JPH0799997A - α−アミラーゼ活性測定用試薬 - Google Patents
α−アミラーゼ活性測定用試薬Info
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- JPH0799997A JPH0799997A JP24944293A JP24944293A JPH0799997A JP H0799997 A JPH0799997 A JP H0799997A JP 24944293 A JP24944293 A JP 24944293A JP 24944293 A JP24944293 A JP 24944293A JP H0799997 A JPH0799997 A JP H0799997A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 1試薬系における試薬ブランクの上昇を回避
し、かつαーアミラーゼの作用様式をより純粋に反映す
る高感度のアミラーゼ活性測定試薬を提供する。 【構成】 【化1】 (式中、R1 およびR2 は互いに異なる水素またはβ−
ガラクトピラノシル基を、R3 は遊離後、発色する測定
可能な物質を示し、nは0〜2の整数を示す。)で表さ
れるマルトオリゴ糖誘導体を基質とし、追随酵素として
βーグルコシダーゼを用いることを特徴とするα−アミ
ラーゼ活性測定用試薬。
し、かつαーアミラーゼの作用様式をより純粋に反映す
る高感度のアミラーゼ活性測定試薬を提供する。 【構成】 【化1】 (式中、R1 およびR2 は互いに異なる水素またはβ−
ガラクトピラノシル基を、R3 は遊離後、発色する測定
可能な物質を示し、nは0〜2の整数を示す。)で表さ
れるマルトオリゴ糖誘導体を基質とし、追随酵素として
βーグルコシダーゼを用いることを特徴とするα−アミ
ラーゼ活性測定用試薬。
Description
【0001】
【産業上の利用分野】本発明はα−アミラーゼ活性測定
用試薬に関する。
用試薬に関する。
【0002】
【従来の技術】膵液や尿などの体液に含有されるα−ア
ミラーゼの活性を測定することにより、膵臓病などの各
種疾患の診断が行われている。従来から、α−アミラー
ゼの活性測定法には、次のようなものがある。 (1)マルトオリゴ糖(マルトテトラオース、マルトペ
ンタオース、マルトヘキサオースなど)を基質とする方
法。 この方法では、α−アミラーゼ含有試料に該マルトオリ
ゴ糖とα−グルコシダーゼ等の追随酵素とを作用させて
基質からグルコースを遊離させ、グルコースの量を測定
することにより、α−アミラーゼの活性値を知る。生成
したグルコースは、例えばグルコースオキシダーゼ/パ
ーオキシダーゼ/色素系を利用する定量法:ヘキソキナ
ーゼ/ホスフォグルコムターゼ/グルコース−6−ホス
フェートデヒドロゲナーゼ/NADH系を利用する測定
法などにより測定される。
ミラーゼの活性を測定することにより、膵臓病などの各
種疾患の診断が行われている。従来から、α−アミラー
ゼの活性測定法には、次のようなものがある。 (1)マルトオリゴ糖(マルトテトラオース、マルトペ
ンタオース、マルトヘキサオースなど)を基質とする方
法。 この方法では、α−アミラーゼ含有試料に該マルトオリ
ゴ糖とα−グルコシダーゼ等の追随酵素とを作用させて
基質からグルコースを遊離させ、グルコースの量を測定
することにより、α−アミラーゼの活性値を知る。生成
したグルコースは、例えばグルコースオキシダーゼ/パ
ーオキシダーゼ/色素系を利用する定量法:ヘキソキナ
ーゼ/ホスフォグルコムターゼ/グルコース−6−ホス
フェートデヒドロゲナーゼ/NADH系を利用する測定
法などにより測定される。
【0003】(2)マルトオリゴ糖の還元性末端にフェ
ニル基、ナフチル基、またはそれらの誘導体をアグリコ
ンとして結合させた誘導体を基質とする方法。 この方法では、α−アミラーゼ含有試料に該マルトオリ
ゴ糖誘導体と必要に応じα−グルコシターゼ等の追随酵
素を作用させて基質からアグリコンを遊離させ、遊離し
