JPH0646895A - α‐アミラーゼ活性の測定方法 - Google Patents
α‐アミラーゼ活性の測定方法Info
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- JPH0646895A JPH0646895A JP22091592A JP22091592A JPH0646895A JP H0646895 A JPH0646895 A JP H0646895A JP 22091592 A JP22091592 A JP 22091592A JP 22091592 A JP22091592 A JP 22091592A JP H0646895 A JPH0646895 A JP H0646895A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 α‐アミラーゼ含有試料に、一般式
【化１】
（式中のＲは芳香族発色性基、Ｘはアジド基、ハロゲン
原子、Ｎ‐モノアルキルカルバモイルオキシ基又はアル
コキシメトキシ基、ＹはＮ‐モノアルキルカルバモイル
オキシ基、アルコキシメトキシ基であるが、ＸとＹのい
ずれか一方は水酸基であってもよい）で表わされる非還
元末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導体とβ‐グルコ
シダーゼを添加して酵素反応を行わせ、遊離する芳香族
発色性化合物を定量するα‐アミラーゼ活性の測定方法
である。 【効果】 非還元末端が修飾された特定のβ‐マルトオ
リゴシド誘導体を基質として用いることにより、共役酵
素としてβ‐グルコシダーゼのみを使用することで、α
‐アミラーゼ活性を精度よく測定することができる。
原子、Ｎ‐モノアルキルカルバモイルオキシ基又はアル
コキシメトキシ基、ＹはＮ‐モノアルキルカルバモイル
オキシ基、アルコキシメトキシ基であるが、ＸとＹのい
ずれか一方は水酸基であってもよい）で表わされる非還
元末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導体とβ‐グルコ
シダーゼを添加して酵素反応を行わせ、遊離する芳香族
発色性化合物を定量するα‐アミラーゼ活性の測定方法
である。 【効果】 非還元末端が修飾された特定のβ‐マルトオ
リゴシド誘導体を基質として用いることにより、共役酵
素としてβ‐グルコシダーゼのみを使用することで、α
‐アミラーゼ活性を精度よく測定することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、非還元末端修飾β‐マ
ルトテトラオシド誘導体を基質とし、α‐グルコシダー
ゼやグルコアミラーゼなどの共役酵素を使用することな
く、β‐グルコシダーゼのみを共役酵素として用いるこ
とにより、α‐アミラーゼ活性を精度よく、かつ効率的
に測定する新規な方法に関するものである。
ルトテトラオシド誘導体を基質とし、α‐グルコシダー
ゼやグルコアミラーゼなどの共役酵素を使用することな
く、β‐グルコシダーゼのみを共役酵素として用いるこ
とにより、α‐アミラーゼ活性を精度よく、かつ効率的
に測定する新規な方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】従来、血清、尿、膵液、唾液などの体液
を対象とするα‐アミラーゼ活性の測定は、臨床診断上
極めて重要であり、特に急性や慢性の膵臓炎、膵臓ガ
ン、流行性耳下腺炎、肺炎、腎不全などの鑑別診断にお
いては必須の測定項目となっている。
を対象とするα‐アミラーゼ活性の測定は、臨床診断上
極めて重要であり、特に急性や慢性の膵臓炎、膵臓ガ
ン、流行性耳下腺炎、肺炎、腎不全などの鑑別診断にお
いては必須の測定項目となっている。
【０００３】このα‐アミラーゼの測定方法については
従来より種々の方法が知られているが、近年、各種の芳
香族発色性基を還元末端に配糖体として有し、その非還
元末端グルコースが種々の置換基で修飾されたマルトオ
リゴシド類を基質として利用し、α‐アミラーゼにより
切断後、共役酵素系すなわちα‐グルコシダーゼかグル
コアミラーゼ又はその両方を、あるいはさらにこれらの
酵素とβ‐グルコシダーゼを作用させ、生成する発色性
物質をそのまま、あるいは必要に応じてｐＨを変化させ
たり、縮合させたのちに比色定量する方法が、広く用い
られるようになってきた。
従来より種々の方法が知られているが、近年、各種の芳
香族発色性基を還元末端に配糖体として有し、その非還
元末端グルコースが種々の置換基で修飾されたマルトオ
リゴシド類を基質として利用し、α‐アミラーゼにより
切断後、共役酵素系すなわちα‐グルコシダーゼかグル
コアミラーゼ又はその両方を、あるいはさらにこれらの
酵素とβ‐グルコシダーゼを作用させ、生成する発色性
物質をそのまま、あるいは必要に応じてｐＨを変化させ
たり、縮合させたのちに比色定量する方法が、広く用い
られるようになってきた。
【０００４】ところで、前記の非還元末端グルコースが
修飾されたマルトオリゴシド類、いわゆるブロック体
は、共役酵素系において安定性を示すが、非還元末端グ
ルコースが修飾されていないマルトオリゴシド類、いわ
ゆる非ブロック体を精製過程で完全に分離することがで
きなかったり、あるいはブロック体が長期間の保存中に
一部分解して非ブロック体を生成するため、この中には
非ブロック体が微量含有されるのを免れない。
修飾されたマルトオリゴシド類、いわゆるブロック体
は、共役酵素系において安定性を示すが、非還元末端グ
ルコースが修飾されていないマルトオリゴシド類、いわ
ゆる非ブロック体を精製過程で完全に分離することがで
きなかったり、あるいはブロック体が長期間の保存中に
一部分解して非ブロック体を生成するため、この中には
非ブロック体が微量含有されるのを免れない。
【０００５】この非ブロック体は、α‐グルコシダーゼ
やグルコアミラーゼなどの共役酵素が存在すると、加水
分解を受けやすく、そして該非ブロック体がα‐アノマ
ーのときはそのままで、またβ‐アノマーのときはさら
にβ‐グルコシダーゼの作用を受けて、発色性化合物が
生成するため、前記のようなブロック体を基質として用
いた場合には、α‐アミラーゼ活性の測定時に、あるい
は前記共役酵素と共存させて保存したときには、その保
存中に、この共役酵素類によって非ブロック体が加水分
解されて発色し、その結果、ブランク値が上昇して相対
的な感度が低下するという欠点を有している。
やグルコアミラーゼなどの共役酵素が存在すると、加水
分解を受けやすく、そして該非ブロック体がα‐アノマ
ーのときはそのままで、またβ‐アノマーのときはさら
にβ‐グルコシダーゼの作用を受けて、発色性化合物が
生成するため、前記のようなブロック体を基質として用
いた場合には、α‐アミラーゼ活性の測定時に、あるい
は前記共役酵素と共存させて保存したときには、その保
存中に、この共役酵素類によって非ブロック体が加水分
解されて発色し、その結果、ブランク値が上昇して相対
的な感度が低下するという欠点を有している。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
ブロック体を基質とし、α‐グルコシダーゼやグルコア
ミラーゼを共役酵素として用いる、従来のα‐アミラー
ゼ活性の測定方法が有する欠点を克服し、α‐アミラー
ゼ活性を精度よく、かつ効率的に測定しうる方法を提供
することを目的としてなされたものである。
ブロック体を基質とし、α‐グルコシダーゼやグルコア
ミラーゼを共役酵素として用いる、従来のα‐アミラー
ゼ活性の測定方法が有する欠点を克服し、α‐アミラー
ゼ活性を精度よく、かつ効率的に測定しうる方法を提供
することを目的としてなされたものである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは前記目的を
達成するために種々研究を重ねた結果、特定の数のグル
コース単位をもつ非還元末端修飾マルトオリゴシド誘導
体がα‐アミラーゼにより選択的にβ‐グルコシド誘導
体のみを生成すること、したがって、共役酵素として従
来用いていたα‐グルコシダーゼやグルコアミラーゼな
どの糖鎖を切断する酵素類を使用することなく、β‐グ
ルコシド結合を切断するためのβ‐グルコシダーゼのみ
を用いることにより、所定の芳香族発色性化合物を遊離
することを見出し、この知見に基づいて本発明を完成す
るに至った。
達成するために種々研究を重ねた結果、特定の数のグル
コース単位をもつ非還元末端修飾マルトオリゴシド誘導
体がα‐アミラーゼにより選択的にβ‐グルコシド誘導
体のみを生成すること、したがって、共役酵素として従
来用いていたα‐グルコシダーゼやグルコアミラーゼな
どの糖鎖を切断する酵素類を使用することなく、β‐グ
ルコシド結合を切断するためのβ‐グルコシダーゼのみ
を用いることにより、所定の芳香族発色性化合物を遊離
することを見出し、この知見に基づいて本発明を完成す
るに至った。
【０００８】すなわち、本発明は、α‐アミラーゼ含有
試料に、一般式
試料に、一般式
【化２】 （式中のＲは芳香族発色性基、Ｘはアジド基、ハロゲン
原子、Ｎ‐モノアルキルカルバモイルオキシ基又はアル
コキシメトキシ基、ＹはＮ‐モノアルキルカルバモイル
オキシ基又はアルコキシメトキシ基であるが、ＸとＹの
いずれか一方は水酸基であってもよい）で表わされる非
還元末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導体とβ‐グル
コシダーゼを添加して酵素反応を行わせ、遊離する芳香
族発色性化合物を定量することを特徴とするα‐アミラ
ーゼ活性の測定方法を提供するものである。
原子、Ｎ‐モノアルキルカルバモイルオキシ基又はアル
コキシメトキシ基、ＹはＮ‐モノアルキルカルバモイル
オキシ基又はアルコキシメトキシ基であるが、ＸとＹの
いずれか一方は水酸基であってもよい）で表わされる非
還元末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導体とβ‐グル
コシダーゼを添加して酵素反応を行わせ、遊離する芳香
族発色性化合物を定量することを特徴とするα‐アミラ
ーゼ活性の測定方法を提供するものである。
【０００９】前記一般式（Ｉ）で表わされる非還元末端
修飾β‐マルトテトラオシド誘導体において、Ｘはアジ
ド基、ハロゲン原子、Ｎ‐モノアルキルカルバモイルオ
キシ基、アルコキシメトキシ基又は水酸基、ＹはＮ‐モ
ノアルキルカルバモイルオキシ基、アルコキシメトキシ
基又は水酸基であり、ＸとＹは同時に水酸基ではない。
中でも特に、Ｘ及びＹの両方がＮ‐モノアルキルカルバ
モイルオキシ基であるものが好適である。Ｘ及びＹのＮ
‐モノアルキルカルバモイルオキシ基のアルキル部、並
びにＸ及びＹのアルコキシメトキシ基のアルキル部は、
例えばメチル基、エチル基、イソプロピル基、ブチル
基、シクロヘキシルなどの直鎖状、分枝状又は環状のア
ルキル基であり、そしてこれらは、例えばベンジル基な
どのアラルキル基やフェニル基、トルイル基、ナフチル
基などのアリール基、水酸基、アミノ基、カルボニル
基、アルキルオキシ基、アシル基、カルボキシル基、ニ
トロ基、アルキルシリル基、スルホニル基、ハロゲン原
子あるいはメシル基、トシル基、キノリンスルホニル基
などのアルキル又はアリールスルホニル基などで置換さ
れていてもよい。
修飾β‐マルトテトラオシド誘導体において、Ｘはアジ
ド基、ハロゲン原子、Ｎ‐モノアルキルカルバモイルオ
キシ基、アルコキシメトキシ基又は水酸基、ＹはＮ‐モ
ノアルキルカルバモイルオキシ基、アルコキシメトキシ
基又は水酸基であり、ＸとＹは同時に水酸基ではない。
中でも特に、Ｘ及びＹの両方がＮ‐モノアルキルカルバ
モイルオキシ基であるものが好適である。Ｘ及びＹのＮ
‐モノアルキルカルバモイルオキシ基のアルキル部、並
びにＸ及びＹのアルコキシメトキシ基のアルキル部は、
例えばメチル基、エチル基、イソプロピル基、ブチル
基、シクロヘキシルなどの直鎖状、分枝状又は環状のア
ルキル基であり、そしてこれらは、例えばベンジル基な
どのアラルキル基やフェニル基、トルイル基、ナフチル
基などのアリール基、水酸基、アミノ基、カルボニル
基、アルキルオキシ基、アシル基、カルボキシル基、ニ
トロ基、アルキルシリル基、スルホニル基、ハロゲン原
子あるいはメシル基、トシル基、キノリンスルホニル基
などのアルキル又はアリールスルホニル基などで置換さ
れていてもよい。
【００１０】次に前記一般式（Ｉ）で表わされる非還元
末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導体において、還元
末端グルコースの１位の水酸基に置換されるＲの芳香族
発色性基としては、分光学的に検出できればどのような
ものを用いてもよいが、例えば、一般式
末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導体において、還元
末端グルコースの１位の水酸基に置換されるＲの芳香族
発色性基としては、分光学的に検出できればどのような
ものを用いてもよいが、例えば、一般式
【化３】 （式中のＲ１ないしＲ５は同一でも異なっていてもよ
く、それぞれ水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、アル
キル基、アリール基、アラルキル基、アミノ基、スルホ
ン酸基又はカルボキシル基であり、またＲ１とＲ２又は
Ｒ２とＲ３とで縮合芳香環を形成してもよい）
く、それぞれ水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、アル
キル基、アリール基、アラルキル基、アミノ基、スルホ
ン酸基又はカルボキシル基であり、またＲ１とＲ２又は
Ｒ２とＲ３とで縮合芳香環を形成してもよい）
【化４】 （式中のＲ６は水素原子又はアルキル基である）
【化５】 （式中のＲ７は水素原子又はハロゲン原子である）
【化６】 （式中のＲ８ないしＲ15は同一でも異なっていてもよ
く、それぞれ水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、アル
キル基、アリール基、アラルキル基、アミノ基、スルホ
ン酸基又はカルボキシル基であり、またＲ８とＲ９又は
Ｒ10とＲ１１とで縮合芳香環を形成してもよく、さらに
Ｒ９とＲ１０又はＲ１３とＲ１４とで酸素原子を介して
縮合エーテル環を形成してもよく、Ｚは窒素原子又はＮ
→Ｏである）で表わされる基などが挙げられる。
く、それぞれ水素原子、ハロゲン原子、ニトロ基、アル
キル基、アリール基、アラルキル基、アミノ基、スルホ
ン酸基又はカルボキシル基であり、またＲ８とＲ９又は
Ｒ10とＲ１１とで縮合芳香環を形成してもよく、さらに
Ｒ９とＲ１０又はＲ１３とＲ１４とで酸素原子を介して
縮合エーテル環を形成してもよく、Ｚは窒素原子又はＮ
→Ｏである）で表わされる基などが挙げられる。
【００１１】前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物とし
ては、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６４‐
ヨード‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシ
ド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６４‐ブロモ‐
６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド、２‐ク
ロロ‐４‐ニトロフェニル＝６４‐クロロ‐６４‐デオ
キシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド、２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝６４‐デオキシ‐６４‐フルオロ‐β
‐Ｄ‐マルトテトラオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフ
ェニル＝６４‐アジド‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マル
トテトラオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６
４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ‐
マルトテトラオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４４，６４‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモ
イル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド、４‐ニトロフェニ
ル＝６４‐デオキシ‐６４‐フルオロ‐β‐Ｄ‐マルト
テトラオシド、フェノールインド‐３′‐クロロフェニ
ル＝６４‐クロロ‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテ
トラオシド、４‐メチルウンベリフェロニル＝６４‐ア
ジド‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド、
ルシフェリニル＝６４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カル
バモイル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド、４‐ニトロフ
ェニル＝６４‐Ｏ‐ベンジルオキシメチル‐β‐Ｄ‐マ
ルトテトラオシド、フェノールインドフェニル＝４４，
６４‐ジ‐Ｏ‐メチルオキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトテ
トラオシドなどが挙げられる。
ては、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６４‐
ヨード‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシ
ド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６４‐ブロモ‐
６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド、２‐ク
ロロ‐４‐ニトロフェニル＝６４‐クロロ‐６４‐デオ
キシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド、２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝６４‐デオキシ‐６４‐フルオロ‐β
‐Ｄ‐マルトテトラオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフ
ェニル＝６４‐アジド‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マル
トテトラオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６
４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ‐
マルトテトラオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４４，６４‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモ
イル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド、４‐ニトロフェニ
ル＝６４‐デオキシ‐６４‐フルオロ‐β‐Ｄ‐マルト
テトラオシド、フェノールインド‐３′‐クロロフェニ
ル＝６４‐クロロ‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテ
トラオシド、４‐メチルウンベリフェロニル＝６４‐ア
ジド‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド、
ルシフェリニル＝６４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カル
バモイル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド、４‐ニトロフ
ェニル＝６４‐Ｏ‐ベンジルオキシメチル‐β‐Ｄ‐マ
ルトテトラオシド、フェノールインドフェニル＝４４，
６４‐ジ‐Ｏ‐メチルオキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトテ
トラオシドなどが挙げられる。
【００１２】なお、上記において、記号６４‐、４４‐
などは、マルトテトラオシドを構成するグルコース鎖の
還元末端側から４番目のグルコース（すなわち、非還元
末端側のグルコース）の６位、４位などの水酸基が置換
されていることを示す。
などは、マルトテトラオシドを構成するグルコース鎖の
還元末端側から４番目のグルコース（すなわち、非還元
末端側のグルコース）の６位、４位などの水酸基が置換
されていることを示す。
【００１３】本発明における前記一般式（Ｉ）で表わさ
れる非還元末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導体は、
例えば次の（１）〜（３）の方法によって製造すること
ができるが、もちろんそれ以外の方法で製造されたもの
でもよい。
れる非還元末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導体は、
例えば次の（１）〜（３）の方法によって製造すること
ができるが、もちろんそれ以外の方法で製造されたもの
でもよい。
【００１４】（１） 前記一般式（Ｉ）において、Ｘ＝
アジド基又はハロゲン原子、Ｙ＝水酸基の場合：例えば
市販又は公知の方法で得たβ‐マルトテトラオシド誘導
体にテトラメトキシメタンを作用させて非還元末端４，
６‐位ＯＨをジメトキシメチリデン化したのち、アセチ
ル化し、得られた生成物のジメトキシメチリデン基を酢
酸／水を作用させて除去し、４，６‐ＯＨ誘導体とし、
続いてトシルクロリドを作用させる選択的６‐Ｏトシル
化反応、さらに４‐Ｏ‐アセチル化反応、そしてアジ化
ナトリウムを作用させるアジド化反応（Ｘ＝アジド基の
場合）又はハロゲン化ナトリウム若しくはハロゲン化リ
チウムを作用させるハロゲン化反応を行って、非還元末
端アジド又はハロゲノマルトオリゴ糖誘導体としたの
ち、最後に炭酸カリウムとメタノールの混合物を作用さ
せて脱アセチル化反応を行う［特願平３−１８０４６５
号、「カルボハイドレート・リサーチ」（Ｃａｒｂｏｈ
