JPH05161498A - 非還元末端修飾フェニル化マルトテトラオース誘導体の製造法 - Google Patents
非還元末端修飾フェニル化マルトテトラオース誘導体の製造法Info
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- JPH05161498A JPH05161498A JP3350894A JP35089491A JPH05161498A JP H05161498 A JPH05161498 A JP H05161498A JP 3350894 A JP3350894 A JP 3350894A JP 35089491 A JP35089491 A JP 35089491A JP H05161498 A JPH05161498 A JP H05161498A
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 α−アミラーゼ活性測定用基質として有用な
一般式 【化１】 （式中、各記号は明細書に定義されている通りであ
る。）により表される非還元末端修飾フェニル化マルト
テトラオース誘導体を製造するに当たり、サイクロデキ
ストリングルカノトランスフェラーゼによる糖転位反応
を利用する方法。 【効果】 本発明の方法によれば、α−アミラーゼ活性
測定用基質として有用な非還元末端修飾フェニル化マル
トテトラオース誘導体をサイクロデキストリングルカノ
トランスフェラーゼによる糖転位反応により、効率よく
合成することができる。
一般式 【化１】 （式中、各記号は明細書に定義されている通りであ
る。）により表される非還元末端修飾フェニル化マルト
テトラオース誘導体を製造するに当たり、サイクロデキ
ストリングルカノトランスフェラーゼによる糖転位反応
を利用する方法。 【効果】 本発明の方法によれば、α−アミラーゼ活性
測定用基質として有用な非還元末端修飾フェニル化マル
トテトラオース誘導体をサイクロデキストリングルカノ
トランスフェラーゼによる糖転位反応により、効率よく
合成することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はα−アミラーゼ活性測定
用基質として有用な非還元末端修飾フェニル化マルトテ
トラオース誘導体の新規な製造法に関する。
用基質として有用な非還元末端修飾フェニル化マルトテ
トラオース誘導体の新規な製造法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】膵液
や尿などの体液に含有されるα−アミラーゼの活性を測
定することにより、各種疾患の診断が行われている。α
−アミラーゼの活性測定法には、たとえばマルトオリゴ
糖（マルトペンタオースやマルトテトラオース）を基質
とする方法がある。この方法ではα−アミラーゼ含有試
料に該マルトオリゴ糖とα−グルコシダーゼとを作用さ
せて、基質から遊離してきたグルコースの量を測定する
ことによりα−アミラーゼの活性を知ることができる。
また、マルトオリゴ糖の還元性末端にニトロフェノー
ル、ジクロロフェノール、クロロ−ニトロフェノール等
の色原体をアグリコンとして結合させた基質を用いる方
法も提案されている。これらの基質を用いると最終的に
は共存酵素の作用によりアグリコンが遊離し、遊離した
アグリコン、たとえばｐ−ニトロフェノールを光学的に
測定することにより、α−アミラーゼの活性を容易に測
定することができる。しかし、上記基質に対してもα−
グルコシダーゼがわずかながら作用するためブランク値
上昇を招くので、これらの基質とα−グルコシダーゼを
一液化して使用することは困難である。さらに、すぐれ
たα−アミラーゼ活性測定用の基質として、マルトオリ
ゴ糖の還元性末端にフェノール類をアグリコンとして結
合させ、かつ非還元性末端グルコースの水酸基を種々の
置換基でブロックした構造を持つ化合物が提案されてい
る。たとえば、特開平１−１５７９９６号公報には３−
ケトブチリデン２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−
マルトペンタオシドを基質として用いる方法が開示され