たアグリコンの量を光学的に測定することにより、α−
アミラーゼの活性を測定することができる。例えば、基
質としてp−ニトロフェニルマルトペンタオシド、p−
ニトロフェニルマルトヘキサオシド、p−ニトロフェニ
ルマルトヘプタオシド、2,4−ジクロロフェニルマル
トペンタオシド、2−クロロ−4−ニトロフェニルマル
トペンタオシドなどを用いる測定法がある。
ニル基、ナフチル基、またはそれらの誘導体をアグリコ
ンとして結合させた誘導体を基質とする方法。 この方法では、α−アミラーゼ含有試料に該マルトオリ
ゴ糖誘導体と必要に応じα−グルコシターゼ等の追随酵
素を作用させて基質からアグリコンを遊離させ、遊離し
たアグリコンの量を光学的に測定することにより、α−
アミラーゼの活性を測定することができる。例えば、基
質としてp−ニトロフェニルマルトペンタオシド、p−
ニトロフェニルマルトヘキサオシド、p−ニトロフェニ
ルマルトヘプタオシド、2,4−ジクロロフェニルマル
トペンタオシド、2−クロロ−4−ニトロフェニルマル
トペンタオシドなどを用いる測定法がある。
【0004】しかしながら、上記(1)、(2)の基質
を用いる場合、いずれの場合も1試薬系にすると、α−
グルコシターゼがわずかではあるが基質に作用し、ブラ
ンク値が上昇するという欠点がある。α−グルコシター
ゼの基質分解作用のため、α−グルコシターゼと基質と
を1液化することは、試薬としての安定性が損なわれる
ため好ましくない。
を用いる場合、いずれの場合も1試薬系にすると、α−
グルコシターゼがわずかではあるが基質に作用し、ブラ
ンク値が上昇するという欠点がある。α−グルコシター
ゼの基質分解作用のため、α−グルコシターゼと基質と
を1液化することは、試薬としての安定性が損なわれる
ため好ましくない。
【0005】(3)マルトオリゴ糖の還元性末端にフェ
ニル基、ナフチル基、またはそれらの誘導体をアグリコ
ンとして結合させた誘導体の、非還元性末端のグルコー
スのヒドロキシル基が何らかの手段で修飾された誘導体
を基質とする方法。 この方法も、(2)と同じく、α−アミラーゼ含有試料
に該マルトオリゴ糖誘導体と必要に応じ、α−グルコシ
ターゼ等の追随酵素を作用させて基質からアグリコンを
遊離させ、遊離したアグリコンの量を光学的に測定する
ことにより、α−アミラーゼの活性を測定するものであ
る。具体例としては、非還元性末端グルコースの6位の
ヒドロキシル基が修飾されたタイプの基質(例えば、特
開昭60−237998号公報)、あるいは4位および
6位のヒドロキシル基をアルキル基、アルコイル基また
はフェニル基で置換したタイプの基質(例えば、特開昭
60−54395号公報、特開昭1−157996号公
報)また非還元性末端のグルコースのヒドロキシル基
が、天然糖のガラクトシル基で修飾された誘導体を基質
とする方法(特開平3−264596号公報)などがあ
る。
ニル基、ナフチル基、またはそれらの誘導体をアグリコ
ンとして結合させた誘導体の、非還元性末端のグルコー
スのヒドロキシル基が何らかの手段で修飾された誘導体
を基質とする方法。 この方法も、(2)と同じく、α−アミラーゼ含有試料
に該マルトオリゴ糖誘導体と必要に応じ、α−グルコシ
ターゼ等の追随酵素を作用させて基質からアグリコンを
遊離させ、遊離したアグリコンの量を光学的に測定する
ことにより、α−アミラーゼの活性を測定するものであ
る。具体例としては、非還元性末端グルコースの6位の
ヒドロキシル基が修飾されたタイプの基質(例えば、特
開昭60−237998号公報)、あるいは4位および
6位のヒドロキシル基をアルキル基、アルコイル基また
はフェニル基で置換したタイプの基質(例えば、特開昭
60−54395号公報、特開昭1−157996号公
報)また非還元性末端のグルコースのヒドロキシル基
が、天然糖のガラクトシル基で修飾された誘導体を基質
とする方法(特開平3−264596号公報)などがあ
る。
【0006】これらの方法においては、マルトオリゴ糖