ｙｄｒ．Ｒｅｓ．）、第５１巻、第７３〜８４ペ‐ジ
（１９７６年）参照］。
アジド基又はハロゲン原子、Ｙ＝水酸基の場合：例えば
市販又は公知の方法で得たβ‐マルトテトラオシド誘導
体にテトラメトキシメタンを作用させて非還元末端４，
６‐位ＯＨをジメトキシメチリデン化したのち、アセチ
ル化し、得られた生成物のジメトキシメチリデン基を酢
酸／水を作用させて除去し、４，６‐ＯＨ誘導体とし、
続いてトシルクロリドを作用させる選択的６‐Ｏトシル
化反応、さらに４‐Ｏ‐アセチル化反応、そしてアジ化
ナトリウムを作用させるアジド化反応（Ｘ＝アジド基の
場合）又はハロゲン化ナトリウム若しくはハロゲン化リ
チウムを作用させるハロゲン化反応を行って、非還元末
端アジド又はハロゲノマルトオリゴ糖誘導体としたの
ち、最後に炭酸カリウムとメタノールの混合物を作用さ
せて脱アセチル化反応を行う［特願平３−１８０４６５
号、「カルボハイドレート・リサーチ」（Ｃａｒｂｏｈ
ｙｄｒ．Ｒｅｓ．）、第５１巻、第７３〜８４ペ‐ジ
（１９７６年）参照］。
【００１５】（２） 前記一般式（Ｉ）において、Ｘ＝
アジド基又はハロゲン原子、Ｙ＝Ｎ‐モノアルキルカル
バモイルオキシ基又はアルコキシメトキシ基の場合：例
えば前記（１）における４，６‐ＯＨ誘導体にトシルク
ロリドを作用させる選択的６‐Ｏトシル化反応を行わせ
たのち、Ｎ‐モノアルキルイソシアネートなどを作用さ
せて４‐Ｏ‐（Ｎ‐モノアルキル）カルバモイル化反応
を行わせるか、あるいはハロゲン化メトキシアルキルな
どを作用させて４‐Ｏ‐メトキシアルキル化反応を行わ
せ、次いで前記（１）と同様にアジド化又はハロゲン化
を行い、最後に脱アセチル化反応を行う［前記特願平３
−１８０４６５号、特願平３−１４６６００号、前記
「カルボハイドレート・リサーチ」（Ｃａｒｂｏｈｙｄ
ｒ．Ｒｅｓ．）、第５１巻、第７３〜８４ペ‐ジ（１９
７６年）、「プロテクティブ・グループス・イン・オー
ガニック・シンセシス」（ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏ
ｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ）、第１４〜３９ページ、１９８１年（Ｔ．Ｗ．Ｇｒ
ｅｅｎｅ著、ＪＯＨＮ ＷＩＬＥＹ ＆ ＳＯＮＳ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ）参照］。
アジド基又はハロゲン原子、Ｙ＝Ｎ‐モノアルキルカル
バモイルオキシ基又はアルコキシメトキシ基の場合：例
えば前記（１）における４，６‐ＯＨ誘導体にトシルク
ロリドを作用させる選択的６‐Ｏトシル化反応を行わせ
たのち、Ｎ‐モノアルキルイソシアネートなどを作用さ
せて４‐Ｏ‐（Ｎ‐モノアルキル）カルバモイル化反応
を行わせるか、あるいはハロゲン化メトキシアルキルな
どを作用させて４‐Ｏ‐メトキシアルキル化反応を行わ
せ、次いで前記（１）と同様にアジド化又はハロゲン化
を行い、最後に脱アセチル化反応を行う［前記特願平３
−１８０４６５号、特願平３−１４６６００号、前記
「カルボハイドレート・リサーチ」（Ｃａｒｂｏｈｙｄ
ｒ．Ｒｅｓ．）、第５１巻、第７３〜８４ペ‐ジ（１９
７６年）、「プロテクティブ・グループス・イン・オー
ガニック・シンセシス」（ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏ
ｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ）、第１４〜３９ページ、１９８１年（Ｔ．Ｗ．Ｇｒ
ｅｅｎｅ著、ＪＯＨＮ ＷＩＬＥＹ ＆ ＳＯＮＳ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ）参照］。
【００１６】（３） 前記一般式（Ｉ）において、Ｘ＝
Ｎ‐モノアルキルカルバモイルオキシ基、アルコキシメ
トキシ基又は水酸基、Ｙ＝Ｎ‐モノアルキルカルバモイ
ルオキシ基、アルコキシメトキシ基又は水酸基の場合：
例えば前記（１）における４，６‐ＯＨ誘導体にＮ‐ア
ルキルイソシアネートやハロゲン化アルキルを同時又は
順次に作用させて６‐Ｏ‐や４‐Ｏ‐の位置の置換反応
を行わせる。その際の反応試薬、反応温度、反応時間な
どの反応条件及び精製法を適宜選択することにより、６
‐Ｏ‐モノ置換体又は４，６‐Ｏ‐ジ置換体を得ること
ができる。４‐Ｏ‐モノ置換体を得るためには、あらか
じめ６位水酸基をｔ‐ブチルジメチルシリル基若しくは
トリチル基などで保護しておき、４位水酸基の置換反応
を行ったのちに６位水酸基の脱保護反応を行わせる。最
後に、これらを脱アセチル化する［前記特願平３−１８
０４６５号、前記「プロテクティブ・グループス・イン
・オーガニック・シンセシス」（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ
Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ）、第１４〜３９ページ、１９８１年（Ｔ．Ｗ．
Ｇｒｅｅｎｅ著、ＪＯＨＮ ＷＩＬＥＹ＆ＳＯＮＳ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ）参照］。
Ｎ‐モノアルキルカルバモイルオキシ基、アルコキシメ
トキシ基又は水酸基、Ｙ＝Ｎ‐モノアルキルカルバモイ
ルオキシ基、アルコキシメトキシ基又は水酸基の場合：
例えば前記（１）における４，６‐ＯＨ誘導体にＮ‐ア
ルキルイソシアネートやハロゲン化アルキルを同時又は
順次に作用させて６‐Ｏ‐や４‐Ｏ‐の位置の置換反応
を行わせる。その際の反応試薬、反応温度、反応時間な
どの反応条件及び精製法を適宜選択することにより、６
‐Ｏ‐モノ置換体又は４，６‐Ｏ‐ジ置換体を得ること
ができる。４‐Ｏ‐モノ置換体を得るためには、あらか
じめ６位水酸基をｔ‐ブチルジメチルシリル基若しくは
トリチル基などで保護しておき、４位水酸基の置換反応
を行ったのちに６位水酸基の脱保護反応を行わせる。最
後に、これらを脱アセチル化する［前記特願平３−１８
０４６５号、前記「プロテクティブ・グループス・イン
・オーガニック・シンセシス」（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ
Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ）、第１４〜３９ページ、１９８１年（Ｔ．Ｗ．
Ｇｒｅｅｎｅ著、ＪＯＨＮ ＷＩＬＥＹ＆ＳＯＮＳ，Ｎ
ｅｗ Ｙｏｒｋ）参照］。
【００１７】以上のようにして得られた一般式（Ｉ）で
表わされる非還元末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導
体を基質とし、α‐グルコシダーゼやグルコアミラーゼ
などの共役酵素を使用することなく、β‐グルコシダー
ゼのみを共役酵素として用いることにより、α‐アミラ
ーゼ活性を精度よく測定することができる。
表わされる非還元末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導
体を基質とし、α‐グルコシダーゼやグルコアミラーゼ
などの共役酵素を使用することなく、β‐グルコシダー
ゼのみを共役酵素として用いることにより、α‐アミラ
ーゼ活性を精度よく測定することができる。
【００１８】α‐アミラーゼ活性を測定するための有利
な系としては、例えば前記一般式（Ｉ）で表わされる非
還元末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導体０．２〜２
０ｍＭ及び緩衝液２〜３００ｍＭを含有し、かつ共役酵
素としてβ‐グルコシダーゼを０．５〜３０単位／ｍｌ
を含有するｐＨ４〜１０の系が挙げられる。この系に用
いられる緩衝剤としては、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭
酸塩、グッド緩衝液、ホウ酸塩、クエン酸塩、ジメチル
グルタル酸塩などが挙げられる。β‐グルコシダーゼは
いかなる起源のものを用いてもよく、例えばアーモンド
の種子から得たものなどが用いられる。
な系としては、例えば前記一般式（Ｉ）で表わされる非
還元末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導体０．２〜２
０ｍＭ及び緩衝液２〜３００ｍＭを含有し、かつ共役酵
素としてβ‐グルコシダーゼを０．５〜３０単位／ｍｌ
を含有するｐＨ４〜１０の系が挙げられる。この系に用
いられる緩衝剤としては、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭
酸塩、グッド緩衝液、ホウ酸塩、クエン酸塩、ジメチル
グルタル酸塩などが挙げられる。β‐グルコシダーゼは
いかなる起源のものを用いてもよく、例えばアーモンド
の種子から得たものなどが用いられる。
【００１９】このような系に、前記成分以外に、本発明
の目的をそこなわない範囲で、さらに必要に応じて慣用
の種々の添加成分、例えば溶解補助剤、安定化剤とし
て、グリセリン、牛血清アルブミン、α‐又はβ‐シク
ロデキストリン、トリトンＸ‐１００などを加えること
ができるし、またα‐アミラーゼ活性化剤として、Ｎａ
Ｃｌ，ＭｇＣｌ２、ＭｇＳＯ４、ＣａＣｌ２、ＣａＣｌ
２・Ｈ２Ｏなどの形で用いられるＣｌ−イオン、Ｃａ
２＋イオン、Ｍｇ２＋イオンなどを加えることもでき
る。これらの添加成分は単独で用いてもよいし、２種以
上組み合わせて用いてもよい。これらの成分は、前記反
応系調製における適当な段階で加えることができる。
の目的をそこなわない範囲で、さらに必要に応じて慣用
の種々の添加成分、例えば溶解補助剤、安定化剤とし
て、グリセリン、牛血清アルブミン、α‐又はβ‐シク
ロデキストリン、トリトンＸ‐１００などを加えること
ができるし、またα‐アミラーゼ活性化剤として、Ｎａ
Ｃｌ，ＭｇＣｌ２、ＭｇＳＯ４、ＣａＣｌ２、ＣａＣｌ
２・Ｈ２Ｏなどの形で用いられるＣｌ−イオン、Ｃａ
２＋イオン、Ｍｇ２＋イオンなどを加えることもでき
る。これらの添加成分は単独で用いてもよいし、２種以
上組み合わせて用いてもよい。これらの成分は、前記反
応系調製における適当な段階で加えることができる。
【００２０】この試薬は、乾燥物あるいは溶解した形で
用いてもよいし、薄膜状の担体、例えばシ‐ト、含浸性
の紙などに含浸させて用いてもよい。このような試薬を
用いることにより、各種の試料に含有されるα‐アミラ
ーゼ活性を簡単な操作で正確に、かつ高感度で測定する
ことができる。
用いてもよいし、薄膜状の担体、例えばシ‐ト、含浸性
の紙などに含浸させて用いてもよい。このような試薬を
用いることにより、各種の試料に含有されるα‐アミラ
ーゼ活性を簡単な操作で正確に、かつ高感度で測定する
ことができる。
【００２１】次に、本発明方法の好適な実施態様を説明
する。まず、α‐アミラーゼを含む試料に、共役酵素と
してのβ‐グルコシダーゼを０．５〜３０単位／ｍｌ、
好ましくは１〜１５単位／ｍｌ加え、これと同時又はこ
れらの後に、前記一般式（Ｉ）で表わされる非還元末端
修飾β‐マルトテトラオシド誘導体を０．２〜２０ｍ
Ｍ、好ましくは０．５〜１０ｍＭを緩衝剤とともに添加
したのち、温度２５〜４５℃、好ましくは３５〜４０
℃、ｐＨ４〜１０、好ましくは６〜８の条件下で少なく
とも１分間、好ましくは２〜１０分間酵素反応を行わ
せ、生成した芳香族発色性化合物を、常法に従いそのま
まであるいは必要に応じｐＨを調整したのち、又は縮合
反応を行わせたのちに、適当な吸光波長で連続的に又は
断続的に吸光度変化量を測定し、あらかじめ測定したα
‐アミラーゼ標品の吸光度変化量と対比させて試料中の
α‐アミラーゼ活性を算出する。また芳香族発色性化合
物の分子吸光係数から算出することもできる。
する。まず、α‐アミラーゼを含む試料に、共役酵素と
してのβ‐グルコシダーゼを０．５〜３０単位／ｍｌ、
好ましくは１〜１５単位／ｍｌ加え、これと同時又はこ
れらの後に、前記一般式（Ｉ）で表わされる非還元末端
修飾β‐マルトテトラオシド誘導体を０．２〜２０ｍ
Ｍ、好ましくは０．５〜１０ｍＭを緩衝剤とともに添加
したのち、温度２５〜４５℃、好ましくは３５〜４０
℃、ｐＨ４〜１０、好ましくは６〜８の条件下で少なく
とも１分間、好ましくは２〜１０分間酵素反応を行わ
せ、生成した芳香族発色性化合物を、常法に従いそのま
まであるいは必要に応じｐＨを調整したのち、又は縮合
反応を行わせたのちに、適当な吸光波長で連続的に又は
断続的に吸光度変化量を測定し、あらかじめ測定したα
‐アミラーゼ標品の吸光度変化量と対比させて試料中の
α‐アミラーゼ活性を算出する。また芳香族発色性化合
物の分子吸光係数から算出することもできる。
【００２２】本発明に用いられるα‐アミラーゼ含有試
料については、α‐アミラーゼ活性を含有するものであ
ればよく、特に制限はないが、具体的には微生物の培養
液、植物の抽出液、あるいは動物の体液や組織及びそれ
らの抽出液などを用いることができる。α‐アミラーゼ
含有試料が固体の場合には、いったん精製水又は前記し
たような緩衝液に溶解又は懸濁させるのが好ましい。ま
た必要により、この際、不溶物をろ過などにより除去し
てもよい。
料については、α‐アミラーゼ活性を含有するものであ
ればよく、特に制限はないが、具体的には微生物の培養
液、植物の抽出液、あるいは動物の体液や組織及びそれ
らの抽出液などを用いることができる。α‐アミラーゼ
含有試料が固体の場合には、いったん精製水又は前記し
たような緩衝液に溶解又は懸濁させるのが好ましい。ま
た必要により、この際、不溶物をろ過などにより除去し
てもよい。
【００２３】
【発明の効果】本発明の方法によれば、試料中に含まれ
るグルコース、マルトース、ビリルビン、ヘモグロビン
などの影響を受けることなく、α‐アミラーゼ活性を自
動分析法、用手法などにより、精度よく短時間で容易に
測定することができる。
るグルコース、マルトース、ビリルビン、ヘモグロビン
などの影響を受けることなく、α‐アミラーゼ活性を自
動分析法、用手法などにより、精度よく短時間で容易に
測定することができる。
【００２４】また、本発明の方法によれば、用いる共役
酵素がβ‐グルコシダーゼのみであるので、本発明の方
法を適用するためのα‐アミラーゼ測定用試薬の製造コ
ストが低減することはもちろんのこと、その製造操作も
容易になり、さらに基質溶液を調製して共役酵素を共存
させても、長期にわたって初期状態を維持しうるという
利点がある。
酵素がβ‐グルコシダーゼのみであるので、本発明の方
法を適用するためのα‐アミラーゼ測定用試薬の製造コ
ストが低減することはもちろんのこと、その製造操作も
容易になり、さらに基質溶液を調製して共役酵素を共存
させても、長期にわたって初期状態を維持しうるという
利点がある。
【００２５】
【実施例】以下に実施例を示す。なお、各例中の吸収極
大波長は特に示されていない限り、メタノール中で測定
した値であり、比旋光度は２５℃においてナトリウムの
Ｄ線で測定した値である。
大波長は特に示されていない限り、メタノール中で測定
した値であり、比旋光度は２５℃においてナトリウムの
Ｄ線で測定した値である。
【００２６】実施例１ ［１］ α‐アミラーゼ活性の測定法（１） （１） 基質液の調製 下記［２］で得た基質の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝４４，６４‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバ
モイル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド（Ｍｗ９９２）を
８．１２５ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣ
ｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
ル＝４４，６４‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバ
モイル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド（Ｍｗ９９２）を
８．１２５ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣ
ｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
【００２７】（２）共役酵素液の調製 市販のアーモンド由来のβ‐グルコシダーゼを１３Ｕ／
ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ
‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝
７．０）に混合して溶解した。なお、この市販のβ‐グ
ルコシダーゼは東洋紡績（株）製を使用した（以下、同
じ）。
ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ
‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝
７．０）に混合して溶解した。なお、この市販のβ‐グ
ルコシダーゼは東洋紡績（株）製を使用した（以下、同
じ）。
【００２８】（３） 標品α‐アミラーゼ液の調製 市販のヒトα‐アミラーゼ［膵液α‐アミラーゼ
（Ｐ）：唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）＝１：１の割合で混
合］に精製水を加え、０、１２０、２３０、３３７Ｕ／
ｌの濃度に溶解して標品α‐アミラーゼ液とした。な
お、市販のそれぞれのヒトα‐アミラーゼは国際試薬
（株）製キャリブザイム・ＡＭＹを使用した（以下、同
じ）。また、α‐アミラーゼの活性は、３７℃、１分間
に１μｍｏｌの２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐
Ｄ‐マルトペンタオシド（市販品）を分解する酵素量を
１単位（Ｕ）として定義した（以下、同じ）。
（Ｐ）：唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）＝１：１の割合で混
合］に精製水を加え、０、１２０、２３０、３３７Ｕ／
ｌの濃度に溶解して標品α‐アミラーゼ液とした。な
お、市販のそれぞれのヒトα‐アミラーゼは国際試薬
（株）製キャリブザイム・ＡＭＹを使用した（以下、同
じ）。また、α‐アミラーゼの活性は、３７℃、１分間
に１μｍｏｌの２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐
Ｄ‐マルトペンタオシド（市販品）を分解する酵素量を
１単位（Ｕ）として定義した（以下、同じ）。
【００２９】（４） 試料液の調製 α‐アミラーゼ活性測定用試料が液体の場合はそのまま
試料液とした。固体の場合は通常、試料５００ｍｇを正
確に秤量し、精製水を加えて全量を５ｍｌとして試料液
とした。必要に応じて、不溶物をろ過などの操作で除去
してから用いた。
試料液とした。固体の場合は通常、試料５００ｍｇを正
確に秤量し、精製水を加えて全量を５ｍｌとして試料液
とした。必要に応じて、不溶物をろ過などの操作で除去
してから用いた。
【００３０】（５） 検査量線の作成 標品α‐アミラーゼ液２５０μｌに共役酵素液１．０ｍ
ｌを加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温したのち、基
質液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２分間加温
したのちからの２分間の４００ｎｍにおける吸光度の変
化量を測定した。各標品α‐アミラーゼ液の活性と、吸
光度の変化量の関係より検量線を作成した。その結果、
検量線の式は ＴＡ＝１．２４・ΔＡ×１０３＋５．５ ［ＴＡ；酵素活性（Ｕ／ｌ）、 ΔＡ；１分間当りの吸
光度の変化量］ となった。そのグラフを図１に示す。
ｌを加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温したのち、基
質液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２分間加温
したのちからの２分間の４００ｎｍにおける吸光度の変
化量を測定した。各標品α‐アミラーゼ液の活性と、吸
光度の変化量の関係より検量線を作成した。その結果、
検量線の式は ＴＡ＝１．２４・ΔＡ×１０３＋５．５ ［ＴＡ；酵素活性（Ｕ／ｌ）、 ΔＡ；１分間当りの吸
光度の変化量］ となった。そのグラフを図１に示す。
【００３１】（６） 試料液中のα‐アミラーゼ活性の
測定 試料液２５０μｌに共役酵素液１．０ｍｌを加えてかき
まぜ、３７℃で１分間加温したのち、基質液２．０ｍｌ
を加えてかきまぜ、３７℃で２分間加温したのちからの
２分間の４００ｎｍにおける吸光度の変化量を測定し
た。この測定値と（５）で作成した検量線から算出して
試料液中のα‐アミラーゼ活性の測定を行うことができ
る。なお、試料液中の酵素活性の値が検量線の適用範囲
（０〜３３７Ｕ／ｌ）を越えた場合は、精製水を用いて
相当する倍数の希釈を行ったのち、再測定を行う。
測定 試料液２５０μｌに共役酵素液１．０ｍｌを加えてかき
まぜ、３７℃で１分間加温したのち、基質液２．０ｍｌ
を加えてかきまぜ、３７℃で２分間加温したのちからの
２分間の４００ｎｍにおける吸光度の変化量を測定し
た。この測定値と（５）で作成した検量線から算出して
試料液中のα‐アミラーゼ活性の測定を行うことができ
る。なお、試料液中の酵素活性の値が検量線の適用範囲
（０〜３３７Ｕ／ｌ）を越えた場合は、精製水を用いて
相当する倍数の希釈を行ったのち、再測定を行う。
【００３２】［２］ 基質の２‐クロロ‐４‐ニトロフ
ェニル＝４４，６４‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カ
ルバモイル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセ
チル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシドの製造 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トテトラオシド５０．０ｇ（６０．８ｍｍｏｌ）を無水
ＤＭＦ１００ｍｌに溶解し、テトラメトキシメタン５
０．０ｍｌ（３７７ｍｍｏｌ）及びアンバーリスト（１
５Ｅ）２５ｇを加え、３５℃で４時間、かきまぜながら
反応させた。次いでアンバーリスト（１５Ｅ）をグラス
フィルターを用いて除去し、ろ液にピリジン７００ｍ
ｌ、無水酢酸３５０ｍｌ（３．７１ｍｍｏｌ）を加え、
室温で２日間かきまぜながら反応させた。続いて反応液
