JPH0656869A - ６‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα‐アミラーゼ活性の測定方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】 一般式 【化１】 （ｎは２〜６、Ｘは芳香族発色性基、Ｙ^１アルコキシメ
チル基、Ｙ^２は炭化水素基、アルキル若しくはアリール
スルホニル基又はアルコキシメチル基）で表わされるア
ルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体、これを有効
成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及びα‐アミ
ラーゼ含有試料に該オリゴシド誘導体と共役酵素とを加
えて酵素反応を行わせ、遊離する発色性化合物を定量し
てα‐アミラーゼ活性を測定する方法である。 【効果】 前記一般式で表わされるアルコキシメトキシ
マルトオリゴシド誘導体は新規な化合物であって、α‐
アミラーゼ活性測定用試薬として極めて有用で、これを
用いることにより、試料中に含まれる他の成分の影響を
受けることなく、α‐アミラーゼ活性を精度よく、短時
間で容易に測定することができる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、新規な６‐アルコキシ
メトキシマルトオリゴシド誘導体、該誘導体を有効成分
とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬、及び該誘導体を
用いてα‐アミラーゼ活性を効率良く、かつ正確に測定
する方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来、血清、尿、膵液、唾液などの体液
を対象とするα‐アミラーゼ活性の測定は、臨床診断上
極めて重要であり、特に急性や慢性の肝炎、膵臓炎、膵
臓ガン、流行性耳下腺炎などの鑑別診断においては必須
の測定項目となっている。

【０００３】このα‐アミラーゼ活性の測定方法につい
ては従来より種々の方法が知られているが、近年、各種
置換フェニルマルトオリゴシド類の非還元末端グルコー
スが各種の置換基で修飾された物質［共役酵素系に耐性
（安定性）を有する特徴をもつ］を基質として利用し、
α‐アミラーゼにより切断したのち、共役酵素系を作用
させ、生成する置換フェノール類をそのまま、あるいは
必要に応じてｐＨを変化させたのち、あるいは縮合させ
たのちに比色定量する方法が、広く用いられるようにな
ってきた。

【０００４】ところで、前記α‐アミラーゼ活性の測定
方法において用いられる基質については、一般に（１）
加水分解部位が１か所であること、（２）アイソザイム
により加水分解部位及び加水分解率が異ならないこと、
（３）加水分解生成物がさらにα‐アミラーゼの作用を
受けないこと、（４）α‐アミラーゼに対する親和性が
強く（Ｋｍ値が小）、加水分解速度が速いこと、（５）
水溶性に優れていること、などの選択条件が求められて
いる。

【０００５】しかしながら、これまで上記の条件を完全
に満たした非還元末端を修飾した基質は、まだ知られて
いない。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
従来のα‐アミラーゼ活性の測定試薬及びそれを用いる
測定方法が有する欠点を克服し、α‐アミラーゼ活性を
効率良く、かつ正確に測定しうる試薬として好適な新規
化合物を提供するとともに、これを試薬とした新規なα
‐アミラーゼ活性の測定方法を提供することを目的とし
てなされたものである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは前記目的を
達成するために種々研究を重ねた結果、α‐アミラーゼ
活性測定用試薬として特定の新規非還元末端の６‐アル
コキシメトキシマルトオリゴシド誘導体が極めて好適で
あり、これを用いてα‐アミラーゼ活性を測定すること
により、その目的を達成しうることを見出し、この知見
に基づいて本発明を完成するに至った。

【０００８】すなわち、本発明は、一般式

【化２】 ［式中のｎは２〜６の整数、Ｘは芳香族発色性基、Ｙ^１
は‐ＣＨ（Ｒ^１）‐Ｏ‐Ｒ^２若しくは‐ＣＨ（Ｒ^１）‐
Ｓ‐Ｒ^２で表わされる基、Ｙ^２は置換若しくは非置換の
炭化水素基、アルキル若しくはアリールスルホニル基又
は‐ＣＨ（Ｒ^３）‐Ｏ‐Ｒ^４若しくは‐ＣＨ（Ｒ^３）‐
Ｓ‐Ｒ^４で表わされる基であり、Ｒ^１及びＲ^３はそれぞ
れ水素原子又は置換若しくは非置換の炭化水素基、Ｒ^２
及びＲ^４はそれぞれ置換若しくは非置換の炭化水素基で
あるか、あるいはＲ^１とＲ^２又はＲ^３とＲ^４とが相互に
結合してアルキレン基を形成するものである］で表わさ
れる６‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体、
これを有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及
びこれを用いたα‐アミラーゼ活性の測定方法を提供す
るものである。

【０００９】本発明の前記一般式（Ｉ）の６‐アルコキ
シメトキシマルトオリゴシド誘導体におけるマルトオリ
ゴ糖部としては、α‐及びβ‐Ｄ‐マルトテトラオース
からα‐及びβ‐Ｄ‐マルトオクタオースに対応するも
のがすべて使用できる。これらの中でもＤ‐マルトペン
タオース、Ｄ‐マルトヘキサオース、Ｄ‐マルトヘプタ
オースが最終的な基質の性質の点から好適である。

【００１０】前記一般式（Ｉ）中のＹ^１は水素原子の１
個が酸素原子又は硫黄原子を介して炭化水素基で置換さ
れたメチル基あるいはこのメチル基の残りの水素原子の
１つがさらに炭化水素基で置換されたものである。

【００１１】また、一般式（Ｉ）中のＹ^２は、炭化水素
基、アルキルスルホニル基、アリールスルホニル基であ
るか、水素原子の１個が酸素原子又は硫黄原子を介して
炭化水素基で置換されたメチル基あるいはこのメチル基
の残りの水素原子の１つがさらに炭化水素基で置換され
たものである。

【００１２】上記の各炭化水素基の例としては、メチル
基、エチル基、イソプロピル基、ブチル基、アリル基、
シクロヘキシル基のような直鎖状、枝分れ状の飽和又は
不飽和脂肪族炭化水素基や、ベンジル基、フェニル基、
トルイル基、ナフチル基、ビフェニル基などの芳香族炭
化水素基などを挙げることができる。これらの炭化水素
基は、アルコキシ基、アシル基、カルボキシル基、ニト
ロ基、アルキルシリル基、スルホニル基、ハロゲン原子
などで置換されていてもよい。

【００１３】また、Ｙ^１及びＹ^２のメチル基に酸素原子
又は硫黄原子を介して結合している炭化水素基と、メチ
ル基に直接結合している炭化水素基とは相互に結合して
アルキレン基を構成し、それらが結合している酸素原子
又は硫黄原子及びメチル基構成炭素原子と共に環を形成
することもできる。

【００１４】次にＹ^２がアルキルスルホニル基又はアリ
ールスルホニル基の場合の例としては、メシル基、トシ
ル基、キノリンスルホニル基などを挙げることができ
る。

【００１５】一般式（Ｉ）においてＹ^１とＹ^２が共に酸
素原子又は硫黄原子を介して炭化水素基を結合したメチ
ル基である場合には、これらの基は同一である方が、製
造効率の点で特に有利である。

【００１６】次に前記一般式（Ｉ）で表わされる６‐ア
ルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体において、還
元末端グルコースの１位の水酸基に置換されるＸの芳香
族発色性基としては、分光学的に検出できればどのよう
なものを用いてもよいが、例えば一般式

【００１７】

【化３】 （式中のＲ^５〜Ｒ^９は水素原子、ハロゲン原子、ニトロ
基、アルキル基、アリール基、アラルキル基、アミノ
基、スルホン酸基、又はカルボキシル基であり、それぞ
れ同一であってもよいし、たがいに異なっていてもよ
く、またＲ^５とＲ^６、又はＲ^６とＲ^７が結合して、縮合
芳香環を形成してもよい）

【００１８】

【化４】 （式中のＲ^１０は水素原子又はアルキル基である）

【００１９】

【化５】 （式中のＲ^１１は水素原子又はハロゲン原子である）及
び

【００２０】

【化６】 （式中のＲ^１２〜Ｒ^１９は水素原子、ハロゲン原子、ニ
トロ基、アルキル基、アリール基、アラルキル基、アミ
ノ基、スルホン酸基、又はカルボキシル基であり、それ
ぞれ同一であってもよいし、たがいに異なっていてもよ
く、またＲ^１２とＲ^１３、又はＲ^１６とＲ^１７が結合し
て、縮合芳香環を形成してもよいし、さらにＲ^１３とＲ
^１６及び／又はＲ^１４とＲ^１９が共通の酸素原子となっ
て縮合エーテル環を形成してもよく、またＺは窒素原子
又はＮ→Ｏである）で表わされる基などが挙げられる。

【００２１】そして、前記一般式（Ｉ）で表わされる６
‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体は、α‐
アノマー（α‐配糖体）又はβ‐アノマー（β‐配糖
体）のいずれでもよい。したがって、前記一般式（Ｉ）
で表わされる化合物としては、２‐クロロ‐４‐ニトロ
フェニル＝４^５，６^５‐ジＯ‐（２‐メトキシ）エトキ
シメチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、２‐クロロ‐
４‐ニトロフェニル＝４^５，６^５‐ジＯ‐メトキシメチ
ル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニ
トロフェニル＝４^５，６^５‐ジＯ‐メチルチオメチル‐
β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロ
フェニル＝４^７，６^７‐ジＯ‐（２‐メトキシ）エトキ
シメチル‐β‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、４‐ニトロフ
ェニル＝４^７，６^７‐ジＯ‐テトラヒドロピラニル‐α
‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェノールインド‐３′‐
クロロフェニル＝６^５‐Ｏ‐メトキシメチル‐４^５‐Ｏ
‐メチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、２‐クロロ‐
４‐ニトロフェニル＝６^５‐Ｏ‐ｔ‐ブトキシメチル‐
４^５‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐
メチルウンベリフェロニル＝４^５，６^５‐ジＯ‐（２‐
メトキシ）エトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド、レザズリニル＝４^４，６^４‐ジＯ‐メトキシメチル
‐α‐Ｄ‐マルトテトラオシド、ルシフェリニル＝
４^７，６^７‐ジＯ‐ベンジルオキシメチル‐β‐Ｄ‐マ
ルトヘプタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
４^４，６^４‐ジＯ‐（２‐メトキシ）エトキシメチル‐
β‐Ｄ‐マルトテトラオシドなどが挙げられる。

