JPH059196A - 非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体及びこれを用いたα‐アミラーゼアイソザイム活性の分別定量法 - Google Patents

Abstract

(57)【構成】 【要約】 一般式 【化１】 （ｎは２〜６の整数、ＲはＨ、芳香族発色性基又はグル
コース以外の単糖類残基、Ｘは（トリアルキル）シリル
オキシ基、アリールスルホニル又はアリールイミド基、
ＹはＨ、炭化水素基、アルキル又はアリールスルホニル
基）で表わされる非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体
及びこのものを第１の基質とし、２種のα‐アミラーゼ
アイソザイムの基質に対する反応速度比が、第１の基質
と異なるものを第２の基質とし、共役酵素を用いてα‐
アミラーゼアイソザイム活性を分別定量する。 【効果】 試料中のα‐アミラーゼアイソザイム活性の
分別定量を、簡単な操作で極めて正確に行うことがで
き、各種疾患の診断に好適に適用できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規な非還元末端修飾マ
ルトオリゴ糖誘導体、及びこの誘導体を用いたα‐アミ
ラーゼアイソザイム活性の新規な分別定量法に関するも
のである。さらに詳しくいえば、本発明は、α‐アミラ
ーゼアイソザイム活性の分別定量における基質として好
適な非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体、及び試料中
のα‐アミラーゼアイソザイム活性を、該非還元末端修
飾マルトオリゴ糖誘導体と他の１種のα‐アミラーゼ活
性測定用基質と共役酵素とを用いて、効率よく分別定量
する方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】従来、ヒトα‐アミラーゼには膵臓由来
のもの（以下Ｐ型α‐アミラーゼという）と唾液腺由来
のもの（以下Ｓ型α‐アミラーゼという）の少なくとも
２種のアイソザイムが存在することが知られている。

【０００３】ところで、臨床検査において、血清中の総
α‐アミラーゼ活性が高値になると、急性膵炎の初期あ
るいは慢性膵炎の急性化の疑いが出てくるが、この場
合、Ｐ型α‐アミラーゼ活性の上昇が総α‐アミラーゼ
活性の主因となっている。しかしながら、唾液腺や耳下
腺の疾病、外科手術後、ある種の肝疾患などではＳ型α
‐アミラーゼ活性の上昇が主因となって顕著な総α‐ア
ミラーゼ活性の上昇がみられるため、しばしば鑑別診断
を誤らせる原因となっている。したがって、近年両アイ
ソザイムの簡便で正確な分別定量法が強く要望されてい
る。

【０００４】従来、ヒトα‐アミラーゼアイソザイム活
性の分別定量法としては、例えば（１）電気泳動法、ク
ロマトグラフィー法などの２種のアイソザイムを分離
し、個々に定量する方法、（２）モノクロナール抗体
法、小麦インヒビター法などの一方のアイソザイムのみ
を反応させて定量する方法、（３）修飾マルトオリゴ糖
法などの２種のアイソザイムのα‐アミラーゼ測定用基
質に対する反応速度比の差を利用する方法などが知られ
ている。

【０００５】しかしながら、前記（１）の２種のアイソ
ザイムを分離し、個々に定量する方法は煩雑な操作を必
要とする上に、処理に長時間を要するという欠点がある
し、（２）の一方アイソザイムのみを反応させて定量す
る方法は、基質以外に安定性の低いモノクロナール抗体
やインヒビターなどの生体成分を使用しなければならな
いという欠点がある。

【０００６】また、前記（３）の２種のアイソザイムの
α‐アミラーゼ測定用基質に対する反応速度比の差を利
用する方法においては、これまで基質として修飾マルト
オリゴ糖が用いられているが、２種のアイソザイムのこ
のものに対する反応速度比すなわち、Ｓ型α‐アミラー
ゼの反応速度に対するＰ型α‐アミラーゼの反応速度の
比が１．３程度であり、Ｐ型α‐アミラーゼの反応速度
とＳ型α‐アミラーゼの反応速度との間に十分な差を生
じないため、精度が低くなるのを免れないという欠点が
ある。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、α‐アミラ
ーゼ活性測定用基質に対するＰ型α‐アミラーゼの反応
速度とＳ型α‐アミラーゼの反応速度の差を利用して、
試料中のα‐アミラーゼアイソザイムの分別定量を行う
際に、基質として極めて有効に使用しうる新規な化合物
を創製すること、及びこの化合物を用いて、簡単な操作
で、精度よくα‐アミラーゼアイソザイムの分別定量を
行う方法を提供することを目的としてなされたものであ
る。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、前記目
的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、大きな疎水
性基を非還元末端に有する新規な非還元末端修飾マルト
オリゴ糖誘導体は、それに対するヒトα‐アミラーゼの
２種のアイソザイムの反応速度比が大きく異なること、
したがってこれを一方の基質に用いれば精度の高い分別
定量を行いうることを見出し、この知見に基づいて本発
明を完成するに至った。

【０００９】すなわち、本発明は、一般式

【化２】 ［式中のｎは２〜６の整数、Ｒは水素原子、芳香族発色
性基又はグルコース以外の単糖類の残基、Ｘは（トリア
ルキル）シリルオキシ基、アリールスルホニル基又はア
リールイミド基、Ｙは水素原子、置換若しくは非置換の
炭化水素基又はアルキル若しくはアリールスルホニル基
である］で表わされる非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘
導体及び共役酵素の存在下、α‐アミラーゼアイソザイ
ムによる反応速度比が異なった２種の基質と試料とを反
応させ、得られたα‐アミラーゼ活性の各測定値より、
α‐アミラーゼアイソザイム活性を分別定量する方法に
おいて、第１の基質として、前記一般式（Ｉ）で表わさ
れる非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体を、第２の基
質として、２種のα‐アミラーゼアイソザイムのそれに
対する反応速度比が、第１の基質に対する反応速度比と
異なるα‐アミラーゼ活性測定用基質を用いることを特
徴とするα‐アミラーゼアイソザイム活性の分別定量法
を提供するものである。

【００１０】本発明の非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘
導体は、前記一般式（Ｉ）で表わされる化合物であっ
て、そのマルトオリゴ糖部としては、α‐及びβ‐Ｄ‐
マルトテトラオースからα‐及びβ‐Ｄ‐マルトオクタ
オースに対応するものがすべて使用できる。これらの中
でもＤ‐マルトペンタオース、Ｄ‐マルトヘキサオー
ス、Ｄ‐マルトヘプタオースが最終的な基質の性質の点
から好適である。

【００１１】また、前記一般式（Ｉ）におけるＸは（ト
リアルキル）シリルオキシ基、アリールスルホニル基又
はアリールイミド基であって、（トリアルキル）シリル
オキシ基のアルキル基としては、例えばメチル、エチ
ル、イソプロピル、ｔ‐ブチル、シクロヘキシルなどの
直鎖状、分枝状又は環状のアルキル基が挙げられ、ま
た、３つのアルキル基は同じものであってもよいし、異
なるものであってもよい。さらに、アリールスルホニル
基、アリールイミド基のアリール基としては、例えばフ
ェニル基、トルイル基、ナフチル基などが挙げられる。

【００１２】一方、Ｙは水素原子、置換若しくは非置換
の炭化水素基又はアルキル若しくはアリールスルホニル
基であって、該炭化水素基としては、例えばメチル、エ
チル、イソプロピル、ブチル、シクロヘキシルなどの直
鎖状、分枝状若しくは環状のアルキル基、ベンジルなど
のアラルキル基、フェニル、トルイル、ナフチルなどの
アリール基が挙げられ、また、アルキル若しくはアリー
ルスルホニル基としては、例えばメシル基、トシル基、
キノリンスルホニル基などが挙げられる。前記のアルキ
ル基、アラルキル基及びアリール基は、例えばアシル、
アルキルオキシ、カルボキシル、ニトロ、ハロゲン、ア
ルキルシリル、スルホニルなどの官能基で置換されてい
てもよく、また、アルキル基はビニル基やアリル基など
の不飽和のものであってもよい。

【００１３】さらに、前記一般式（Ｉ）におけるＲは水
素原子、芳香族発色性基又はグルコース以外の単糖類の
残基であるが、これらの中で芳香族発色性基が特に好適
である。

【００１４】この芳香族発色性基については、分光学的
に検出しうるものであればよく、特に制限はないが、例
えば

【化３】 （式中のＲ^１ないしＲ^５は水素原子、ハロゲン原子、ニ
トロ基、アルキル基、アリール基、アラルキル基、アミ
ノ基、スルホン酸基又はカルボキシル基であり、それぞ
れ同一であってもよいし、異なっていてもよく、またＲ
^１とＲ^２、Ｒ^２とＲ^３とがそれぞれたがいに結合して、
縮合芳香環を形成してもよい）

【化４】 （式中のＲ^６は水素原子又はアルキル基である）

【化５】 （式中のＲ^７は水素原子又はハロゲン原子である）及び

【化６】 （式中のＲ^８ないしＲ^１５は水素原子、ハロゲン原子、
ニトロ基、アルキル基、アリール基、アラルキル基、ア
ミノ基、スルホン酸基、又はカルボキシル基であり、そ
れぞれ同一であっもよいし、異なっていてもよく、また
Ｒ^８とＲ^９、Ｒ^１０とＲ^１１とがそれぞれたがいに結合
して、縮合芳香環を形成してもよく、さらにＲ^９とＲ
^１０及び／又はＲ^１３とＲ^１４が共通の酸素原子となっ
て縮合エーテル環を形成してもよく、Ｚは窒素原子又は
Ｎ→Ｏである）などが挙げられる。

【００１５】また、グルコース以外の単糖類の残基とし
ては、広義の単糖類あるいはその誘導体の残基でもよ
く、例えばフラクトース、イノシトール、グルシトー
ル、グルコース‐６‐リン酸などの残基が挙げられる。

【００１６】そして、前記一般式（Ｉ）で表わされる非
還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体はα‐アノマー（α
‐配糖体）又はβ‐アノマー（β‐配糖体）のいずれで
あってもよい。

【００１７】このような前記一般式（Ｉ）で表わされる
非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体としては、例えば
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^５‐Ｏ‐（ｔ‐ブ
チルジメチル）シリル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^５‐デオキシ‐６
^５‐（フェニル）スルホニル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^５‐デオキ
シ‐６^５‐フタルイミド‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシ
ド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^７‐デオキシ
‐６^７‐フタルイミド‐β‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、
フェノールインド‐３′‐クロロフェニル＝６^５‐デオ
キシ‐６^５‐（４‐ハイドロキシフェニル）スルホニル
‐４^５‐Ｏ‐メシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、２
‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^５‐Ｏ‐（イソプロ
ピルジメチル）シリル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、
２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４^５‐Ｏ‐メシル‐
６^５‐デオキシ‐６^５‐フタルイミド‐β‐Ｄ‐マルト
ペンタオシド、４‐ニトロフェニル＝４^５‐Ｏ‐ベンジ
ル‐６^５‐Ｏ‐トリメチルシリル‐α‐Ｄ‐マルトペン
タオシド、４‐メチルウンベリフェノニル＝６^４‐Ｏ‐
（トリエチル）シリル‐α‐Ｄ‐マルトテトラオシド、
レザズリニル＝６^６‐デオキシ‐６^６‐（ナフチル）ス
ルホニル‐β‐Ｄ‐マルトヘキサオシド、ルシフェリニ
ル＝６^７‐デオキシ‐４^７‐メチル‐６^７‐フタルイミ
ド‐α‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、６^７‐デオキシ‐６
^７‐（フェニル）スルホニル‐４^７‐Ｏ‐トシル‐Ｄ‐
マルトヘプタオース、６^５‐Ｏ‐（ｔ‐ブチルジメチ
ル）シリル‐α‐Ｄ‐マルトペンタオシルフラクトー
ス、６^６‐デオキシ‐６^６‐フタルイミド‐Ｄ‐マルト
ヘキサオースなどが挙げられる。

