいずれかが使用でき、一般的にナトリウムメトキ
シドが好ましい。本発明者は、この工程におけるアシル
基の除去条件が最終生成物の収率を純度を定める点で重
要であることを発見した。特に、ナトリウムメトキシド
のアシル基に対するモル比率と、過アシル化合物の濃度
が、当該反応を成功させるのに重要である。本発明者
は、メトキシドの過アシル基に対するモル比率で少なく
とも０．０５から２．５当量までが必要とされ、メトキ
シドの当量対アシル基の比率で０．１対１が好適である
ことを知見した。過アシル化シリル化は、５から５０ｍ
Ｍの間の濃度で使用されるべきであり、３０ｍＭの濃度
が最も好ましい。
【００２７】次の具体例は本発明の例示として与えられ
ており、限定するものとみなされるべきではない。
ており、限定するものとみなされるべきではない。
【００２８】例１ 過アセチル化された４，６−Ｏ−ベンジリデン−４−ニ
トロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（“１”）
の製造工程 ピリジン７５ｍｌ中のＰ−ニトロフェニル−４，６−Ｏ
−ベンジリデン−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（５ｇ、
３．６５ｍｍｏｌ）と、ジメチルアミノピリジン（４４
０ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）の溶液を４℃まで冷却した。
この溶液に無水酢酸（３０ｍｌ）を滴下して加えた。一
晩攪拌した後、得られた淡褐色の溶液を高速攪拌された
氷水中にゆっくりと注ぎ、生成物が白い固体として沈澱
した。この固体を収集、乾燥し、過酢酸塩“１”（８．
０２ｇ、９２％）を得た。薄層クロマトグラフィーで
は、Ｒf ＝０．５（ＣＨＣＬ3 ：ＭｅＯＨ、１５：
１）、ｐｍｒ（ｐｐｍ）（ＣＤＣｌ3 ）では、δ８．２
５（ｄ、２Ｈ）、７．２８（ｄ、２Ｈ）、７．３−７．
５（ｍ、５Ｈ）、２．２−１．９（ｓのｍ、アセテー
ト）が示された。
トロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（“１”）
の製造工程 ピリジン７５ｍｌ中のＰ−ニトロフェニル−４，６−Ｏ
−ベンジリデン−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（５ｇ、
３．６５ｍｍｏｌ）と、ジメチルアミノピリジン（４４
０ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）の溶液を４℃まで冷却した。
この溶液に無水酢酸（３０ｍｌ）を滴下して加えた。一
晩攪拌した後、得られた淡褐色の溶液を高速攪拌された
氷水中にゆっくりと注ぎ、生成物が白い固体として沈澱
した。この固体を収集、乾燥し、過酢酸塩“１”（８．
０２ｇ、９２％）を得た。薄層クロマトグラフィーで
は、Ｒf ＝０．５（ＣＨＣＬ3 ：ＭｅＯＨ、１５：
１）、ｐｍｒ（ｐｐｍ）（ＣＤＣｌ3 ）では、δ８．２
５（ｄ、２Ｈ）、７．２８（ｄ、２Ｈ）、７．３−７．
５（ｍ、５Ｈ）、２．２−１．９（ｓのｍ、アセテー
ト）が示された。
【００２９】例２ 過アセチル化された４，６−Ｏ−ジヒドロキシ−４−ニ
トロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（“２”）
の製造工程 酢酸（８０％）４４９ｍｌ中の例１の手順に従い調整さ
れた“１”（８ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）の溶液を一晩４
０〜４５℃に加熱した。反応混合物を氷水１．５ｌ中に
注ぎ、白色固体の生成物が沈澱した。この固体、“２”
を収集、乾燥し、６．４３ｇ（８３％）の“２”を得