【００２２】なお、上記において使用している記号の６
^５‐、６^７‐、４^５‐、４^７‐などは、マルトオリゴ糖
を構成するグルコース単位の還元末端側から５番目、７
番目のグルコース（すなわち非還元末端側のグルコー
ス）の６位、４位水酸基が置換されていることを示す。

【００２３】本発明の前記一般式（Ｉ）で表わされる６
‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体は文献未
載の新規化合物であって、該化合物を製造するためには
どのような方法を用いてもよいが、例えば次の方法によ
って製造することができる。

【００２４】出発原料としては、市販品又は公知の製造
方法で得ることできる、一般式

【化７】 （式中のＸ、ｎは前記と同じ意味を有する）で表わされ
るＤ‐マルトオリゴシド誘導体、例えば２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐
ニトロフェニル＝α‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェノ
ールインド‐３′‐クロロフェニル＝β‐Ｄ‐マルトペ
ンタオシドなどが用いられ、これに、一般式

【００２５】

【化８】 （式中のＲ^２０はメトキシ基、エトキシ基、水素原子、
アルキル基、又はアリール基、Ｒ^２１はメトキシ基又は
エトキシ基である）で表わされるカルボニル化合物又は
そのアセタール若しくはケタールを作用させて、一般式

【００２６】

【化９】 （式中のＲ^２０、Ｒ^２１、Ｘ、ｎは前記と同じ意味を有
する）で表わされる４，６‐Ｏ‐アルコキシメチリデン
化マルトオリゴシド誘導体、例えば２‐クロロ‐４‐ニ
トロフェニル＝４^５，６^５‐ジＯ‐ジメトキシメチリデ
ン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェニル
＝４^７，６^７‐Ｏ‐（１‐メトキシ）エチリデン‐α‐
Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェノールインド‐３′‐ク
ロロフェニル＝４^５，６^５‐Ｏ‐（１‐エトキシ）エチ
リデン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなどを得る。そし
て一般式（ＩＩＩ）で表わされるカルボニル化合物とし
ては、例えばテトラメトキシメタン、オルト酢酸トリエ
チル、オルト酢酸トリメチルなどが挙げられる。

【００２７】前記一般式（ＩＶ）で表わされる４，６‐
Ｏ‐アルコキシメチリデン化マルトオリゴシド誘導体を
得るこの反応は、通常、例えばＮ，Ｎ‐ジメチルホルム
アミド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ‐ジメチルアセトアミド（Ｄ
ＭＡ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヘキサメ
チルホスホリックトリアミド（ＨＭＰＡ）などの非プロ
トン性極性溶媒中において、ｐ‐トルエンスルホン酸、
塩化水素、硫酸、無水塩化亜鉛、強酸性イオン交換樹脂
などの触媒の存在下で行われる。

【００２８】このようにして得られた前記一般式（Ｉ
Ｖ）で表わされる４，６‐Ｏ‐アルコキシメチリデン化
マルトオリゴシド誘導体をアシル化して４，６‐Ｏ‐ア
ルコキシメチリデン化アシルマルトオリゴシド誘導体、
例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝テトラデカ‐
Ｏ‐アセチル‐４^５，６^５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェニル＝
エイコサ‐Ｏ‐ベンゾイル‐４^７，６^７‐Ｏ‐（１‐メ
トキシ）エチリデン‐α‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フ
ェノールインド‐３′‐クロロフェニル＝テトラデカ‐
Ｏ‐ブチリル‐４^５，６^５‐Ｏ‐（１‐エトキシ）エチ
リデン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドに導く。この際、
アシル化剤としては、例えば酢酸、モノクロロ酢酸、プ
ロピオン酸、ｎ‐酪酸、安息香酸などやこれらの酸無水
物、酸クロリド、エステルなどの反応性誘導体が用いら
れる。アシル化反応の条件については特に制限はなく、
従来アシル化反応において慣用されている条件を用いる
ことができる。

【００２９】次いで、このようにして得られた４，６‐
Ｏ‐アルコキシメチリデン化アシルマルトオリゴシド誘
導体に、脱アルコキシメチリデン化反応を行い、一般式

【００３０】

【化１０】 （式中のＲ^２２はアシル基、Ｘ、ｎは前記と同じ意味を
有する）で表わされる部分アシル化マルトオリゴシド誘
導体、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル‐Ｏ‐
（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド、４‐ニトロフェニル‐Ｏ‐（２，３‐
ジ‐Ｏ‐ベンゾイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ
‐ベンゾイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ベンゾイル‐α‐Ｄ‐
グルコピラノシドなどを得る。上記脱アルコキシメチリ
デン化反応の条件については特に制限はなく、公知の方
法、例えば酢酸又はギ酸を作用させる方法［例えば「ジ
ャーナル・オブ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソサエテ
ィ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）」、第８４巻、第
４３０ページ（１９６２）参照］を用いて行うことがで
きる。

【００３１】次に、このようにして得られた前記一般式
（Ｖ）で表わされる部分アシル化マルトオリゴシドにお
ける非還元末端グルコースの６位水酸基をアルコキシメ
チル化（Ｙ^１の導入）を行い、これと同時又はこれに続
いて４位水酸基への置換基（Ｙ^２）の導入を行って、一
般式

【００３２】

【化１１】 （式中のＸ、ｎ、Ｒ^２２、Ｙ^１、Ｙ^２は前記と同じ意味
を有する）で表わされるアシルアルコキシメトキシマル
トオリゴシド誘導体、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフ
ェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐アセチル‐４^５，６^５‐ジＯ
‐（メトキシ）エトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタ
オシド、４‐ニトロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐ブチリ
ル‐４^５，６^５‐ジＯ‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐マル
トペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝エ
イコサ‐Ｏ‐ベンゾイル‐６^７‐Ｏ‐ベンジルオキシメ
チル‐４^５‐Ｏ‐メチル‐β‐Ｄ‐マルトヘプタオシ
ド、フェノールインド‐３′‐クロロフェニル＝テトラ
デカ‐Ｏ‐クロロアセチル‐６^５‐Ｏ‐メチルチオメチ
ル‐４^５‐Ｏ‐トシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐ア
セチル‐４^５‐Ｏ‐ベンジル‐６^５‐Ｏ‐テトラヒドロ
ピラニル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなどを得る。

【００３３】６位水酸基のアルコキシメチル化反応（Ｙ
^１の導入）の条件について特に制限はないが、例えば通
常ジクロロメタン、アセトニトリル、ＤＭＳＯなどの有
機溶媒中で、Ｎ，Ｎ‐ジイソプロピル‐Ｎ‐エチルアミ
ン、ナトリウムハイドライド、硝酸銀などの塩基、ハロ
ゲン捕捉剤、酸触媒などの存在下で、加温又は加温しな
いで、例えばメトキシメチルクロリド、（２‐メトキ
シ）エトキシメチルクロリド、ベンジルオキシメチルク
ロリド、ヨウ化ジメチルスルフィドなどのアルコキシメ
チルハライド、ジヒドロピランなどを１〜３０倍モル作
用させることによって行われる［「プロテクティブ・グ
ループス・イン・オーガニック・シンセシス（Ｐｒｏｔ
ｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ
Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）」、Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒ
ｅｅｎｅ著、第１４〜２５ページ、１９８０年、ＪＯＨ
ＮＷＩＬＥＹ ＆ ＳＯＮＳ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ参
照］。

【００３４】さらに、４位水酸基に置換基（Ｙ^２）を導
入するための条件についても特に制限はないが、例えば
ＤＭＳＯ中において、水酸化カリウムの存在下でアルキ
ルハライドを作用させる、ベンゼン中において、水素化
ナトリウムの存在下でアラルキル又はアリールハライド
を作用させる、などの常法を用いてのエーテル化反応
［「新実験化学講座」第１４巻、有機化合物の合成と反
応［Ｉ］、第５６８〜６１１ページ、１９７７年、丸
善、参照］、例えばピリジン中において、アルキル又は
アリールスルホニルハライドを作用させるなどのスルホ
ニル化反応［「新実験化学講座」第１４巻、有機化合物
の合成と反応［ＩＩＩ］、第１７９３〜１７９８ペー
ジ、１９７７年、丸善、参照］、アルコキシメチル化
（前記参照）反応などを行えばよい。置換メチル化反応
においては、６位及び４位の反応を、例えば長時間反応
や高温反応などの反応条件を適宜選択することにより、
同時に行ってもよい。