の非還元性末端のグルコ−スのヒドロキシル基が修飾さ
れているため、上記(1)、(2)の方法にみられるよ
うな、α−グルコシターゼがわずかではあるが基質に作
用しブランク値が上昇するという欠点は回避された。し
かし、上記基質においては修飾基が天然にない構造のも
のであるため、澱粉やアミロースなどのグルコース鎖を
認識してその結合を切断する、αーアミラーゼの作用様
式を純粋に反映していないことが考えられ、アミラーゼ
に対する親和性に劣り、感度が相対的に小さいという欠
点がある。
の非還元性末端のグルコ−スのヒドロキシル基が修飾さ
れているため、上記(1)、(2)の方法にみられるよ
うな、α−グルコシターゼがわずかではあるが基質に作
用しブランク値が上昇するという欠点は回避された。し
かし、上記基質においては修飾基が天然にない構造のも
のであるため、澱粉やアミロースなどのグルコース鎖を
認識してその結合を切断する、αーアミラーゼの作用様
式を純粋に反映していないことが考えられ、アミラーゼ
に対する親和性に劣り、感度が相対的に小さいという欠
点がある。
【0007】(4)マルトオリゴ糖の還元性末端にフェ
ニル基、ナフチル基、またはそれらの誘導体をアグリコ
ンとして結合させた誘導体を基質とし、追随酵素を用い
ない方法。 α−グルコシダーゼなどの追随酵素を用いずに、α−ア
ミラーゼが直接グリコシド結合に働き、アグリコンを遊
離させることにより、ブランク値の上昇を回避すること
ができる。例えば基質として2−クロロ−4−ニトロフ
ェニルマルトトリオシドを用いる方法(特願平4−30
0103号)がある。この方法は、非還元末端を修飾し
ないので、αーアミラーゼの作用様式をほぼ純粋に反映
していると考えられる。しかし、この方法はアミラーゼ
との反応性が小さいため測定感度が低いという問題点を
もつ。
ニル基、ナフチル基、またはそれらの誘導体をアグリコ
ンとして結合させた誘導体を基質とし、追随酵素を用い
ない方法。 α−グルコシダーゼなどの追随酵素を用いずに、α−ア
ミラーゼが直接グリコシド結合に働き、アグリコンを遊
離させることにより、ブランク値の上昇を回避すること
ができる。例えば基質として2−クロロ−4−ニトロフ
ェニルマルトトリオシドを用いる方法(特願平4−30
0103号)がある。この方法は、非還元末端を修飾し
ないので、αーアミラーゼの作用様式をほぼ純粋に反映
していると考えられる。しかし、この方法はアミラーゼ
との反応性が小さいため測定感度が低いという問題点を
もつ。
【0008】
【発明が解決しようとする課題】本発明は上記従来のα
−アミラーゼ活性測定基質の欠点および従来のα−アミ
ラーゼ活性測定試薬の欠点を解消しようとするものであ
り、その目的とするところは、1試薬系における試薬ブ
ランクの上昇を回避し、かつ、αーアミラーゼの作用様
式をより純粋に反映する、高感度のアミラーゼ活性測定
試薬を提供することにある。
−アミラーゼ活性測定基質の欠点および従来のα−アミ
ラーゼ活性測定試薬の欠点を解消しようとするものであ
り、その目的とするところは、1試薬系における試薬ブ
ランクの上昇を回避し、かつ、αーアミラーゼの作用様
式をより純粋に反映する、高感度のアミラーゼ活性測定
試薬を提供することにある。
【0009】
【課題を解決するための手段】本発明は、一般式
(I)
(I)
【0010】
【化2】
【0011】(式中、R1 およびR2 は互いに異なる水
素またはβ−ガラクトピラノシル基を示し、R3 は遊離
後、発色する測定可能な物質を示す。nは0または1を
示す。)で表されるマルトオリゴ糖誘導体を基質とし、
追随酵素としてβ−グルコシダーゼを用いることを特徴
とする、α−アミラーゼ活性測定用試薬である。
素またはβ−ガラクトピラノシル基を示し、R3 は遊離
後、発色する測定可能な物質を示す。nは0または1を
示す。)で表されるマルトオリゴ糖誘導体を基質とし、
追随酵素としてβ−グルコシダーゼを用いることを特徴
とする、α−アミラーゼ活性測定用試薬である。
【0012】本発明におけるマルトオリゴ糖誘導体