ている。
や尿などの体液に含有されるα−アミラーゼの活性を測
定することにより、各種疾患の診断が行われている。α
−アミラーゼの活性測定法には、たとえばマルトオリゴ
糖（マルトペンタオースやマルトテトラオース）を基質
とする方法がある。この方法ではα−アミラーゼ含有試
料に該マルトオリゴ糖とα−グルコシダーゼとを作用さ
せて、基質から遊離してきたグルコースの量を測定する
ことによりα−アミラーゼの活性を知ることができる。
また、マルトオリゴ糖の還元性末端にニトロフェノー
ル、ジクロロフェノール、クロロ−ニトロフェノール等
の色原体をアグリコンとして結合させた基質を用いる方
法も提案されている。これらの基質を用いると最終的に
は共存酵素の作用によりアグリコンが遊離し、遊離した
アグリコン、たとえばｐ−ニトロフェノールを光学的に
測定することにより、α−アミラーゼの活性を容易に測
定することができる。しかし、上記基質に対してもα−
グルコシダーゼがわずかながら作用するためブランク値
上昇を招くので、これらの基質とα−グルコシダーゼを
一液化して使用することは困難である。さらに、すぐれ
たα−アミラーゼ活性測定用の基質として、マルトオリ
ゴ糖の還元性末端にフェノール類をアグリコンとして結
合させ、かつ非還元性末端グルコースの水酸基を種々の
置換基でブロックした構造を持つ化合物が提案されてい
る。たとえば、特開平１−１５７９９６号公報には３−
ケトブチリデン２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−
マルトペンタオシドを基質として用いる方法が開示され
ている。
【０００３】しかし、市販の管理血清（たとえば、商品
名：ヒューミラーゼ・Ｈ）には唾液腺由来のα−アミラ
ーゼ（Ｓ−アミラーゼ）および膵臓由来のα−アミラー
ゼ（Ｐ−アミラーゼ）が約１：１の割合で存在してい
て、この３−ケトブチリデン２−クロロ−４−ニトロフ
ェニル−β−マルトペンタオシドに管理血清を作用させ
た場合、水解部位は２ケ所で２−クロロ−４−ニトロフ
ェニル基を有する生成物として２−クロロ−４−ニトロ
フェニル−β−マルトトリオシドおよび２−クロロ−４
−ニトロフェニル−β−マルトシドが約７：３の割合で
生成する。
名：ヒューミラーゼ・Ｈ）には唾液腺由来のα−アミラ
ーゼ（Ｓ−アミラーゼ）および膵臓由来のα−アミラー
ゼ（Ｐ−アミラーゼ）が約１：１の割合で存在してい
て、この３−ケトブチリデン２−クロロ−４−ニトロフ
ェニル−β−マルトペンタオシドに管理血清を作用させ
た場合、水解部位は２ケ所で２−クロロ−４−ニトロフ
ェニル基を有する生成物として２−クロロ−４−ニトロ
フェニル−β−マルトトリオシドおよび２−クロロ−４
−ニトロフェニル−β−マルトシドが約７：３の割合で
生成する。
【０００４】また、３−ケトブチリデン２−クロロ−４
−ニトロフェニル−β−マルトテトラオシドに管理血清
を作用させた場合、水解部位は１ケ所で２−クロロ−４
−ニトロフェニル基を有する生成物として２−クロロ−
４−ニトロフェニル−β−マルトシドのみが生成し、α
−グルコシダーゼなど追随酵素共存下に発色させる場
合、３−ケトブチリデン２−クロロ−４−ニトロフェニ
ル−β−マルトペンタオシドより、３−ケトブチリデン
２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトテトラオ
シドのほうがlag timeが短く、よい基質といえる。
−ニトロフェニル−β−マルトテトラオシドに管理血清
を作用させた場合、水解部位は１ケ所で２−クロロ−４
−ニトロフェニル基を有する生成物として２−クロロ−
４−ニトロフェニル−β−マルトシドのみが生成し、α
−グルコシダーゼなど追随酵素共存下に発色させる場
合、３−ケトブチリデン２−クロロ−４−ニトロフェニ
ル−β−マルトペンタオシドより、３−ケトブチリデン
２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトテトラオ
シドのほうがlag timeが短く、よい基質といえる。
【０００５】この３−ケトブチリデン２−クロロ−４−
