JPH0655753B2 - 新規オリゴグルコシド誘導体、α‐アミラーゼの測定方法および測定試薬 - Google Patents
新規オリゴグルコシド誘導体、α‐アミラーゼの測定方法および測定試薬Info
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- JPH0655753B2 JPH0655753B2 JP63323815A JP32381588A JPH0655753B2 JP H0655753 B2 JPH0655753 B2 JP H0655753B2 JP 63323815 A JP63323815 A JP 63323815A JP 32381588 A JP32381588 A JP 32381588A JP H0655753 B2 JPH0655753 B2 JP H0655753B2
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- Japan
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- amylase
- measuring
- general formula
- glucosidase
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/20—Carbocyclic rings
- C07H15/203—Monocyclic carbocyclic rings other than cyclohexane rings; Bicyclic carbocyclic ring systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
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- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、新規オリゴグルコシド誘導体、α−アミラー
ゼを測定する方法および試薬に関する。
ゼを測定する方法および試薬に関する。
従来の技術 血清および尿中のα−アミラーゼの測定は、膵臓機能の
検査のための重要な臨床的パラメータである。α−アミ
ラーゼ測定のための慣用方法の場合には、基質として、
３〜８個の１，４−α−結合グルコース単位から成り、
還元性末端の１位では測定可能の基で誘導されかつ他の
末端の６位および場合によつて４位では保護基によつて
誘導されているオリゴグルコシドが使用される。
検査のための重要な臨床的パラメータである。α−アミ
ラーゼ測定のための慣用方法の場合には、基質として、
３〜８個の１，４−α−結合グルコース単位から成り、
還元性末端の１位では測定可能の基で誘導されかつ他の
末端の６位および場合によつて４位では保護基によつて
誘導されているオリゴグルコシドが使用される。
EP第１３５７５８号明細書にはこのような基質が記載さ
れており、還元性末端の１位では例えばニトロフエニル
基のような測定可能の基で誘導されており、他の末端の
４および６位では保護基によつて誘導されている。保護
基としては、例えば直鎖または枝分れアルキル基または
アルコイル基、フエニル基またはエチリデン架橋が適当
である。
れており、還元性末端の１位では例えばニトロフエニル
基のような測定可能の基で誘導されており、他の末端の
４および６位では保護基によつて誘導されている。保護
基としては、例えば直鎖または枝分れアルキル基または
アルコイル基、フエニル基またはエチリデン架橋が適当
である。
このような基質を用いてα−アミラーゼ測定を酵素的呈
色試験として実施することは、４，６−エチリデン−ｐ
−ニトロフエニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（Et−
Ｇ7−PNP）なる基質に関しては、Fresenius Z. Anal.Ch
em.３２４（１９８６）、３０３〜３０５に記載されて
いる。この場合には測定は次の試験原理（単純化してあ
る）に従つて行われる： （Et＝エチリデン、Ｇ＝グルコース、PNP＝ｐ−ニトロ
フエノール） 前記基質の利点は特に、測定可能の基を遊離するために
使用される補酵素、例えばα−グルコシダーゼまたはβ
−グルコシダーゼが、すでにα−アミラーゼによつて分
解された基質のみに作用するが、未分解基質には作用し
ないことである。
色試験として実施することは、４，６−エチリデン−ｐ
−ニトロフエニル−α−Ｄ−マルトヘプタオシド（Et−
Ｇ7−PNP）なる基質に関しては、Fresenius Z. Anal.Ch
em.３２４（１９８６）、３０３〜３０５に記載されて
いる。この場合には測定は次の試験原理（単純化してあ
る）に従つて行われる： （Et＝エチリデン、Ｇ＝グルコース、PNP＝ｐ−ニトロ
フエノール） 前記基質の利点は特に、測定可能の基を遊離するために
使用される補酵素、例えばα−グルコシダーゼまたはβ
−グルコシダーゼが、すでにα−アミラーゼによつて分
解された基質のみに作用するが、未分解基質には作用し
ないことである。
従つて保護された基質を用いると、未保護基質と比べて
試薬混合物の貯蔵能力が改善される。
試薬混合物の貯蔵能力が改善される。
しかし、特にα−アミラーゼの小さい活性を測定する場
合に精度を高めるためには、測光的試験で公知基質を用
いて得られる感度よりもさらに高い感度を有するα−ア
ミラーゼ基質を得るのが望ましい。ここで感度とは、単
位時間当りの吸光度の増分（ΔＥ／min）に対するα−
アミラーゼ活性の割合の謂である。つまり感度の増大
は、試料のα−アミラーゼ活性が同じでもΔＥ／minが
より大きくなることを意味する。
合に精度を高めるためには、測光的試験で公知基質を用
いて得られる感度よりもさらに高い感度を有するα−ア
ミラーゼ基質を得るのが望ましい。ここで感度とは、単
位時間当りの吸光度の増分（ΔＥ／min）に対するα−
アミラーゼ活性の割合の謂である。つまり感度の増大
は、試料のα−アミラーゼ活性が同じでもΔＥ／minが
より大きくなることを意味する。
また特開昭６０−２３７９９８号明細書には、非反応性