【００１８】なお、上記及び後記において、記号６
^５‐、６^７‐、４^５‐などは、マルトオリゴ糖を構成す
るグリコース単位の還元末端側から、５番目、７番目の
グリコースの６位、４位の水酸基が置換されていること
を示す。

【００１９】本発明の前記一般式（Ｉ）で表わされる非
還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体は文献未載の新規な
化合物であって、その製造方法については、特に制限は
なく、任意の方法を用いることができるが、例えば次の
方法によって製造することができる。

【００２０】すなわち、Ｒが芳香族発色性基であるもの
は、出発原料として、市販品や公知の製造方法で得るこ
とのできる、一般式

【化７】 （式中のＲ及びｎは前記と同じ意味をもつ）で表わされ
るＤ‐マルトオリゴシド、例えば２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロ
フェニル＝α‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェノールイ
ンド‐３′‐クロロフェニル＝β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シドなどを用い、これに、一般式

【化８】 （式中のＲ^１６は水素原子、メトキシ基、エトキシ基、
アルキル基又はアリール基、Ｒ^１７はメトキシ基又はエ
トキシ基である）で表わされるカルボニル化合物又はそ
のアセタール若しくはケタールを作用させて、一般式

【化９】 （式中のＲ^１６、Ｒ^１７、Ｒ及びｎは前記と同じ意味を
もつ）で表わされる４，６‐Ｏ‐アルコキシメチリデン
化マルトオリゴ糖誘導体、例えば２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝４^５，６^５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐
β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェニル＝４
^７，６^７‐Ｏ‐（１‐メトキシ）エチリデン‐α‐Ｄ‐
マルトヘプタオシド、フェノールインド‐３′‐クロロ
フェニル＝４^５，６^５‐Ｏ‐（１‐エトキシ）エチリデ
ン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなどを製造する。

【００２１】前記一般式（ＩＩＩ）で表わされるカルボ
ニル化合物又はそのアセタール若しくはケタールとして
は、例えばテトラメトキシメタン、オルト酢酸トリエチ
ル、オルト酢酸トリメチルなどが挙げられる。

【００２２】前記一般式（ＩＶ）で表わされる４，６‐
Ｏ‐アルコキシメチリデン化マルトオリゴ糖誘導体を得
るこの反応は、通常例えばＮ，Ｎ‐ジメチルホルムアミ
ド（ＤＭＦ）、Ｎ，Ｎ‐ジメチルアセトアミド（ＤＭ
Ａ）、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ヘキサメチ
ルホスホリックトリアミド（ＨＭＰＡ）などの非プロト
ン性極性溶媒中において、ｐ‐トルエンスルホン酸、塩
化水素、硫酸、無水塩化亜鉛、強酸性イオン交換樹脂な
どの触媒の存在下で行われる。

【００２３】このようにして得られた前記一般式（Ｉ
Ｖ）で表わされる４，６‐Ｏ‐アルコキシメチリデン化
マルトオリゴ糖誘導体をアシル化して、４，６‐Ｏ‐ア
ルコキシメチリデン化アシルマルトオリゴ糖誘導体、例
えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ
‐アセチル‐４^５，６^５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐
β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、４‐ニトロフェニル＝エ
イコサ‐Ｏ‐ベンゾイル‐４^７，６^７‐Ｏ‐（１‐メト
キシ）エチリデン‐α‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェ
ノールインド‐３′‐クロロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ
‐ブチリル‐４^５，６^５‐Ｏ‐（１‐エトキシ）エチリ
デン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなどとする。この
際、アシル化剤としては例えば酢酸、モノクロロ酢酸、
プロピオン酸、ｎ‐酪酸、安息香酸などやこれらの酸無
水物、酸クロリド、エステルなどの反応性誘導体が用い
られる。アシル化反応の条件については特に制限はな
く、従来アシル化反応において慣用されている条件を用
いることができる。

【００２４】次いで、このようにして得た４，６‐Ｏ‐
アルコキシメチリデン化アシルマルトオリゴ糖誘導体
に、脱アルコキシメチリデン化反応を行い、一般式

【化１０】 （式中のＲ^１８はアシル基、Ｒ及びｎは前記と同じ意味
をもつ）で表わされる部分アシル化マルトオリゴ糖誘導
体、例えば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル‐Ｏ‐
（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド、４‐ニトロフェニル‐Ｏ‐（２，３‐
ジ‐Ｏ‐ベンゾイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐ペンタキス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ
‐ベンゾイル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ベンゾイル‐α‐Ｄ‐
グルコピラノシドなどを製造する。上記脱アルコキシメ
チリデン化反応の条件については特に制限はなく、公知
の方法、例えば酢酸又はギ酸を作用させる方法［例えば
「ジャーナル・オブ・ジ・アメリカン・ケミカル・ソサ
エティ（Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．）」、第８４
巻、第４３０ページ（１９６２）参照］を用いて行うこ
とができる。

【００２５】次に、前記一般式（Ｉ）で表わされる非還
元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体のＸが（トリアルキ
ル）シリルオキシ基の場合、前記のように得られた一般
式（Ｖ）で表わされる部分アシル化マルトオリゴ糖誘導
体に、（トリアルキル）シリルクロリドなどのシリル化
剤を作用させて６位水酸基のみをトリアルキルシリル化
し、４位水酸基の水素原子が水素原子以外の置換基Ｙで
置換されている場合には、この反応に引続いて置換基Ｙ
を導入して、一般式

【化１１】 （式中のＲ^１９ないしＲ^２１はそれぞれアルキル基であ
って、それらは同一であってもよいし、たがいに異なっ
ていてもよく、Ｒ^１８，Ｒ，Ｙ及びｎは前記と同じ意味
をもつ）

【００２６】で表わされるアシル（トリアルキル）シリ
ルオキシマルトオリゴ糖誘導体、例えば２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐アセチル‐６^５‐
Ｏ‐（ｔ‐ブチルジメチル）シリルオキシ‐β‐Ｄ‐マ
ルトペンタオシド、４‐ニトロフェニル＝エイコサデカ
‐Ｏ‐アセチル‐６^７‐Ｏ‐（ｔ‐ブチルジメチル）シ
リルオキシ‐４^７‐Ｏ‐メチル‐α‐Ｄ‐マルトヘプタ
オシドなどを得る。このトリアルキルシリル化反応の条
件については特に制限はないが、通常はＤＭＦなどの非
プロトン性極性溶媒中で、イミダゾール、Ｎ，Ｎ‐ジメ
チルピリジンなどの塩基の存在下で、通常加温しない
で、（トリアルキル）シリルクロリドを３〜３０倍モル
作用させることによって行われる。

【００２７】さらに４位水酸基に水素原子以外の置換基
Ｙを導入する場合、すなわち前記一般式（Ｉ）で表わさ
れる非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体のＹが水素原
子以外の物質を得るには、常法を用いてエーテル化反応
（置換若しくは非置換の炭化水素基の導入）［「新実験
化学講座」第１４巻、有機化合物の合成と反応［Ｉ］、
第５６８〜６１１ページ、１９７７年、丸善、参照］、
あるいはスルホニル化反応（アルキル若しくはアリール
スルホニル基の導入）［「新実験化学講座」第１４巻、
有機化合物の合成と反応［ＩＩＩ］、第１７９３〜１７
９８ページ、１９７７年、丸善、参照］などを行えばよ
い。

【００２８】また、前記一般式（Ｉ）で表わされる非還
元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体のＸがアリールスルホ
ニル基又はアリールイミド基の場合、前記のようにして
得られた一般式（Ｖ）で表わされる部分アシル化マルト
オリゴ糖誘導体に、トシルクロリドのようにバルキーな
Ｏ‐アリールスルホニル化剤を作用させて６位水酸基の
みをＯ‐アリールスルホニル化し、４位水酸基の水素原
子が水素原子以外の置換基Ｙで置換されている場合、こ
れに引続いて前記と同様にして置換基Ｙを導入し、一般
式

【００２９】

【化１２】 （式中のＲ^１８，Ｒ，ｎ，Ｙは前記と同じ意味をもち、
Ｗはアリールスルホニル基である）で表わされるアシル
‐Ｏ‐アリールスルホニルマルトオリゴ糖誘導体、例え
ば２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐
アセチル‐６^５‐Ｏ‐トシル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝エイコサ‐Ｏ
‐ベンゾイル‐４^７‐Ｏ‐メチル‐６^７‐Ｏ‐ナフタレ
ンスルホニル‐α‐Ｄ‐マルトヘプタオシド、フェノー
ルインド‐３′‐クロロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐ク
ロロアセチル‐４^５‐Ｏ‐メシル‐６^５‐Ｏ‐トシル‐
β‐Ｄ‐マルトペンタオシドなどを得る。この６位水酸
基のＯ‐アリールスルホニル化反応の条件については特
に制限はないが、通常はピリジン中で、必要に応じて
Ｎ，Ｎ‐ジメチルアミノピリジン、ジアザビシクロウン
デセン（ＤＢＵ）などの塩基を存在させて、通常加温し
ないで、アリールスルホニルハライドを３〜３０倍モル
作用させることによって行われる。

【００３０】また、前記Ｏ‐アリールスルホニル化の条
件を用いて、必要に応じ４，６位の水酸基を、同時にバ
ルキーでないＯ‐アルキルスルホニル化してもよい。

【００３１】次にこのようにして得られた一般式（ＶＩ
Ｉ）で表わされるアシル‐Ｏ‐アリールスルホニルマル
トオリゴ糖誘導体にヨウ化ナトリウム又は臭化ナトリウ
ムを作用させ、６‐ヨード又は６‐ブロモ誘導体とした
のち、Ｘがアリールイミド基の場合は、例えばフタルイ
ミド酸カリウム塩などを作用させ、Ｘがアリールスルホ
ニル基の場合は、例えばチオフェノールなどを作用さ
せ、続いて酸化反応を行い、一般式

【化１３】 （式中のＲ^１８，Ｒ，ｎ及びＹは前記と同じ意味をも
ち、Ｘ^１はアリールスルホニル基又はアリールイミド基
である）で表わされるアシルアリールスルホニル又はア
シルアリールイミドマルトオリゴ糖誘導体、例えば２‐
クロロ‐４‐ニトロフェニル＝テトラデカ‐Ｏ‐アセチ
ル‐６^５‐デオキシ‐６^５‐フェニルスルホニル‐β‐
Ｄ‐マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェ
ニル＝エイコサ‐Ｏ‐ベンゾイル‐６^７‐デオキシ‐４
^７‐Ｏ‐メチル‐６^７‐フタルイミド‐α‐Ｄ‐マルト
ヘプタオシド、フェノールインド‐３′‐クロロフェニ
ル＝テトラデカ‐Ｏ‐クロロアセチル‐６^５‐デオキシ
‐４^５‐Ｏ‐メシル‐６^５‐フェニルスルホニル‐β‐
Ｄ‐マルトペンタオシドなどを得る。