た。薄層クロマドグラフィーでは、Ｒf ＝Ｏ（ＣＨＣｌ
3 ：ＭｅＯＨ、３０：１）、ｐｍｒ（ｐｐｍ）（ＣＤＣ
ｌ3 ）ではδ８．２５（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、２
Ｈ）、２．２−１．９（ｓのｍ、アセテート）が示され
た。
トロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（“２”）
の製造工程 酢酸（８０％）４４９ｍｌ中の例１の手順に従い調整さ
れた“１”（８ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）の溶液を一晩４
０〜４５℃に加熱した。反応混合物を氷水１．５ｌ中に
注ぎ、白色固体の生成物が沈澱した。この固体、“２”
を収集、乾燥し、６．４３ｇ（８３％）の“２”を得
た。薄層クロマドグラフィーでは、Ｒf ＝Ｏ（ＣＨＣｌ
3 ：ＭｅＯＨ、３０：１）、ｐｍｒ（ｐｐｍ）（ＣＤＣ
ｌ3 ）ではδ８．２５（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、２
Ｈ）、２．２−１．９（ｓのｍ、アセテート）が示され
た。
【００３０】例３ 過アセチル化さた６−Ｏ−ｔ−ブチル−ジメチルシリル
−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド
（“３”）の製造工程 ＤＭＦ５０ｍｌ中の、例２の手順に従い調整した“２”
（６．４ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリ
ジン（０．１５０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびｔ−ブチ
ルジメチルシリル クロリド（２．５ｇ、１６．６ｍｍ
ｏｌ）の溶液を、室温で３時間攪拌した。得られた溶液
を水１０ｍｌ中に注ぎ、白色固体様の生成物が沈澱し
た。この固体を収集、乾燥し、“３”を６．６ｇ（９９
％）得た。薄層クロマトグラフィーでは、Ｒf ＝６．０
（ＣＨＣｌ3 ：ＭｅＯＨ、１５：１）、ｐｍｒ（ｐｐ
ｍ）（ＣＤＣｌ3 ）では、δ８．２５（ｄ、２Ｈ）、
７．２５（ｄ、２Ｈ）、２．２−１．９（ｓのｍ、アセ
テート）、０．９（ｓ、９Ｈ）、０．１（ｓ、６Ｈ）が
示された。
−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド
（“３”）の製造工程 ＤＭＦ５０ｍｌ中の、例２の手順に従い調整した“２”
（６．４ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリ
ジン（０．１５０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびｔ−ブチ
ルジメチルシリル クロリド（２．５ｇ、１６．６ｍｍ
ｏｌ）の溶液を、室温で３時間攪拌した。得られた溶液
を水１０ｍｌ中に注ぎ、白色固体様の生成物が沈澱し
た。この固体を収集、乾燥し、“３”を６．６ｇ（９９
％）得た。薄層クロマトグラフィーでは、Ｒf ＝６．０
（ＣＨＣｌ3 ：ＭｅＯＨ、１５：１）、ｐｍｒ（ｐｐ
ｍ）（ＣＤＣｌ3 ）では、δ８．２５（ｄ、２Ｈ）、
７．２５（ｄ、２Ｈ）、２．２−１．９（ｓのｍ、アセ
テート）、０．９（ｓ、９Ｈ）、０．１（ｓ、６Ｈ）が
示された。
【００３１】例４ ６−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−４−ニトロフェニ
ル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（“４”）の製造工程 メタノール２０ｍｌ中の、例３の手順に従い調整された