ニトロフェニル−β−マルトテトラオシドなど非還元末
端修飾フェニル化マルトテトラオース誘導体の製造方法
は特開平１−１５７９９６号公報記載の３−ケトブチリ
デン２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトペン
タオシドの製造例と同様にフェニル−マルトテトラオシ
ドと１，１−ジメトキシ−３−ブタノンなどのアセター
ル化合物とのアセタール交換反応による方法が考えられ
るが、この方法は工業的製造方法として充分満足できる
ものとは言いがたい。すなわち、原料であるフェニルマ
ルトテトラオシドは通常、マルトテトラオースから出発
しアセチル化、グリコシド化、脱アセチル化等の多段階
の化学反応を経て合成されるが、収率は必ずしも定量的
ではなく、また各段階の反応物は飴状の物が多く、再結
晶などの簡単な操作に依っては精製しがたいものが多
い。また、アセタール化合物とのアセタール交換反応も
副反応が多く、しかも最終目的物をカラムクロマトによ
り単離する際に、保持時間が目的物と近似している副生
物が多く混在しているため、クロマト分離の効率が低い
という欠点がある。
ニトロフェニル−β−マルトテトラオシドなど非還元末
端修飾フェニル化マルトテトラオース誘導体の製造方法
は特開平１−１５７９９６号公報記載の３−ケトブチリ
デン２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−マルトペン
タオシドの製造例と同様にフェニル−マルトテトラオシ
ドと１，１−ジメトキシ−３−ブタノンなどのアセター
ル化合物とのアセタール交換反応による方法が考えられ
るが、この方法は工業的製造方法として充分満足できる
ものとは言いがたい。すなわち、原料であるフェニルマ
ルトテトラオシドは通常、マルトテトラオースから出発
しアセチル化、グリコシド化、脱アセチル化等の多段階
の化学反応を経て合成されるが、収率は必ずしも定量的
ではなく、また各段階の反応物は飴状の物が多く、再結
晶などの簡単な操作に依っては精製しがたいものが多
い。また、アセタール化合物とのアセタール交換反応も
副反応が多く、しかも最終目的物をカラムクロマトによ
り単離する際に、保持時間が目的物と近似している副生
物が多く混在しているため、クロマト分離の効率が低い
という欠点がある。
【０００６】また、近年、サイクロデキストリングルカ
ノトランスフェラーゼを利用して、非還元末端修飾フェ
ニル化マルトテトラオース誘導体の合成研究〔ジャーナ
ル・オブ・バイオケミストリー（J.Biochem.) 第９７
巻、第９７７頁、１９８２年；生化学、第６２巻
（７）、第７６１頁、１９９０年〕が行われている。
ノトランスフェラーゼを利用して、非還元末端修飾フェ
ニル化マルトテトラオース誘導体の合成研究〔ジャーナ
ル・オブ・バイオケミストリー（J.Biochem.) 第９７
巻、第９７７頁、１９８２年；生化学、第６２巻
（７）、第７６１頁、１９９０年〕が行われている。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、これらの
課題を解決する方法の１つとして酵素反応に着目し研究
を重ねた結果、非還元末端４，６位−修飾マルトテトラ
オースである供与体基質とフェノール骨格残基を有する
グルコシドである受容体基質とにサイクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼを作用させることにより効
率よく非還元末端修飾フェニル化マルトテトラオース誘
導体が製造できることを見出し、本発明を完成した。
課題を解決する方法の１つとして酵素反応に着目し研究
を重ねた結果、非還元末端４，６位−修飾マルトテトラ
オースである供与体基質とフェノール骨格残基を有する
グルコシドである受容体基質とにサイクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼを作用させることにより効
率よく非還元末端修飾フェニル化マルトテトラオース誘
導体が製造できることを見出し、本発明を完成した。
【０００８】すなわち、本発明は一般式
【化４】 （式中、Ｒ1 ，Ｒ2 の少なくとも一方は、Ｒ3−Ｓ