【００３５】最後に、アシルアルコキシメトキシマルト
オリゴシド誘導体を脱アシル化すれば、前記一般式
（Ｉ）で表わされる目的化合物の６‐アルコキシメトキ
シマルトオリゴシド誘導体が得られる。この脱アシル化
反応の条件についても特に制限はないが、例えばアシル
アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体に、メタノ
ールなどのアルコール類中で炭酸カリウム、アンモニア
水、シアン化カリウムなどの塩基を作用させる方法が用
いられる［「プロテクティブ・グループス・イン・オー
ガニック・シンセシス（Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｇｒｏ
ｕｐｓ ｉｎ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉ
ｓ）」、Ｔｈｅｏｄｏｒａ Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ著、第５
０〜５５ページ、１９８０年、ＪＯＨＮ ＷＩＬＥＹ
＆ ＳＯＮＳ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ参照］。

【００３６】以上のようにして得られた一般式（Ｉ）で
表わされる６‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘
導体は、α‐アミラーゼ活性の測定に極めて有用であ
り、この６‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導
体を用いてα‐アミラーゼ活性を測定することができ
る。

【００３７】前記したように、一般式（Ｉ）で表わされ
る６‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体には
α‐アノマーとβ‐アノマーが存在するが、α‐アミラ
ーゼ活性の測定に際して、α‐アノマーのみを用いる場
合には共役酵素系として、α‐グルコシダーゼ及び／又
はグルコアミラーゼを用いることが必要であり、β‐ア
ノマーのみあるいはα‐アノマーとβ‐アノマーの混合
物を用いる場合にはα‐グルコシダーゼ及び／又はグル
コアミラーゼに加えてさらにβ‐グルコシダーゼを併用
することが必要である。また必要に応じてβ‐アミラー
ゼを用いてもよい。

【００３８】α‐アミラーゼ活性を測定するための有利
な系としては、例えば一般式（Ｉ）で表わされる６‐ア
ルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体０．１〜１０
ｍＭ及び緩衝液２〜３００ｍＭを含有し、かつ共役酵素
としてα‐グルコシダーゼ及び／又はグルコアミラーゼ
をそれぞれ５〜１０００単位／ｍｌ、さらにβ‐グルコ
シダーゼを用いるときは０．５〜３０単位／ｍｌを含有
するｐＨ４〜１０の系が挙げられる。この系に用いられ
る緩衝剤としては例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、グ
ッズ（ｇｏｏｄ’ｓ）の緩衝液、ホウ酸塩、クエン酸
塩、ジメチルグルタル酸塩などが挙げられる。

【００３９】α‐グルコシダーゼは動物、植物、微生物
などいかなる起源のものを用いてもよいが、例えば酵母
由来のものが好ましい。また、グルコアミラーゼもいか
なる起源のものを用いてもよいが、例えばリゾプス属
（Ｒｉｚｏｐｕｓ ｓｐ）などに由来するものが好まし
い。さらに、β‐グルコシダーゼもいかなる起源のもの
を用いてもよく、例えばアーモンドの種子から得たもの
が用いられる。β‐アミラーゼもいかなる起源のものを
用いてもよいが、例えば細菌や植物由来のものを用いる
ことができる。

【００４０】このような系に、前記成分以外に、本発明
の目的をそこなわない範囲で、さらに必要に応じて慣用
の種々の添加成分、例えば溶解補助剤、安定化剤とし
て、グリセリン、牛血清アルブミン、α‐又はβ‐シク
ロデキストリン、トリトンＸ‐１００などを加えること
ができるし、α‐アミラーゼ活性化剤として、ＮａＣ
ｌ，ＭｇＣｌ_２，ＭｇＳＯ_４，ＣａＣｌ_２，ＣａＣｌ_２
・Ｈ_２Ｏなどの形で用いられるＣｌ⁻イオン、Ｃａ^２＋
イオン、Ｍｇ^２＋イオンなどを加えてもよい。これらの
添加成分は１種用いてもよいし、２種以上を組み合わせ
て用いてもよく、また前記系調製の適当な段階で加える
ことができる。

【００４１】本発明の試薬は、乾燥物あるいは溶解した
形で用いてもよいし、薄膜状の担体、例えばシート、含
浸性の紙などに含浸させて用いてもよい。このような本
発明の試薬を用いることにより、各種の試料に含有され
るα‐アミラーゼ活性を簡単な操作で正確に、かつ高感
度で測定することができる。

【００４２】次に、本発明方法の好適な実施態様を説明
する。まず、α‐アミラーゼを含む試料に、共役酵素と
してのα‐グルコシダーゼ又はグルコアミラーゼあるい
はその両方をそれぞれ５〜１０００単位／ｍｌ、好まし
くは１０〜５００単位／ｍｌを加え、前記一般式（Ｉ）
で表わされる６‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド
誘導体がβ‐アノマーを含むときは、さらにβ‐グルコ
シダーゼを０．５〜３０単位／ｍｌ、好ましくは１〜１
５単位／ｍｌ加え、これと同時又はこれらの後に、該６
‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体を０．１
〜１０ｍＭ、好ましくは０．３〜５ｍＭを緩衝剤ととも
に添加したのち、温度２５〜４５℃、好ましくは３５〜
４０℃、ｐＨ４〜１０、好ましくは６〜８の条件下で少
なくとも１分間、好ましくは２〜１０分間酵素反応さ
せ、生成した芳香族発色性化合物を、常法に従いそのま
まであるいは必要に応じｐＨを調整したのち、又は縮合
反応を行ったのちに、適当な吸光波長で連続的に又は断
続的に吸光度変化量を測定し、あらかじめ測定したα‐
アミラーゼ標品の吸光度変化量と対比させて試料中のα
‐アミラーゼ活性を算出する。また、該芳香族発色性化
合物の分子吸光係数から、α‐アミラーゼ活性を算出す
ることもできる。

【００４３】本発明で用いられるα‐アミラーゼ含有試
料については、α‐アミラーゼ活性を含有するものであ
ればよく、特に制限はないが、具体的には微生物の培養
液、植物の抽出液、あるいは動物の体液や組織及びそれ
らの抽出液などを用いることができる。α‐アミラーゼ
含有試料が固体の場合には、いったん精製水又は前記し
たような緩衝液に溶解又は懸濁させるのがよい。また必
要により、不溶物をろ過などの操作で除去してもよい。

【００４４】

【発明の効果】本発明の前記一般式（Ｉ）で表わされる
６‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体は新規
な化合物であり、そして該化合物は前記した基質の選択
条件をすべて具備していて、α‐アミラーゼ活性測定用
試薬として極めて有用であり、このものを用いることに
より、試料中に含まれるグルコース、マルトース、ビリ
ルビン、ヘモグロビンなどの影響を受けることなく、α
‐アミラーゼ活性を自動分析法、用手法などにより、精
度よく短時間で容易に測定することができる。また、本
発明の化合物は分解されにくく、基質として長期間安定
であるという利点を有している。

【００４５】

【実施例】次に実施例により本発明をさらに詳細に説明
する。

【００４６】なお、各例中の吸収極大波長は特に示され
ない限り、メタノール中で測定した値であり、比旋光度
は２５℃においてＤ線で測定した値である。

【００４７】実施例１ ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝４^５，６^５‐ジＯ‐（２‐メトキシ）エトキシメチ
ル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４^５，６^５
‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シドの製造 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トペンタオシド１５．０ｇ（１５．２ｍｍｏｌ）を無水
ＤＭＦ７５ｍｌに溶解し、テトラメトキシメタン１５．
０ｍｌ（１１３ｍｍｏｌ）及びアンバーリスト(１５Ｅ)
［オルガノ（株）製］７．５ｇを加え、３５℃で４時間
かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液を氷冷下
１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）２．０ｌ中
へ、かきまぜながらゆっくりと滴下した。この混合液を
ＯＤＳ（オクタデシルシリカゲル）カラムクロマトグラ
フィーにより精製し、アセトニトリル‐水混液（容量比
３：７）で溶出した目的区分を濃縮し、イソプロパノー
ル‐メタノールから再結晶すると、２‐クロロ‐４‐ニ
トロフェニル＝４^５，６^５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドが１０．７ｇ（１０．１
ｍｍｏｌ、収率６６．５％）得られた。

【００４８】融点（℃）：９３．０〜９５．０（分解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２９５（ｌｏｇε
＝３．９５），２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝
４．１７） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４２０，２９４
０，１６４８，１５８８，１５２４，１４９０，１３５
２，１２７６，１２４６，１１５４，１０８２，１０５
０，１０２６，９３０，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：３．２５〜３．８５（ｍ），３．２３（３
Ｈ，ｓ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．８９（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），４．３０〜４．７０（ｍ），
５．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．１０（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．４Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），５．２５〜５．７０（ｍ），７．４７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝１：４ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝１０．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０，５０ｍＭリン酸ｂｕ
ｆｆｅｒ）；＋８６．７° 元素分析：Ｃ_３９Ｈ_５８ＣｌＮＯ_３０として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４４．３５ ５．５３ １．３３ 実測値（％） ４４．５５ ５．４３ １．３４

【００４９】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ＝グルコピ
ラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル＝α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］＝２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシドの製造 実施例１の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝４^５，６^５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐β‐Ｄ‐
マルトペンタオシド３．００ｇ（２．８４ｍｍｏｌ）を
ピリジン６０ｍｌに溶解し、無水酢酸３０ｍｌ（３８４
ｍｍｏｌ）を加え、室温で２日間かきまぜながら反応さ
せた。次いで反応液を減圧下濃縮し、ここに含まれるピ
リジン、無水酢酸、酢酸を留去した。得られたオイル状
のアセチル体を精製しないで酢酸１００ｍｌに溶解し、
水２５．０ｍｌを加え、３０℃で３日間かきまぜながら
反応させた。次いでこの反応液を氷水６００ｍｌ中へ、
かきまぜながらゆっくりと滴下したのち、この混合液を
ジクロロメタン６００ｍｌで３回抽出した。次いでジク
ロロメタン層を水６００ｍｌで３回洗浄し、ジクロロメ
タン層部を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ別したのち、
ろ液を減圧下濃縮し、ジクロロメタンを留去した。この
残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製
し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容
量比６６：２．５：３３）で溶出した目的区分を濃縮し
て、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐
ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ド２．０８ｇ（１．３２ｍｍｏｌ、２工程通算収率４
６．５％）が得られた。