を減圧下濃縮し、これに含まれるピリジン、無水酢酸、
酢酸を留去した。得られたオイル状のアセチル体を精製
しないで酢酸３．０ｌに溶解し、水７５０ｍｌを加え、
３０℃で２日間、かきまぜながら反応させた。さらにこ
の反応液を氷水３．０ｌ中へ、かきまぜながらゆっくり
と滴下したのち、この混合液をジクロロメタン１．０ｌ
で３回抽出した。次いでジクロロメタン層を水３．０ｌ
で３回洗浄し、ジクロロメタン層部を無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥、ろ別したのち、ろ液を減圧下濃縮し、ジクロ
ロメタンを留去した。この残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐
ジクロロメタン混液（容量比５０：２：４８）で溶出し
た目的区分を濃縮して、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシド５５．９ｇ（４３．５ｍｍｏｌ，
３工程通算収率７１．６％）を得た。
ェニル＝４４，６４‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カ
ルバモイル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセ
チル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシドの製造 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トテトラオシド５０．０ｇ（６０．８ｍｍｏｌ）を無水
ＤＭＦ１００ｍｌに溶解し、テトラメトキシメタン５
０．０ｍｌ（３７７ｍｍｏｌ）及びアンバーリスト（１
５Ｅ）２５ｇを加え、３５℃で４時間、かきまぜながら
反応させた。次いでアンバーリスト（１５Ｅ）をグラス
フィルターを用いて除去し、ろ液にピリジン７００ｍ
ｌ、無水酢酸３５０ｍｌ（３．７１ｍｍｏｌ）を加え、
室温で２日間かきまぜながら反応させた。続いて反応液
を減圧下濃縮し、これに含まれるピリジン、無水酢酸、
酢酸を留去した。得られたオイル状のアセチル体を精製
しないで酢酸３．０ｌに溶解し、水７５０ｍｌを加え、
３０℃で２日間、かきまぜながら反応させた。さらにこ
の反応液を氷水３．０ｌ中へ、かきまぜながらゆっくり
と滴下したのち、この混合液をジクロロメタン１．０ｌ
で３回抽出した。次いでジクロロメタン層を水３．０ｌ
で３回洗浄し、ジクロロメタン層部を無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥、ろ別したのち、ろ液を減圧下濃縮し、ジクロ
ロメタンを留去した。この残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐
ジクロロメタン混液（容量比５０：２：４８）で溶出し
た目的区分を濃縮して、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシド５５．９ｇ（４３．５ｍｍｏｌ，
３工程通算収率７１．６％）を得た。
【００３３】融点（℃）：１２０〜１２２ 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε
＝３．９９），２０９（ｌｏｇε＝４．２２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４９０，２９５
０，１７４２，１５８４，１５２４，１４８４，１４２
６，１３６８，１２２８，１０３６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．１８（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．３０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．５０〜４．７
１（ｍ），５．１５〜５．５０（ｍ），７．２８（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．７Ｈｚ） 薄層クロマトグラフィ［メルク（株）製シリカゲルＴＬ
ＣプレートＮｏ．５７１５，ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，
展開液：酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液
（容量比５０：２：４８）］：Ｒｆ＝０．３３ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５６，１，４‐ジオキサ
ン）；＋７５．４° 元素分析：Ｃ５２Ｈ６６ＣｌＮＯ３４として
＝３．９９），２０９（ｌｏｇε＝４．２２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３４９０，２９５
０，１７４２，１５８４，１５２４，１４８４，１４２
６，１３６８，１２２８，１０３６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：２．００〜２．１８（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．３０（１Ｈ，ｂｒ．ｓ），３．５０〜４．７
１（ｍ），５．１５〜５．５０（ｍ），７．２８（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．７Ｈｚ） 薄層クロマトグラフィ［メルク（株）製シリカゲルＴＬ
ＣプレートＮｏ．５７１５，ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，
展開液：酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液
（容量比５０：２：４８）］：Ｒｆ＝０．３３ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５６，１，４‐ジオキサ
ン）；＋７５．４° 元素分析：Ｃ５２Ｈ６６ＣｌＮＯ３４として
【００３４】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐
（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐
グルコピラノシドの製造 実施例１の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド３．００ｇ（２．３４ｍｍ
ｏｌ）をピリジン１６０ｍｌに溶解し、イソプロピルイ
ソシアネート２０ｍｌ（２０４ｍｍｏｌ）、ジメチルア
ミノピリジン７１．３ｍｇ（０．５８４ｍｍｏｌ）及び
モレキュラシーブス４Ａ４．０ｇを加え、７５℃で１５
時間かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液をセ
ライトベットでろ過し、ろ液中のピリジンを減圧下留去
し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
により精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタ
ン混液（容量比５０：１：９９）で溶出した目的区分を
濃縮して、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐
［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐
イソプロピル）カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ
‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド３．１０ｇ（２．１３ｍｍｏｌ，収率９
１．１％）を得た。
＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐
（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐
グルコピラノシドの製造 実施例１の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド３．００ｇ（２．３４ｍｍ
ｏｌ）をピリジン１６０ｍｌに溶解し、イソプロピルイ
ソシアネート２０ｍｌ（２０４ｍｍｏｌ）、ジメチルア
ミノピリジン７１．３ｍｇ（０．５８４ｍｍｏｌ）及び
モレキュラシーブス４Ａ４．０ｇを加え、７５℃で１５
時間かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液をセ
ライトベットでろ過し、ろ液中のピリジンを減圧下留去
し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
により精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタ
ン混液（容量比５０：１：９９）で溶出した目的区分を
濃縮して、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐
［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐
イソプロピル）カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ
‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド３．１０ｇ（２．１３ｍｍｏｌ，収率９
１．１％）を得た。
【００３５】融点（℃）：１１７〜１１９ 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：２９７５，１７５
１，１５２３，１３７１，１３４９，１２３６，１０３
８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．１２（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．
１６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），２．００〜２．１
９（３３Ｈ，ｅａｃｈ ｓ），３．６５〜４．９５
（ｍ），５．１５〜５．５０（ｍ），７．２８（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．２Ｈｚ，２．５Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．５Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニト
リル／水＝３／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔＲ＝９．５ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６１２，１，４‐ジオキサ
ン）；＋７５．６°
１，１５２３，１３７１，１３４９，１２３６，１０３
８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．１２（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．
１６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），２．００〜２．１
９（３３Ｈ，ｅａｃｈ ｓ），３．６５〜４．９５
（ｍ），５．１５〜５．５０（ｍ），７．２８（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．２Ｈｚ，２．５Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．５Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニト
リル／水＝３／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔＲ＝９．５ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６１２，１，４‐ジオキサ
ン）；＋７５．６°
【００３６】（３） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４４，６４‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモ
イル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 実施例１の［２］の（２）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６
‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．１４ｇ（１．４７ｍｍ
ｏｌ）にメタノ‐ル２００ｍｌ及び無水炭酸カリウム２
２３ｍｇ（１．６２ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１５時
間かきまぜながら反応させた。次いで反応液を減圧濃縮
し、これに含まれるメタノールを留去した。次いでその
残渣をＯＤＳ（オクタデシルシリカゲル）カラムクロマ
トグラフィにより精製し、アセトニトリル‐水混液（容
量比２５：７５）で溶出した目的区分を濃縮し、凍結乾
燥して、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４４，６４
‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ
‐マルトテトラオシド１．２２ｇ（１．２３ｍｍｏｌ，
収率８３．６％）を得た。
＝４４，６４‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモ
イル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 実施例１の［２］の（２）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６
‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．１４ｇ（１．４７ｍｍ
ｏｌ）にメタノ‐ル２００ｍｌ及び無水炭酸カリウム２
２３ｍｇ（１．６２ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１５時
間かきまぜながら反応させた。次いで反応液を減圧濃縮
し、これに含まれるメタノールを留去した。次いでその
残渣をＯＤＳ（オクタデシルシリカゲル）カラムクロマ
トグラフィにより精製し、アセトニトリル‐水混液（容
量比２５：７５）で溶出した目的区分を濃縮し、凍結乾
燥して、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４４，６４
‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ
‐マルトテトラオシド１．２２ｇ（１．２３ｍｍｏｌ，
収率８３．６％）を得た。
【００３７】融点（℃）：１６３〜１６５（分解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝３．９７），２２７（ｌｏｇε＝４．０１），２０９
（ｌｏｇε＝４．２１） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３８０，２９７
５，１７０２，１５８７，１５２３，１３４８，１２７
３，１２５１，１１５２，１０４６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：１．０６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），
１．０７（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．２０〜
３．９５（ｍ），４．００（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１０．
１Ｈｚ），４．４６（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１０．５Ｈ
ｚ），５．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．１
２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．
３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，
２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニト
リル／水＝３／７（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔＲ＝２１．７ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０２，Ｈ２Ｏ）；＋６
１．６° 元素分析：Ｃ３８Ｈ５８ＣｌＮ３Ｏ２５として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．６３ｍ
Ｍ ：対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．９５ｍＭ
＝３．９７），２２７（ｌｏｇε＝４．０１），２０９
（ｌｏｇε＝４．２１） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３８０，２９７
５，１７０２，１５８７，１５２３，１３４８，１２７
３，１２５１，１１５２，１０４６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：１．０６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），
１．０７（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．２０〜
３．９５（ｍ），４．００（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１０．
１Ｈｚ），４．４６（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝１０．５Ｈ
ｚ），５．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．１
２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．
３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，
２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニト
リル／水＝３／７（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔＲ＝２１．７ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０２，Ｈ２Ｏ）；＋６
１．６° 元素分析：Ｃ３８Ｈ５８ＣｌＮ３Ｏ２５として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．６３ｍ
Ｍ ：対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．９５ｍＭ
【００３８】実施例２ ［１］ α‐アミラーゼ活性の測定法（２） （１） 基質液の調製 下記［２］で得た基質の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝６4‐クロロ‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテト
ラオシド（Ｍｗ ８４０）を６．５０ｍＭの濃度になる
ように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を
含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解
した。 （２） 共役酵素液の調製 実施例１の［１］の（２）と同様の操作で共役酵素液の
調製を行った。 （３） 標品α‐アミラーゼ液の調製 市販のヒトα‐アミラーゼ（Ｐ：Ｓ＝１：１）に精製水
を加え、０、１５８、２８０、４０３Ｕ／ｌの濃度に溶
解して標品α‐アミラーゼ液とした。 （４） 試料液の調製 実施例１の［１］の（４）と同様の操作で試料液の調製
を行った。 （５） 検量線の作成 実施例１の［１］の（５）と同様の操作で検量線の作成
を行った。その結果、検量線の式は ＴＡ＝３．２５・ΔＡ×１０３＋５．８ ［ＴＡ；酵素活性（Ｕ／ｌ）、ΔＡ；１分間当りの吸光
度の変化量］ となった。そのグラフを図２に示す。 （６） 試料液中のα‐アミラーゼ活性の測定 実施例１の［１］の（６）と同様の操作で試料液中のα
‐アミラーゼ活性の測定を行った。
ル＝６4‐クロロ‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテト
ラオシド（Ｍｗ ８４０）を６．５０ｍＭの濃度になる
ように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を
含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解
した。 （２） 共役酵素液の調製 実施例１の［１］の（２）と同様の操作で共役酵素液の
調製を行った。 （３） 標品α‐アミラーゼ液の調製 市販のヒトα‐アミラーゼ（Ｐ：Ｓ＝１：１）に精製水
を加え、０、１５８、２８０、４０３Ｕ／ｌの濃度に溶
解して標品α‐アミラーゼ液とした。 （４） 試料液の調製 実施例１の［１］の（４）と同様の操作で試料液の調製
を行った。 （５） 検量線の作成 実施例１の［１］の（５）と同様の操作で検量線の作成
を行った。その結果、検量線の式は ＴＡ＝３．２５・ΔＡ×１０３＋５．８ ［ＴＡ；酵素活性（Ｕ／ｌ）、ΔＡ；１分間当りの吸光
度の変化量］ となった。そのグラフを図２に示す。 （６） 試料液中のα‐アミラーゼ活性の測定 実施例１の［１］の（６）と同様の操作で試料液中のα
‐アミラーゼ活性の測定を行った。