（Ｏ）m −Ａｌｋ−またはＲ3 −ＣＯ−Ａｌｋ−を示
し、他方は水素、炭素数１〜６個のアルキルまたはフェ
ニルを示す。ここでＲ3 は炭素数１〜５個のアルキルを
示し、Ａｌｋは炭素数１〜５個のアルキレンを示し、ｍ
は１または２の整数を示す。）により表される供与体基
質（以下、化合物(II)ともいう）と一般式
（Ｏ）m −Ａｌｋ−またはＲ3 −ＣＯ−Ａｌｋ−を示
し、他方は水素、炭素数１〜６個のアルキルまたはフェ
ニルを示す。ここでＲ3 は炭素数１〜５個のアルキルを
示し、Ａｌｋは炭素数１〜５個のアルキレンを示し、ｍ
は１または２の整数を示す。）により表される供与体基
質（以下、化合物(II)ともいう）と一般式
【化５】 （式中、Ｒ4 はフェニルまたは置換フェニルを示す。）
により表される受容体基質（以下、化合物(III) ともい
う）とにサイクロデキストリングルカノトランスフェラ
ーゼを作用させることを特徴とする、一般式
により表される受容体基質（以下、化合物(III) ともい
う）とにサイクロデキストリングルカノトランスフェラ
ーゼを作用させることを特徴とする、一般式
【化６】 （式中、各記号は前記と同義である。）により表される
非還元末端修飾フェニル化マルトテトラオース誘導体
（以下、化合物（Ｉ）ともいう）の製造法に関する。
非還元末端修飾フェニル化マルトテトラオース誘導体
（以下、化合物（Ｉ）ともいう）の製造法に関する。
【０００９】本発明で使用されるサイクロデキストリン
グルカノトランスフェラーゼは起源、由来に特に限定は
なく、バチルス マセランス(Bacillus macerans) 、バ
チルス メガテリウム(Bacillus megaterium) 、バチル
ス ステアロサーモフィラス(Bacillus stearothermoph
ilis) 等を由来とする酵素を用いることができる。本発
明の酵素反応はｐＨ５〜８で行われることが望ましく、
ｐＨ調節は緩衝液により行われる。緩衝液の種類につい
ては、反応を阻害しないものであれば特に指定はなく、
酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、グッドの緩衝液等があげら
れる。また、必要に応じて水可溶性有機溶媒を含有させ
てもよいが、水可溶性有機溶媒とはメタノール、エタノ
ール、プロパノール、イソプロピルアルコール等の低級
アルコール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチル
スルホキシド、ヘキサメチルホスホルアミド等の極性非
水溶媒、β−オキシエチルメチルエーテル、β−オキシ
エチルエーテル等のエチレングリコールエーテル類、エ
チレングリコール、プロピレングリコール等のグリコー
ル類などがあげられる。これら水可溶性有機溶媒の濃度
は３０〜７０％程度である。また、緩衝液には１〜５０
ｍＭの塩化カルシウムなどのカルシウム塩を含有させる
こともできる。本反応中での化合物(II)と化合物(III)
の反応モル比率は、前者１に対し後者１．１〜５が望ま
しく、サイクロデキストリングルカノトランスフェラー
ゼの使用量は、化合物(II)１モルに対し１５０〜１０，
０００ユニットが望ましい。また、反応は３０〜５０℃
の温度で行われる。反応終了後は、反応液を酢酸でｐＨ
４．０以下に調整して酵素を失活させ、逆相クロマトグ
ラフィーにより精製を行うことによって目的物を得るこ
とができる。
グルカノトランスフェラーゼは起源、由来に特に限定は
なく、バチルス マセランス(Bacillus macerans) 、バ
チルス メガテリウム(Bacillus megaterium) 、バチル
ス ステアロサーモフィラス(Bacillus stearothermoph
ilis) 等を由来とする酵素を用いることができる。本発
明の酵素反応はｐＨ５〜８で行われることが望ましく、
ｐＨ調節は緩衝液により行われる。緩衝液の種類につい
ては、反応を阻害しないものであれば特に指定はなく、
酢酸緩衝液、リン酸緩衝液、グッドの緩衝液等があげら
れる。また、必要に応じて水可溶性有機溶媒を含有させ
てもよいが、水可溶性有機溶媒とはメタノール、エタノ
