JPH06220080A - オリゴ糖化合物およびその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【目的】 α−アミラーゼを検出する活性測定に有用で
ある新規な保護されたオリゴ糖化合物。 【構成】 一般式： 〔Ｒは、一般式 Ｒ₃ 、Ｒ₄ 、Ｒ₅ Ｓ_i − から成る直
鎖状または分岐状のアルキル基またはアリール基で置換
されたシリル基。Ｒ₁ は水素原子。Ｒ₃ 、Ｒ₄ 、Ｒ₅ は
アルキル鎖ならば、１〜６個の炭素原子を含むアルキル
鎖等。Ｒ₂ は少なくとも２個のグルコース単位を含むオ
ルゴグルコシド残基。Ｘは光学的に測定可能な変化を示
す標識基。〕の化合物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の背景】本発明は、新規なオリゴ糖化合物、その
製法およびα−アミラーゼの活性の測定のための改良さ
れた基質としてのその使用に関する。

【０００２】尿および血清中のα−アミラーゼの測定
は、膵臓疾患の診断において広く行われている。伝統的
にそのような活性測定はオリゴ糖α−アミラーゼ基質を
利用している。これらの基質は、α−アミラーゼと、例
えばα−グルコシダーゼ、β−グルコシダーゼまたはグ
ルコアミラーゼのようなエキソ酵素との共働作用によっ
て切断されて小さなフラグメントになる。

【０００３】ブレア(Blair) の米国特許第４，６４９，
１０８号は、α−アミラーゼの活性測定法を記述してい
る。その測定法は、還元末端に色原体を有し、かつ非還
元末端「ブロック（保護）する」置換基（例えば、カル
ボン酸エステル（例えば、アセチルまたはベンゾイ
ル）；リン酸エステル；スルホン酸エステル（例えば、
トルエンスルホニルまたはメタンスルホニル）；エーテ
ル（例えば、ベンジル、シリルおよびトリフェニルメチ
ル）およびα−１，４−結合したグルコース以外の単糖
類）を有し、少なくとも３つのグルコース単位の鎖長か
ら成るオリゴ糖、好適にブロックされた基質として４，
６−Ｏ−ベンジリデン、を利用する。

【０００４】ラウシャー(Rauscher)等の米国特許第４，
７０９，０２０号は、ブレアの米国特許第４，６４９，
１０８号に関連し、包含されている化合物およびその製
法を記述している。ラウシャー等の特許は、α−アミラ
ーゼ測定法においてブレアにより記述される化合物と同
様の化合物（例えば、４，６−Ｏ−ベンジリデン−４−
ニトロフェニル−マルトヘプタオース）の利点を述べて
いる。

【０００５】大道、池中の（１９８３年）J.Biochem.誌
１０５５頁は、非還元末端グルコースのＣ−６位を２−
ピリジルアミノ基で置換したα−アミラーゼのためのけ
い光オリゴ糖基質を記述する。この化合物はエキソ型の
グルコシダーゼによる分解に抵抗する。しかしながら、
この化合物は還元末端に色原体（例えば、Ｐ−ニトロフ
ェノール）を伴わず、そのアミラーゼ活性の測定は、好
ましくは避けられるべき欠点であるＨＰＬＣ（高速液体
クロマトグラフィー）による分析を必要とする。

【０００６】里村等の（１９８８年）Carbohydrate Re
s. 誌１０７頁は、非還元末端グルコースのＣ−６位に
ベンジル基を有するＰ−フェニル−α−マルトペンタオ
シドを記述している。この化合物は、α−アミラーゼの
測定においてベンジル置換基がエキソ型のグルコシダー
ゼの作用をブロックする基質として使用されるのに適し
ている（里村等（１９８８年）Clin. Chem. Acta．誌３
１５頁）。しかしながら、このブロックされた基質の合
成には、回避されるべき重大な欠点がある。すなわち、
非常に危険で爆発性で有毒の試薬（例えば、ジメチルア
ミノボラン）を伴う。

【０００７】ドリスコル(Driscoll)等の米国特許第４，
１０２，７４７号は、還元末端に色原体（Ｐ−ニトロフ
ェノールまたは“ＰＮＰ”）を有する、鎖長４〜１０の
グルコース単位のオリゴ糖を用いる活性測定法を記述す
る。この鎖はα−グルコシダーゼによる切断に対して安
定であり、α−アミラーゼによる切断が「α−グルコシ
ダーゼの作用を受けて・・・・・Ｐ−ニトロフェノール
を放出する小フラグメント」を生ずる。

【０００８】マーシャル(Marshall)等の（１９７７年）
Clin. Chimica Acta誌２７７頁は、「グルコシダーゼの
作用に対する保護を含む修飾デンプン状多糖」を記述
し、「エキソ酵素の作用に対するこのような保護が、・
・・・・制限付き過ヨウ素酸塩酸化によって・・・・・
または単糖残基の置換によって通常導入される」との述
べている。

【０００９】

【発明の要旨】一般に、本発明は、次の一般式を有する
一連の新規な「保護された」オリゴ糖基質を特徴とす
る。

【００１０】

【化３】

【００１１】上記一般式において、Ｒは、式Ｒ₃ Ｒ₄ Ｒ
₅ Ｓi −を有する直鎖状もしくは分岐状のアルキルまた
はアリール置換されたシリル基を表わし：Ｒ₁ は水素原
子を表わし、あるいはＲ₁ とＲはたがいに独立して各々
が直鎖状もしくは分岐状のアルキルまたはアリール置換
されたシリル基、またはＲとＲ₁ は一緒になってケイ素
が直鎖状もしくは分岐状のアルキルもしくはアリール基
で置換されたシリル橋を形成し；Ｒ₂ は少なくとも２つ
のグルコース単位を含むオリゴ糖残基を表わし；Ｘは水
素原子またはＲ₂ とＸ間のグルコシド結合の切断に際し
光学的に測定可能な変化を現わす標識基（ラベル）を表
わす。本発明の最も好ましい実施例は、６−Ｏ−テキシ
ルジメチルシリル−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マル
トヘプタオシドと、６−Ｏ−テキシルジメチルシリル−
４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトペンタオシドから
成る。

【００１２】本発明者は、本発明の化合物がα−グルコ
シダーゼの存在下においてさえも、何ら変化せず、それ
故長期間経過後でも正確なα−アミラーゼの値を与える
ことを発見した。更に本発明は、予期せずに、本発明の
化合物が記述したオリゴ糖基質、特にラウシャー等の米
国特許第４，７０９，０２０とブレアの米国特許第４，
６４９，１０８の基質に比べ際立った利点をもたらすこ
とを見い出した。これらの利点は、α−アミラーゼの改
善されたＶ／Ｋ値を引き出し、部分的にα−アミラーゼ
に対する感度を明らかに改善し、それによりアッセイ毎
の基質使用量を減少させるかもしくはα−アミラーゼの
検出感度を向上させる。更に本発明者は後述されるよう
に、本発明の化合物が、エンド酵素であるαアミラーゼ
の作用を受ける際、ユニークな切断パターンを示すこと
を発見した。

【００１３】

【表の簡単な説明】表１は、α−アミラーゼを伴う本発
明の化合物の結合・動的パラメータを記述するデータを
示す。

【００１４】表２は、α−アミラーゼを伴う本発明の化
合物の切断パターンを記述するデータを示す。

【００１５】

【詳細な説明および最良の形態】表１のデータは、本発
明のシリルオリゴ糖と従来の４，６−Ｏ−ベンジリデン
誘導体との間で知見されるα−アミラーゼに関する動的
・結合の値における差を示す。例えば、６−Ｏ−ｔ−ブ
チルジメチルシリル−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マ
ルトヘプタオシド（シリル−Ｇ₇ −ＰＮＰ）の結合定数
（Ｋｍ）は、従来の４，６−Ｏ−ベンジリデン誘導体
（Ｂz −Ｇ₇ −ＰＮＰ）の値９７μＭと比べて、８１μ
Ｍである。またシリル−Ｇ₇ −ＰＮＰは、Ｖmax に関し
１．１５×１０^-2μＭｏｌｅｓ ｍｉｎ^-1で、Ｂz −Ｇ
₇ −ＰＮＰより４６％速い。本発明の実施例であるシリ
ル−Ｇ₅ −ＰＮＰは、従来のＢz −Ｇ₅ −ＰＮＰの１８
３μＭと比して８７μＭのＫｍを示し、Ｂz −Ｇ₅ −Ｐ
ＮＰよりも１９％大きい最終のＶ／Ｋ値を有する。この
シリル−Ｇ₇ −ＰＮＰ誘導体の改善されたＫｍおよびＸ
max 値は、この実施例を用いα−アミラーゼのアッセイ
において、（ｉ）基質使用量を節約し得る、（ｉi ）α
−アミラーゼに対する感度が増加する、という利点が得
られることを示す。

【００１６】表２に示されるデータは、従来のベンジリ
デン誘導体と比べ、本発明のシリル誘導体のα−アミラ
ーゼとの反応性の差を示している。これらの差は、膵臓
と唾液双方のα−アミラーゼを用いた加水分解の間に観
察される分解パターンで明示される。例えば、シリル−
Ｇ₇ −誘導体は、主として３位と４位のグルコース間で
切断される（６６〜６７％）のに対し、ベンジリデン−
Ｇ₇ は２位と３位のグルコース間で切断される（６３〜
７４％）。シリル−Ｇ₅ 誘導体は、１位と２位および２
位と３位のグルコース単位間でほぼ等しく切断される
（膵臓および唾液α−アミラーゼに対し、それぞれ４０
〜６０％）のに対し、ベンジリデン−Ｇ₅誘導体は、主
として３位と４位のグルコース間で切断される（７８〜
８４％）。これらのデータは、本発明のシリルオリゴ糖
が従来の４，６−Ｏ−ベンジリデン誘導体と比べ、基本
的に異なる基質としてα−アミラーゼの作用を受け、そ
れゆえ均等物としてふるまわないという発明者の確信を
裏付ける。

【００１７】シリル基のＲ₃ 、Ｒ₄ 、Ｒ₅ の各々に対す
るアルキル置換基の他の具体例は、メチル、エチル、ｎ
−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、
ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル基、これらの異性体、ｎ−ヘ
キシル、この異性体、並びにシクロヘキシル基を含む。
シリル基のＲ₃ 、Ｒ₄ 、Ｒ₅ の各々に対するアリール置
換基の具体例は、個々に、フェニル、ｏ，ｐまたはｍ−
トリル、ｏ，ｐまたはｍ−メトキシフェニル、並びにジ
−およびトリ−メチル置換されたフェニル異性体の各々
を含む。本発明の好ましい化合物は、Ｒ₁ がＨで、Ｒが
アルキル置換された基、特に好ましくはテキシルジメチ
ルシリルであるものである。

【００１８】Ｒ₂ から成る適用可能なオリゴグルコシド
残基の内、３，４および６個のグルコース単位からなる
ものが好ましい。なぜなら、これらの基質はアッセイに
おいてα−アミラーゼに対する好ましい性質を示すから
である。

【００１９】好ましいラベル、Ｘは、４−ニトロフェノ
ール、２−ニトロフェノール、２−クロロ−４−ニトロ
フェノール（色原体）、４−メチルウンベリフェロンの
ようなクマリン誘導体（けい光源）およびルシフェリン
（化学発光置換基）であり、特に４−ニトロフェノー
ル、２−クロロ−４−ニトロフェノールが好ましい。

【００２０】

【本発明の化合物の合成】本発明の化合物の製法は、下
記に示されるような非還元末端グルコースのＣ−６位ま
たはＣ−４／Ｃ−６位の水酸基に関するいくつかの保護
基を含むオリゴグルコシドを用いて優位に開始され得
る。４，６−Ｏ−ベンジリデンの保護基は開始物質とし
て好ましい。また、そのオリゴグルコシドでは上記した
ような光学的に測定可能な末端基Ｘを選択的に伴うこと
が可能である。

【００２１】遊離の水酸基は、最初に、例えば酸塩化物
または酸無水物のいずれかを用いる処理によりアシル誘
導体に転化することで、反応性の水素原子を除去して保
護される。

【００２２】適当なアシル基は、アセチル、プロピオニ
ル、ブタノイル、ヘキサノイルおよびベンゾイルを含
み、アセチルが最も好ましい。最も好ましいアシル化試
薬は無水酢酸である。

【００２３】次いで、４，６−Ｏ−保護基、特にベンジ
リデンは、アシル基と還元末端の色原体Ｘが、妨害され
ないような緩やかな酸性加水分解により除去される。当
業者に知られた標準的な酸のいずれかを使用でき、酢酸
が好適である。

【００２４】次いで、遊離のＣ−６位の水酸基、そして
所望ならばＣ−４位の水酸基は、活性なシリル化試薬を
用いる反応によりシリルエーテル誘導体に転化される。
当業者に知られたシリル化試薬および反応システムのい
ずれかを使用できる。

【００２５】使用可能なシリル化試薬の具体例は、クロ
ロトリメチルシラン、ビス−トリメチルシリルアセトア
ミド、クロロテキシルジメチルシラン、クロロトリフェ
ニルシランおよびジクロロジフェニルシランを含むが、
これらに限られない。これらの内、クロロテキシルジメ
チルシランが最も好ましい。

【００２６】最後に、アシル基は塩基性加水分解により
除去される。当業者に知られたエステル加水分解の標準
方法のいずれかが使用でき、一般的にナトリウムメトキ
シドが好ましい。本発明者は、この工程におけるアシル
基の除去条件が最終生成物の収率を純度を定める点で重
要であることを発見した。特に、ナトリウムメトキシド
のアシル基に対するモル比率と、過アシル化合物の濃度
が、当該反応を成功させるのに重要である。本発明者
は、メトキシドの過アシル基に対するモル比率で少なく
とも０．０５から２．５当量までが必要とされ、メトキ
シドの当量対アシル基の比率で０．１対１が好適である
ことを知見した。過アシル化シリル化は、５から５０ｍ
Ｍの間の濃度で使用されるべきであり、３０ｍＭの濃度
が最も好ましい。

【００２７】次の具体例は本発明の例示として与えられ
ており、限定するものとみなされるべきではない。

【００２８】例１ 過アセチル化された４，６−Ｏ−ベンジリデン−４−ニ
トロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（“１”）
の製造工程 ピリジン７５ｍｌ中のＰ−ニトロフェニル−４，６−Ｏ
−ベンジリデン−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（５ｇ、
３．６５ｍｍｏｌ）と、ジメチルアミノピリジン（４４
０ｍｇ、３．５ｍｍｏｌ）の溶液を４℃まで冷却した。
この溶液に無水酢酸（３０ｍｌ）を滴下して加えた。一
晩攪拌した後、得られた淡褐色の溶液を高速攪拌された
氷水中にゆっくりと注ぎ、生成物が白い固体として沈澱
した。この固体を収集、乾燥し、過酢酸塩“１”（８．
０２ｇ、９２％）を得た。薄層クロマトグラフィーで
は、Ｒ_f ＝０．５（ＣＨＣＬ₃ ：ＭｅＯＨ、１５：
１）、ｐｍｒ（ｐｐｍ）（ＣＤＣｌ₃ ）では、δ８．２
５（ｄ、２Ｈ）、７．２８（ｄ、２Ｈ）、７．３−７．
５（ｍ、５Ｈ）、２．２−１．９（ｓのｍ、アセテー
ト）が示された。

【００２９】例２ 過アセチル化された４，６−Ｏ−ジヒドロキシ−４−ニ
トロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（“２”）
の製造工程 酢酸（８０％）４４９ｍｌ中の例１の手順に従い調整さ
れた“１”（８ｇ、３．５７ｍｍｏｌ）の溶液を一晩４
０〜４５℃に加熱した。反応混合物を氷水１．５ｌ中に
注ぎ、白色固体の生成物が沈澱した。この固体、“２”
を収集、乾燥し、６．４３ｇ（８３％）の“２”を得
た。薄層クロマドグラフィーでは、Ｒ_f ＝Ｏ（ＣＨＣｌ
₃ ：ＭｅＯＨ、３０：１）、ｐｍｒ（ｐｐｍ）（ＣＤＣ
ｌ₃ ）ではδ８．２５（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、２
Ｈ）、２．２−１．９（ｓのｍ、アセテート）が示され
た。

【００３０】例３ 過アセチル化さた６−Ｏ−ｔ−ブチル−ジメチルシリル
−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド
（“３”）の製造工程 ＤＭＦ５０ｍｌ中の、例２の手順に従い調整した“２”
（６．４ｇ、２．９８ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリ
ジン（０．１５０ｇ、１．２ｍｍｏｌ）およびｔ−ブチ
ルジメチルシリル クロリド（２．５ｇ、１６．６ｍｍ
ｏｌ）の溶液を、室温で３時間攪拌した。得られた溶液
を水１０ｍｌ中に注ぎ、白色固体様の生成物が沈澱し
た。この固体を収集、乾燥し、“３”を６．６ｇ（９９
％）得た。薄層クロマトグラフィーでは、Ｒ_f ＝６．０
（ＣＨＣｌ₃ ：ＭｅＯＨ、１５：１）、ｐｍｒ（ｐｐ
ｍ）（ＣＤＣｌ₃ ）では、δ８．２５（ｄ、２Ｈ）、
７．２５（ｄ、２Ｈ）、２．２−１．９（ｓのｍ、アセ
テート）、０．９（ｓ、９Ｈ）、０．１（ｓ、６Ｈ）が
示された。

【００３１】例４ ６−Ｏ−ｔ−ブチルジメチルシリル−４−ニトロフェニ
ル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（“４”）の製造工程 メタノール２０ｍｌ中の、例３の手順に従い調整された
“３”（６．６ｇ、２．９６ｍｍｏｌ）の溶液を、メタ
ノール中のナトリウム メトキシド（ナトリウム金属か
ら新たに調整した）３Ｍの２ｍｌに混合した。得られた
溶液を１時間攪拌し、酢酸０．２ｍｌを添加することに
より反応を停止させた。溶媒を真空内で除去し、黄色固
体（５．０ｇ）を得た。この黄色固体を更にＨＰＬＣ
（カラムＸＫ−５０、１５×６０ｃｍ、ＴＳＫ ＨＷ４
０Ｓ樹脂を充填、緩衝液：水、流速１．５ｍｌ／分、２
５ｍｌ／フラクション、２８０ｎｍで検出）で精製し
た。フラクション４０−５８を貯留し、限外濾過（５０
ＭＷで分断）で濃縮し、精製した“４”３．３ｇ（８０
％）を凍結乾燥して得た。ｐｍｒ（ｐｐｍ）（Ｄ₂ Ｏ）
では、δ８．２（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、２Ｈ）、
０．８（ｓ、９Ｈ）、０．０５（ｓ、６Ｈ）、ＨＰＬＣ
では保持時間１０．７分、積分（ＡＸ−５カラム、アセ
トニトリル／水７２：２８Ｖ／Ｖ、１．０ｍｌ／分、３
０５ｎｍで検出）による純度９７％が示された。

【００３２】例５ ６−Ｏ−ｔ−ブチルメチル−シリル−４−ニトロフェニ
ル−α−Ｄ−マルトペンタオシド（“５”）の製造工程 出発原料としてＰ−ニトロフェニル−４，６−ベンジリ
デン−α−Ｄ−マルトペンタオシドを代わりに用いて例
１−４の手順に従い“５”の合成を行った。４，６−Ｏ
−ベンジリデン−α−Ｄ−マルトペンタオシド１．０ｇ
（１．５７ｍｍｏｌ）で一連工程を開始し、例４の手順
に従い精製して所望“５”０．２８ｇ（２７％全収率）
を得た。ｐｍｒ（ｐｐｍ）（Ｄ₂ Ｏ）では、δ８．２
（ｄ、２Ｈ）、７．２５（ｄ、２Ｈ）、０．８（ｓ、９
Ｈ）、０．０（ｓ、６Ｈ）、ＨＰＬＣでは保持時間５．
０７分、積分（カラムおよび条件は例４のものに従う）
による純度９４％が示された。