【００３９】［２］ 基質の２‐クロロ‐４‐ニトロフ
ェニル＝６４‐クロロ‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マル
トテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐クロ
ロ‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造 実施例１の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド４．００ｇ（３．１２ｍｍ
ｏｌ）をピリジン１５０ｍｌに溶解し、トシルクロライ
ド５．９６ｇ（３１．２ｍｍｏｌ）及びモレキュラシー
ブス４．０ｇを加え、１０℃で６時間、かきまぜながら
反応させた。次いでこの反応液にベンゾイルクロライド
３．７ｍｌ（３１．８ｍｍｏｌ）を加え、さらに１５時
間かきまぜながら反応させた。この反応液をセライトベ
ットでろ過し、ろ液中のピリジンを減圧下留去し、得ら
れた残渣をＤＭＳＯ１００ｍｌに溶解し、ＬｉＣｌ３．
９７ｇ（９３．６ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で５時間反
応させた。続いてこの反応液にトルエン１．０ｌを加
え、３ｗｔ％ＮａＣｌ水各５００ｍｌで３回洗浄した。
次にトルエン層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、綿栓で
ろ過したのち、ろ液中のトルエンを減圧下留去した。こ
の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製
し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容
量比５０：１：９９）で溶出した目的区分を濃縮して、
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐
Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐クロロ‐６‐
デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐
ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．８１
ｇ（２．００ｍｍｏｌ，３工程通算収率６４．０％）を
得た。
ェニル＝６４‐クロロ‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マル
トテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐クロ
ロ‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造 実施例１の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド４．００ｇ（３．１２ｍｍ
ｏｌ）をピリジン１５０ｍｌに溶解し、トシルクロライ
ド５．９６ｇ（３１．２ｍｍｏｌ）及びモレキュラシー
ブス４．０ｇを加え、１０℃で６時間、かきまぜながら
反応させた。次いでこの反応液にベンゾイルクロライド
３．７ｍｌ（３１．８ｍｍｏｌ）を加え、さらに１５時
間かきまぜながら反応させた。この反応液をセライトベ
ットでろ過し、ろ液中のピリジンを減圧下留去し、得ら
れた残渣をＤＭＳＯ１００ｍｌに溶解し、ＬｉＣｌ３．
９７ｇ（９３．６ｍｍｏｌ）を加えて６０℃で５時間反
応させた。続いてこの反応液にトルエン１．０ｌを加
え、３ｗｔ％ＮａＣｌ水各５００ｍｌで３回洗浄した。
次にトルエン層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、綿栓で
ろ過したのち、ろ液中のトルエンを減圧下留去した。こ
の残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製
し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容
量比５０：１：９９）で溶出した目的区分を濃縮して、
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐
Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐クロロ‐６‐
デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐
ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．８１
ｇ（２．００ｍｍｏｌ，３工程通算収率６４．０％）を
得た。
【００４０】融点（℃）：１２０〜１２２ 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：１７５３，１５２
７，１４８３，１３７１，１３４９，１２３６，１１２
４，１０４１ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．８９〜２．１９（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．６３（２Ｈ，ＡＢＸ），３．８５〜４．９５
（ｍ），５．１５〜５．６０（ｍ），７．２７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．
３Ｈｚ），７．６０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），
８．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），８．１５（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニト
リル／水＝４／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔＲ＝１０．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５６６，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６１．３° 元素分析：Ｃ５９Ｈ６９Ｃｌ２ＮＯ３４として
７，１４８３，１３７１，１３４９，１２３６，１１２
４，１０４１ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ３）：１．８９〜２．１９（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．６３（２Ｈ，ＡＢＸ），３．８５〜４．９５
（ｍ），５．１５〜５．６０（ｍ），７．２７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．
３Ｈｚ），７．６０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），
８．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），８．１５（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニト
リル／水＝４／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔＲ＝１０．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５６６，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６１．３° 元素分析：Ｃ５９Ｈ６９Ｃｌ２ＮＯ３４として
【００４１】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６４‐クロロ‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテト
ラオシドの製造 実施例２の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ
‐ベンゾイル‐６‐クロロ‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，
６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β
‐Ｄ‐グルコピラノシド１．６５ｇ（１．１７ｍｍｏ
ｌ）を出発原料に用いること以外、実施例１の［２］の
（３）と同様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフ
ェニル＝６４‐クロロ‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マル
トテトラオシド９４２ｍｇ（１．１２ｍｍｏｌ，収率９
５．６％）を得た。
＝６４‐クロロ‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテト
ラオシドの製造 実施例２の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ
‐ベンゾイル‐６‐クロロ‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，
６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β
‐Ｄ‐グルコピラノシド１．６５ｇ（１．１７ｍｍｏ
ｌ）を出発原料に用いること以外、実施例１の［２］の
（３）と同様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフ
ェニル＝６４‐クロロ‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マル
トテトラオシド９４２ｍｇ（１．１２ｍｍｏｌ，収率９
５．６％）を得た。
【００４２】融点（℃）：１７８〜１８０（分解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝３．９７），２０９（ｌｏｇε＝４．１９） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３８６，１５８
７，１５２２，１４８９，１３４９，１２７４，１１５
０，１０７０，１０４７ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．１０〜３．９０（ｍ），５．０６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．７Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１
９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．９Ｈｚ），８．
２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニト
リル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔＲ＝７．７ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０２，Ｈ２Ｏ）；＋７
６．３° 元素分析：Ｃ３０Ｈ４３Ｃｌ２ＮＯ２２として Ｋｍ値： 対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．４９
ｍＭ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．６８ｍＭ
＝３．９７），２０９（ｌｏｇε＝４．１９） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ−１）：３３８６，１５８
７，１５２２，１４８９，１３４９，１２７４，１１５
０，１０７０，１０４７ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ６）：３．１０〜３．９０（ｍ），５．０６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．７Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１
９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．９Ｈｚ），８．
２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニト
リル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔＲ＝７．７ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０２，Ｈ２Ｏ）；＋７
６．３° 元素分析：Ｃ３０Ｈ４３Ｃｌ２ＮＯ２２として Ｋｍ値： 対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．４９
ｍＭ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．６８ｍＭ
【００４３】実施例３ ［１］ αーアミラーゼ活性の測定法（３） （１） 基質液の調製 下記［２］で得た表１記載の本発明で用いられる基質
を、それぞれ表１に記載の濃度になるように、４０ｍＭ
‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
を、それぞれ表１に記載の濃度になるように、４０ｍＭ
‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ２を含有する５０ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
【００４４】なお、表において、各種基質の化合物名を
次のごとく略称した。 ６ＣＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６
４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ‐
マルトテトラオシド（Ｍｗ ９０７） ４ＣＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４
４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ‐
マルトテトラオシド（Ｍｗ ９０７） ４６ＤＭＯ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４４，６４‐ジ‐Ｏ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マル
トテトラオシド（Ｍｗ ９０８） ６ＤＩＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６４‐デオキシ‐６４‐ヨード‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシド（Ｍｗ ９３２） ６ＢＤＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６４‐ブロモ‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシド（Ｍｗ ８８５） ６ＡＤＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６４‐アジド‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシド（Ｍｗ ８４７）
次のごとく略称した。 ６ＣＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６
４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ‐
マルトテトラオシド（Ｍｗ ９０７） ４ＣＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４
４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ‐
マルトテトラオシド（Ｍｗ ９０７） ４６ＤＭＯ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４４，６４‐ジ‐Ｏ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マル
トテトラオシド（Ｍｗ ９０８） ６ＤＩＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６４‐デオキシ‐６４‐ヨード‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシド（Ｍｗ ９３２） ６ＢＤＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６４‐ブロモ‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシド（Ｍｗ ８８５） ６ＡＤＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６４‐アジド‐６４‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシド（Ｍｗ ８４７）
【００４５】（２） 共役酵素の調製 （３） 標品α‐アミラーゼ液の調製 （４） 試料液の調製 （５） 検量線の作成 実施例１の［１］の（２）〜（５）と同様の操作で共役
酵素の調製、標品α‐アミラーゼ液の調製、試料液の調
製及び検量線の作成を行った。この検量線の式をＴＡ＝
Ｍ・ΔＡ×１０３＋Ｎ［ＴＡ；酵素活性（Ｕ／ｌ）、
△Ａ；１分間当りの吸光度の変化量］としたときのＭ及
びＮの値を表１に示す。
酵素の調製、標品α‐アミラーゼ液の調製、試料液の調
製及び検量線の作成を行った。この検量線の式をＴＡ＝
Ｍ・ΔＡ×１０３＋Ｎ［ＴＡ；酵素活性（Ｕ／ｌ）、
△Ａ；１分間当りの吸光度の変化量］としたときのＭ及
びＮの値を表１に示す。
【００４６】
【表１】
【００４７】（６） 試料液中のα‐アミラーゼ活性の
測定 実施例１の［１］の（６）と同様の操作で試料液中のα
‐アミラーゼ活性を精度よく測定することができた。
測定 実施例１の［１］の（６）と同様の操作で試料液中のα
‐アミラーゼ活性を精度よく測定することができた。
【００４８】［２］ 表１記載の各種基質の製造 （Ａ） ６ＣＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝６4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐
β‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）
カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→
４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐
α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，
６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの
製造 実施例１の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．００ｇ（１．５６ｍｍ
ｏｌ）をピリジン１５０ｍｌに溶解し、イソプロピルイ
ソシアネート３．０ｍｌ（３０．６ｍｍｏｌ）、ジメチ
ルアミノピリジン４７．５ｍｇ（０．３８９ｍｍｏｌ）
及びモレキュラシーブス４Ａ４．０ｇを加え、６５℃で
７時間かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液を
セライトベットでろ過し、ろ液中のピリジンを減圧下留
去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメ
タン混液（容量比５０：２：９８）で溶出した目的区分
を濃縮して、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐
［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロ
ピル）カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐
（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセ
チル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシド１．３７ｇ（１．００ｍｍｏｌ，収率６４．１
％）を得た。
ニル＝６4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐
β‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）
カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→
４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐
α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，
６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの
製造 実施例１の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．００ｇ（１．５６ｍｍ
ｏｌ）をピリジン１５０ｍｌに溶解し、イソプロピルイ
ソシアネート３．０ｍｌ（３０．６ｍｍｏｌ）、ジメチ
ルアミノピリジン４７．５ｍｇ（０．３８９ｍｍｏｌ）
及びモレキュラシーブス４Ａ４．０ｇを加え、６５℃で
７時間かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液を
セライトベットでろ過し、ろ液中のピリジンを減圧下留
去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメ
タン混液（容量比５０：２：９８）で溶出した目的区分