ール、プロパノール、イソプロピルアルコール等の低級
アルコール、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチル
スルホキシド、ヘキサメチルホスホルアミド等の極性非
水溶媒、β−オキシエチルメチルエーテル、β−オキシ
エチルエーテル等のエチレングリコールエーテル類、エ
チレングリコール、プロピレングリコール等のグリコー
ル類などがあげられる。これら水可溶性有機溶媒の濃度
は３０〜７０％程度である。また、緩衝液には１〜５０
ｍＭの塩化カルシウムなどのカルシウム塩を含有させる
こともできる。本反応中での化合物(II)と化合物(III)
の反応モル比率は、前者１に対し後者１．１〜５が望ま
しく、サイクロデキストリングルカノトランスフェラー
ゼの使用量は、化合物(II)１モルに対し１５０〜１０，
０００ユニットが望ましい。また、反応は３０〜５０℃
の温度で行われる。反応終了後は、反応液を酢酸でｐＨ
４．０以下に調整して酵素を失活させ、逆相クロマトグ
ラフィーにより精製を行うことによって目的物を得るこ
とができる。
【００１０】本発明で用いられる原料である化合物(II)
は、特開平１−１５７９９６号公報記載の公知のアセタ
ール交換反応などにより得ることができ、得られた化合
物(II)は必要であれば逆相クロマトグラフィー等の常法
により精製し、高純度のものとして使用することもでき
る。本発明で使用される化合物(II)としては、たとえば
３−ケトブチリデンマルトテトラオース、２−ケトブチ
リデンマルトテトラオース、２−ケトプロピリデンマル
トテトラオース、４−ケトペンチリデンマルトテトラオ
ース、メチルスルフィニルエチリデンマルトテトラオー
ス、エチルスルフィニルエチリデンマルトテトラオー
ス、メタンスルホニルエチリデンマルトテトラオース、
エタンスルホニルエチリデンマルトテトラオースなどを
あげることができる。もう一方の原料である化合物(II
I) は、核置換芳香族化合物とマルトオリゴ糖を通常の
方法に従って反応させることによって合成することがで
きる。化学的にはグルコースをアセチル化し、このアセ
チル化グルコースと核置換芳香族化合物を結合させた
後、脱アセチル化することにより合成できる（生化学実
験講座、第４巻、第３９頁）。オリゴ糖の場合と異な
り、各工程の反応はほぼ定量的に進行し、かつ目的物は
結晶性に富むため、再結晶等により容易に精製すること
ができる。
は、特開平１−１５７９９６号公報記載の公知のアセタ
ール交換反応などにより得ることができ、得られた化合
物(II)は必要であれば逆相クロマトグラフィー等の常法
により精製し、高純度のものとして使用することもでき
る。本発明で使用される化合物(II)としては、たとえば
３−ケトブチリデンマルトテトラオース、２−ケトブチ
リデンマルトテトラオース、２−ケトプロピリデンマル
トテトラオース、４−ケトペンチリデンマルトテトラオ
ース、メチルスルフィニルエチリデンマルトテトラオー
ス、エチルスルフィニルエチリデンマルトテトラオー
ス、メタンスルホニルエチリデンマルトテトラオース、
エタンスルホニルエチリデンマルトテトラオースなどを
あげることができる。もう一方の原料である化合物(II
I) は、核置換芳香族化合物とマルトオリゴ糖を通常の
方法に従って反応させることによって合成することがで
きる。化学的にはグルコースをアセチル化し、このアセ
チル化グルコースと核置換芳香族化合物を結合させた
後、脱アセチル化することにより合成できる（生化学実
験講座、第４巻、第３９頁）。オリゴ糖の場合と異な
り、各工程の反応はほぼ定量的に進行し、かつ目的物は
結晶性に富むため、再結晶等により容易に精製すること
ができる。
【００１１】化合物(III) の修飾グルコシドのアグリコ
ンに相当するＲ4 はフェニルまたは置換フェニルであっ
て、Ｒ4 は還元性末端のグルコースの１位のＯＨ基にα
型で結合していても、β型で結合していてもよい。この
場合の置換フェニルとはハロゲン、ヒドロキシ炭素原子
数１〜６のアルキル、アルコキシ、アルコキシカルボニ
ル、ニトロなどを置換基として有するフェニルであっ