末端で変性されたα−および／またはβ−フェニルマル
トオリゴシドを用いるα−アミラーゼ活性の測定方法が
記載されている。この場合該マルトオリゴシドは、グル
コース単位３〜５個から成り、末端グルコース基のＣ６
位にＲ１＝Ｘ−Ｒ３（Ｘ＝ＯＯＣ、Ｒ３＝フェニル又は
ピリジル）を有する。
末端で変性されたα−および／またはβ−フェニルマル
トオリゴシドを用いるα−アミラーゼ活性の測定方法が
記載されている。この場合該マルトオリゴシドは、グル
コース単位３〜５個から成り、末端グルコース基のＣ６
位にＲ１＝Ｘ−Ｒ３（Ｘ＝ＯＯＣ、Ｒ３＝フェニル又は
ピリジル）を有する。
発明が解決しようとする問題点 従つて本発明の課題は、貯蔵可能であつて、感度の改善
されたα−アミラーゼ基質を提供することである。
されたα−アミラーゼ基質を提供することである。
問題点を解決するための手段 前記課題は、本発明により一般式Ｉ： 〔式中Ｒ１は水素原子、メチル基、エチル基、プロピル
基、イソプロピル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、１−ア
ルコキシアルキル基または未置換のまたは親水的に置換
されたシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペン
チル基、シクロヘキシル基、テトラヒドロピラニル基、
ピペリジニル基（未置換かまたはＮ−メチルまたはエチ
ル置換されている）、チオフエニル基、１，１−ジオキ
ソ−テトラヒドロチオピラニル基または場合によりメチ
ル基、エチル基、プロピル基またはイソプロピル基から
の同じまたは異なる置換基を有するアミノ基を表わし；
Ｒ２は２，３または４個のグルコース単位を有するオリ
ゴグルコシド基を表わし；Ｘは水素原子または光学的に
測定可能の基を表わす〕で示される化合物によつて解決
される。
基、イソプロピル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、１−ア
ルコキシアルキル基または未置換のまたは親水的に置換
されたシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペン
チル基、シクロヘキシル基、テトラヒドロピラニル基、
ピペリジニル基（未置換かまたはＮ−メチルまたはエチ
ル置換されている）、チオフエニル基、１，１−ジオキ
ソ−テトラヒドロチオピラニル基または場合によりメチ
ル基、エチル基、プロピル基またはイソプロピル基から
の同じまたは異なる置換基を有するアミノ基を表わし；
Ｒ２は２，３または４個のグルコース単位を有するオリ
ゴグルコシド基を表わし；Ｘは水素原子または光学的に
測定可能の基を表わす〕で示される化合物によつて解決
される。
意外にも、末端のＣ６−ヒドロキシ基に対する上記の保
護基を有する本発明による基質が、公知基質よりも明ら
かにより感受性があり、従つてα−アミラーゼ測定の精
度が著しく改善されうることが判明した。
護基を有する本発明による基質が、公知基質よりも明ら
かにより感受性があり、従つてα−アミラーゼ測定の精
度が著しく改善されうることが判明した。
Ｒ１としては、メチル基、イソプロピル基または場合に
より親水的に置換されたシクロプロピル基が有利であ
る。特にイソプロピル基およびシクロプロピル基が有利
である。Ｒ２としては４個のグルコース単位を有するオ
リゴグルコシド基が有利である。
より親水的に置換されたシクロプロピル基が有利であ
る。特にイソプロピル基およびシクロプロピル基が有利
である。Ｒ２としては４個のグルコース単位を有するオ
リゴグルコシド基が有利である。
親水性置換基としては、例えばカルボキシ基、ヒドロキ
シ基、スルホン酸基、ジメチルアミノ基、燐酸基、ハロ
ゲン基および／またはニトロ基が適当である。
シ基、スルホン酸基、ジメチルアミノ基、燐酸基、ハロ
ゲン基および／またはニトロ基が適当である。
該基質の還元性末端の１位における光学的測定可能基
は、α−配置またはβ−配置で結合されていてもよい。
は、α−配置またはβ−配置で結合されていてもよい。
Ｘが光学的に測定可能の基である場合には、これは可視
範囲または紫外範囲でも呈色する基、または別の化合物
との反応後に、例えば着色物質に変化するかまたは着色
物質と結合して初めて光学的に測定可能になる基であつ
てもよい。このような光学的に測定可能な基は当業者に
は周知であり、ここでさらに詳述する必要はない。有利
にはニトロ基を有し、場合により塩素化されたフエニル
基、すなわちニトロフエニル基、３，４−ジ−ニトロフ
エニル基または２−クロロ−４−ニトロフエニル基およ
びレゾルフイン基およびそれらの誘導基である。
範囲または紫外範囲でも呈色する基、または別の化合物
との反応後に、例えば着色物質に変化するかまたは着色
物質と結合して初めて光学的に測定可能になる基であつ
てもよい。このような光学的に測定可能な基は当業者に
は周知であり、ここでさらに詳述する必要はない。有利
にはニトロ基を有し、場合により塩素化されたフエニル
基、すなわちニトロフエニル基、３，４−ジ−ニトロフ
エニル基または２−クロロ−４−ニトロフエニル基およ
びレゾルフイン基およびそれらの誘導基である。
本発明による化合物および対照化合物の製造は例えばEP
第１３５７５８号明細書に記載された方法と同様にして
行われる。また未保護基質中に、活性化カルボン酸基に
より、例えば相応のオルトエステル、酸塩化物、無水物
により、活性化エステルから酵素的に〔JACS１１０（１
９８８）、５８４〜５８９）、アセタールからまたは直
接カルボン酸から脱水剤により、例えばミツノブ（Mits
unobu）反応〔Postervon S.Czernecki auf dem XIVth I
nternational Carbohydrate Symposium（１９８８）、S
tockholm；Synthesis１９８１、Ｓ．１−２８〕によつ
て所望の保護基を導入してもよい。特に中間生成物とし
て相応のオルトエステルを介する製造およびミツノブ反
応による製造が有利である。オルトエスエルは有利には
相応のニトリルから製造される〔例えばHouben-Weyl、Ba
nd V1／３（１９６５）３００−３１３〕ニトリルは例