を濃縮して、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐
［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロ
ピル）カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐
（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセ
チル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシド１．３７ｇ（１．００ｍｍｏｌ，収率６４．１
％）を得た。
【００４９】融点（℃）：１１９〜１２１ 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３４００，２９６０，
１７４２，１５２４，１３７０，１２３２，１０３４ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：１．１８（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），２．
００〜２．１８（３３Ｈ，ｅａｃｈ ｓ），３．４６
（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，３．２Ｈｚ），３．６
５〜４．８５（ｍ），５．０６（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝
７．０Ｈｚ，Ｄ2Ｏ消失），５．１５〜５．５０
（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．
１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 薄層クロマトグラフィ［メルク（株）製シリカゲルＴＬ
ＣプレートＮｏ．５７１５，ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，
展開液：酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液
（容量比５０：２：９９）］：Ｒｆ＝０．４９ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５２４，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６４．５°
１７４２，１５２４，１３７０，１２３２，１０３４ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：１．１８（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），２．
００〜２．１８（３３Ｈ，ｅａｃｈ ｓ），３．４６
（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，３．２Ｈｚ），３．６
５〜４．８５（ｍ），５．０６（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝
７．０Ｈｚ，Ｄ2Ｏ消失），５．１５〜５．５０
（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．
１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 薄層クロマトグラフィ［メルク（株）製シリカゲルＴＬ
ＣプレートＮｏ．５７１５，ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，
展開液：酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液
（容量比５０：２：９９）］：Ｒｆ＝０．４９ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５２４，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６４．５°
【００５０】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐
Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 前記（Ａ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐（Ｎ
‐イソプロピル）カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド１．２８ｇ（０．９３４ｍｍｏｌ）を出
発原料に用いること以外、実施例１の［２］の（３）と
同様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ
‐マルトテトラオシド７３１ｍｇ（０．８０６ｍｍｏ
ｌ，収率８６．１％）を得た。
＝６4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐
Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 前記（Ａ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐（Ｎ
‐イソプロピル）カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド１．２８ｇ（０．９３４ｍｍｏｌ）を出
発原料に用いること以外、実施例１の［２］の（３）と
同様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ
‐マルトテトラオシド７３１ｍｇ（０．８０６ｍｍｏ
ｌ，収率８６．１％）を得た。
【００５１】融点（℃）：１６７〜１６９（分解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝３．９８），２２７（ｌｏｇε＝４．００），２０９
（ｌｏｇε＝４．２０） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３３６９，２９２９，
１７０１，１５８７，１５２２，１４８８，１３４９，
１２７３，１１４９，１０７８，１０４７ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：１．０６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），
３．０５〜３．８０（ｍ），４．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝１０．８Ｈｚ，６．１Ｈｚ），４．２２（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１０．８Ｈｚ），５．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７
Ｈｚ），５．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），５．
１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．
３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，
２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１１．３ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，Ｈ2Ｏ）；＋６
７．０° 元素分析：Ｃ34Ｈ51ＣｌＮ2Ｏ24として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．５７ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．４９ｍＭ
＝３．９８），２２７（ｌｏｇε＝４．００），２０９
（ｌｏｇε＝４．２０） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３３６９，２９２９，
１７０１，１５８７，１５２２，１４８８，１３４９，
１２７３，１１４９，１０７８，１０４７ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：１．０６（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），
３．０５〜３．８０（ｍ），４．０１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝１０．８Ｈｚ，６．１Ｈｚ），４．２２（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１０．８Ｈｚ），５．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７
Ｈｚ），５．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．２Ｈｚ），５．
１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．
３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，
２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１１．３ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，Ｈ2Ｏ）；＋６
７．０° 元素分析：Ｃ34Ｈ51ＣｌＮ2Ｏ24として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．５７ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．４９ｍＭ
【００５２】（Ｂ） ４ＣＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル＝４4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カ
ルバモイル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）
カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→
４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐
α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，
６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの
製造 実施例１の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１０．０ｇ（７．７９ｍｍ
ｏｌ）をＤＭＦ２００ｍｌに溶解し、（ｔ‐ブチルジメ
チル）シリルクロリド４．７０ｇ（３１．１ｍｍｏｌ）
及びイミダゾール６．７３ｇ（６２．３ｍｍｏｌ）を加
え、室温下で１５時間かきまぜながら反応させた。次い
でこの反応液中のＤＭＦを減圧下留去し、得られた残渣
をシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製し、酢
酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容量比３
３：１：９９）で溶出した目的区分を濃縮して、２‐ク
ロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐ア
セチル‐６‐Ｏ‐（ｔ‐ブチルジメチル）シリル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド９．４６ｇ（６．７
６ｍｍｏｌ，収率８６．８％）を得た。この内の３．５
０ｇ（２．５０ｍｍｏｌ）をピリジン１４０ｍｌに溶解
し、イソプロピルイソシアネート２４．６ｍｌ（２５０
ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン６１０ｍｇ（５．
００ｍｍｏｌ）及びモレキュラシーブス４Ａ７．０ｇを
加え、９０℃で１５時間かきまぜながら反応させた。次
いでこの反応液をセライトベットでろ過し、ろ液中のピ
リジンを減圧下留去し、得られた残渣を酢酸２８０ｍｌ
に溶解し、水７０ｍｌを加えて４０℃で６時間反応させ
た。反応液にジクロロメタン１．０ｌを加え、３％食塩
水各３００ｍｌで３回、飽和ＮａＨＣＯ3水各３００ｍ
ｌで３回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、綿栓ろ過
後、ろ液中のジクロロメタンを減圧下留去した。得られ
た残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製
し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容
量比５０：１：４９）で溶出した目的区分を濃縮して、
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐
Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモ
イル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→４）‐ビス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．６５ｇ
（１．９４ｍｍｏｌ，２工程通算収率７７．６％）を得
た。
‐ニトロフェニル＝４4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カ
ルバモイル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）
カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→
４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐
α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，
６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの
製造 実施例１の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１０．０ｇ（７．７９ｍｍ
ｏｌ）をＤＭＦ２００ｍｌに溶解し、（ｔ‐ブチルジメ
チル）シリルクロリド４．７０ｇ（３１．１ｍｍｏｌ）
及びイミダゾール６．７３ｇ（６２．３ｍｍｏｌ）を加
え、室温下で１５時間かきまぜながら反応させた。次い
でこの反応液中のＤＭＦを減圧下留去し、得られた残渣
をシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製し、酢
酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容量比３
３：１：９９）で溶出した目的区分を濃縮して、２‐ク
ロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐ア
セチル‐６‐Ｏ‐（ｔ‐ブチルジメチル）シリル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド９．４６ｇ（６．７
６ｍｍｏｌ，収率８６．８％）を得た。この内の３．５
０ｇ（２．５０ｍｍｏｌ）をピリジン１４０ｍｌに溶解
し、イソプロピルイソシアネート２４．６ｍｌ（２５０
ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノピリジン６１０ｍｇ（５．
００ｍｍｏｌ）及びモレキュラシーブス４Ａ７．０ｇを
加え、９０℃で１５時間かきまぜながら反応させた。次
いでこの反応液をセライトベットでろ過し、ろ液中のピ
リジンを減圧下留去し、得られた残渣を酢酸２８０ｍｌ
に溶解し、水７０ｍｌを加えて４０℃で６時間反応させ
た。反応液にジクロロメタン１．０ｌを加え、３％食塩
水各３００ｍｌで３回、飽和ＮａＨＣＯ3水各３００ｍ
ｌで３回洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥、綿栓ろ過
後、ろ液中のジクロロメタンを減圧下留去した。得られ
た残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィにより精製
し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容
量比５０：１：４９）で溶出した目的区分を濃縮して、
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐
Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモ
イル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→４）‐ビス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．６５ｇ
（１．９４ｍｍｏｌ，２工程通算収率７７．６％）を得
た。
【００５３】融点（℃）：１２５〜１２７ 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３４５１，２９６０，
１７５２，１５２３，１３７５，１２３２，１０３９ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：１．１５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．
１７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），２．００〜
２．１８（３３Ｈ，ｅａｃｈ ｓ），３．２０（１Ｈ，
ｂｒｔ様，Ｄ2Ｏ消失），３．５５〜４．９０（ｍ），
５．１５〜５．５０（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ），８．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈ
ｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈ
ｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝７．３ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５４０，１，４‐ジオキサ
ン）；＋７１．８°
１７５２，１５２３，１３７５，１２３２，１０３９ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：１．１５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），１．
１７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），２．００〜
２．１８（３３Ｈ，ｅａｃｈ ｓ），３．２０（１Ｈ，
ｂｒｔ様，Ｄ2Ｏ消失），３．５５〜４．９０（ｍ），
５．１５〜５．５０（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ），８．１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈ
ｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈ
ｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝７．３ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５４０，１，４‐ジオキサ
ン）；＋７１．８°
【００５４】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐
Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 前記（Ｂ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐（Ｎ
‐イソプロピル）カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド２．５０ｇ（１．８３ｍｍｏｌ）を出発
原料に用いること以外、実施例１の［２］の（３）と同
様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４
4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ‐
マルトテトラオシド１．４３ｇ（１．５８ｍｍｏｌ，収
率８６．３％）を得た。
＝４4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐
Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 前記（Ｂ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐（Ｎ
‐イソプロピル）カルバモイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル］‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド２．５０ｇ（１．８３ｍｍｏｌ）を出発
原料に用いること以外、実施例１の［２］の（３）と同
様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４
4‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ‐
マルトテトラオシド１．４３ｇ（１．５８ｍｍｏｌ，収
率８６．３％）を得た。
【００５５】融点（℃）：１７２〜１７４（分解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝４．０４），２２７（ｌｏｇε＝４．０４），２０９