【００３２】上記６‐ヨウ化、臭化、アリールイミド化
及びアリールチオエーテル化反応の条件については特に
制限はないが、通常はＤＭＳＯ、ＤＭＦ、メチルエチル
ケトンなどの非プロトン性極性溶媒中で、通常加温し
て、ヨウ化ナトリウム、臭化ナトリウム、フタルイミド
カリウム塩、チオフェノールなどを５〜５０倍モル作用
させることによって行われる。この際、段階的にこれら
の反応を行わずに、同一反応系内で連続的にヨウ化又は
臭化反応、続いてアリールイミド化又はアリールチオエ
ーテル化反応を行ってもよい。

【００３３】さらに、上記アリールチオエーテル誘導体
からアリールスルホン誘導体への酸化反応であるが、こ
の反応条件についても特に制限はなく、常法［「新実験
化学講座」第１４巻、有機化合物の合成と反応［ＩＩ
Ｉ］、第１７５９〜１７６０ページ、１９７７年、丸
善、参照］を用いて行えばよい。

【００３４】最後に、一般式（ＶＩ）又は（ＶＩＩＩ）
で表わされる非還元末端修飾アシルマルトオリゴ糖誘導
体を脱アシル化して、前記一般式（Ｉ）で表わされる目
的の化合物である、非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導
体が得られる。この脱アシル化反応の条件については特
に制限はないが、例えばアシルアルキル又はアリールシ
リルオキシマルトオリゴ糖誘導体に、メタノールなどの
アルコール類中でアンモニア水を１００〜２００倍モル
添加し、２０〜５０℃で５〜５０時間反応させる方法な
どが用いられる［「カナディアン・ジャーナル・オブ・
ケミストリー（Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．）」、第４９
巻、第４９３ページ（１９７１）参照］。

【００３５】還元末端置換基Ｒが水素原子又はグルコー
ス以外の単糖類の残基であるものについては、出発原料
として市販品や公知の製造方法で得ることができる前記
一般式（ＩＩ）で表わされる化合物（ただし、Ｒは水素
原子又はグルコース以外の単糖類の残基である）などを
用い、該Ｒが芳香族発色性基である場合の製造法に準じ
て製造することができる。

【００３６】このようにして得られた前記一般式（Ｉ）
で表わされる非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体は、
このものに対するヒトα‐アミラーゼの２種のアイソザ
イムの反応速度が大きく異なり、本発明のα‐アミラー
ゼアイソザイム活性の分別定量法における２種のα‐ア
ミラーゼ活性測定用基質のうちの第１の基質として有効
に用いられる。

【００３７】一方、第２の基質については、α‐アミラ
ーゼ活性測定用基質であって、第１の基質と両アイソザ
イムによる反応速度比が異なるものであればよく、特に
制限はない。このような物質としては、例えば一般式

【化１４】 （式中のＲ′は水素原子、芳香族発色性基又はグルコー
ス以外の単糖類の残基、Ｒ^２２及びＲ^２３は、それぞれ
ハロゲン原子、水酸基、アジド基、アシルオキシ基、ア
ルキル若しくはアリールオキシ基、Ｎ‐アルキル若しく
はＮ‐アリールカルバモイルオキシ基、アルキルオキシ
若しくはアリールオキシメトキシ基、アルキル若しくは
アリールスルホニルオキシ基又はアルキル若しくはアリ
ールメルカプト基であり、それらは同一であってもたが
いに異なっていてもよいし、Ｒ^２２及びＲ^２３とで置換
又は非置換のメチレンジオキシ基を形成してもよく、ｍ
は２〜６の整数である）で表わされるマルトオリゴ糖誘
導体を挙げることができるが、これらの中で、反応速度
比が１．３以下、特に約１のものが簡便性及び正確性の
点で有利である。

【００３８】次に、これらの２種の基質、すなわち第１
の基質と第２の基質を用いて、試料中のα‐アミラーゼ
アイソザイム活性を分別定量する方法を具体的に説明す
る。

【００３９】まず、活性既知のＰ型α‐アミラーゼ標品
及びＳ型α‐アミラーゼ標品を用いて、あらかじめ第１
の基質に対する各反応速度と、第２の基質に対する各反
応速度を求める。この測定方法は、例えば「メソッズ・
オブ・エンザイマティック・アナリシス（Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ｏｆ Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ Ａｎａｌｙｓｉｓ）第
３版」、第ＩＶ巻、第１５７〜１６１ページ（１９８４
年）に記載された方法に従って行われる。

【００４０】次に、α‐アミラーゼ活性を有する試料
に、第１の基質又は第２の基質を加え、常法により共役
酵素の存在下で反応させ、それぞれの吸光度変化量
Ａ_１，Ａ_２を測定する。

【００４１】第１の基質に対するＰ型α‐アミラーゼの
反応速度をｋ_１、Ｓ型α‐アミラーゼの反応速度を
ｋ_２、第２の基質に対するＰ型α‐アミラーゼの反応速
度をｋ_３、Ｓ型α‐アミラーゼの反応速度をｋ_４、試料
中のＰ型α‐アミラーゼ活性をａ_Ｐ、Ｓ型α‐アミラー
ゼ活性をａ_Ｓとすると、関係式

【数１】 が成りたつ。そして、これらの式から、関係式

【数２】 が得られる。

【００４２】すなわち、ｋ_１，ｋ_２，ｋ_３及びｋ_４をあ
らかじめ測定しておけば、式（ＸＩＩ）及び式（ＸＩＩ
Ｉ）を用いることにより、２種の基質を用いて酸素反応
を行って測定した吸光度変化量を代入するだけで、試料
中の２種のアイソザイム活性の分別定量を簡単に行うこ
とができる。

【００４３】そして、前記したように、第１の基質とし
て用いる前記一般式（Ｉ）で表わされる大きな疎水性基
を非還元末端に有する非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘
導体は、反応速度比（ｋ_１／ｋ_２）が極めて大きいた
め、ｋ_３とｋ_４がほぼ等しいとすると、式（ＸＩＩ）及
び式（ＸＩＩＩ）において分母のｋ_１とｋ_２の差（絶対
値）が大きくなり、分子のＡ_１及びＡ_２に含まれる測定
誤差の増幅が小となる結果、正確度が向上することにな
る。

【００４４】この際、第２の基質として用いられる前記
一般式（ＩＸ）で表わされるマルトオリゴ糖誘導体とし
ては、α‐アノマー及びβ‐アノマーのいずれでもよ
く、また、このもののマルトオリゴ糖部については、例
えばＤ‐マルトテトラオースから、マルトオクタオース
までのものすべてが使用できるが、これらの中で、特に
マルトペンタオース、マルトヘキサオース及びマルトヘ
プタオースが、最終的な基質の性質の点から好適であ
る。

【００４５】また、前記一般式（ＩＸ）で表わされるマ
ルトオリゴ糖誘導体のＲ′は前記一般式（Ｉ）における
Ｒと同じ意味をもっていて、水素原子、芳香族発色性基
又はグルコース以外の単糖類の残基であるが、特に芳香
族発色性基が好ましく、この例としては前記Ｒと同様な
ものが挙げられる。さらに、第１の基質と第２の基質の
組合せにおいて、Ｒ′とＲは同一であってもよいし、異
なっていてもよい。

【００４６】このような前記一般式（ＩＸ）で表わされ
る化合物の代表例としては、マルトペンタオース、マル
トヘプタオース、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β
‐Ｄ‐マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフ
ェニル＝４^５，６^５‐ジ‐Ｏ‐（Ｎ‐エチル）カルバモ
イル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝４^５，６^５‐ジ‐Ｏ‐メトキシメチル
‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝６^５‐アジド‐６^５‐デオキシ‐β‐Ｄ‐
マルトペンタオシド、４‐ニトロフェニル＝６^５‐Ｏ‐
ベンジル‐α‐Ｄ‐マルトペンタオシド、２‐クロロ‐
４‐ニトロフェニル＝６^７‐クロロ‐β‐デオキシ‐Ｄ
‐マルトヘプタオシド、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝４^５，６^５‐Ｏ‐ベンジリデン‐β‐Ｄ‐マルトペ
ンタオシド、フェノールインド‐３′‐クロロフェニル
＝６^５‐Ｏ‐トルエンスルホニル‐β‐Ｄ‐マルトペン
タオシド、６^５‐クロロ‐６^５‐デオキシ‐Ｄ‐マルト
ペンタオース、１‐（４^６‐Ｏ‐，６^６‐Ｏ‐ジメタン
スルホニル‐α‐マルトヘキサオシル）‐α‐Ｄ‐グル
シトールなどが挙げられる。

【００４７】これらの一般式（ＩＸ）で表わされるマル
トオリゴ糖誘導体は市販品のものを用いてもよいし、一
般的な製造方法を組み合わせて得られたものを用いても
よい。

【００４８】本発明の方法においては、試料中のα‐ア
ミラーゼアイソザイム活性を定量するに際し、前記一般
式（Ｉ）及び一般式（ＩＸ）で表わされる２種の基質を
用いてそれぞれα‐アミラーゼ活性を測定するが、この
場合常法により共役酵素の存在下でα‐アミラーゼと基
質を反応させる。基質と用いる共役酵素の関係について
は、特に制限はなく、常法に従えばよい。

【００４９】例えば、前記一般式（Ｉ）で表わされる非
還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体及び前記一般式（Ｉ
Ｘ）で表わされるマルトオリゴ糖誘導体の場合の共役酵
素としては、（１）Ｒ又はＲ′が水素原子である化合物
（α‐アノマーやβ‐アノマー）の場合には、α‐グル
コシダーゼやグルコアミラーゼが、（２）Ｒ又はＲ′が
芳香族発色性基又はグルコース以外の単糖類の残基であ
る化合物の場合には、（イ）α‐アノマーのみの場合
は、α‐グルコシダーゼやグルコアミラーゼが、（ロ）
β‐アノマーのみあるいはα‐アノマーとβ‐アノマー
との混合物の場合はα‐グルコシダーゼやグルコアミラ
ーゼに加えてβ‐グルコシダーゼが用いられる。

【００５０】なお、前記一般式（ＩＸ）で表わされるマ
ルトオリゴ糖誘導体の中で、非還元末端修飾が非修飾の
Ｒ^２２及びＲ^２３が水酸基である化合物を基質として用
いる場合は、共役酵素としてグルコアミラーゼを用いな
いことなども通常どおりである。また、必要に応じてβ
‐アミラーゼを用いることもできる。