“３”（６．６ｇ、２．９６ｍｍｏｌ）の溶液を、メタ
ノール中のナトリウム メトキシド（ナトリウム金属か
ら新たに調整した）３Ｍの２ｍｌに混合した。得られた
溶液を１時間攪拌し、酢酸０．２ｍｌを添加することに
より反応を停止させた。溶媒を真空内で除去し、黄色固
体（５．０ｇ）を得た。この黄色固体を更にＨＰＬＣ
（カラムＸＫ−５０、１５×６０ｃｍ、ＴＳＫ ＨＷ４
０Ｓ樹脂を充填、緩衝液：水、流速１．５ｍｌ／分、２
５ｍｌ／フラクション、２８０ｎｍで検出）で精製し
た。フラクション４０−５８を貯留し、限外濾過（５０
ＭＷで分断）で濃縮し、精製した“４”３．３ｇ（８０
％）を凍結乾燥して得た。ｐｍｒ（ｐｐｍ）（Ｄ2 Ｏ）
では、δ８．２（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、２Ｈ）、
０．８（ｓ、９Ｈ）、０．０５（ｓ、６Ｈ）、ＨＰＬＣ
では保持時間１０．７分、積分（ＡＸ−５カラム、アセ
トニトリル／水７２：２８Ｖ／Ｖ、１．０ｍｌ／分、３
０５ｎｍで検出）による純度９７％が示された。
ル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（“４”）の製造工程 メタノール２０ｍｌ中の、例３の手順に従い調整された
“３”（６．６ｇ、２．９６ｍｍｏｌ）の溶液を、メタ
ノール中のナトリウム メトキシド（ナトリウム金属か
ら新たに調整した）３Ｍの２ｍｌに混合した。得られた
溶液を１時間攪拌し、酢酸０．２ｍｌを添加することに
より反応を停止させた。溶媒を真空内で除去し、黄色固
体（５．０ｇ）を得た。この黄色固体を更にＨＰＬＣ
（カラムＸＫ−５０、１５×６０ｃｍ、ＴＳＫ ＨＷ４
０Ｓ樹脂を充填、緩衝液：水、流速１．５ｍｌ／分、２
５ｍｌ／フラクション、２８０ｎｍで検出）で精製し
た。フラクション４０−５８を貯留し、限外濾過（５０
ＭＷで分断）で濃縮し、精製した“４”３．３ｇ（８０
％）を凍結乾燥して得た。ｐｍｒ（ｐｐｍ）（Ｄ2 Ｏ）
では、δ８．２（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、２Ｈ）、
０．８（ｓ、９Ｈ）、０．０５（ｓ、６Ｈ）、ＨＰＬＣ
では保持時間１０．７分、積分（ＡＸ−５カラム、アセ
トニトリル／水７２：２８Ｖ／Ｖ、１．０ｍｌ／分、３
０５ｎｍで検出）による純度９７％が示された。
【００３２】例５ ６−Ｏ−ｔ−ブチルメチル−シリル−４−ニトロフェニ
ル−α−Ｄ−マルトペンタオシド（“５”）の製造工程 出発原料としてＰ−ニトロフェニル−４，６−ベンジリ
デン−α−Ｄ−マルトペンタオシドを代わりに用いて例
１−４の手順に従い“５”の合成を行った。４，６−Ｏ
−ベンジリデン−α−Ｄ−マルトペンタオシド１．０ｇ
（１．５７ｍｍｏｌ）で一連工程を開始し、例４の手順
に従い精製して所望“５”０．２８ｇ（２７％全収率）
を得た。ｐｍｒ（ｐｐｍ）（Ｄ2 Ｏ）では、δ８．２
（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、２Ｈ）、０．８（ｓ、９
Ｈ）、０．０（ｓ、６Ｈ）、ＨＰＬＣでは保持時間５．
０７分、積分（カラムおよび条件は例４のものに従う）
による純度９４％が示された。
ル−α−Ｄ−マルトペンタオシド（“５”）の製造工程 出発原料としてＰ−ニトロフェニル−４，６−ベンジリ
デン−α−Ｄ−マルトペンタオシドを代わりに用いて例
１−４の手順に従い“５”の合成を行った。４，６−Ｏ
−ベンジリデン−α−Ｄ−マルトペンタオシド１．０ｇ
（１．５７ｍｍｏｌ）で一連工程を開始し、例４の手順
に従い精製して所望“５”０．２８ｇ（２７％全収率）
を得た。ｐｍｒ（ｐｐｍ）（Ｄ2 Ｏ）では、δ８．２