（ｌｏｇε＝４．２５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３３９１，２９３２，
１７０１，１５８７，１５２３，１４８８，１３４８，
１２７３，１２５０，１１５１，１０２８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：１．０７（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），
３．１５〜３．８０（ｍ），４．３５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝
９．５Ｈｚ），５．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈ
ｚ），５．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．１
４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．
３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，
２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１５．８ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，Ｈ2Ｏ）；＋７
０．０° 元素分析：Ｃ34Ｈ51ＣｌＮ2Ｏ24として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．５３ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．７１ｍＭ
＝４．０４），２２７（ｌｏｇε＝４．０４），２０９
（ｌｏｇε＝４．２５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３３９１，２９３２，
１７０１，１５８７，１５２３，１４８８，１３４８，
１２７３，１２５０，１１５１，１０２８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：１．０７（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），
３．１５〜３．８０（ｍ），４．３５（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝
９．５Ｈｚ），５．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈ
ｚ），５．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．１
４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．
３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，
２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１５．８ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，Ｈ2Ｏ）；＋７
０．０° 元素分析：Ｃ34Ｈ51ＣｌＮ2Ｏ24として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．５３ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．７１ｍＭ
【００５６】（Ｃ） ４６ＤＭＯ‐ＣＮＰ：２‐クロロ
‐４‐ニトロフェニル＝４4，６4‐ジ‐Ｏ‐メトキシメ
チル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐メトキシメチ
ル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→４）‐ビス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造 実施例１の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．００ｇ（１.５６ｍｍ
ｏｌ）をアセトニトリル４０ｍｌに溶解し、メトキシメ
チルクロリド１.４２ｍｌ（１５.６ｍｍｏｌ）及びＮ,
Ｎ‐ジイソプロピルエチルアミン２.６６ｍｌ（１５.６
ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で還流しながら、３時間反応
させた。次いでこの反応液中の溶媒と過剰の試薬を減圧
下留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロ
ロメタン混液（容量比２０：１：９９）で溶出した目的
区分を濃縮して、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ
‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐メト
キシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→４）
‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１.７
８ｇ（１.３０ｍｍｏｌ，収率８３．３％）を得た。
‐４‐ニトロフェニル＝４4，６4‐ジ‐Ｏ‐メトキシメ
チル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐メトキシメチ
ル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→４）‐ビス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造 実施例１の［２］の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．００ｇ（１.５６ｍｍ
ｏｌ）をアセトニトリル４０ｍｌに溶解し、メトキシメ
チルクロリド１.４２ｍｌ（１５.６ｍｍｏｌ）及びＮ,
Ｎ‐ジイソプロピルエチルアミン２.６６ｍｌ（１５.６
ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で還流しながら、３時間反応
させた。次いでこの反応液中の溶媒と過剰の試薬を減圧
下留去し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロ
ロメタン混液（容量比２０：１：９９）で溶出した目的
区分を濃縮して、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ
‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐メト
キシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→４）
‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１.７
８ｇ（１.３０ｍｍｏｌ，収率８３．３％）を得た。
【００５７】融点（℃）：１０５〜１０７ 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：２９５７，１７５２，
１５２４，１３７１，１３４９，１２３８，１０３３ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：２．００〜２．１９（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３８（３Ｈ，ｓ），
３．６５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５０
（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．
１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝９．５ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５２０，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６９．６°
１５２４，１３７１，１３４９，１２３８，１０３３ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：２．００〜２．１９（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３８（３Ｈ，ｓ），
３．６５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５０
（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．
１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝９．５ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５２０，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６９．６°
【００５８】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４4，６4‐ジ‐Ｏ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルト
テトラオシドの製造 前記（Ｃ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐
Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐
（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセ
チル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシド１．７２ｇ（１．２６ｍｍｏｌ）を出発原料に用
いること以外、実施例１の［２］の（３）と同様の操作
を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４4，６4‐
ジ‐Ｏ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド
９６５ｍｇ（１．０６ｍｍｏｌ，収率８４．１％）を得
た。
＝４4，６4‐ジ‐Ｏ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルト
テトラオシドの製造 前記（Ｃ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐
Ｏ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐
（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセ
チル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシド１．７２ｇ（１．２６ｍｍｏｌ）を出発原料に用
いること以外、実施例１の［２］の（３）と同様の操作
を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４4，６4‐
ジ‐Ｏ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド
９６５ｍｇ（１．０６ｍｍｏｌ，収率８４．１％）を得
た。
【００５９】融点（℃）：１３２〜１３４（分解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝３．９６），２２７（ｌｏｇε＝３．９６），２０９
（ｌｏｇε＝４．１６） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３３８６，２９３０，
１５２３，１３４９，１２７５，１１５１，１０７８，
１０２５ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：３．２７（３Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，
ｓ），３．２０〜３．９５（ｍ），４．５９（２Ｈ，
ｓ），４．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），４．８
２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），５．０６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．
４Ｈｚ），５．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），
５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．４７（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１２．１ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，Ｈ2Ｏ）；＋７
６．４° 元素分析：Ｃ34Ｈ42ＣｌＮＯ25として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；１．５２ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；１．４３ｍＭ
＝３．９６），２２７（ｌｏｇε＝３．９６），２０９
（ｌｏｇε＝４．１６） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３３８６，２９３０，
１５２３，１３４９，１２７５，１１５１，１０７８，
１０２５ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：３．２７（３Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，
ｓ），３．２０〜３．９５（ｍ），４．５９（２Ｈ，
ｓ），４．６８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），４．８
２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），５．０６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．
４Ｈｚ），５．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），
５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．４７（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１２．１ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，Ｈ2Ｏ）；＋７
６．４° 元素分析：Ｃ34Ｈ42ＣｌＮＯ25として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；１．５２ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；１．４３ｍＭ
【００６０】（Ｄ） ６ＤＩＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐
４‐ニトロフェニル＝６4‐デオキシ‐６4‐ヨード‐β
‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐デオ
キシ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造 ＬｉＣｌの代わりにＮａＩを１９．３５ｇ（６２．３ｍ
ｍｏｌ）用いる以外は、実施例２の［２］の（１）と同
様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ
‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐
６‐デオキシ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ
‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド３．１９ｇ（２．１３ｍｍｏｌ，３工程
通算収率６８．３％）を得た。
４‐ニトロフェニル＝６4‐デオキシ‐６4‐ヨード‐β
‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐デオ
キシ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造 ＬｉＣｌの代わりにＮａＩを１９．３５ｇ（６２．３ｍ
ｍｏｌ）用いる以外は、実施例２の［２］の（１）と同
様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ
‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐
６‐デオキシ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ
‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド３．１９ｇ（２．１３ｍｍｏｌ，３工程
通算収率６８．３％）を得た。
【００６１】融点（℃）：１１８〜１２０ 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８１（ｌｏｇε
＝４．０３），２２９（ｌｏｇε＝４．３７） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：１７５１，１５８８，
１５２７，１４８４，１３７０，１３４９，１２３４，
１０３９ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：１．８９〜２．１９（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，６．
５Ｈｚ），３．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，
２．９Ｈｚ），３．７０〜４．９５（ｍ），５．１０〜
５．６０（ｍ），７．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈ
ｚ），７．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６
０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．００（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝４／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１２．１ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５７６，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６０．４° 元素分析：Ｃ59Ｈ69ＣｌＩＮＯ34として
＝４．０３），２２９（ｌｏｇε＝４．３７） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：１７５１，１５８８，
１５２７，１４８４，１３７０，１３４９，１２３４，
１０３９ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：１．８９〜２．１９（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，６．
５Ｈｚ），３．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ，
２．９Ｈｚ），３．７０〜４．９５（ｍ），５．１０〜
５．６０（ｍ），７．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈ
ｚ），７．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），７．６
０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．００（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），８．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝４／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１２．１ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５７６，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６０．４° 元素分析：Ｃ59Ｈ69ＣｌＩＮＯ34として
【００６２】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６4‐デオキシ‐６4‐ヨード‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシドの製造 前記（Ｄ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベン
ゾイル‐６‐デオキシ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐
グルコピラノシド１．６７ｇ（１．１１ｍｍｏｌ）を出
発原料に用いること以外、実施例１の［２］の（３）と
同様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６4‐ヨード‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオ
シド８５７ｍｇ（０．９２０ｍｍｏｌ，収率８２．５