(I)の骨格となるマルトオリゴ糖は、2または3個の
糖から形成される。
(I)の骨格となるマルトオリゴ糖は、2または3個の
糖から形成される。
【0013】マルトオリゴ糖の非還元性末端グルコース
の修飾基であるガラクトースは、非還元性末端グルコー
スの4位または6位の水酸基にβ型で結合している。従
来、マルトオリゴ糖の非還元性末端グルコースの修飾形
態としては、非還元性末端グルコースの6位のヒドロキ
シル基がアルキル基、アルコイル基またはフェニル基で
修飾されたタイプの基質、あるいは4位および6位のヒ
ドロキシル基をアルキル基、アルコイル基またはフェニ
ル基で置換したタイプ、あるいは4位および6位の水酸
基がメチレン架橋されたタイプの基質などがあるが、こ
れらの修飾基は天然の基質にはない構造のものであり、
アミラーゼとの親和性を考慮した場合、本発明のβ−ガ
ラクトシル基は前述の修飾基より優れている。
の修飾基であるガラクトースは、非還元性末端グルコー
スの4位または6位の水酸基にβ型で結合している。従
来、マルトオリゴ糖の非還元性末端グルコースの修飾形
態としては、非還元性末端グルコースの6位のヒドロキ
シル基がアルキル基、アルコイル基またはフェニル基で
修飾されたタイプの基質、あるいは4位および6位のヒ
ドロキシル基をアルキル基、アルコイル基またはフェニ
ル基で置換したタイプ、あるいは4位および6位の水酸
基がメチレン架橋されたタイプの基質などがあるが、こ
れらの修飾基は天然の基質にはない構造のものであり、
アミラーゼとの親和性を考慮した場合、本発明のβ−ガ
ラクトシル基は前述の修飾基より優れている。
【0014】マルトオリゴ糖の還元性末端には、追随酵
素(β−グルコシダーゼ)により遊離した後、発色する
測定可能な物質がアグリコンとして結合する。該物質の
グリコシド結合はβ型に限定される。遊離後、発色する
測定可能な物質には、次の置換フェノール:
素(β−グルコシダーゼ)により遊離した後、発色する
測定可能な物質がアグリコンとして結合する。該物質の
グリコシド結合はβ型に限定される。遊離後、発色する
測定可能な物質には、次の置換フェノール:
【0015】
【化3】
【0016】式中、R4 または R 5はいずれか一方が
ハロゲン原子またはニトロ基を意味し、他方は水素原
子、ヒドロキシル基、低級アルキル基、ハロゲン原子ま
たはニトロ基を意味する。置換フェノールとしては具体
的には、p−ニトロフェノールをはじめ、2−クロロ−
4−ニトロフェノール、2,4−ジクロロフェノールな
ど種々のものがあるが、アミラーゼの至適pHであるp
H7付近における測定感度を考慮した場合、2−クロロ
−4−ニトロフェノールが優れている。
ハロゲン原子またはニトロ基を意味し、他方は水素原
子、ヒドロキシル基、低級アルキル基、ハロゲン原子ま
たはニトロ基を意味する。置換フェノールとしては具体
的には、p−ニトロフェノールをはじめ、2−クロロ−
4−ニトロフェノール、2,4−ジクロロフェノールな
ど種々のものがあるが、アミラーゼの至適pHであるp
H7付近における測定感度を考慮した場合、2−クロロ
−4−ニトロフェノールが優れている。
【0017】本発明のマルトオリゴ糖誘導体(I)は、
例えば2−クロロ−4−ニトロフェニル 4−O−β−
D−ガラクトピラノシル−α−マルトシド、2−クロロ
−4−ニトロフェニル 4−O−β−D−ガラクトピラ
ノシル−α−マルトトリオシド、p−ニトロフェニル
4−O−β−D−ガラクトピラノシル−α−マルトシ
ド、p−ニトロフェニル 4−O−β−D−ガラクトピ
ラノシル−α−マルトトリオシドなどが挙げられる。
例えば2−クロロ−4−ニトロフェニル 4−O−β−
D−ガラクトピラノシル−α−マルトシド、2−クロロ
−4−ニトロフェニル 4−O−β−D−ガラクトピラ
ノシル−α−マルトトリオシド、p−ニトロフェニル
4−O−β−D−ガラクトピラノシル−α−マルトシ
ド、p−ニトロフェニル 4−O−β−D−ガラクトピ