えば相応のカルボン酸から製造することができる。保護
された基質の精製は例えばクロマトグラフイーやイオン
交換体またはMPLCにより行うことができる。
第１３５７５８号明細書に記載された方法と同様にして
行われる。また未保護基質中に、活性化カルボン酸基に
より、例えば相応のオルトエステル、酸塩化物、無水物
により、活性化エステルから酵素的に〔JACS１１０（１
９８８）、５８４〜５８９）、アセタールからまたは直
接カルボン酸から脱水剤により、例えばミツノブ（Mits
unobu）反応〔Postervon S.Czernecki auf dem XIVth I
nternational Carbohydrate Symposium（１９８８）、S
tockholm；Synthesis１９８１、Ｓ．１−２８〕によつ
て所望の保護基を導入してもよい。特に中間生成物とし
て相応のオルトエステルを介する製造およびミツノブ反
応による製造が有利である。オルトエスエルは有利には
相応のニトリルから製造される〔例えばHouben-Weyl、Ba
nd V1／３（１９６５）３００−３１３〕ニトリルは例
えば相応のカルボン酸から製造することができる。保護
された基質の精製は例えばクロマトグラフイーやイオン
交換体またはMPLCにより行うことができる。
一般式Ｉの化合物は、一般式II： 〔式中Ｒは２、３または４個のグルコース単位を有する
オリゴグルコシドを表し、Ｙは水素原子または光学的測
定可能の基を表わす〕で示される化合物を、一般式II
I： 〔式中でＲ３は水素原子、メチル基、エチル基、プロピ
ル基、イソプロピル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、１−
アルコキシアルキル基または未置換のまたは親水的に置
換されたシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペ
ンチル基、シクロヘキシル基、フエニル基、テトラヒド
ロピラニル基、ピペリジニル基（未置換かまたはＮ−メ
チルまたはエチル置換されている）、ピリジニル基、チ
オフエニル基、１，１−ジオキソ−テトラヒドロチオピ
ラニル基または未置換のまたはメチル基、エチル基、プ
ロピル基またはイソプロピル基からの同じかまたは異な
る基で置換されているアミノ基を表わし、 Ｒ４は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ジメチルまたは
ジエチル置換アミノ基を表わし、 Ｒ５およびＲ６（同じかまたは異なつていてもよい）は
炭素原子１〜４個を有するアルコキシ基または一緒に酸
素原子を表わす〕で示されるカルボン酸、そのエステル
（場合によりさらに活性化されていてもよい）、オルト
エステル、アセタールまたはケタールと、水分排除下の
無水溶剤および酸触媒中でまたは脱水剤の存在で反応さ
せ、場合により加水分解させ、生成混合物を次に例えば
クロマトグラフイー法により分離することによつて製造
されうる。反応は有利には２０〜５０℃で実施する。
オリゴグルコシドを表し、Ｙは水素原子または光学的測
定可能の基を表わす〕で示される化合物を、一般式II
I： 〔式中でＲ３は水素原子、メチル基、エチル基、プロピ
ル基、イソプロピル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、１−
アルコキシアルキル基または未置換のまたは親水的に置
換されたシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペ
ンチル基、シクロヘキシル基、フエニル基、テトラヒド
ロピラニル基、ピペリジニル基（未置換かまたはＮ−メ
チルまたはエチル置換されている）、ピリジニル基、チ
オフエニル基、１，１−ジオキソ−テトラヒドロチオピ
ラニル基または未置換のまたはメチル基、エチル基、プ
ロピル基またはイソプロピル基からの同じかまたは異な
る基で置換されているアミノ基を表わし、 Ｒ４は、ヒドロキシ基、アルコキシ基、ジメチルまたは
ジエチル置換アミノ基を表わし、 Ｒ５およびＲ６（同じかまたは異なつていてもよい）は
炭素原子１〜４個を有するアルコキシ基または一緒に酸
素原子を表わす〕で示されるカルボン酸、そのエステル
（場合によりさらに活性化されていてもよい）、オルト
エステル、アセタールまたはケタールと、水分排除下の
無水溶剤および酸触媒中でまたは脱水剤の存在で反応さ
せ、場合により加水分解させ、生成混合物を次に例えば
クロマトグラフイー法により分離することによつて製造
されうる。反応は有利には２０〜５０℃で実施する。
このようにして例えば、Ｒ１がメチル基、イソプロピル
基または親水的に置換されたシクロプロピル基を表わ
し、 Ｒ２が４個のグルコース単位を有するオリゴグルコシド
を表わし、Ｘがレゾルフイン基またはｐ−ニトロフエニ
ル基を表わす一般式Ｉの化合物は、一般式IIにおいてＲ
およびＹがＲ２およびＸと同様のものを表わす化合物
を、一般式IIIにおいてＲ３がメチル基、イソプロピル
基または親水的に置換されたシクロプロピル基を表わ
し、Ｒ４はメトキシ基またはエトキシ基を表わし、Ｒ５
およびＲ６は両方ともメトキシ基かまたはエトキシ基を
表わす一般式IIIのオルトエステルの少なくとも４倍の
当量と一緒に無水溶剤中で溶かし、水分排除下にｐ−ト
ルオールスルホン酸１molを導入攪拌する場合に得られ
る。
基または親水的に置換されたシクロプロピル基を表わ
し、 Ｒ２が４個のグルコース単位を有するオリゴグルコシド
を表わし、Ｘがレゾルフイン基またはｐ−ニトロフエニ
ル基を表わす一般式Ｉの化合物は、一般式IIにおいてＲ
およびＹがＲ２およびＸと同様のものを表わす化合物
を、一般式IIIにおいてＲ３がメチル基、イソプロピル
基または親水的に置換されたシクロプロピル基を表わ
し、Ｒ４はメトキシ基またはエトキシ基を表わし、Ｒ５
およびＲ６は両方ともメトキシ基かまたはエトキシ基を
表わす一般式IIIのオルトエステルの少なくとも４倍の
当量と一緒に無水溶剤中で溶かし、水分排除下にｐ−ト
ルオールスルホン酸１molを導入攪拌する場合に得られ
る。
同様にしてまた、アセタールの相応の量および一般式II
の化合物を用いて、相応の４，６−エチリデン−レゾル