【００５０】融点（℃）：１２６．０〜１３０．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８２（ｌｏｇε
＝３．９４）（アセトニトリル中で測定） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４８０，２９７
０，１７５２，１５８８，１５３０，１４８６，１４３
２，１３７２，１３５０，１２３６，１０３０，９４
４，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．８１〜２．１２（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．５０〜４．７４（ｍ），５．０５（ｍ），
７．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．０９（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２２
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝７：３ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝４．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．２５，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８８．０°

【００５１】（３） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐
（２‐メトキシ）エトキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラ
ノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐
グルコピラノシドの製造 まず、トリエチルアミン３．０ｍｌに（２‐メトキシ）
エトキシメチルクロリド１１２５ｍｇ（９．０ｍｍｏ
ｌ）を加え、室温下かきまぜながら３０分間反応させた
のち、過剰のトリエチルアミンを減圧下留去した。ここ
へ実施例１の（２）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グル
コピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，
６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β
‐Ｄ‐グルコピラノシド９４２ｍｇ（０．５９９ｍｍｏ
ｌ）をアセトニトリル２０ｍｌに溶解した溶液を加え、
還流温度でかきまぜながら８時間反応させた。次いでこ
の反応液中のアセトニトリルを減圧下留去し、この残渣
をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、
メタノール‐クロロホルム混液（容量比１：２００）で
溶出した目的区分を濃縮すると、２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６
‐ジＯ‐（２‐メトキシ）エトキシメチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド７８０ｍｇ（０．４４６ｍ
ｍｏｌ、収率７４．４％）が得られた。

【００５２】融点（℃）：９１．０〜９３．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε
＝３．９７），２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝
４．２１） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４７０，２９４
０，１７５０，１５８６，１５３０，１４８６，１４３
２，１３７２，１３５０，１２３８，１０３４，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．９９〜２．２１（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．３６（３Ｈ，ｓ），３．３９（３Ｈ，
ｓ），３．４５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５０
（ｍ），７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．
１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ＹＭＣ（株）製 ＹＭＣ‐
Ｐａｃｋ ＯＤＳ‐ＡＱ３１２Ｓ５カラム（６．０ｍｍ
ＩＤ×１５０ｍｍ）ＵＶ_２8０ｎｍ検出、溶離液：アセ
トニトリル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍ
ｉｎ］：Ｒ^ｔ＝１１．５ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５６２，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８９．６° 元素分析：Ｃ_７２Ｈ_６２ＣｌＮＯ_３０として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４９．４４ ５．６５ ０．８０ 実測値（％） ４９．２８ ５．７４ ０．７８

【００５３】（４） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４^５，６^５‐ジＯ‐（２‐メトキシ）エトキシメチル
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの製造 実施例１の（３）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐
（２‐メトキシ）エトキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラ
ノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐
グルコピラノシド７８０ｍｇ（０．４４６ｍｍｏｌ）に
メタノール５３ｍｌ，２８ｗｔ％アンモニア水１３．４
ｍｌ及び水２６．８ｍｌを加え、３５℃で１６時間かき
まぜながら反応させた。次いで反応液を減圧濃縮し、こ
こに含まれるメタノールを留去した。次いでその濃縮液
をＯＤＳカラムクロマトグラフィーにより精製し、アセ
トニトリル‐水混液（容量比３：７）で溶出した目的区
分を濃縮し、凍結乾燥して、２‐クロロ‐４‐ニトロフ
ェニル＝４^５，６^５‐ジＯ‐（２‐メトキシ）エトキシ
メチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド３５９ｍｇ（０．
３０９ｍｍｏｌ，収率６９．３％）が得られた。

【００５４】融点（℃）：１２１．０〜１２３．０（分
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝３．９８），２２７（ｌｏｇε＝３．９８），２０９
（ｌｏｇε＝４．２１） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４３０，２９３
０，１５８４，１５２２，１４８６，１３４８，１２７
６，１２４８，１１５４，１０８０，１０２４，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：３．１５〜３．８０（ｍ），３．２５（３
Ｈ，ｓ），３．２６（３Ｈ，ｓ），４．３０〜４．５５
（ｍ），４．６４（２Ｈ，ｓ），４．７３（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝６．４Ｈｚ），４．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈ
ｚ），５．０３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．０
５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．９Ｈｚ），５．１０（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
６Ｈｚ），５．３０〜５．６５（ｍ），７．４７（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．２Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝５．８ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０２，メタノール）；＋
８１．１° 元素分析：Ｃ_４４Ｈ_７０ＣｌＮＯ_３２として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４５．５４ ６．０８ １．２１ 実測値（％） ４５．３１ ６．１４ １．１２

【００５５】実施例２ ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝４^５，６^５‐ジＯ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マル
トペンタオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐メトキシメチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造

【００５６】実施例１の（２）と同様の操作で得た２‐
クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐
アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐
トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１８８
４ｍｇ（１．２０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル３０ｍｌ
に溶解し、メトキシメチルクロリド９６６ｍｇ（１２ｍ
ｍｏｌ）及びＮ，Ｎ‐ジイソプロピル‐Ｎ‐エチルアミ
ン１５５１ｍｇ（１２ｍｍｏｌ）を加え、かきまぜなが
ら３時間還流しながら反応させたのち、過剰の溶媒とア
ミンを減圧下留去し、この残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーにより精製し、メタノール‐クロロホル
ム混液（容量比１：２００）で溶出した目的区分を濃縮
すると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐メトキシメチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１７２１ｍｇ
（１．０４ｍｍｏｌ，収率８６．６％）が得られた。

【００５７】融点（℃）：１１０．０〜１１３．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε
＝３．９６）、２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝
４．１９） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４８０，２９６
０，１７５０，１５８６，１５３０，１４８６，１４３
２，１３７０，１３５０，１２３６，１０３０，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．９９〜２．２１（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．３３（３Ｈ，ｓ），３．３８（３Ｈ，
ｓ），３．６５〜４．８０（ｍ），５．１５〜５．５０
（ｍ），７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．
１７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ＹＭＣ（株）製 ＹＭＣ‐
Ｐａｃｋ ＯＤＳ‐ＡＱ３１２Ｓ５カラム（６．０ｍｍ
ＩＤ×１５０ｍｍ）ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセ
トニトリル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍ
ｉｎ］：Ｒ^ｔ＝１２．４ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．４７０、１，４‐ジオキサ
ン）；＋８７．４° 元素分析：Ｃ_６８Ｈ_９０ＣｌＮＯ_４４として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４９．１８ ５．４６ ０．８４ 実測値（％） ４９．４１ ５．３９ ０．７９

【００５８】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４^５，６^５‐ジＯ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルト
ペンタオシドの製造 実施例２の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐
メトキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ド１．５２ｇ（０．９１５ｍｍｏｌ）を原料に用いたこ
と以外は、実施例１の（４）と同様の操作を行うことに
より、目的の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４^５，
６^５‐ジＯ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シド７７３ｍｇ（０．７２１ｍｍｏｌ，収率７８．８
％）が得られた。

【００５９】融点（℃）：１４９．０〜１５１．０（分
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝３．９８）、２２７（ｌｏｇε＝３．９８），２０９
（ｌｏｇε＝４．１８） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４２０，２９３
０，１５８６，１５２４，１４８８，１３５０，１２７
４，１２５０，１１５２，１０８０，１０２４，９２
４，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：３．２０〜３．８０（ｍ），３．２７（３
Ｈ，ｓ），３．３１（３Ｈ，ｓ），４．３０〜４．５５
（ｍ），４．６４（２Ｈ，ｓ），４．７３（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝６．４Ｈｚ），４．８６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈ
ｚ），４．５８（２Ｈ，ｓ），４．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝６．４Ｈｚ），４．８２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈ
ｚ），５．０５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．０
７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．１２（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
６Ｈｚ），５．３０〜５．６５（ｍ），７．４７（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．２Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝５．９ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０４、メタノール）；＋
９２．８° 元素分析：Ｃ_４０Ｈ_６２ＣｌＮＯ_３０として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４４．８０ ５．０８ １．３１ 実測値（％） ４４．７１ ５．１２ １．３３

【００６０】実施例３ ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝４^５，６^５‐ジＯ‐ベンジルオキシメチル‐β‐Ｄ
‐マルトペンタオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐ベンジルオキシ
メチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ト
リス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造 メトキシメチルクロリドの代わりにベンジルオキシメチ
ルクロリド１８７９ｍｇ（１２ｍｍｏｌ）を加えたこと
以外は、実施例２の（１）と同様の操作を行うことによ
り、目的の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐
（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐ベンジル
オキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ド１３３０ｍｇ（０．７３４ｍｍｏｌ，収率６１．２
％）が得られた。

【００６１】融点（℃）：９２．０〜９５．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε
＝３．９７），２２８（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝
４．４９） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４６０，２９５
０，１７４８，１５８４，１５２８，１４８４，１４３
０，１３７０，１３５０，１２３６，１０３４，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．９９〜２．２１（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．７０〜４．８０（ｍ），５．１５〜５．５
０（ｍ），７．２７〜７．３２（ｍ），８．１７（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ₁₈カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝３６．７ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．４７０、１，４‐ジオキサ
ン）；＋８６．７° 元素分析：Ｃ_８０Ｈ_９８ＣｌＮＯ_４４として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ５３．００ ５．４５ ０．７７ 実測値（％） ５２．８６ ５．５１ ０．７５