％）を得た。
＝６4‐デオキシ‐６4‐ヨード‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシドの製造 前記（Ｄ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベン
ゾイル‐６‐デオキシ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐
グルコピラノシド１．６７ｇ（１．１１ｍｍｏｌ）を出
発原料に用いること以外、実施例１の［２］の（３）と
同様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６4‐ヨード‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオ
シド８５７ｍｇ（０．９２０ｍｍｏｌ，収率８２．５
％）を得た。
【００６３】融点（℃）：１８０〜１８２（分解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝３．９８），２０９（ｌｏｇε＝４．２２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３３８６，２９２７，
１５８７，１５２１，１４８４，１３４８，１２７４，
１２５０，１１５０，１０４４ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：２．９５〜３．８５（ｍ），５．０６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），５．１２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．０Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈ
ｚ），７．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１
８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．
２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝８．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１０，Ｈ2Ｏ）；＋６
６．０° 元素分析：Ｃ30Ｈ43ＣｌＩＮＯ22として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．３４ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．５８ｍＭ
＝３．９８），２０９（ｌｏｇε＝４．２２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３３８６，２９２７，
１５８７，１５２１，１４８４，１３４８，１２７４，
１２５０，１１５０，１０４４ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：２．９５〜３．８５（ｍ），５．０６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），５．１２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．０Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈ
ｚ），７．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１
８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．
２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝８．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１０，Ｈ2Ｏ）；＋６
６．０° 元素分析：Ｃ30Ｈ43ＣｌＩＮＯ22として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．３４ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．５８ｍＭ
【００６４】（Ｅ） ６ＢＤＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐
４‐ニトロフェニル＝６4‐ブロモ‐６4‐デオキシ‐β
‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐ブロ
モ‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造 ＬｉＣｌの代わりにＮａＢｒを用いる以外は、実施例２
の［２］の（１）と同様の操作を行い、２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐
４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐ブロモ‐６‐デオキシ‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．８７ｇ（１．９
８ｍｍｏｌ，３工程通算収率６３．６％）を得た。
４‐ニトロフェニル＝６4‐ブロモ‐６4‐デオキシ‐β
‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐ブロ
モ‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造 ＬｉＣｌの代わりにＮａＢｒを用いる以外は、実施例２
の［２］の（１）と同様の操作を行い、２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐
４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐ブロモ‐６‐デオキシ‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．８７ｇ（１．９
８ｍｍｏｌ，３工程通算収率６３．６％）を得た。
【００６５】融点（℃）：１２０〜１２２ 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８１（ｌｏｇε
＝４．０２），２２９（ｌｏｇε＝４．３８） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：１７４６，１５８６，
１５２８，１４８４，１４３２，１３７２，１２３４，
１０３６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：１．８９〜２．１９（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．４４（２Ｈ，ＡＢＸ），３．７５〜４．９５
（ｍ），５．１５〜５．６０（ｍ），７．２７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．
４Ｈｚ），７．６０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），
８．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），８．１５（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝４／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１１．１ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１０，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６１．６° 元素分析：Ｃ59Ｈ69ＢｒＣｌＮＯ34として
＝４．０２），２２９（ｌｏｇε＝４．３８） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：１７４６，１５８６，
１５２８，１４８４，１４３２，１３７２，１２３４，
１０３６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：１．８９〜２．１９（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．４４（２Ｈ，ＡＢＸ），３．７５〜４．９５
（ｍ），５．１５〜５．６０（ｍ），７．２７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．
４Ｈｚ），７．６０（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），
８．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），８．１５（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝４／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１１．１ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１０，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６１．６° 元素分析：Ｃ59Ｈ69ＢｒＣｌＮＯ34として
【００６６】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６4‐ブロモ‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシドの製造 前記（Ｅ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベン
ゾイル‐６‐ブロモ‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐
グルコピラノシド１．５０ｇ（１．０３ｍｍｏｌ）を出
発原料に用いること以外、実施例１の［２］の（３）と
同様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６4‐ブロモ‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオ
シド８０６ｍｇ（０．９１２ｍｍｏｌ，収率８８．２
％）を得た。
＝６4‐ブロモ‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシドの製造 前記（Ｅ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４‐Ｏ‐ベン
ゾイル‐６‐ブロモ‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐
グルコピラノシド１．５０ｇ（１．０３ｍｍｏｌ）を出
発原料に用いること以外、実施例１の［２］の（３）と
同様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６4‐ブロモ‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオ
シド８０６ｍｇ（０．９１２ｍｍｏｌ，収率８８．２
％）を得た。
【００６７】融点（℃）：１６９〜１７１（分解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝３．９７），２０９（ｌｏｇε＝４．２０） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：１５８７，１５２８３
１４８３，１３４９，１２７４，１１５０，１０４６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：３．１０〜３．８５（ｍ），５．０４（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．４Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１
９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．
３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝７．０ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０６，Ｈ2Ｏ）；＋７
０．５° 元素分析：Ｃ30Ｈ43ＢｒＣｌＮＯ22として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．４０ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．７３ｍＭ
＝３．９７），２０９（ｌｏｇε＝４．２０） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：１５８７，１５２８３
１４８３，１３４９，１２７４，１１５０，１０４６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：３．１０〜３．８５（ｍ），５．０４（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．４Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１
９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．
３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝７．０ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０６，Ｈ2Ｏ）；＋７
０．５° 元素分析：Ｃ30Ｈ43ＢｒＣｌＮＯ22として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．４０ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；０．７３ｍＭ
【００６８】（Ｆ） ６ＡＤＭ‐ＣＮＰ：２‐クロロ‐
４‐ニトロフェニル＝６4‐アジド‐６4‐デオキシ‐β
‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐アジド‐４‐Ｏ‐ベンゾイ
ル‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造 ＬｉＣｌの代わりにＮａＮ3を用いる以外は、実施例２
の［２］の（１）と同様の操作を行い、２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐
６‐アジド‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐デオキシ‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．６８ｇ（１．９
０ｍｍｏｌ，３工程通算収率６０．９％）を得た。
４‐ニトロフェニル＝６4‐アジド‐６4‐デオキシ‐β
‐Ｄ‐マルトテトラオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐アジド‐４‐Ｏ‐ベンゾイ
ル‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造 ＬｉＣｌの代わりにＮａＮ3を用いる以外は、実施例２
の［２］の（１）と同様の操作を行い、２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐
６‐アジド‐４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐デオキシ‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．６８ｇ（１．９
０ｍｍｏｌ，３工程通算収率６０．９％）を得た。
【００６９】融点（℃）：１１７〜１１９ 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：２９５７，２３６４，
２１０６，１７５２，１５８８，１５２３，１４８９，
１３７１，１３４９，１２３４，１０４０ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：１．８９〜２．１９（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．３８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２．９Ｈ
ｚ），３．８５〜４．９５（ｍ），５．１５〜５．６０
（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．
４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．６０（１Ｈ，
ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
６Ｈｚ），８．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，
２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝４／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１１．０ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６００，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６８．５°
２１０６，１７５２，１５８８，１５２３，１４８９，
１３７１，１３４９，１２３４，１０４０ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ3）：１．８９〜２．１９（３３Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．３８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．４Ｈｚ，２．９Ｈ
ｚ），３．８５〜４．９５（ｍ），５．１５〜５．６０
（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．
４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．６０（１Ｈ，
ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），７．９８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
６Ｈｚ），８．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，
２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝４／１（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝１１．０ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６００，１，４‐ジオキサ
ン）；＋６８．５°
【００７０】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６4‐アジド‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシドの製造 前記（Ｆ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐アジド‐
４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐
グルコピラノシド１．３５ｇ（０．９５５ｍｍｏｌ）を
出発原料に用いること以外、実施例１の［２］の（３）
と同様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６4‐アジド‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシド７３０ｍｇ（０．８６２ｍｍｏｌ，収率９０．２
％）を得た。
＝６4‐アジド‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシドの製造 前記（Ｆ）の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐アジド‐
４‐Ｏ‐ベンゾイル‐６‐デオキシ‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）‐ビス［Ｏ‐（２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐
グルコピラノシド１．３５ｇ（０．９５５ｍｍｏｌ）を
出発原料に用いること以外、実施例１の［２］の（３）
と同様の操作を行い、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６4‐アジド‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラ
オシド７３０ｍｇ（０．８６２ｍｍｏｌ，収率９０．２
％）を得た。
【００７１】融点（℃）：１６６〜１６８（分解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝３．９７），２２７（ｌｏｇε＝４．００），２０９
（ｌｏｇε＝４．２０） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３４２２，２９２９，
２１０５，１５８７，１５２２，１４８９，１３４９，
１２７４，１２７４，１１５０，１０７４，１０４６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：３．００〜３．８０（ｍ），５．０４（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．７Ｈｚ），５．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１