フイニル−β−Ｄ−もしくは４，６−エチリデン−ｐ−
ニトロフエニル−α−Ｄ−マルテペンタオシドも得られ
る。またｐ−トリオールスルホン酸の代りに酸触媒とし
て他の有機酸および鉱酸および／またはリユイス酸を使
用してもよい。
の化合物を用いて、相応の４，６−エチリデン−レゾル
フイニル−β−Ｄ−もしくは４，６−エチリデン−ｐ−
ニトロフエニル−α−Ｄ−マルテペンタオシドも得られ
る。またｐ−トリオールスルホン酸の代りに酸触媒とし
て他の有機酸および鉱酸および／またはリユイス酸を使
用してもよい。
同様にして本発明による化合物を、一般式IIIにおいて
例えばＲ３がメチル基、イソプロピル基または親水的に
置換されたシクロプロピルを表わし、Ｒ４はヒドロキシ
基またはアルコキシ基を表わし、Ｒ５およびＲ６が一緒
に酸素原子を表わす一般式IIIのカルボン酸および一般
式IIの化合物から製造するのが有利であり、これらの化
合物を水分排除下に１種以上の脱水剤の存在で反応させ
る。脱水剤としては例えばトリフエニルホスフインおよ
び／またはジエチルアゾジカルボキシレートおよび／ま
たは同様に使用可能の化合物を使用することができる。
例えばＲ３がメチル基、イソプロピル基または親水的に
置換されたシクロプロピルを表わし、Ｒ４はヒドロキシ
基またはアルコキシ基を表わし、Ｒ５およびＲ６が一緒
に酸素原子を表わす一般式IIIのカルボン酸および一般
式IIの化合物から製造するのが有利であり、これらの化
合物を水分排除下に１種以上の脱水剤の存在で反応させ
る。脱水剤としては例えばトリフエニルホスフインおよ
び／またはジエチルアゾジカルボキシレートおよび／ま
たは同様に使用可能の化合物を使用することができる。
Ｒ１およびＲ３の定義における“アルコキシアルキル”
とは、アルキル基に結合されたアルコキシ基を意味し、
それぞれ炭素原子１〜６個、有利には１〜４個を有す
る。
とは、アルキル基に結合されたアルコキシ基を意味し、
それぞれ炭素原子１〜６個、有利には１〜４個を有す
る。
Ｒ４の定義における“アルコキシ基”は、炭素原子１〜
１０個、有利には１〜６個および場合によつては１個以
上のヘテロ原子、特に窒素および塩素を有しかつ直鎖、
枝分れまたは環として存在していてもよい。
１０個、有利には１〜６個および場合によつては１個以
上のヘテロ原子、特に窒素および塩素を有しかつ直鎖、
枝分れまたは環として存在していてもよい。
また本発明による化合物の製造は、それぞれのグルコシ
ド（マリトトリオシド、マルトテトラオシド、マルトペ
ンタオシド）を無水酢酸または塩化アセチルで過アセチ
ル化し〔Chem.Ber.１３（１８８０）〕、１位のアセト
キシ基を加水分解して〔Chem.Ber.８６（１９５３）６
０４〕水酸化物または臭化物を形成させることによつて
行つてもよい。
ド（マリトトリオシド、マルトテトラオシド、マルトペ
ンタオシド）を無水酢酸または塩化アセチルで過アセチ
ル化し〔Chem.Ber.１３（１８８０）〕、１位のアセト
キシ基を加水分解して〔Chem.Ber.８６（１９５３）６
０４〕水酸化物または臭化物を形成させることによつて
行つてもよい。
次に遊離着色物質がクロルアセトイミダート（Chlorace
timidat）法〔Synthesia（１９８１）８８５〜８８７〕
またはケーニツクス−クノル（Konigs-Knorr）法〔Ｊ．
Am.Chem.Soc.５１（１９２９）１８３０、Angew.Chemie
９４（１９８２）１８４〕によりグルコシドに結合され
る。この結合は、それぞれの過アセチル化化合物をリユ
イス酸触媒下にフエノール性色素原と反応させて直接行
うこともできる（特開昭６２−２８９５９５号公報）。
着色物質の結合後に脱アセチル化され、保護基が相応の
オルトエステルにより酵素的にまたは活性化カルボン酸
誘導体、すなわち活性エステル、酸塩化物または無水物
により末端の６位に結合される〔Tetrahedron Letters
２８（１９８７）３８０９〜３８１２、Ｊ．Am.Chem.So
c.１０８（１９８６）５６３８〕。対照化合物も同様に
製造することができる。
timidat）法〔Synthesia（１９８１）８８５〜８８７〕
またはケーニツクス−クノル（Konigs-Knorr）法〔Ｊ．
Am.Chem.Soc.５１（１９２９）１８３０、Angew.Chemie
９４（１９８２）１８４〕によりグルコシドに結合され
る。この結合は、それぞれの過アセチル化化合物をリユ
イス酸触媒下にフエノール性色素原と反応させて直接行
うこともできる（特開昭６２−２８９５９５号公報）。
着色物質の結合後に脱アセチル化され、保護基が相応の
オルトエステルにより酵素的にまたは活性化カルボン酸
誘導体、すなわち活性エステル、酸塩化物または無水物
により末端の６位に結合される〔Tetrahedron Letters
２８（１９８７）３８０９〜３８１２、Ｊ．Am.Chem.So
c.１０８（１９８６）５６３８〕。対照化合物も同様に
製造することができる。
本発明の他の対象は、試料をオリゴサツカリド基質、α
−グルコシダーゼおよび／またはβ−グルコシダーゼと
混合し、生じた分解生成物を測定することによつて試料
中のα−アミラーゼを測定する方法であつて、その特徴
とするところはオリゴグルコシド基質として一般式Ｉ： で示される化合物を使用することである。
−グルコシダーゼおよび／またはβ−グルコシダーゼと
混合し、生じた分解生成物を測定することによつて試料
中のα−アミラーゼを測定する方法であつて、その特徴
とするところはオリゴグルコシド基質として一般式Ｉ： で示される化合物を使用することである。
Ｘ＝Ｈである限り、分解生成物の測定は当業者に周知の
方法（例えばDE第２７４１１９２号明細書に記載）で行
うことができる。Ｘが光学的に測定可能の基である場合
の分解生成物の測定も同様に当業者にとつて周知であ
り、例えばEP第１３５７５８号明細書に記載されてい
る。他の実施態様ではさらにグルコアミラーゼも加え
る。例えばヨーロッパ特許出願第０１７１９６０号明細
書には、α−アミラーゼ基質にグルコアミラーゼのよう
な補酵素を加えることが記載されている。
方法（例えばDE第２７４１１９２号明細書に記載）で行
うことができる。Ｘが光学的に測定可能の基である場合
