JP4426727B2 - 新規なエキセンジンアゴニスト製剤とその投与方法 - Google Patents

Description

【０００１】
【関連出願】
本出願は、引用によりそれらの内容が全体として本出願に掲載されている、１９９９年１月１４日に出願された「新規なエキセンジンアゴニスト製剤とその投与諸方法」と称する米国仮出願第６０／１１６，３８０号と、２０００年１月１０日に出願された「トリグリセリド値の調節作用および脂肪血症障害の治療のためのエキセンジンとその作動薬の使用」と称する米国仮出願第６０／［番号はまだ割り振られていない］と、から優先権を主張するものである。
【０００２】
【発明の技術分野】
本出願は、生物活性であって、また、例えば、注射可能な経路を介して、また呼吸器管、口腔および腸といった注射不可能な経路を介して送達可能である、新規なエキセンジンおよびペプチドエキセンジンアゴニスト製剤、用量および投与製剤に関する。こうした製剤および用量および投与の諸方法は、タイプＩおよびＩＩ糖尿病を含めた糖尿病の治療に、血漿グルコース値を低下させる薬剤により恩恵を受ける障害の治療に、また、胃内容排出を遅らせるおよび／またはゆっくりと行う際に、あるいは食物摂取を減らす際に有用な薬剤の投与により恩恵を受ける障害の治療に有用である。
【０００３】
【発明の背景】
以下の説明には本発明を理解するのに有用な情報が含まれている。本出願に提供されている情報のいずれかが現在請求されている発明（複数）あるいはそれに該当するものに対する先行技術であることを認めているわけではなく、また、特定されて参照されている、あるいは暗に参照されている公表物のいずれかが先行技術であることを認めているわけでもない。
【０００４】
エキセンジンは、アリゾナ州とニューメキシコ州の原産である爬虫類、アメリカドクトカゲおよびメキシコアゴヒゲトカゲの唾液腺で見つかったペプチドである。エキセンジン−３［配列識別番号１： Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｓｅｒ−ＮＨ₂］ は、Heloderma horrium (メキシコアゴヒゲトカゲ)の唾液腺のなかに存在しており、また、エキセンジン−４[配列識別番号２：Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｓｅｒ−ＮＨ₂ ] は、Heloderma suspectum (アメリカドクトカゲ)の唾液腺に存在している (Eng, J.ら、J. Biol. Chem., 265:20259−62, 1990; Eng, J. ら、J. Biol. Chem., 267:7402−05, 1992)。エキセンジン−３のアミノ酸配列は図１に図示されている。エキセンジン−４のアミノ酸配列は図２に図示されている。エキセンジン−４は最初、毒液の一つの成分（潜在的に毒性）であると考えられていた。現在では、エキセンジン−４は毒性がまったくなく、また毒液ではなくて、アメリカドクトカゲの唾液腺のなかで作られているものであると考えられている。
【０００５】
エキセンジンは、グルカゴン様ペプチドファミリーのいくつかの構成要素に対して配列類似性を有しており、ＧＬＰ−１［７−３６］ＮＨ₂ ［配列識別番号３］ に対しては最も高い相同性53%を有している(Gokeら、J. Biol. Chem. 268:19650−55, 1993)。ＧＬＰ−１[7−36]NH₂はまた、プログルカゴン［７８−１０７］として知られており、あるいは本出願では多くの場合、単に「ＧＬＰ−１」として用いられている。ＧＬＰ−１は、膵臓β細胞からのインスリン分泌を刺激するインスリン親和性効果を有している。ＧＬＰ−１はまた、膵臓α細胞からのグルカゴン分泌を阻害すると報告されている (φrsovら、Diabetes, 42:658−61, 1993; D'Alessioら、J. Clin. Invest., 97:133-38, 1996)。ＧＬＰ−１のアミノ酸配列は、図3に図示されている。ＧＬＰ−１は、胃内容排出を阻害すると報告されており (Willms Bら、 J. Clin. Endocrinol Metab. 81 (1): 327 − 32, 1996; Wettergren A.ら、Dig. Dis. Sci. 38 (4): 665−73, 1993)、また、胃酸分泌を阻害すると報告されている (Schjoldager, BTら、Dig. Dis. Sci. 34 (5): 703−8, 1989; O'Halloran DJら、J. Endocrinol 126 (1): 169−73, 1990; Wettergren Aら、Dig. Dis. Sci. 38 (4): 665−73, 1993)。付加グリシン残基をカルボキシ末端に有するＧＬＰ−１［７−３７］はまた、ヒトにおいてインスリン分泌を刺激する(φrsovら、Diabetes, 42:658−61, 1993)。ＧＬＰ−１のインスリン親和性効果に関して少なくとも部分的にその役割を担っているといわれているトランスメンブレンＧタンパク質アデニレート − シクラーゼ結合受容体は、β細胞系統からクローン化されたという報告がなされている (Thorens, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 8641−45, 1992)。
【０００６】
ＧＬＰ−１ は、刺激インスリン産生の増幅(Fehmann HC, Goke B. 編『インスリン親和性腸管ホルモングルカゴン様ペプチド１（Insulinotropic Gut Hormone Glucagon-Like Peptide 1）』のなかのByrne MM, Goke B.執筆部分「グルカゴン様ペプチド−１: 臨床使用のための腸管ホルモンの潜在能力」 (Lessons from human studies with glucagon-like peptide−1: Potential of the gut hormone for clinical use. ) 、219−33頁、スイス、バーゼル市、Karger社, 1997年刊)、胃内容排出の阻害（Wettetgren Aら、端を切り取ったＧＬＰ−１（プログルカゴン78−107−アミド））はヒトの胃および膵臓機能を阻害する（Dig. Dis. Sci.1993年4月; 38 (4): 665−73）、グルカゴン分泌（Creutzfeldt WOCら、「タイプＩ糖尿病患者におけるグルカゴノスタティック作用と外因性グルカゴン様ペプチドＩ(7−36)アミドによる空腹時高血糖の減少」(Glucagonostatic actions and reduction of fasting hyperglycemia by exogenous glucagons−like peptide I (7−36))amid in type I diabetic patients）(Diabetes Care 1996; 19 (6): 580−6) および食欲のコントロールにおける一つの意味のある役割（Turton MDら、「摂食の中枢調節におけるグルカゴン様ペプチド−１の一つの役割 (A role for glucagons−like peptide−1 in the central regulation of feeding )」、Nature 1996年1月;379(6560): 69−72））などの報告されている作用のため、近年では、重要な調査研究の焦点となってきた。ＧＬＰ−１はまた、年取ったラットでのランゲルハンス島グルコース感受性を回復させ、若いラットの耐糖能に比して年取ったラットの耐糖能を回復させることもまた報告されている（Egan JMら、「グルカゴン様ペプチド−１ は、年取ったラットに対して急性期のインスリン放出を回復させる」（Glucagon−like peptide−1 restores acute−phase insulin release to aged rats）Diabetologia 1997年6月; 40 (補遺1):A130）。Ｉｎ ｖｉｖｏでのＧＬＰ−１の生物学的作用の持続期間が短いことが、治療用薬剤としてそれが開発されることを妨げられていたそのペプチドの一つの特徴である。
【０００７】
薬理学的研究では、エキセンジン−４とＧＬＰ−１の間の類似と差異の両方が示されている。エキセンジン−４ は、報告されているものによると、インスリン分泌βＴＣ１細胞上のＧＬＰ−１ 受容体、モルモットの膵臓から採取した分散した腺房細胞、また胃から採取した壁細胞に作用することができる。このペプチドはまた、分離胃においてソマトスタチン放出を刺激し、またガストリン放出を阻害することが報告されている（Gokeら、J. Biol. Chem. 268: 19650 − 55, 1993; Scheppら、Eur. J. Pharmacol., 69: 183 − 91, 1994; Eisseleら、Life Sci., 55: 629 − 34, 1994）。エキセンジン−３とエキセンジン−４ は、膵臓腺房細胞におけるcAMP産生を刺激し、膵臓腺房細胞からのアミラーゼ放出を刺激することが報告によると見つかっている（Malhotra, R.ら、Regulatory Peptides, 41:149 − 56, 1992; Raufmanら、J. Biol. Chem. 267:21432 − 37, 1992; Singhら、Regul. Pept. 53: 47 − 59, 1994）。 エキセンジン−４ もまたＧＬＰ−１ よりも有意に長い作用時間を有する。例えば、一つの実験では、糖尿病マウスにおいてエキセンジン−４ によりグルコースが低下することが数時間、また投与量によっては24時間まで持続することが報告されている（Eng. J. 「db/dbマウスの高血糖に対するエキセンジン−４の延長効果」(Prolonged effect of exendin−4 on hyperglycemia of db/db mice) Diabetes 1996年5月; 45 (補遺2): 152A (要約554)。そのインスリン親和性活性に基づいて、糖尿病の治療用のエキセンジン−３ とエキセンジン−４ の使用と高血糖症の予防が提案されている（Eng,米国特許第5,424,286号）。
【０００８】
エキセンジン−４ ［９−３９］、カルボキシアミド化分子、断片３−３９〜９−３９などのＣ末端の端を切ったエキセンジンペプチドは、ＧＬＰ−１の潜在的かつ選択的拮抗薬になることが報告されている（Gokeら、J. Biol. Chem., 268:19650-55, 1993; Raufman, J. P.ら、J. Biol. Chem., 266: 2897-902, 1991; Schepp, W.ら、Eur. J. Pharm. 269: 183 - 91, 1994; Montrose-Rafizadehら、Diabetes, 45(補遺2): 152A, 1996）。エキセンジン−４ ［９−３９］は、ｉｎ ｖｉｖｏにて内因性ＧＬＰ−１を阻止し、結果としてインスリン分泌を減少させるといわれている(Wangら、J. Clin. Invest., 95:417-21, 1995; D'Alessioら、J. Clin. Invest., 97:133-38, 1996)。明らかに、ラットにおけるＧＬＰ−１のインスリン親和性効果に関与している一つの受容体が、報告されるところによると、ラットの膵臓ランゲルハンス島細胞からクローン化されいる（Thorens, B. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 8641 - 8645, 1992)。エキセンジン類とエキセンジン−４［９−３９］は、クローン化ラットＧＬＰ−１受容体（ラット膵臓β細胞ＧＬＰ−１ 受容体（Fehmann, HCら、Peptides 15 (3): 453-6 , 1994））ヒトＧＬＰ−１ 受容体（Thorens Bら、Diabetes 42 (11): 1678-82, 1993）に結合するといわれている。クローン化ＧＬＰ−１受容体によりトランスフェクションされた細胞においては、エキセンジン−４ は作動薬であると報告されており、すなわち、エキセンジン−４はｃＡＭＰを増加させるが、一方、エキセンジン［９−３９］は拮抗薬として同定されており、すなわち、エキセンジン［９−３９］はエキセンジン−４ およびＧＬＰ−１の刺激作用を阻止する。
【０００９】
エキセンジン−４［９−３９］ はまた、完全長エキセンジンの拮抗薬として作用し、エキセンジン−３ およびエキセンジン−４による膵臓の腺房細胞の刺激を阻害することが報告されている（Raufmanら、J. Biol. Chem. 266:2897-902, 1991; Raumanら、J. Biol. Chem., 266: 21432-37, 1992）。エキセンジン［９−３９］は、エキセンジン−４ による血漿インスリン値の刺激を阻害し、また、エキセンジン−４およびＧＬＰ−１ のソマトスタチン放出刺激およびガストリン放出阻害活性を阻害することも報告されている（Kolligs, F.ら、Diabetes, 44: 16-19, 1995; Eisseleら、Life Sciences, 55: 629-34, 1994）。エキセンジン［９−３９］は食物摂取コントロールにおいて、中枢ＧＬＰ−１の生理学的関連性を研究調査するのに使用されてきた（Turton, M. D.ら、Nature 379: 69-72, 1996）。脳室内注射により投与されたＧＬＰ−１はラットの食物摂取を阻害する。ＧＬＰ−１送達ICVのこの飽和誘導効果は、エキセンジン ［９−３９］のＩＣＶ注射により阻害されることが報告されている（Turton、同上）。しかし、ＧＬＰ−１は、末梢部位への注射により投与される場合のマウスでは食物摂取を阻害しないことが報告されている（Turton, M. D.、Nature 379: 69-72, 1996; Bhavsar, S. P. 、Soc. Neurosci. Asbtr. 21: 460 (188.8), 1995）。
【００１０】
エキセンジンが哺乳動物ＧＬＰ−１ の類似種であるかどうかの研究調査の結果が、アメリカドクトカゲから得たエキセンジン遺伝子をクローン化したChenとDruckerにより報告された（J. Biol. Chem. 272 (7): 4108-15 (1997)）。アメリカドクトカゲもまた、プログルカゴン（ＧＬＰ−１はこれから処理される）に関する別個の遺伝子を有しており、それらがエキセンジンよりも哺乳類のプログルカゴンにより似ているという観察結果から、エキセンジンがＧＬＰ−１の類似種ではないことが示されている。
【００１１】
胃内容排出を遅らせるのに役立つ薬剤は、胃腸管放射線検査における診断補助薬として医学上の一つの地位を見出した。例えば、グルカゴンは、膵臓のランゲルハンス島のα細胞により産生されるポリペプチドホルモンである。これは、肝性グリコーゲン分解を活性化させることにより、グルコースを動員する高血糖症薬である。多少は膵臓インスリンの分泌を刺激することができる。グルカゴンは、例えば、静脈内グルコースの投与が可能ではない場合に、インスリン誘発低血糖症の治療に使用される。しかし、グルカゴンが胃腸管の運動性を減らすので、胃腸管放射線検査のなかで、診断補助薬としても使用される。グルカゴンはまた、痙攣に関連したさまざまな痛みを伴う胃腸管障害を治療するいくつかの研究のなかで使用されてきた。Danielら（Br. Med. J., 3: 720, 1974）は、鎮痛薬あるいは抗痙攣薬で治療された患者と比較して、グルカゴンで治療されている急性憩室炎患者の症状緩和が早いことを報告している。Glauserらによる総説では（J.Am. Coll. Emergency Physns. 8: 228, 1979）、グルカゴン治療後、急性食道食物閉塞の緩和が記述されている。もう一つの研究では、グルカゴンは、プラセボで治療された２２人の患者と比較して胆管疾患を有する２１人の患者で疼痛と圧痛を有意に緩和している（M. J. Stowerら、Br. J. Surg., 69: 591-2, 1982）。
【００１２】
アミリン作動薬を使用して胃腸管運動性を調節するための諸方法は、１９９５年３月１６日に公表された、共有されている国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ９４／１０２２５号のなかで説明されている。
【００１３】
エキセンジンアゴニストを使用して胃腸管運動性を調節するための諸方法は、１９９６年８月８日に出願された米国特許出願第０８／６９４，９５４号の部分継続出願である、「胃腸管運動性を調節するための諸方法（Methods for Regulating Gastrointestinal Motility）」と称する１９９７年８月８日に出願された共有されている米国特許出願第０８／９０８，８６７号のなかで説明されている。
【００１４】
エキセンジンアゴニストを使用して食物摂取を減らすための諸方法は、１９９７年1月７日に出願された米国仮特許出願第６０／０３４，９０５号、１９９７年８月７日に出願された米国仮特許出願第６０／０５５，４０４号、１９９７年１１月１４日に出願された米国仮特許出願第６０／０６５，４４２号および１９９７年１１月１４日に出願された米国仮特許出願第６０／０６６，０２９号の恩恵を主張している、「食物摂取軽減のためのエキセンジンとその作動薬の使用(Use of Exendin and Agonists Thereof for the Reduction of Food Intake)」と称する１９９８年１月７日に出願された、共有されている米国特許出願第０９／００３，８６９号に説明されている。
【００１５】
エキセンジンはまた、１９９８年２月１３日に出願された米国仮特許出願第６０／０７５，１２２号の恩恵を主張する、１９９９年２月５日に出願された、共有されている国際出願第ＰＣＴ／ＵＳ９９／０２５５４号に述べられているように、筋変力および利尿効果を有することが報告されている。
【００１６】
新規なエキセンジンアゴニスト化合物は、１９９７年８月８日に出願された米国特許出願第６０／０５５，４０４号の恩恵を主張する、「新規なエキセンジンアゴニスト化合物（Novel Exendin Agonist Compounds）」と称する１９９８年８月６日に出願された、共有されているＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６３８７号のなかで説明されている。
【００１７】
その他の新規なエキセンジンアゴニストが、1997年11月14日に出願された米国仮特許出願第６０／０６５，４４２号の恩恵を主張する、「新規なエキセンジンアゴニスト化合物（Novel Exendin Agonist Compounds）」と称する１９９８年１１月１３日出願された、共有されているＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／２４２１０号に説明されている。
【００１８】
さらに他の新規なエキセンジンアゴニストが、1997年11月14日に出願された米国仮特許出願第６０／０６６，０２９号の恩恵を主張する、「新規なエキセンジンアゴニスト化合物（Novel Exendin Agonist Compounds）」と称する１９９８年１１月１３日に出願された、共有されているＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９８／２４２７３号に説明されている。
【００１９】
遺伝子工学により産生された最初の治療用活性ペプチドおよびタンパク質が出現して以来、非経口以外の経路によりこれらの薬剤を送達することを可能にするよう、さらに増大していく需要があった。しかしこれは、今日広範に使用されている小さな薬剤分子からそれらを隔てるペプチドおよびタンパク質のまさに特性により阻まれてきた。これらの特性には、分子サイズ、タンパク質加水分解に対する耐性、急速な血漿クリアランス、特異的な投与-反応曲線、免疫原性、生体適合性、および凝集、吸収、変性を行うペプチドおよびタンパク質の性向が含まれる。
【００２０】
皮下あるいは静脈注射あるいは静脈内輸液以外の経路によるペプチド薬剤の投与は、例えば、経口投与の場合、胃腸管における酵素による変性および非吸収の両方があるので、多くの場合、実際的ではないと一般的には理解されている。このように、上に参照されているエキセンジンやペプチドエキセンジンアゴニスト類似体などのペプチド薬剤の投与には不便であって、ときには痛みを伴う注射に代わり得る諸方法の開発に対する需要がずっと継続して存在している。注射によるエキセンジンおよびエキセンジンアゴニストの投与に有用な製剤および用量に加えて、これらの問題を解決し、またエキセンジンおよびエキセンジンアゴニストの治療上効果的な用量の注射によらない送達に有用である製剤、用量および諸方法が説明され、また本出願では請求の範囲に記載されている。
【００２１】
上で確認された記事、特許および特許出願の内容および本出願に言及あるいは引用されているその他すべての書類は、引用により本出願に全体として掲載されている。出願人は、本出願のなかに、本出願において言及したあるいは引用した何らかのこうした記事、特許、特許出願、あるいはその他の文書から得た何らかおよびすべての資料および情報を物理的に掲載する権利を保留する。
【００２２】
【発明の概要】
一つの態様によると、本発明は、胃内容排出を遅らせ、また血漿グルコース値を低下させる際の効果を含む利便的な特性を示す、新規なエキセンジンおよびエキセンジンアゴニスト化合物製剤とその用量を提供する。このように、本発明の本態様には、緩衝液（好適には酢酸塩緩衝液）、等浸透圧調節剤（好適にはマンニトール）および任意に保存剤（好適にはｍ-クレゾール）を含み、ｐＨが約３．０と約７．０の間である前記製剤（好適には約４．０と約５．０の間）である、製剤を包含する。「エキセンジンアゴニスト」という用語は、例えば、エキセンジンが一つあるいはそれ以上のこうした効果を生む受容体に結合することにより、あるいはエキセンジンが一つあるいはそれ以上のこうした効果を生むシグナリングカスケードを活性化させることにより、エキセンジンの一つあるいはそれ以上の効果を模倣する化合物を意味している。エキセンジンアゴニストには、一つあるいはそれ以上の所望されるエキセンジンの活性を有するエキセンジン−３やエキセンジン−４の類似体や誘導体などのエキセンジンアゴニストペプチドが含まれる。さまざまなエキセンジンアゴニスト類似体が本出願において同定され、あるいは参照される。
【００２３】
本発明の範囲内にある付加的なエキセンジンおよびエキセンジンアゴニスト製剤には、エキセンジンおよびエキセンジンアゴニストの経口、鼻腔内、頬内側（口腔）、舌下、気管内および肺内送達において有用である非経口液体投与形態、凍結乾燥単位投与形態、凍結乾燥多数回投与態、およびこれらの投与形態の変形が含まれる。
【００２４】
このように、本発明は、非経口液体投与形態であって、約０．００５〜約０．４％、より特異的には、約０．００５〜約０．２％、あるいは約０．００５〜約０．０５％（w/v）の有効成分のそれぞれ水性系に含有し、さらに、０．０２〜０．５％（w/v）の酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩あるいはグルタミン酸塩あるいは同様な緩衝液を単独あるいは組み合わせて、最終的な組成物のpHが約３．０から７．０、より具体的には、約４．０から約６．０あるいは約４．０から約５．０を得るために含有し、加えて、約１．０から１０％（w/v）の炭水化物あるいは多価アルコールの等浸透圧調整剤（好ましくマンにトール）、あるいは０．９％までの生理食塩水、あるいは水性連続相において等張あるいは等浸透圧溶液を得るためのこれらの組み合わせのいずれかを含有することができる。その製剤が多数回使用の容器にパッケージされるのであれば、ｍ-クレゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピルおよびブチルパラオキシ安息香酸エステル類およびフェノールから構成されるグループから選択される抗菌保存剤の約０．００５〜１．０％（ｗ／ｖ）もまた加える。注射用の水の十分な量が溶液の所望される濃度を得るために加えられる。所望されれば、他の賦形剤だけではなく、塩化ナトリウムもまた加えられる。しかし、こうした賦形剤により活性成分の全体的な安定性を維持しなければならない。有用な多価アルコールには、ソルビトール、マンニトール、グリセロール、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧｓ）などの化合物が含まれる。多価アルコールおよび炭水化物はまた、上昇した温度により、また凍結融解あるいは凍結乾燥プロセスにより生じる変性に対してタンパク質を安定化させる際に効果的であろう。適当な炭水化物には、糖尿病患者に副作用を起こさせないガラクトース、アラビノース、ラクトースあるいは何らのその他の炭水化物が含まれるが、その用途を意図している場合には、すなわち、その炭水化物は血液中のグルコースの高い濃度を形成するようには代謝されないものである。好適には、本発明のペプチドは、分子量２００、４００、１４５０、３３５０、４０００、６０００および８０００のさまざまなポリエチレングリコール（ＰＥＧ）だけではなく、ソルビトール、マンニトール、イノシトール、グリセロール、キシリトールおよびポリプロピレン／エチレングリコール共重合体などの多価アルコールと混ぜる。マンニトールが好適な多価アルコールである。
【００２５】
本発明の凍結乾燥単位投与製剤もまた安定しているが、しかし等張および／または等浸透圧である必要はない。それら製剤には、活性成分（複数）、ケーク形成を容易にするためのバルキング剤（再構成に当っては等張化剤として、および／または等浸透圧調節剤としても作用して、活性成分の安定化を容易にする、および／または注射時の痛みを軽減する）が含まれており、また、そのケークの特性および／または再構成を容易するといった利益をもたらす界面活性剤が含まれる。本発明の凍結乾燥単位投与製剤には、約０．００５〜約０．４％、さらに特異的には、約０．００５〜０．０２％、あるいは０．００５〜０．０５％（ｗ／ｖ）の有効成分が含まれる。その意図が、再構成された活性成分に関して確立された安定期間内に容器の内容物を消費することであるならば、製剤のなかには緩衝液が必ずしも含まれる必要はなく、および／または、緩衝液で凍結乾燥体を再構成する必要はない。緩衝液が使用される場合は、その緩衝液は凍結乾燥体あるいは、再構成用の溶剤に含まれていてもよい。したがって、その製剤および／または再構成溶剤は、酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩あるいはグルタミン酸塩を単独であるいは組み合わせて個別にあるいは全体として約０．０２から０．５％（w/v）を含むことができ、pHが約３．０から７．０、より具体的には、約４．０から約６．０、あるいは約４．０から５．０の最終組成物を得ることができるようになっている。バルキング剤は、約１〜１０％（w/v）の炭水化物あるいは多価アルコール等浸透圧調節剤（上述したような）あるいは、０．９％までの生理食塩水、あるいは、再構成された水性相において等張あるいは等浸透圧液となるようなこれらの組み合わせのいずれかから構成することができる。界面活性剤、好適には、ポリソルベート８０あるいはその他の非イオン性界面活性剤の約０．１〜約１．０％（ｗ／ｖ）が含まれるのがよい。上述されているように、塩化ナトリウムの他、他の賦形剤も、所望される場合には、凍結乾燥された単位投与製剤には入れるのがよい。凍結乾燥前の液体製剤は実質的には等張および／または等浸透圧になっている、あるいは再構成の後に等張および／または等浸透圧溶液の形成が可能になるであろう。
【００２６】