【００６２】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４^５，６^５‐ジＯ‐ベンジルオキシメチル‐β‐Ｄ‐
マルトペンタオシドの製造 実施例３の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐
ベンジルオキシメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシド１．３３ｇ（０．７３４ｍｍｏｌ）を原料に用い
たこと以外は、実施例１の（４）と同様の操作を行うこ
とにより、目的の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４
^５，６^５‐ジＯ‐ベンジルオキシメチル‐β‐Ｄ‐マル
トペンタオシド６３０ｍｇ（０．５１４ｍｍｏｌ，収率
７０．０％）が得られた。

【００６３】融点（℃）：１３３．０〜１３５．０（分
解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝３．９５）、２２７（ｌｏｇε＝３．９６），２０９
（ｌｏｇε＝４．４５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４２０，２９３
０，１５８４，１５２０，１４９０，１４５４，１３５
０，１２７４，１２５０，１１５０，１０８０，１０２
６，９３２，８９４ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：３．１５〜３．８５（ｍ），４．５３（２
Ｈ，ｓ），４．６０（２Ｈ，ｓ），４．７０（２Ｈ，
ｓ），４．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），４．９
６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），５．０５（２Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．
２Ｈｚ），５．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），
５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），５．２５〜
５．７０（ｍ），７．３０（１０Ｈ，ｂｒｓ），７．４
６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝４．０ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１２、１，４‐ジオキサ
ン：水＝１：１ｖ／ｖ）；＋９２．８° 元素分析：Ｃ_５２Ｈ_７０ＣｌＮＯ_３０として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ５１．００ ５．７６ １．１４ 実測値（％） ５０．８１ ５．９２ １．２３

【００６４】実施例４ ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝４^５，６^５‐ジＯ‐メチルチオメチル‐β‐Ｄ‐マ
ルトペンタオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐メチルチオメチ
ル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造 実施例１の（２）と同様の操作で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α
‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．５０ｇ（１．５
９ｍｍｏｌ）をＤＭＳＯ１００ｍｌに溶解し、無水酢酸
１００ｍｌを加え、室温下でかきまぜながら１５時間反
応させたのち、この反応液にトルエン２５０ｍｌ及び水
２５０ｍｌを加え、３５℃で２４時間反応させた。次に
トルエン１．５ｌを加え、３ｗｔ％ＮａＣｌ水５００ｍ
ｌで３回洗浄し、トルエン層を無水硫酸ナトリウムで乾
燥し、綿栓ろ過後、ろ液中の溶媒を減圧下留去した。得
られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによ
り精製し、メタノール‐ジクロロメタン‐酢酸エチル混
液（容量比１：１００：５０）で溶出した目的区分を濃
縮すると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐
（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐メチルチ
オメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐
トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．４
７ｇ（０．８７６ｍｍｏｌ，収率５５．０％）が得られ
た。

【００６５】融点（℃）：８７．０〜９０．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε
＝４．０５），２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝
４．２９） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３５００，２９７
０，１７４８，１５８６，１５３０，１４８６，１４３
２，１３７２，１３５２，１２３６，１０３２，９４
４，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：２．００〜２．１９（ｃａ．４５Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．４５〜３．６０（４Ｈ，ｍ），３．７０〜
４．８５（ｍ），５．１５〜５．５０（ｍ），７．２８
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．１７（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ＹＭＣ（株）製 ＹＭＣ‐
Ｐａｃｋ ＯＤＳ‐ＡＱ３１２Ｓ５カラム（６．０ｍｍ
ＩＤ×１５０ｍｍ）ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセ
トニトリル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍ
ｉｎ］：Ｒ^ｔ＝８．７ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．３８０、１，４‐ジオキサ
ン）；＋１１４．５° 元素分析：Ｃ_６７Ｈ_８８ＣｌＮＯ_４２Ｓ_２として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４７．９３ ５．２８ ０．８３ 実測値（％） ４８．１９ ５．４４ ０．７１

【００６６】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４^５，６^５‐ジＯ‐メチルチオメチル‐β‐Ｄ‐マル
トペンタオシドの製造 実施例４の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐
メチルチオメチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ド１．４７ｇ（０．８７６ｍｍｏｌ）を原料に用いたこ
と以外は、実施例１の（４）と同様の操作を行うことに
より、目的の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４^５，
６^５‐ジＯ‐メチルチオメチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタ
オシド５９９ｍｇ（０．５４９ｍｍｏｌ，収率６２．７
％）が得られた。

【００６７】融点（℃）：１７６〜１７８（分解） 紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝４．０６），２２７（ｌｏｇε＝４．０５），２０９
（ｌｏｇε＝４．２６） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４２０，２９３
０，１５８８，１５２４，１４９０，１３５０，１２７
６，１１５２，１０７８，１０２６，９２６，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：２．２０（３Ｈ，ｓ），２．２５（３Ｈ，
ｓ），３．０５〜３．８０（ｍ），３．７６（２Ｈ，
ｓ），３．８０（２Ｈ，ｓ），４．２０〜４．４０
（ｍ），４．７０〜４．９５（ｍ），５．０５（３Ｈ，
ｂｒｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ），５．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．７Ｈｚ），５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈ
ｚ），５．３０〜５．７０（ｍ），７．４７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．２０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝９．９ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０２、メタノール）；＋
８４．５° 元素分析：Ｃ_３９Ｈ_６０ＣｌＮＯ_２８Ｓ_２として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４２．９６ ５．５５ １．２８ 実測値（％） ４３．１８ ５．６９ １．２７

【００６８】実施例５ ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝４^７，６^７‐ジＯ‐テトラヒドロピラニル‐β‐Ｄ
‐マルトヘプタオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４^７，６^７
‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐β‐Ｄ‐マルトヘプタオ
シドの製造 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トヘプタオシド１５．０ｇ（１１．５ｍｏｌ）を無水Ｄ
ＭＦ７５ｍｌに溶解し、テトラメトキシメタン１５．０
ｍｌ（１１３ｍｍｏｌ）、アンバーリスト（１５Ｅ）
７．５ｇを加え、３５℃で４時間かきまぜながら反応さ
せた。次いでこの反応液を氷冷下１００ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ＝７．０）２．０ｌ中へ、かきまぜながらゆっ
くりと滴下した。この混合液をＯＤＳ（オクタデシルシ
リカゲル）カラムクロマトグラフィーにより精製し、ア
セトニトリル‐水混液（容量比３５：６５）で溶出した
目的区分を濃縮すると、オイル状の２‐クロロ‐４‐ニ
トロフェニル＝４^７，６^７‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン
‐β‐Ｄ‐マルトヘプタオシドが１０．０ｇ（７．２５
ｍｍｏｌ，収率６３．０％）得られた。

【００６９】紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２９５（ｌｏｇε
＝３．９６），２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝
４．２０） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４２０，２９４
０，１６４６，１５８６，１５２６，１４８８，１３５
２，１２７４，１２４８，１１５４，１０８０，１０４
８，１０２４，９３０，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：３．３０〜３．８５（ｍ），３．２４（３
Ｈ，ｓ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．９０（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），４．３５〜４．７０（ｍ），
５．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．１１（４
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７．６Ｈｚ），５．２５〜５．７０（ｍ），７．４７
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝１：４ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝１１．９ｍｉｎ 元素分析：Ｃ_５１Ｈ_７８ＣｌＮＯ_４０として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４４．３７ ５．６９ １．０１ 実測値（％） ４４．５５ ５．５３ １．００

【００７０】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジＯ‐テ
トラヒドロピラニル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ
‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）
‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピ
ラノシドの製造

【００７１】実施例５の（１）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝４^７，６^７‐Ｏ‐ジメトキシメチリデ
ン‐β‐Ｄ‐マルトヘプタオシド３．００ｇ（２．１７
ｍｍｏｌ）を原料に使用したこと以外は、実施例１の
（２）と同様の操作を行った。得られた物質を精製する
ことなくジクロロメタン５０ｍｌに溶解し、ジヒドロピ
ラン９１３ｍｇ（１０．９ｍｍｏｌ）、トシル酸‐水和
物４１．８ｍｇ（０．２２ｍｍｏｌ）及びモレキュラシ
ーブス４Ａを加えて室温下、３時間かきまぜながら反応
させた。次にジクロロメタン１ｌを加え、飽和重炭酸ナ
トリウム水溶液５００ｍｌで３回、さらに３ｗｔ％Ｎａ
Ｃｌ水溶液５００ｍｌで３回洗浄し、ジクロロメタン層
を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、綿栓ろ過後、ろ液中の
溶媒を減圧下留去した。得られた残渣をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーにより精製し、メタノール‐ジク
ロロメタン‐酢酸エチル混液（容量比１：１００：５
０）で溶出した目的区分を濃縮すると、オイル状の２‐
クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐
アセチル‐４，６‐ジＯ‐テトラヒドロピラニル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ
‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドが２．１０ｇ（０．
９０３ｍｍｏｌ，３工程通算収率４１．６％）得られ
た。