の分解生成物の測定も同様に当業者にとつて周知であ
り、例えばEP第１３５７５８号明細書に記載されてい
る。他の実施態様ではさらにグルコアミラーゼも加え
る。例えばヨーロッパ特許出願第０１７１９６０号明細
書には、α−アミラーゼ基質にグルコアミラーゼのよう
な補酵素を加えることが記載されている。
また本発明の他の対象は、 本発明による一般式Ｉの化合物 0.5〜２ｍ mol／ ＮａＣ ３０〜１００ｍmol／ α−グルコシダーゼ ２０〜５０Ｕ／および／または β−グルコシダーゼ 0.5〜２Ｕ／ から成るα−アミアーゼ測定用試薬である。
測定は通常、pH６〜８、有利には6.5〜7.5で、濃度２０
〜２００ｍ mol／、有利には５０〜１５０ｍ mol／
の緩衝剤、有利にはゴード（GOOD）緩衝剤中で行う。
場合によつてはグルコアミラーゼ５〜２０Ｕ／ｍを加
えてもよい。有利には測定はＭｇＣ２５〜２０ｍ mo
l／の存在で行う。
〜２００ｍ mol／、有利には５０〜１５０ｍ mol／
の緩衝剤、有利にはゴード（GOOD）緩衝剤中で行う。
場合によつてはグルコアミラーゼ５〜２０Ｕ／ｍを加
えてもよい。有利には測定はＭｇＣ２５〜２０ｍ mo
l／の存在で行う。
本発明を次の実施例により詳述する。
例 １ ペルアセチル−β−マルトペンタオシド マルトペンタオース１００ｇ（0.12mol）および無水酢
酸ナトリウム８１．８ｇ（1.0mol）を、無水酢酸1.1
（11.7mol）中で懸濁し、水分排除下に反応開始（約１
１０℃）まで徐々に加熱する。次に氷水を用いて、反応
が低下するまで冷却し、次にさらに１時間還流煮沸して
反応を完結させる。反応混合物を約７０℃に冷却して、
氷水４に注ぐ。６０分の攪拌後に上澄みを注出し、残
留物をＣＨ２Ｃ５００ｍ中に溶かす。H2O、飽和NaH
CO3溶液およびH2Oを用いて順々にＣＨ２Ｃ２相に振出
を施し、Na2SO4を介して脱水する。真空で溶剤を留去し
た後、残留物を活性炭添加下にエタノール−イソプロパ
ノール（１：１）1.5から再結晶させる。
酸ナトリウム８１．８ｇ（1.0mol）を、無水酢酸1.1
（11.7mol）中で懸濁し、水分排除下に反応開始（約１
１０℃）まで徐々に加熱する。次に氷水を用いて、反応
が低下するまで冷却し、次にさらに１時間還流煮沸して
反応を完結させる。反応混合物を約７０℃に冷却して、
氷水４に注ぐ。６０分の攪拌後に上澄みを注出し、残
留物をＣＨ２Ｃ５００ｍ中に溶かす。H2O、飽和NaH
CO3溶液およびH2Oを用いて順々にＣＨ２Ｃ２相に振出
を施し、Na2SO4を介して脱水する。真空で溶剤を留去し
た後、残留物を活性炭添加下にエタノール−イソプロパ
ノール（１：１）1.5から再結晶させる。
収量：無色結晶166.2ｇ（理論値の89.8％） 融点：１２０〜１２５℃：▲α20 D▼＝＋123.5° DC（薄層クロマトグラフイー）：珪酸ゲル ６０−プレートＦ254（Merk社） トルオール／アセトン（７／４） rf＝0.521 H-NMR(DMSO-d6)： 1.8-2.2（ｓ、51Ｈ、CH3CO）； 3.8-5.5（ｍ、35Ｈ、Ｈ−１−Ｈ−６） 文献： Herzfeld、Chem.Ber.１３（１８８０）、２６７ 次のペルアセチル−β−Ｄ−マルトオリゴサツカリドを
上記のようにして合成する。この際マルトペントースの
代りに同量のマルトース、マルトトリオース、マルトテ
トラオース、マルトヘキサオースおよびマルトヘプタオ
ースを使用した。
上記のようにして合成する。この際マルトペントースの
代りに同量のマルトース、マルトトリオース、マルトテ
トラオース、マルトヘキサオースおよびマルトヘプタオ
ースを使用した。
例 ２ ヒドロキシ−α−Ｄ−ペルアセチルマルトペンタオシド ペルアセチル−β−Ｄ−マルトペンタオシド１５０ｇ
（0.096mol）を無水テトラヒドロフラン２００ｍ中に
溶かす。このものに攪拌下にベンジルアミン３３ｍ
（0.3mol）を加え、室温で２時間水分排除下に攪拌す
る。次に真空で乾固するまで蒸発し、残留物をＣＨ２Ｃ
２４００ｍに溶かし、ＣＨ２Ｃ２相を５mol／
ＨＣ、H2O、飽和NaHCO3溶液およびH2Oのそれぞれ４０
０ｍで順々に洗浄する。次に有機相をNa2SO4を介して
脱水し、活性炭と共に還流下に加熱煮沸する。活性炭を
濾取した後、濾液を真空で蒸発乾固する。生成物は、さ
らに精製することなく次の段階のために使用することが
できる。
（0.096mol）を無水テトラヒドロフラン２００ｍ中に
溶かす。このものに攪拌下にベンジルアミン３３ｍ
（0.3mol）を加え、室温で２時間水分排除下に攪拌す
る。次に真空で乾固するまで蒸発し、残留物をＣＨ２Ｃ
２４００ｍに溶かし、ＣＨ２Ｃ２相を５mol／
ＨＣ、H2O、飽和NaHCO3溶液およびH2Oのそれぞれ４０
０ｍで順々に洗浄する。次に有機相をNa2SO4を介して
脱水し、活性炭と共に還流下に加熱煮沸する。活性炭を
濾取した後、濾液を真空で蒸発乾固する。生成物は、さ
らに精製することなく次の段階のために使用することが
できる。
収量：１４０ｇ（理論値の９７％） DC：珪酸ゲル６０Ｆ254（Merck社） トルオール／アセトン（７／４） rf＝0.421 H-NMR(DMSO-d6)： 1.8-2.2（ｓ、48Ｈ CH3CO） 3.8-5.5（ｍ、35Ｈ、Ｈ−１−Ｈ−６） 5.7（ｓ、１Ｈ、OH） 文献： Helferich、Ｂ．；Portz、Ｗ．；Chem.Ber.８６、（１
９５３）、６０４。
９５３）、６０４。
この規定により次のマルトオリゴサツカリドを合成し
た： 例 ３ ペルアセチル−マルトペンタオシル−α−Ｄ−トリクロ
ルアセチミデート ヒドロキシ−α−Ｄ−ペルアセチル−マルトペンタオシ
ド５ｇ（0.05mol）およびトリクロルアセトニトリル２
５ｍ（0.25mol）を、無水ＣＨ２Ｃ２１５０ｍ中
に溶かす。溶液を０℃に冷却し、攪拌下に水素化ナトリ
ウム1.5ｇ（0.055mol）を少しづつ加え、次に室温で２
時間水分排除下に攪拌する。過剰の水素化ナトリウムを
ガラスフリツトを介して分離し、濾液を珪酸ゲルカラム
（６０Merk約２００ｍ、φ６cm）により濾過し、次い
で酢酸エステル２で洗浄する。濾液を活性炭と共に還
流下に加熱煮沸し、活性炭を濾取し、濾液を真空で蒸発