【００５１】ここで使用するα‐グルコシダーゼは動
物、植物、微生物などいずれの由来のものを用いてもよ
いが、例えば酵母由来ものを用いるのが好ましい。

【００５２】また、グルコアミラーゼもいかなる起源の
ものを用いてもよいが、例えばリゾプス属（Ｒｉｚｏｐ
ｕｓ ｓｐ）などに由来するものは好ましい。

【００５３】さらに、β‐グルコシダーゼもいかなる起
源のものを用いてもよく、例えばアーモンドの種子から
得たものが用いられる。

【００５４】そして、β‐アミラーゼもいかなる起源の
ものを用いてもよく、例えば細菌や植物由来のものを用
いることができる。

【００５５】次に、α‐アミラーゼアイソザイム活性の
分別定量のための有利な系としては、例えば第１の基質
である前記一般式（Ｉ）で表わされる非還元末端修飾マ
ルトオリゴ糖誘導体を含む系及び第２の基質である前記
一般式（ＩＸ）で表わされるマルトオリゴ糖誘導体を含
む系では、各基質０．１〜１０ｍＭ及び緩衝液２〜３０
０ｍＭを含有し、かつ各系の共役酵素として、前記の基
質と共役酵素の組合せを考慮し、α‐グルコシダーゼ及
び／又はグルコアミラーゼを用いるときはそれぞれ５〜
１０００単位／ｍｌ、さらにβ‐グルコシダーゼを用い
るときは０．５〜３０単位／ｍｌを含有するｐＨ４〜１
０の系が挙げられる。この系に用いられる緩衝剤として
は、例えばリン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、グッズ（Ｇｏｏ
ｄ’ｓ）の緩衝液、ホウ酸塩、クエン酸塩、ジメチルグ
ルタル酸塩などが挙げられる。

【００５６】このような系に前記成分以外に本発明の目
的をそこなわない範囲で、さらに必要に応じて慣用の種
々の添加成分を加えることができる。例えば、溶解補助
剤、安定化剤として、グリセリン、牛血清アルブミン、
α‐又はβ‐シクロデキストリン、トリトンＸ‐１００
などを加えることができるし、ヒトα‐アミラーゼ活性
化剤として、ＮａＣｌ、ＭｇＣｌ_２、ＭｇＳＯ_４、Ｃａ
Ｃｌ_２、ＣａＣｌ_２・Ｈ_２Ｏなどの形でＣｌ⁻イオン、
Ｃａ^２＋イオン、Ｍｇ^２＋イオンなどを加えることもで
きる。これらの添加成分は１種用いてもよいし、２種以
上を組合わせて用いてもよい。これらは前記系調製の適
当な段階で加えることができる。

【００５７】また、前記一般式（Ｉ）で表わされる非還
元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体及び前記一般式（Ｉ
Ｘ）で表わされるマルトオリゴ糖誘導体において、Ｒ又
はＲ′が水素原子若しくは単糖類の残基である基質を用
いる場合、酵素反応によって生成するグルコース、フラ
クトース、あるいはその他の単糖類を吸光度法によって
定量する場合には、ＮＡＤ→ＮＡＤＨ又はＮＡＤＨ→Ｎ
ＡＤの酸化‐還元反応に伴う光度変化測定系に通常用い
られる酵素類、すなわち、グルコース‐６‐リン酸デヒ
ドロゲナーゼ（例えばＬｅｕｃｏｎｏｓｔｏｃ ｍｅｓ
ｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓなどに由来するもの）、マルトー
スホスホリラーゼ（例えばＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｒｅｖｉｓなどに由来するもの）、ヘキソキナーゼ
（例えば酵母などに由来するもの）、β‐ホスホムター
ゼ［例えば兎筋肉（ｒａｂｂｉｔｍｕｓｃｌｅ）などに
由来するもの］、ソルビトールデヒドロゲナーゼ［例え
ば羊肝（ｓｈｅｅｐ ｌｉｖｅｒ）に由来するもの］及
びＮＡＤ（又はＮＡＤＨ）、ＡＴＰなどを加えればよ
い。

【００５８】なお、Ｒ又はＲ′が芳香族発色性基である
基質を用いる場合には、α‐アミラーゼ反応に係わる共
役酵素系以外に前記のように、吸光系に係わる酵素など
を必要としないで吸光度法を適用できるため、より好ま
しい。

【００５９】次に、本発明方法の好適な実施態様につい
て説明すると、まず、前記一般式（Ｉ）で表わされる非
還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体を第１の基質とし、
活性既知のＰ型α‐アミラーゼ標品及びＳ型α‐アミラ
ーゼ標品を用いて、これらに対する反応速度（ｋ_１及び
ｋ_２）を測定する。次いで、α‐アミラーゼ活性を有す
る試料に、共役酵素としてのα‐グルコシダーゼ又はグ
ルコアミラーゼあるいはその両方をそれぞれ５〜１００
０単位／ｍｌ、好ましくは１０〜５００単位／ｍｌ加
え、第１の基質がβ‐アノマーを含むときは、さらにβ
‐グルコシダーゼを０．５〜３０単位／ｍｌ、好ましく
は１〜１５単位／ｍｌ加え、これと同時又はこれらの後
に第１の基質０．１〜１０ｍＭ、好ましくは０．３〜５
ｍＭを緩衝剤と共に添加したのち、温度２５〜４５℃、
好ましくは３５〜４０℃、ｐＨ４〜１０、好ましくは６
〜８の条件下で少なくとも１分間、好ましくは２〜１０
分間反応させ、生成した発色性芳香族化合物を、常法に
従いそのままであるいは必要に応じｐＨを調整したの
ち、適当な吸収波長で連続的に又は断続的に、吸光度変
化量（Ａ_１）を測定する。

【００６０】次に、活性既知のＰ型α‐アミラーゼ標品
及びＳ型α‐アミラーゼ標品を用いて、あらかじめ反応
速度（ｋ_３及びｋ_４）を測定しておいた第２の基質につ
いて、第１の基質の場合と同様にして吸光度変化量（Ａ
_２）を測定する。ただし、この第２の基質としては、そ
の反応速度比（ｋ_３／ｋ_４）が第１の基質の反応速度比
（ｋ_１／ｋ_２）と同じにならないようなものを選ぶ必要
がある。

【００６１】このようにして得たｋ_１，ｋ_２，ｋ_３，ｋ
_４，Ａ_１及びＡ_２の値を式（ＸＩＩ）及び式（ＸＩＩ
Ｉ）に代入することにより、試料中のＰ型α‐アミラー
ゼ活性（ａ_P）及びＳ型α‐アミラーゼ活性（ａ_S）を求
めることができる。

【００６２】なお、前記一般式（Ｉ）及び（ＩＸ）で表
わされる化合物のＲ又はＲ′が水素原子又は単糖類の残
基であるときは、吸光系に係る酵素その他必要な成分を
適宜添加し、Ｒ又はＲ′が芳香族発色性基である場合同
様にして行うことができる。

【００６３】

【発明の効果】本発明の新規な非還元末端修飾マルトオ
リゴ糖誘導体は、該誘導体に対するヒトα‐アミラーゼ
の２種のアイソザイムの反応速度比が大きく異なるもの
であり、該誘導体を用いると、簡単な操作で、しかも正
確にヒトα‐アミラーゼ中のアイソザイム活性の分別定
量を行いうるという利点がある。

【００６４】したがって、該誘導体は、Ｐ型α‐アミラ
ーゼ及びＳ型α‐アミラーゼを別々に定量することが要
求される疾患の診断用として好適である。

【００６５】

【実施例】次に実施例により、本発明をさらに詳細に説
明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定され
るものではない。

【００６６】なお、各例中の吸収極大波長は特に示され
ていない限り、メタノール中で測定した値であり、比旋
光度は２５℃においてＤ線で測定した値である。

【００６７】実施例１ ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^５‐Ｏ‐（ｔ‐ブ
チルジメチル）シリル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの
製造 （１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４^５，６^５
‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シドの製造 市販の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝β‐Ｄ‐マル
トペンタオシド１５．０ｇ（１５．２ｍｍｏｌ）を無水
ＤＭＦ７５ｍｌに溶解し、テトラメトキシメタン１５．
０ｍｌ（１１３ｍｍｏｌ）及びアンバーリスト（１５
Ｅ）７．５ｇを加え、３５℃で４時間、かきまぜながら
反応させた。次いでこの反応液を氷冷下１００ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）２．０ｌ中へ、かきまぜなが
らゆっくりと滴下した。この混合液をＯＤＳ（オクタデ
シルシリカゲル）カラムクロマトグラフィーにより精製
し、アセトニトリル‐水混液（容量比３：７）で溶出し
た目的区分を濃縮し、イソプロパノール‐メタノールか
ら再結晶すると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝４
^５，６^５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐β‐Ｄ‐マルト
ペンタオシドが１０．７ｇ（１０．１ｍｍｏｌ，収率６
６．５％）得られた。

【００６８】融点（℃）：９３．０〜９５．０（ｄｅ
ｃ．） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２９５（ｌｏｇε＝３．９５），２２７
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．１７） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４２０，２９４
０，１６４８，１５８８，１５２４，１４９０，１３５
２，１２７６，１２４６，１１５４，１０８２，１０５
０，１０２６，９３０，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：３．２５〜３．８５（ｍ），３．２３（３
Ｈ，ｓ），３．３０（３Ｈ，ｓ），３．８９（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），４．３０〜４．７０（ｍ），
５．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），５．１０（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
３．４Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ），５．２５〜５．７０（ｍ），７．４７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝１．４ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝１０．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０，５０ｍＭリン酸ｂｕ
ｆｆｅｒ）；＋８６．７° 元素分析：Ｃ_３９Ｈ_５８ＣｌＮＯ_３０として

【００６９】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシドの製造 実施例１の（１）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝４^５，６^５‐Ｏ‐ジメトキシメチリデン‐β‐Ｄ‐
マルトペンタオシド３．００ｇ（２．８４ｍｍｏｌ）を
ピリジン６０ｍｌに溶解し、無水酢酸３０ｍｌ（３８４
ｍｍｏｌ）を加え、室温で２日間かきまぜながら反応さ
せた。次いで反応液を減圧下濃縮し、ここに含まれるピ
リジン、無水酢酸、酢酸を留去した。得られたオイル状
のアセチル体を精製しないで酢酸１００ｍｌに溶解し、
水２５ｍｌを加え、３０℃で３日間、かきまぜながら反
応させた。次いでこの反応液を氷水６００ｍｌ中へ、か
きまぜながらゆっくりと滴下したのち、この混合液をジ
クロロメタン６００ｍｌで３回抽出した。次いでジクロ
ロメタン層を水６００ｍｌで３回洗浄し、ジクロロメタ
ン層部を無水硫酸ナトリウムで乾燥、ろ別したのち、ろ
液を減圧下濃縮し、ジクロロメタンを留去した。この残
渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製
し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容
量比６６：２．５：３３）で溶出した目的区分を濃縮す
ることにより、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐
（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド２．０８ｇ（１．３２ｍｍｏｌ，２工程
通算収率４６．５％）が得られた。 融点（℃）：１２６．０〜１３０．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ（ＣＨ_３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８２（ｌｏｇε＝
３．９４） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４８０，２９７
０，１７５２，１５８８，１５３０，１４８６，１４３
２，１３７２，１３５０，１２３６，１０３０，９４
４，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．８１〜２．１２（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．５０〜４．７４（ｍ），５．０５（ｍ），
７．２２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．０９（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２２
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝７：３ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝４．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．２５，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８８．０°

【００７０】（３） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐（ｔ‐ブ
チルジメチル）シリル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐
（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシドの製造

【００７１】実施例１の（２）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α
‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．５０ｇ（０．９
５４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ３０ｍｌに溶解し、（ｔ‐ブチ
ルジメチル）シリルクロリド７２８ｍｇ（４．８２ｍｍ
ｏｌ）、イミダゾール６５４ｍｇ（９．６０ｍｍｏｌ）
を加え、２５℃で１６時間、かきまぜながら反応させ
た。次いでこの反応液にトルエンを加え、３ｗｔ％食塩
水各３００ｍｌで３回洗浄し、トルエン層を無水硫酸ナ
トリウムで乾燥、ろ別したのち、ろ液を減圧下濃縮し、
トルエンを留去した。この残渣をシリカゲルカラムクロ
マトグラフィーにより精製し、酢酸エチル‐メタノール
‐ジクロロメタン混液（容量比１００：１：２００）で
溶出した目的区分を濃縮すると、２‐クロロ‐４‐ニト
ロフェニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ
‐（ｔ‐ブチルジメチル）シリル‐α‐Ｄ‐グルコピラ
ノシル］‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐
グルコピラノシド１．３９ｇ（０．８２４ｍｍｏｌ，収
率８６．４％）が得られた。

【００７２】融点（℃）：１１７．０〜１１９．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝３．９９），２２８
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２１） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４８０，２９５
０，１７５０，１５８４，１５２８，１４８４，１４３
０，１３７０，１３５０，１２３８，１１４２，１０３
８，８９６，８３６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：０．０９（６Ｈ，ｓ），０．９０（９Ｈ，
ｓ），２．００〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．６５〜４．８０（ｍ），５．２０〜５．４５
（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），８．
１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：２ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝１６．４ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０２，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８８．６° 元素分析：Ｃ_７０Ｈ_９６ＣｌＮＯ_４２Ｓｉとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４９．８４ ５．７４ ０．８３ 実測値（％） ４９．５７ ５．７０ ０．７５

【００７３】（４） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６^５‐Ｏ‐（ｔ‐ブチルジメチル）シリル‐β‐Ｄ‐
マルトペンタオシドの製造 実施例１の（３）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐（ｔ‐
ブチルジメチル）シリル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］
‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐
アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］
‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピ
ラノシド１．３３ｇ（０．７９１ｍｍｏｌ）をメタノー
ル１００ｍｌ及び無水炭酸カリウム１６４ｍｇ（１．１
９ｍｍｏｌ）を加え、２５℃で１２時間かきまぜながら
反応させた。次いで反応液を減圧濃縮し、ここに含まれ
るメタノールを留去した。次いでその残渣をＯＤＳカラ
ムクロマトグラフィーにより精製し、アセトニトリル‐
水混液（容量比４５：５５）で溶出した目的区分を濃縮
し、凍結乾燥することにより、２‐クロロ‐４‐ニトロ
フェニル＝６^５‐Ｏ‐（ｔ‐ブチルジメチル）シリル‐
β‐Ｄ‐マルトペンタオシド７４２ｍｇ（０．６７６ｍ
ｍｏｌ，収率８５．５％）が得られた。

【００７４】融点（℃）：１４５．０〜１４８．０（ｄ
ｅｃ．） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２９０（ｌｏｇε＝３．９４），２２７
（ｌｏｇε＝３．９５），２０９（ｌｏｇε＝４．１
６） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４２０，２９４
０，１７３６，１５８６，１５２４，１３５０，１２７
４，１２５６，１１５４，１０８２，１０３２，８９
４，８７２，８３８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：０．０４（６Ｈ，ｓ），０．８７（９Ｈ，
ｓ），３．０５〜３．８５（ｍ），４．２５〜４．５５
（ｍ），４．７２〜４．８０（１Ｈ，ｍ），５．０５
（３Ｈ，ｍ），５．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．４Ｈ
ｚ），５．２５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），５．２
５〜５．６５（ｍ），７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０
Ｈｚ），８．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．
７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝４．３ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，メタノール）；＋
７８．８° 元素分析：Ｃ_４２Ｈ_６８ＣｌＮＯ_２８Ｓｉ・３／２Ｈ_２
０として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４４．８２ ６．３６ １．２４ 実測値（％） ４４．６６ ６．１８ １．１１

【００７５】実施例２ ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^５‐デオキシ‐６
^５‐（フェニル）スルホニル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シドの製造

【００７６】（１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐トシル‐
α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ
‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐
アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造

【００７７】実施例１の（２）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐α
‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．１６ｇ（０．７
３８ｍｍｏｌ）をピリジン３０ｍｌに溶解し、トシルク
ロリド２．１１ｇ（１１．０ｍｍｏｌ）を加え、室温下
で５時間、かきまぜながら反応させた。次いでこの反応
液中のピリジンを減圧下留去し、この残渣をシリカゲル
カラムクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル‐
メタノール‐ジクロロメタン混液（容量比５０：１：１
００）で溶出した目的区分を濃縮すると、２‐クロロ‐
４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル
‐６‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１
→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ド６４３ｍｇ（０．３７２ｍｍｏｌ，収率５０．５％）
が得られた。

【００７８】融点（℃）：１０９．０〜１１３．５ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ（ＣＨ₃ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８１（ｌｏｇε＝
３．９５），２７２（ｓｈ） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４９０，２９７
０，１７５２，１５８６，１５２８，１４８６，１４３
０，１３７２，１３５０，１２４０，１１７８，１０３
４，９４２ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．９９〜２．１７（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），２．４５（３Ｈ，ｓ），３．５０〜４．８０
（ｍ），５．１０〜５．５０（ｍ），７．２７（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．３３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．
５Ｈｚ），７．７９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），
８．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈ
ｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝７：３ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝８．３ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６５０，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８８．０° 元素分析：Ｃ_７１Ｈ_８８ＣｌＮＯ_４４Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４９．３８ ５．１４ ０．８１ 実測値（％） ４９．１４ ５．１０ ０．７９

【００７９】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐ト
シル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリ
ス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐
グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造

【００８０】実施例２の（１）と同様にして得た２‐ク
ロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐ア
セチル‐６‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐
アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］
‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピ
ラノシド８．４８ｇ（４．９１ｍｍｏｌ）をピリジン４
０ｍｌに溶解し、無水酢酸２０ｍｌを加え、室温下で１
５時間、かきまぜながら反応させた。次いでこの反応中
のピリジンを減圧下留去し、この残渣をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル‐メタ
ノール‐ジクロロメタン混液（容量比４０：１：１０
０）で溶出した目的区分を濃縮すると、２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセ
チル‐６‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシド５．７９ｇ（３．２７ｍｍｏｌ，収率６６．６
％）が得られた。

【００８１】融点（℃）：１１６．５〜１１８．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ（ＣＨ_３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８４（ｌｏｇε＝
３．９７），２２６（ｌｏｇε＝４．３４） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４９０，２９６
０，１７５４，１５８４，１５２８，１４８６，１４３
２，１３７２，１３５２，１２３８，１１８０，１０４
０，９９４，９４０，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．９３〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），２．４５（３Ｈ，ｓ），３．８０〜４．８０
（ｍ），４．９６（１Ｈ，ｔ様），５．１０〜５．５０
（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．
３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．７８（２Ｈ，
ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），８．１６（１Ｈｚ，ｄｄ，Ｊ＝
９．０Ｈｚ，２．４Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．４Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝６．７ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６９２，１，４‐ジオキサ
ン）；＋９２．６° 元素分析：Ｃ_７３Ｈ_９０ＣｌＮＯ_４５Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４９．５６ ５．１３ ０．７９ 実測値（％） ４９．４３ ５．１７ ０．８４

【００８２】（３） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキ
シ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ドの製造

【００８３】実施例２の（２）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐６‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシド２．００ｇ（１．１３ｍｍｏｌ）をメチルエチル
ケトン１２０ｍｌに溶解し、ヨウ化ナトリウム５．０８
ｇ（３３．９ｍｍｏｌ）を加え、７０℃で６時間、かき
まぜながら反応させた。次いでこの反応液をセライトベ
ットでろ過し、ろ液中のメチルエチルケトンを減圧下留
去し、この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー
により精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタ
ン混液（容量比４０：１：１００）で溶出した目的区分
を濃縮すると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐
（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６
‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐
トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．９
４ｇ（１．１３ｍｍｏｌ，収率９９．９％）が得られ
た。

【００８４】融点（℃）：１２７．０〜１２９．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ（ＣＨ_３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８４（ｌｏｇε＝
４．１０），２２７（ｓｈ），２１４（ｌｏｇε＝４．
２５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３５００，２９７
０，１７５４，１５８６，１５３０，１４８６，１４３
４，１３７４，１３５４，１２３８，１０４０，９４
６，９００ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．９９〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．１３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ，
６．２Ｈｚ），３．２８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．２Ｈ
ｚ，１．５Ｈｚ），３．６８（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．
８Ｈｚ，６．２Ｈｚ，１．５Ｈｚ），３．８５〜４．８
５（ｍ），５．１５〜５．５０（ｍ），７．２８（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝９．２Ｈｚ，２．８Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝２．８Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝６．０ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６３４，１，４‐ジオキサ
ン）；＋９１．０° 元素分析：Ｃ₆₆Ｈ₈₃ＣｌＩＮＯ₄₂として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４５．９６ ４．８５ ０．８１ 実測値（％） ４５．８７ ４．８４ ０．６８

【００８５】（４） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキ
シ‐６‐（フェニル）チオ‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシドの製造

【００８６】実施例２の（３）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐６‐デオキシ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド１．２１ｇ（０．７０１ｍｍｏｌ）をＤ
ＭＦ１２０ｍｌに溶解し、チオフェノール７１５μｌ
（６．９６ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン９６９μｌ
（９．６９ｍｍｏｌ）を加え、室温下で３時間、かきま
ぜながら反応させた。次いでこの反応液にトルエン７０
０ｍｌを加え、３ｗｔ％ＮａＣｌ水各３００ｍｌで３回
洗浄した。次にトルエン層を無水硫酸ナトリウムで乾燥
し、綿栓でろ過したのち、ろ液中のトルエンを減圧下留
去した。この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメ
タン混液（容量比３０：１：１００）で溶出した目的区
分を濃縮すると２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐
（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６
‐（フェニル）チオ‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシド７９０ｍｇ（０．４６３ｍｍｏｌ，収率６６．５
％）が得られた。

【００８７】融点（℃）：１１２．０〜１１５．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ（ＣＨ_３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８０（ｌｏｇε＝
４．０１），２５４（ｌｏｇε＝４．０７），２２８
（ｓｈ），２１２（ｌｏｇε＝４．３３） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４９０，２９６
０，１７５０，１５８４，１５２６，１４８４，１４３
０，１３７０，１３５０，１２３８，１１６２，１１２
４，１０３８，９４４，８９６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．９８〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．０８（２Ｈ，ＡＢ様），３．８０〜４．３
５（ｍ），５．０３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝９．５Ｈｚ），
５．１５〜５．５０（ｍ），７．１５〜７．４０（６
Ｈ，ｍ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，
２．７Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝７．９ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．８１０，１，４‐ジオキサ
ン）；＋９０．４° 元素分析：Ｃ_７２Ｈ_８８ＣｌＮＯ_４２Ｓ・３／４Ｈ_２Ｏ
として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ５０．２６ ５．２４ ０．８１ 実測値（％） ５０．２１ ５．２５ ０．７１

【００８ ８】（５） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐
［２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６
‐（フェニル）スルホニル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル］‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシドの製造

【００８９】実施例２の（４）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐６‐デオキシ‐６‐（フェニル）チオ‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル］‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド７９０ｍｇ（０．４６３ｍ
ｍｏｌ）をジクロロメタン７０ｍｌに溶解し、ｍ‐クロ
ロ過安息香酸２２４ｍｇ（１．３０ｍｍｏｌ）を加え、
室温下で４時間、かきまぜながら反応させた。次いでこ
の反応中のジクロロメタンを減圧下留去し、その残渣を
シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し、酢
酸エチル‐メタノール‐ジクロロメタン混液（容量比５
０：１：１００）で溶出した目的区分を濃縮すると２‐
クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，３，４‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６‐（フェニル）スル
ホニル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→４）‐ト
リス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド６３７ｍ
ｇ（０．３７０ｍｍｏｌ、収率７９．９％）が得られ
た。

【００９０】融点（℃）：１２４．０〜１２８．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ（ＣＨ_３ＣＮ中）］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝
３．９９），２７３ （ｌｏｇε＝３．９８），２６５
（ｓｈ），２１３（ｌｏｇε＝４．３８） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４９０，２９６
０，１７５２，１５８６，１５３２，１４８８，１４４
８，１４３０，１３７２，１３５０，１２３８，１１５
０，１０３８，９４６，８９８，７９２ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．９７〜２．１８（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，
２．５Ｈｚ），３．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．５Ｈ
ｚ，７．５Ｈｚ），３．８５〜４．９０（ｍ），５．１
５〜５．５０（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０
Ｈｚ），７．５２〜７．７２（３Ｈ，ｍ），７．８９
（２Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），８．１６（１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝５．５ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．４０６，１，４‐ジオキサ
ン）：＋８８．９° 元素分析：Ｃ_７２Ｈ_８８ＣｌＮＯ_４４Ｓとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４９．７３ ５．１０ ０．８１ 実測値（％） ４９．５２ ５．１３ ０．５９

【００９１】（６） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６^５‐デオキシ‐６^５‐（フェニル）スルホニル‐β
‐Ｄ‐マルトペンタオシドの製造 実施例２の（５）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐［（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デ
オキシ‐６‐（フェニル）スルホニル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル］）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，
６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β
‐Ｄ‐グルコピラノシド６８０ｍｇ（０．３９４ｍｍｏ
ｌ）を原料とした以外は、実施例１の（５）と同様の操
作を行うことにより、目的の２‐クロロ‐４‐ニトロフ
ェニル＝６^５‐デオキシ‐６^５‐（フェニル）スルホニ
ル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドが３２３ｍｇ（０．２
９２ｍｍｏｌ，収率７４．１％）得られた。

【００９２】融点（℃）：１４０．０〜１４５．０（ｄ
ｅｃ．） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２９１（ｌｏｇε＝３．９４），２７１
（ｓｈ），２６４（ｓｈ），２１３（ｌｏｇε＝４．３
３） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４００，２９３
０，１５８６，１５２０，１４８８，１４４６，１３５
２，１２７６，１１５０，１０４０，１０２４核磁気共
鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳＯ‐
ｄ_６）：２．９１〜３．０１（１Ｈ，ｍ），３．１５〜
３．２５（１Ｈ，ｍ），３．２５〜４．００（ｍ），
４．１５〜４．６０（ｍ），４．８４（１Ｈ，ｂｒ
ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ），５．０５（３Ｈ，ｂｒ ｓ），
５．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．２６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），５．２５〜５．６０
（ｍ），７．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），７．
６０〜７．７３（３Ｈ，ｍ），７．９１（２Ｈ，ｂｒ
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製 ＴＳＫｇ
ｅｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝５．９ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５００，メタノール）：＋
７０．８° 元素分析：Ｃ_４２Ｈ_５８ＣｌＮＯ_２９Ｓ・Ｈ_２Ｏとして Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４４．７８ ５．３７ １．２４ 実測値（％） ４４．４５ ５．４０ １．０７

【００９３】実施例３ ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^５‐デオキシ‐６
^５‐フタルイミド‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの製造

【００９４】（１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキ
シ‐６‐フタルイミド‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシドの製造

【００９５】実施例２の（３）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐６‐デオキシ‐６‐ヨード‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド１．００ｇ（０．５８０ｍｍｏｌ）をＤ
ＭＳＯ５０ｍｌに溶解し、フタル酸イミドカリウム２１
４ｍｇ（１．１６ｍｍｏｌ）を加え、９５℃で１時間、
かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液にトルエ
ン５００ｍｌを加え、３ｗｔ％ＮａＣｌ水各２００ｍｌ
で３回洗浄した。次にトルエン層を無水硫酸ナトリウム
で乾燥し、綿栓でろ過したのち、ろ液中のトルエンを減
圧下留去した。この残渣をシリカゲルカラムクロマトグ
ラフィーにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジク
ロロメタン混液（容量比５０：１：１００）で溶出した
目的区分を濃縮すると２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキ
シ‐６‐フタルイミド‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐
２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラ
ノシド７５５ｍｇ（０．４３３ｍｍｏｌ、収率７４．７
％）が得られた。

【００９６】融点（℃）：１１１．０〜１１３．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８５（ｌｏｇε＝４．０４），２３９
（ｓｈ），２１９（ｌｏｇε＝４．６９） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３５００，２９６
０，１７５０，１７２０，１５８８，１５３０，１４２
８，１３７０，１３５２，１２３６，１０３８，９５
０，９００ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．９６〜２．１７（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．７５〜４．９０（ｍ），５．１５〜５．５
０（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），
７．７１〜７．８９（４Ｈ，ｍ），８．１６（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．２９（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝５．５ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５１４，１，４‐ジオキサ
ン）：＋９０．９° 元素分析：Ｃ_７４Ｈ_８７ＣｌＮ_２Ｏ_４４として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ５０．９７ ５．０３ １．６１ 実測値（％） ５１．２２ ５．１９ １．３６

【００９７】（２） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６^５‐デオキシ‐６^５‐フタルイミド‐β‐Ｄ‐マル
トペンタオシドの製造

【００９８】実施例３の（１）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３，４‐トリ‐Ｏ‐アセチ
ル‐６‐デオキシ‐６‐フタルイミド‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６
‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシド４９９ｍｇ（０．２８６ｍｍｏ
ｌ）を原料とした以外は、実施例１の（５）と同様の操
作を行い、目的の２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６
^５‐デオキシ‐６^５‐フタルイミド‐β‐Ｄ‐マルトペ
ンタオシドが２．０４ｇ（１．２０ｍｍｏｌ，収率９
５．２％）得られた。

【００９９】融点（℃）：１６２．０〜１６４．０（ｄ
ｅｃ．） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２９１（ｌｏｇε＝４．０４），２４２
（ｓｈ），２１９（ｌｏｇε＝４．６５） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４００，２９２
０，１７７２，１７０６，１６３２，１５８４，１５２
０，１４８４，１４２８，１４００，１３４８，１２７
６，１２５０，１１５０，１０３０，９３２，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：２．９５〜４．０５（ｍ），４．３５〜
４．６０（ｍ），４．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝４．８Ｈ
ｚ），４．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ），５．０
２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），５．１０（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．
６Ｈｚ），５．３０〜５．６５（ｍ），７．４７（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ），７．７０〜８．００（４
Ｈ，ｍ），８．１９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，
２．７Ｈｚ），８．３１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製 ＴＳＫｇ
ｅｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝６．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５０２，メタノール）：＋
７９．９° 元素分析：Ｃ_４４Ｈ_５７ＣｌＮ_２Ｏ_２９・５／２Ｈ_２Ｏ
として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４５．６２ ５．３９ ２．４２ 実測値（％） ４５．４１ ５．１９ ２．３１

【０１００】実施例４ ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^５‐デオキシ‐４
^５‐Ｏ‐メシル‐６^５‐（フェニル）スルホニル‐β‐
Ｄ‐マルトペンタオシドの製造

【０１０１】（１） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐
メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ト
リス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐ト
リ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドの製造

【０１０２】実施例１の（２）と同様の操作で得た２‐
クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐
アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐
トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐
Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐
トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１１．
０ｇ（７．００ｍｍｏｌ）をピリジン５００ｍｌに溶解
し、メシルクロリド４．９ｍｌ（６３．３ｍｍｏｌ）及
びモレキュラーシーブス２０．０ｇを加え、室温下で１
６時間、かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液
をセライトベットでろ過し、ろ液中のピリジンを減圧下
留去し、この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロメ
タン混液（容量比１００：１：２００）で溶出した目的
区分を濃縮すると２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ
‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐４，６‐ジ‐Ｏ‐メシ
ル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス
［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１１．６ｇ
（６．６７ｍｍｏｌ，収率９５．３％）が得られた。

【０１０３】融点（℃）：１１６．０〜１１９．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝３．９８），２２６
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２３） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：２９５０，１７５
２，１５８６，１５２８，１３６８，１３５０，１２３
８，１１７６，１０３２，８９６，８２６ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：２．００〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．０８（３Ｈ，ｓ），３．１０（３Ｈ，
ｓ），３．８５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５０
（ｍ），７．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ），８．
１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，２．７Ｈｚ），
８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出、溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝４．０ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６７４，１，４‐ジオキサ
ン）：＋８５．８° 元素分析：Ｃ_６６Ｈ_８６ＣｌＮＯ_４６Ｓ_２として Ｃ Ｈ Ｎ 理論値（％） ４５．８５ ５．０１ ０．８１ 実測値（％） ４６．０５ ５．０９ ０．７８

【０１０４】（５） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６
‐ヨード‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシドの製造

【０１０５】実施例４の（１）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐
４，６‐ジ‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）
‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐
アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］
‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピ
ラノシド１１．６ｇ（６．６７ｍｍｏｌ）をメチルエチ
ルケトン１０００ｍｌに溶解し、ヨウ化ナトリウム３
０．２ｇ（２０１ｍｍｏｌ）を加え、８５℃で６時間、
かきまぜながら反応させた。次いでこの反応液をセライ
トベットでろ過し、ろ液中のメチルエチルケトンを減圧
下留去し、この残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ
ィーにより精製し、酢酸エチル‐メタノール‐ジクロロ
メタン混液（容量比１００：１：２００）で溶出した目
的区分を濃縮すると、２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐６
‐ヨード‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐
Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシド１０．３ｇ（５，８５ｍｍｏｌ，収率８
７．７％）が得られた。

【０１０６】融点（℃）：１２７．０〜１２９．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長〔λｍａ
ｘ〕（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝３．９８），２２７
（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．２２） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３５５０，２９６
０，１７５０，１５８６，１５２８，１４８６，１４３
０，１３７２，１３５０，１２３４，１１８０，１０４
０，９６０，８９８，８２８， 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：２．００〜２．１９（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），３．０６（３Ｈ，ｓ），３．３０（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，５．４Ｈｚ），３．５０（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１．５Ｈｚ），３．６８
（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，５．４Ｈｚ，１．５
Ｈｚ），３．８５〜４．８５（ｍ），５．１５〜５．５
０（ｍ），７．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），
８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７Ｈ
ｚ），８．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×１５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ〕：
Ｒ^ｔ＝５．６ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６７４，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８０．７° 元素分析：Ｃ_６５Ｈ_８３ＣｌＩＮＯ_４３Ｓとして

【０１０７】（３） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐４
‐Ｏ‐メシル‐６‐（フェニル）チオ‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６
‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐
（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐
Ｄ‐グルコピラノシドの製造