て、たとえばクロロフェノール、ジクロロフェノール、
ヒドロキシフェノール、アルキルフェノール、アルコキ
シフェノール、ヒドロキシ安息香酸、ニトロフェノー
ル、ハロゲン化ニトロフェノール、アルキル化ニトロフ
ェノール、アルコキシ化ニトロフェノール、ニトロ化ヒ
ドロキシ安息香酸、ジニトロフェノールなどがあげられ
る。特に少なくとも１個のニトロ基を有するフェノール
類、たとえば４−ニトロフェノール、２−クロロ−４−
ニトロフェノール、２，６−ジクロロ−４−ニトロフェ
ノール、２−フルオロ−４−ニトロフェノール、２，６
−ジフルオロ−４−ニトロフェノール、２−ブロモ−４
−ニトロフェノール、２，６−ジブロモ−４−ニトロフ
ェノール、２−ニトロフェノール、２−ヒドロキシ−４
−ニトロフェノール、３−ヒドロキシ−４−ニトロフェ
ノールなどが好ましい。
ンに相当するＲ4 はフェニルまたは置換フェニルであっ
て、Ｒ4 は還元性末端のグルコースの１位のＯＨ基にα
型で結合していても、β型で結合していてもよい。この
場合の置換フェニルとはハロゲン、ヒドロキシ炭素原子
数１〜６のアルキル、アルコキシ、アルコキシカルボニ
ル、ニトロなどを置換基として有するフェニルであっ
て、たとえばクロロフェノール、ジクロロフェノール、
ヒドロキシフェノール、アルキルフェノール、アルコキ
シフェノール、ヒドロキシ安息香酸、ニトロフェノー
ル、ハロゲン化ニトロフェノール、アルキル化ニトロフ
ェノール、アルコキシ化ニトロフェノール、ニトロ化ヒ
ドロキシ安息香酸、ジニトロフェノールなどがあげられ
る。特に少なくとも１個のニトロ基を有するフェノール
類、たとえば４−ニトロフェノール、２−クロロ−４−
ニトロフェノール、２，６−ジクロロ−４−ニトロフェ
ノール、２−フルオロ−４−ニトロフェノール、２，６
−ジフルオロ−４−ニトロフェノール、２−ブロモ−４
−ニトロフェノール、２，６−ジブロモ−４−ニトロフ
ェノール、２−ニトロフェノール、２−ヒドロキシ−４
−ニトロフェノール、３−ヒドロキシ−４−ニトロフェ
ノールなどが好ましい。
【００１２】
【実施例】以下、本発明を参考例、実施例によって詳し
く説明するが、本発明はこれらによって何ら限定される
ものではない。
く説明するが、本発明はこれらによって何ら限定される
ものではない。
【００１３】参考例１：３−ケトブチリデン−マルトテ
トラオースの合成 マルトテトラオース２５ｇ、１，１−ジメトキシ−３−
ブタノン１０．９７ｇおよびメタンスルホン酸１．８ｇ
をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２００ｍｌに溶解し、
攪拌下、室温で５０時間反応した。反応終了後、反応液
に弱塩基性イオン交換樹脂を加え酸を中和し、濾過後、
濾液を濃縮し粗品を得た。粗品をオクタデシルシリル化
シリカゲル逆相カラムクロマトグラフィーにより精製
し、ＨＰＬＣ面積純度９９％の目的物２１．３ｇを得た
（融点１３６〜１４０℃）。
トラオースの合成 マルトテトラオース２５ｇ、１，１−ジメトキシ−３−
ブタノン１０．９７ｇおよびメタンスルホン酸１．８ｇ
をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド２００ｍｌに溶解し、
攪拌下、室温で５０時間反応した。反応終了後、反応液
に弱塩基性イオン交換樹脂を加え酸を中和し、濾過後、
濾液を濃縮し粗品を得た。粗品をオクタデシルシリル化
シリカゲル逆相カラムクロマトグラフィーにより精製
し、ＨＰＬＣ面積純度９９％の目的物２１．３ｇを得た
（融点１３６〜１４０℃）。
【００１４】参考例２：２−クロロ−４−ニトロフェニ
ル−β−グルコシドの合成 （１）β−ペンタアセチルグルコース６０．６ｇ、２−
クロロ−４−ニトロフェノール６０ｇおよび無水塩化亜
鉛１．３ｇをナスフラスコに入れ、ロータリーエバポレ
ーターに取付け、１０〜５ｍｍＨｇの減圧下に浴温１２
０℃の油浴で加温しながら４時間反応した。反応終了
後、反応物に酢酸エチルを加え溶解し、有機層を水、
２．５％水酸化ナトリウム水、水の順で洗浄後、有機層
を濃縮し、β−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）−