乾固する。
た： 例 ３ ペルアセチル−マルトペンタオシル−α−Ｄ−トリクロ
ルアセチミデート ヒドロキシ−α−Ｄ−ペルアセチル−マルトペンタオシ
ド５ｇ（0.05mol）およびトリクロルアセトニトリル２
５ｍ（0.25mol）を、無水ＣＨ２Ｃ２１５０ｍ中
に溶かす。溶液を０℃に冷却し、攪拌下に水素化ナトリ
ウム1.5ｇ（0.055mol）を少しづつ加え、次に室温で２
時間水分排除下に攪拌する。過剰の水素化ナトリウムを
ガラスフリツトを介して分離し、濾液を珪酸ゲルカラム
（６０Merk約２００ｍ、φ６cm）により濾過し、次い
で酢酸エステル２で洗浄する。濾液を活性炭と共に還
流下に加熱煮沸し、活性炭を濾取し、濾液を真空で蒸発
乾固する。
収量：発泡状の無色生成物７２ｇ（理論値の87.5％）、 DC：珪酸ゲル６０Ｆ254（Merck社） トリオール／アセトン（７／４） rf＝0.581 H-NMR(DMSO-d6)： 1.8-2.2（ｓ、48Ｈ、CH3CO） 3.8-5.5（ｍ、35Ｈ、Ｈ−１−Ｈ−６） 6.3（ｓ、１Ｈ、NH） 文献： Schmidt、Ｒ．、Stumrpp、Ｍ．、Liebigs、Ann.Chem.１
９８３、１２４９〜１２５６。
９８３、１２４９〜１２５６。
この規定によりペルアセチル−マルトトリオーストリク
ロルアセチミデートも製造した。
ロルアセチミデートも製造した。
収率：９３％ rf：0.45 例 ４ レゾルフイニル−β−Ｄ−マルトペンタオシド ペルアセチルマルトペンタオシル−α−Ｄ−トリクロル
アセチミデート７２ｇ（0.044mol）およびレゾルフイン
4.4ｇ（0.02mol）を無水DMF１中で懸濁する。BF3・OEt
触媒下に水分を排除して６０℃で８時間攪拌する。室温
に冷却後Ａ２Ｏ３（約５００ｍ）により濾過し、次
に酢酸エステル５で洗浄する。濾液を真空で蒸発乾固
し、残留物を無水MeOH１００ｍ中に溶かし、水分排除
下に室温で３時間、NaOCH3２ｇで脱アセチル化する。懸
濁液を真空で蒸発乾固し、残留物をH2O１００ｍ中に
取り、２mol／ ＨＣでpH＝６に調節し、ダイヤイ
オン（Diaion）カラム（約５００ｍ／０８cm）上に施
す。先づH2O４で溶離し、次に２０％イソプロパノー
ル溶液３で溶離する。溶離液を蒸発して約４０ｍと
なし、RP−１８−フラツシユカラム（φ＝４cm、ｈ＝３
９cm）により溶離剤としての１５％イソプロパノールを
５０ｍづつ用いてクロマトグラフイーを施す。レゾル
フイニル−マルトペンタオシドを含有するフラクシヨン
を一緒にし、真空で約２０ｍに蒸発濃縮し、RP−１８
−MPLCカラムにより溶離剤としての１５％イソプロパノ
ールを１０ｍづつ用いてクロマトグラフイーを施す。
生成物を含有するフラクシヨンを一緒にし、真空蒸発
し、次に凍結乾燥する。
アセチミデート７２ｇ（0.044mol）およびレゾルフイン
4.4ｇ（0.02mol）を無水DMF１中で懸濁する。BF3・OEt
触媒下に水分を排除して６０℃で８時間攪拌する。室温
に冷却後Ａ２Ｏ３（約５００ｍ）により濾過し、次
に酢酸エステル５で洗浄する。濾液を真空で蒸発乾固
し、残留物を無水MeOH１００ｍ中に溶かし、水分排除
下に室温で３時間、NaOCH3２ｇで脱アセチル化する。懸
濁液を真空で蒸発乾固し、残留物をH2O１００ｍ中に
取り、２mol／ ＨＣでpH＝６に調節し、ダイヤイ
オン（Diaion）カラム（約５００ｍ／０８cm）上に施
す。先づH2O４で溶離し、次に２０％イソプロパノー
ル溶液３で溶離する。溶離液を蒸発して約４０ｍと
なし、RP−１８−フラツシユカラム（φ＝４cm、ｈ＝３
９cm）により溶離剤としての１５％イソプロパノールを
５０ｍづつ用いてクロマトグラフイーを施す。レゾル
フイニル−マルトペンタオシドを含有するフラクシヨン
を一緒にし、真空で約２０ｍに蒸発濃縮し、RP−１８
−MPLCカラムにより溶離剤としての１５％イソプロパノ
ールを１０ｍづつ用いてクロマトグラフイーを施す。
生成物を含有するフラクシヨンを一緒にし、真空蒸発
し、次に凍結乾燥する。
収量：凍結乾燥物2.8ｇ（理論値の１４％） HPLC：RP−１８−カラム、１ｍ／min、１７％ イソプロパノール、rt＝2.95min レゾルフイン−Ｇ５の含分：９７％1 H-NMR(DMSO-d6)： 3.0-6.0（ｍ、51Ｈ、OH、Ｈ−１−Ｈ−６）； 6.2-8.0（ｍ、６Ｈ、ArH） 文献： Schmidt、Ｒ．；Grundler、Ｇ．；Synthesis１９８１、
８８５〜８８７ 例 ５ ケーニツクス−クノル（Koenigs-Knorr）法によるレゾ
ルフイニル−β−Ｄ−マルトオリゴサツカリドの製造 １．アセトブロム−α−Ｄ−マルトオリゴサツカリド： 過アセチル化糖２５ｍ molを氷酢酸５０ｍ中に溶か
す。これに氷酢酸中のHBr（３０％）５０ｍを加え、
室温で水分排除下で攪拌する。次にＣＨ２Ｃ２３００
ｍを加え、氷水１に注ぐ。有機相を分離し、次にH2
O、飽和NaHCO3溶液およびH2Oを用いて振出を施す。有機
相をNaSO4により脱水し、次に真空で蒸発乾固する。生
成物をさらに精製することなく次の反応で使用すること
ができる。
８８５〜８８７ 例 ５ ケーニツクス−クノル（Koenigs-Knorr）法によるレゾ
ルフイニル−β−Ｄ−マルトオリゴサツカリドの製造 １．アセトブロム−α−Ｄ−マルトオリゴサツカリド： 過アセチル化糖２５ｍ molを氷酢酸５０ｍ中に溶か
す。これに氷酢酸中のHBr（３０％）５０ｍを加え、
室温で水分排除下で攪拌する。次にＣＨ２Ｃ２３００
ｍを加え、氷水１に注ぐ。有機相を分離し、次にH2
O、飽和NaHCO3溶液およびH2Oを用いて振出を施す。有機
相をNaSO4により脱水し、次に真空で蒸発乾固する。生
成物をさらに精製することなく次の反応で使用すること
ができる。
文献： Brauns、Ｊ．Am.Chem.Soc.５１（１９２９）、１８３０ ２．レゾルフイニル−β−Ｄ−マルトオリゴサツカリド レゾルフイン５０ｍ molおよびAg2O２５ｍ molを、無
水CH3CN８００ｍ中でモレキユラーシーブ（３Å）と
共に懸濁し、水分排除下に４時間還流煮沸する。無水CH
3CN２００ｍ中のアセトブロム−α−Ｄ−マルトオリ
ゴサツカリド62.5ｍ molを加え、６時間還流煮沸す