【０１０８】実施例４の（２）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６
‐デオキシ‐６‐ヨード‐４‐Ｏ‐メシル‐α‐Ｄ‐グ
ルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシ
ル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．９２ｇ（１．０９ｍｍ
ｏｌ）を原料とした以外は、実施例２の（４）と同様の
操作を行うことにより、目的の２‐クロロ‐４‐ニトロ
フェニル＝Ｏ‐（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオ
キシ‐４‐Ｏ‐メシル‐６‐（フェニル）チオ‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．７０ｇ（０．９
７６ｍｍｏｌ，収率８６．８％）が得られた。 融点（℃）：１１７．０〜１１９．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２７９（ｌｏｇε＝４．００），２５３
（ｌｏｇε＝４．０６），２０７（ｌｏｇε＝４．４
３） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３６４０，３５０
０，２９７０，１７５０，１５８６，１５２８，１４８
６，１４３４，１３７４，１３５２，１２３６，１１８
０，１０３６，９６０，８９８ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：２．００〜２．１８（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），２．９９（３Ｈ，ｓ），３．１４（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，６．５Ｈｚ），３．３８（１
Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ），３．８０〜４．８
０（ｍ），５．２０〜５．５０（ｍ），７．１８〜７．
４１（６Ｈ，ｍ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０
Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７
Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製
ＣＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５
０ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出，溶離液：アセトニトリ
ル／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：
Ｒ^ｔ＝８．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．６３８，１，４‐ジオキサ
ン）；＋８９．７° 元素分析：Ｃ_７１Ｈ_８８ＣｌＮＯ_４３Ｓ_２・２Ｈ_２Ｏと
して （４） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，
３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐４‐Ｏ‐メシル
‐６‐（フェニル）スルホニル‐α‐Ｄ‐グルコピラノ
シル］‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ
‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→
４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グ
ルコピラノシドの製造

【０１１０】実施例４の（３）で得た２‐クロロ‐４‐
ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６
‐デオキシ‐４‐Ｏ‐メシル‐６‐（フェニル）チオ‐
α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐トリス［Ｏ
‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコ
ピラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐
アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．７０ｇ（０．
９７６ｍｍｏｌ）を原料とした以外は、実施例２の
（５）と同様の操作を行うことにより、目的の２‐クロ
ロ‐４‐ニトロフェニル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセ
チル‐６‐デオキシ‐４‐Ｏ‐メシル‐６‐（フェニ
ル）スルホニル‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル］‐（１→
４）‐トリス［Ｏ‐（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル
‐α‐Ｄ‐グルコピラノシル）‐（１→４）］‐２，
３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシ
ド１．６２ｇ（０．９１３ｍｍｏｌ，収率９３．５％）
が得られた。

【０１１１】融点（℃）：１２８．０〜１３０．０ 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２８３（ｌｏｇε＝３．９９），２７２
（ｓｈ），２６５（ｓｈ），２０９（ｌｏｇε＝４．４
０） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３６４０，３５６
０，３５１０，２９７０，１７５０，１５８６，１５２
８，１４８６，１４３８，１３７０，１３５０，１２３
６，１１８０，１１５０，１０３６，９５０，８９６， 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＣＤＣ
ｌ_３）：１．９９〜２．１６（ｃａ．４０Ｈ，ｅａｃｈ
ｓ），２．９９（３Ｈ，ｓ），３．３７（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，７．２Ｈｚ），３．６０（１
Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ），３．８５〜４．８
０（ｍ），５．１５〜５．５０（ｍ），７．２８（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．５４〜７．６７（３
Ｈ，ｍ），７．９０（２Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．５Ｈ
ｚ），８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，２．７
Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［ナカライテスク（株）製Ｃ
ＯＳＭＯＳＩＬＣ_１８カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出，溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝５．８ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．５３８，１，４‐ジオキサ
ン）；＋７９．６° 元素分析：Ｃ_７１Ｈ_８８ＣｌＮＯ_４５Ｓ_２として

【０１１２】（５） ２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル
＝６^５‐デオキシ‐４^５‐Ｏ‐メシル‐６^５‐（フェニ
ル）スルホニル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシドの製造 実施例４の（４）で得た２‐クロロ‐４‐ニトロフェニ
ル＝Ｏ‐［２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐デオキシ‐
４‐Ｏ‐メシル‐６‐（フェニル）スルホニル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル］‐（１→４）‐トリス［Ｏ‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐２，３，６‐トリ‐Ｏ‐ア
セチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシド１．６２ｇ（０．９
１３ｍｍｏｌ）を原料とした以外は、実施例１の（５）
と同様の操作を行うことにより、目的の２‐クロロ‐４
‐ニトロフェニル＝６^５‐デオキシ‐４^５‐Ｏ‐メシル
‐６^５‐（フェニル）スルホニル‐β‐Ｄ‐マルトペン
タオシド６３９ｍｇ（０．５３９ｍｍｏｌ，収率５９．
０％）が得られた。

【０１１３】融点（℃）：１４４．０〜１４８．０（ｄ
ｅｃ．） 紫外部・可視部吸収スペクトル：吸収極大波長［λｍａ
ｘ］（ｎｍ）＝２９０（ｌｏｇε＝３．９９），２７１
（ｓｈ），２６４（ｓｈ），２１３（ｌｏｇε＝４．３
６） 赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４２０，２９２
０，１６３０，１５８４，１５１８，１４８６，１４４
４，１４０４，１３４８，１３０４，１２７４，１１５
２，１０７８，１０２６， 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：３．１７〜３．１９（１Ｈ，ｍ），３．２
５〜３．８５（ｍ），４．３５〜４．６０（ｍ），４．
９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ），５．０４（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ），５．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．
５Ｈｚ），５．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．９Ｈｚ），
５．２６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），５．２５〜
５．６０（ｍ），７．４６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．３Ｈ
ｚ），７．６１〜７．７５（３Ｈ，ｍ），７．９７（２
Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），８．１９（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，２．７Ｈｚ），８．３０（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝２．７Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＵＶ_２８０ｎｍ検出，溶離液：アセトニトリル
／水＝３：１ｖ／ｖ，流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ
^ｔ＝４．２ｍｉｎ 比旋光度［α］：（ｃ ０．２４２，メタノール）；＋
５０．９° 元素分析：Ｃ_４３Ｈ_６０ＣｌＮＯ_３１Ｓとして

【０１１４】実施例５ ６^７‐デオキシ‐６^７‐（フェニル）スルホニル‐４^７
‐Ｏ‐メトキシメチル‐Ｄ‐マルトヘプタオシドの製造 原料に市販のＤ‐マルトヘプタオシド（１０．０ｇ，
８．６８ｍｍｏｌ）を用いて、まず実施例１の（１）、
（２）及び実施例２の（１）と同様の操作を行い、Ｏ‐
（２，３‐ジ‐Ｏ‐アセチル‐６‐Ｏ‐トシル‐α‐Ｄ
‐グルコピラノシル）‐（１→４）‐ペンタキス［０‐
（２，３，６‐トリ‐Ｏ‐アセチル‐α‐Ｄ‐グルコピ
ラノシル）‐（１→４）］‐１，２，３，６‐テトラ‐
Ｏ‐アセチル‐β‐Ｄ‐グルコピラノシドを得た。これ
にメトキシメチルクロリドとジイソプロピルエチルアミ
ンをアセトニトリル中作用させ、４^７‐Ｏ‐メトキシメ
チル体とし、続いて実施例２の（３）〜（６）と同様の
操作を行い、６^７‐デオキシ‐６^７‐（フェニル）スル
ホニル‐４^７‐Ｏ‐メトキシメチル‐Ｄ‐マルトヘプタ
オシド１．９２ｇ（１．４５ｍｍｏｌ，９工程通算収率
１６．７％）を得た。

【０１１５】赤外吸収スペクトル（ｃｍ^−１）：３４３
０，２９２０，１６６０，１４４２，１３８２，１１９
０，１１５２，１０７４，１０２２，９２４，７６０ 核磁気共鳴スペクトル（２００ＭＨｚ）ｐｐｍ（ＤＭＳ
Ｏ‐ｄ_６）：３．１５〜３．２０（１Ｈ，ｍ），３．２
５〜４．１０（ｍ），３．３０（３Ｈ，ｓ），４．６４
（ｃａ．０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ，α‐Ｈ）、
４．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），４．８２（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ），５．２０（ｃａ．０．５
Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，β‐Ｈ），５．２６（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝３．１Ｈｚ），５．３５（５Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．
５Ｈｚ），７．６０〜７．８０（３Ｈ，ｍ），７．９６
（２Ｈ，ｂｒ ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ） 高速液体クロマトグラフィ［東ソー（株）製ＴＳＫｇｅ
ｌ Ａｍｉｄｅ‐８０カラム（４．６ｍｍＩＤ×２５０
ｍｍ），ＲＩ検出，溶離液：アセトニトリル／水＝３：
２ｖ／ｖ、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ］：Ｒ^ｔ＝７．２
ｍｉｎ 元素分析：Ｃ_５０Ｈ_８０Ｏ_３８Ｓとして

【０１１６】実施例６ 第１の基質として２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６
^５‐Ｏ‐（ｔ‐ブチルジメチル）シリル‐β‐Ｄ‐マル
トペンタオシド（以下、ＴＢＤＭＳｉ‐Ｇ_５‐ＣＮＰと
いう）を、第２の基質として２‐クロロ‐４‐ニトロフ
ェニル＝β‐Ｄ‐マルトペンタオシド（以下Ｇ_５‐ＣＮ
Ｐという）を、試料として調製α‐アミラーゼを用いて
分別定量を行った。

【０１１７】（１） 第２の基質Ｇ_５‐ＣＮＰの速度定
数の測定 （イ） α‐アミラーゼ液の調製 市販のヒトＰ型α‐アミラーゼ及び市販のヒトＳ型α‐
アミラーゼをそれぞれブルースターチに対して同一の活
性になるように、蒸留水に溶解した。なお、この市販の
ヒト両α‐アミラーゼとしては国際試薬（株）製キャリ
ブザイム・ＡＭＹを使用した。

【０１１８】（ロ） Ｇ_５‐ＣＮＰ液の調製 常法により得たＧ_５‐ＣＮＰ（Ｍｗ ９８３．５）を
３．２５ｍＭ濃度になるように、４０ｍＭ‐ＮａＣｌ及
び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ＝７．０）に溶解した。この濃度は酵素反応時に
は２．０ｍＭとなり、ヒトＰ型及びヒトＳ型α‐アミラ
ーゼに対してＫｍ値（それぞれ０．４５ｍＭ、０．４５
ｍＭ）の４．４倍に相当するため、最大反応速度を得る
に十分な基質量である。

【０１１９】（ハ） 共役酵素液の調製 市販の酵母由来α‐グルコシダーゼ及び市販のアーモン
ド由来β‐グルコシダーゼをそれぞれ１１０ｕ／ｍｌ，
１２．６ｕ／ｍｌの濃度になるように、４０ｍＭ‐Ｎａ
Ｃｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ＝７．０）に混合して溶解した。なお、こ
れら市販のα‐及びβ‐グルコシダーゼは東洋紡績
（株）製を使用した。

【０１２０】（ニ） 速度定数［式（ＸＩ）におけるｋ
_３，ｋ_４］の測定 α‐アミラーゼ液２５０μｌに共役酵素液１．０ｍｌを
加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温したのち、Ｇ_５‐
ＣＮＰ液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２．５
分間加温後の２分間、４００ｎｍにおける吸光度変化量
（ΔＯＤ）を測定した。