【００７２】紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε
＝３．９９），２２７（ｓｈ），２０５（ｌｏｇε＝
４．４８） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４８０，２９７
０，１７４６，１５８４，１５３０，１４８６，１４３
０，１３７２，１３５０，１２３６，１０３２，９４
２，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．５５〜１．６０（ｍ），２．００〜２．１
９（ｃａ．６０Ｈ，ｅａｃｈ ｓ），３．５５〜４．８
５（ｍ），５．０５〜５．５０（ｍ），７．２８（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ＹＭＣ（株）製 ＹＭＣ‐
Ｐａｃｋ ＯＤＳ‐ＡＱ３１２Ｓ５カラム（６．０ｍｍ
ＩＤ×１５０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：ア
セトニトリル／水＝７：３ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／
ｍｉｎ］：Ｒ^ｔ＝１０．７ｍｉｎ 元素分析：Ｃ_９８Ｈ_１３８ＣｌＮＯ_６０として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ５０．６１ ５．９８ ０．６０ 実測値（％） ５０．４８ ５．７５ ０．５４

【００７３】（３） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝４^７，６^７‐ジＯ‐テトラヒドロピラニル＝β‐Ｄ‐
マルトヘプタオシドの製造

【００７４】実施例５の（２）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐
４，６‐ジＯ‐テトラヒドロピラニル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐
β‐Ｄ‐グルコピラノシド２．１０ｇ（０．９０３ｍｍ
ｏｌ）を原料に用いたこと以外は、実施例１の（４）と
同様の操作を行うことにより、目的の２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝４^７，６^７‐ジＯ‐テトラヒドピラニ
ル＝β‐Ｄ‐マルトヘプタオシド９３５ｍｇ（０．６３
３ｍｍｏｌ，収率７０．１％）が得られた。

【００７５】紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８９（ｌｏｇε
＝４．０６），２２７（ｌｏｇε＝４．０５），２０９
（ｌｏｇε＝４．２６） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４２０，２９３
０，１５８８，１５２４，１４９０，１３５０，１２７
６，１１５２，１０７８，１０２６，９２６，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：１．５５〜１．６５（６Ｈ，ｍ），３．１
５〜３．８５（ｍ），４．０５〜４．６５（ｍ），４．
７０〜４．９５（ｍ），５．００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．
８Ｈｚ），５．０４（４Ｈ，ｂｒｓ），５．１０（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
７．６Ｈｚ），５．３０〜５．６０（ｍ），７．４６
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），８．１８（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製 ＴＳＫｇ
ｅｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝１０．２ｍｉｎ 元素分析：Ｃ_５８Ｈ_９０ＣｌＮＯ_４０として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４７．１７ ６．１４ ０．９５ 実測値（％） ４７．０２ ６．０３ １．０５

【００７６】実施例６ ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝６^５‐Ｏ‐（２‐メトキシ）エトキシメチル‐４^５
‐Ｏ‐トシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐（２‐メトキシ）エト
キシメチル‐４‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グル
コピラノシドの製造

【００７７】まず、トリエチルアミン６．０ｍｌに（２
‐メトキシ）エトキシメチルクロリド１．５０ｇ（１
２．０ｍｍｏｌ）を加え、室温下かきまぜながら３０分
間反応させたのち、過剰のトリエチルアミンを減圧下留
去した。ここへ実施例１の（２）で得た２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐
α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ
‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１８８４ｍｇ（１．
２０ｍｍｏｌ）をアセトニトリル４０ｍｌに溶解した溶
液を加え、還流温度でかきまぜながら２時間反応させ
た。次いでこの反応液中のアセトニトリルを減圧下留去
し、この残渣を精製しないで、ピリジン５０ｍｌに溶解
し、トシルクロリド２．１１ｇ（１１．０ｍｍｏｌ）を
加え、５０℃で８時間かきまぜながら反応させた。次い
で反応液中のピリジンを減圧下留去し、得られた残渣を
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、酢
酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容量比５
０：１：１００）で溶出した目的区分を濃縮すると、オ
イル状の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐（２‐メトキシ）エト
キシメチル‐４‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グル
コピラノシド１．３３ｇ（０．７３９ｍｍｏｌ，収率８
１．８％）が得られた。

【００７８】紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε
＝３．９９），２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝
４．２５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４８０，２９６
０，１７５０，１５８４，１５２８，１４８６，１４３
２，１３７２，１３５０，１２４０，１０３４，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．９９〜２．２０（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），２．４５（３Ｈ，ｓ），３．３７（３Ｈ，
ｓ），３．４５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．４５
（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．
３３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），７．７９（２Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝７：３ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝１１．７ｍｉｎ 元素分析：Ｃ_７４Ｈ_９４ＣｌＮＯ_４６Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４９．３４ ５．２６ ０．７８ 実測値（％） ４９．４８ ５．３５ ０．８１

【００７９】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６^５‐Ｏ‐（２‐メトキシ）エトキシメチル‐４^５‐
Ｏ‐トシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの製造

【００８０】実施例６の（１）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６
‐Ｏ‐（２‐メトキシ）エトキシメチル‐４‐Ｏ‐トシ
ル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）‐２，３，６‐トリ‐Ｏ
‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．３３ｇ
（０．７３９ｍｍｏｌ）を原料に用いたこと以外は、実
施例１の（４）と同様の操作を行うことにより、目的の
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^５‐Ｏ‐（２‐メ
トキシ）エトキシメチル‐４^５‐Ｏ‐トシル‐β‐Ｄ‐
マルトペンタオシド６６９ｍｇ（０．５９５ｍｍｏｌ，
収率８０．５％）が得られた。

【００８１】紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２９１（ｌｏｇε
＝３．９６），２２５（ｌｏｇε＝４．３０），２１５
（ｌｏｇε＝４．３０） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４３０，２９３
０，１６９６，１５８４，１５２０，１４８４，１３５
０，１２７４，１２４８，１１７６，１１５２，１０７
８，１０２６，９３０，８９２ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：２．４３（３Ｈ，ｓ），３．００〜３．８
５（ｍ），３．２６（３Ｈ，ｓ），４．３０〜４．５５
（ｍ），４．６３（２Ｈ，ｓ），４．７８（１Ｈ，ｂｒ
ｄ），４．８６（１Ｈ，ｂｒ ｄ），５．０１（３
Ｈ，ｂｒ ｓ），５．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈ
ｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），５．３
０〜５．７０（ｍ），７．４７（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０
Ｈｚ），７．７７（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．
１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）ＴＳＫｇｅｌ
Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０ｍ
ｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル／
水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ^ｔ
＝３．６ｍｉｎ比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，Ｈ
_２Ｏ‐１，４‐ジオキサン＝１：１ｖ／ｖ）；＋８８．
２° 元素分析：Ｃ_４２Ｈ_５８ＣｌＮＯ_３０Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４４．８６ ５．２０ １．２５ 実測値（％） ４４．９８ ５．１３ １．２９

【００８２】実施例７ ４‐ニトロフェニル＝６^５‐Ｏ
‐メトキシメチル‐４^５‐Ｏ‐メチル‐α‐Ｄ‐マルト
ペンタオシドの製造

【００８３】（１） ４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐メトキシメチル‐４‐
Ｏ‐メチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）
‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α
‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造

【００８４】市販の４‐ニトロフェニル＝α‐Ｄ‐マル
トペンタオシド５．０ｇ（５．２７ｍｍｏｌ）を原料と
した以外は、実施例１の（１）、（２）と同様の操作を
行い、得られた４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ
‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドをジクロロメタン３０ｍｌに溶解し、メトキシメチル
クロリド１．２１ｇ（１５ｍｍｏｌ）及びＮ，Ｎ‐ジイ
ソプロピル‐Ｎ‐エチルアミン１．９４ｇ（１５ｍｍｏ
ｌ）を加え、かきまぜながら２時間還流して反応させ
た。次いで過剰の溶媒とアミンを減圧下に留去し、この
残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製
し、メタノール‐クロロホルム混液（容量比１：１０
０）で溶出した区分を濃縮して得た４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐メトキシ
メチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ト
リス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐２，３，６‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシド２．２５ｇ
（１．４２ｍｍｏｌ，４工程通算収率２６．９％）をＤ
ＭＳＯ５０ｍｌに溶解し、ヨードメタン１．９ｍｌ（３
０ｍｍｏｌ）及び水酸化カリウム１．７３ｇ（３０．８
ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で７時間かきまぜながら反応
させた。次いでこの反応液にトルエン１．０ｌ加え、３
ｗｔ％食塩水５００ｍｌで３回洗浄した。トルエン層を
無水硫酸ナトリウムで乾燥したのち、綿栓ろ過で硫酸ナ
トリウムを除き、ろ液中のトルエンを減圧下留去した。
この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより
精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液
（容量比５０：１：１００）で溶出した目的区分を濃縮
すると、オイル状の４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３
‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐メトキシメチル‐４‐Ｏ
‐メチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐
トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシド１．１９
ｇ（０．７４６ｍｍｏｌ，収率５２．５％）が得られ
た。

【００８５】紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２９０（ｌｏｇε
＝３．９９），２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝
４．２８） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３６４０，２９７
０，１７５２，１６１２，１５９４，１５２４，１４９
８，１４３２，１３７０，１３４８，１２３４，１０４
０，９４８，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：２．００〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．３２（３Ｈ，ｓ），３．３７（３Ｈ，
ｓ），３．６５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５５
（ｍ），７．０８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），８．
２２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝７．７ｍｉｎ 元素分析：Ｃ_６７Ｈ_８９ＮＯ_４３として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ５０．４１ ５．６２ ０．８８ 実測値（％） ５０．２５ ５．５７ ０．８０