ラノシル−α−マルトトリオシドなどが挙げられる。
【0018】本発明のマルトオリゴ糖誘導体(I)は種
々の公知の方法で製造することができる。例えばマルト
ースまたはマルトトリオースをアセチル化し、2−クロ
ロ−4−ニトロフェノールなどの置換フェノールを還流
芳香族炭化水素、例えばトルエンの存在下で反応させ
て、還元性末端にアグリコンを結合するマルトオリゴ糖
誘導体とする。次いで該オリゴ糖誘導体にラクトースを
β−ガラクトシダーゼ共存下に反応させてマルトオリゴ
糖誘導体(I)を製造する。
々の公知の方法で製造することができる。例えばマルト
ースまたはマルトトリオースをアセチル化し、2−クロ
ロ−4−ニトロフェノールなどの置換フェノールを還流
芳香族炭化水素、例えばトルエンの存在下で反応させ
て、還元性末端にアグリコンを結合するマルトオリゴ糖
誘導体とする。次いで該オリゴ糖誘導体にラクトースを
β−ガラクトシダーゼ共存下に反応させてマルトオリゴ
糖誘導体(I)を製造する。
【0019】また別法ではマルトースまたはマルトトリ
オースをおよびラクトースをβ−ガラクトシダーゼの存
在下に反応させて得られたガラクトシルマルトオリゴ糖
を有機媒体の存在下、もしくは無溶媒の下に、アルカリ
および無水酢酸とともに加熱してアセチル化し、さらに
アセチル化ガラクトシルマルトオリゴ糖と置換フェノー
ルを有機媒体中、酸触媒とともに加熱し、次いで得られ
た反応生成物のアセチル基を脱離する方法がある。
オースをおよびラクトースをβ−ガラクトシダーゼの存
在下に反応させて得られたガラクトシルマルトオリゴ糖
を有機媒体の存在下、もしくは無溶媒の下に、アルカリ
および無水酢酸とともに加熱してアセチル化し、さらに
アセチル化ガラクトシルマルトオリゴ糖と置換フェノー
ルを有機媒体中、酸触媒とともに加熱し、次いで得られ
た反応生成物のアセチル基を脱離する方法がある。
【0020】本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬
は、上記マルトオリゴ糖誘導体(I)を基質として、ま
たβ−グルコシダーゼを追随酵素としてそれぞれ含有す
るものであり、α−グルコシダーゼを含有しないことを
特徴とする。しかし必要に応じてその他の添加剤、例え
ば界面活性剤、防腐剤、キレート剤、安定化剤などを含
有する。β−グルコシダーゼは1〜100単位/ml含
有させる。本発明の基質は追随酵素(β−グルコシダー
ゼ)による分解を受けず、従来のアミラーゼ測定系に比
べて安定である。
は、上記マルトオリゴ糖誘導体(I)を基質として、ま
たβ−グルコシダーゼを追随酵素としてそれぞれ含有す
るものであり、α−グルコシダーゼを含有しないことを
特徴とする。しかし必要に応じてその他の添加剤、例え
ば界面活性剤、防腐剤、キレート剤、安定化剤などを含
有する。β−グルコシダーゼは1〜100単位/ml含
有させる。本発明の基質は追随酵素(β−グルコシダー
ゼ)による分解を受けず、従来のアミラーゼ測定系に比
べて安定である。
【0021】本発明方法によりα−アミラーゼの活性を
測定するには、上記基質、β−グルコシダーゼおよび必
要に応じてその他の添加物、例えば塩化カルシウムなど
を含有する試薬に、α−アミラーゼを含む試料を作用さ
せる。α−アミラーゼが基質に作用し、β−グルコシダ
ーゼが加水分解した発色可能な物質を結合したグルコシ
ドに作用して、発色可能な物質が遊離する。次いで遊離
し発色した測定可能な物質を直接に光学的に測定する
か、または遊離した物質に他の化合物を作用させて発色
させ、光学的に測定することにより試料中のα−アミラ
ーゼの量を知る。
測定するには、上記基質、β−グルコシダーゼおよび必
要に応じてその他の添加物、例えば塩化カルシウムなど
を含有する試薬に、α−アミラーゼを含む試料を作用さ
せる。α−アミラーゼが基質に作用し、β−グルコシダ
ーゼが加水分解した発色可能な物質を結合したグルコシ
ドに作用して、発色可能な物質が遊離する。次いで遊離
し発色した測定可能な物質を直接に光学的に測定する