本発明にはまた、凍結乾燥された、また液体多数回投与製剤が含まれる。上述されている非経口液体および凍結乾燥された単位投与製剤の場合と同様に、凍結乾燥された複数回投与製剤は、ケーク形成を容易にするため、バルキング剤を含有すべきである。保存剤は、患者による複数回使用を容易にするために含められる。これらの投与形態には、有効成分をそれぞれ、約０．００５〜約０．４％、さらに特異的には約０．００５〜約０．０２％、あるいは約０．００５〜０．０５％（ｗ／ｖ）が含まれる。緩衝液が使用される場合は、その緩衝液は、凍結乾燥体あるいは再構成溶剤のなかに含められるのがよく、また、その製剤および／または再構成溶剤は、酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩あるいはグルタミン酸塩を単独であるいは組み合わせて個別にあるいは全体として約０．０２から０．５％（w/v）を含むことができ、pHが約３．０から７．０、より具体的には、約４．０から約６．０、あるいは約４．０から５．０の最終的な組成物を得ることができるようになっている。バルキング剤は、約０．１〜１０％（w/v）の炭水化物あるいは多価アルコール等浸透圧調節剤（好適にはマンニト−ル）あるいは０．９％までの生理食塩水、あるいは再構成された水性相において等張あるいは等浸透圧溶溶液になるようなこれらの組み合わせのいずれかから構成されることができる。界面活性剤、好適には、ポリソルベート８０あるいはその他の非イオン性界面活性剤の約０．１〜約１．０％（ｗ／ｖ）を含めるのがよい。その製剤が多数回使用の容器にパッケージされるのであれば、ｍ-クレゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピルおよびブチルパラオキシ安息香酸エステル類およびフェノール（好適にはｍ−クレゾ−ル）から構成されるグループから選択される抗菌保存剤の約０．００５〜１．０％（ｗ／ｖ）もまた加えられる。所望されれば、塩化ナトリウムの他、他の賦形剤も含めることができる。凍結乾燥より以前に液体製剤は実質的に等張および／または等浸透圧にすべきであり、あるいは再構成の後に、等張および／または等浸透圧溶液の形成が可能とされるべきである。
【００２７】
本発明にはさらに、経口、頬内側、舌下、気管内、鼻腔内および肺内送達に有用な固形投与形態が含まれる。肺内および／または気管内投与形態をもっとも良く支持する製剤は、保存あるいは非保存剤入り液体製剤および／または乾燥粉末製剤かのいすれかがよい。保存あるいは非保存剤入り製剤は、保存あるいは非保存剤入り液体非経口製剤として既に記載した製剤に基本的には同一になるであろう。その溶液のｐＨは、約３．０〜７．０、さらに特異的には約４．０〜６．０、あるいは約４．０〜５．０であるべきであり、また、約５．０以上のｐＨが、気管支収縮の潜在性を軽減するためにはもっとも好適なものである。乾燥粉末製剤には、粒子サイズ形成および適当な粒子サイズ分布を容易にするため、バルキング剤および／または塩類を含めるのがよい。界面活性剤および／または塩類はまた、粒子形態に関する特性および/または活性成分の組織摂取を容易にするにおいて利益をもたらすことがある。乾燥粉末投与形態では、活性成分のそれぞれ１％〜１００％（ｗ／ｗ）の範囲にある可能性がある。粒子サイズ形成および／またはその分布を容易にするためにバルキング剤および／または塩類を必ずしも含める必要はないであろう。バルキング剤および／または塩類は、炭水化物あるいは多価アルコールの約０〜９９％（ｗ／ｗ）、あるいは約０〜９９％の塩類、あるいはその好適な粒子サイズおよび分布が得られるような併用かのいずれかから構成されることができる。界面活性剤、好適には、ポリソルベート８０あるいはその他の非イオン性界面活性剤の約０．１〜約１．０％（ｗ／ｗ）が含まれうる。塩化ナトリウムの他、その他の賦形剤も、所望により入れることができる。しかし、こうした賦形剤は、活性成分の全体的な安定性を維持し、かつ水和の適切なレベルを容易に実現するであろう。
【００２８】
また、本発明の範囲内には、保存剤を加えて、あるいは保存剤を加えない、３０ｍｍ酢酸塩緩衝液（ｐＨ約４．５）とマンニトールの中の５０ｍｇ／ｍｌまでのエキセンジンあるいはエキセンジンアゴニストを含む製剤がある。
さらに、本発明の範囲内において、注射により投与される場合、およびその他の経路により投与される場合、エキセンジンおよびエキセンジンアゴニストにとっては好適な投与となる。このように、エキセンジンおよび匹敵する効力を有するエキセンジンアゴニストのための製剤は、約０．１〜約０．５μｇ／ｋｇで、日に１回から３回投与の注射による投与に対して提供される。典型的には、約７０ｋｇ（1型糖尿病における平均）から約９０ｋｇ（２型糖尿病における平均）までの範囲内にある体重の糖尿病を有する患者に関しては、例えば、単回あるいは分割投与で約１０〜約１２０μｇ／日の合計投与という結果になる。分割投与で投与が行われる場合は、その投与は好適には１日に２回あるいは３回投与され、またさらに好適には１日に２回投与である。
【００２９】
一つの好適な注射の手順では、エキセンジンあるいはエキセンジンアゴニストは非経口投与され、さらに好適には、注射により、例えば、末梢部位への注射により投与される。好適には、エキセンジンあるいはエキセンジンアゴニストの約１μｇ〜３０μｇから約１ｍｇが１日に投与される。さらに好適には、エキセンジンあるいはエキセンジンアゴニストの約１〜３０μｇから約５００μｇあるいは約１〜３０μｇから約５０μｇが１日に投与される。もっとも好適には、対象者の体重と投与された化合物の効力によるが、エキセンジンあるいはエキセンジンアゴニストの約３μｇ〜５０μｇが１日に投与される。エキセンジン−４の効力をほぼ有する化合物に対する患者の体重に基づく用量は、好適には、投与毎に約０．００５μｇ／ｋｇから投与毎に約０．２μｇ／ｋｇまでという範囲である。さらに好ましくは、エキセンジン−４の効力をほぼ有する化合物に対する患者の体重に基づく用量は、投与毎に約０．０２μｇ／ｋｇから投与毎に約０．１μｇ／ｋｇまでという範囲である。もっとも好適には、エキセンジン−４の効力をほぼ有する化合物に対する患者の体重に基づいて決められた用量は、投与毎に約０．０５μｇ／ｋｇから投与毎に約０．１μｇ／ｋｇまでという範囲である。これらの用量で１日に１〜４回投与され、好適には、１日に１回〜２回投与される。エキセンジンあるいはエキセンジンアゴニストの用量は、通常、連続輸液により投与される場合はより低くなる。エキセンジンあるいはエキセンジンアゴニストの用量は、通常、経口、頬内側、舌下、鼻腔内、肺内あるいは皮膚パッチ送達などの注射に拠らない方法により投与される場合はより高くなる。
【００３０】
本発明による経口投与では、約５０〜約１００倍の活性成分が含まれ、すなわち、単回あるいは分割投与で１日に約５００〜１２，０００μｇが含まれており、好適には、１日に約５００から約５，０００μｇが含まれることになるであろう。本発明による肺内投与には、約１０〜約１００倍の活性成分が含まれ、すなわち、単回あるいは分割投与で１日に約１００〜約１２，０００μｇが含まれることになるであろう。 本発明による鼻腔内、頬内側、舌下投与はまた、約１０倍〜約１００倍の活性成分を含んでおり、すなわち、単回あるいは分割投与で１日に約１００〜約１２，０００μｇが含まれる。
【００３１】
鼻腔内投与の好適な用量は１日当り約１０〜１０００から約１２００〜１２，０００μｇであり、頬内側投与では、１日当り約１０〜１０００から約１２００〜１２，０００μｇであり、舌下投与では、１日当り約１０〜１０００から約１２００〜８，０００μｇである。舌下投与では好適には、頬内側用量よりも少ない。エキセンジン−４の効力よりも小さなあるいはそれよりも大きな効力を有するエキセンジンアゴニストの用量は、上述される用量及び本明細書の他の箇所に記載の用量から適切に増加させるか、あるいは、減少される。
【００３２】
また、本発明の範囲内に含まれるものは、前記新規なエキセンジンアゴニスト化合物製剤の投与の諸方法と、例えば、鼻腔内送達、肺内送達、経口送達、気管内送達、舌下送達および頬内側送達によるものを含む、皮下注射あるいは静脈注入に代わり得る送達手段による前記新規なエキセンジンアゴニスト化合物製剤と用量を投与するための諸方法である。
【００３３】
もう一つの態様によると、本発明は新規なエキセンジンアゴニスト製剤および用量を提供し、また、糖尿病（１型および２型糖尿病を含む）、肥満、および胃内容排出を遅らせ、血漿グルコース値を低下させ、また食物の摂取を減らすことができる治療薬の投与から恩恵を受けるその他の症状を治療するのに有用である諸方法を提供する。
【００３４】
本発明にはまた、エキセンジンあるいはエキセンジンアゴニストを投与することによりインスリン感受性を増加させるための対象者治療の諸方法が含まれる。本出願に説明されているエキセンジンおよびエキセンジンアゴニスト製剤と用量は、内因性あるいは外因性インスリンに対する対象者の感受性を増加させるのに使用されることができる。
【００３５】
一つの好適な態様では、本発明の諸方法において使用されるエキセンジンあるいはエキセンジンアゴニストは、エキセンジン−３ ［配列番号１］である。もう一つの好適な態様では、前記エキセンジンは、エキセンジン−４ ［配列番号２］である。他の好適なエキセンジンアゴニストには、エキセンジン−４ （１-３０） ［配列番号６：Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ］、エキセンジン−４ （１-３０） アミド ［配列番号７：Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ-ＮＨ₂］、エキセンジン−４ （１-２８） アミド ［配列番号４０：Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ
Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ-ＮＨ₂］、¹⁴Ｌｅｕ， ²⁵Ｐｈｅ エキセンジン−４ ［配列番号９：Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ
Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｓｅｒ-ＮＨ₂］、¹⁴Ｌｅｕ， ²⁵Ｐｈｅ エキセンジン−４ （１-２８）アミド ［配列番号４１：Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ ｌｙｓ Ａｓｎ-ＮＨ₂］および¹⁴Ｌｅｕ， ²²Ａｌａ， ²⁵Ｐｈｅ エキセンジン−４ （１-２８） ［配列番号８：Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ ｌｙｓ Ａｓｎ-ＮＨ₂］が含まれる。
【００３６】
本発明の他の特徴および長所は、その好適な実施態様の以下の説明と請求の範囲から明らかである。
【００３７】
本発明によると、また本出願において使用されているように、以下の用語は、明確に言明がないかぎり、以下の意味を有すると定義される。「製剤学的に許容される塩類」には、こうした化合物と有機あるいは無機酸の組み合わせから得られる本発明の化合物の塩類が含まれる。実際には、その塩形態の使用量は塩基形態の使用量にほぼ等しい。本発明の化合物は遊離塩基および塩形態の両方において有用であり、また、両方の形態とも本発明の範囲内にあると考えられる。
【００３８】
【発明の詳細な記載】
エキセンジンおよびエキセンジンアゴニスト
エキセンジン−３およびエキセンジン−４はアメリカドクトカゲおよびMexican Beaded Lizardの唾液分泌から単離された天然に生じるペプチドである。エキセンジン−４の動物テストは、血中グルコースを降下させるその能力が数時間続くことを示している。エキセンジン−４（３９−アミノ酸ポリペプチド）は本明細書中で用いる固相合成を用いて合成され、この合成方法は天然エキセンジン−４のものと同一であることが示されている。
【００３９】
エキセンジン−４の非臨床的薬理学の種々の態様が研究されてきた。脳において、エキセンジン−４は主として後部脳では最後野および核弧束領域に、および前脳では弓状下器官に結合する。エキセンジン−４結合はラットおよびマウスの脳および腎臓で観察されている。エキセンジン−４が腎臓で結合する構造部位は知られていない。
【００４０】
多数の他の実験はエキセンジン−４およびＧＬＰ−１の生物学的作用を比較し、エキセンジン−４についての特性のより好都合なスペクトルを証明した。単一皮下用量のエキセンジン−４はｄｂ／ｄｂ（糖尿病）およびｏｂ／ｏｂ（糖尿病肥満）において４０％までの血漿中グルコースを低下させた。糖尿病 Fatty Zucker（ＺＤＦ）ラットにおいて、エキセンジン−４での５週間の処理はＨｂＡ_1c（血漿中グルコースレベルを評価するのに使用されるグリコシル化ヘモグロビンの尺度）を４１％だけ低下させた。また、肥満ＺＤＦラットにおいて処理の５週間後にインスリン感受性もまた７６％だけ改良された。グルコース非耐性霊長類において、血漿中グルコースの用量−依存性減少も観察された。また、エキセンジンが、グルコース−刺激インスリン放出を増幅するにおいて、ＧＬＰ−１よりも優れたおよび／または効果的であることを示す実験の結果を記載する実施例６を参照されたい。実施例８は、さらに、イン・ビボでグルコースを低下させるエキセンジン−４の能力がＧＬＰ−１よりも３４３０倍優れていることを示す研究を記載する。
【００４１】
また、齧歯類においてエキセンジン−４のインスリン向性作用も観察され、非絶食Harlan Sprague Dawley（ＨＳＤ）ラットにおいて１００％を超えて、および非絶食ｄｂ／ｄｂマウスにおいて〜１０倍までグルコースに対するインスリン応答を改良する。より高い予備処理血漿中グルコース濃度はより大きいグルコース−降下効果と関連付けられている。かくして、エキセンジン−４の観察されたグルコース降下効果は用量−依存的であるように見え、もし動物が既にオイグリセミックであれば最小である。また、エキセンジン−４処理は、実施例９および１３で記載されているごとく、糖血指標において、およびインスリン感受性において改良と関連付けられる。
【００４２】
エキセンジン−４用量依存性は、ＨＳＤラットにおいて胃の空化の遅延化を示し、この作用はＬＰ−１よりも〜９０倍優れていた。また、エキセンジン−４は末梢投与に続きＮＩＨ／Ｓｗ（Ｓｗｉｓｓ）マウスにおいて食物摂取を低下させることが示され、この作用のためＧＬＰ−１よりも少なくとも１０００倍優れていた。エキセンジン−４は、低インスリン血症、高インスリン血症クランプ条件の間に麻酔ＺＤＦラットにおいてほぼ４０％だけ血漿中グルカゴン濃度を低下させたが、正常ラットにおいてオイグリセミック条件の間に血漿中グルカゴン濃度に影響しなかった。例えば、実施例４参照。エキセンジン−４は肥満ＺＤＦラットにおいて体重を用量−依存的に低下させることが示されており、他方、痩せたＺＤＦラットにおいては、体重における観察された低下は一過的であるように見える。
【００４３】
インスリン分泌の増加および回復に対する、ならびにグルカゴン分泌の阻害に対する効果を通じて、エキセンジン−４はインスリンを分泌する能力を保有する２型糖尿病を持つヒトで有用であろう。食物摂取、胃の空化、栄養吸収を変調する他の機構、およびグルカゴン分泌に対するその効果は、また、例えば、肥満、１型糖尿病の治療において、およびインスリン分泌を低下されてしまった２型糖尿病を持つヒトにおいて、エキセンジン−４の利用性を支持する。
【００４４】
エキセンジン−４の毒性学は、マウス、ラットおよびサルにおける単一−用量実験において、ラットおよびサルにおける反復−用量（２８連続日用量まで）実験において、および突然変異誘発および染色体改変についてのイン・ビトロテストにおいて調べられてきた。現在、死亡は起こらず、血液学、臨床化学、または目視または顕微鏡組織変化において観察された処理−関連変化はなかった。エキセンジン−４は非突然変異誘発性であることが示され、（５０００μg/ｍｌまでの）テストした濃度で染色体異常を引き起こさなかった。
【００４５】
エキセンジン−４の非臨床的薬物動態学および代謝の調査を支持して、多数の免疫アッセイが開発されている。限定された感度（〜１００pM）を持つラジオイムノアッセイは初期の薬物動態学研究で使用された。エキセンジン−４についての２−部位ＩＲＭＡアッセイが引き続いて有効化され、１５pMと定量のより低い限界であった。実施例５および７参照。エキセンジン−４の生物学的利用性は、皮下投与されると、ラジオイムノアッセイを用いほぼ５０〜８０％であることが判明した。これは、腹腔内投与後に観察されたものと同様であった（４８〜６０％）。ピーク血漿中濃度（Ｃ_max）は３０および４３分の間に起こった（Ｔ_max）。Ｃ_maxおよびＡＵＣ値は共に用量に対して単調に関連した。皮下投与されたエキセンジン−４についての見掛けの終期半減期はほぼ９０〜１１０分であった。これは静脈内投与に続いて観察された１４〜４１分よりも有意に長かった。同様の結果がＩＲＭＡアッセイを用いて得られた。ＧＬＰ−１と比較したエキセンジン−４での分解実験は、エキセンジン−４が分解に対して比較的抵抗性であることを示す。
【００４６】
代謝に対するその安定性について、およびその物理的特徴について、エキセンジンの抗糖尿病活性に関連し得る構造を評価するための構造活性関係（ＳＡＲ）の調査は、特にそれがペプチド安定性および代替送達系に従うことに関するので、エキセンジンアゴニストペプチド化合物の発見に導いた。エキセンジンアゴニストは、１またはそれ以上の天然アミノ酸が欠失されるかあるいは他のアミノ酸（複数含む）で置き換えられたエキセンジンペプチドアナログを含む。好ましいエキセンジンアゴニストはエキセンジン−４のアゴニストアナログである。
特に好ましいエキセンジンアゴニストは、式（Ｉ）［配列番号３］：Ｘａａ₁ Ｘａａ₂ Ｘａａ₃ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｘａａ₄ Ｘａａ₅ Ｘａａ₆ Ｘａａ₇ Ｘａａ₈ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｘａａ₉ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｘａａ₁₀ Ｘａａ₁₁ Ｘａａ₁₂ Ｘａａ₁₃ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₁₄ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｘａａ₁₅ Ｘａａ₁₆ Ｘａａ₁₇ Ｘａａ₁₈−Ｚ
［式中、Ｘａａ₁はＨｉｓ、ＡｒｇまたはＴｙｒであり； Ｘａａ₂はＳｅｒ、Ｇｌｙ、ＡｌａまたはＴｈｒであり； Ｘａａ₃はＡｓｐまたはＧｌｕであり； Ｘａａ₄はＰｈｅ、Ｔｙｒまたはナフチルアラニンであり、Ｘａａ₅はＴｈｒまたはＳｅｒであり； Ｘａａ₆はＳｅｒまたはＴｈｒであり； Ｘａａ₇はＡｓｐまたはＧｌｕであり； Ｘａａ₈はＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ペンチルグリシンまたはＭｅｔであり； Ｘａａ₉はＬｅｕ、Ｉｌｅ、ペンチルグリシン、ＶａｌまたはＭｅｔであり； Ｘａａ₁₀ はＰｈｅ、Ｔｙｒまたはナフチルアラニンであり； Ｘａａ₁₁はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ペンチルグリシン、tert−ブチルグリシンまたはＭｅｔであり； Ｘａａ₁₂はＧｌｕまたはＡｓｐであり； Ｘａａ₁₃はＴｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒまたはナフチルアラニンであり； Ｘａａ₁₄、Ｘａａ₁₅、Ｘａａ₁₆およびＸａａ₁₇は独立してＰｒｏ、ホモプリン、３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ、チオプロリン、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンまたはＮ−アルキルアラニンであり； Ｘａａ₁₈はＳｅｒ、ＴｈｒまたはＴｙｒであり；およびＺは−ＯＨまたは−ＮＨ₂であり；但し、当該化合物はエキセンジン−３またはエキセンジン−４ではない］
の化合物を含めた、「Novel Exendin Agonist Compounds」と題され、１９９8年、８月6日に出願された米国仮出願Ｎｏ．６０／０５５，４０４の利益を主張する１９９８年８月６日に出願された国際出願Ｎｏ．ＰＣＴ／ＵＳ９８／１６３８７に記載されたものである。
【００４７】
Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンおよびＮ−アルキルアラニンについての好ましいＮ−アルキル基は、好ましくは１ないし約６個の炭素原子、より好ましくは１ないし４個の炭素原子の低級アルキル基を含む。適切な化合物は配列番号９ないし３９のアミノ酸配列を有する図１にリストされたものを含む。
好ましいエキセンジンアゴニスト化合物は、Ｘａａ₁がＨｉｓまたはＴｙｒであるものを含む。より好ましくは、Ｘａａ₁はＨｉｓである。
好ましいものは、Ｘａａ₂がＧｌｙである化合物である。
好ましいものは、Ｘａａ₉がＬｅｕ、ペンチルグリシンまたはＭｅｔである化合物である。
好ましいものは、Ｘａａ₁₃がＴｒｐまたはＰｈｅであるものを含む。
また、好ましいものは、Ｘａａ₄がＰｈｅまたはナフチルアラニンであり；Ｘａａ₁₁がＩｌｅまたはＶａｌであって、Ｘａａ₁₄、Ｘａａ₁₅、Ｘａａ₁₆およびＸａａ₁₇が独立してＰｒｏ、ホモプリン、チオプロリンまたはＮ−アルキルアラニンから選択される化合物である。好ましくは、Ｎ−アルキルアラニンは１ないし６個の炭素原子のＮ−アルキル基を有する。
【００４８】
特に好ましい態様によると、Ｘａａ₁₅、Ｘａａ₁₆よびＸａａ₁₇は同一のアミノ酸残基である。
好ましいものは、Ｘａａ₁₈がＳｅｒまたはＴｙｒ、より好ましくはＳｅｒである化合物である。
好ましくはＺは−ＮＨ₂である。
【００４９】
１つの態様によると、好ましいものは、Ｘａａ₁がＨｉｓまたはＴｙｒ、より好ましくはＨｉｓであり； Ｘａａ₂がＧｌｙであり； Ｘａａ₄がＰｈｅまたはナフチルアラニンであり；Ｘａａ₉がＬｅｕ、ペンチルグリシンまたはＭｅｔであり； Ｘａａ₁₀ がＰｈｅまたはナフチルアラニンであり； Ｘａａ₁₁がＩｌｅまたはＶａｌであり； Ｘａａ₁₄、Ｘａａ₁₅、Ｘａａ₁₆およびＸａａ₁₇が独立してＰｒｏ、ホモプリン、トオプロリンまたはＮ−アルキルアラニンであり； Ｘａａ₁₈がＳｅｒまたはＴｙｒ、より好ましくはＳｅｒである式（Ｉ）の化合物である。より好ましくは、Ｚは−ＮＨ₂である。
【００５０】
特に好ましい態様によると、特に好ましい化合物は、Ｘａａ₁がＨｉｓまたはＡｒｇであり； Ｘａａ₂がＧｌｙであり； Ｘａａ₃がＡｓｐまたはＧｌｕであり； Ｘａａ₄がＰｈｅまたはナフチルアラニンであり； Ｘａａ₅がＴｈｒまたはＳｅｒであり； Ｘａａ₆がＳｅｒまたはＴｈｒであり； Ｘａａ₇がＡｓｐまたはＧｌｕであり； Ｘａａ₈がＬｅｕまたはペンチルグリシンであり；Ｘａａ₉がＬｅｕまたはペンチルグリシンであり； Ｘａａ₁₀ がＰｈｅまたはナフチルアラニンであり； Ｘａａ₁₁がＩｌｅ、Ｖａｌまたはｔ−ブチルチルグリシンであり； Ｘａａ₁₂がＧｌｕまたはＡｓｐであり； Ｘａａ₁₃がＴｒｐまたはＰｈｅであり； Ｘａａ₁₄、Ｘａａ₁₅、Ｘａａ₁₆およびＸａａ₁₇が独立してＰｒｏ、ホモプリン、チオプロリン、またはＮ−メチルアラニンであり； Ｘａａ₁₈がＳｅｒまたはＴｙｒであり； Ｚが−ＯＨまたは−ＮＨ₂であり； 但し、当該化合物は配列番号１または２いずれかの式を有しない式（Ｉ）のものを含む。特に好ましい化合物は配列番号９、１０、２１、２２、２３、２６、２８、３４、３５および３９のアミノ酸配列を有するものを含む。
【００５１】
特に好ましい態様によると、Ｘａａ₉がＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌまたはペンチルグリシンであり、より好ましくはＬｅｕまたはペンチルグリシンであり、Ｘａａ₁₃がＰｈｅ、Ｔｙｒまたはナフチルアラニンであり、より好ましくはＰｈｅまたはナフチルアラニンである化合物が提供される。これらの化合物は有利な作用持続を呈し、イン・ビトロおよびイン・ビボ双方において、ならびに当該化合物の合成の間に酸化的分解されにくい。
【００５２】
また、エキセンジンアゴニスト化合物は、式（ＩＩ）［配列番号４］：
Ｘａａ₁ Ｘａａ₂ Ｘａａ₃ Ｇｌｙ Ｘａａ₅ Ｘａａ₆ Ｘａａ₇ Ｘａａ₈ Ｘａａ₉ Ｘａａ₁₀ Ｘａａ₁₁ Ｘａａ₁₂ Ｘａａ₁₃ Ｘａａ₁₄ Ｘａａ₁₅ Ｘａａ₁₆ Ｘａａ₁₇ Ａｌａ Ｘａａ₁₉ Ｘａａ₂₀ Ｘａａ₂₁ Ｘａａ₂₂ Ｘａａ₂₃ Ｘａａ₂₄ Ｘａａ₂₅ Ｘａａ₂₆ Ｘａａ₂₇ Ｘａａ₂₈−Ｚ₁；
［式中、Ｘａａ₁はＨｉｓ、ＡｒｇまたはＴｙｒ；
Ｘａａ₂はＳｅｒ、Ｇｌｙ、ＡｌａまたはＴｈｒ；
Ｘａａ₃はＡｓｐまたはＧｌｕ；
Ｘａａ₅はＡｌａまたはＴｈｒ；
Ｘａａ₆はＡｌａ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒまたはナフチルアラニン；
Ｘａａ₇はＴｈｒまたはＳｅｒ；
Ｘａａ₈はＡｌａ、ＳｅｒまたはＴｈｒ；
Ｘａａ₉はＡｓｐまたはＧｌｕ；
Ｘａａ₁₀ はＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ペンチルグリシンまたはＭｅｔ；
Ｘａａ₁₁はＡｌａまたはＳｅｒ；
Ｘａａ₁₂はＡｌａまたはＬｙｓ；
Ｘａａ₁₃はＡｌａまたはＧｌｎ；
Ｘａａ₁₄はＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ペンチルグリシン、ＶａｌまたはＭｅｔ；
Ｘａａ₁₅はＡｌａまたはＧｌｕ；
Ｘａａ₁₆はＡｌａまたはＧｌｕ；
Ｘａａ₁₇はＡｌａまたはＧｌｕ；
Ｘａａ₁₉はＡｌａまたはＶａｌ；
Ｘａａ₂₀はＡｌａまたはＡｒｇ；
Ｘａａ₂₁はＡｌａまたはＬｅｕ；
Ｘａａ₂₂はＡｌａ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒまたはナフチルアラニン；
Ｘａａ₂₃はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ペンチルグリシン、tert−ブチルグリシンまたはＭｅｔ；
Ｘａａ₂₄はＡｌａ、ＧｌｕまたはＡｓｐ；
Ｘａａ₂₅はＡｌａ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒまたはナフチルアラニン；
Ｘａａ₂₆はＡｌａまたはＬｅｕ；
Ｘａａ₂₇はＡｌａまたはＬｙｓ；
Ｘａａ₂₈はＡｌａまたはＡｓｎ；
Ｚ₁は−ＯＨ、
−ＮＨ₂、
Ｇｌｙ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｘａａ₃₆−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｘａａ₃₆ Ｘａａ₃₇−Ｚ₂または
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｘａａ₃₆ Ｘａａ₃₇ Ｘａａ₃₈−Ｚ₂；
Ｘａａ₃₁、Ｘａａ₃₆、Ｘａａ₃₇およびＸａａ₃₈は独立してＰｒｏ、ホモプリン、３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ、チオプロリン、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンまたはＮ−アルキルアラニン；および
Ｚ₂は−ＯＨまたは−ＮＨ₂；
但し、Ｘａａ₃、Ｘａａ₅、Ｘａａ₆、Ｘａａ₈、Ｘａａ₁₀ 、Ｘａａ₁₁、Ｘａａ₁₂、Ｘａａ₁₃、Ｘａａ₁₄、Ｘａａ₁₅、Ｘａａ₁₆、Ｘａａ₁₇、Ｘａａ₁₉、Ｘａａ₂₀、Ｘａａ₂₁、Ｘａａ₂₄、Ｘａａ₂₅、Ｘａａ₂₆、Ｘａａ₂₇およびＸａａ₂₈のうちの３以下はＡｌａである］
の化合物を含めた、１９９７年１１月１４日に出願された米国仮出願Ｎｏ．６０／０６５，４４２の利益を主張する１９９８年１１月１３日に出願された、「Novel Exendin Agonist compounds」と題された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／２４２１０に記載されたものを含む。
【００５３】
Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペントルグリシンおよびＮ−アルキルアラニンについての好ましいＮ−アルキル基は好ましくは１ないし６個の炭素原子、より好ましくは１ないし４個の炭素原子の低級アルキル基を含む。