る。さらに１８時間室温で攪拌し、活性炭１０ｇを加
え、短時間還流煮沸する。この混合物をＡ２Ｏ３（活
性段階III／Ｎ）１００ｇにより濾過し、次に酢酸エス
テル５で洗浄する。濾液を真空で蒸発乾固し、残留物
を無水エタノール１中に溶かし、水分排除下に室温で
１８時間NaOCH3５ｇと一緒に攪拌する。この懸濁液を真
空で蒸発乾固し、残留物をH2O２００ｍに溶かし、pH
７に調節し、ダイヤイオン−HP−２０ ５００ｍを充
填したカラム上に施す。H2O１５で洗浄し、１５％イ
ソプロパノール溶液１０を用いて溶離する。溶離液を
真空で蒸発して１００ｍとし、イミダート法によりMP
LCカラム（RP−１８）でイソプロパノール溶液を用いて
クロマトグラフイーにかけ、凍結乾燥する。
水CH3CN８００ｍ中でモレキユラーシーブ（３Å）と
共に懸濁し、水分排除下に４時間還流煮沸する。無水CH
3CN２００ｍ中のアセトブロム−α−Ｄ−マルトオリ
ゴサツカリド62.5ｍ molを加え、６時間還流煮沸す
る。さらに１８時間室温で攪拌し、活性炭１０ｇを加
え、短時間還流煮沸する。この混合物をＡ２Ｏ３（活
性段階III／Ｎ）１００ｇにより濾過し、次に酢酸エス
テル５で洗浄する。濾液を真空で蒸発乾固し、残留物
を無水エタノール１中に溶かし、水分排除下に室温で
１８時間NaOCH3５ｇと一緒に攪拌する。この懸濁液を真
空で蒸発乾固し、残留物をH2O２００ｍに溶かし、pH
７に調節し、ダイヤイオン−HP−２０ ５００ｍを充
填したカラム上に施す。H2O１５で洗浄し、１５％イ
ソプロパノール溶液１０を用いて溶離する。溶離液を
真空で蒸発して１００ｍとし、イミダート法によりMP
LCカラム（RP−１８）でイソプロパノール溶液を用いて
クロマトグラフイーにかけ、凍結乾燥する。
生成物を真空で蒸発乾固し、次にDMFに溶かし、H2Oで沈
殿させる。沈殿物を吸引し、真空で乾燥する。1 H-NMR(DMSO-d6)： マルトース：3.1-3.9（ｍ、11Ｈ、OH、Ｈ−６）； 4.4-5.7（ｍ、10Ｈ、Ｈ−１−Ｈ−５）； 6.2-8.0（ｍ、６Ｈ、ArH） マルトトリオース：3.0-5.9（ｍ、32Ｈ、OH、 Ｈ−１−Ｈ−６）； 6.2-8.0（ｍ、６Ｈ、ArH） 例 ６ 保護されたレゾルフイニル−β−Ｄ−およびｐ−ニトロ
フエニル−α−Ｄ−マルトオリゴサツカリドの合成 レゾルフイニル−もしくはｐ−ニトロフエニル−マルト
オリゴサツカリド１ｍ molおよびオルトエステルもし
くはアセタール４ｍ molを、無水DMF１０ｍ中でモレ
キユラーシーブ（３Å、新鮮、活性化）と一緒に水分排
除下に溶かす。これにｐ−トルオールスルホン酸１ｍ
molを攪拌下に加え、室温で４時間攪拌する。次にH2O２
０ｍを加え、１０分攪拌し、DEAE−セフアセル（Seph
acel）（▲CO2- 3▼）により濾過する。次に２０％イソ
プロパノールで洗浄し、濾液を真空で蒸発させて２０ｍ
となし、RP−１８−MPLC−カラムにより１８〜６０％
イソプロパノールを用いて画分的にクロマトグラフイー
を施す。生成物のフラクシヨンを一緒にし、真空で蒸発
させ、凍結乾燥する。レゾルフイニル−β−Ｄ−マルト
シドの保護された化合物の場合には、DMF/H2Oから生じ
る。その都度使用された化合物および生成物の物理的デ
ータは表Ｉから判明する。
殿させる。沈殿物を吸引し、真空で乾燥する。1 H-NMR(DMSO-d6)： マルトース：3.1-3.9（ｍ、11Ｈ、OH、Ｈ−６）； 4.4-5.7（ｍ、10Ｈ、Ｈ−１−Ｈ−５）； 6.2-8.0（ｍ、６Ｈ、ArH） マルトトリオース：3.0-5.9（ｍ、32Ｈ、OH、 Ｈ−１−Ｈ−６）； 6.2-8.0（ｍ、６Ｈ、ArH） 例 ６ 保護されたレゾルフイニル−β−Ｄ−およびｐ−ニトロ
フエニル−α−Ｄ−マルトオリゴサツカリドの合成 レゾルフイニル−もしくはｐ−ニトロフエニル−マルト
オリゴサツカリド１ｍ molおよびオルトエステルもし
くはアセタール４ｍ molを、無水DMF１０ｍ中でモレ
キユラーシーブ（３Å、新鮮、活性化）と一緒に水分排
除下に溶かす。これにｐ−トルオールスルホン酸１ｍ
molを攪拌下に加え、室温で４時間攪拌する。次にH2O２
０ｍを加え、１０分攪拌し、DEAE−セフアセル（Seph
acel）（▲CO2- 3▼）により濾過する。次に２０％イソ
プロパノールで洗浄し、濾液を真空で蒸発させて２０ｍ
となし、RP−１８−MPLC−カラムにより１８〜６０％
イソプロパノールを用いて画分的にクロマトグラフイー
を施す。生成物のフラクシヨンを一緒にし、真空で蒸発
させ、凍結乾燥する。レゾルフイニル−β−Ｄ−マルト
シドの保護された化合物の場合には、DMF/H2Oから生じ
る。その都度使用された化合物および生成物の物理的デ
ータは表Ｉから判明する。
例 ７ ミツノブ反応による末端基の保護されたマルトオリゴサ
ツカリドの合成 レゾルフイニル−マルトペンタオシド１ｍ molに、無
水DMF中でその都度のカルボン酸２ｍ mol、トリフエニ
ルホスフインおよびジエチルアゾジカルボキシレートを
加え、室温で１６時間水分排除下に攪拌する。次にH2O
２０ｍを加え、生じる沈殿物をザイツフイルター（Se
itz-Filter）により濾取する。濾液を真空で蒸発させて
約８ｍにし、RP−１８−MPLC−カラムにより１８％イ
ソプロパノールを用いてクロマトグラフイーにかける。
生成物のフラクシヨンを集めて、真空で蒸発させ、凍結
乾燥する。その都度の生成物はオルトエステル法（例
６）により製造された生成物と同一であり、同じ物理的
データ（表Ｉ）を示す。
ツカリドの合成 レゾルフイニル−マルトペンタオシド１ｍ molに、無
水DMF中でその都度のカルボン酸２ｍ mol、トリフエニ
ルホスフインおよびジエチルアゾジカルボキシレートを
加え、室温で１６時間水分排除下に攪拌する。次にH2O
２０ｍを加え、生じる沈殿物をザイツフイルター（Se
itz-Filter）により濾取する。濾液を真空で蒸発させて
約８ｍにし、RP−１８−MPLC−カラムにより１８％イ
ソプロパノールを用いてクロマトグラフイーにかける。
生成物のフラクシヨンを集めて、真空で蒸発させ、凍結
乾燥する。その都度の生成物はオルトエステル法（例