【００８６】（２） ４‐ニトロフェニル＝６^５‐Ｏ‐
メトキシメチル‐４‐Ｏ‐メチル‐α‐Ｄ‐マルトペン
タオシドの製造 実施例７の（１）で得た４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐
（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐メトキシメチル
‐４‐Ｏ‐メチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ド１．１９ｇ（０．７４６ｍｍｏｌ）を原料に用いたこ
と以外は、実施例１の（４）と同様の操作を行うことに
より、目的の４‐ニトロフェニル＝６^５‐Ｏ‐メトキシ
メチル‐４‐Ｏ‐メチル‐α‐Ｄ‐マルトペンタオシド
５８９ｍｇ（０．５８５ｍｍｏｌ，収率７８．４％）が
得られた。

【００８７】紫外部・可視部吸収スペクトル： 吸収極大波長［λｍａｘ］（ｎｍ）＝２９８（ｌｏｇε
＝４．０１），２２７（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝
４．２５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^-１）：３４１０，２９４
０，１６１２，１５９２，１５１８，１５００，１３４
６，１２５２，１１５４，１０８２，１０２２，９３
４，８７６，８５２ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：３．１５〜３．８０（ｍ），３．２５（３
Ｈ，ｓ），３．２７（３Ｈ，ｓ），４．２５〜４．６０
（ｍ），４．５８（２Ｈ，ｓ），４．７０〜４．９０
（ｍ），５．０２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），５．
０４（２Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝３．６Ｈｚ），５．１０
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），５．２３（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝３．４Ｈｚ），５．３０〜５．６５（ｍ），７．２
３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．２３（２Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^t＝６．３ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０４，メタノール）；＋
８６．２° 元素分析：Ｃ_３９Ｈ_６１ＮＯ_２９として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４６．４８ ６．１０ １．３９ 実測値（％） ４６．２８ ６．２５ １．２９

【００８８】 実施例８ α‐アミラーゼ活性の測定（１） （１）基質液の調製 実施例１で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
４^５，６^５‐ジＯ‐（２‐メトキシ）エトキシメチル‐
β‐Ｄ‐マルトペンタオシド（Ｍｗ１１６０）を３．０
ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍ
Ｍ‐ＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ
＝７．０）に溶解した。

【００８９】（２）共役酵素液の調製 酵母由来の市販α‐グルコシダーゼ及びアーモンド由来
のβ‐グルコシダーゼをそれぞれ１１７ｕ／ｍｌ、１３
ｕ／ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２
ｍＭ‐ＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝７．０）に混合して溶解した。なお、これら市販の
α‐及びβ‐グルコシダーゼは東洋紡績（株）製を使用
した。

【００９０】（３）標品α‐アミラーゼ液の調製 市販のヒトα‐アミラーゼ（Ｐ：Ｓ＝１：１）に精製水
を加え、０，１４９，２９５，４２４，５４７ＩＵ／ｌ
の濃度に溶解して標品α‐アミラーゼ液とした。 な
お、この市販のヒトα‐アミラーゼは国際試薬（株）製
キャリブザイム・ＡＭＹを使用した。また、α‐アミラ
ーゼの活性は、３７℃、１分間に１μｍｏｌの２‐クロ
ロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マルトペンタオシド
（市販品）を分解する酵素量を１国際単位（ＩＵ）とし
て定義した。

【００９１】（４）試料液の調製 α‐アミラーゼの活性測定用試料が液体の場合はそのま
ま試料液とした。固体の場合は通常、試料５００ｍｇを
正確に秤量し、精製水を加えて全量を５ｍｌとして試料
液とした。

【００９２】（５）検量線の作成 標品α‐アミラーゼ液２５０μｌに共役酵素液１．０ｍ
ｌを加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温したのち、基
質液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、さらに３７℃で２分
間加温後からの２分間の４００ｎｍにおける吸光度の変
化量を測定した。各標品α‐アミラーゼ液の活性と、吸
光度の変化量の関係より検量線を作成した。その結果、
検量線の式はＵ＝９．３２・ΔＡ×１０^３＋１２．３
［Ｕ；酵素活性（ＩＵ／ｌ）、ΔＡ；吸光度の変化量］
となった。そのグラフを図１に示す。

【００９３】（６）試料液中のα‐アミラーゼ活性の測
定 試料液２５０μｌに共役酵素液１．０ｍｌを加えてかき
まぜ、３７℃で１分間加温したのち、基質液２．０ｍｌ
を加えてかきまぜ、さらに３７℃で２分間加温後からの
２分間の４００ｎｍにおける吸光度の変化量を測定し
た。この測定値と（５）で作成した検量線から算出して
試料液中のα‐アミラーゼ活性の測定を行うことができ
る。なお、試料液中の酵素活性の値が検量線の適用範囲
（０〜５４７ＩＵ／ｌ）を越えた場合は精製水を用いて
相当する倍数の希釈を行ったのち、再測定を行う。

【００９４】実施例９ α‐アミラーゼ活性の測定
（２） （１）基質液の調製 実施例２で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
４^５，６^５‐ジＯ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトペ
ンタオシド（Ｍｗ１１６０）を３．０ｍＭの濃度になる
ように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ_２を
含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解
した。

【００９５】（２）実施例８の（２）〜（５）と同様の
操作で共役酵素液の調製、標品α‐アミラーゼ液の調
製、試料液の調製及び検量線の作成を行った。その結
果、検量線の式はＵ＝８．６９・ΔＡ×１０^３＋１０．
４となった。そのグラフを図２に示す。

【００９６】（３）試料液中のα‐アミラーゼ活性の測
定 実施例８の（６）と同様の操作で試料液中のα‐アミラ
ーゼ活性の測定を行った。

【００９７】実施例１０ α‐アミラーゼ活性の測定
（３） （１）基質液の調製 実施例３で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
４^５，６^５‐ジＯ‐ベンジルオキシメチル‐β‐Ｄ‐マ
ルトペンタオシド（Ｍｗ１２２５）を３．０ｍＭの濃度
になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣ
ｌ_２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）
に溶解した。

【００９８】（２）実施例８の（２）〜（５）と同様の
操作で共役酵素液の調製、標品α‐アミラーゼ液の調
製、試料液の調製及び検量線の作成を行った。その結
果、検量線の式はＵ＝６．９５・ΔＡ×１０^３−６．５
となった。そのグラフを図３に示す。

【００９９】（３）試料液中のα‐アミラーゼ活性の測
定 実施例８の（６）と同一の操作で試料液中のα‐アミラ
ーゼ活性の測定を行った。

【０１００】実施例１１ α‐アミラーゼ活性の測定
（４） （１）基質液の調製 実施例７で得た４‐ニトロフェニル＝６^５‐ジＯ‐メト
キシメチル‐４^５‐Ｏ‐メチル‐α‐Ｄ‐マルトペンタ
オシド（Ｍｗ１０４２）を３．０ｍＭの濃度になるよう
に、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ_２を含有
する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解し
た。

【０１０１】（２）共役酵素液の調製 β‐グルコシダーゼを加えないこと以外は、実施例８の
（２）と同様の操作で共役酵素液の調製を行った。

【０１０２】（３）実施例８の（３）〜（５）と同様の
操作で標品α‐アミラーゼ液の調製、試料液の調製及び
検量線の作成を行った。その結果、検量線の式はＵ＝１
８．６・ΔＡ×１０^３＋６．１となった。そのグラフを
図４に示す。

【０１０３】（４）試料液中のα‐アミラーゼ活性の測
定 実施例８の（６）と同一の操作で試料液中のα‐アミラ
ーゼ活性の測定を行った。なお、実施例５で得た２‐ク
ロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^７‐Ｏ‐テトラヒドロピ
ラニル‐β‐Ｄ‐マルトヘプタオシドについても、上記
と同様の操作を行えば、試料液中のα‐アミラーゼ活性
の測定を行うことができる。

【０１０４】実施例１２ 耐共役酵素試験（１） （１）基質液（ア）の調製 実施例１で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
４^５，６^５‐ジＯ‐（２‐メトキシ）エトキシメチル‐
β‐Ｄ‐マルトペンタオシド（Ｍｗ１１６０）（以下本
発明基質という）を３．０ｍＭの濃度になるように、４
０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ_２を含有する５
０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。

【０１０５】（２）基質液（イ）の調製 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トペンタオシド（Ｍｗ９８４）（以下対照基質という）
を３．０ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ
及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。

【０１０６】（３）共役酵素液の調製 酵母由来の市販α‐グルコシダーゼ及びアーモンド由来
のβ‐グルコシダーゼをそれぞれ１１００ｕ／ｍｌ、１
５．５ｕ／ｍｌの濃度になるように４０ｍＭ‐ＮａＣｌ
及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝
液（ｐＨ＝７．０）に混合して溶解した。なお、これら
市販α‐及びβ‐グルコシダーゼは東洋紡績（株）製を
使用した。

【０１０７】（４）共役酵素反応 共役酵素液１．０ｍｌを３７℃で５分間加温したのち、
本発明基質液又は対照基質液をそれぞれ２．０ｍｌ加え
てよく混合し、３７℃で３分間加温後から５分間、４０
０ｎｍにおける吸光度の変化量を測定した。その結果を
図５に示す。図５において◇印は基質液（ア）、□印は
基質液（イ）によるものである。図５から、本発明基質
は共役酵素と反応することなく、測定系内で安定に存在
することが分かる。

【０１０８】実施例１３ 耐共役酵素試験（２） 実施例４で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
４^５，６^５‐ジＯ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトペ
ンタオシド（Ｍｗ１０７２）を基質液（ア）として用い
たこと以外は、実施例１２と同様の操作を用いて行っ
た。その結果を図６に示す。図６において◇印は基質液
（ア）、□印は基質液（イ）によるものである。図６か
ら、本発明基質は共役酵素と反応することなく、測定系
内で安定に存在することが分かる。