好ましいエキセンジンアゴニスト化合物は、Ｘａａ₁がＨｉｓまたはＴｙｒであるものを含む。より好ましくは、Ｘａａ₁はＨｉｓである。
好ましいものはＸａａ₂がＧｌｙである化合物である。
好ましいものはＸａａ₁₄がＬｅｕ、ペンチルグリシンまたはＭｅｔである化合物である。
好ましい化合物はＸａａ₂₅がＴｒｐまたはＰｈｅであるものである。
好ましい化合物はＸａａ₆がＰｈｅまたはナフチルアラニンであり；Ｘａａ₂₂がＰｈｅまたはナフチルアラニンであってＸａａ₂₃がＩｌｅまたはＶａｌであるものである。
【００５４】
好ましいものはＸａａ₃₁、Ｘａａ₃₆、Ｘａａ₃₇およびＸａａ₃₈が独立してＰｒｏ、ホモプリン、チオプロリンおよびＮ−アルキルアラニンから選択される化合物である。
好ましくは、Ｚ₁は−ＮＨ₂である。
好ましくは、Ｚ₂は−ＮＨ₂である。
【００５５】
１つの態様によると、好ましいものは、Ｘａａ₁がＨｉｓまたはＴｙｒであり、より好ましくはＨｉｓであり； Ｘａａ₂がＧｌｙであり； Ｘａａ₆がＰｈｅまたはナフチルアラニンであり； Ｘａａ₁₄がＬｅｕ、ペンチルグリシンまたはＭｅｔであり； Ｘａａ₂₂がＰｈｅまたはナフチルアラニンであり； Ｘａａ₂₃がＩｌｅまたはＶａｌであり； Ｘａａ₃₁、Ｘａａ₃₆、Ｘａａ₃₇およびＸａａ₃₈が独立してＰｒｏ、ホモプリン、チオプロリンまたはＮ−アルキルアラニンである化合物である。より好ましくは、Ｚ₁は−ＮＨ₂である。
【００５６】
特に好ましい態様によると、特に好ましい化合物は、Ｘａａ₁がＨｉｓまたはＡｒｇであり； Ｘａａ₂がＧｌｙまたはＡｌａであり； Ｘａａ₃がＡｓｐまたはＧｌｕであり； Ｘａａ₅がＡｌａまたはＴｈｒであり； Ｘａａ₆がＡｌａ、Ｐｈｅまたはナフチルアラニンであり； Ｘａａ₇がＴｈｒまたはＳｅｒであり； Ｘａａ₈がＡｌａ、ＳｅｒまたはＴｈｒであり； Ｘａａ₉がＡｓｐまたはＧｌｕであり； Ｘａａ₁₀ がＡｌａ、Ｌｅｕまたはペンチルグリシンであり； Ｘａａ₁₁がＡｌａまたはＳｅｒであり； Ｘａａ₁₂がＡｌａまたはＬｙｓであり； Ｘａａ₁₃がＡｌａまたはＧｌｎであり； Ｘａａ₁₄がＡｌａ、Ｌｅｕまたはペンチルグリシンであり； Ｘａａ₁₅がＡｌａまたはＧｌｕであり； Ｘａａ₁₆がＡｌａまたはＧｌｕであり； Ｘａａ₁₇がＡｌａまたはＧｌｕであり； Ｘａａ₁₉がＡｌａまたはＶａｌであり； Ｘａａ₂₀ がＡｌａまたはＡｒｇであり； Ｘａａ₂₁がＡｌａまたはＬｅｕであり； Ｘａａ₂₂がＰｈｅまたはナフチルアラニンであり； Ｘａａ₂₃がＩｌｅ、Ｖａｌまたはtert−ブチルグリシンであり； Ｘａａ₂₄がＡｌａ、ＧｌｕまたはＡｓｐであり； Ｘａａ₂₅がＡｌａ、ＴｒｐまたはＰｈｅであり； Ｘａａ₂₆がＡｌａまたはＬｅｕであり； Ｘａａ₂₇がＡｌａまたはＬｙｓであり； Ｘａａ₂₈がＡｌａまたはＡｓｎであり； Ｚ₁が−ＯＨ、−ＮＨ₂、Ｇｌｙ−Ｚ₂、Ｇｌｙ Ｇｌｙ−Ｚ₂、 Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁−Ｚ₂、Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁、 Ｓｅｒ−Ｚ₂、 Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ−Ｚ₂、 Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ−Ｚ₂、 Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ−Ｚ₂、 Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｘａａ₃₆−Ｚ₂、 Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｘａａ₃₆ Ｘａａ₃₇−Ｚ₂、 Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｘａａ₃₆ Ｘａａ₃₇ Ｘａａ₃₈−Ｚ₂であり； Ｘａａ₃₁、 Ｘａａ₃₆、 Ｘａａ₃₇およびＸａａ₃₈は独立してＰｒｏ、ホモプリン、チオプロリンまたはＮ−メチルアラニンであり； Ｚ₂は−ＯＨまたは−ＮＨ₂であり；但し、Ｘａａ₃、Ｘａａ₅、Ｘａａ₆、Ｘａａ₈、Ｘａａ₁₀ 、Ｘａａ₁₁、Ｘａａ₁₂、Ｘａａ₁₃、Ｘａａ₁₄、Ｘａａ₁₅、Ｘａａ₁₆、Ｘａａ₁₇、Ｘａａ₁₉、Ｘａａ₂₀、Ｘａａ₂₁、Ｘａａ₂₄、Ｘａａ₂₅、Ｘａａ₂₆、Ｘａａ₂₇およびＸａａ₂₈のうちの３以下はＡｌａである式（ＩＩ）のものを含む。特に好ましい化合物は配列番号４０〜６１のアミノ酸配列を有するものを含む。
【００５７】
特に好ましい態様によると、Ｘａａ₁₄がＬｅｕ、Ｖａｌまたはペンチルグリシン、より好ましくはＬｅｕまたはペンチルグリシンであって、Ｘａａ₂₅がＰｈｅ、Ｔｙｒまたはナフチルアラニン、より好ましくはＰｈｅまたはナフチルアラニンである化合物が提供される。これらの化合物はイン・ビトロおよびイン・ビボ双方において、ならびに当該化合物の合成の間に、酸化的分解に対して感受性がより低い。
【００５８】
エキセンジンアゴニストは、また、式：［配列番号５］：
Ｘａａ₁ Ｘａａ₂ Ｘａａ₃ Ｘａａ₄ Ｘａａ₅ Ｘａａ₆ Ｘａａ₇ Ｘａａ₈ Ｘａａ₉ Ｘａａ₁₀ Ｘａａ₁₁ Ｘａａ₁₂ Ｘａａ₁₃ Ｘａａ₁₄ Ｘａａ₁₅ Ｘａａ₁₆ Ｘａａ₁₇ Ａｌａ Ｘａａ₁₉ Ｘａａ₂₀ Ｘａａ₂₁ Ｘａａ₂₂ Ｘａａ₂₃ Ｘａａ₂₄ Ｘａａ₂₅ Ｘａａ₂₆ Ｘａａ₂₇ Ｘａａ₂₈−Ｚ₁
［式中、Ｘａａ₁はＨｉｓ、Ａｒｇ、Ｔｙｒ、Ａｌａ、Ｎｏｒｖａｌ、ＶａｌまたはＮｏｒｌｅｕ；
Ｘａａ₂はＳｅｒ、Ｇｌｙ、ＡｌａまたはＴｈｒ；
Ｘａａ₃はＡｌａ、ＡｓｐまたはＧｌｕ；
Ｘａａ₄はＡｌａ、Ｎｏｒｖａｌ、Ｖａｌ、ＮｏｒｌｅｕまたはＧｌｙ；
Ｘａａ₅はＡｌａまたはＴｈｒ；
Ｘａａ₆はＰｈｅ、Ｔｙｒまたはナフチルアラニン；
Ｘａａ₇はＴｈｒまたはＳｅｒ；
Ｘａａ₈はＡｌａ、ＳｅｒまたはＴｈｒ；
Ｘａａ₉はＡｌａ、Ｎｏｒｖａｌ、Ｖａｌ、Ｎｏｒｌｅｕ、ＡｓｐまたはＧｌｕ；
Ｘａａ₁₀はＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｖａｌ、ペンチルグリシンまたはＭｅｔ；
Ｘａａ₁₁はＡｌａまたはＳｅｒ；
Ｘａａ₁₂はＡｌａまたはＬｙｓ；
Ｘａａ₁₃はＡｌａまたはＧｌｎ；
Ｘａａ₁₄はＡｌａ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、ペンチルグリシン、ＶａｌまたはＭｅｔ；
Ｘａａ₁₅はＡｌａまたはＧｌｕ；
Ｘａａ₁₆はＡｌａまたはＧｌｕ；
Ｘａａ₁₇はＡｌａまたはＧｌｕ；
Ｘａａ₁₉はＡｌａまたはＶａｌ；
Ｘａａ₂₀はＡｌａまたはＡｒｇ；
Ｘａａ₂₁はＡｌａまたはＬｅｕ；
Ｘａａ₂₂はＰｈｅ、Ｔｙｒまたはナフチルアラニン；
Ｘａａ₂₃はＩｌｅ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ペンチルグリシン、tert−ブチルグリシンまたはＭｅｔ；
Ｘａａ₂₄はＡｌａ、ＧｌｕまたはＡｓｐ；
Ｘａａ₂₅はＡｌａ、Ｔｒｐ、Ｐｈｅ、Ｔｙｒまたはナフチルアラニン；
Ｘａａ₂₆はＡｌａまたはＬｅｕ；
Ｘａａ₂₇はＡｌａまたはＬｙｓ；
Ｘａａ₂₈はＡｌａまたはＡｓｎ；
Ｚ₁は−ＯＨ、
−ＮＨ₂、
Ｇｌｙ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｘａａ₃₆−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｘａａ₃₆ Ｘａａ₃₇−Ｚ₂、
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｘａａ₃₆ Ｘａａ₃₇ Ｘａａ₃₈−Ｚ₂または
Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｘａａ₃₁ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｘａａ₃₆ Ｘａａ₃₇ Ｘａａ₃₈ Ｘａａ₃₉−Ｚ₂；
ここに、Ｘａａ₃₁、Ｘａａ₃₆、Ｘａａ₃₇およびＸａａ₃₈は独立してＰｒｏ、ホモプリン、３Ｈｙｐ、４Ｈｙｐ、チオプロリン、Ｎ−アルキルグリシン、Ｎ−アルキルペンチルグリシンまたはＮ−アルキルアラニン；および
Ｚ₂は−ＯＨまたは−ＮＨ₂；
但し、Ｘａａ₃、Ｘａａ₄、Ｘａａ₅、Ｘａａ₆、Ｘａａ₈、Ｘａａ₉、Ｘａａ₁₀ 、Ｘａａ₁₁、Ｘａａ₁₂、Ｘａａ₁₃、Ｘａａ₁₄、Ｘａａ₁₅、Ｘａａ₁₆、Ｘａａ₁₇、Ｘａａ₁₉、Ｘａａ₂₀、Ｘａａ₂₁、Ｘａａ₂₄、Ｘａａ₂₅、Ｘａａ₂₆、Ｘａａ₂₇およびＸａａ₂₈のうちの３以下はＡｌａであり；但し、もしＸａａ₁がＨｉｓ、ＡｒｇまたはＴｙｒである場合、Ｘａａ₃、Ｘａａ₄およびＸａａ₉のうちの少なくとも１つはＡｌａである］
の化合物を含めた、１９９７年１１月１４日に出願された米国仮出願Ｎｏ．６０／０６６，０２９の利益を主張する１９９８年１１月１３日に出願された、「Novel exendin Agonist compounds」と題された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９８／２４２７３に記載されたものを含む。
【００５９】
化合物の調製
本発明の処方および投与の成分を構成する化合物は、標準的な固相ペプチド合成技術、好ましくは自動または半自動ペプチド合成器を用いて調製することができる。エキセンジン−３およびエキセンジン−４の調製は後記実施例１および２に記載する。さらなるエキセンジンアゴニストペプチドアナログは後記実施例１３−１９８に記載する。
【００６０】
典型的には、自動または半自動ペプチド合成技術を用い、α−Ｎ−カルバミル保護アミノ酸および樹脂上の成長するペプチド鎖に付着したアミノ酸を、ジイソプロピルベンゾトリアゾールの存在下、ジシクロヘキシルカルボジイミドおよび１−ヒドロキシベンゾトリアゾールのごときカップリング剤の存在下で、ジメチルホルムアミド、Ｎ−メチルピロリジノンまたは塩化メチレンのごとき不活性溶媒中、室温にてカップリングさせる。トリフルオロ酢酸またはピペリジンのごとき試薬を用い、該α−Ｎ−カルバモイル保護基を得られたペプチド−樹脂から除去し、ペプチド鎖に付加させるべき次の所望のアミノ酸でカップリング反応を反復する。適当なＮ−保護基は当該分野でよく知られており、ｔ−ブチルオキシカルボニル（ｔＢｏｃ）およびフルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）がここでは好ましい。
【００６１】
ペプチド合成器で使用される溶媒、アミノ酸誘導体および４−メチルベンズヒドリル−アミン樹脂はApplied Biosystems Inc. （Foster City, CA）から購入することができる。以下の側鎖保護アミノ酸はApplied Biosystems，Inc.から購入することができる：Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｍｔｓ）， Ｆｍｏｃ−Ａｒｇ（Ｐｍｃ）、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｒ（ｔ−Ｂｕ）、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｓｅｒ（ｔ−Ｂｕ）、Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（ＢｒＺ）、Ｆｍｏｃ−Ｔｙｒ（ｔ−Ｂｕ）、Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｌ−Ｚ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（Ｂｏｃ）、Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（Ｂｚｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｕ（ｔ−Ｂｕ）、Ｆｍｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｒｔ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｎ（Ｔｒｔ）、およびＦｍｏｃ−Ｇｌｎ（Ｔｒｔ）。Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（ＢＯＭ）はApplied Biosystems，Inc.またはBachem Inc. (Torrance, CA）からから購入することができる。アニソール、ジメチルスルフィド、フェノール、エタンジオール、およびチオアニソールはAldrich Chemical Company (Milwaukee, WI）から購入することができる。Air Products and Chemicals (Allentown, PA）はＨＦを供給する。エチルエーテル、酢酸、およびメタノールはFisher Scientific (Pittsburgh, PA)から購入することができる。
【００６２】
固相ペプチド合成は、ＮＭＰ／ＨＯＢｔ（オプション１）システムおよびキャッピングと共にｔＢｏｃまたはＦｍｏｃ化学（ＡＢＩ ４３０Ａペプチド合成器についてのApplied Biosystems の使用者のマニュアル、バージョン１．３Ｂ １９８８年７月１日、セクション６、４９−７０頁、Applied Biosystems，Inc.， Foster City, CA)を用い、自動ペプチド合成器（モデル４３０Ａ， Applied Biosystems Inc., Foster City, CA)で行うことができる。Ｂｏｃ−ペプチド−樹脂はＨＦ（−５℃ないし０℃、１時間）で切断することができる。ペプチドは交互に水および酢酸で樹脂から抽出することができ、濾液は凍結乾燥することができる。Ｆｍｏｃ−ペプチド樹脂は標準的な方法（Introduction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems, Inc., 1990, 6-12頁）に従って切断することができる。また、ペプチドはAdvance Chem Tech Synthesizer (モデル MPS 350, Louisville, Kentuchy）を用いて組み立てることができる。
【００６３】
ペプチドは、Waters Delta Prep 3000システムを用い、ＲＰ−ＨＰＬＣ（分取用および分析）によって精製することができる。Ｃ４、Ｃ８またはＣ１８分取用カラム（１０μ、２．２×２５ｃｍ；Vydac, Hesperia, ＣＡ）を用いてペプチドを単離することができ、純度はＣ４、Ｃ８またはＣ１８分析カラム（５μ、０．４６×２５ｃｍ； Vydac）を用いて測定することができる。溶媒（Ａ＝０．１％ ＴＦＡ／水およびＢ＝０．１％ ＴＦＡ／ＣＨ₃ＣＮ）は１．０ ｍｌ／分の流速で分析カラムに、および１５ｍｌ／分の流速で分取用カラムに送達するとこができる。アミノ酸分析はWaters Pico Tagシステムで行うことができ、Maximaプログラムを用いて進行させることができる。ペプチドは蒸気−相酸加水分解（１１５℃、２０−２４時間）によって加水分解することができる。加水分解物は標準的な方法(Cohenら, The Pico Tag Method: A Manual of Advanced Techniques for Amino Acid Analysis, １１−１５頁、Millipore Corporation, Milford, MA(1989））によって誘導体化し、分析することができる。速原子衝撃分析はM-Scan, Incorporated (West Chester, PA)によって行うことができる。質量キャリブレーションはヨウ化セシウムまたはヨウ化セシウム／グリセロールを用いて行うことができる。時間飛行検出を用いるプラズマ脱着イオン化分析はApplied Biosystems Ｂｉｏ−Ｉｏｎ ２０質量分析機で行うことができる。電子スプレイ質量スペクトル分析はＶＧ−Ｔｒｉｏマシーンで行うことができる。
【００６４】
本発明の処方および投与で有用なペプチド有効成分化合物は組換えＤＮＡ技術を用い、今日当該分野で知られている方法を用い調製することもできる。例えば、Sambrookら, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第2版, Cold Spring Harbor (1989)参照。
【００６５】
利用性
本明細書に記載する処方および投与はその薬理学的特性に鑑み有用である。特に、本発明の処方および投与は、哺乳動物における食後グルコースレベルを低下させる能力によって証明させるごとく、エキセンジンおよびエキセンジンアナログとして効果的であり、血中グルコースを低下させる、胃移動度を調節するのに、および胃の空化を遅らせる剤として活性を有する。
【００６６】
処方および投与
本発明のエキセンジンおよびエキセンジンアナログの製剤及び投与はそれらのエキセンジン−様効果に鑑み有用であり、便宜には、（静脈内、筋肉内および皮下を含む）投与に適した処方の形態で提供することができる。また、経口、鼻孔、バッカル（口腔）、舌下および肺を含めた別の送達経路で有用である処方および投与をここに記載する。
【００６７】
本発明で有用な化合物は、注射または注入のための非経口組成物として提供することができる。一般に、それらは、例えば、不活性油、適当にはゴマ、落花生、オリーブ油、または他の許容される担体のごとき植物油に懸濁させることができる。好ましくは、それらは水性担体、例えば、約３．０ないし約７．０、より具体的には約４．０ないし６．０、好ましくは約４．０ないし約５．０のｐＨの等張緩衝溶液に懸濁させる。これらの組成物は通常の滅菌技術によって滅菌するとこができるか、あるいは滅菌濾過することができる。該組成物は、ｐＨ緩衝剤のごとき生理学的条件を近似するのに必要な製薬上許容される補助物質を含有することができる。有用な緩衝液は、例えば、酢酸ナトリウム／酢酸緩衝液を含む。所望の等張性は塩化ナトリウムまたはデキストロース、ホウ酸、酒石酸ナトリウム、ポリプロピレングリコール、（マンニトールおよびソルビトールのごとき）ポリオールのごとき他の製薬上許容される剤、または他の無機または有機溶質を用いて達成することができる。塩化ナトリウムはナトリウムイオンを含有する緩衝液が特に好ましい。
【００６８】
エキセンジンおよびエキセンジンアゴニスト化合物は製薬上許容される塩（例えば、酸付加塩）および／またはその複合体として処方することができる。製薬上許容される塩はそれらが投与される濃度において非毒性の塩である。そのような塩の調製は、組成物がその生理学的効果を発揮するのを妨げることなく組成物の物理的−化学的特性を改変することによって薬理学的使用を容易とすることができる。物理学的特性における有用な改変の例は、経粘膜投与を容易とする溶融温度の降下およびより高い濃度の薬物の投与を容易とする溶解度の上昇を含む。
【００６９】
製薬上許容される塩は、硫酸塩、塩酸塩、リン酸塩、スルファミン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、エチンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、シクロヘキシルスルファミン酸塩およびキニン酸塩のごとき酸付加塩を含む。製薬上許容される塩は塩酸、硫酸、リン酸、スルファミン酸、酢酸、クエン酸、乳酸、酒石酸、マロン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、シクロヘキシルスルファミン酸、およびキニン酸のごとき酸から得ることができる。そのような塩は、例えば、生成物の遊離酸または塩基形態を、塩がそれに不溶性である溶媒または媒体中、または次いで真空中で除去される水のごとき溶媒中で、１当量以上の適当な塩基または酸と反応させることによって、あるいは適当なイオン交換樹脂上のもう１つのイオンについての存在する塩のイオンを交換することによって調製することができる。
【００７０】
一般に、担体または賦形剤を用いて、本発明の適量の投与を容易とすることもできる。担体および賦形剤の例は炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、ラクトースのごとき種々の糖、または澱粉、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油、ポリエチレングリコールおよび生理学上適合する溶媒を含む。
【００７１】
所望ならば、前記適量組成物の溶液はメチルセルロースのごとき増粘剤で増粘することができる。それらは、油中水型または水中油型いずれかの乳化形態で調製することができる。広く種々の製薬上許容される乳化剤のいずれも使用することができ、例えば、アカシア粉末、（Ｔｗｅｅｎのごとき）非イオン性界面活性剤、または（アルカリポリエステルアルコール硫酸塩またはスルホン酸塩、例えば、Ｔｒｉｔｏｎのごとき）イオン性界面活性剤を含む。
【００７２】
一般に、本発明の製剤及び投与組成物は、一般に許容される手法に従い成分を混合することによって調製される。例えば、選択された化合物は単にブレンダーまたは他の標準的なデバイス中で混合して濃縮された混合物が得られ、次いで、これを、ｐＨを制御するための水または増粘剤および恐らくは緩衝液、および等張性を制御するためのさらなる溶質の添加によって最終濃度および粘性に調節することができる。
【００７３】
他の製薬上許容される担体およびそれらの処方は標準的な処方論文、例えば、E. W. MartinによってRemington's Pharmaceutical Sciencesに記載されている。例えば、Wang, Y.J.およびHanson, M.A. 「Parenteral Formulation of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers」、Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No. 10, Supp. 42:2S (1988）参照。
【００７４】
医師による使用では、化合物は、もう１つの治療剤、例えば、グルコース降下剤、胃の空化を調節する剤、脂質降下剤、または食物摂取阻害剤と共にまたはそれなくして、ある量のエキセンジンアゴニストを含有する投与単位形態で提供されるであろう。血中グルコースの制御におけるまたは胃の空化を調節するにおいて、および胃の空化が遅延されまたは調節されることが有益である疾患において使用されるエキセンジンアゴニストの治療上有効量は、食事後血中グルコースレベルを、好ましくは約８または９ｍＭ以下程度まで血中グルコースレベルが望むように低下されるような量である。糖尿病またはグルコースレベル不耐性個体において、血漿中グルコースレベルが正常個体よりも高い。そのような個体において、食事後血中グルコースレベルの役に立つ低下または「平滑化」を得ることができる。当業者によって認識されるであろうがごとく、治療剤の有効量は患者の身体の状態、得るべき血中糖レベルまたは胃の空化を阻害するレベル、または、食物摂取減少の所望のレベルおよび他の因子を含めた多くの因子に従って変化するであろう。
【００７５】
そのような製剤組成物は、投与対象において、増加したインスリン感受性を引き起こし、インスリンに対する感受性が便宜には増加される糖尿病のごとき障害においてよく使用することができる。
【００７６】
治療上有効量の製剤を経皮注射または他の形態の送達に続いて数時間または数日間にわたって血流に送達されるように、容器または「デポ」遅延放出製剤を用いることができる。
【００７７】
化合物の効果的な日用量を記載する。投与すべき正確な用量は主治医が決定することができ、それはさらに使用する特定のエキセンジンまたはエキセンジンアゴニスト化合物の効率、ならびに個体の年齢、体重および状態に依存し得る。患者への本出願の化合物の投与の最適様式は、特定の病気または障害、所望の効果、および患者のタイプのごとき当該分野で知られた因子に依存する。化合物は、典型的には、ヒト患者を治療するのに使用されるが、また他の霊長類のごとき他の脊椎動物、ブタ、ウシおよび家禽のごとき農場動物、およびウマ、イヌおよびネコのごとき愛玩動物およびペットにおいて同様のまたは同一の病気を治療するのに用いることもできる。
【００７８】
本発明は、緩衝液（好ましくは酢酸緩衝液）、等浸透圧調整剤（好ましくはマンニトール）と一緒に混合され、所望により保存剤（好ましくはｍ−クレゾール）を含有するエキセンジンまたはエキセンジンアゴニストを含むエキセンジンおよびエキセンジンアゴニストの製剤を含み、該製剤は約３．０および約７．０の間（好ましくは約４．０および約５．０の間）のｐＨを有する。
【００７９】
非経口液体投与形態を最良に支持する製剤は、有効成分が適当な緩衝能力を有して安定であって、製品の意図した寿命にわたって溶液のｐＨを維持するものである。投与形態は、有効成分の安定性を促進し、あるいは注射の苦痛を低下させ、あるいはその双方を行うために等張および／または等浸透圧溶液いずれかとすべきである。しかしながら、非常に小さな注射容量を送達するデバイスは、該処方が等張および／または等浸透圧であることを要求しないであろう。もし投与形態が一単位投与としてパッケージされるならば、保存剤を含むことができるがそれが要求されるものではない。しかしながら、もし投与単位が多数回使用にパッケージされるならば、保存剤が必要である。
【００８０】
これらの投与形態は、ほぼ３．０ないし７．０、より具体的には約ｐＨ４．０ないし約６．０、または約４．０ないし５．０の最終組成物のｐＨを得るための、各々、単独でまたは組み合わせたほぼ０．０２ないし０．５％（ｗ／ｖ）の酢酸塩、リン酸塩、クエン酸またはグルタミン酸塩または同様の緩衝液、ならびにほぼ１．０ないし１０％（ｗ／ｖ）の炭水化物または多価アルコール等浸透圧調整剤（好ましくはマンニトール）または約０．９％までの生理食塩水または水性連続相中の等張または等浸透圧溶液双方に導く組合せを含む、ほぼ０．００５ないし約０．４％、より具体的には約０．００５ないし約０．０２％、または約０．００５ないし約０．０５％（ｗ／ｖ）の水性系中の有効成分を含む。もし製剤が多数回使用容器中にパッケージされるならば、ｍ−クレゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピルおよびブチルパラベンおよびフェノールから選択されるほぼ０．００５ないし１．０％（ｗ／ｖ）の抗微生物保存剤も存在させる。有効量の注射用水を添加して所望の濃度の溶液を得る。所望ならば、塩化ナトリウム、ならびに他の賦形剤を存在させることもできる。しかしながら、そのような賦形剤は有効成分の総じての安定性を維持しなければならない。
【００８１】
多価アルコールおよび炭水化物はそれらの骨格、すなわち、−ＣＨＯＨ−ＣＨＯＨ−において同一の特徴を共有する。多価アルコールはソルビトール、マンニトール、グリセロールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のごとき化合物を含む。これらの化合物は直鎖分子である。マンノース、リボース、トレハロース、マルトース、グリセロール、イノシトール、グルコースおよびラクトースのごとき炭水化物は、他方、ケトまたはアルデヒド基を含有することができる環状分子である。また、これらの２つのクラスの化合物は、上昇した温度によって、および凍結−解凍または凍結乾燥プロセスによって引き起こされた変性に対して蛋白質を安定化させるのにも効果的であろう。適当な炭水化物はガラクトース、アラビノース、ラクトース、または糖尿病患者に悪影響を有しないいずれかの他の炭水化物（すなわち、該炭水化物は代謝されて血液中に高い濃度のグルコースを形成しない）を含む。そのような炭水化物は糖尿病に適したものとして当該分野でよく知られている。
【００８２】
好ましくは、本発明のペプチドはソルビトール、マンニトール、イノシトール、グリセロール、キシリトール、およびポリプロピレン／エチレングリコールコポリマー、ならびに分子量２００、４００、１４５０、３３５０、４０００、６０００および８０００の種々のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）のごとき多価アルコールと混合される。マンニトールが好ましい多価アルコールである。
【００８３】
本発明の液体製剤は実質的に等張および／または等浸透圧であるべきである。等張溶液は、それが導入されるもの、例えば、処方の非経口注射の場合には哺乳動物組織と同等の浸透圧を発揮する電解質、または電解質および非電解質の組合せの濃度を有する溶液と定義することができる。同様に、等浸透圧溶液は、それが導入される溶液と同等の浸透圧を発揮する、非電解質の濃度を有する溶液として定義することができる。本明細書中で用いる「実質的に等張」は等張性の±２０％内、好ましくは±１０％内を意味する。本明細書中で用いるごとく、「実質的に等浸透圧」は等浸透圧の±２０％内、好ましくは±１０％内を意味する。注射のための処方された製品は容器、典型的には、例えばバイアル、カートリッジ、プレフィルシリンジまたはディスポーザブルペン内に含まれる。
【００８４】
１単位−用量非経口凍結乾燥投与形態を最良に支持する製剤は、再構成された製品の意図した寿命にわたって溶液のｐＨを維持する適切な緩衝能力を持つまたはそれを持たずして、有効成分が合理的に安定であるものである。該投与形態はケーキ形成を容易とするバルキング剤を含有すべきである。また、バルキング剤は、有効成分の安定性を促進するおよび／または注射に対して苦痛を低下させるための、復元に際して等張剤および／または等浸透圧調整剤としても働くことができる。前記したごとく、非常に小さな注射用量を送達するデバイスは、処方が等張および／または等浸透圧であることを要求しないであろう。また、界面活性剤はケーキの特性に役立ちおよび／または再構成を促進し得る。
【００８５】
これらの投与形態はほぼ０．００５ないし約０．４％、より具体的には約０．００５ないし約０．０２％、または０．００５ないし０．０５％（ｗ／ｖ）の有効成分を含む。もし再構成された有効成分について確立された安定性期間内に容器の内容物を消費することが意図されれば、製剤に緩衝液を含めおよび／または、緩衝液で凍結乾燥物を復元する必要はないであろう。もし緩衝液を用いれば、それは凍結乾燥物にまたは再構成溶剤に含めることができる。従って、製剤および／または再構成用溶剤は、ほぼ３．０ないし７．０、より具体的には約ｐＨ４．０ないし６．０、または約４．０ないし５．０の最終組成物のｐＨを得るために、個々にまたは集合的に、ほぼ０．０２ないし０．５％（ｗ／ｖ）の酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩またはグルタミン酸塩緩衝液いずれか単独またはこれらの組合せを含有することができる。バルキング剤はほぼ１．０ないし１０％（ｗ／ｖ）の炭水化物または多価アルコール等当浸透圧調整剤（前記）または０．９％までの生理食塩水または復元された水性相中の等張性または等浸透圧溶液双方に導く組合せよりなることができる。界面活性剤、好ましくは約０．１ないし約１．０％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０または他の非イオン性洗剤を含めることができる。前記したごとく、塩化ナトリウム、ならびに他の賦形剤を、所望ならば、凍結乾燥された単位−投与処方中に存在させることもできる。しかしながら、そのような賦形剤は有効成分の総じての安定性を維持しなければならない。処方は、有効成分の安定性を維持すると同定された有効化パラメーター内で凍結乾燥されるであろう。
【００８６】
凍結乾燥前の本発明の液体製剤は、凍結乾燥前に、実質的に等張および／または等浸透圧であるべきであるか、あるいは、再構成後に等張及び／または等浸透圧溶液の形成を可能とされるべきである。この製剤は、凍結乾燥形態についてのおよび再構成後の寿命実験によって確立された期間内に用いるべきである。凍結乾燥された製品は容器、典型的には例えば、バイアル内に含まれる。もしカートリッジ、プレフィルシリンジまたはディスポーザブルペンのごとき他の容器を用いるならば、再構成用溶剤を含めることもできる。
【００８７】
前記した非経口液体および凍結乾燥単位−投与製剤に関しては、多数回投与の非経口凍結乾燥形態を最良に支持する製剤は、製品の意図した「イン−ユース」寿命にわたって溶液のｐＨを維持する適切な緩衝能力でもって有効成分が合理的に安定であるものである。投与形態はケーキ形成を促進するためのバルキング剤を含有すべきである。該バルキング剤は、有効成分の安定性を増強するか、または注射に際して苦痛を低下させるか、あるいはその双方を行うために、再構成に際して等張剤および／または等浸透圧調整剤としても働くことができる。再度、非常に小さな注射用量を送達するデバイスは、該処方が等張および／または等浸透圧であることを要求しないであろう。しかしながら、患者による複数使用を促進するためには保存剤が必要である。
【００８８】
これらの投与形態は、各々、ほぼ０．００５ないし約０．４％、より具体的には約０．００５ないし約０．０２％、または約０．００５ないし０．０５％（ｗ／ｖ）の有効成分を含む。もし復元された有効成分について確立された安定性期間内に容器の内容物を消費することが意図されていれば、処方中に緩衝液を含めおよび／または、緩衝液で凍結乾燥物を再構成する必要はないであろう。もし緩衝液を用いれば、それは凍結乾燥物にまたは再構成用溶剤に含めることができる。従って、処方および／または再構成溶剤は、個々にまたは集合的に、ほぼ０．０２ないし０．５％（ｗ／ｖ）の酢酸塩、リン酸塩、クエン酸塩またはグルタミン酸塩緩衝液いずれか単独あるいはこれらを組み合わせて含有することができ、ほぼ３．０ないし７．０、より具体的には約４．０ないし約６．０のｐＨ、または約４．０ないし５．０の最終組成物のｐＨを得ることができるようになっている。バルキング剤は、ほぼ１．０ないし１０％（ｗ／ｖ）の炭水化物または多価アルコール等浸透圧調整剤（好ましくはマンニトール）または０．９％までの生理食塩水、あるいは復元された水性相中の等張または等浸透圧溶液に至る双方の組合せよりなることができる。界面活性剤、好ましくは約０．１ないし１．０％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０または非イオン性洗剤を含めることができる。もし処方が多数回使用容器にパッケージされるならば、ｍ−クレーゾール、ベンジルアルコール、メチル、エチル、プロピルおよびブチルパラベンおよびフェノール（好ましくはｍ−クレゾール）よりなる群から選択されるほぼ０．００５ないし１．０％（ｗ／ｖ）の抗微生物保存剤もまた存在させる。塩化ナトリウム、ならびに他の賦形剤も所望であれば存在させることができる。しかしながら、再度、そのような賦形剤は有効成分の総じての安定性を維持しなければならない。製剤は、有効成分の安定性を維持することが同定された評価済みのパラメーターの範囲内で凍結乾燥すべきである。本発明の液体製剤は凍結乾燥する前に実質的に等張および／または等浸透圧であるか、あるいは復元後に等張および／または等浸透圧溶液の形成を可能とすべきである。処方は、凍結乾燥および復元後双方についての寿命研究によって確立された期間内に用いるべきである。凍結乾燥製品は容器、典型的には例えばバイアル内に含める。カートリッジ、プレフィルシリンジまたはディスポーザブルペインのごとき他の容器を使用するならば、再構成用溶剤も含めることができる。
【００８９】
経口、鼻孔、肺および／または気管内投与形態を最良に支持する製剤は、保存剤が添加されたあるいは添加されていない液体製剤および／または乾燥粉末、あるいは経口投与では固体製剤とすることができる。保存剤が添加されたあるいは添加されていない液体製剤は、保存剤が添加されたあるいは添加されていない非経口液体製剤として前記した製剤と実質的に同一であろう。溶液のｐＨは約３．０ないし７．０とすべきであり、約５．０より大またはそれと等しいｐＨが気管支収縮の能力を低下させるのに最も好ましい。乾燥粉末製剤は、粒子サイズ形成および適当な粒子サイズ分布を促進するためにバルキング剤および／または塩を含有することができる。界面活性剤および／または塩は粒子形態の特性に役立ちおよび／または有効成分の組織摂取を促進することもできる。
【００９０】
これらの乾燥粉末投与形態は、各々、１％ないし１００％（ｗ／ｗ）の有効成分の範囲とすることができる。粒子サイズ形成および／または分布を促進するためにバルキング剤および／または塩を含める必要はないであろう。バルキング剤および／または塩はほぼ０ないし９９％（ｗ／ｗ）の炭水化物または多価アルコールまたはほぼ０ないし９９％の塩または好ましい粒子サイズおよび分布双方に導くこれらの組合せよりなることができる。界面活性剤、好ましくは約０．１ないし約１．０％（ｗ／ｗ）のポリソルベート８０または他の非イオン性洗剤を含めることもできる。塩化ナトリウム、ならびに他の賦形剤も所望であれば存在させることができる。しかしながら、そのような賦形剤は有効成分の総じての安定性を維持し、水和の適切なレベルを容易としなければならない。
【００９１】
鼻孔および／または気管内投与形態を最良に支持する製剤は、前記した保存剤が添加されたあるいは添加されていない液体製剤のいずれかとすることができる。
【００９２】
溶解性ゲルおよび／またはパッチを用いて口腔内送達を促進することができる。該ゲルは種々のタイプの澱粉および／またはセルロール誘導体から調製することができる。
【００９３】
舌下送達は、投与形態が等張および／または等浸透圧溶液であることを要求しないことを除いては、再構成後の非経口液体または非経口凍結乾燥製剤として前記したものと同様の液体製剤によって最良に支持することができる。固体投与形態は、それが舌の下で容易に溶解できなければならない以外は経口固体投与形態と同様とすることができる。
【００９４】
経口送達は、溶液がより濃縮することができ、小腸による有効成分の摂取を促進するためにさらなる添加物を含有することができる以外は非経口液体製剤と同様である液体（ゲルキャップ）製剤によって最良に支持することができる。固体投与形態は、有効成分の他、錠剤の形成を促進するための不活性成分を含有するであろう。これらの成分は（マンニトールのごとき）多価アルコール、炭水化物、または種々のタイプの澱粉、セルロース誘導体および／または他の不活性生理学的適合物質を含有することができる。錠剤は腸溶コートして胃の中での消化を最小化し、それにより、消化管に沿った溶出および摂取を促進することができる。
【００９５】
また、本発明は、注射により投与された場合、および他の経路によって投与された場合にエキセンジンおよびエキセンジンアゴニストのための好ましい用量を含む。かくして、エキセンジンおよび匹敵する能力を有するエキセンジンアゴニストのための製剤は注射による投与のために調製され、それは１日当たり１回ないし３回投与される、１ｋｇ当たり約０．１ないし約０．５μｇを含む。典型的には、約７０キログラム（１型糖尿病についての平均）ないし約９０キログラム（２型糖尿病についての平均）の範囲の体重である糖尿病を持つ患者では、例えば、この結果、単一または分割用量にての１日当たり約１０ないし１２０μｇの合計投与となるであろう。もし分割用量で投与されれば、該用量は好ましくは１日当たり２ないし３回、より好ましくは１日当たり２回投与される。
【００９６】
好ましい注射手法において、エキセンジンまたはエキセンジンアゴニストは非経口、より好ましくは注射、例えば末梢注射によって投与される。好ましくは、約１μｇ−３０μｇないし約１ｍｇのエキセンジンまたはエキセンジンアゴニストが１日当たり投与される。より好ましくは、約１−３０μｇないし約５００μｇ、または約１−３０μｇないし約５０μｇのエキセンジンまたはエキセンジンアゴニストが１日当たり投与される。最も好ましくは、投与対象の体重および投与される化合物の効力に応じて、約３μｇないし約５０μｇのエキセンジンまたはエキセンジンアゴニストが１日当たり投与される。エキセンジン−４におおよそ匹敵する効力を有する化合物に対する患者体重に基づく好ましい用量は、投与あたり約０．００５μｇ／ｋｇないし投与あたり約０．２μｇ／ｋｇの範囲である。より好ましくは、エキセンジン−４の能力をほぼ有する化合物についての患者体重に基づく用量は、投与当たり約０．０２μｇ／ｋｇないし投与当たり約０．１μｇ／ｋｇの範囲である。最も好ましくは、エキセンジン−４の能力をほぼ有する化合物についての患者体重に基づく用量は、投与当たり約０．０５μｇ／ｋｇないし投与当たり約０．１μｇ／ｋｇの範囲である。これらの用量は１日当たり１ないし４回、好ましくは１日当たり１ないし２回投与される。エキセンジンまたはエキセンジンアゴニストの用量は、もし連続的注入によって投与するならば通常はより低いであろう。エキセンジンまたはエキセンジンアゴニストの用量は、経口、バッカル、舌下、鼻孔、肺または皮膚パッチ送達のごとき非注射方法によって投与するならば通常はより高いであろう。
【００９７】
本発明の経口投与量は、約５０ないし約１００倍の有効成分、すなわち、単一または分割用量中に１日当たり約５００ないし約１２，０００μｇ、好ましくは１日当たり約５００ないし約５，０００μｇを含むであろう。本発明による肺投与量は約１０ないし１００倍の有効成分、すなわち、単一または分割用量中に１日当たり約１００ないし約１２，０００μｇ、好ましくは１日当たり約５００ないし１０００μｇを含むであろう。また、本発明による鼻孔、バッカルおよび舌下投与量は約１０ないし約１００倍の有効成分、すなわち、単一または分割用量中に１日当たり約１００ないし約１２，０００μｇを含むであろう。
【００９８】
鼻孔投与についての好ましい投与量は１日当たり約１０−１０００ないし約１２００−１２，０００μｇであり、バッカル投与では、１日当たり約１０−１０００ないし１２００−１２，０００μｇであって、舌下投与では、１日当たり約１０−１０００ないし約１２００−８，０００μｇである。舌下投与量は好ましくはバッカル投与量よりも小さい。エキセンジン−４の能力未満またはそれを超える能力を有するエキセンジンアゴニストについての投与量は、適切には、前記したものおよび本明細書中の他の箇所に記載したものから増加させまたは減少させる。
【００９９】
臨床実験
後記実施例１０に記載したごとく、健康なボランティアにおいて皮下エキセンジン−４の安全性、許容性、および薬物動態学を調べる二重盲検−プラセボ制御−単一上昇用量実験を使用した。５種類の単一皮下用量のエキセンジン−４（０．０１、０．０５、０．１、０．２または０．３μｇ／ｋｇ）を絶食状態にて４０人の健康な男性ボランティアで実験した。調べた用量のうちではほとんど差異がなく、１および２時間後に最大血漿中エキセンジン−４濃度が達成された。データの調査はＣ_maxについての用量依存的増加を示した。この実験で報告された深刻な有害作用はなかった。
【０１００】
本実験に参加した健康な男性ボランティアにおいて、エキセンジン−４は０．１μ／ｋｇまでのかつそれを含めた皮下用量にてよく許容された。また、血漿中グルコース濃度の減少もこの用量で観察された。０．２μｇ／ｋｇ以上の用量において、最も普通に観察された有害作用は頭痛、吐き気、嘔吐、目眩および体位性低血圧であった。０．０５μｇ／ｋｇ以上の用量の投与後において血漿中グルコース濃度の一過性低下があった。
【０１０１】
後記実施例１２は、０．１μｇ／ｋｇ未満の用量におけるエキセンジン−４のグルコース−降下効果についての用量応答関係のさらなる実験を記載する。ダイエット±経口血糖低下剤で処理した、２型糖尿病を持つ１４人の対象者［平均（±ＳＥ）年齢５５±２；平均ＢＭＩ（３０．２±１．６ｋｇ／ｍ²）］は、１０−１４日間の経口剤の投与中止に続いて実験した。評価は、一晩の絶食に続いて，別の日に、プラセボ、０．０１、０．０２、０．０５および０．１μｇ／ｋｇエキセンジン−４のランダム化された皮下注射の後に行った。注射は、標準化されたSustacal（登録商標）ミール(７ｋｃａｌ／ｋｇ）の摂取の直前に行い、その後引き続いての３００分間において頻繁な間隔での血漿グルコース試料を採取した。
【０１０２】
血糖応答は、５時間の期間における血漿中グルコース濃度の時間−重み付け平均（±ＳＥ）変化として定量した。該応答は、プラセボにおいては、絶食グルコース濃度よりも＋４２．０±７．９ｍｇ／ｄＬ増加であったのに対し、０．１μｇ／ｋｇエキセンジン−４では、絶食グルコース濃度よりも、３０．５±８．６ｍｇ／ｄＬ減少した。
【０１０３】
このグルコース降下効果についてのＥＤ₅₀は０．０３８μｇ／ｋｇであった。０．１μｇ／ｋｇ未満の用量のエキセンジン−４で、グルコース降下効果を胃腸副作用から区別するように見えた。実施例１２は、エキセンジン−４が０．１μｇ／ｋｇ未満の用量でよく許容されるのみならず、これらの用量が２型糖尿病を持つヒトにおいて食後血漿中グルコース濃度を実質的に降下させたことを示す（０．０３８μｇ／ｋｇのＥＤ₅₀）。
【０１０４】
送達の別の経路
エキセンジン−４についての送達の別の経路の可能性は、投与後における糖尿病動物での血漿中グルコース降下のごとき生物学的応答の観察と組み合わせて循環中でエキセンジン−４を測定することによって開発された。エキセンジン−４の通過はいくつかの表面、呼吸管（鼻孔、気管および肺経路）および腸（舌下、栄養および十二指腸経路）を横切って調べた。血液中でのエキセンジン−４の生物学的効果および外観は呼吸管を介しての各投与経路にて、および胃腸管を介する舌下および栄養ペプチドで観察された。
【０１０５】
気管内投与−前記したごとく、エキセンジン−４の絶食ラットへの気管内投与（２０μｇ／５０μＬ／動物）は、投与後５−１０分以内での平均血漿中エキセンジン−４濃度の２０６０±９６０ｐｇ／ｍｌの上昇を生じた。上昇した血漿中エキセンジン−４濃度は注入後少なくとも１時間維持された（図４）。糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおいて、エキセンジン−４の気管内注入（１μｇ／動物）は３０％だけ血漿中グルコース濃度を降下させ、他方、ビヒクル対照群においては、処理後１．５時間には４１％だけ増加した。これらの動物において、エキセンジン−４の平均血漿中濃度は処理後４．５時間には７７７±３６５ｐｇ／ｍｌであった（図５ａおよび５ｂ参照）。
【０１０６】
糖尿病ｏｂ／ｏｂマウスにおいて、エキセンジン−４の気管内注入（１μｇ／動物）は４時間後に血漿中グルコース濃度を前処理の４３％まで低下させ、他方、ビヒクル対照群において、変化しなかった（図６ａおよび６ｂ参照）。
【０１０７】
９匹の一晩絶食させたオスSprague Dawleyラット（年齢９６−１１５日、体重３６５−３９５、平均３８５ｇ）をハロタンで麻酔し、気管を切開し、大腿動脈を介してカテーテルを入れた。Ｔ＝０分にて、２．１μｇ（ｎ＝３）、２１μｇ（ｎ＝３）または２１０μｇのエキセンジン−４を溶解させた３０μＬの生理食塩水を、挿管法のレベルを超えて気管に注入した。５、１０、２０、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２４０、３００および３６０分後に血液試料を採取し、遠心し、無傷エキセンジン−４分子のＮ−末端およびＣ−末端エピトープに向けられた引き続いてのイムノラジオメトリック（ＩＲＭＡ）でアッセイのために血漿を−２０℃で保存した。気管内投与に続き、ピーク血漿中濃度の６１−７４％が５分以内に観察された。Ｔｍａｘは投与後２０分および３０分の間に起こった。（ヒトにおけるグルコース−降下効果が観察される）〜５０ｐＭの血漿中濃度をもたらすＡＵＣおよびＣｍａｘは用量に比例した。２．１μｇ（１．５ｎｍｏｌ／ｋｇ）の用量において、生物学的利用性は７．３％であった。変動の係数は４４％であった。より高い用量では、生物学的利用性はわずかに低く、ＣＶはより高かった（図７ａおよび７ｂ参照）。気管投与経路を介し、ｔ１／２（実用的にはＣｍａｘの５０％未満まで血漿が降下する時間として定義される）は最低用量では３０−６０分であり、２種類のより高い用量では６０−９０分であった。要約すると、エキセンジン−４の生物学的に有効な量は、見かけの呼吸器の困難を惹起することなく気管を介して迅速に吸収される。呼吸管はエキセンジン−４の大事な投与経路である。
【０１０８】
肺投与−エキセンジン−４の増加した血漿中濃度がエアロゾル化エキセンジン−４に暴露されたラットで検出された。１０分間の雰囲気ｍｌ当たりほぼ８ｎｇのエアロゾル化エキセンジン−４へのラットの暴露の結果、処理から５分後に３００−１９００ｐｇ／ｍｌのピーク血漿中エキセンジン−４濃度がもたらされた（図８参照）。エアロゾル化エキセンジン−４への糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスの同様の暴露は、１時間後に血漿中グルコース濃度の３３％減少に至り、その時、１７０±６７ｐｇ／ｍｌの平均血漿中エキセンジン−４濃度が検出された。エアロゾル化生理食塩水に暴露された対照群における糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスは血漿中グルコースの変化を記録しなかった（図９ａおよび９ｂ参照）。
【０１０９】
鼻孔投与ラット−ラットの鼻孔へのエキセンジン−４の適用は血漿中濃度の上昇に導いた。各々、１μｇおよび１００μ−４（２μＬ生理食塩水に溶解）の投与から１０分後に３００ｐｇ／ｍｌおよび６７５７ｐｇ／ｍｌのピーク値が検出された（図１０参照）。
【０１１０】
Ｇｕｔ−雄ｄｂ／ｄｂマウス（ほぼ５０ｇ体重）を介する投与は、２時間、および生理食塩水またはエキセンジン−４の胃内投与の前後に絶食させた（エキセンジン−４）。血漿中グルコース濃度の９％減少が１ｍｇ／２００μｌ／動物で観察され、１５％減少が３ｍｇ／２００μｌ／動物で観察され、これに対して、処理後１時間後における対照では血漿中グルコースは１０％増加した（図１１参照）。
【０１１１】
舌下投与−エキセンジン−４（１００μｇ／５μｌ／動物）の糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスへの舌下適用は、処理１時間後における血漿中グルコース濃度の１５％減少に導いた。３０％増加が生理食塩水を摂取する対照群で観察された。６０分における平均エキセンジン−４血漿中レベルは４５２０±１８４６ｐｇ／ｍｌであった（図１２ａおよび１２ｂおよび１２ｃ参照）。
【０１１２】
１０μｇ／３μＬ（ｎ＝４）または１００μｇ／３μＬ（ｎ＝４）を含有する溶液を舌の下にピペットで入れつつ、８匹のSprague Dawleyラット（〜３００ｇ）をメトファンで軽く麻酔した。血液試料を引き続いて局所的に麻酔した尾から収集し、ＩＲＭＡによってエキセンジン−４につきアッセイした。血漿中濃度は投与後３分には上昇し始め、投与後１０分および３０分に最大であった（各々、１０μｇおよび１００μｇ用量）。血漿中エキセンジン−４濃度は引き続いて５時間を超えて定量の下限（ＬＬＯＱ）の上方に留まった。各実験の終わりまでの曲線下面積を台形方法によって計算した。２つの数字を誘導し、１つは全免疫反応性から誘導し、他方はｔ＝０に存在する非ゼロ値上の増加から誘導した。これらの値を同一動物モデルにおいて歴史的静脈内ボーラスデータと比較して、各々、高および低評価の生物学的利用性を得た。１０μｇ用量では、舌下生物学的利用性は３．１〜９．６％であり、１００μｇ用量では、生物学的利用性は１．３〜１．５％においてより低かった。ＡＵＧの変動は投与後最初の１時間以内に最大であった（１０およい１００μｇ用量でＣＶ７４％および１２８％）。５時間の積分では、ＡＵＧの変動の係数は、各々、２０％および６４％であった。ピーク血漿中濃度（Ｃｍａｘ）は皮下投与と同程度に迅速に舌下投与後に起こった（Ｔｍａｘ〜３０分）１０μｇのエキセンジン−４の舌下投与後のＣｍａｘは静脈内ボーラスの後のものの１．５％であったが、皮下ボーラス後に得られたものの１４．５％であった。１００μｇのエキセンジン−４の舌下投与後のＣｍａｘは静脈内ボーラス後に観察されたものの０．２９％に過ぎず、皮下ボーラス後に得られたものの６．１％であった（図１２ｄおよび１２ｅ参照）。かくして、エキセンジン−４は舌下経路を介して生物学的に効果的な用量で送達することができる。生物学的利用性およびＣｍａｘは最大であり、Ｔｍａｘは最も短く、利用性の変動は最低の舌下用量で最低であった。最低の舌下用量の結果、ヒトにおいてグルコースを降下させるのに効果的であると予測されるものと同様の血漿中濃度をもたらせた（〜５０−１００ｐＭ）。
【０１１３】
本発明の理解するを助けるために、一連の実験の結果を記載した以下の実施例を含める。本発明に関する実験は、勿論、本発明を具体的に限定するものと解釈されるべきではなく、当業者の技量内にある現在知られているまたは後に開発される発明のそのような変形はここに記載し後に特許請求する発明の範囲内にあると考えられるべきものである。
【０１１４】
実施例１−エキセンジン−３の調製
Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号１］
【０１１５】
Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Bio systems, Inc.)を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセトアミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立てた。一般に、合成を通じて単一カップリンングサイクルを用い、Fast Moc（ＨＢＴＵ活性化）化学を使用した。成長するペプチド鎖の脱保護（Ｆｍｏｃ基除去）はピペリジンを用いて達成された。完成されたペプチド樹脂の最終脱保護は、標準的な方法（Introduction to Cleavage Techniques, Applied Bio systems, Inc.)に従い、トリエチルシラン(０．２ｍｌ）、エタンジチオール（０．２ｍｌ）、アニソール（０．２ｍｌ）、水（０．２ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（１５ｍｌ）の混合物を用いて達成された。該ペプチドはエーテル／水（５０ｍｌ）中で沈殿し、遠心分離された。該沈殿を氷酢酸中で復元し、凍結乾燥した。凍結乾燥したペプチドを水に溶解させた。粗製純度は約７５％であった。
【０１１６】
実施例１および２の精製段階および分析において溶媒Ａ（水中の０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中の０．１％ＴＦＡ）を用いた。
【０１１７】
ペプチドを含有する溶液を分取用Ｃ−１８カラムに適用し、精製した（４０分間にわたる溶媒Ａ中の１０％ないし４０％溶媒Ｂ）。画分の純度はＣ−１８分析カラムを用いてイソクラチックに測定した。純粋な画分をプールし、前記ペプチドを仕上げた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の勾配３０％ないし６０％溶媒Ｂ）は、１９．２分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。
【０１１８】
実施例２−エキセンジン−４の調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号２］
【０１１９】
Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Bio systems Inc.)を用いて４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂）Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミノ化ペプチドを組立て、樹脂から切断し、脱保護し、実施例１に記載したエキセンジン−３と同様な方法で精製した。溶媒Ａ（水中の０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中の０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の勾配３６％ないし４６％溶媒Ｂ）は、１４．９分の観察された保持時間を有する生成物を与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）、計算値：４１８６．６；実測値８１８６．０ないし４１８６．８（４つのロット）
【０１２０】
実施例３−エキセンジン−４はアメリカドクトカゲにおける循環食事関連ペプチドである。
この実験は、エキセンジン−４がアメリカドクトカゲそれ自体において代謝的役割を有するか否かを調べた。エキセンジン−４が食料供給に応答してアメリカドクトカゲの血液中に出現するか否かを調べるために、小さなラットの摂食前および摂食３０分後に、血液を７週間絶食させた１つの動物からサンプリングした。エキセンジン−４のＮ−およびＣ−末端におけるエピトープに向けられたモノクローナル抗体対でのイムノラジオメトリックアッセイを用いて血漿を全長エキセンジン−４につきアッセイした。絶食血漿エキセンジン−４濃度は７６ｐｇ／ｍｌであり、定量の下限に近かった。食事させた後、この値は２３,１２０ｐｇ／ｍｌまで３００倍上昇した。
【０１２１】
第２の実験において、１または２の小さなラット（４７〜４９ｇ）の摂食前後に、５週間絶食させた２の動物から系列的試料を採取した。血漿中エキセンジン−４濃度は食事直後に２３ないし３６倍（４８６０、８３４０ｐｇ／ｍｌ）まで上昇し、唾液腺から血液へのエキセンジン−４の直接的通過と合致する。第２のラットを食べた後（ｔ＝３０分）、１つのアメリカドクトカゲにおける血漿中エキセンジン−４濃度はさらに２７，２０９ｐｇ／ｍｌまで上昇した。血漿中エキセンジン−４濃度は、各々、５．００および５．３３時間のｔ1/2にて減衰した。結論として、アメリカドクトカゲの唾液腺から由来することが知られているエキセンジン−４は、食事直後に血液中に高濃度にて出現する。これはさらなる食事を阻害し、栄養貯蔵を促進する食事関連シグナルを表し得る。
【０１２２】
実施例４−エキセンジン−４は糖尿病 Fatty Zucker ラットにおける過剰高血糖症クランプの間にグルカゴン分泌を減少させる。
絶対的または相対的高グルカゴン血症は、しばしば、１型および２型糖尿病の特徴であり、過剰なグルカゴン分泌の抑制はグルカゴン静止剤を用いる優れた治療の潜在的利点である。この実施例においては、雄麻酔糖尿病Fatty Zucker（ＺＴＦ）ラットにおけるグルカゴン分泌に対するエキセンジン−４の効果を調べた。高インスリン血症高血糖症クランププロトコルを用い、グルカゴン分泌に影響する傾向がある因子を一定に保持した。生理食塩水（ｎ＝７）またはエキセンジン−４（０．２１μｇ＋２．１μｇ／ｍｌ／時間；ｎ＝７）の静脈内注入開始６０分前に、血漿中グルコースを〜３４ｍｍにクランプした。これらの注入前に測定した血漿中グルカゴン濃度は双方の群で同様であった（各々、３０６±３０ｐＭ対２５２±３２ｐＭ；ｎｓ．）
【０１２３】
エキセンジン−４注入ラットにおける平均血漿中グルカゴン濃度は該クランプの最終６０分において生理食塩水−注入ラットにおけるもののほぼ半分であった（各々、１６５±１８ｐＭ対２９８±２６ｐＭ；Ｐ＜０．００２）。高血糖症クランププロトコルはインスリン感受性の測定を可能とした。該クランプの間のグルコース注入速度は、エキセンジン−４処理されたもの対する対照ラットにおいて１１１±７％だけ増加した（Ｐ＜０．００１）。換言すれば、エキセンジン−４は高血糖症クランプ実験の間にＺＤＦラットでグルカゴン静止効果を呈し、これは、糖尿病ヒトにおける治療効果となろう効果である。
【０１２４】
実施例５−静脈内皮下および腹腔内投与に続くラットにおけるエキセンジン−４の薬物動態学
本実施例は、２．１、２１、２１０μｇ／ラット静脈内ボーラス、皮下および腹腔内投与および２．１、２１、２１０μｇ／時間／ラット静脈内注入（３時間）後のラット（各々〜３５０ｇ体重）におけるエキセンジン−４の血漿中薬物動態学を規定する研究を記載するものである。血漿の系列的試料（〜１２０μＬ）を、有効化イムノラジオメトリックアッセイ（ＩＲＭＡ）を用いて検定した。このサンドウィッチ型のアッセイは、エキセンジン−４と反応するが、ＧＬＰ−１あるいはエキセンジン−４またはＧＬＰ−１のテストした代謝産物とは反応しないマウスベースのモノクローナル抗体を用いる。定量の下限は１５ｐＭ（６３ｐｇ／ｍｌ）であった。エキセンジン−４についての見積もったｔ_1/2は静脈内ボーラスでは１８−４１分であり、連続的静脈内では２８−４９分であり、皮下では９０−２１６分であり、腹腔内注射では１２５−１７４分であった。生物学的利用性は皮下および腹腔内注射では６５−７６％であった。静脈内注入から測定されたクリアランスは４〜８ｍｌ／分であった。各投与経路内のＣ_maxおよびＡＵＣ値は共に用量に比例した。分布の容量は４５７−８６７ｍｌであった。クリアランスおよび生物学的利用性は容量依存的ではなかった。Ｃ_max（または定常状態血漿中濃度；Ｃ_ss）は以下の表に示されている。
【表１】

【０１２５】
実施例６−ラットにおける静脈内グルコースチャレンジの間におけるエキセンジン−４およびグルカゴン状ペプチド−１（ＧＬＰ−１）のインスリン向性作用の比較
この実験は、ラットにおける静脈内グルコースチャレンジ後における生体内での合成エキセンジン−４およびＧＬＰ−１のインスリン向性作用を比較するものである。Sprague-Dawleyラット(〜400g)をハロタンで麻酔し、大腿動脈および伏在静脈を介してカニューレを入れた。９０分の回復期間の後、生理食塩水またはペプチド（各々、３０ｐｍｏｌ／ｋｇ／分）を静脈内投与した（２時間について１ｍｌ／時間；各グループにつきｎ＝４−５）。注入開始から３０分後に、Ｄ−グルコース（５．７ミリモル／ｋｇ， ０．８ｍｌ）を静脈内注射した。生理食塩水処置、エキセンジン−４処置およびＧＬＰ−１処置されたラットにおいて、血漿中グルコース濃度は注射前には同様であり（９．３±０．３， ９．７±０．３， １０．３±０．４ｍＭ）、グルコース注射後には同様の量だけ増加し（２１．７、２１．３、２３．７ｍＭ）、同様の６０分グルコースＡＵＣをもたらした（各々、９８７±３９， ９０７±３０， １０９６±６８ｍｍ・分）。すなわち、血糖刺激は各処置グループで同様であった。生理食塩水処置されたラットにおける血漿中インスリン濃度はグルコースチャレンジに伴って３．３倍増加した（７６５±１８８ｐＭのピークに対して２３０±５３）。エキセンジン−４注入による、血漿中インスリン濃度の増加は６．８倍であった（３６３±６０から２４８６±３６５ｐＭまで）。ＧＬＰ−１に関しては、血漿中インスリン濃度の増加は２．９倍であり（３９１±２７から１１４５±１６９ｐＭまで）、これは生理食塩水処置されたラットで得られたものと同様であった。生理食塩水処置されたラットにおける６０分インスリンＡＵＣは２４±６ｎＭ・分であり、エキセンジン処置されたラットでは２．８倍増加し（６７±８ｎＭ・分；ｐ＜０．００３対生理食塩水；Ｐ＜０．０２対ＧＬＰ−１）、ＧＬＰ−１処置されたラットでは２０％だけ増加した（ｎ．ｓ対生理食塩水）。エキセンジン−４によるグルコース刺激インスリン放出の増幅もまた３および３００ｐｍｏｌ／ｋｇ／分の注入速度でテストし、用量依存的であることが示された。かくして、エキセンジン−４は、無傷ラットにおけるグルコース刺激インスリン放出の増幅においてＧＬＰ−１よりも優れおよび／または効果的である。
【０１２６】
実施例７−血漿中のエキセンジン−４の定量のためのイムノラジオメトリックアッセイ（ＩＲＭＡ）の開発と有効化および前臨床毒性および相Ｉ臨床評価に対するその適用
感受性および特異的サンドイッチ型イムノラジオメトリック（ＩＲＭＡ）アッセイは、合成エキセンジン−４を免疫原として用いる血漿中エキセンジン−４濃度の定量のために開発された。１つのマウス由来モノクローナル抗体はエキセンジン−４上のＣ−末端エピトープを認識する（捕獲抗体）が、ＧＬＰ−１とは交差反応しない。二次抗体（¹²⁵Ｉで標識したディテクター抗体）はエキセンジン−４およびＧＬＰ−１上のＮ−末端エピトープを認識し、結合には末端ヒスチジンを要する。かくして、該アッセイは全体としてＧＬＰ−１（７−３６）ＮＨ₂、ＧＬＰ−１（７−３６）ＣＯＯＨまたはエキセンジン（３−３９）を検出しない。ラット、サル、イヌ、ウサギおよびヒト血漿におけるアッセイの有効化により、各々、変動＜２０％＜１０％のアッセイ間およびアッセイ内係数、目標とする低、中程度および高い制御での±１５％の精度、および各々、６２．８および２５１２ｐｇ／ｍｌの定量の上限および下限が示された。ラットおよびサルならびに正常対象における相Ｉ臨床実験におけるエキセンジン−４の２８日の皮下毒性評価からの血漿試料がＩＲＭＡを用いて評価された。動物実験におけるＣｍａｘ値を以下の表に示す。０．０５、０．１、０．２および０．３μｇ／ｋｇの皮下投与からのヒト試料は９０、２２４、３７０および５８７ｐｇ／ｍｌのＣ_max値を生じた。
【表２】

【０１２７】
実施例８−ＧＬＰ−１およびエキセンジン−４のＧＬＰ−１受容体結合／活性化およびグルコース−降下効果の比較
エキセンジン−４を固相ペプチド合成技術によって合成し、ＧＬＰ−１受容体への生体内結合およびその活性化について、および糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿中グルコースの生体内降下について合成ＧＬＰ−１と比較した。ラットＧＬＰ−１受容体を発現するラット島細胞腫瘍細胞系（ＲＩＮｍ５ｆ）の原形質膜調製において、放射性標識ＧＬＰ−１に結合してそれを置き換えるそれらの能力について、またｃＡＭＰの生成を起こさせるそれらの能力についてペプチドを検定した。結合能力の相対的順番はＧＬＰ−１＞エキセンジン−４であることが判明した。シクラーゼ活性化の相対的順序はＧＬＰ−１＝エキセンジン−４であった。以下の表に示すごとく親和性は４−５倍の範囲にわたって異なる。対照的に、生体内グルコース降下能力は３４３０倍の範囲にわたって異なった。エキセンジン−４はＧＬＰ−１よりも３４３０倍の能力を有していた。エキセンジン−４の生体内能力はＧＬＰ−１受容体において能力にマッチせず、特性の集合の最高点のようである。
【表３】

【０１２８】
実施例９−対で育てたエキセンジン−４処置糖尿病 Fatty Zucker ラットにおける血糖指標およびインスリン感受性の比較
本実施例は、ＺＤＦラットにおけるエキセンジン−４の有利な効果が食物摂取の変化に対して二次的であるか否かをテストするものである。これは、エキセンジン−４で得られた効果を、１０μｇのエキセンジン−４を毎日２回皮下注射したＺＤＦラットが食べたのと同一の食物の量を消費した生理食塩水処置適合動物で観察された効果と比較するものである。血漿中グルコースおよびＨｂＡ１ｃは６週間の間毎週測定した。最後の処置から１日後に、動物をハロタンで麻酔し、高インスリン血症（５０ｍＵ／ｋｇ／分）正常血糖クランプに付した。６週間にわたるＨｂＡ１ｃの変化は処置グループの間で異なり（Ｐ＜０．００１ ＡＮＯＶＡ）、自由摂食（ｎ＝５）および対摂食（ｎ＝５）ラットでは増加し、エキセンジン−４−処理ラット（ｎ＝５）では減少した。同様に、血漿中グルコースの変化は処置グループの間で異なり（Ｐ＜０．００２ ＡＮＯＶＡ）、自由摂食および対摂食ＺＤＦラットでは増加し、エキセンジン−４で処置したＺＤＦラットでは減少した。３時間のクランププロトコルのうちの最後の時間において、エキセンジン−４処置ラットにおけるグルコース注入速度は、各々、対摂食（＋１０５％）および自由摂食（＋２０％）対照よりも高い傾向にあった（１０．１４±１．４３ ｎ＝５、８．４６±０．８７ ｎ＝４、４．９３±２．０２ｍｇ／ｋｇ／分 ｎ＝３；ｎ．ｓ． Ｐ＝０．０９ ＡＮＯＶＡ）。インスリン感受性のもう１つの指標である血漿中乳酸濃度は処置グループの間で大きく異なり（Ｐ＜０．０２ ＡＮＯＶＡ）、エキセンジン−４処置ラットにおいて最低であった。つまり、エキセンジン−４処置は、完全にではないが部分的には、同量の食物を摂取させた対照に適合する血糖指標およびインスリン感受性の改良に関係し、これは、ＺＤＦラットにおけるエキセンジン−４での代謝対照における改良がカロリー制限以外のメカニズムに少なくとも部分的に原因することを示している。
【０１２９】
実施例１０−健康な一晩絶食ボランティアにおける皮下合成エキセンジン−４による内因性インスリン分泌の臨床的研究および刺激
合成エキセンジン−４の安定性および許容性および薬物動態学を探究するための二重盲検プラセボ制御単一上昇用量臨床試験において、皮下注射用に処方されたエキセンジン−４を、血漿中グルコースおよびインスリン濃度に対する効果を評価しつつ健康な男性ボランティアで評価した。５つの単一皮下用量のエキセンジン−４（０．０１、０．０５、０．１、０．２または０．３μｇ／ｋｇ）を絶食状態の４０人の健康な男性ボランティアで実験した。最大の血漿中エキセンジン−４濃度は投与後１時間および２時間の間で達成され、調べた用量の間で差はほとんどなかった。データの調査により、Ｃｍａｘについての用量依存性増加が示された。この実験およびこの実験に参加した健康な男性ボランティアにおいては深刻で有害な事象は報告されず、エキセンジン−４は、０．１μｇ／ｋｇまでおよびそれを含む皮下用量で十分許容性のあるものであった。血漿中グルコース濃度の減少もまたこの用量で観察された。０．２μｇ／ｋｇ以上の用量において、最も共通的に観察された有害事象は頭痛、吐き気、嘔吐、目眩、および体位性低血圧であった。０．０５μｇ／ｋｇ以上の用量の投与の後に血漿中グルコース濃度の一過的降下があった。
【０１３０】
１８−４０才の年齢の４０人の健康な痩せた（平均ＢＭＩ（±ＳＥ）２２．７±１．２）対象をランダムに５つのグループに割り当てた。８人の対象の各グループ内において、６人をエキセンジン−４に割り当て、２人をプラセボ（ＰＢＯ）に割り当てた。エキセンジン−４（０．０１、０．０５、０．１、０．２または０．３μｇ／ｋｇ）またはプラセボを一晩の絶食に続いて投与し、血漿中エキセンジン−４、グルコースおよびインスリン濃度を安全性および許容性に関してモニターした。安全性の問題は見られなかった。≦０．１μｇ／ｋｇの用量ならびにＰＢＯは許容され、他方、０．２および０．３μｇ／ｋｇは吐き気および嘔吐における用量依存性増加をもたらした。ピーク血漿中エキセンジン−４濃度は用量依存的に上昇し、０．１μｇ／ｋｇの後に、エキセンジン−４の免疫反応性は３６０分間持続した。血漿中グルコースは０．０１μｇ／ｋｇを除いて全ての用量の後に減少し、３０分迄に最下点に到達し、１８０分内にベースラインに復帰した。０．３μｇ／ｋｇを摂取した対象は投与３０分後にカロリー飲料を摂取し、それらのデータの比較を不可能にした。血漿中グルコースの平均変化（０−１８０分）：ＰＢＯの０．０１、０．０５、０．１および０．２μｇ／ｋｇについてはそれぞれ０．０３±０．０７、−０．０７±０．０８、−０．３８±０．１４、−０．８５±０．１３および−０．８３±０．２３ミリモル／Ｌ；Ｐ≦０．０２対ＰＢＯ。記録された最低血漿中グルコースは３．４ミリモル／Ｌであった。血漿中インスリンの対応する平均変化（０−１２０分）は０．４３±０．５９、２．３７±０．５８、２．２８±０．６６、４．９１±１．２３、および１４．００±３．３４μＬ／ｍｌであり；０．１および０．２μｇ／ｋｇのグループではＰ≦０．１対ＰＢＯであった。つまり、健康な一晩絶食ボランティアにおいては、エキセンジン−４の皮下注射は、（１）安全性の問題を示さず、（２）用量≦０．１μｇ／ｋｇで純分に許容性が有り、（３）６時間までの血漿中でのエキセンジン−４免疫反応性を与え、（４）低血糖症を併発することなく血漿中インスリンを増加させかつ、血漿中グルコースを低下させた。
【０１３１】
実施例１１−齧歯類におけるエキセンジン−４の別の送達の有効性
本実施例では注射に代わる手段によるエキセンジン−４の送達をテストし、生物学的効果を発揮するのに十分な量で粘膜表面を移動する能力を調べた。（２部位イムノラジオメトリックアッセイによって測定した）血漿中グルコースおよび無傷合成エキセンジン−４の濃度の変化を、ｄｂ／ｄｂマウスに、気管を介し、エアロゾルミストを介し（肺）、栄養を介し（経口）、また舌下にて（舌下）の様々な用量の合成エキセンジン−４を含有する生理食塩水溶液を投与して観察した。同一の投与経路、ならびに十二指腸および鼻孔内投与経路をラットについてテストし、例えば、舌下および気管内経路についての生物学的利用性を計算した。マウスに上記経路の各々を介してエキセンジン−４を投与（ｄｂ／ｄｂマウス気管内 Ｐ＜０．０２； ｏｂ／ｏｂマウス気管内 Ｐ＜０．０００２； ｄｂ／ｄｂマウスエアロゾル Ｐ＜０．０００１；栄養 Ｐ＜０．００２；舌下 Ｐ＜０．０２）した結果、１ないし４時間後に大きなグルコース降下活性がもたらされた。血漿内エキセンジン−４濃度の用量依存的増加は７７７±３６５ｐｇ／ｍｌ（ｄｂ／ｄｂマウス気管内）；１７０±６７ｐｇ／ｍｌ（ｄｂ／ｄｂマウスエアロゾル）；４５２０±１８４６ｐｇ／ｍｌ（ｄｂ／ｄｂマウス舌下）までであった。同様に、ラットにおいては、エキセンジン−４濃度は６８，６８２±３８，６６１ｐｇ／ｍｌ（気管内）；１９００ｐｇ／ｍｌ（肺）；６７５７ｐｇ／ｍｌ（鼻孔）３，８６２±２，８４４ｐｇ／ｍｌ（舌下）まで観察されたが；十二指腸送達した場合には、明らかな吸収または生物学的活性はなかった。生理食塩水中でのエキセンジン−４の生物学的利用性は気管を介して送達すると低用量で〜７．３％であり、その時、６１〜７４％のＣｍａｘが５分以内に観察された。従って、動力学は皮下投与後に観察されたものと同様であった。舌下にて送達された生理食塩水中のエキセンジン−４の生物学的利用性は低用量において３．１〜９．６％であった。これらの実験は、便宜的な非注射経路を介する生物学的有効量でのエキセンジン−４およびそのペプチドアゴニストアナログの送達を裏付けるものである。
【０１３２】
実施例１２−２型糖尿病を持つヒトへの皮下注射によって与えられたある範囲の用量の合成エキセンジン−４の代謝効果についての単一盲検プラセボ制御実験
本実施例は、ＩＩ型糖尿病を持つ対象に皮下経路によって与えられたある範囲の用量の合成エキセンジン−４の代謝効果を調べるための２部分単一盲検プラセボ制御実験の結果を説明するものである。この実験に関与した対象はＩＩ型糖尿病と診断され、食事、および／または経口低血糖剤（ＯＨＡ）、および≧７．０％であるがスクリーニング訪問時には≦１２．０％あった濃度のＨｂＡ_1cで制御された個体であった。
【０１３３】
実験はスクリーニング訪問時に開始し、しかる後、ＯＨＡを摂取している対象はこの薬剤の停止の指示を受け、ＯＨＡの効果が消失したほぼ１４日後に診療所に戻った。パート１に参加した対象は最初の投与に先立って午後に診療所の到着し、３または４日のスケジュールの投与を開始した。各投与事象は２４時間離すように計画した。
【０１３４】
同意およびスクリーニングの後に、対象は合成エキセンジン−４またはプラセボを摂取するようにランダムに割り当てられた。実験の最初の部分において、６人の対象は３ないし４日間、入院患者臨床リサーチユニットに引きこもらせられて、４つの処置配列のうちの１つに割り当てられ、そこで彼らは以下の用量の各々を摂取させられた：０．１または０．０１、あるいは恐らくは０．００１μｇ／ｋｇのプラセボまたは合成エキセンジン−４。一晩の絶食後に用量が皮下投与された。実験薬の注射から１５分後に標準化された液体食が与えられた。以下の表はパート１についての投与スケジュールを示す：
【表４】

【０１３５】
実験の第２のパートにおいては、パート１の完了のほぼ３日後に、８人の対象を４日間、入院患者臨床リサーチユニットに閉じこもらせた。対象はパート１に参加したものとは別の対象であった。パート２の間の実験手法および事象のスケジュールはパート１と一致していた。用量は、パート１におけるグルコースに対する効果が分析された後に決定された。
【０１３６】
パート１の間には０．０１μｇ／ｋｇで有意な効果が観察されなかったので、パート２においては以下のスケジュールに従って対象に投与した。
【表５】

パート２に参加した対象は、同様に、パート１からのデータの検討の後に投与が開始された。全ての対象は、安全性再評価のために入院患者ユニットから出て４ないし６日後に診療所に戻った。
【０１３７】
実験で用いた合成エキセンジン−４は皮下注射用の透明無色の滅菌溶液であり、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．５）中に処方したものであり、等浸透圧修飾剤としての４．３％マンニトールを含有していた。合成エキセンジン−４注射の強度は０．１ｍｇ／ｍｌであった。１ｍｌの溶液をゴムストッパーにて３ｍｌのバイアルに供給した。プラセボ溶液は同様な滅菌処方から、薬物、合成エキセンジン−４なしでつくった。
【０１３８】
実験の結果は図１６および１７に示されている。それらは、２型糖尿病を持つヒトにおいて血中グルコースを低下させる種々の異なる用量のエキセンジン−４（０．０２μｇ／ｋｇ、０．０５μｇ／ｋｇ、および０．１μｇ／ｋｇ）の能力を示している。
【０１３９】
実施例１３
本実施例は糖尿病Fatty Zuckerラットにおけるエキセンジン−４およびそのアゴニストのインスリン−感受性化効果についての用量応答を測定する実験を説明するものである。これらの実験で用いたエキセンジン−４はBachem（Torrance, CA; カタログ番号Ｈ８７３０，ロット番号５０６１８９）， American Peptides (Sunnyvale, CA; カタログ番号３０１５７７, ロット番号K1005ITI)、およびイン・ハウス固相合成（ロットＡＲ１３７４−１１；ペプチド含有量９３．３％）から入手したものである。３９匹の雄糖尿病Fatty Zuckerラット（ＺＤＦ）／Ｇｍｉ^TM−（ｆａ／ｆａ）（年齢１１６±２０日；体重４４１±３９ｇ）を５つの処置グループに割り当てた；すなわち生理食塩水注射のみ（ｎ＝９）及びエキセンジン−４注射０．１、１、１０または１００μｇ（各々、ｎ＝９、１０、６、５）。これらのうち、３５匹のラットを高インスリン血症正常血糖クランプ実験で用いた（各々、ｎ＝９、７、９、５、５）。処置前、およびヘモグロビンＡ_1c（ＤＣＡ２０００ラテックス免疫凝集阻害， Bayer Diagnostics, Tarrytown, NY)の分析のための処置の間５週間、週間隔にて、意識のある一晩絶食したラットの局所的に麻酔した尾(20%局所ベンゾカイン溶液のHurricaineブランド, Beutlich, Waukegan, IL)の先端から血液をサンプリングした。体重は毎日測定した。

【０１４０】
処置の６週間後、最後のエキセンジン−４（または生理食塩水）投与からほぼ１６時間後、および一晩の絶食の後、高インスリン血症オイグリセミッククランプ（DeFronzo RA, Tobin JD, Andres R: Glucose clamp tequnique: a method for quantifying insulin secretion and resistance. Amer J Physiol 237:E214-23, 1979）をハロタン−麻酔ラットについて行った。ラットを熱調整し、気管を切開し、２０％Ｄ−グルコースおよびインスリンの注入のための伏在静脈を介し、および血液サンプリングおよび血圧モニタリングのために大腿動脈を介してカテーテルを入れた（Ｐ２３ＸＬトランスジューサー， Spectramed, Oxnard, CA; ユニバーサル増幅器Gould, Valley View, OH; A/D 転換, Datatranslation, Wilmington DE) 。 インスリン(Humulin-R Eli Lilly, Indianapolis, IN）を５０ｍＵ／ｋｇ／分で注入し、ｔ＝−３０分で開始し、ｔ＋１８０分まで継続した。グルコースを可変速度で注入して、５分間隔でのグルコースサンプリングおよび分析（固定化グルコースオキシダーゼ方法； YSI 2300-Stat Analyzer, Yellow Springs, OH）によって測定してオイグリセミアを維持した。クランプの間の平均血漿中グルコースは１０３．９ ｍｇ／ｄＬであった（変数の平均係数は５．８％であった。）分析のためのグルコース注入速度データは、応答が定常状態に近づいた時のｔ＝６０−１８０分から採取した。グルコースアナライザーに導入した固定化乳酸オキシダーゼセンサーから得られた血漿中乳酸データも収集した。
【０１４１】
注射は月曜日から金曜日にわたってほぼ午前８時および午後４時に、および土曜日および日曜日にほぼ午前１０時に腹腔内投与した。
【０１４２】
有意レベルとしてＰ＜０．０５を用い、スチューデントのｔ−検定ルーチン（Instat V3.0, GraphPad Software, San Diego, CA）を用いて対統計分析(pairwise statistical analyses)を行った。用量応答分析は４−パラメーター論理回帰を用い、片側ＡＮＯＶＡ（Prism V3.0, GraphPad Software,San Diego,CA）を用いて一般的効果をテストした。

【０１４３】
結果は、異なる用量のエキセンジン−４で６週間処理した糖尿病Fatty Zuckerラットにおいて、食物摂取（ＥＤ５０ ０．１４μｇ±０．１５ ｌｏｇ； 図１３ａ参照）において、および２７±２ｇまでの体重（ＥＤ５０ ０．４２μｇ±０．１５ ｌｏｇ； 図１３ｂ参照）において用量依存減少があり、生理食塩水注射対照に対して体重の５．６±０．５％減少があった。
【０１４４】
ラットのこのグループにおいて、糖尿病は進行的であるように思われた。というのは、ヘモグロビンＡ_1cは最初に全てのグループで上昇したからである。エキセンジン−４の注射はそれにもかかわらずヘモグロビンＡ_1cにおける上昇を用量依存的に阻止し逆行させるように思われた（図１３ｃ参照）。処置の最後の２週間に測定したヘモグロビンＡ１ｃに対する影響についてのエキセンジン−４用量応答は一般に有意であり（Ｐ＝０．０５ ＡＮＯＶＡ）、特に１μｇおよび１００μｇ用量において有意である（各々、Ｐ＜０．００５， Ｐ＜０．０２）。同様のパターンが処置の最後の２週間において絶食血漿中トリグリセリドに関して観察され、そこでは、血漿中濃度は全ての用量において５１％および６１％の間だけ大きく減少した（Ｐ＜０．００２ ＡＮＯＶＡ）。
【０１４５】
３９匹のラットの内、３５匹を、それらの最後の処置からほぼ１６時間後に高インスリン血漿オイグリセミッククランプまで進行させる実験に供した。エキセンジン処置ラットよりも生理食塩水処置ラットでより高い（４８９±２８ｍｇ／ｄＬ）最初の絶食血漿中グルコース濃度はインスリン注入と共に低下し、引き続いて、同様の血漿中グルコース濃度に保持された（６０−１８０分において１０５．６ｍｇ／ｄＬ； 偏差の平均係数４．６％；図１４ａ参照）。オイグリセミアを維持するのに必要なグルコース注入速度はエキセンジン−４での前処置によって用量依存的に増加した（ＥＤ５０ １．０μｇ±０．４１ ｌｏｇ；図１４ｂ参照）。エキセンジン−４処理はグルコース注入速度を生理食塩水処置対照に対して４８％までだけ増加させた。
【０１４６】
クランプ手法の前およびその間における血漿中乳酸濃度はエキセンジン−４での前処置によって用量依存的に低下した（ＥＤ５０ ４μｇ±０．２５ ｌｏｇ；図１４ｃ参照）。クランプの６０分および１８０分の間の平均血漿中乳酸濃度の４２％までの低下を表すこの影響は、主として、前クランプ（基礎）乳酸濃度の低下によるように思われ、高インスリン血漿の間の血漿中乳酸の増分は全ての処置グループで同様であった。クランプ手法の前またはその間に測定された平均動脈圧に処置に関連する差異はなかった。
【０１４７】
エキセンジン−４の長期投与後に観察されたインスリン感受性におけるほぼ５０％増加は、エキセンジン−４は生体外でのインスリン感受性組織において急性効果を有しないという観察に鑑みれば重要かつ驚くべきことであった（すなわち、摘出されたヒラメ筋においてグリコーゲンへの、または摘出された脂肪細胞において脂質への放射性標識グルコースの基礎的またはインスリン刺激取り込みに対する効果はない；Pittnerら, 未公表）。インスリン感受性の増加が改良された糖血制御および低下したグルコース毒性からいくぶんはもたらされたものであろうという可能性は見逃すことができないが、インスリン感受性化として分類されないものを含めた種々の抗糖尿病療法からのインスリン感受性の増加はかなり変化し得ることが報告されており、ＧＬＰ−１での急性処理はヒトにおいてインスリン感受性を直ちには変化させないようであると報告されている（Orskov L, Holst JJ, Moller J, Orskov C, Moller N, Alberti KG, Schmitz O: GLP-1 does not affect insulin sensitivity in healthy man. Diabetologia 39:1227-32, 1996; Ahren B, Larsson H, Holst JJ: Effects of glucagon-like peptide-1 on islet function and insulin sensitivity in noninsulin-dependent diabetes mellitus. J Clin Endocrinol Metab 82:473-8, 1997; UK Prospective Diabetes Study Group: Intensive blood-glucose control with sulphonylureas or insulin compared with conventional treatment and risk of complications in patients with type 2 diabetes (UKPDS 33). Lancet 352:837-53, 1998)。 つまり、エキセンジン−４の長期投与は、チアゾリジンジオンおよびメトフォルミンのごときインスリン感受性化薬物を含めた、他の療法で観察されたものよりも大きくないとしてもそれと同程度の大きさであるインスリン感受性の増加に関連するように思われる。
【０１４８】
実施例１４
配列番号９を有するアミド化ペプチドの調製
Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.)を用いて４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, 0.55 ｍモル/g）上に上記ペプチドを組み立てた。一般に、合成を通じて単一カップリングサイクルを用い、Ｆａｓｔ Ｍｏｃ（ＨＢＴＵ活性化）化学を利用した。しかしながら、いくつかの位置においては、カップリングは予期したよりは効率は低く、二重カップリングが必要であった。特に、残基Ａｓｐ₉、Ｔｈｒ₇およびＰｈｅ₆は全て二重カップリングを要した。ピペリジンを用いる成長ペプチド鎖の脱保護（Ｆｍｏｃ基除去）は必ずしも効果的でなかった。位置Ａｒｇ₂₀、Ｖａｌ₁₉およびＬｅｕ₁₄では二重脱保護が必要であった。完成したペプチド樹脂の最後の脱保護は、標準的な方法（Introduction to Clevage Techniques, Applied Biosystems, Inc.）に従って、トリエチルシラン（０．２ｍｌ）、エタンジチオール（０．２ｍｌ）、アニソール（０．２ｍｌ）、水（０．２ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（１５ｍｌ）の混合物を用いて達成された。ペプチドをエーテル／水（５０ｍｌ）中で沈殿させ、遠心分離した。沈殿物を氷酢酸中で復元し、凍結乾燥した。凍結乾燥したペプチドを水に溶解させた。粗製純度は約５５％であった。
【０１４９】
溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を精製工程および分析で用いた。
【０１５０】
ペプチドを含有する溶液を分取用Ｃ−１８カラムに適用し、精製した（４０分間にわたり溶媒Ａ中１０％ないし４０％の溶媒Ｂ）。Ｃ−１８分析カラムを用いて画分の純度をイソクラチックに測定した。純粋な画分をプールし、前記したペプチドを仕上げた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたり溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）は、１４．５分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１３１．７；実測値４１２９．３
【０１５１】
実施例１５
配列番号１０を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配２５％ないし７５％の溶媒Ｂ）は、２１．５分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１６８．６；実測値４１７１．２。
【０１５２】
実施例１６
配列番号１１を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）は、１７．９分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１４７．６；実測値４１５０．２。
【０１５３】
実施例１７
配列番号１２を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３５％ないし６５％の溶媒Ｂ）は、１９．７分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２１２．６；実測値４２１３．２。
【０１５４】
実施例１８
配列番号１３を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし５０％の溶媒Ｂ）は、１６．３分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２６２．７；実測値４２６２．４。
【０１５５】
実施例１９
配列番号１４を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１７２．６。
【０１５６】
実施例２０
配列番号１５を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２２４．７。
【０１５７】
実施例２１
配列番号１６を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１７２．６。
【０１５８】
実施例２２
配列番号１７を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１８６．６。
【０１５９】
実施例２３
配列番号１８を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２００．７。
【０１６０】
実施例２４
配列番号１９を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２００．７。
【０１６１】
実施例２５
配列番号２０を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２０２．７。
【０１６２】
実施例２６
配列番号２１を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１４５．６。
【０１６３】
実施例２７
配列番号２２を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１８４．６。
【０１６４】
実施例２８
配列番号２３を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１４５．６。
【０１６５】
実施例２９
配列番号２４を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２２４．７。
【０１６６】
実施例３０
配列番号２５を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１７２．６。
【０１６７】
実施例３１
配列番号２６を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１１５．５。
【０１６８】
実施例３２
配列番号２７を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１８８．６。
【０１６９】
実施例３３
配列番号２８を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１３１．６。
【０１７０】
実施例３４
配列番号２９を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１７２．６
【０１７１】
実施例３５
配列番号３０を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１４５．６
【０１７２】
実施例３６
配列番号３１を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上で前記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。チオプロリン位置３８、３７、３６および３１においてさらなる二重カップリングが必要であった。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２６６．８
【０１７３】
実施例３７
配列番号３２を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。チオプロリン位置３８、３７および３６においてさらなる二重カップリングが必要であった。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２４６．８
【０１７４】
実施例３８
配列番号３３を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。ホモプロリン位置３８、３７、３６および３１においてさらなる二重カップリングが必要であった。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２５０．８
【０１７５】
実施例３９
配列番号３４を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。ホモプロリン位置３８、３７および３６においてさらなる二重カップリングが必要であった。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２３４．８
【０１７６】
実施例４０
配列番号３５を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。チオプロリン位置３８、３７、３６および３１においてさらなる二重カップリングが必要であった。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４２０９．８
【０１７７】
実施例４１
配列番号３６を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。ホモプロリン位置３８、３７、３６および３１においてさらなる二重カップリングが必要であった。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１９３．７
【０１７８】
実施例４２
配列番号３７を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上でに上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。Ｎ−メチルアラニン位置３８、３７、３６および３１においてさらなる二重カップリングが必要であった。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３８５８．２
【０１７９】
実施例４３
配列番号３８を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。Ｎ−メチルアラニン位置３８、３７および３６においてさらなる二重カップリングが必要であった。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３９４０．３
【０１８０】
実施例４４
配列番号３９を有するペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。Ｎ−メチルアラニン位置３８、３７、３６および３１においてさらなる二重カップリングが必要であった。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３８０１．１
【０１８１】
実施例４５
前記Ｃ−末端アミド配列に対応するＣ−末端カルボン酸ペプチドの調製
実施例１４と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、いわゆるＷａｎｇ樹脂（ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂（Bachem, ０．５４ミリモル／ｇ）上に実施例１ないし３０の上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％溶媒Ｂ）を次いで行い、生成物ペプチドの保持時間を測定した。電子スプレイ質量スペクトル分析は実験的に測定された（Ｍ）を与えた。
【０１８２】
実施例４６
配列番号７を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号７］
【０１８３】
Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.)を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立てた。概して、合成を通じて単一カップリングサイクルを用い、Ｆａｓｔ Ｍｏｃ（ＨＢＴＵ活性化）化学を利用した。成長するペプチド鎖の脱保護（Ｆｍｏｃ基除去）はピペリジンを用いて達成した。完成したペプチド樹脂の最終脱保護は、標準的な方法（Introduction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems, Inc.）に従い、トリエチルシラン（０．２ｍｌ）、エタンジチオール（０．２ｍｌ）、アニソール（０．２ｍｌ）、水（０．２ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（１５ｍｌ）の混合物を用いて達成した。ペプチドをエーテル／水（５０ｍｌ）中で沈殿させ、遠心分離した。沈殿を氷酢酸中で復元し、凍結乾燥した。凍結乾燥ペプチドを水に溶解させた。粗製純度は約７５％であった。
【０１８４】
溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を精製工程および分析で使用した。ペプチドを含有する溶液を分取用Ｃ−１８カラムに適用し、精製した（４０分間にわたる溶媒Ａ中の１０％ないし４０％溶媒Ｂ）。画分の純度はＣ−１８分析カラムを用いてイソクラチックに測定した。純粋な画分をプールし、上記ペプチドを仕上げた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の勾配３０％ないし５０％の溶媒Ｂ）は、１８．９分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３４０８．０；実測値３４０８．９
【０１８５】
実施例４７
配列番号４０を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号４０］
【０１８６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし４０％の溶媒Ｂ）は、１７．９分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２９４．７；実測値３２９４．８
【０１８７】
実施例４８
配列番号４１を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号４１］
【０１８８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配２９％ないし３６％の溶媒Ｂ）は、２０．７分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２３７．６；実測値３２４０
【０１８９】
実施例４９
配列番号４２を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号４２］
【０１９０】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３６％ないし４６％の溶媒Ｂ）は、１５．２分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２５１．６；実測値３２５１．５
【０１９１】
実施例５０
配列番号４３を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号４３］
【０１９２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３６％ないし４６％の溶媒Ｂ）は、１３．１分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２０７．６；実測値３２０８．３
【０１９３】
実施例５１
配列番号４４を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号４４］
【０１９４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３５％ないし４５％の溶媒Ｂ）は、１２．８分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１６１．５；実測値３１６３
【０１９５】
実施例５２
配列番号４５を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号４５］
【０１９６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３６％ないし４６％の溶媒Ｂ）は、１５．２分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２２１．６；実測値３２２２．７
【０１９７】
実施例５３
配列番号４６を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号４６］
【０１９８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３４％ないし４４％の溶媒Ｂ）は、１４．３分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１９５．５；実測値３１９９．４
【０１９９】
実施例５４
配列番号４７を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号４７］
【０２００】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３８％ないし４８％の溶媒Ｂ）は、１５．７分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２２１．６；実測値３２２１．６
【０２０１】
実施例５５
配列番号４８を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号４８］
【０２０２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３８％ないし４８％の溶媒Ｂ）は、１８．１分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１８０．５；実測値３１８０．９
【０２０３】
実施例５６
配列番号４９を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号４９］
【０２０４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３６％ないし４６％の溶媒Ｂ）は、１７．０分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１８０．６；実測値３１８２．８
【０２０５】
実施例５７
配列番号５０を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号５０］
【０２０６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３２％ないし４２％の溶媒Ｂ）は、１４．９分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１９５．５；実測値３１９５．９
【０２０７】
実施例５８
配列番号５１を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号５１］
【０２０８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３７％ないし４７％の溶媒Ｂ）は、１７．９分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７９．６；実測値３１７９．０
【０２０９】
実施例５９
配列番号５２を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号５２］
【０２１０】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３７％ないし４７％の溶媒Ｂ）は、１４．３分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７９．６；実測値３１８０．０
【０２１１】
実施例６０
配列番号５３を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号５３］
【０２１２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３７％ないし４７％の溶媒Ｂ）は、１３．７分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７９．６；実測値３１７９．０
【０２１３】
実施例６１
配列番号５４を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号５４］
【０２１４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３５％ないし４５％の溶媒Ｂ）は、１４．０分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２０９．６；実測値３２１２．８
【０２１５】
実施例６２
配列番号５５を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号５５］
【０２１６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３８％ないし４８％の溶媒Ｂ）は、１４．３分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１５２．５；実測値３１５３．５
【０２１７】
実施例６３
配列番号５６を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号５６］
【０２１８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３５％ないし４５％の溶媒Ｂ）は、１２．１分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１９５．５；実測値３１９７．７
【０２１９】
実施例６４
配列番号５７を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号５７］
【０２２０】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３８％ないし４８％の溶媒Ｂ）は、１０．９分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７９．６；実測値３１８０．５
【０２２１】
実施例６５
配列番号５８を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号５８］
【０２２２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３２％ないし４２％の溶媒Ｂ）は、１７．５分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１６１．５；実測値３１６３．０
【０２２３】
実施例６６
配列番号５９を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号５９］
【０２２４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３２％ないし４２％の溶媒Ｂ）は、１９．５分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１９５．５；実測値３１９９
【０２２５】
実施例６７
配列番号６０を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号６０］
【０２２６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３８％ないし４８％の溶媒Ｂ）は、１４．５分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１８０．５；実測値３１８３．７
【０２２７】
実施例６８
配列番号６１を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｌａ−ＮＨ₂［配列番号６１］
【０２２８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３４％ないし４４％の溶媒Ｂ）は、２２．８分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１９４．６；実測値３１９７．６
【０２２９】
実施例６９
配列番号６２を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号６２］
【０２３０】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４０９９．６
【０２３１】
実施例７０
配列番号６３を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号６３］
【０２３２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４０４２．５
【０２３３】
実施例７１
配列番号６４を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号６４］
【０２３４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４００２．４
【０２３５】
実施例７２
配列番号６５を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号６５］
【０２３６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３９４５．４
【０２３７】
実施例７３
配列番号６６を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号６６］
【０２３８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３９０５．３
【０２３９】
実施例７４
配列番号６７を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号６７］
【０２４０】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３８４８．２
【０２４１】
実施例７５
配列番号６８を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ−ＮＨ₂［配列番号６８］
【０２４２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３８０８．２
【０２４３】
実施例７６
配列番号６９を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ−ＮＨ₂［配列番号６９］
【０２４４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３７５１．１
【０２４５】
実施例７７
配列番号７０を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号７０］
【０２４６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３７３７．１
【０２４７】
実施例７８
配列番号７１を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号７１］
【０２４８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３６８０．１
【０２４９】
実施例７９
配列番号７２を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号７２］
【０２５０】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３６８０．１
【０２５１】
実施例８０
配列番号７３を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号７３］
【０２５２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３６２３．０
【０２５３】
実施例８１
配列番号７４を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号７４］
【０２５４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３５９３．０
【０２５５】
実施例８２
配列番号７５を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号７５］
【０２５６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３５３５．９
【０２５７】
実施例８３
配列番号７６を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号７６］
【０２５８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３５０５．９４
【０２５９】
実施例８４
配列番号７７を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号７７］
【０２６０】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３４４８．８
【０２６１】
実施例８５
配列番号７８を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号７８］
【０２６２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３３５１．７
【０２６３】
実施例８６
配列番号７９を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号７９］
【０２６４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３３５１．８
【０２６５】
実施例８７
配列番号８０を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号８０］
【０２６６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２９４．７
【０２６７】
実施例８８
配列番号８１を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ｔＰｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ ｔＰｒｏ ｔＰｒｏ ｔＰｒｏ−ＮＨ₂［配列番号８１］
【０２６８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。残基３７、３６及び３１において二重カップリングが必要である。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１９７．１
【０２６９】
実施例８９
配列番号８２を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ ｔＰｒｏ ｔＰｒｏ ｔＰｒｏ−ＮＨ₂［配列番号８２］
【０２７０】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。残基３７、３６および３１において二重カップリングが必要である。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１７９．１
【０２７１】
実施例９０
配列番号８３を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ＮＭｅａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号８３］
【０２７２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。残基３６および３１において二重カップリングが必要である。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３９４８．３
【０２７３】
実施例９１
配列番号８４を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ＮＭｅａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ ＮＭｅａｌａ ＮＭｅａｌａ−ＮＨ₂［配列番号８４］
【０２７４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。残基３６および３１において二重カップリングが必要である。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３８４０．１
【０２７５】
実施例９２
配列番号８５を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ｈＰｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ ｈＰｒｏ ｈＰｒｏ−ＮＨ₂［配列番号８５］
【０２７６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。残基３６および３１において二重カップリングが必要である。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４０５０．１
【０２７７】
実施例９３
配列番号８６を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ｈＰｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ ｈＰｒｏ−ＮＨ₂［配列番号８６］
【０２７８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。残基３１において二重カップリングが必要である。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３９３７．１
【０２７９】
実施例９４
配列番号８７を有するペプチドの調製
Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ−ＮＨ₂［配列番号８７］
【０２８０】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３８２７．２
【０２８１】
実施例９５
配列番号８８を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号８８］
【０２８２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３３９４．８
【０２８３】
実施例９６
配列番号８９を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｎａｐｈｔｈｙｌａｌａ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号８９］
【０２８４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上で前記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２８９．５
【０２８５】
実施例９７
配列番号９０を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号９０］
【０２８６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２８０．７
【０２８７】
実施例９８
配列番号９１を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号９１］
【０２８８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２９４．７
【０２８９】
実施例９９
配列番号９２を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号９２］
【０２９０】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２５０．７
【０２９１】
実施例１００
配列番号９３を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ ｐｅｎｔｙｌｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号９３］
【０２９２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２５３．５
【０２９３】
実施例１０１
配列番号９４を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｎａｐｈｔｈｙｌａｌａ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号９４］
【０２９４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上で上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２８９．５
【０２９５】
実施例１０２
配列番号９５を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ ｔＢｕｔｙｌｇｌｙ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号９５］
【０２９６】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１８３．４
【０２９７】
実施例１０３
配列番号９６を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号９６］
【０２９８】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２３７．６
【０２９９】
実施例１０４
配列番号９７を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号９７］
【０３００】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３６３７．９
【０３０１】
実施例１０５
配列番号９８を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号９８］
【０３０２】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３３０９．７
【０３０３】
実施例１０６
配列番号９９を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ｈＰｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ ｈＰｒｏ ｈＰｒｏ−ＮＨ₂［配列番号９９］
【０３０４】
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。残基３６および３１において二重カップリングが必要である。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３７１１．１
【０３０５】
実施例１０７
配列番号７、４０−６１、６８−７５、７８−８０および８７−９８についての上記Ｃ−末端アミド配列に対応するＣ−末端カルボン酸ペプチドの調製
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、いわゆるＷａｎｇ樹脂（ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂（Bachem, ０．５４ミリモル／ｇ））上に配列番号７、４０−６１、６８−７５、７８−８０および８７−９８の配列を有するペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析により実験的に（Ｍ）を決定する。
【０３０６】
実施例１０８
配列番号６２−６７、７６、７７、８１−８６および９９についての上記Ｃ−末端アミド配列に対応するＣ−末端カルボン酸ペプチドの調製
実施例４６と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、２−クロロトリチルクロライド樹脂（２００−４００メッシュ）、２％ＤＶＢ（Novabiochem, ０．４−１．０ミリモル／ｇ））上で配列番号６２−６７、７６、７７、８１−８６および９９の配列を有するペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を、次いで行って、生成物ペプチドの、保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析により実験的に（Ｍ）を決定する。
【０３０７】
実施例１０９
配列番号１００を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１００］
【０３０８】
Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸(Applied Biosystems, Inc.)を用いて４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立てた。概して、合成を通じて単一カップリングサイクルを用い、Ｆａｓｔ Ｍｏｃ（ＨＢＴＵ活性化）化学を利用した。成長ペプチド鎖の脱保護（Ｆｍｏｃ基除去）はピペリジンを用いて達成された。完成したペプチド樹脂の最終脱保護は、標準的な方法（Introduction to Cleavage Techniques, Applied Biosystems, Inc.）に従って、トリエチルアミン（０．２ｍｌ）、エタンジチオール（０．２ｍｌ）、アニソール（０．２ｍｌ）、水（０．２ｍｌ）およびトリフルオロ酢酸（１５ｍｌ）の混合物を用いて達成された。ペプチドをエーテル／水（５０ｍｌ）中で沈殿させ、遠心分離した。沈殿を氷酢酸中で復元し、凍結乾燥した。凍結乾燥したペプチドを水に溶解させた。粗製純度は約７５％であった。
【０３０９】
溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を精製工程および分析で用いた。
【０３１０】
ペプチドを含有する溶液を分取用Ｃ−１８カラムに適用し、精製した（４０分間にわたる溶媒Ａ中１０％ないし４０％の溶媒Ｂ）。画分の純度はＣ−１８分析カラムを用いてイソクラテックに測定した。純粋な画分をプールし、前記ペプチドを仕上げた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中の勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）は、１９．２分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７１．６；実測値３１７２
【０３１１】
実施例１１０
配列番号１０１を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１０１］
【０３１２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３６％ないし４６％の溶媒Ｂ）は、１４．９分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７９．６；実測値３１８０
【０３１３】
実施例１１１
配列番号１０２を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１０２］
【０３１４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３７％ないし４７％の溶媒Ｂ）は、１２．２分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２５１．６；実測値３２５３．３
【０３１５】
実施例１１２
配列番号１０３を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１０３］
【０３１６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製した。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いた。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３５％ないし４５％の溶媒Ｂ）は、１６．３分の観察された保持時間を有する生成物ペプチドを与えた。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１９３．６；実測値３１９７
【０３１７】
実施例１１３
配列番号１０４を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１０４］
【０３１８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２２８．６
【０３１９】
実施例１１４
配列番号１０５を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１０５］
【０３２０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２３４．７
【０３２１】
実施例１１５
配列番号１０６を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１０６］
【０３２２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３３０８．７
【０３２３】
実施例１１６
配列番号１０７を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１０７］
【０３２４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２５０．７
【０３２５】
実施例１１７
配列番号１０８を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１０８］
【０３２６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２５２．６
【０３２７】
実施例１１８
配列番号１０９を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１０９］
【０３２８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２００．６
【０３２９】
実施例１１９
配列番号１１０を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１１０］
【０３３０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１４３．５
【０３３１】
実施例１２０
配列番号１１１を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１１１］
【０３３２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２１４．６
【０３３３】
実施例１２１
配列番号１１２を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１１２］
【０３３４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１５７．５
【０３３５】
実施例１２２
配列番号１１３を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１１３］
【０３３６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１８４．６
【０３３７】
実施例１２３
配列番号１１４を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１１４］
【０３３８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上で前記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１２７．５
【０３３９】
実施例１２４
配列番号１１５を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ ＮａｐｈｔｈｙｌＡｌａ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１１５］
【０３４０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２６６．４
【０３４１】
実施例１２５
配列番号１１６を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｎａｐｈｔｈｙｌａｌａ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１１６］
【０３４２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２０９．４
【０３４３】
実施例１２６
配列番号１１７を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１１７］
【０３４４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２００．６
【０３４５】
実施例１２７
配列番号１１８を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１１８］
【０３４６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１４３．５
【０３４７】
実施例１２８
配列番号１１９を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１１９］
【０３４８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１９８．６
【０３４９】
実施例１２９
配列番号１２０を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１２０］
【０３５０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上で前記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中グラジエント３０％ないし６０％溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１４１．５
【０３５１】
実施例１３０
配列番号１２１を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１２１］
【０３５２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７０．６
【０３５３】
実施例１３１
配列番号１２２を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１２２］
【０３５４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１１３．５
【０３５５】
実施例１３２
配列番号１２３を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１２３］
【０３５６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２２８．６
【０３５７】
実施例１３３
配列番号１２４を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１２４］
【０３５８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７１．６
【０３５９】
実施例１３４
配列番号１２５を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１２５］
【０３６０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７２．５
【０３６１】
実施例１３５
配列番号１２６を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１２６］
【０３６２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１１５．４
【０３６３】
実施例１３６
配列番号１２７を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｐｅｎｔｙｌｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１２７］
【０３６４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２３０．４