か、または遊離した物質に他の化合物を作用させて発色
させ、光学的に測定することにより試料中のα−アミラ
ーゼの量を知る。
【0022】本発明のα−アミラーゼ活性測定用試薬を
使用する測定方法における基質分解の反応式を2−クロ
ロ−4−ニトロフェニル 4−O−β−D−ガラクトピ
ラノシル−β−マルトトリオシドを基質とする場合を例
にあげて説明する。
使用する測定方法における基質分解の反応式を2−クロ
ロ−4−ニトロフェニル 4−O−β−D−ガラクトピ
ラノシル−β−マルトトリオシドを基質とする場合を例
にあげて説明する。
【0023】
【化4】
【0024】α−アミラーゼが基質(2−クロロ−4−
ニトロフェニル 4−O−β−D−ガラクトピラノシル
−β−マルトトリオシド)に作用し、β−グルコシダー
ゼが加水分解した発色可能な物質を結合したグルコシド
(2−クロロ−4−ニトロフェニル β−グルコシド)
に作用して、発色可能な物質(2−クロロ−4−ニトロ
フェノール)が遊離する。次いで2−クロロ−4−ニト
ロフェノールのスペクトルを直接に光学的に測定する。
また2−クロロ−4−ニトロフェノールの測定方法とし
ては、α−アミラーゼの反応を連続的に追跡するレート
法および一定時間反応させた後、反応を止めて測定する
エンドポイント法のいずれもが使用されうる。
ニトロフェニル 4−O−β−D−ガラクトピラノシル
−β−マルトトリオシド)に作用し、β−グルコシダー
ゼが加水分解した発色可能な物質を結合したグルコシド
(2−クロロ−4−ニトロフェニル β−グルコシド)
に作用して、発色可能な物質(2−クロロ−4−ニトロ
フェノール)が遊離する。次いで2−クロロ−4−ニト
ロフェノールのスペクトルを直接に光学的に測定する。
また2−クロロ−4−ニトロフェノールの測定方法とし
ては、α−アミラーゼの反応を連続的に追跡するレート
法および一定時間反応させた後、反応を止めて測定する
エンドポイント法のいずれもが使用されうる。
【0025】
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳細に説明
する。 実施例・比較例 本発明のマルトオリゴ糖誘導体2種(表1に記載)を基
質として用い、下記組成からなるα−アミラーゼ活性測
定試薬をそれぞれ調製した。 試薬組成: 50mMグッドバッファー(pH7.0) CaCl2 1mM 基質 2mM β−グルコシダーゼ 10単位 なお、比較例として後記表1に示した基質4種を用い
て、上記と同様の試薬を調製した。表1に示された各試
薬3mlに三種類の血清1、2および3をそれぞれ0.25ml
添加し、37℃にて3分間放置したのち、415nmに
おける吸光度の変化を測定し、1分間当りの吸光度の変
化を算出した。その結果を表2に示した。なお、表2に
は試薬ブランクの1分間当りの吸光度の変化も伴せて記
載した。
する。 実施例・比較例 本発明のマルトオリゴ糖誘導体2種(表1に記載)を基
質として用い、下記組成からなるα−アミラーゼ活性測
定試薬をそれぞれ調製した。 試薬組成: 50mMグッドバッファー(pH7.0) CaCl2 1mM 基質 2mM β−グルコシダーゼ 10単位 なお、比較例として後記表1に示した基質4種を用い
て、上記と同様の試薬を調製した。表1に示された各試
薬3mlに三種類の血清1、2および3をそれぞれ0.25ml
添加し、37℃にて3分間放置したのち、415nmに
おける吸光度の変化を測定し、1分間当りの吸光度の変
化を算出した。その結果を表2に示した。なお、表2に
は試薬ブランクの1分間当りの吸光度の変化も伴せて記
載した。
【0026】
【表1】
【0027】
【表2】
【0028】表2に示した実施例Aと比較例A−1の比
較および実施例Bと比較例B−1の比較より、非還元末
端に3−ケトブチリデン基を有する基質よりも、β−ガ
ラクトシル基を有する本発明の基質では1分間当たりの
吸光度変化が大きく、試薬ブランクが小さい。すなわち
本発明の基質では非還元末端のガラクトシル基が試料中