テトラアセチルグルコシドの粗品を得た。粗品をトルエ
ンで再結晶すると白色の目的物結晶が得られた（融点１
５１〜１５３℃）。 （２）β−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）−テト
ラアセチルグルコシド５０ｇに無水メタノール２００ｍ
ｌを加え、０℃まで冷却した後、２８％ナトリウムメト
キシド４ｍｌを加え、同温度で３時間攪拌した。反応終
了後、酢酸１．３ｍｌで中和し、一部のメタノールを減
圧下に留去後、残液を冷却すると微黄色の結晶が析出し
た。この結晶を濾取後、冷メタノールで洗浄し乾燥する
と、白色結晶の２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−
グルコシド３５ｇが得られた（融点１８０〜１８２
℃）。本品がβ体であることは、β−グルコシダーゼを
作用させることにより確認した。
ル−β−グルコシドの合成 （１）β−ペンタアセチルグルコース６０．６ｇ、２−
クロロ−４−ニトロフェノール６０ｇおよび無水塩化亜
鉛１．３ｇをナスフラスコに入れ、ロータリーエバポレ
ーターに取付け、１０〜５ｍｍＨｇの減圧下に浴温１２
０℃の油浴で加温しながら４時間反応した。反応終了
後、反応物に酢酸エチルを加え溶解し、有機層を水、
２．５％水酸化ナトリウム水、水の順で洗浄後、有機層
を濃縮し、β−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）−
テトラアセチルグルコシドの粗品を得た。粗品をトルエ
ンで再結晶すると白色の目的物結晶が得られた（融点１
５１〜１５３℃）。 （２）β−（２−クロロ−４−ニトロフェニル）−テト
ラアセチルグルコシド５０ｇに無水メタノール２００ｍ
ｌを加え、０℃まで冷却した後、２８％ナトリウムメト
キシド４ｍｌを加え、同温度で３時間攪拌した。反応終
了後、酢酸１．３ｍｌで中和し、一部のメタノールを減
圧下に留去後、残液を冷却すると微黄色の結晶が析出し
た。この結晶を濾取後、冷メタノールで洗浄し乾燥する
と、白色結晶の２−クロロ−４−ニトロフェニル−β−
グルコシド３５ｇが得られた（融点１８０〜１８２
℃）。本品がβ体であることは、β−グルコシダーゼを
作用させることにより確認した。
【００１５】実施例１：３−テトブチリデン２−クロロ
−４−ニトロフェニル−β−マルトテトラオシドの合成 （１）反応： ５ｍＭ塩化カルシウム含有１００ｍＭ酢
酸緩衝液（ｐＨ６．０）３５０ｍｌに３−ケトブチリデ
ン−マルトテトラオース３３ｇ、２−クロロ−４−ニト
ロフェニル−β−グルコシド１７ｇおよびサイクロデキ
ストリングルカノトランスフェラーゼ（バチルス マセ
ランス由来）３０２０ユニットを加え、３７℃で１２時
間攪拌反応した。反応液に酢酸を加え、ｐＨ４．０とし
１時間静置後、外浴４５℃で約２００ｍｌまで減圧濃縮
し反応物の濃縮液を得た。 （２）精製： 内径６ｃｍ、長さ５５ｃｍのガラスカラ
ムにオクタデシルシリル化シリカゲル約６００ｇをスラ
リー法で充填し、常法によりコンディショニングを行っ
た。このカラムに前記の濃縮液を負荷後、１５％アセト
ニトリル水で展開し、目的成分を含む留分を集め、減圧
下に濃縮乾固すると１８．１ｇの目的物が白色結晶とし
て得られた（ＨＰＬＣ面積純度９９％以上（保持時間
９．９９分）、融点１６４〜１６８℃）。 ＨＰＬＣ分析条件； カラム：ＩＮＥＲＴＳＩＬ ＯＤＳ−２，４．６×２５
０ｍｍ 移動相：アセトニトリル／リン酸二水素ナトリウム（ｐ
Ｈ３．０）＝２０／８０ 温度 ：４０℃ 流速 ：０．８ｍｌ／分 検出器：ＵＶ検出器（２８０ｎｍ，ＡＴＴＥＮ４）
−４−ニトロフェニル−β−マルトテトラオシドの合成 （１）反応： ５ｍＭ塩化カルシウム含有１００ｍＭ酢
酸緩衝液（ｐＨ６．０）３５０ｍｌに３−ケトブチリデ
ン−マルトテトラオース３３ｇ、２−クロロ−４−ニト
ロフェニル−β−グルコシド１７ｇおよびサイクロデキ
ストリングルカノトランスフェラーゼ（バチルス マセ
ランス由来）３０２０ユニットを加え、３７℃で１２時
間攪拌反応した。反応液に酢酸を加え、ｐＨ４．０とし