【００３３】例６ α−アミラーゼ基質の動的および結合的値の測定 ５０ｍＭＮａｃｌ、５ｍＭＣａｃｌ₂ 、２７℃における
グルコアミラーゼ１０単位およびマルターゼ２５単位を
含むＰＩＰＥＳ緩衝液（ＰＨ７．０）５０ｍＭ中で全て
の反応が行われた。各基質濃度を二回試行し、各基質に
対して少なくとも８つの濃度を試験した。反応進行曲線
からのデータは、マルクワルト(Margua-ｒdt) 解析を用
いるミカエリス−メンテン(Michaelis-Menten)の式に適
合した。Ｋｍ値は混入する非保護基質に対して補正され
た。Ｇ₇ 基質に対するＶ、Ｋ値は２回実験の平均であ
る。各実験の動的パラメータの誤差は既報告の平均値の
５％以内であった。データは表１にまとめられている。

【００３４】例７ パラ−ニトロフェニル−６−テキシルジメチルシリル−
α−マルトヘプタオシドの製造 ジメチルホルムアミド２１２ｍｌ中の、“２”（例２に
よる）（２１．２２ｇ、１０．０５ｍｍｏｌ）、ジメチ
ルアミノピリジン（３．０６ｇ、２５．１ｍｍｏｌ）お
よびテキシルジメチルシリル クロリド（１，１，２−
トリメチルプロピルシリル クロリド）（４．４９ｇ、
２５．１ｍｍｏｌ）溶液を室温で１８時間攪拌した。得
られた溶液を砕いた氷２５０ｇを含む氷水７５０ｍｌ中
に注ぎ、沈澱物質を収集、乾燥してモノシリル化、一部
アセチル化された生成物２０．３ｇ（ＴＬＣのＲ_f ＝
０．４２、ＣＨ₂ ＣＬ₂ ：ＭｅＯＨ １５：１）を得
た。

【００３５】モノシリル化、一部アセチル化されたマル
トヘプタオシド（２０．３ｇ、９ｍｍｏｌ）をメタノー
ル２０３ｍｌ中に溶解し、メタノール中１．６８Ｍナト
リウム メトキシドの１１．２ｍｌと混ぜた。１時間
後、酢酸５ｍｌを加え、真空下溶媒を除去して黄色固体
（１５ｇ）を得た。粗生成物を、移動相として水を用い
てＨＷ ４０Ｓ ＴＳＫカラム（５×３０ｃｍ）を通
し、次いでＸＡＤ−７樹脂を含むカラム（２．５×１５
ｃｍ）を通して精製した。吸収された精製物を６０％水
性メタノールで溶出させた。生成物のフラクションを真
空下メタノールを除去して濃縮し、凍結乾燥して所望物
質６．３ｇを得た。ＨＰＬＣ（ＡＸ−５カラム、ＣＨ₃
ＣＮ／Ｈ₂ Ｏ ７２／２８（Ｖ／Ｖ）、流速１ｍｌ／
分、３０５ｎｍで検出）による純度分析で約９７％の純
度が示された。

【００３６】上記事項に対する種々の小さな修正が本発
明の精神および範囲を逸脱することなくなされ得るであ
ろう。

【００３７】

【表１】

【００３８】

【表２】

【図面の簡単な説明】

【図１】例７に記載された反応工程を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 デビッド シーナ アメリカ合衆国、マサチューセッツ州 02146、ブルックライン、ビーコン スト リート 1244

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式： 【化１】 〔式中、Ｒは、一般式 Ｒ₃ 、Ｒ₄ 、Ｒ₅ Ｓ_i − から
   成る直鎖状または分岐状のアルキル基またはアリール基
   で置換されたシリル基を表わし、Ｒ₁ は水素原子を表わ
   し、Ｒ₃ 、Ｒ₄ 、Ｒ₅ はもしアルキル鎖ならば、それぞ
   れ、１〜６個の炭素原子を含み、一方もしアリール基な
   らば、水素原子、メチル基もしくはメトキシ基で置換さ
   れており、Ｒ₂ は少なくとも２個のグルコース単位を含
   むオリゴグルコシド残基を表わし、Ｘは、水素原子また
   はＲ₂ とＸとの間の結合の切断の際、光学的に測定可能
   な変化を示す標識基を表わす。〕の化合物。
2. 【請求項２】 Ｘがニトロフェニル基である請求項１の
   化合物。
3. 【請求項３】 Ｘが２−クロロ−４−ニトロフェニル基
   である請求項１の化合物。
4. 【請求項４】 Ｘが４−メチルウンベリフェロンである
   請求項１の化合物。
5. 【請求項５】 Ｘがルシフェリンである請求項１の化合
   物。
6. 【請求項６】 Ｒが、各アルキル基につき１〜６個の炭
   素原子から成るアルキル基で３置換されたシリル基であ
   る請求項１の化合物。
7. 【請求項７】 シリル基が、メチル、エチル、ｎ−プロ
   プル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブ
   チル、ｎ−ペンチル基、これらの異性体、ｎ−ヘキシル
   基、この異性体、テキシルメチル基およびシクロヘキシ
   ル基からなる群から選択されるアルキル基で置換されて
   いる請求項６記載の化合物。
8. 【請求項８】 シリル基がテキシルジメチルシリル基で
   ある請求項７記載の化合物。
9. 【請求項９】 シリル基が、フェニル、ｏ，ｐもしくは
   ｍ−トリル、ｏ，ｐもしくはｍ−メトキシフェニル基お
   よびジ−もしくはトリ−メチル置換されたフェニル基異
   性体からなる群から選択されるアリール基で置換される
   請求項６の化合物。
10. 【請求項１０】 Ｒ₂ が３，４または６個のグルコース
    単位を含む請求項１の化合物。
11. 【請求項１１】 ６−Ｏ−テキシルジメチルシリル−４
    −ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシドである
    請求項１の化合物。
12. 【請求項１２】 ６−Ｏ−テキシルジメチルシリル−４
    −ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトペンタオシドである
    請求項１の化合物。
13. 【請求項１３】 （ａ）一般式： 【化２】 〔式中、Ｘは請求項１に定められたものであり、Ｒ₂ は
    ２〜７個のグルコース単位からなり、ＲおよびＲ₁ は保
    護基である〕の化合物と、対応するアシル誘導体を生成
    させる酸塩化物または酸無水物と反応させる工程と、 （ｂ）工程（ａ）で得られる物質と、保護基ＲおよびＲ
    ₁ を除去させる酸または塩基を反応させる工程と、 （ｃ）（ｉ）メチル、エチル、ｎ−プロプル、イソプロ
    ピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペン
    チル基、これらの異性体、ｎ−ヘキシル基、この異性
    体、テキシルメチル基およびシクロヘキシル基からなる
    群から選択されるアルキル基、または（ｉｉ）フェニ
    ル、ｏ，ｐもしくはｍ−トリル、ｏ，ｐもしくはｍ−メ
    トキシフェニル基およびジ−もしくはトリ−メチル置換
    されたフェニル異性体からなる群から選択されるアリー
    ル基、で置換されるシリル基をＲに導入するシリル化試
    薬と、工程（ｂ）で得られる物質を接触させる工程と、 （ｄ）アシル基を除去する試薬と、工程（ｃ）で得られ
    る物質を接触させる工程、から構成される請求項１の化
    合物の製造方法。
14. 【請求項１４】 出発原料が、４，６−Ｏ−ベンジリデ
    ン−４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド
    である請求項１３の製造方法。
15. 【請求項１５】 出発原料が４，６−Ｏ−ベンジリデン
    −４−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトペンタオシドで
    ある請求項１３の製造方法。
16. 【請求項１６】 アシル誘導体がアセチル化物である請
    求項１３の製造方法。
17. 【請求項１７】 アシル誘導体がベンゾイル化物である
    請求項１３の製造方法。
18. 【請求項１８】 シリル化試薬がクロロシラン、クロロ
    テキシルジメチルシランからなる群から選択される請求
    項１３の製造方法。
19. 【請求項１９】 アシル基を除去するための試薬を、ア
    シル誘導体中の各アシル基に対して、約０．０５〜２．
    ５当量のナトリウム アルコキシドの比率で存在させる
    請求項１３の製造方法。
20. 【請求項２０】 前記試薬がナトリウム メトキシドで
    ある請求項１９の製造方法。