【０１０９】実施例１４ 耐共役酵素試験（３） 実施例３で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
４^５，６^５‐ジＯ‐ベンジルオキシメチル‐β‐Ｄ‐マ
ルトペンタオシド（Ｍｗ１２２５）を基質液（ア）とし
て用いたこと以外は、実施例１２と同様の操作を用いて
行った。その結果を図７に示す。図７において◇印は基
質液（ア）、□印は基質液（イ）によるものである。図
７から、本発明基質は共役酵素と反応することなく、測
定系内で安定に存在することが分かる。

【０１１０】実施例１５ 耐共役酵素試験（４） 実施例７で得た４‐ニトロフェニル＝４^５，６^５‐ジＯ
‐メトキシメチル‐α‐Ｄ‐マルトペンタオシド（Ｍｗ
１０４２）を基質液（ア）として、４‐ニトロフェニル
＝α‐Ｄ‐マルトペンタオシド（Ｍｗ９４９）を基質液
（イ）として用い、かつ共役酵素中にβ‐グルコシダー
ゼを加えないこと以外は、実施例１２と同様の操作を用
いて行った。その結果を図８に示す。図８において◇印
は基質液（ア）、□印は基質液（イ）によるものであ
る。図８から、本発明基質は共役酵素と反応することな
く、測定系内で安定に存在することが分かる。

【０１１１】実施例１６ 測定試薬 （１）試薬の調製 精製水に以下の成分を以下の濃度で溶解することによ
り、試薬を調製した。 成 分 濃 度 ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４^５，６^５‐ジＯ‐ メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド １．６０ｍＭ α‐グルコシダーゼ ４０Ｕ／ｍｌ β‐グルコシダーゼ ５．０Ｕ／ｍｌ β‐グリセロリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０） ２０ｍＭ ウシ血清アルブミン ０．０５％

【０１１２】（２）測定法 測定用試料が液体の場合はそのまま試料液とする。固体
の場合は試料５００ｍｇを正確に秤量し、精製水を加え
て全量を５．０ｍｌとし、これを試料液とした。試料液
２５０μｌにあらかじめ３７℃で２分間加温した試薬
３．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２分間加温した
のち、２分間の４００ｎｍにおける吸光度の変化量を測
定した。この測定値とあらかじめ作成した検量線から算
出して試料液中のα‐アミラーゼ活性の測定を行うこと
が出来る。なお、試料液中の酵素活性の値が検量線の適
用範囲（０〜５４７ＩＵ／ｌ）を越えた場合は精製水を
用いて相当する倍数の希釈を行った後、再測定を行う。

【０１１３】実験例 実施例で得た本発明の基質である２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝４^５，６^５‐ジＯ‐（２‐メトキシ）エト
キシメチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド（ＤＭＥＭＧ
５ＣＮＰ）及び２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝
４^５，６^５‐ジＯ‐メトキシメチル‐β‐Ｄ‐マルトペ
ンタオシド（ＤＭＯＭＧ５ＣＮＰ）の加水分解速度、水
溶性及び加水分解部位を求めた。その結果を表１及び表
２に示す。なお、対照基質として市販の２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド（Ｇ５
ＣＮＰ）を用いた。また、表においてＡｉはヒトα‐ア
ミラーゼアイソザイム、Ｐはヒト膵液由来のα‐アミラ
ーゼ、Ｓはヒト唾液由来のα‐アミラーゼを示す。さら
に、加水分解速度、水溶性及び加水分解部位は次のよう
にして求めた。

【０１１４】加水分解速度： （１）基質液の調製 各基質を３．０ｍＭの濃度になるように、４０ｍＭ‐Ｎ
ａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。この濃度は後記
α‐アミラーゼ反応において、最大反応速度に達するに
十分な基質量である。

【０１１５】（２）共役酵素液の調製 実施例１０の（２）と同様にして調製した。

【０１１６】（３）α‐アミラーゼ液の調製 実施例８の（３）と同様にして、約５００ＩＵ／ｌの濃
度の市販ヒトＰ型及びＳ型α‐アミラーゼ液を調製し
た。

【０１１７】（４）加水分解速度の測定（α‐アミラー
ゼ反応） 上記（３）のα‐アミラーゼ液２５０μｌに共役酵素液
１．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温した
のち、基質液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２
分間加温した後からの２分間の４００ｎｍにおける吸光
度の変化量を測定した。対照基質のＧ５ＣＮＰを用いた
場合、加水分解速度、すなわち単位時間当りの吸光度の
変化量を１０とし、各基質の加水分解速度を相対値で示
した。

【０１１８】水溶性：水１００ｍｌに基質２０ｇを添加
し、その溶解状態を観察した。いずれも速やかに溶解
し、水溶性は良好であった。

【０１１９】加水分解部位：各基質の濃度を０．５ｍＭ
になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣ
ｌ_２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）
に溶解し、この基質液１．０ｍｌに、上記加水分解速度
の項の（３）のα‐アミラーゼ液１００μｌを加えてか
きまぜたのち、３７℃で２分間反応させた。この反応液
を高速液体クロマトグラフィーで分析することにより、
加水分解生成物を定量した。

【表１】

【表２】 表１及び表２から分かるように、本発明の基質は、加水
分解部位が実質的に１か所であり、またアイソザイムに
よる加水分解部位及び加水分解率が同じである上、加水
分解速度及び水溶性も良好であって、基質として極めて
優れたものである。

【０１２０】なお、実施例６の（１）に準じて、６位の
みを（２‐メトキシ）エトキシメチル化及びメトキシメ
チル化したのち、脱アセチル化して得た２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル＝６^５‐Ｏ‐（２‐メトキシ）エトキ
シメチル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド及び２‐クロロ
‐４‐ニトロフェニル＝６^５‐Ｏ‐メトキシメチル‐β
‐Ｄ‐マルトペンタオシドのアイソザイムによる加水分
解率は、それぞれＰ：Ｓ＝１１：９、Ｐ：Ｓ＝１２：１
０であって等しくなく、明らかな差が認められた。これ
に対して、本発明の基質の４位及び６位のジ置換体は、
該加水分解率が等しいので、この基質を用いれば、両ア
イソザイムの含有比が未知の試料中の総α‐アミラーゼ
活性を極めて精度よく測定することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】 実施例８におけるα−アミラーゼ活性の測定
に用いる検量線を示すグラフ。

【図２】 実施例９におけるα−アミラーゼ活性の測定
に用いる検量線を示すグラフ。

【図３】 実施例１０におけるα−アミラーゼ活性の測
定に用いる検量線を示すグラフ。

【図４】 実施例１１におけるα−アミラーゼ活性の測
定に用いる検量線を示すグラフ。

【図５】 実施例１２における本発明基質と対照基質と
の測定系内での安定性を示すグラフ。

【図６】 実施例１３における本発明基質と対照基質と
の測定系内での安定性を示すグラフ。

【図７】 実施例１４における本発明基質と対照基質と
の測定系内での安定性を示すグラフ。

【図８】 実施例１５における本発明基質と対照基質と
の測定系内での安定性を示すグラフ。

フロントページの続き (72)発明者 冨倉 正 千葉県野田市野田339番地 キッコーマン 株式会社内 (72)発明者 小谷 一夫 東京都墨田区業平５丁目５番12号 第一化 学薬品株式会社東京技術センター内 (72)発明者 齋藤 和典 東京都墨田区業平５丁目５番12号 第一化 学薬品株式会社東京技術センター内 (72)発明者 戸辺 光一朗 千葉県野田市野田339番地 盛進製薬株式 会社内

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式 【化１】 ［式中のｎは２〜６の整数、Ｘは芳香族発色性基、Ｙ^１
   は‐ＣＨ（Ｒ^１）‐Ｏ‐Ｒ^２若しくは‐ＣＨ（Ｒ^１）‐
   Ｓ‐Ｒ^２で表わされる基、Ｙ^２は置換若しくは非置換の
   炭化水素基、アルキル若しくはアリールスルホニル基又
   は‐ＣＨ（Ｒ^３）‐Ｏ‐Ｒ^４若しくは‐ＣＨ（Ｒ^３）‐
   Ｓ‐Ｒ^４で表わされる基であり、Ｒ^１及びＲ^３はそれぞ
   れ水素原子又は置換若しくは非置換の炭化水素基、Ｒ^２
   及びＲ^４はそれぞれ置換若しくは非置換の炭化水素基で
   あるか、あるいはＲ^１とＲ^２又はＲ^３とＲ^４とが相互に
   結合してアルキレン基を形成するものである］で表わさ
   れる６‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体。
2. 【請求項２】 請求項１記載の６‐アルコキシメトキシ
   マルトオリゴシド誘導体を有効成分とするα‐アミラー
   ゼ活性測定用試薬。
3. 【請求項３】 α‐アミラーゼ含有試料に、請求項１記
   載の６‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体の
   α‐アノマーと、α‐グルコシダーゼ又はグルコアミラ
   ーゼあるいはその両方を添加して酵素反応を行わせ、遊
   離する芳香族発色性化合物を定量することを特徴とする
   α‐アミラーゼ活性の測定方法。
4. 【請求項４】 α‐アミラーゼ含有試料に、請求項１記
   載の６‐アルコキシメトキシマルトオリゴシド誘導体の
   β‐アノマー又はα‐アノマーとβ‐アノマーとの混合
   物と、α‐グルコシダーゼ又はグルコアミラーゼあるい
   はその両方と、β‐グルコシダーゼを添加して酵素反応
   を行わせ、遊離する芳香族発色性化合物を定量すること
   を特徴とするα‐アミラーゼ活性の測定方法。