（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、２Ｈ）、０．８（ｓ、９
Ｈ）、０．０（ｓ、６Ｈ）、ＨＰＬＣでは保持時間５．
０７分、積分（カラムおよび条件は例４のものに従う）
による純度９４％が示された。
【００３３】例６ α−アミラーゼ基質の動的および結合的値の測定 ５０ｍＭＮａｃｌ、５ｍＭＣａｃｌ2 、２７℃における
グルコアミラーゼ１０単位およびマルターゼ２５単位を
含むＰＩＰＥＳ緩衝液（ＰＨ７．０）５０ｍＭ中で全て
の反応が行われた。各基質濃度を二回試行し、各基質に
対して少なくとも８つの濃度を試験した。反応進行曲線
からのデータは、マルクワルト(Margua-ｒdt) 解析を用
いるミカエリス−メンテン(Michaelis-Menten)の式に適
合した。Ｋｍ値は混入する非保護基質に対して補正され
た。Ｇ7 基質に対するＶ、Ｋ値は２回実験の平均であ
る。各実験の動的パラメータの誤差は既報告の平均値の
５％以内であった。データは表１にまとめられている。
グルコアミラーゼ１０単位およびマルターゼ２５単位を
含むＰＩＰＥＳ緩衝液（ＰＨ７．０）５０ｍＭ中で全て
の反応が行われた。各基質濃度を二回試行し、各基質に
対して少なくとも８つの濃度を試験した。反応進行曲線
からのデータは、マルクワルト(Margua-ｒdt) 解析を用
いるミカエリス−メンテン(Michaelis-Menten)の式に適
合した。Ｋｍ値は混入する非保護基質に対して補正され
た。Ｇ7 基質に対するＶ、Ｋ値は２回実験の平均であ
る。各実験の動的パラメータの誤差は既報告の平均値の
５％以内であった。データは表１にまとめられている。
【００３４】例７ パラ−ニトロフェニル−６−テキシルジメチルシリル−
α−マルトヘプタオシドの製造 ジメチルホルムアミド２１２ｍｌ中の、“２”（例２に
よる）（２１．２２ｇ、１０．０５ｍｍｏｌ）、ジメチ
ルアミノピリジン（３．０６ｇ、２５．１ｍｍｏｌ）お
よびテキシルジメチルシリル クロリド（１，１，２−
トリメチルプロピルシリル クロリド）（４．４９ｇ、
２５．１ｍｍｏｌ）溶液を室温で１８時間攪拌した。得
られた溶液を砕いた氷２５０ｇを含む氷水７５０ｍｌ中
に注ぎ、沈澱物質を収集、乾燥してモノシリル化、一部
アセチル化された生成物２０．３ｇ（ＴＬＣのＲf ＝
０．４２、ＣＨ2 ＣＬ2 ：ＭｅＯＨ １５：１）を得
た。
α−マルトヘプタオシドの製造 ジメチルホルムアミド２１２ｍｌ中の、“２”（例２に
よる）（２１．２２ｇ、１０．０５ｍｍｏｌ）、ジメチ
ルアミノピリジン（３．０６ｇ、２５．１ｍｍｏｌ）お
よびテキシルジメチルシリル クロリド（１，１，２−
トリメチルプロピルシリル クロリド）（４．４９ｇ、
２５．１ｍｍｏｌ）溶液を室温で１８時間攪拌した。得
られた溶液を砕いた氷２５０ｇを含む氷水７５０ｍｌ中
に注ぎ、沈澱物質を収集、乾燥してモノシリル化、一部
アセチル化された生成物２０．３ｇ（ＴＬＣのＲf ＝
０．４２、ＣＨ2 ＣＬ2 ：ＭｅＯＨ １５：１）を得
た。
【００３５】モノシリル化、一部アセチル化されたマル
トヘプタオシド（２０．３ｇ、９ｍｍｏｌ）をメタノー
ル２０３ｍｌ中に溶解し、メタノール中１．６８Ｍナト
リウム メトキシドの１１．２ｍｌと混ぜた。１時間
後、酢酸５ｍｌを加え、真空下溶媒を除去して黄色固体
（１５ｇ）を得た。粗生成物を、移動相として水を用い
てＨＷ ４０Ｓ ＴＳＫカラム（５×３０ｃｍ）を通
し、次いでＸＡＤ−７樹脂を含むカラム（２．５×１５
ｃｍ）を通して精製した。吸収された精製物を６０％水
性メタノールで溶出させた。生成物のフラクションを真
空下メタノールを除去して濃縮し、凍結乾燥して所望物
質６．３ｇを得た。ＨＰＬＣ（ＡＸ−５カラム、ＣＨ3
ＣＮ／Ｈ2 Ｏ ７２／２８（Ｖ／Ｖ）、流速１ｍｌ／
分、３０５ｎｍで検出）による純度分析で約９７％の純