９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．
３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝９．８ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，Ｈ2Ｏ）；＋７
０．３° 元素分析：Ｃ30Ｈ43ＣｌＮ4Ｏ22として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．５３ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；１．０８ｍＭ
＝３．９７），２２７（ｌｏｇε＝４．００），２０９
（ｌｏｇε＝４．２０） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ-1）：３４２２，２９２９，
２１０５，１５８７，１５２２，１４８９，１３４９，
１２７４，１２７４，１１５０，１０７４，１０４６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ6）：３．００〜３．８０（ｍ），５．０４（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．７Ｈｚ），５．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１
９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．
３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ18カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０ｍ
ｍ），ＵＶ（２８０ｎｍ）検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１／３（ｖ／ｖ），流速：１．０ｍｌ／ｍｉ
ｎ］：ｔR＝９．８ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，Ｈ2Ｏ）；＋７
０．３° 元素分析：Ｃ30Ｈ43ＣｌＮ4Ｏ22として Ｋｍ値：対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）；０．５３ｍ
Ｍ 対ヒト唾液α‐アミラーゼ（Ｓ）；１．０８ｍＭ
【００７２】実施例４ 測定用試薬及びそれをを用いてのα‐アミラーゼ活性の
測定 （１） 試薬の調製 精製水に以下の成分を以下の濃度で溶解することによ
り、試薬を調製した。 成 分 濃 度 ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４4，６4‐ジ‐ Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ‐ マルトテトラオシド ５．０ｍＭ β‐グルコシダーゼ １０．０Ｕ／ｍｌ β‐グリセロリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０） ５０ｍＭ ＮａＣｌ ４０ｍＭ ウシ血清アルブミン ０．０５％
測定 （１） 試薬の調製 精製水に以下の成分を以下の濃度で溶解することによ
り、試薬を調製した。 成 分 濃 度 ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４4，６4‐ジ‐ Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル‐β‐Ｄ‐ マルトテトラオシド ５．０ｍＭ β‐グルコシダーゼ １０．０Ｕ／ｍｌ β‐グリセロリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０） ５０ｍＭ ＮａＣｌ ４０ｍＭ ウシ血清アルブミン ０．０５％
【００７３】（２） 測定法 測定用試料が液体の場合はそのまま試料液とした。固体
の場合は試料５００ｍｇを正確に秤量し、精製水加えて
全量を５．０ｍｌとし、必要に応じてろ過処理などで不
溶物を除去したのち、これを試料液とした。試料液２５
０μｌに試薬３．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２
分間加温したのち、２分間の４００ｎｍにおける吸光度
の変化量を測定した。この測定値とあらかじめ作成した
検量線から算出して試料液中のα‐アミラーゼ活性の測
定を行うことができる。なお、試料液中の酵素活性の値
が検量線の適用範囲を越えた場合は精製水を用いて相当
する倍数の希釈を行ったのち、再測定を行う。
の場合は試料５００ｍｇを正確に秤量し、精製水加えて
全量を５．０ｍｌとし、必要に応じてろ過処理などで不
溶物を除去したのち、これを試料液とした。試料液２５
０μｌに試薬３．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２
分間加温したのち、２分間の４００ｎｍにおける吸光度
の変化量を測定した。この測定値とあらかじめ作成した
検量線から算出して試料液中のα‐アミラーゼ活性の測
定を行うことができる。なお、試料液中の酵素活性の値
が検量線の適用範囲を越えた場合は精製水を用いて相当
する倍数の希釈を行ったのち、再測定を行う。
【００７４】参考例１ 加水分解部位の測定 前記実施例で得た表２記載の本発明で用いられる基質及
び非還元末端未修飾の公知の基質について、加水分解部
位の測定を行った。 （１） 基質液の調製 各基質の濃度を１ｍＭになるように、４０ｍＭ‐ＮａＣ
ｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。 （２） ヒト膵液α‐アミラーゼ液及びヒト唾液α‐ア
ミラーゼ液の調製 市販のヒト膵液α‐アミラーゼ及びヒト唾液α‐アミラ
ーゼ（表において、それぞれＨＰＡ、ＨＳＡと示す）に
精製水を加え、約３００Ｕ／ｌの濃度に溶解してα‐ア
ミラーゼ液とした。 （３） 加水分解反応 基質液１．０ｍｌに、（２）の各α‐アミラーゼ液１０
０μｌを加えてよくかき混ぜのち、３７℃で２０分間反
応させた。この反応液を高速液体クロマトグラフィで分
析することにより加水分解生成物を定量した。その結果
を表２に示す。なお、表などにおいて、前記以外の化合
物名の略称は表の下に記載した。
び非還元末端未修飾の公知の基質について、加水分解部
位の測定を行った。 （１） 基質液の調製 各基質の濃度を１ｍＭになるように、４０ｍＭ‐ＮａＣ
ｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。 （２） ヒト膵液α‐アミラーゼ液及びヒト唾液α‐ア
ミラーゼ液の調製 市販のヒト膵液α‐アミラーゼ及びヒト唾液α‐アミラ
ーゼ（表において、それぞれＨＰＡ、ＨＳＡと示す）に
精製水を加え、約３００Ｕ／ｌの濃度に溶解してα‐ア
ミラーゼ液とした。 （３） 加水分解反応 基質液１．０ｍｌに、（２）の各α‐アミラーゼ液１０
０μｌを加えてよくかき混ぜのち、３７℃で２０分間反
応させた。この反応液を高速液体クロマトグラフィで分
析することにより加水分解生成物を定量した。その結果
を表２に示す。なお、表などにおいて、前記以外の化合
物名の略称は表の下に記載した。
【００７５】
【表２】
【００７６】略称： ４６ＤＣＭ‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４4，６4‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイ
ル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド ６ＣＤＭ‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６4‐クロロ‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオ
シド Ｇ５‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐
Ｄ‐マルトペンタオシド Ｇ４‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐
Ｄ‐マルトテトラオシド Ｇ３‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐
Ｄ‐マルトトリオシド Ｇ２‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐
Ｄ‐マルトシド Ｇ‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ
‐グルコシド Ａｍｙ；ヒトα‐アミラーゼ
＝４4，６4‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイ
ル‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド ６ＣＤＭ‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
６4‐クロロ‐６4‐デオキシ‐β‐Ｄ‐マルトテトラオ
シド Ｇ５‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐
Ｄ‐マルトペンタオシド Ｇ４‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐
Ｄ‐マルトテトラオシド Ｇ３‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐
Ｄ‐マルトトリオシド Ｇ２‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐
Ｄ‐マルトシド Ｇ‐ＣＮＰ；２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ
‐グルコシド Ａｍｙ；ヒトα‐アミラーゼ
【００７７】表２から、本発明の方法における基質を用
いた場合には、いずれも各ヒトα‐アミラーゼの加水分
解によって実質的にはＧ‐ＣＮＰのみを生成するため、
α‐アミラーゼ活性を測定する際に必要な共役酵素がβ
‐グルコシダーゼのみでよいことが判る。これに対して
非還元末端未修飾の公知基質を用いた場合には、主とし
てＧ２‐ＣＮＰを生成するため、共役酵素にはα‐１，
４結合を切断する能力のあるα‐グルコシダーゼやグル
コアミラーゼなどのエキソ型加水分解酵素類をさらに必
要とすることが判る。
いた場合には、いずれも各ヒトα‐アミラーゼの加水分
解によって実質的にはＧ‐ＣＮＰのみを生成するため、
α‐アミラーゼ活性を測定する際に必要な共役酵素がβ
‐グルコシダーゼのみでよいことが判る。これに対して
非還元末端未修飾の公知基質を用いた場合には、主とし
てＧ２‐ＣＮＰを生成するため、共役酵素にはα‐１，
４結合を切断する能力のあるα‐グルコシダーゼやグル
コアミラーゼなどのエキソ型加水分解酵素類をさらに必
要とすることが判る。
【００７８】参考例２ α‐アミラーゼ活性を測定するための共役酵素として、
β‐グルコシダーゼのみを用いた場合における、本発明
で用いられる基質と非還元末端未修飾の公知の基質との
感度、すなわち単位時間における吸光度増加量（見掛け
の反応速度）の比較を行った。
β‐グルコシダーゼのみを用いた場合における、本発明
で用いられる基質と非還元末端未修飾の公知の基質との
感度、すなわち単位時間における吸光度増加量（見掛け
の反応速度）の比較を行った。
【００７９】（１） 基質液（ア）の調製 実施例１で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
４4，６4‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル
‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド（４６ＤＣＭ‐ＣＮＰ）
を８．１２５ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐Ｎａ
Ｃｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
４4，６4‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐イソプロピル）カルバモイル
‐β‐Ｄ‐マルトテトラオシド（４６ＤＣＭ‐ＣＮＰ）
を８．１２５ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐Ｎａ
Ｃｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。
【００８０】（２） 基質液（イ）の調製 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トペンタオシド（Ｇ５‐ＣＮＰ、Ｍｗ ９８４）を３．
２５ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び
２ｍＭ‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ＝７．０）に溶解した。なお、Ｇ５‐ＣＮＰのＫ
ｍ値は、対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）、対ヒト唾液
α‐アミラーゼ（Ｓ）が、それぞれ０．２９ｍＭ、０．
３７ｍＭである。
トペンタオシド（Ｇ５‐ＣＮＰ、Ｍｗ ９８４）を３．
２５ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び
２ｍＭ‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ＝７．０）に溶解した。なお、Ｇ５‐ＣＮＰのＫ
ｍ値は、対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）、対ヒト唾液
α‐アミラーゼ（Ｓ）が、それぞれ０．２９ｍＭ、０．
３７ｍＭである。
【００８１】（３） 基質液（ウ）の調製 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トテトラオシド（Ｇ４‐ＣＮＰ、Ｍｗ ８２２）を４．
００ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び
２ｍＭ‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ＝７．０）に溶解した。なお、Ｇ４‐ＣＮＰのＫ
ｍ値は、対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）、対ヒト唾液
α‐アミラーゼ（Ｓ）が、それぞれ０．４４ｍＭ、０．
４５ｍＭである。
トテトラオシド（Ｇ４‐ＣＮＰ、Ｍｗ ８２２）を４．
００ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び
２ｍＭ‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ＝７．０）に溶解した。なお、Ｇ４‐ＣＮＰのＫ
ｍ値は、対ヒト膵液α‐アミラーゼ（Ｐ）、対ヒト唾液
α‐アミラーゼ（Ｓ）が、それぞれ０．４４ｍＭ、０．
４５ｍＭである。
【００８２】（４） 共役酵素液（ア）の調製 市販のアーモンド由来のβ‐グルコシダーゼを１３Ｕ／
ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ
‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝
７．０）に混合して溶解した。
ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ
‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝
７．０）に混合して溶解した。
【００８３】（５） 共役酵素液（イ）の調製 市販の酵母由来のα‐グルコシダーゼ及びアーモンド由
来のβ‐グルコシダーゼをそれぞれ１１７Ｕ／ｌ、１３
Ｕ／ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２
ｍＭ‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝７．０）に混合して溶解した。なお、この市販のα
‐グルコシダーゼは東洋紡績（株）製を使用した。
来のβ‐グルコシダーゼをそれぞれ１１７Ｕ／ｌ、１３
Ｕ／ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２
ｍＭ‐ＭｇＣｌ2を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝７．０）に混合して溶解した。なお、この市販のα
‐グルコシダーゼは東洋紡績（株）製を使用した。
【００８４】（６） 標品α‐アミラーゼ液の調製 市販のヒトα‐アミラーゼ（Ｐ：Ｓ＝１：１）に精製水
を加え、２３０Ｕ／ｌの濃度に溶解して標品α‐アミラ
ーゼ液とした。
を加え、２３０Ｕ／ｌの濃度に溶解して標品α‐アミラ
ーゼ液とした。
【００８５】（７） 加水分解反応と直線式の算出 標品α‐アミラーゼ液２５０μｌにそれぞれの共役酵素
液［（ア）又は（イ）］１．０ｍｌを加えてかきまぜ、
３７℃で１分間加温したのち、それぞれの基質液
［（ア）、（イ）又は（ウ）］２．０ｍｌを加えてかき
まぜ、３７℃で２分間加温したのちからの２分間の４０
０ｎｍにおける吸光度の変化量を測定した。
液［（ア）又は（イ）］１．０ｍｌを加えてかきまぜ、
３７℃で１分間加温したのち、それぞれの基質液
［（ア）、（イ）又は（ウ）］２．０ｍｌを加えてかき
まぜ、３７℃で２分間加温したのちからの２分間の４０
０ｎｍにおける吸光度の変化量を測定した。
【００８６】この吸光度の変化量と時間との関係により
得られる直線の式はＡ＝ａ・ｔ＋ｂ［Ａ；吸光度（Ｏ
Ｄ）、ｔ；反応時間（ｍｉｎ）、ａ；速度定数（ＯＤ／
ｍｉｎ）、ｂ；初期（ｔ＝０）吸光度（ＯＤ）］である
から、それぞれの共役酵素液存在下におけるそれぞれの
基質を用いた場合の感度、すなわち単位時間当りの吸光
度の増加量（見掛けの反応速度）はａの値で比較されう
る。これらの結果を表３に示す。
得られる直線の式はＡ＝ａ・ｔ＋ｂ［Ａ；吸光度（Ｏ
Ｄ）、ｔ；反応時間（ｍｉｎ）、ａ；速度定数（ＯＤ／
ｍｉｎ）、ｂ；初期（ｔ＝０）吸光度（ＯＤ）］である
から、それぞれの共役酵素液存在下におけるそれぞれの
基質を用いた場合の感度、すなわち単位時間当りの吸光
度の増加量（見掛けの反応速度）はａの値で比較されう
る。これらの結果を表３に示す。
【００８７】
【表３】
【００８８】表３から、本発明の方法で用いられる基質
では、共役酵素としてβ−グルコシダーゼのみで十分な
感度が得られるのに対し、非還元末端未修飾の公知の基
質では、β−グルコシダーゼのみでは感度が低く、実質
的にはα−アミラーゼ活性の測定が行えないことが判
る。
では、共役酵素としてβ−グルコシダーゼのみで十分な
感度が得られるのに対し、非還元末端未修飾の公知の基
質では、β−グルコシダーゼのみでは感度が低く、実質
的にはα−アミラーゼ活性の測定が行えないことが判
る。
【図１】 実施例１におけるα‐アミラーゼ活性の測定
に用いる検量線のグラフ。
に用いる検量線のグラフ。
【図２】 実施例２におけるα‐アミラーゼ活性の測定
に用いる検量線のグラフ。
に用いる検量線のグラフ。
Claims (1)
- 【請求項１】 α‐アミラーゼ含有試料に、一般式 【化１】 （式中のＲは芳香族発色性基、Ｘはアジド基、ハロゲン
原子、Ｎ‐モノアルキルカルバモイルオキシ基又はアル
コキシメトキシ基、ＹはＮ‐モノアルキルカルバモイル
オキシ基又はアルコキシメトキシ基であるが、ＸとＹの
いずれか一方は水酸基であってもよい）で表わされる非
還元末端修飾β‐マルトテトラオシド誘導体とβ‐グル
コシダーゼを添加して酵素反応を行わせ、遊離する芳香
族発色性化合物を定量することを特徴とするα‐アミラ
ーゼ活性の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22091592A JPH0646895A (ja) | 1992-07-29 | 1992-07-29 | α‐アミラーゼ活性の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22091592A JPH0646895A (ja) | 1992-07-29 | 1992-07-29 | α‐アミラーゼ活性の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0646895A true JPH0646895A (ja) | 1994-02-22 |
Family
ID=16758540
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22091592A Pending JPH0646895A (ja) | 1992-07-29 | 1992-07-29 | α‐アミラーゼ活性の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0646895A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5693480A (en) * | 1994-07-18 | 1997-12-02 | Kikkoman Corporation | Method and reagent for determinng exo-type saccharide hydrolase activity |
-
1992
- 1992-07-29 JP JP22091592A patent/JPH0646895A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5693480A (en) * | 1994-07-18 | 1997-12-02 | Kikkoman Corporation | Method and reagent for determinng exo-type saccharide hydrolase activity |
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