【０１２１】この結果、ヒトＰ型及びヒトＳ型α‐アミ
ラーゼに対する吸光度変化量（ΔＯＤ）は等しかった
（ｋ_３＝ｋ_４）。

【０１２２】ここで、２‐クロロ‐４‐ニトロフェノー
ルの分子吸光係数εを１６，１００とし、α‐アミラー
ゼの活性を３７℃、１分間に１μｍｏｌのＧ_５‐ＣＮＰ
を分解する酵素量を１国際単位（ＩＵ）と定義すると
（以下同じ）、次の式が成り立つ。

【数３】

【０１２３】そして、ｋ_３＝ｋ_４＝ｋとすると、前記式
（ＸＩＩ）は

【数４】 となり、また前記式（ＸＩＩＩ）は

【数５】 となる。

【０１２４】（２） 第１の基質ＴＢＤＭＳｉ‐Ｇ_５‐
ＣＮＰの直線性の確認試験及び速度定数の測定 （イ） ＴＢＤＭＳｉ‐Ｇ_５‐ＣＮＰ液の調製 実施例１で得たＴＢＤＭＳｉ‐Ｇ_５‐ＣＮＰ（Ｍｗ１０
９７．５）を０．６５ｍＭ濃度になるように、４０ｍＭ
‐ＮａＣｌ及び２ｍＭ‐ＭｇＣｌ_２を含有する５０ｍＭ
‐リン酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）に溶解した。この濃度
は酵素反応時には０．４０ｍＭとなり、ヒトＰ型及びヒ
トＳ型α‐アミラーゼに対してそれぞれＫｍ値（それぞ
れ０．０９ｍＭ，０．０３３ｍＭ）の４．４倍，１２．
１倍に相当するため、それぞれ最大速度に達するには十
分な基質量である。

【０１２５】（ロ） α‐アミラーゼ液の調製 前記市販のヒトＰ型α‐アミラーゼ及びヒトＳ型α‐ア
ミラーゼを蒸留水で溶解し、それぞれ５４０ＩＵ／ｌ、
５１０ＩＵ／ｌのα‐アミラーゼ液を得た。これらを原
液とし、蒸留水を用いてそれぞれ希釈を行い、原液１０
０％，７５％，５０％及び２５％を含有する４種の各α
‐アミラーゼ液を調製した。

【０１２６】（ハ） 共役酵素液の調製 前記（１）の（ハ）と同様な操作で共役酵素液の調製を
行った。

【０１２７】（ニ） 直線性の確認、ｋ_１，ｋ_２の値の
測定 前記ヒトＰ型及びヒトＳ型α‐アミラーゼ液各４種につ
いて、α‐アミラーゼ液２５０μｌに共役酵素液１．０
ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で１分間加温したのち、
ＴＢＤＭＳｉ‐Ｇ_５‐ＣＮＰ液２．０ｍｌを加えてかき
まぜ、３７℃で２．５分間加温後の２分間、４００ｎｍ
における吸光度の変化量を測定した。また両基質に関し
てα‐アミラーゼ液の代わりに蒸留水２５０μｌ用いて
ブランク試験を行った。

【０１２８】この結果、ヒトＰ型α‐アミラーゼに関し
ては５４０ＩＵ／ｌまでｒ＝０．９９８９）、ヒトＳ型
α‐アミラーゼに関しては５１０ＩＵ／ｌまで（ｒ＝
０．９９９２）まで直線性が確認された。また、最小二
乗法を用いた直線の傾きから

【数６】 を得た。この数値と前記式（ＸＩＶ）の数値を前記式
（ＸＶ）及び式（ＸＶＩ）に代入することにより、次の
ようにしてａ_Ｐとａ_Ｓが求められる。

【数７】

【０１２９】ここで用いたヒトＰ型α‐アミラーゼの活
性値と吸光度変化量（ΔＯＤ）との関係を図１に、ヒト
Ｓ型α‐アミラーゼの活性値と吸光度変化量（ΔＯＤ）
との関係を図２に示す。

【０１３０】（３） 分別定量試験 活性既知のヒトＰ型とヒトＳ型α‐アミラーゼ液とを種
々の割合で混合し、ＴＢＤＭＳｉ‐Ｇ_５‐ＣＮＰを第１
の基質、Ｇ_５‐ＣＮＰを第２の基質とした場合につい
て、混合割合に基づいて得た理論値と式（ＸＩＸ）及び
式（ＸＸ）から算出される計算値との適合性を調べた。

【０１３１】（イ） ＴＢＤＭＳｉ‐Ｇ_５‐ＣＮＰ液の
調製 前記（２）の（イ）と同様な操作を用いて、ＴＢＤＭＳ
ｉ‐Ｇ_５‐ＣＮＰ液の調製を行った。

【０１３２】（ロ） Ｇ_５‐ＣＮＰ液の調製 前記（１）の（ロ）と同様な操作を用いて、Ｇ_５‐ＣＮ
Ｐ液の調製を行った。

【０１３３】（ハ） α‐アミラーゼアイソザイム試験
液の調製 市販のヒトＰ型α‐アミラーゼ及びヒトＳ型α‐アミラ
ーゼをそれぞれ約１３０ＩＵ／ｌの濃度になるように、
蒸留水に溶解し、（Ｐ：Ｓ）＝（１０：０）及び（０：
１０）に対応する理論値の各α‐アミラーゼ液を得た。
この活性は前記（２）で試験した直線性が保持されてい
る範囲内である。

【０１３４】これらの溶液を原液とし、Ｐ型α‐アミラ
ーゼ及びＳ型α‐アミラーゼの混合液を混合容量比
（Ｐ：Ｓ）＝（１０：０），（９：１），（８：２），
（７：３），（６：４），（５：５），（４：６），
（３：７），（２：８），（１：９），（０：１０）で
調製し（計１１種）、α‐アミラーゼアイソザイム試験
液とした。

【０１３５】また、市販のヒト両α‐アミラーゼは、国
際試薬（株）製キャリブザイム・ＡＭＹを使用した。

【０１３６】（ニ） 共役酵素液の調製 前記（１）の（ハ）と同様な操作で共役酵素液の調製を
行った。

【０１３７】（ホ） 分別定量試験 各α‐アミラーゼアイソザイム試験液２５０μｌに共役
酵素液１．０ｍｌを加えかきまぜ、３７℃で１分間加温
したのち、ＴＢＤＭＳｉ‐Ｇ_５‐ＣＮＰ液又はＧ_５‐Ｃ
ＮＰ液２．０ｍｌを加えてかきまぜ、３７℃で２．５分
間加温した後の２分間、４００ｎｍにおける吸光度の変
化量（ΔＯＤ）を測定した。また、両基質に関してα‐
アミラーゼアイソザイム試験液の代りに蒸留水２５０μ
ｌを用いてブランク試験を行い、Ａ_１及びＡ_２を求め
た。混合前の活性値と混合比から求められるａ_Ｐ及びａ
_Ｓを理論活性値とし、前記式（ＸＩＸ）及び式（ＸＸ）
にＡ_１及びＡ_２を代入して算出されるａ_Ｐ及びａ_Sを計
算活性値とした試験結果を表１に示した。なお、活性値
の単位はＩＵ／ｌである。

【０１３８】また、ここで用いられた各種混合比のヒト
α‐アミラーゼアイソザイム試験液と吸光度変化量（Δ
ＯＤ）の関係を図３に示す。

【表１】

【０１３９】表１から、計算活性値と理論活性値は極め
て高い相関を示していることが分かる。すなわち、本発
明は非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体と、これとは
異なる反応速度比を有するマルトオリゴ糖誘導体を基質
として、ヒトα‐アミラーゼアイソザイム活性を測定す
るものであるが、このようにすれば、簡単に、しかも正
確に、ヒトＰ型及びＳ型α‐アミラーゼ活性を別々に定
量（分別定量）することができる。

【０１４０】実施例７ 速度定数（ｋ_１，ｋ_２）の測定 実施例２〜４で得た基質の速度定数の測定を、実施例６
と同様の操作を用いて行った。その結果を表２に示す。
表において、単位は（ｌ・ΔＯＤ／ＩＵ）であり、また
ＰｈＳＯ_２‐Ｇ_５‐ＣＮＰは、２‐クロロ‐４‐ニトロ
フェニル＝６^５‐デオキシ‐６^５‐（フェニル）スルホ
ニル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、ＰＩ‐Ｇ_５‐ＣＮ
Ｐは２‐クロロ‐４‐ニトロフェニル＝６^５‐デオキシ
‐６^５‐フタルイミド‐β‐Ｄ‐マルトペンタオシド、
ＭｓＰｈＳＯ_２‐Ｇ_５‐ＣＮＰは、２‐クロロ‐４‐ニ
トロフェニル＝６^５‐デオキシ‐４^５‐Ｏ‐メシル‐６
^５‐（フェニル）スルホニル‐β‐Ｄ‐マルトペンタオ
シドの略である。

【表２】

【０１４１】これらの基質を第１の基質とし、Ｇ_５‐Ｃ
ＮＰを第２の基質として前記実施例６の（３）と同様に
して分別定量試験を行った結果、計算活性値と理論活性
値との間には、実施例６の（３）と同様に極めて高い相
関が認められた。

【図面の簡単な説明】

【図１】 実施例６で用いたヒトＰ型α‐アミラーゼ活
性値と吸光度変化量との関係を示すグラフ。

【図２】 実施例６で用いたヒトＳ型α‐アミラーゼ活
性値と吸光度変化量との関係を示すグラフ。

【図３】 実施例６で用いた種々のＳ型α‐アミラーゼ
の混合比率と吸光度変化量との関係を示すグラフ。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 内田 理一郎 千葉県野田市野田339番地 キツコーマン 株式会社内 (72)発明者 小谷 一夫 東京都墨田区業平５丁目５番12号 第一化 学薬品株式会社東京技術センター内 (72)発明者 齋藤 和典 東京都墨田区業平５丁目５番12号 第一化 学薬品株式会社東京技術センター内 (72)発明者 戸辺 光一朗 千葉県野田市野田339番地 盛進製薬株式 会社内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式 【化１】 ［式中のｎは２〜６の整数、Ｒは水素原子、芳香族発色
   性基又はグルコース以外の単糖類の残基、Ｘは（トリア
   ルキル）シリルオキシ基、アリールスルホニル基又はア
   リールイミド基、Ｙは水素原子、置換若しくは非置換の
   炭化水素基又はアルキル若しくはアリールスルホニル基
   である］で表わされる非還元末端修飾マルトオリゴ糖誘
   導体。
2. 【請求項２】 共役酵素の存在下、α‐アミラーゼアイ
   ソザイムによる反応速度比が異なった２種の基質と試料
   とを反応させ、得られたα‐アミラーゼ活性の各測定値
   より、α‐アミラーゼアイソザイム活性を分別定量する
   方法において、第１の基質として、請求項１記載の非還
   元末端修飾マルトオリゴ糖誘導体を、第２の基質とし
   て、２種のα‐アミラーゼアイソザイムのそれに対する
   反応速度比が、第１の基質に対する反応速度比と異なる
   α‐アミラーゼ活性測定用基質を用いることを特徴とす
   るα‐アミラーゼアイソザイム活性の分別定量法。