度が示された。
トヘプタオシド（２０．３ｇ、９ｍｍｏｌ）をメタノー
ル２０３ｍｌ中に溶解し、メタノール中１．６８Ｍナト
リウム メトキシドの１１．２ｍｌと混ぜた。１時間
後、酢酸５ｍｌを加え、真空下溶媒を除去して黄色固体
（１５ｇ）を得た。粗生成物を、移動相として水を用い
てＨＷ ４０Ｓ ＴＳＫカラム（５×３０ｃｍ）を通
し、次いでＸＡＤ−７樹脂を含むカラム（２．５×１５
ｃｍ）を通して精製した。吸収された精製物を６０％水
性メタノールで溶出させた。生成物のフラクションを真
空下メタノールを除去して濃縮し、凍結乾燥して所望物
質６．３ｇを得た。ＨＰＬＣ（ＡＸ−５カラム、ＣＨ3
ＣＮ／Ｈ2 Ｏ ７２／２８（Ｖ／Ｖ）、流速１ｍｌ／
分、３０５ｎｍで検出）による純度分析で約９７％の純
度が示された。
【００３６】上記事項に対する種々の小さな修正が本発
明の精神および範囲を逸脱することなくなされ得るであ
ろう。
明の精神および範囲を逸脱することなくなされ得るであ
ろう。
【００３７】
【表１】
【００３８】
【表２】
【図面の簡単な説明】
【図１】例７に記載された反応工程を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 デビッド シーナ アメリカ合衆国、マサチューセッツ州 02146、ブルックライン、ビーコン スト リート 1244
Claims (20)
- 【請求項１】 一般式： 【化１】 〔式中、Ｒは、一般式 Ｒ3 、Ｒ4 、Ｒ5 Ｓi − から
成る直鎖状または分岐状のアルキル基またはアリール基
で置換されたシリル基を表わし、Ｒ1 は水素原子を表わ
し、Ｒ3 、Ｒ4 、Ｒ5 はもしアルキル鎖ならば、それぞ
れ、１〜６個の炭素原子を含み、一方もしアリール基な
らば、水素原子、メチル基もしくはメトキシ基で置換さ
れており、Ｒ2 は少なくとも２個のグルコース単位を含
むオリゴグルコシド残基を表わし、Ｘは、水素原子また
はＲ2 とＸとの間の結合の切断の際、光学的に測定可能
な変化を示す標識基を表わす。〕の化合物。 - 【請求項２】 Ｘがニトロフェニル基である請求項１の
化合物。 - 【請求項３】 Ｘが２−クロロ−４−ニトロフェニル基
である請求項１の化合物。 - 【請求項４】 Ｘが４−メチルウンベリフェロンである
請求項１の化合物。 - 【請求項５】 Ｘがルシフェリンである請求項１の化合
物。 - 【請求項６】 Ｒが、各アルキル基につき１〜６個の炭
素原子から成るアルキル基で３置換されたシリル基であ
る請求項１の化合物。 - 【請求項７】 シリル基が、メチル、エチル、ｎ−プロ
プル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブ
チル、ｎ−ペンチル基、これらの異性体、ｎ−ヘキシル
基、この異性体、テキシルメチル基およびシクロヘキシ
ル基からなる群から選択されるアルキル基で置換されて
いる請求項６記載の化合物。 - 【請求項８】 シリル基がテキシルジメチルシリル基で
ある請求項７記載の化合物。 - 【請求項９】 シリル基が、フェニル、ｏ，ｐもしくは
ｍ−トリル、ｏ，ｐもしくはｍ−メトキシフェニル基お
よびジ−もしくはトリ−メチル置換されたフェニル基異
性体からなる群から選択されるアリール基で置換される
請求項６の化合物。 - 【請求項１０】 Ｒ2 が３，４または６個のグルコース
単位を含む請求項１の化合物。 - 【請求項１１】 ６−Ｏ−テキシルジメチルシリル−４
−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシドである
請求項１の化合物。 - 【請求項１２】 ６−Ｏ−テキシルジメチルシリル−４
−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトペンタオシドである
請求項１の化合物。 - 【請求項１３】 （ａ）一般式： 【化２】 〔式中、Ｘは請求項１に定められたものであり、Ｒ2 は
２〜７個のグルコース単位からなり、ＲおよびＲ1 は保
護基である〕の化合物と、対応するアシル誘導体を生成
させる酸塩化物または酸無水物と反応させる工程と、 （ｂ）工程（ａ）で得られる物質と、保護基ＲおよびＲ
1 を除去させる酸または塩基を反応させる工程と、 （ｃ）（ｉ）メチル、エチル、ｎ−プロプル、イソプロ
ピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペン
チル基、これらの異性体、ｎ−ヘキシル基、この異性
体、テキシルメチル基およびシクロヘキシル基からなる
群から選択されるアルキル基、または（ｉｉ）フェニ
ル、ｏ，ｐもしくはｍ−トリル、ｏ，ｐもしくはｍ−メ
トキシフェニル基およびジ−もしくはトリ−メチル置換
されたフェニル異性体からなる群から選択されるアリー
ル基、で置換されるシリル基をＲに導入するシリル化試
薬と、工程（ｂ）で得られる物質を接触させる工程と、 （ｄ）アシル基を除去する試薬と、工程（ｃ）で得られ
る物質を接触させる工程、から構成される請求項１の化
合物の製造方法。 - 【請求項１４】 出発原料が、４，６−Ｏ−ベンジリデ
ン−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド
である請求項１３の製造方法。 - 【請求項１５】 出発原料が４，６−Ｏ−ベンジリデン
−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトペンタオシドで
ある請求項１３の製造方法。 - 【請求項１６】 アシル誘導体がアセチル化物である請
求項１３の製造方法。 - 【請求項１７】 アシル誘導体がベンゾイル化物である
請求項１３の製造方法。 - 【請求項１８】 シリル化試薬がクロロシラン、クロロ
テキシルジメチルシランからなる群から選択される請求
項１３の製造方法。 - 【請求項１９】 アシル基を除去するための試薬を、ア
シル誘導体中の各アシル基に対して、約０．０５〜２．
５当量のナトリウム アルコキシドの比率で存在させる
請求項１３の製造方法。 - 【請求項２０】 前記試薬がナトリウム メトキシドで
ある請求項１９の製造方法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US50768990A | 1990-04-10 | 1990-04-10 | |
| US62794190A | 1990-12-14 | 1990-12-14 | |
| US07/507689 | 1990-12-14 | ||
| US07/627941 | 1990-12-14 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06220080A true JPH06220080A (ja) | 1994-08-09 |
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Family
ID=27055946
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3078002A Expired - Fee Related JP3016099B2 (ja) | 1990-04-10 | 1991-04-10 | オリゴ糖化合物およびその製法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
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