６）により製造された生成物と同一であり、同じ物理的
データ（表Ｉ）を示す。
例 ８ α−アミラーゼの測定 試薬（試験における最終濃度）： 基質（表II参照） １ｍ mol／ HEPES緩衝剤（pH7.1） 100ｍ mol／ ＮａＣ 50ｍ mol／ ＭｇＣ２ 10ｍ mol／ α−グルコシダーゼ 30Ｕ／ β−グルコシダーゼ １Ｕ／ 試薬１ｍおよびヒトの病的血清たる試料0.25ｍを混
合し、混合物を２５℃に調節する。４分の前恒温保持時
間（遅延期）後に578nmでの吸光度の増分を光度計で記
録し、毎分の吸光度の変化（ΔＥ／min）を測定する。
本発明による基質(1)、(2)、(4)および(6)と対照化合物の
結果が表IIから判る。
合し、混合物を２５℃に調節する。４分の前恒温保持時
間（遅延期）後に578nmでの吸光度の増分を光度計で記
録し、毎分の吸光度の変化（ΔＥ／min）を測定する。
本発明による基質(1)、(2)、(4)および(6)と対照化合物の
結果が表IIから判る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 エリ・ラウシヤー ドイツ連邦共和国ミユンヘン‐70・グアル デイニシユトラーセ 71 (56)参考文献 特開 昭60−54395（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−237998（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−83195（ＪＰ，Ａ)
Claims (7)
- 【請求項１】一般式Ｉ： ［式中Ｒ１は水素原子、メチル基、エチル基、プロピル
基、イソプロピル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、１−ア
ルコキシアルキル基、未置換のまたは親水的に置換され
たシクロプロピル基、シクロブチル基、シクロペンチル
基、シクロヘキシル基、テトラヒドロピラニル基、ピペ
リジニル基（未置換かまたはＮ−メチルまたはエチル置
換されている）、チオフェニル基、１，１−ジオキソ−
テトラヒドロチオピラニル基または未置換のまたはメチ
ル基、エチル基、プロピル基またはイソプロピル基から
の同じかまたは異なる置換基を有するアミノ基を表わ
し；Ｒ２は２，３または４個の１，４−α−結合グルコ
ース単位を有するオリゴグルコシド基を表わし；Ｘは水
素原子または相応の末端グルコース基のＣ１位置にα−
又はβ−配置で結合されていてもよい光学的に測定可能
の基を表わす］で示される化合物。 - 【請求項２】Ｘが未置換のまたは置換されたニトロフェ
ニル基またはレゾルフィン基を表わす請求項１記載の化
合物。 - 【請求項３】試料を、請求項１記載の一般式Ｉで示され
る化合物およびα−グルコシダーゼおよび／またはβ−
グルコシダーゼと混合し、生じた分解生成物を測定する
ことを特徴とするα−アミラーゼの測定方法。 - 【請求項４】グルコアミラーゼを加える請求項３記載の
方法。 - 【請求項５】請求項１記載の一般式Ｉで示される化合物 0.5〜２ｍ mol／ ＮａＣ ３０〜１００ｍ mol／ α−グルコシダーゼ ２０〜５０Ｕ／および／または β−グルコシダーゼ 0.5〜２Ｕ／ 緩衝剤（pH６〜８） ２０〜２００ｍ mol／ から成ることを特徴とするα−アミラーゼ測定用試薬。
- 【請求項６】グルコアミラーゼ５〜２０Ｕ／ｍを含有
する請求項５記載の試薬。 - 【請求項７】ＭｇＣ２５〜２０ｍ mol／を含有す
る請求項５または６記載の試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3743908.1 | 1987-12-23 | ||
| DE19873743908 DE3743908A1 (de) | 1987-12-23 | 1987-12-23 | Neue oligoglucoside |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02138291A JPH02138291A (ja) | 1990-05-28 |
| JPH0655753B2 true JPH0655753B2 (ja) | 1994-07-27 |
Family
ID=6343487
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63323815A Expired - Lifetime JPH0655753B2 (ja) | 1987-12-23 | 1988-12-23 | 新規オリゴグルコシド誘導体、α‐アミラーゼの測定方法および測定試薬 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5068182A (ja) |
| EP (1) | EP0321871B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0655753B2 (ja) |
| AT (1) | ATE91284T1 (ja) |
| AU (1) | AU603941B2 (ja) |
| DE (2) | DE3743908A1 (ja) |
| ES (1) | ES2058225T3 (ja) |
| NZ (1) | NZ227396A (ja) |
| ZA (1) | ZA889431B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP3023239U (ja) * | 1995-06-01 | 1996-04-16 | 俊彦 岡田 | 風呂またはトイレの掃除用具と芳香剤の組合せ |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3929355A1 (de) * | 1989-09-04 | 1991-03-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung von pankreas-(alpha)-amylase |
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