１時間静置後、外浴４５℃で約２００ｍｌまで減圧濃縮
し反応物の濃縮液を得た。 （２）精製： 内径６ｃｍ、長さ５５ｃｍのガラスカラ
ムにオクタデシルシリル化シリカゲル約６００ｇをスラ
リー法で充填し、常法によりコンディショニングを行っ
た。このカラムに前記の濃縮液を負荷後、１５％アセト
ニトリル水で展開し、目的成分を含む留分を集め、減圧
下に濃縮乾固すると１８．１ｇの目的物が白色結晶とし
て得られた（ＨＰＬＣ面積純度９９％以上（保持時間
９．９９分）、融点１６４〜１６８℃）。 ＨＰＬＣ分析条件； カラム：ＩＮＥＲＴＳＩＬ ＯＤＳ−２，４．６×２５
０ｍｍ 移動相：アセトニトリル／リン酸二水素ナトリウム（ｐ
Ｈ３．０）＝２０／８０ 温度 ：４０℃ 流速 ：０．８ｍｌ／分 検出器：ＵＶ検出器（２８０ｎｍ，ＡＴＴＥＮ４）
【００１６】
【発明の効果】本発明の方法によれば、α−アミラーゼ
活性測定用基質として有用な非還元末端修飾フェニル化
マルトテトラオース誘導体を、サイクロデキストリング
ルカノトランスフェラーゼの糖転位反応により、効率よ
く合成することができる。
活性測定用基質として有用な非還元末端修飾フェニル化
マルトテトラオース誘導体を、サイクロデキストリング
ルカノトランスフェラーゼの糖転位反応により、効率よ
く合成することができる。
Claims (1)
- 【請求項１】 一般式 【化１】 （式中、Ｒ1 ，Ｒ2 の少なくとも一方は、Ｒ3−Ｓ
（Ｏ）m −Ａｌｋ−またはＲ3 −ＣＯ−Ａｌｋ−を示
し、他方は水素、炭素数１〜６個のアルキルまたはフェ
ニルを示す。ここでＲ3 は炭素数１〜５個のアルキルを
示し、Ａｌｋは炭素数１〜５個のアルキレンを示し、ｍ
は１または２の整数を示す。）により表される供与体基
質と一般式 【化２】 （式中、Ｒ4 はフェニルまたは置換フェニルを示す。）
により表される受容体基質とにサイクロデキストリング
ルカノトランスフェラーゼを作用させることを特徴とす
る一般式 【化３】 （式中、各記号は前記と同義である。）により表される
非還元末端修飾フェニル化マルトテトラオース誘導体の
製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3350894A JPH05161498A (ja) | 1991-12-10 | 1991-12-10 | 非還元末端修飾フェニル化マルトテトラオース誘導体の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3350894A JPH05161498A (ja) | 1991-12-10 | 1991-12-10 | 非還元末端修飾フェニル化マルトテトラオース誘導体の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05161498A true JPH05161498A (ja) | 1993-06-29 |
Family
ID=18413619
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3350894A Pending JPH05161498A (ja) | 1991-12-10 | 1991-12-10 | 非還元末端修飾フェニル化マルトテトラオース誘導体の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH05161498A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5890798U (ja) * | 1981-12-14 | 1983-06-20 | 澤藤 正 | 平面駆動スピ−カ |
-
1991
- 1991-12-10 JP JP3350894A patent/JPH05161498A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5890798U (ja) * | 1981-12-14 | 1983-06-20 | 澤藤 正 | 平面駆動スピ−カ |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |