DE69839021T2

DE69839021T2 - Neuartige exendin agonisten

Info

Publication number: DE69839021T2
Application number: DE69839021T
Authority: DE
Inventors: Nigel Robert Solana Beach BEELEY; Kathryn S. San Diego PRICKETT
Original assignee: Amylin Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Amylin Pharmaceuticals LLC
Priority date: 1997-11-14
Filing date: 1998-11-13
Publication date: 2009-01-15
Anticipated expiration: 2018-11-14
Also published as: PT1032587E; DK1032587T3; WO1999025728A1; EP1032587B2; CY1107883T1; DK1032587T4; DE69839021D1; CA2309356A1; ES2297902T3; NZ504256A; AU756836B2; BR9814189A; JP2001523688A; HK1031120A1; EP1032587B1; ATE383867T1; ES2297902T5; DE69839021T3; AU1458899A; CA2309356C

Description

Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf neue Verbindungen, welche eine Aktivität als Exendin-Agonisten aufweisen.
Hintergrund
Die folgende Beschreibung enthält Information, die nützlich zum Verständnis der Erfindung sein kann.
Exendin
Die Exendine sind Peptide, welche in dem Gift des Gila-Monsters gefunden werden, einer in Arizona und Nordmexiko heimischen Eidechse. Exendin-3 [SEQ ID NO: 1] liegt in dem Gift von Heloderma horridum vor, und Exendin-4 [SEQ ID NO: 2] liegt in dem Gift von Heloderma suspectum vor (Eng., J., et al., J. Biol. Chem., 265: 20259–62, 1990; Eng., J., et al., J. Biol. Chem., 267: 7402–05, 1992). Die Aminosäuresequenz von Exendin-3 ist in 1 gezeigt. Die Aminosäuresequenz von Exendin-4 ist in 2 gezeigt. Die Exendine weisen einige Sequenzähnlichkeit mit mehreren Mitgliedern der Glucacon-ähnlichen Peptidfamilie auf, wobei die höchste Homologie von 53% zu GLP-1[7–36]NH₂ [SEQ ID. NO: 3] besteht (Goke, et al., J. Biol. Chem., 268: 1965–55, 1993). GLP-1[7–36]NH₂, auch als Proglucagon [78–107] oder einfach, wie hierin am häufigsten benutzt, als "GLP-1" bekannt, weist einen insulinotrophen Effekt auf, die Insulinsekretion von β-Zellen des Pankreas stimulierend; GLP-1 inhibiert auch die Glucagonsekretion aus α-Zellen des Pankreas (Ørsov, et al., Diabetes, 42: 658–61, 1993; D'Alessio, et al., J. Clin. Invest., 97: 133–38, 1996). Die Aminosäuresequenz von GLP-1 ist in 3 gezeigt. Es wird von GLP-1 berichtet, dass es das Entleeren des Magens (Willms B, et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 81(1): 327–32, 1996; Wettergren A, et al., Dig Dis Sci 38(4): 665–73, 1993) und die Sekretion von Ma gensäure inhibiert. Schjoldager BT, et al., Dig. Dis. Sci. 34(5): 7–03–8, 1989; O'Halloran DJ, et al., J. Endocrinol. 126(1): 169–73, 1990; Wettergren A, et al., Dig. Dis. Sci. 38(4): 665–73, 1993). GLP-1[7–37], welches einen zusätzlichen Glycinrest an seinem Carboxyterminus aufweist, stimuliert auch die Insulinsekretion bei Menschen (Ørsov, et al., Diabetes, 42: 658–61, 1993).
Es wurde ein Transmembran G-Protein-Adenylatcyclasegekoppelter Rezeptor aus einer β-Zelllinie geklont, von dem angenommen wird, dass er für den insulinotrophen Effekt von GLP-1 verantwortlich ist (Thorens, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 8641–45 (1992)), auf den in der Folge als "klonierter GLP-1 Rezeptor" Bezug genommen wird. Es wird berichtet, dass Exendin-4 an GLP–Rezeptoren auf Insulin-sekretierenden βTC1-Zellen, an verteilten azinösen Zellen des Pankreas von Meerschweinchen und an parietalen Zellen des Magens wirkt; es wird von dem Peptid auch berichtet, dass es die Freisetzung von Somatostatin stimuliert und die Freisetzung von Gastrin in isolierten Mägen inhibiert (Goke, et al., J. Biol. Chem. 268: 19650–55, 1993; Schepp, et al., Eur. J. Pharmacol., 69: 183–91, 1994; Eissele, et al., Life Sci., 55: 629–34, 1994). Es wurde berichtet, dass Exendin-3 und Exendin-4 cAMP-Produktion in und Amylasefreisetzung aus pankreatischen acinösen Zellen stimuliert (Malhotra, R., et al., Regulatory Peptides, 41: 149–56, 1992; Raufman, et al., J. Biol. Chem. 267: 21432–37, 1992; Singh, et al., Regul. Pept. 53: 47–59, 1994). Basierend auf ihren insulinotrophen Aktivitäten wurde die Verwendung von Exendin-3 und Exendin-4 zur Behandlung von Diabetes mellitus und zur Vorsorge gegen Hyperglykämie vorgeschlagen (Eng, US-Patent Nr. 5,424,286 ).
Agenzien, welche dazu dienen, die Entleerung des Magens zu verzögern, haben als diagnostische Mittel bei gastrointestinalen radiologischen Untersuchungen einen Platz in der Medizin gefunden. Zum Beispiel ist Glucagon ein Polypeptidhormon, welches von den α-Zellen der Langerhans'schen Inseln des Pankreas produziert wird. Es ist ein hyperglykämisches Agens, welches Glucose durch die Aktivierung von Glycogenolyse in der Leber mobilisiert. Es kann in einem geringeren Ausmaß die Sekretion von Insulin aus dem Pankreas stimulieren. Glucagon wird bei der Behandlung von Insulin-induzierter Hypoglykämie verwendet, z. B., wenn eine Verabreichung von Glucose intravenös nicht möglich ist. Da Glucagon die Motilität des Gastrointestinaltrakts reduziert, wird es jedoch auch als diagnostisches Mittel bei gastrointestinalen radiologischen Untersuchungen genutzt. Glucagon wurde auch in mehreren Studien zur Behandlung verschiedener schmerzhafter gastrointestinaler Störungen, welche mit Krämpfen assoziiert sind, verwendet. Daniel, et al. (Br. Med. J., 3: 720, 1974) berichteten von einem schnelleren Nachlassen von Symptomen akuter Divertikulitis bei mit Glucagon behandelten Patienten, verglichen mit denen, welche mit Analgetika oder Antispasmodika behandelt wurden. Ein Übersichtsartikel von Glauser, et al., (J. Am. Coll. Emergency Physns, 8: 228, 1979) beschrieb ein Nachlassen von akutem ösophagialen Nahrungsmittelverschluss nach Glucagontherapie. In einer anderen Studie befreite Glucagon 21 Patienten mit Gallentrakterkrankung deutlich von Schmerzen und Empfindlichkeit, verglichen mit 22 mit Placebo behandelten Patienten (M. J. Stower, et al., Br. J. Surg., 69: 591–2, 1982).
Verfahren zur Regulation der gastrointestinalen Motilität unter Verwendung von Amylin-Agonisten sind in der internationalen Anmeldung Nr. WO 95/07098 , veröffentlicht am 16. März 1995, beschrieben.
Verfahren zur Regulation der gastrointestinalen Motilität unter Verwendung von Exendin-Agonisten sind in US 6,858,576 , eingereicht am 8. August 1997, betitelt "Verfahren zur Regulation der gastrointestinalen Motilität" beschrieben.
Verfahren zur Reduktion der Nahrungsaufnahme unter Verwendung von Exendin-Agonisten sind in US 6,956,026 , am 7. Januar 1998 eingereicht, betitelt „Use of Exendin and Agonists thereof for the Reduction of Food Intake", beschrieben.
Neue agonistische Exendin-Verbindungen sind in der PCT-Anmeldung WO 99/07404 , eingereicht am 6. August 1998, betitelt "Neue agonistische Exendin-Verbindungen", beschrieben. Andere neue agonistische Exendin-Verbindungen sind in der PCT-Anmeldung WO 99/25728 , eingereicht am 13. November 1998, betitelt "Neue agonistische Exendin-Verbindungen", beschrieben.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Gemäß einem Aspekt stellt die vorliegende Erfindung neue Peptidverbindungen nach Formel (I) [SEQ ID NO: 4] zur Verfügung, wobei die Peptidverbindungen eine agonistische Exendin-Aktivität zeigen:

Xaa₁ Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaa₆ Xaa₇ Xaa₈ Xaa₉ Xaa₁₀ Xaa₁₁ Xaa₁₂ Xaa₁₃ Xaa₁₄ Xaa₁₅ Xaa₁₆ Xaa₁₇ Ala Xaa₁₉ Xaa₂₀ Xaa₂₁ Xaa₂₂ Xaa₂₃ Xaa₂₄ Xaa₂₅ Xaa₂₆ Xaa₂₇ Xaa₂₈ –Z₁;

wobei

Xaa₁ His, Arg, Tyr, Ala, Norval, Val oder Norleu ist;
Xaa₂ Ser, Gly, Ala oder Thr ist;
Xaa₃ Ala, Asp oder Glu ist;
Xaa₄ Ala, Norval, Val, Norleu oder Gly ist;
Xaa₅ Ala oder Thr ist;
Xaa₆ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist;
Xaa₇ Thr oder Ser ist;
Xaa₈ Ala, Ser oder Thr ist;
Xaa₉ Ala, Norval, Val, Norleu, Asp oder Glu ist;
Xaa₁₀ Ala, Leu, Ile, Val, Pentylglycin oder Met ist;
Xaa₁₁ Ala oder Ser ist;
Xaa₁₂ Ala oder Lys ist;
Xaa₁₃ Ala oder Gln ist;
Xaa₁₄ Ala, Leu, Ile, Pentylglycin, Val oder Met ist;
Xaa₁₅ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₆ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₇ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₉ Ala oder Val ist;
Xaa₂₀ Ala oder Arg ist;
Xaa₂₁ Ala oder Leu ist;
Xaa₂₂ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist;
Xaa₂₃ Ile, Val, Leu, Pentylglycin, Tert-Butylglycin oder Met ist;
Xaa₂₄ Ala, Glu oder Asp ist;
Xaa₂₅ Ala, Trp, Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist;
Xaa₂₆ Ala oder Leu ist;
Xaa₂₇ Ala oder Lys ;
Xaa₂₈ Ala oder Asn ist; und
Z₁ ist: Gly Gly –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ –Z₂ oder
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ Xaa₃₉ –Z₂;

wobei Xaa₃₁, Xaa₃₆, Xaa₃₇ und Xaa₃₈ unabhängig voneinander aus der Gruppe bestehend aus Pro, Homoprolin, 3Hyp, 4Hyp, Thioprolin, N-Alkylglycin, N-Alkylpentylglycin und N-alkylalanin ausgewählt sind; Xaa₃₉ Ser oder Tyr ist; und Z₂ -OH oder -NH₂ ist;

vorausgesetzt, daß nicht mehr als drei von Xaa₃, Xaa₄, Xaa₅, Xaa₆, Xaa₈, Xaa₉, Xaa₁₀, Xaa₁₁, Xaa₁₂, Xaa₁₃, Xaa₁₄, Xaa₁₅, Xaa₁₆, Xaa₁₇, Xaa₁₉, Xaa₂₀, Xaa₂₁, Xaa₂₄, Xaa₂₅, Xaa₂₆, Xaa₂₇ und Xaa₂₈ Ala sind; und ebenfalls vorausgesetzt, daß wenn Xaa₁ His, Arg oder Tyr ist, dann mindestens eins von Xaa₃, Xaa₄ und Xaa₉ Ala ist; und pharmazeutisch verträgliche Salze davon; und wobei Xaa₁, Xaa₃ oder Xaa₉ Ala ist.
Die vorliegende Erfindung stellt ferner die Verwendung einer solchen Verbindung zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung von Diabetes mellitus oder zur Behandlung eines hyperglykämischen Zustands in einem Säuger bereit.
In einer weiteren Ausführungsform bezieht sich die Erfindung auf eine Peptidverbindung der Formel (II) [SEQ ID Nr. 94], wobei die Peptidverbindung Exendin-Agonistenaktivität aufweist:

Xaa₁ Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaa₆ Xaa₇ Xaa₈ Xaa₉ Xaa₁₀ Xaa₁₁ Xaa₁₂ Xaa₁₃ Xaa₁₄ Xaa₁₅ Xaa₁₆ Xaa₁₇ Ala Xaa₁₉ Xaa₂₀ Xaa₂₁ Xaa₂₂ Xaa₂₃ Xaa₂₄ Xaa₂₅ Xaa₂₆ X₁ –Z₁;

wobei

Xaa₁ His, Arg, Tyr, Ala, Norval, Val, Norleu oder 4-Imidazopropionyl ist;
Xaa₂ Ser, Gly, Ala oder Thr ist;
Xaa₃ Ala, Asp oder Glu ist;
Xaa₄ Ala, Norval, Val, Norleu oder Gly ist;
Xaa₅ Ala oder Thr ist;
Xaa₆ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist;
Xaa₇ Thr oder Ser ist;
Xaa₈ Ala, Ser oder Thr ist;
Xaa₉ Ala, Norval, Val, Norleu, Asp oder Glu ist;
Xaa₁₀ Ala, Leu, Ile, Val, Pentylglycin oder Met ist;
Xaa₁₁ Ala oder Ser ist;
Xaa₁₂ Ala oder Lys ist;
Xaa₁₃ Ala oder Gln ist;
Xaa₁₄ Ala, Leu, Ile, Pentylglycin, Val oder Met ist;
Xaa₁₅ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₆ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₇ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₈ Ala oder Val ist;
Xaa₂₀ Ala oder Arg ist;
Xaa₂₁ Ala, Leu oder Lys-NH^ε-R, wobei R Lys ist, Arg, C₁-C₁₀ geradkettiges oder verzweigtes Alkanoyl oder Cycloalkylkanoyl ist;
Xaa₂₂ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist;
Xaa₂₃ Ile, Val, Leu, Pentylglycin, Tert-Butylglycin oder Met ist;
Xaa₂₄ Ala, Glu oder Asp ist;
Xaa₂₅ Ala, Trp, Phe, Tyr oder Naphtylalanin ist,
Xaa₂₆ Ala Oder Leu ist;
X₁ Lys Asn, Asn Lys, Lys-NH^ε-R Asn, Asn Lys-NH^ε-R, Lys-NH^ε-R Ala, Ala Lys-NH^ε-R, wobei R Lys, Arg, C₁-C₁₀ geradkettiges oder verzweigtes Alkanoyl oder Cycloalkylalkanoyl ist; und

Z₁ ist: Gly Gly –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ –Z₂, oder
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ –Z₂ ist;
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ Xaa₃₉ –Z₂;

wobei Xaa₃₁, Xaa₃₆, Xaa₃₇ und Xaa₃₈ unabhängig voneinander aus der Gruppe bestehend aus Pro, Homoprolin, 3Hyp, 4Hyp, Thioprolin, N-Alkylglycin, N-Alkylpentylglycin und N-Alkylalanin ausgewählt sind; Xaa₃₉ Ser oder Tyr ist; und Z₂ -OH oder -NH₂ ist;

vorausgesetzt, daß nicht mehr als drei von Xaa₃, Xaa₄, Xaa₅, Xaa₆, Xaa₈, Xaa₉, Xaa₁₀, Xaa₁₁, Xaa₁₂, Xaa₁₃, Xaa₁₄, Xaa₁₅, Xaa₁₆, Xaa₁₇, Xaa₁₉, Xaa₂₀, Xaa₂₁, Xaa₂₄, Xaa₂₅, Xaa₂₆, Xaa₂₇ und Xaa₂₈ Ala sind; und ebenfalls vorausgesetzt, daß wenn Xaa₁ His, Arg oder Tyr ist, dann mindestens eins von Xaa₃, Xaa₄, und Xaa₉ Ala ist.
Zusätzlich stehen die folgenden Abkürzungen für das Folgende:
„Norval" bezieht sich auf Norvalin.
„Norleu" bezieht sich auf Norleucin.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
1 zeigt die Wirkung von verschiedenen Konzentrationen von Verbindung 1 [SEQ ID NO. 5] auf die Senkung von Blut-Glukose.
2 zeigt die Wirkung von verschiedenen Konzentrationen von Verbindung 1 [SEQ ID NO. 5] auf die Entleerung des Magens.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Gemäß der vorliegenden Erfindung werden neue Peptidverbindungen nach Formel (I) [SEQ ID NO: 4] zur Verfügung gestellt:
wobei die Peptidverbindung eine agonistische Exendin-Aktivität zeigt:

Xaa₁ Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaa₆ Xaa₇ Xaa₈ Xaa₉ Xaa₁₀ Xaa₁₁ Xaa₁₂ Xaa₁₃ Xaa₁₄ Xaa₁₅ Xaa₁₆ Xaa₁ Ala Xaa₁₉ Xaa₂₀ Xaa₂₁ Xaa₂₂ Xaa₂₃ Xaa₂₄ Xaa₂₅ Xaa₂₆ Xaa₂₇ Xaa₂₈ –Z₁;

wobei

Xaa₁ His, Arg, Tyr, Ala, Norval, Val oder Norleu ist;
Xaa₂ Ser, Gly, Ala oder Thr ist;
Xaa₃ Ala, Asp oder Glu ist;
Xaa₄ Ala, Norval, Val, Norleu oder Gly ist;
Xaa₅ Ala oder Thr ist;
Xaa₆ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist;
Xaa₇ Thr oder Ser ist;
Xaa₈ Ala, Ser oder Thr ist;
Xaa₉ Ala, Norval, Val, Norleu, Asp oder Glu ist;
Xaa₁₀ Ala, Leu, Ile, Val, Pentylglycin oder Met ist;
Xaa₁₁ Ala oder Ser ist;
Xaa₁₂ Ala oder Lys ist;
Xaa₁₃ Ala oder Gln ist;
Xaa₁₄ Ala, Leu, Ile, Pentylglycin, Val oder Met ist;
Xaa₁₅ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₆ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₇ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₉ Ala oder Val ist;
Xaa₂₀ Ala oder Arg ist;
Xaa₂₁ Ala oder Leu ist;
Xaa₂₂ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist;
Xaa₂₃ Ile, Val, Leu, Pentylglycin, Tert-Butylglycin oder Met ist;
Xaa₂₄ Ala, Glu oder Asp ist;
Xaa₂₅ Ala, Trp, Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist;
Xaa₂₆ Ala oder Leu ist;
Xaa₂₇ Ala oder Lys;
Xaa₂₈ Ala oder Asn ist; und
Z₁ ist: Gly Gly –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ –Z₂ oder
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ Xaa₃₉ –Z₂;

wobei Xaa₃₁, Xaa₃₆, Xaa₃₇ und Xaa₃₈ unabhängig voneinander aus der Gruppe bestehend aus Pro, Homoprolin, 3Hyp, 4Hyp, Thioprolin, N-Alkylglycin, N-Alkylpentylglycin und N-alkylalanin ausgewählt sind; Xaa₃₉ Ser oder Tyr ist; und Z₂ -OH oder -NH₂ ist;

vorausgesetzt, daß nicht mehr als drei von Xaa₃, Xaa₄, Xaa₅, Xaa₆, Xaa₈, Xaa₉, Xaa₁₀, Xaa₁₁, Xaa₁₂, Xaa₁₃, Xaa₁₄, Xaa₁₅, Xaa₁₆, Xaa₁₇, Xaa₁₉, Xaa₂₀, Xaa₂₁, Xaa₂₄, Xaa₂₅, Xaa₂₆, Xaa₂₇ und Xaa₂₈ Ala sind; und ebenfalls vorausgesetzt, daß wenn Xaa₁ His, Arg oder Tyr ist, dann mindestens eins von Xaa₃, Xaa₄ und Xaa₉ Ala ist; und pharmazeutisch verträgliche Salze davon; und wobei Xaa₁, Xaa₃ oder Xaa₉ Ala ist.
Innerhalb der Verbindungen definiert durch die Formel:
kann Xaa₂ Gly sein,
kann Xaa₄ Ala sein,
kann Xaa₁₄ Leu, Pentylglycin oder Met sein,
kann Xaa₂₅ Trp oder Phe sein,
kann Xaa₆ Ala, Phe oder Naphtylalanin sein,
kann Xaa₂₂ Phe oder Naphtylalanin sein,
kann Xaa₂₃ Ile oder Val sein,
können Xaa₃₁, Xaa₃₆, Xaa₃₇ und Xaa₃₈ unabhängig voneinander aus der Gruppe bestehend aus Pro, Homoprolin, Thioprolin und N-alkylalanin ausgewählt sein;
kann Xaa₃₉ Ser sein;
kann Z₂ -NH₂ sein.
Weitere Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung werden durch die Verbindungen dargestellt, welche eine Aminosäuresequenz ausgewählt aus SEQ ID NOs: 72, 73, 75–78, 80–83, 86, 88–90 und 92–93 aufweisen.
Die Verbindungen können ferner auch als Zusammensetzung vorliegen, welche diese Verbindungen, wie oben definiert, in einem pharmazeutisch akzeptablen Träger umfasst.
In einem weiteren Aspekt bezieht sich die vorliegende Erfindung auf die Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 oder 10 zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung von Diabetes mellitus. Die Zusammensetzung kann ferner eine therapeutisch effektive Menge eines Insulins umfassen.
Nach einem weiteren Aspekt bezieht sich die vorliegende Erfindung auf die Verwendung einer der oben genannten Verbindungen zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung eines hyperglykämischen Zustands bei einem Säuger.
In einer alternativen Ausführungsform richtet sich die vorliegende Erfindung auf eine Peptidverbindung nach Formel (II) [SEQ ID NO: 94], wobei die Peptidverbindung eine agonistische Exendin-Aktivität aufweist:

Xaa₁ Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaa₆ Xaa₇ Xaa₈ Xaa₉ Xaa₁₀ Xaa₁₁ Xaa₁₂ Xaa₁₃ Xaa₁₄ Xaa₁₅ Xaa₁₆ Xaa₁₇ Ala Xaa₁₉ Xaa₂₀ Xaa₂₁ Xaa₂₂ Xaa₂₃ Xaa₂₄ Xaa₂₅ Xaa₂₆ X₁ –Z₁;

wobei

Xaa₁ His, Arg, Tyr, Ala, Norval, Val, Norleu oder 4-Imidazopropionyl ist;
Xaa₂ Ser, Gly, Ala oder Thr ist;
Xaa₃ Ala, Asp oder Glu ist;
Xaa₄ Ala, Norval, Val, Norleu oder Gly ist;
Xaa₅ Ala oder Thr ist;
Xaa₆ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist;
Xaa₇ Thr oder Ser ist;
Xaa₈ Ala, Ser oder Thr ist;
Xaa₉ Ala, Norval, Val, Norleu, Asp oder Glu ist;
Xaa₁₀ Ala, Leu, Ile, Val, Pentylglycin oder Met ist;
Xaa₁₁ Ala oder Ser ist;
Xaa₁₂ Ala oder Lys ist;
Xaa₁₃ Ala oder Gln ist;
Xaa₁₄ Ala, Leu, Ile, Pentylglycin, Val oder Met ist;
Xaa₁₅ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₆ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₇ Ala oder Glu ist;
Xaa₁₈ Ala oder Val ist;
Xaa₂₀ Ala oder Arg ist;
Xaa₂₁ Ala, Leu oder Lys-NH^ε-R, wobei R Lys ist, Arg, C₁-C₁₀ geradkettiges oder verzweigtes Alkanoyl oder Cycloalkylkanoyl ist;
Xaa₂₂ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist;
Xaa₂₃ Ile, Val, Leu, Pentylglycin, Tert-Butylglycin oder Met ist;
Xaa₂₄ Ala, Glu oder Asp ist;
Xaa₂₅ Ala, Trp, Phe, Tyr oder Naphtylalanin ist,
Xaa₂₆ Ala Oder Leu ist;
X₁ Lys Asn, Asn Lys, Lys-NH^ε-R Asn, Asn Lys-NH^ε-R, Lys-NH^ε-R Ala, Ala Lys-NH^ε-R, wobei R Lys, Arg, C₁-C₁₀ geradkettiges oder verzweigtes Alkanoyl oder Cycloalkylalkanoyl ist; und
Z₁ ist: Gly Gly –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ –Z₂,
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ –Z₂, oder
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ –Z₂ ist;
Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ Xaa₃₉ –Z₂;

wobei Xaa₃₁, Xaa₃₆, Xaa₃₇ und Xaa₃₈ unabhängig voneinander aus der Gruppe bestehend aus Pro, Homoprolin, 3Hyp, 4Hyp, Thioprolin, N-Alkylglycin, N-Alkylpentylglycin und N-Alkylalanin ausgewählt sind; Xaa₃₉ Ser oder Tyr ist; und Z₂ -OH oder -NH₂ ist;

vorausgesetzt, daß nicht mehr als drei von Xaa₃, Xaa₄, Xaa₅, Xaa₆, Xaa₈, Xaa₉, Xaa₁₀, Xaa₁₁, Xaa₁₂, Xaa₁₃, Xaa₁₄, Xaa₁₅, Xaa₁₆, Xaa₁₇, Xaa₁₉, Xaa₂₀, Xaa₂₁, Xaa₂₄, Xaa₂₅, Xaa₂₆, Xaa₂₇ und Xaa₂₈ Ala sind; und ebenfalls vorausgesetzt, daß wenn Xaa₁ His, Arg oder Tyr ist, dann mindestens eins von Xaa₃, Xaa₄, und Xaa₉ Ala ist; und pharmazeutisch akzeptable Salze davon; und wobei Xaa₁, Xaa₃ oder Xaa₉ Ala ist.
Innerhalb der Verbindungen definiert durch die Formel:
kann Xaa₂ Gly sein,
kann Xaa₄ Ala sein,
kann Xaa₁₄ Leu, Pentylglycin oder Met sein,
kann Xaa₂₅ Trp oder Phe sein,
kann Xaa₆ Ala, Phe oder Naphtylalanin sein,
kann Xaa₂₂ Phe oder Naphtylalanin sein,
kann Xaa₂₃ Ile oder Val sein,
können Xaa₃₁, Xaa₃₆, Xaa₃₇ und Xaa₃₈ unabhängig voneinander aus der Gruppe bestehend aus Pro, Homoprolin, Thioprolin und N-alkylalanin ausgewählt sein;
kann Xaa₃₉ Ser sein;
kann Z₂ -NH₂ sein.
In einer weiteren Ausführungsform ist die Erfindung auf eine dieser Verbindungen gerichtet, wobei X₁ Lys, Asn, Lys-NH^ε-R Asn oder Lys-NH^ε-R, Ala, sein kann, wobei R Lys, Arg, C₁-C₁₀ geradkettiges oder verzweigtes Alkanoyl sein kann.
Weitere von den Ansprüchen umfasste Verbindungen werden durch die obige Formel charakterisiert, wobei Xaa₂₁ Lys-NH^ε-R ist, wobei R Lys, Arg, C₁-C₁₀ geradkettiges oder verzweigtes Alkanoyl oder Cycloalkylkanoyl ist.
Die Verbindungen können z. B. eine Aminosäuresequenz ausgewählt aus SEQ ID NOs: 105, 106, 103 und 110 aufweisen.
Die Verbindungen können ferner auch als Zusammensetzung vorliegen, welche eine der obigen Verbindungenen in einem pharmazeutisch akzeptablen Träger umfasst.
Die oben in Bezug genommenen Verbindungen bilden Salze mit verschiedenen anorganischen und organischen Säuren und Basen. Solche Salze schließen Salze ein, welche mit organischen und anorganischen Säuren hergestellt wurden, z. B. HCl, HBr, H₂SO₄, H₃PO₄, Trifluoressigsäure, Essigsäure, Ameisensäure, Methansulfonsäure, Toluensulfonsäure, Äpfelsäure, Fumarsäure und Camphersulfonsäure. Mit Basen hergestellte Salze schließen Ammoniumsalze, Alkalimetallsalze, z. B. Natrium- und Kaliumsalze und Erdalkalisalze, z. B. Calcium- und Magnesiumsalze, ein. Acetat-, Hydrochlorid- und Trifluoressigsäuresalze sind bevorzugt. Die Salze können durch konventionelle Mittel gebildet werden, wie durch ein zur Reaktion Bringen der freien Säure- oder Baseformen des Produkts mit einem oder mehr Äquivalenten der geeigneten Base oder Säure in einem Lösungsmittel oder in einem Medi um, in dem das Salz nicht löslich ist, oder in einem Lösungsmittel wie Wasser, welches dann im Vakuum oder durch Gefriertrocknung entfernt wird, oder durch Austausch der Ionen eines bestehenden Salzes gegen ein anderes Ion mit einem geeigneten Ionenaustauschharz.
Nützlichkeit
Die oben beschriebenen Verbindungen sind in Anbetracht ihrer pharmakologischen Eigenschaften nützlich. Insbesondere sind die Verbindungen der Erfindung Exendin-Agonisten und besitzen eine Aktivität als Agenzien, um gastrische Motilität zu regulieren und eine Entleerung des Magens zu verlangsamen, wie durch die Fähigkeit erwiesen wird, die post-prandialen Glucosespiegel in Säugern zu reduzieren.
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung sind nützlich bei wissenschaftlichen in vitro und in vivo Verfahren zur Erforschung von Exendinen und Exendin-Agonisten, z. B. in Verfahren wie denen, die in Beispielen A–E unten beschrieben sind.
Herstellung der Verbindungen
Die Verbindungen der vorliegenden Erfindung können unter Verwendung von Standard-Festphasen Peptidsynthese-Techniken und bevorzugt mit einem automatisierten oder semi-automatisierten Peptid-Synthesizer hergestellt werden. Typischerweise werden unter Verwendung solcher Techniken eine α-N-Carbamoyl geschützte Aminosäure und eine Aminosäure, welche mit der wachsenden Peptidkette auf einem Harz verbunden ist, bei Raumtemperatur in einem inerten Lösungsmittel wie Dimethylformamid, N-Methylpyrrolidinon oder Methylenchlorid in der Anwesenheit von Kopplungsmitteln wie Dicyclohexylcarbodiimid und 1-Hydroxybenzotriazol in der Anwesenheit einer Base wie Diisopropylethylamin gekoppelt. Die α-N-Carbamoyl-Schutzgruppe wird von dem sich ergebenden Peptidharz unter Verwendung eines Reagenzes wie Trifluoressigsäure oder Piperidin entfernt, und die Kopp lungsreaktion wird mit der nächsten gewünschten N-geschützten Aminosäure wiederholt, welche zu der Peptidkette hinzugefügt werden soll. Geeignete N-Schutzgruppen sind in der Technik gut bekannt, wobei t-Butyloxycarbonyl (tBoc) und Fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) hierin bevorzugt sind.
Die Lösungsmittel, Aminosäurederivate und 4-Methylbenzhydryl-Aminharz, welche in dem Peptid-Synthesizer verwendet werden, können von Applied Biosystems Inc. (Foster City, CA) erworben werden. Die folgenden an den Seitenketten geschützten Aminosäuren können von Applied Biosystems, Inc. erworben werden: Boc-Arg(Mts), Fmoc-Arg(Pmc), Boc-Thr(Bzl), Fmoc-Thr(t-Bu), Boc-Ser(Bzl), Fmoc-Ser(t-Bu), Boc-Tyr(BrZ), Fmoc-Tyr(t-Bu), Boc-Lys(Cl-Z), Fmoc-Lys(Boc), Boc-Glu(Bzl), Fmoc-Glu(t-Bu), Fmoc-His(Trt), Fmoc-Asn(Trt) und Fmoc-Gln(Trt). Boc-His(BOM) kann von Applied Biosystems, Inc. oder Bachem Inc. (Torrance, CA) erworben werden. Anisol, Dimethylsulfid, Phenol, Ethandithiol und Thioanisol können von Aldrich Chemical Company (Milwaukee, WI) erhalten werden. Air Products and Chemicals (Allentown, PA) liefert HF. Ethylether, Essigsäure und Methanol können von Fisher Scientific (Pittsburgh, PA) erworben werden.
Eine Festphasen-Peptidsynthese kann mit einem automatischen Peptid-Synthesizer (Model 430A, Applied Biosystems Inc., Foster City, CA) unter Verwendung des NMP/HOBt (Option 1) Systems und tBoc- oder Fmoc-Chemie mit Capping durchgeführt werden (siehe Handbuch von Applied Biosystems für den ABI 430A Peptid-Synthesizer, Version 1.3B, 1. Juli 1988, Abschnitt 6, Seiten 49–70, Applied Biosystems, Inc., Foster City, CA). Boc-Peptidharze können mit HF gespalten werden (–5°C bis 0°C, 1 Stunde). Das Peptid kann von dem Harz durch Abwechslung von Wasser und Essigsäure extrahiert werden, und die Filtrate werden lyophilisiert. Die Fmoc-Peptidharze können gemäß Standardverfahren gespalten werden (Introduction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems, Inc., 1990, Seiten 6–12). Peptide können auch unter Verwendung eines Advanced Chem Tech Synthesizers (Model MPS 350, Louisville, Kentucky) zusammengesetzt werden.
Peptide können durch RP-HPLC (präparativ und analytisch) unter Verwendung eines Waters Delta Prep 3000 Systems gereinigt werden. Eine C4, C8 oder C18 präparative Säule (10 μ, 2,2 × 25 cm; Vydac, Hesperia, CA) kann zur Isolation von Peptiden verwendet werden, und Reinheit kann unter Bestimmung einer C4, C8 oder C18 analytischen Säule bestimmt werden (5 μ, 0,46 × 25 cm; Vydac). Lösungsmittel (A = 0,1% TFA/Wasser und B = 0,1% TFA/CH₃CN) können der analytischen Säule bei einer Flussrate von 1,0 ml/min und der präparativen Säule bei 15 ml/min zugeführt werden. Aminosäureanalysen können mit dem Waters Pico Tag System durchgeführt und unter Verwendung des Maxima Programms prozessiert werden. Peptide können durch Säurehydrolyse in der Dampfphase (115°C, 20–24 h) hydrolysiert werden. Hydrolysate können mit Standardverfahren derivatisiert und analysiert werden (Cohen et al., The Pico Tag Method: A Manual of Advanced Techniques for Amino Acid Analysis, Seiten 11–52, Millipore Corporation, Milford, MA (1989)). Eine schnelle Atombombardmentanalyse (fast atom bombardment analysis) kann mit M-Scan, Incorporated durchgeführt werden (West Chester, PA). Eine Massenkalibration kann unter Verwendung von Cäsiumiodid oder Cäsiumiodid/Glycerol durchgeführt werden. Eine Plasmadesorptionsionisationsanalyse unter Verwendung eines Nachweises der Flugzeit (time of flight detection) kann mit einem Applied Biosystems Bio-Ion 20 Massenspektrometer durchgeführt werden. Elektrospraymassenspektroskopie kann mit einer VG-Trio-Maschine durchgeführt werden.
In der Erfindung nützliche Peptidverbindungen können auch unter Verwendung von Gentechnik hergestellt werden, unter Verwendung von nun in der Technik bekannten Methoden. Siehe z. B. Sambrook et al., Molecular Cloning; A Laboratory Manual, 2. Auflage, Cold Spring Harbor.
Formulierung und Verabreichung
Erfindungsgemäße Verbindungen sind in Anbetracht ihrer Exendin-artigen Effekte nützlich, und können bequemerweise in der Form von Formulierungen zur Verfügung gestellt werden, die zur parenteralen (einschließlich intravenösen, intramuskulären und subkutanen) oder nasalen, sublingualen, buccalen oder oralen Verabreichung geeignet sind. In einigen Fällen wird es bequem sein, ein Exendin und ein anderes Agens gegen Entleerung des Magens, so wie Glucagon, ein Amylin oder einen Amylin-Agonisten, in einer einzigen Zusammensetzung oder Lösung zur gemeinsamen Verabreichung zur Verfügung zu stellen. In anderen Fällen kann es von größerem Vorteil sein, ein anderes Agens gegen die Entleerung getrennt von dem Exendin-Agonisten zu verabreichen. In noch anderen Fällen kann es von Vorteil sein, einen Exendin-Agonisten entweder gemeinsam formuliert oder getrennt von anderen Glucose-senkenden Agenzien wie Insulin zur Verfügung zu stellen. Ein geeignetes Format zur Verabreichung kann am besten für jeden Patienten individuell durch einen medizinischen Praktiker bestimmt werden. Geeignete pharmazeutisch akzeptable Träger und ihre Formulierung sind in Standardwerken zur Formulierung beschrieben, z. B. Remington's Pharmaceutical Sciences von E. W. Martin. Siehe auch Wang, Y. J. und Hanson, M. A. "Parenteral Formulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers," Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report Nr. 10, Supp. 42: 2S (1988).
In der Erfindung nützliche Verbindungen können als parenterale Zusammensetzungen zur Injektion oder Infusion zur Verfügung gestellt werden. Sie können z. B. in einem inerten Öl suspendiert werden, geeigneterweise einem Pflanzenöl wie einem Sesam-, Erdnuss-, Olivenöl oder einem anderem akzeptablen Träger. Bevorzugt sind sie in einem wässrigen Träger suspendiert, z. B. in einer isotonischen Pufferlösung bei einem pH von etwa 5,6 bis 7,4. Diese Zusammensetzungen können durch konventionelle Sterilisierungstechniken sterilisiert werden, oder sie können sterilfiltriert werden. Die Zusammensetzungen können pharmazeutisch akzeptable Hilfssubstanzen enthalten, wie sie benötigt werden, um sich physiologischen Bedingungen anzunähern, wie z. B. pH-Wert puffernde Agenzien. Nützliche Puffer schließen z. B. Natriumacetat/Essigsäure-Puffer ein. Eine Form von Vorrats- oder „Depot"-Zusammensetzung mit langsamer Freisetzung kann verwendet werden, so dass in den Blutstrom therapeutisch effektive Mengen der Zusammensetzung über mehrere Stunden oder Tage nach transdermaler Injektion oder einer anderen Form der Verabreichung freigesetzt werden.
Die erwünschte Isotonizität kann unter Verwendung von Natriumchlorid oder anderen pharmazeutisch akzeptablen Agenzien, zum Beispiel Dextrose, Borsäure, Natriumtartrat, Propylenglykol, Polyolen (zum Beispiel Mannitol und Sorbitol) oder anderen anorganischen oder organischen Soluten erreicht werden. Natriumchlorid ist besonders für Puffer bevorzugt, welche Natriumionen enthalten.
Die beanspruchten Verbindungen können auch als pharmazeutisch akzeptable Salze (z. B. Säureadditionssalze) und/oder Komplexe davon formuliert werden. Pharmazeutisch akzeptable Salze sind in der Konzentration, in der sie verabreicht werden, nicht-toxische Salze. Die Herstellung solcher Salze kann die pharmakologische Verwendung erleichtern, indem die physikalisch/chemischen Charakteristika der Zusammensetzung verändert werden, ohne dass die Zusammensetzung daran gehindert wird, ihren physiologischen Effekt auszuüben. Beispiele von nützlichen Änderungen bei physikalischen Eigenschaften schließen eine Verringerung des Schmelzpunkts ein, um eine Verabreichung über die Mukosa zu erleichtern, und eine Erhöhung der Löslichkeit, um die Verabreichung von höheren Konzentrationen des Medikaments zu erleichtern.
Pharmazeutisch akzeptable Salze schließen Säureadditionssalze ein, zum Beispiel jene, welche Sulfat, Hydrochlorid, Phosphat, Sulfamat, Acetat, Citrat, Lactat, Tartrat, Methansulfonat, Ethansulfonat, Benzensulfonat, p-Toluensulfonat, Cyclohexylsulfamat und Quinat enthalten. Pharmazeutisch akzeptable Salze können mit Säuren wie Hydrochlorsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Sulfaminsäure, Essigsäure, Zitronensäure, Milchsäure, Weinsäure, Malonsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Benzensulfonsäure, p-Toluensulfonsäure, Cyclohexylsulfaminsäure, und Chinasäure erhalten werden. Solche Salze können z. B. hergestellt werden, indem man die freien Säure- oder Baseformen des Produkts mit einem oder mehreren Äquivalenten der geeigneten Base oder Säure in einem Lösungsmittel oder einem Medium zur Reaktion bringt, in dem das Salz unlöslich ist, oder in einem Lösungsmittel wie Wasser, welches dann im Vakuum oder durch Gefriertrocknung entfernt wird, oder durch Austauschen der Ionen eines bestehenden Salzes gegen ein anderes Ion mit einem geeigneten Ionenaustauschharz.
Auch Träger oder Hilfsstoffe können verwendet werden, um eine Verabreichung der Verbindung zu erleichtern. Beispiele von Trägern oder Hilfsstoffen schließen Calciumcarbonat, Calciumphosphat, verschiedene Zucker so wie Lactose, Glucose oder Sucrose oder Arten von Stärke, Cellulosederivaten, Gelatine, Pflanzenölen, Polyethylenglykolen und physiologisch kompatiblen Lösungsmitteln ein. Die Zusammensetzungen oder pharmazeutischen Zusammensetzungen können über verschiedene Routen verabreicht werden, einschließlich intravenös, intraperitoneal, subkutan und intramuskulär, oral, topisch oder transmukosal.
Wenn gewünscht, können Lösungen der obigen Zusammensetzungen mit einem Verdickungsmittel wie Methylcellulose verdickt werden. Sie können in Emulsionsform, entweder Wasser-in-Öl oder Öl-in-Wasser, hergestellt werden. Jedes einer großen Vielzahl von pharmazeutisch akzeptablen emulsionsbildenden Agenzien kann genutzt werden, einschließlich z. B. Akazienpuder, ein nicht-ionisches oberflächenaktives Mittel (so wie ein Tween) oder ein ionisches oberflächenaktives Mittel (so wie Alkalipolyetheralkoholsulfate oder -sulfonate, z. B. ein Triton).
In der Erfindung nützliche Zusammensetzungen werden hergestellt, indem man die Zutaten nach allgemein akzeptierten Verfahren mischt. Zum Beispiel können die ausgewählten Komponenten einfach in einem Mixer oder einer anderen Standardvorrichtung gemischt werden, um eine konzentrierte Mischung zu bilden, welche dann durch das Hinzufügen von Wasser oder Verdickungsmittel und eventuell eines Puffers zur Kontrolle des pH oder eines zusätzlichen Soluts zur Kontrolle der Tonizität an die Endkonzentration und -viskosität angepasst werden kann.
Zur Verwendung durch den Arzt werden die Verbindungen in Form von Dosiereinheiten bereitgestellt, welche eine Menge eines Exendin-Agonisten mit oder ohne ein weiteres Agens gegen das Entleeren enthält. Therapeutisch effektive Mengen eines Exendin-Agonisten zur Verwendung bei der Kontrolle der Entleerung des Magens und bei Zuständen, bei denen eine Entleerung des Magens vorteilhafterweise verlangsamt oder reguliert wird, sind solche, die die post-prandialen Blutglucosespiegel verringern, bevorzugt auf nicht mehr als etwa 8 oder 9 mM, oder so, dass die Blutglucosespiegel so wie gewünscht reduziert werden. Bei diabetischen oder glucoseintoleranten Individuen sind Plasmaglucosespiegel höher als bei normalen Individuen. Bei solchen Individuen kann eine vorteilhafte Reduktion oder ein „Glätten" von post-prandialen Blutglucosespiegeln erhalten werden. Wie durch die in dem Gebiet Tätigen erkannt werden wird, wird eine effektive Menge an therapeutischem Agens von vielen Faktoren abhängen, einschließlich des physischen Zustands des Patienten, des Blutzuckerspiegels oder des Niveaus der Inhibition des Entleerens des Magens, welches erhalten werden sollen, und anderer Faktoren.
Solche pharmazeutischen Zusammensetzungen sind nützlich beim Bewirken von gastrischer Hypomotilität bei einem Subjekt und können auch bei anderen Störungen verwendet werden, bei denen vorteilhafterweise die gastrische Motilität reduziert wird.
Die effektive tägliche Dosis der Verbindungen gegen das Entleeren wird typischerweise in dem Bereich von 0,001 oder 0,005 bis etwa 5 mg/Tag liegen, bevorzugt etwa 0,01 oder 0,05 bis 2 mg/Tag oder mehr bevorzugt etwa 0,05 oder 0,1 bis 1 mg/Tag für einen Patienten mit 70 kg. Die exakte zu verabreichende Dosis wird durch den betreuenden Kliniker bestimmt und hängt davon ab, wo die besondere Verbindung in dem oben genannten Bereich liegt, genau wie von dem Alter, Gewicht und Zustand des Individuums. Die Verabreichung sollte bei dem ersten Zeichen von Symptomen oder kurz nach einer Diagnose von Diabetes mellitus beginnen. Eine Verabreichung kann durch Injektion, bevorzugt subkutan oder intramuskulär, durchgeführt werden, oder über andere Routen, z. B. durch orale, buccale oder nasale, Routen, Dosierungen sollten jedoch 5- bis 10-fach gegenüber der Dosierung bei Injektion erhöht werden.
Allgemein können bei der Behandlung oder der Vorbeugung von erhöhten, unangemessenen oder unerwünschten post-prandialen Blutglucosespiegeln die erfindungsgemäßen Verbindungen Patienten mit Bedarf für eine solche Behandlung in Dosisbereichen ähnlich den oben angegebenen verabreicht werden, die Verbindungen werden jedoch häufiger verabreicht, z. B. einmal, zweimal oder dreimal am Tag.
Die optimale Formulierung und Art der Verabreichung der Verbindungen der vorliegenden Anmeldung an einen Patienten hängt von in der Technik bekannten Faktoren wie der bestimmten Erkrankung oder der Störung, dem gewünschten Effekt und der Art des Patienten ab. während die Verbindungen typischerweise verwendet werden, um menschliche Patienten zu behandelt, können sie auch verwendet werden, um ähnliche oder identische Erkrankungen bei anderen Vertebraten, so wie anderen Primaten, Bauernhoftieren wie Schweinen, Rindern und Geflügel und Sporttie ren und Haustieren wie Pferden, Hunden oder Katzen, zu behandeln.
Um beim Verständnis der vorliegenden Erfindung zu helfen, sind die folgenden Beispiele angefügt, welche die Ergebnisse einer Folge von Experimenten beschreiben. Die sich auf die Erfindung beziehenden Experimente sollten natürlich nicht so ausgelegt werden, als ob sie die Erfindung und solche jetzt bekannten oder später entwickelten Variationen der Erfindung spezifisch begrenzen, die für einen Fachmann greifbar wären und von denen angenommen wird, dass sie in den Rahmen der Erfindung fallen, wie sie hierin beschrieben und hierin beansprucht ist.
BEISPIEL 1
Herstellung von Verbindung 68

Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro-NH₂ [SEQ. ID. NO. 72]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 4033.5.
BEISPIEL 2
Herstellung von Verbindung 69

His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro-NH₂ [SEQ. ID. NO. 73]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3984.4
BEISPIEL 3
Herstellung von Verbindung 71

His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro-NH₂ [SEQ. ID. NO. 75]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3861.3.
BEISPIEL 4
Herstellung von Verbindung 72

Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro-NH₂ [SEQ. ID. NO. 76]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3746.1.
BEISPIEL 5
Herstellung von Verbindung 73

Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala-NH₂ [SEQ. ID. NO. 77]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3742.1.
BEISPIEL 6
Herstellung von Verbindung 74

His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala-NH₂ [SEQ. ID. NO. 78]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3693.1.
BEISPIEL 7
Herstellung von Verbindung 76

His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser-NH₂ [SEQ. ID. NO. 80]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3634.1.
BEISPIEL 8
Herstellung von Verbindung 77

Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser-NH₂ [SEQ. ID. NO. 81]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3526.9.
BEISPIEL 9
Herstellung von Verbindung 78

His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser-NH₂ [SEQ. ID. NO. 82]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3477.9.
BEISPIEL 10
Herstellung von Verbindung 79

His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro-NH₂ [SEQ. ID. NO. 83]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3519.9.
BEISPIEL 11
Herstellung von Verbindung 82

His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly tPro Ser Ser Gly Ala tPro tPro tPro-NH₂ [SEQ. ID. NO. 86]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Doppelte Kopplungen sind bei Resten 37, 36 und 31 nötig. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30 bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 4121.1.
BEISPIEL 12
Herstellung von Verbindung 84

His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly NMeala Ser Ser Gly Ala NMeala Nmeala-NH₂ [SEQ. ID. NO. 88]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Doppelte Kopplungen sind an Resten 36 und 31 nötig. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3796.1.
BEISPIEL 13
Herstellung von Verbindung 85

Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly hPro Ser Ser Gly Ala hPro-NH₂ [SEQ. ID. NO. 89]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Eine doppelte Kopplung ist bei Rest 31 nötig. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3871.1.
BEISPIEL 14
Herstellung von Verbindung 86

His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala-NH₂ [SEQ. ID. NO. 90]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3750.2.
BEISPIEL 15
Herstellung von Verbindung 88

Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser-NH₂ [SEQ. ID. NO. 92]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 4120.6
BEISPIEL 16
Herstellung von Verbindung 89

Ala Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser-NH₂ [SEQ. ID. NO. 93]

Das oben identifizierte amidierte Peptid wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 4005.5.
BEISPIEL 17
Herstellung von Peptid mit SEQ ID NO: 103
Verbindung 98, Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys-NH^εoctanoyl Asn-NH₂ [SEQ. ID. NO. 103], wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Fmoc-Lys-NH^εoctanoylsäure wird zur Kopplung in Position 27 verwendet. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3334.6.
BEISPIEL 18
Herstellung von Peptid mit SEQ ID NO: 105
Verbindung Nr. 100, Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys-NH^εoctanoyl Asn Gly Gly-NH₂ [SEQ ID NO: 105] wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Fmoc-Lys-NH^εoctanoylsäure wird zur Kopplung in Position 27 verwendet. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3442.8.
BEISPIEL 19
Herstellung von Peptid mit SEQ ID NO: 106
Verbindung Nr. 101, Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys-NH^εoctanoyl Asn Gly Gly-NH₂ [SEQ ID NO: 106] wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Fmoc-Lys-NH^εoctanoylsäure wird zur Kopplung in Position 27 verwendet. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3391.7.
BEISPIEL 20
Herstellung von Peptid mit SEQ ID NO: 110
Verbindung Nr. 105, Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Asn Lys-NH^εoctanoyl Gly Gly-NH₂ [SEQ ID NO: 110] wird auf einem 4-(2'-4'-Dimethoxyphenyl)-Fmoc-aminomethylphenoxyacetamidnorleucin MBHA-Harz (Novabiochem, 0,55 mmol/g) unter Verwendung von mit Fmoc geschützten Aminosäuren (Applied Biosystems, Inc.) zusammengesetzt, von dem Harz gespalten, entschützt, und auf eine ähnlich Art wie Verbindung 1 gereinigt. Fmoc-Lys-NH^εoctanoylsäure wird zur Kopplung in Position 28 verwendet. Bei der Analyse werden Lösungsmittel (0,1% TFA in Wasser) und Lösungsmittel B (0,1% TFA in ACN) verwendet. Eine analytische RP-HPLC (Gradient 30% bis 60% Lösungsmittel B in Lösungsmittel A über 30 Minuten) des lyophilisierten Peptids wird dann ausgeführt, um die Retentionszeit des Peptidprodukts zu bestimmten. Elektrospraymassenspektrometrie (M): berechnet 3391.7.
BEISPIELE A BIS D
Verwendete Reagenzien
GLP-1 wurde von Bachem (Torrance, CA) erworben, alle anderen Peptide wurden unter Verwendung von Synthesemethoden wie den hierin beschriebenen hergestellt. Alle Chemikalien waren vom höchsten kommerziellen Grad. Der cAMP SPA Immunoassay wurde von Amersham erworben. Die Radioliganden wurden von New England Nuclear (Boston, MA) erworben. RINm5f-Zellen (American Type Tissue Collection, Rockville, MD) wurden in DME/F12-Medium, welches 10% fötales bovines Serum und 2 mM L-Glutamin enthielt, wachsen gelassen. Die Zellen wurden bei 37°C und 5% CO₂/95% befeuchteter Luft wachsen gelassen, und Medium wurde alle 2 bis 3 Tage ersetzt. Die Zellen wurden bis zur Konfluenz wachsen gelassen, dann geerntet und unter Verwendung eines Polytron-Homogenisierers homogenisiert. Zellhomogenate wurden bis zur Verwendung gefroren bei –70°C gelagert.
Beispiel A
GLP-1 Rezeptorbindungsstudien
Die Rezeptorbindung wurde durch Messung der Verdrängung von [¹²⁵I] humanen GLP-1 (7–36) oder [¹²⁵I] Exendin (9–39) von RINm5f Membranen beurteilt. Der Testpuffer enthielt 5 μg/ml Bestatin, 1 μg/ml Phosphoramidon, 1 mg/ml bovines Serumalbumin (Fraktion V), 1 mg/ml Bacitracin und 1 mM MgCl₂ in 20 mM HEPES, pH 7,4. Um die Bindung zu messen, wurden 30 μg Membranprotein (Bradford protein assay) in 200 μl Testpuffer resuspendiert und mit 60 pM [¹²⁵I] GLP-1 oder [¹²⁵I] Exendin (9–39) und unmarkierten Peptiden für 120 Minuten bei 23°C in 96 Well-Platten (Nagle Nunc, Rochester, NY) inkubiert. Die Inkubationen wurden durch schnelle Filtration mit kalter, mit Phosphat gepufferter Salzlösung, pH 7,4, durch mit Polyethylenimin behandelte GF/B-Glasfiberfilter (Wallac Inc., Gaithersburg, MD) unter Verwendung eines Tomtec Mach II Plattenerntegeräts (Wallac Inc., Gaithersburg, MD) beendet. Die Filter wurden getrocknet, mit Szintillationsflüssigkeit kombiniert und die Radioaktivität in einem Betaplate flüssigen Szintillationszähler (Wallac Inc.) bestimmt.
Peptidproben wurden in dem Test als duplikate Punkte bei 6 Verdünnungen über einen Konzentrationsbereich von 10^–6 M bis 10^–12 M laufen gelassen, um Antwortkurven zu bestimmen. Die biologische Aktivität einer Probe wird als ein IC₅₀-Wert angegeben, berechnet aus den Rohdaten unter Verwendung eines iterativen Kurvenanpassungsprogramms unter Verwendung einer logischen Gleichung mit 4 Parametern (Prism, GraphPAD Software). Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 gezeigt. TABELLE I

Verbindung IC₅₀ (nM)

Exendin-4 [SEQ ID NO.2] 0,70

Verbindung 1 [SEQ ID NO.5] 26,1

Verbindung 2 [SEQ ID NO.6] 14,42

Verbindung 3 [SEQ ID NO.7] 41,65

Verbindung 4 [SEQ ID NO.8] 4,96
BEISPIEL B
Cyclase-Aktivierungsstudie
Der Testpuffer enthielt 10 μM GTP, 0,75 mM ATP, 2,5 mM MgCl₂, 0,5 mM Phosphocreatin, 12,5 U/ml Creatinkinase, 0,4 mg/ml Aprotinin, 1 μM IBMX in 50 mM HEPES, pH 7,4. Membranen und Peptide wurden in 100 ml Testpuffer in 96 Well-Platten mit Filterunterseite (Millipore Corp., Redford, MA) zusammengegeben. Nach 20 Minuten der Inkubation bei 37°C wurde der Test durch Transfer des Überstands durch Filtration in eine frische 96 Well-Platte unter Verwendung eines Millipore Vakuum-Mehrfachverteilers beendet. Der Gehalt an cAMP in den Überständen wurde durch einen SPA-Immunassay quantifiziert.

Peptidproben wurden in dem Test als triplikate Punkte bei 7 Verdünnungen über einen Konzentrationsbereich von 10^–6 M bis 10^–12 M gemessen, um Antwortkurven herzustellen. Die biologische Aktivität einer bestimmten Probe wurde als ein EC₅₀-Wert angegeben, wie oben beschrieben berechnet. Die Ergebnisse sind in Tabelle II tabelliert. TABELLE II

Verbindung		EC₅₀ (nM)
Exendin-4	[SEQ ID NO.2]	0,23
Verbindung 1	[SEQ ID NO.5]	> 1 000
Verbindung 2	[SEQ ID NO.6]	> 10 000
Verbindung 3	[SEQ ID NO.7]	> 10 000
Verbindung 4	[SEQ ID NO.8]	> 10 000

Beispiel C
Bestimmung des Blutglucosespiegels in db/db Mäusen C57BLKS/J-m-db Mäuse mit mindestens 3 Monaten Alter wurden für die Studie verwendet. Die Mäuse wurden von dem Jackson Laboratory erhalten und sie durften sich für mindestens 1 Woche in dem Vivarium aklimatisieren. Die Mäuse wurden in Gruppen von 10 bei 22° ± 1°C bei einem 12:12 Hell:Dunkelzyklus beherbergt, wobei die Lichter um 6:00 Uhr morgens angingen.
Allen Tieren wurden 2 Stunden vor der Entnahme von Blutproben für die Basislinie das Essen weggenommen. Etwa 70 μl Blut wurden von jeder Maus über Einstich ins Auge nach leichter Anästhesie mit Methophan entnommen. Nach der Entnahme der Blutproben für die Basislinie zur Messung von Plasmaglucosekonzentrationen erhielten alle Tiere subkutane Injektionen entweder von Träger (10,9% NaCl), von Exendin-4 oder von Testverbindung (1 μg) in Träger. Genau 1 Stunde nach den Injektionen wurden unter Verwendung der gleichen Prozedur wieder Blutproben entnommen, und Plasmaglucosekonzentrationen wurden gemessen.

Bei jedem Tier wurde die prozentuale Veränderung in dem Plasmawert gegenüber dem Basislinien-Wert berechnet. Die prozentuale Abnahme der Plasmaglucose nach einer Stunde ist in Tabelle III dargestellt. TABELLE III

Test-Verbindung		% Abnahme der Glucose
Exendin-4	[SEQ ID NO.2]	39%	(n = 78)
Verbindung 1	[SEQ ID NO.5]	40%	(n = 4)
Verbindung 2	[SEQ ID NO.6]	41%	(n = 5)
Verbindung 3	[SEQ ID NO.7]	32%	(n = 5)
Verbindung 4	[SEQ ID NO.8]	42%	(n = 5)

Beispiel D
Bestimmung der Dosis-Antwort von Blutglucosespiegeln in db/db Mäusen
C57BLKS/J-m-db/db Mäuse mit mindestens 3 Monaten Alter wurden für die Studie verwendet. Die Mäuse wurden von dem Jackson Laboratory erhalten und sie durften sich für mindestens 1 Woche aklimatisieren, bevor sie verwendet wurden. Die Mäuse wurden in Gruppen von 10 bei 22° ± 1°C bei einem 12:12 Hell:Dunkelzyklus beherbergt, wobei die Lichter um 6:00 Uhr morgens angingen.
Allen Tieren wurden 2 Stunden vor der Entnahme von Blutproben für die Basislinie das Essen weggenommen. Etwa 70 μl Blut wurden von jeder Maus über Einstich ins Auge nach leichter Anästhesie mit Methophan entnommen. Nach der Entnahme der Blutproben für die Basislinie zur Messung von Plasmaglucosekonzentrationen erhielten alle Tiere subkutane Injektionen entweder von Träger, von Exendin-4 oder von Testverbindung in den angegebenen Konzentrationen. Genau 1 Stunde nach den Injektionen wurden unter Verwendung der gleichen Prozedur wieder Blutproben entnommen, und Plasmaglucosekonzentrationen wurden gemessen.
Bei jedem Tier wurde die prozentuale Veränderung in dem Plasmawert gegenüber dem Basislinien-Wert berechnet und eine dosisabhängige Beziehung wurde unter Verwendung von Graphpad Prizm^TM Software evaluiert.
5 zeigt die Wirkungen von unterschiedlichen Dosen von Exendin-4 [SEQ ID NO. 2] und Verbindung 1 [SEQ ID NO. 5] auf Plasmaglucosespiegel. Exendin-4 hat einen ED₅₀ von 0,01 μg pro Maus und Verbindung 1 hat einen ED₅₀ von 0,042 μg pro Maus.
Beispiel E
Magen-Entleerung
Die folgende Studie wurde ausgeführt, um die Effekte von Exendin-4 und einer erfindungsgemäßen agonistischen Exendin-Verbindung auf die Entleerung des Magens bei Ratten zu untersuchen. Dieses Experiment folgte einer Modifikation des Verfahrens von Scarpignato, et al., Arch. Int. Pharmacodyn. Ther. 246: 286–94 (1980).
Es wurden männliche Harlan Sprague Dawley (HSD) Ratten verwendet. Alle Tiere wurden bei 22,7 ± 0,8°C in einem 12:12 Stunden Hell:Dunkelzyklus beherbergt (wobei Experimente während des hellen Zyklus durchgeführt wurden), und wurden ad libitum gefüttert und mit Wasser versorgt (Diät LM-485, Teklad, Madison, WI). Exendin-4 wurde nach Standardpeptidsyntheseverfahren synthetisiert. Die Herstellung von Verbindung 1 [SEQ ID No: 5] ist in Beispiel 1 beschrieben.
Die Bestimmung des Entleerens des Magens durch das unten beschriebene Verfahren wurde nach einem Fasten von ~20 Stunden durchgeführt, um sicherzustellen, dass der Magen keinen Speisebrei enthalten würde, der mit spektrophotometrischen Absorptionsmessungen Wechselwirken könnte.
Ratten bei Bewusstsein erhielten über eine Magensonde 1,5 ml eines akalorischen Gels, welches 1,5% Methylcellulose (M-0262, Sigma Chemical Co., St Louis, MO) und 0,05% Phenolrot-Indikator enthielt. 20 Minuten nach der Magensondierung wurden die Ratten unter Verwendung von 5% Halothan anästhesiert, der Magen freigelegt und unter Verwendung von Arterienzangen an den pylorischen und unteren Speiseröhrenschließ muskeln verschlossen, entfernt und in eine alkalische Lösung geöffnet, welche auf ein festes Volumen eingestellt wurde. Der Mageninhalt ergab sich aus der Intensität des Phenolrots in der alkalischen Lösung, gemessen durch Absorption bei einer Wellenlänge von 560 nm. Bei getrennten Experimenten bei 7 Ratten wurden der Magen und der Dünndarm beide ausgeschnitten und in eine alkalische Lösung geöffnet. Die Menge an Phenolrot, welches aus dem oberen Gastrointestinaltrakt innerhalb von 20 Minuten nach Sondierung wiedergewonnen werden konnte, war 89 ± 4%; Farbstoff, welcher unwiderruflich an die luminale Oberfläche des Eingeweides zu binden schien, könnte den Rest ausgemacht haben. Um eine maximale Wiedergewinnung von weniger als 100% Farbstoff zu berücksichtigen, wurde der Prozentsatz von Mageninhalt, der nach 20 Minuten verblieb, als ein Anteil des Mageninhalts ausgedrückt, der von Kontrollratten wiedergewonnen wurde, die in dem gleichen Experiment direkt nach der Sondierung geopfert wurden. Prozent Restmageninhalt = (Absorption nach 20 min)/(Absorption bei 0 min) × 100.
In Studien zur Basislinie ohne medikamentöse Behandlung wurde die Entleerung des Magens über 20 Minuten bestimmt. In Dosis-Antwortstudien wurden Ratten mit 0,01, 0,1, 0,3, 1, 10 und 100 μg Exendin-4, 0,1, 0,3, 1, 10 und 100 der Verbindung 1 [SEQ ID No: 5] behandelt.
Die Ergebnisse, gezeigt in 6, zeigen, dass die Exendin-Agonisten, Exendin-4 und Verbindung 1, starke Inhibitoren des Entleerens des Magens sind. Der E₅₀ von Exendin-4 war 0,27 μg. Der EC₅₀ von Verbindung 1 war 55,9 μg.
SEQUENZPROTOKOLL

Claims

Peptidverbindung der Formel (I) [SEQ ID Nr: 4], wobei die Peptidverbindung Exendin-Agonistenaktivität aufweist: Xaa₁ Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaa₆ Xaa₇ Xaa₈ Xaa₉ Xaa₁₀ Xaa₁₁ Xaa₁₂ Xaa₁₃ Xaa₁₄ Xaa₁₅ Xaa₁₆ Xaa₁₇ Ala Xaa₁₉ Xaa₂₀ Xaa₂₁ Xaa₂₂ Xaa₂₃ Xaa₂₄ Xaa₂₅ Xaa₂₆ Xaa₂₇ Xaa₂₈ –Z₁; wobei Xaa₁ His, Arg, Tyr, Ala, Norval, Val oder Norleu ist; Xaa₂ Ser, Gly, Ala oder Thr ist; Xaa₃ Ala, Asp oder Glu ist; Xaa₄ Ala, Norval, Val, Norleu oder Gly ist; Xaa₅ Ala oder Thr ist; Xaa₆ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist; Xaa₇ Thr oder Ser ist; Xaa₈ Ala, Ser oder Thr ist; Xaa₉ Ala, Norval, Val, Norleu, Asp oder Glu ist; Xaa₁₀ Ala, Leu, Ile, Val, Pentylglycin oder Met ist; Xaa₁₁ Ala oder Ser ist; Xaa₁₂ Ala oder Lys ist; Xaa₁₃ Ala oder Gln ist; Xaa₁₄ Ala, Leu, Ile, Pentylglycin, Val oder Met ist; Xaa₁₅ Ala oder Glu ist; Xaa₁₆ Ala oder Glu ist; Xaa₁₇ Ala oder Glu ist; Xaa₁₉ Ala oder Val ist; Xaa₂₀ Ala oder Arg ist; Xaa₂₁ Ala oder Leu ist; Xaa₂₂ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist; Xaa₂₃ Ile, Val, Leu, Pentylglycin, Tert-Butylglycin oder Met ist; Xaa₂₄ Ala, Glu oder Asp ist; Xaa₂₅ Ala, Trp, Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist; Xaa₂₆ Ala oder Leu ist; Xaa₂₇ Ala oder Lys ; Xaa₂₈ Ala oder Asn ist; und Z₁ ist: Gly Gly –Z₂ Gly Gly Xaa₃₁ –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ –Z₂ oder Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ Xaa₃₉ –Z₂; wobei Xaa₃₁, Xaa₃₆, Xaa₃₇ und Xaa₃₈ unabhängig voneinander aus der Gruppe bestehend aus Pro, Homoprolin, 3Hyp, 4Hyp, Thioprolin, N-Alkylglycin, N-Alkylpentylglycin und N-alkylalanin ausgewählt sind; Xaa₃₉ Ser oder Tyr ist; und Z₂ -OH oder -NH₂ ist; vorausgesetzt, daß nicht mehr als drei von Xaa₃, Xaa₄, Xaa₅, Xaa₆, Xaa₈, Xaa₉, Xaa₁₀, Xaa₁₁, Xaa₁₂, Xaa₁₃, Xaa₁₄, Xaa₁₅, Xaa₁₆, Xaa₁₇, Xaa₁₉, Xaa₂₀, Xaa₂₁, Xaa₂₄, Xaa₂₅, Xaa₂₆, Xaa₂₇ und Xaa₂₈ Ala sind; und ebenfalls vorausgesetzt, daß wenn Xaa₁ His, Arg oder Tyr ist, dann mindestens eins von Xaa₃, Xaa₄ und Xaa₉ Ala ist; und pharmazeutisch verträgliche Salze davon; und wobei Xaa₁, Xaa₃ oder Xaa₉ Ala ist.
Verbindung nach Anspruch 1, wobei Xaa₂ Gly ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, wobei Xaa₄ Ala ist.
Verbindung nach Anspruch 2 oder 3, wobei Xaa₁₄ Leu, Pentylglycin oder Met ist.
Verbindung nach Anspruch 4, wobei Xaa₂₅ Trp oder Phe ist.
Verbindung nach Anspruch 5, wobei Xaa₆ Ala, Phe oder Naphtylalanin ist; Xaa₂₂ Phe oder Naphthylalanin ist; und Xaa₂₃ Ile oder Val ist.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 6, wobei Xaa₃₁, Xaa₃₆, Xaa₃₇ und Xaa₃₈ unabhängig voneinander aus der Gruppe bestehend aus Pro, Homoprolin, Thioprolin und N-Alkylalanin ausgewählt sind.
Verbindung nach Anspruch 1 oder 6, wobei Xaa₃₉ Ser ist.
Verbindung nach einem der Ansprüche 1, 7 oder 8, wobei Z₂ -NH₂ ist.
Verbindung nach Anspruch 1, die eine Aminosäuresequenz ausgewählt aus SEQ ID Nr.: 72, 73, 75–78, 80–83, 86, 88–90 und 92–93 aufweist.
Zusammensetzung, die eine Verbindung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 10 in einem pharmazeutisch verträglichen Träger umfaßt.
Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 10 für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung für die Behandlung von Diabetes mellitus.
Verwendung nach Anspruch 12, wobei die Zusammensetzung ferner eine therapeutisch wirksame Menge eines Insulins umfaßt.
Verwendung einer Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 10 für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung für die Behandlung eines hyperglykämischen Zustandes in einem Säugetier.
Peptidverbindung der Formel (II) [SEQ ID Nr. 94], wobei die Peptidverbindung Exendin-Agonistenaktivität aufweist: Xaa₁ Xaa₂ Xaa₃ Xaa₄ Xaa₅ Xaa₆ Xaa₇ Xaa₈ Xaa₉ Xaa₁₀ Xaa₁₁ Xaa₁₂ Xaa₁₃ Xaa₁₄ Xaa₁₅ Xaa₁₆ Xaa₁₇ Ala Xaa₁₉ Xaa₂₀ Xaa₂₁ Xaa₂₂ Xaa₂₃ Xaa₂₄ Xaa₂₅ Xaa₂₆ X₁ –Z₁; wobei Xaa₁ His, Arg, Tyr, Ala, Norval, Val, Norleu oder 4-Imidazopropionyl ist; Xaa₂ Ser, Gly, Ala oder Thr ist; Xaa₃ Ala, Asp oder Glu ist; Xaa₄ Ala, Norval, Val, Norleu oder Gly ist; Xaa₅ Ala oder Thr ist; Xaa₆ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist; Xaa₇ Thr oder Ser ist; Xaa₈ Ala, Ser oder Thr ist; Xaa₉ Ala, Norval, Val, Norleu, Asp oder Glu ist; Xaa₁₀ Ala, Leu, Ile, Val, Pentylglycin oder Met ist; Xaa₁₁ Ala oder Ser ist; Xaa₁₂ Ala oder Lys ist; Xaa₁₃ Ala oder Gln ist; Xaa₁₄ Ala, Leu, Ile, Pentylglycin, Val oder Met ist; Xaa₁₅ Ala oder Glu ist; Xaa₁₆ Ala oder Glu ist; Xaa₁₇ Ala oder Glu ist; Xaa₁₈ Ala oder Val ist; Xaa₂₀ Ala oder Arg ist; Xaa₂₁ Ala, Leu oder Lys-NH^ε-R, wobei R Lys ist, Arg, C₁-C₁₀ geradkettiges oder verzweigtes Alkanoyl oder Cycloalkylkanoyl ist; Xaa₂₂ Phe, Tyr oder Naphthylalanin ist; Xaa₂₃ Ile, Val, Leu, Pentylglycin, Tert-Butylglycin oder Met ist; Xaa₂₄ Ala, Glu oder Asp ist; Xaa₂₅ Ala, Trp, Phe, Tyr oder Naphtylalanin ist, Xaa₂₆ Ala Oder Leu ist; X₁ Lys Asn, Asn Lys, Lys-NH^ε-R Asn, Asn Lys-NH^ε-R, Lys-NH^ε-R Ala, Ala Lys-NH^ε-R, wobei R Lys ist, Arg, C₁-C₁₀ geradkettiges oder verzweigtes Alkanoyl oder Cycloalkylalkanoyl ist; und Z₁ ist: Gly Gly –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ –Z₂, Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ –Z₂, oder Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ –Z₂ ist; Gly Gly Xaa₃₁ Ser Ser Gly Ala Xaa₃₆ Xaa₃₇ Xaa₃₈ Xaa₃₉ –Z₂; wobei Xaa₃₁, Xaa₃₆, Xaa₃₇ und Xaa₃₈ unabhängig voneinander aus der Gruppe bestehend aus Pro, Homoprolin, 3Hyp, 4Hyp, Thioprolin, N-Alkylglycin, N-Alkylpentylglycin und N-Alkylalanin ausgewählt sind; Xaa₃₉ Ser oder Tyr ist; und Z₂ -OH oder -NH₂ ist; vorausgesetzt, daß nicht mehr als drei von Xaa₃, Xaa₄, Xaa₅, Xaa₆, Xaa₈, Xaa₉, Xaa₁₀, Xaa₁₁, Xaa₁₂, Xaa₁₃, Xaa₁₄, Xaa₁₅, Xaa₁₆, Xaa₁₇, Xaa₁₉, Xaa₂₀, Xaa₂₁, Xaa₂₄, Xaa₂₅, Xaa₂₆, Xaa₂₇ und Xaa₂₈ Ala sind; und ebenfalls vorausgesetzt, daß wenn Xaa₁ His, Arg oder Tyr ist, dann mindestens eins von Xaa₃, Xaa₄, und Xaa₉ Ala ist; und pharmazeutisch verträgliche Salze davon; und wobei Xaa₁, Xaa₃ oder Xaa₉ Ala ist.
Verbindung nach Anspruch 15, wobei Xaa₂ Gly ist.
Verbindung nach Anspruch 15, wobei Xaa₄ Ala ist.
Verbindung nach Anspruch 15, wobei Xaa₁₄ Leu, Pentylglycin oder Met ist.
Verbindung nach Anspruch 15, wobei Xaa₂₅ Trp oder Phe ist.
Verbindung nach Anspruch 15, wobei Xaa₆ Ala, Phe oder Naphthylalanin ist; Xaa₂₂ Phe oder Naphtylalanin ist; und Xaa₂₃ Ile oder Val ist.
Verbindung nach Anspruch 15, wobei Xaa₃₁, Xaa₃₆, Xaa₃₇ und Xaa₃₈ unabhängig voneinander aus der Gruppe bestehend aus Pro, Homoprolin, Thioprolin und N-Alkylalanin ausgewählt sind.
Verbindung nach Anspruch 15 oder 21, wobei Xaa₃₉ Ser ist.
Verbindung nach Anspruch 15, wobei Z₂ -NH₂ ist.
Verbindung nach Anspruch 15, wobei X₁ Lys Asn, Lys-NH^ε-R Asn oder Lys-NH^ε-R Ala ist, wobei R Lys, Arg, C₁-C₁₀ geradkettiges oder verzweigtes Alkanoyl ist.
Verbindung nach Anspruch 15, wobei Xaa₂₁ Lys-NH^ε-R ist, wobei R Lys, Arg, C₁-C₁₀ geradkettiges oder verzweigtes Alkanoyl oder Cycloalkyl-Alkanoyl ist.
Verbindung nach Anspruch 15, die eine Aminosäuresequenz ausgewählt aus SEQ ID Nrn.: 105, 106, 103 und 110 aufweist.
Zusammensetzung, die eine Verbindung gemäß Anspruch 15 oder 26 in einem pharmazeutisch verträglichen Träger umfaßt.