のα−アミラーゼとの親和性に優れ、非還元末端の修飾
基として好ましいことがわかる。また実施例Aと比較例
A−1、A−2の比較および実施例Bと比較例B−1、
B−2の比較より、非還元末端に修飾基を有しない基質
よりも本発明の基質は測定感度が高いことがわかる。さ
らにA群とB群の比較により、アグリコンとして2−ク
ロロ−4−ニトロフェノールがp−ニトロフェノールよ
りも感度が優れていることがわかる。
較および実施例Bと比較例B−1の比較より、非還元末
端に3−ケトブチリデン基を有する基質よりも、β−ガ
ラクトシル基を有する本発明の基質では1分間当たりの
吸光度変化が大きく、試薬ブランクが小さい。すなわち
本発明の基質では非還元末端のガラクトシル基が試料中
のα−アミラーゼとの親和性に優れ、非還元末端の修飾
基として好ましいことがわかる。また実施例Aと比較例
A−1、A−2の比較および実施例Bと比較例B−1、
B−2の比較より、非還元末端に修飾基を有しない基質
よりも本発明の基質は測定感度が高いことがわかる。さ
らにA群とB群の比較により、アグリコンとして2−ク
ロロ−4−ニトロフェノールがp−ニトロフェノールよ
りも感度が優れていることがわかる。
【0029】
【発明の効果】本発明の試薬では非還元末端にβ−ガラ
クトシル基を有するグルコース数が2または3であり、
還元末端に遊離後、発色する測定可能な物質を有するマ
ルトオリゴ糖を基質とし、β−グルコシダーゼのみを使
用することにより、1試薬系における試薬ブランクの上
昇を回避し、かつαーアミラーゼの作用様式をより純粋
に反映する、高感度のアミラーゼ活性測定試薬を得るこ
とができる。
クトシル基を有するグルコース数が2または3であり、
還元末端に遊離後、発色する測定可能な物質を有するマ
ルトオリゴ糖を基質とし、β−グルコシダーゼのみを使
用することにより、1試薬系における試薬ブランクの上
昇を回避し、かつαーアミラーゼの作用様式をより純粋
に反映する、高感度のアミラーゼ活性測定試薬を得るこ
とができる。
Claims (1)
- 【請求項1】 一般式 (I) 【化1】 (式中、R1 およびR2 は互いに異なる水素またはβ−
ガラクトピラノシル基を示し、R3 は遊離後、発色する
測定可能な物質を示す。nは0または1を示す。)で表
されるマルトオリゴ糖誘導体を基質とし、追随酵素とし
てβ−グルコシダーゼを用いることを特徴とするα−ア
ミラーゼ活性測定用試薬。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP24944293A JPH0799997A (ja) | 1993-10-05 | 1993-10-05 | α−アミラーゼ活性測定用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP24944293A JPH0799997A (ja) | 1993-10-05 | 1993-10-05 | α−アミラーゼ活性測定用試薬 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0799997A true JPH0799997A (ja) | 1995-04-18 |
Family
ID=17193035
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP24944293A Pending JPH0799997A (ja) | 1993-10-05 | 1993-10-05 | α−アミラーゼ活性測定用試薬 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPH0799997A (ja) |
-
1993
- 1993-10-05 JP JP24944293A patent/JPH0799997A/ja active Pending
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