【０３６５】
実施例１３７
配列番号１２８を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｐｅｎｔｙｌｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１２８］
【０３６６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１９８．６
【０３６７】
実施例１３８
配列番号１２９を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１２９］
【０３６８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１４１．５
【０３６９】
実施例１３９
配列番号１３０を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１３０］
【０３７０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１５７．５
【０３７１】
実施例１４０
配列番号１３１を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１３１］
【０３７２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１００．４
【０３７３】
実施例１４１
配列番号１３２を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１３２］
【０３７４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１５７．６
【０３７５】
実施例１４２
配列番号１３３を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１３３］
【０３７６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１００．５
【０３７７】
実施例１４３
配列番号１３４を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１３４］
【０３７８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１００．５
【０３７９】
実施例１４４
配列番号１３５を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１３５］
【０３８０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１５４．５
【０３８１】
実施例１４５
配列番号１３６を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１３６］
【０３８２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１１５．５
【０３８３】
実施例１４６
配列番号１３７を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｐｅｎｔｙｌｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１３７］
【０３８４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２１２．４
【０３８５】
実施例１４７
配列番号１３８を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｐｅｎｔｙｌｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１３８］
【０３８６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７３．４
【０３８７】
実施例１４８
配列番号１３９を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１３９］
【０３８８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１５６．６
【０３８９】
実施例１４９
配列番号１４０を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１４０］
【０３９０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３０９９．５
【０３９１】
実施例１５０
配列番号１４１を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１４１］
【０３９２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１５６．６
【０３９３】
実施例１５１
配列番号１４２を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１４２］
【０３９４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３０９９．５
【０３９５】
実施例１５２
配列番号１４３を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１４３］
【０３９６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１５６．６
【０３９７】
実施例１５３
配列番号１４４を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１４４］
【０３９８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３０９９．５
【０３９９】
実施例１５４
配列番号１４５を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１４５］
【０４００】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１８６．６
【０４０１】
実施例１５５
配列番号１４６を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｌａ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１４６］
【０４０２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１２９．５
【０４０３】
実施例１５６
配列番号１４７を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１４７］
【０４０４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１２９．５
【０４０５】
実施例１５７
配列番号１４８を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１４８］
【０４０６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３０７２．４
【０４０７】
実施例１５８
配列番号１４９を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１４９］
【０４０８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７２．５
【０４０９】
実施例１５９
配列番号１５０を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１５０］
【０４１０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１１５．５
【０４１１】
実施例１６０
配列番号１５１を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｎａｐｈｔｙｌａｌａ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１５１］
【０４１２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２６６．４
【０４１３】
実施例１６１
配列番号１５２を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｎａｐｈｔｈｙｌａｌａ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１５２］
【０４１４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２０９．４
【０４１５】
実施例１６２
配列番号１５３を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１５３］
【０４１６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２００．６
【０４１７】
実施例１６３
配列番号１５４を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１５４］
【０４１８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１４３．５
【０４１９】
実施例１６４
配列番号１５５を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ ｔＢｕｔｙｌｇｌｙ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１５５］
【０４２０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２１６．５
【０４２１】
実施例１６５
配列番号１５６を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ ｔＢｕｔｙｌｇｌｙ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１５６］
【０４２２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１５９．４
【０４２３】
実施例１６６
配列番号１５７を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１５７］
【０４２４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３２００．６
【０４２５】
実施例１６７
配列番号１５８を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１５８］
【０４２６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１４３．５
【０４２７】
実施例１６８
配列番号１５９を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１５９］
【０４２８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３０９９．５
【０４２９】
実施例１６９
配列番号１６０を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１６０］
【０４３０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３０８１．４
【０４３１】
実施例１７０
配列番号１６１を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１６１］
【０４３２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７２．５
【０４３３】
実施例１７１
配列番号１６２を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｌｙｓ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１６２］
【０４３４】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１１５．５
【０４３５】
実施例１７２
配列番号１６３を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１６３］
【０４３６】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１５７．５
【０４３７】
実施例１７３
配列番号１６４を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ａｌａ Ａｓｎ−ＮＨ₂［配列番号１６４］
【０４３８】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１００．４
【０４３９】
実施例１７４
配列番号１６５を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｌａ−ＮＨ₂［配列番号１６５］
【０４４０】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１７１．６
【０４４１】
実施例１７５
配列番号１６６を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｌａ−ＮＨ₂［配列番号１６６］
【０４４２】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１１４．５
【０４４３】
実施例１７６
配列番号１６７を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号１６７］
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４０３３．５
【０４４４】
実施例１７７
配列番号１６８を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号１６８］
【０４４５】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３９８４．４
【０４４６】
実施例１７８
配列番号１６９を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号１６９］
【０４４７】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４０１６．５
【０４４８】
実施例１７９
配列番号１７０を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号１７０］
【０４４９】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３８６１．３
【０４５０】
実施例１８０
配列番号１７１を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号１７１］
【０４５１】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３７４６．１
【０４５２】
実施例１８１
配列番号１７２を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ−ＮＨ₂［配列番号１７２］
【０４５３】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３７４２．１
【０４５４】
実施例１８２
配列番号１７３を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ−ＮＨ₂［配列番号１７３］
【０４５５】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３６９３．１
【０４５６】
実施例１８３
配列番号１７４を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号１７４］
【０４５７】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３７５１．２
【０４５８】
実施例１８４
配列番号１７５を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号１７５］
【０４５９】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３６３４．１
【０４６０】
実施例１８５
配列番号１７６を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号１７６］
【０４６１】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３５２６．９
【０４６２】
実施例１８６
配列番号１７７を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号１７７］
【０４６３】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３４７７．９
【０４６４】
実施例１８７
配列番号１７８を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ−ＮＨ₂［配列番号１７８］
【０４６５】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３５１９．９
【０４６６】
実施例１８８
配列番号１７９を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号１７９］
【０４６７】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３３０７．７
【０４６８】
実施例１８９
配列番号１８０を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号１８０］
【０４６９】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３１８６．５
【０４７０】
実施例１９０
配列番号１８１を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ｔＰｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ ｔＰｒｏ ｔＰｒｏ ｔＰｒｏ−ＮＨ₂［配列番号１８１］
【０４７１】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。残基３７、３６及び３１において二重カップリングが必要である。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１２１．１
【０４７２】
実施例１９１
配列番号１８２を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ ｔＰｒｏ ｔＰｒｏ ｔＰｒｏ−ＮＨ₂［配列番号１８２］
【０４７３】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。残基３７、３６及び３１において二重カップリングが必要である。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１７３．２
【０４７４】
実施例１９２
配列番号１８３を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ＮＭｅａｌａ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ ＮＭｅａｌａ ＮＭｅａｌａ−ＮＨ₂［配列番号１８３］
【０４７５】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。残基３６および３１において二重カップリングが必要である。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３７９６．１
【０４７６】
実施例１９３
配列番号１８４を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ ｈＰｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ ｈＰｒｏ−ＮＨ₂［配列番号１８４］
【０４７７】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。残基３１において二重カップリングが必要である。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３８７１．１
【０４７８】
実施例１９４
配列番号１８５を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ−ＮＨ₂［配列番号１８５］
【０４７９】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３７５０．２
【０４８０】
実施例１９５
配列番号１８６を有するペプチドの調製
Ｈｉｓ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ−ＮＨ₂［配列番号１８６］
【０４８１】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値３４０８．８
【０４８２】
実施例１９６
配列番号１８７を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号１８７］
【０４８３】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４１２０．６
【０４８４】
実施例１９７
配列番号１８８を有するペプチドの調製
Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｓｅｒ−ＮＨ₂［配列番号１８８］
【０４８５】
実施例１０９と同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.）を用い、４−（２’−４’−ジメトキシフェニル）−ＦｍｏｃアミノメチルフェノキシアセタミドノルロイシンＭＢＨＡ樹脂（Novabiochem, ０．５５ミリモル／ｇ）上に上記アミド化ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分間にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を次いで行って生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析（Ｍ）：計算値４００５．５
【０４８６】
実施例１９８
配列番号１００〜１６６、１７２〜１７７、１７９〜１８０および１８５〜１８８を有するペプチドについての上記Ｃ−末端アミド配列に対応するＣ−末端カルボン酸ペプチドの調製
実施例１０９に記載されたのと同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.)を用いていわゆるＷａｎｇ樹脂（ｐ−アルコキシベンジルアルコール樹脂（Bachem, ０．５４ミリモル／ｇ））上で、配列番号１００〜１６６、１７２〜１７７、１７９〜１８０および１８５〜１８８を有するアミド化に対応するＣ−末端カルボン酸ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を行って、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析により（Ｍ）が実験的に測定される。
【０４８７】
実施例１９９
配列番号１６７〜１７１、１７８および１８１〜１８４を有するペプチドについての上記Ｃ−末端アミド配列に対応するＣ−末端カルボン酸ペプチドの調製
実施例１０９に記載したと同様にして、Ｆｍｏｃ−保護アミノ酸（Applied Biosystems, Inc.)を用いて２−クロロトリチルクロライド樹脂（２００〜４００メッシュ）、２％ＤＶＢ（Novabiochem, ０．４〜１．０ミリモル／ｇ）上で、配列番号１６７〜１７１、１７８および１８１〜１８４を有するアミド化に対応するＣ−末端カルボン酸ペプチドを組み立て、樹脂から切断し、脱保護し、精製する。溶媒Ａ（水中０．１％ＴＦＡ）および溶媒Ｂ（ＡＣＮ中０．１％ＴＦＡ）を分析で用いる。次いで、凍結乾燥したペプチドの分析ＲＰ−ＨＰＬＣ（３０分にわたる溶媒Ａ中勾配３０％ないし６０％の溶媒Ｂ）を行って、生成物ペプチドの保持時間を測定する。電子スプレイ質量スペクトル分析により（Ｍ）を実験的に測定する。
【０４８８】
実施例Ａ〜Ｅ
用いた試薬
ＧＬＰ−１［７−３６］ＮＨ₂（ＧＬＰ−１）はBachem(Torrance, CA)から購入した。全ての他のペプチドは、ここに記載したような合成方法を用いて調製した。全ての化学物質は市販の最高グレードの物であった。ｃＡＭＰ ＳＰＡイムノアッセイはAmershamから購入した。放射性リガンドはNew England Nuclear (Boston, MA)から購入した。ＲＩＮｍ５ｆ細胞（American Type Tissue Collection, Rockville, MD)は、１０％の胎児ウシ血清と２ｍＭのＬ−グルタミンを含有するＤＭＥ／Ｆ１２培地中で増殖させた。細胞を３７℃および５％ＣＯ₂／９５％湿潤空気にて増殖させて、２ないし３日毎に培地を交換した。細胞を密集するまで増殖させ、次いで、収穫し、Polytronホモジナイザーを用いてホモジネートした。細胞ホモジネートは用いるまで−７０℃で凍結保存した。
【０４８９】
実施例Ａ−ＧＬＰ−１受容体結合実験
ＲＩＮｍ５ｆ膜からの［¹²⁵I］ＧＬＰ−１または［¹²⁵Ｉ］エキセンジン（９−３９）の変位を測定することによって受容体結合を評価した。アッセイ緩衝液は２０ｍｍ ＨＥＰＥＳ（ｐｈ７．４）中に５μｇ／ｍｌのベスタチン、１μｇ／ｍｌのホスホルアミドン、１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミン（画分Ｖ）、１ｍｇ／ｍｌのバシトラシンおよび１ｍＭのＭｇＣｌ₂を含有するものであった。結合を測定するために、３０μｇの膜蛋白質（Bradford蛋白質アッセイ)を２００μｌのアッセイ緩衝液に再懸濁させ、９６のウェルプレート（Nagle Nunc, Rochester, NY)中にて２３℃で６０ ｐＭ［¹²⁵Ｉ］ＧＬＰ−１または［¹²⁵Ｉ］エキセンジン（９−３９）および未標識ペプチドと共に１２０分間インキュベートした。Tomtec Mach IIプレートハーベスター(Wallac Inc., Gaithersburg, MD)を用い、ポリエチレンイミンー処理ＧＦ／Ｂガラス繊維フィルターを通じた、冷リン酸緩衝化生理食塩水（ｐＨ７．４）での迅速な濾過によって、インキュベーションを停止した。フィルターを乾燥し、シンチラントと組み合せ、Betaplate液体シンチラントカンタ(Wallac Inc.)で放射能を測定した。
【０４９０】
ペプチド試料は１０^-6Ｍないし１０^-12Ｍの濃度範囲にわたる６希釈にて二連点としてこのアッセイで実行して、応答曲線を作成した。試料の生物学的活性は、４−パラメーター論理方程式（Prizm, GraphPAD Software)を用いて、インターラクティブ曲線適合プログラムを用いて生データから計算したＩＣ₅₀値として表わす。
【０４９１】
実施例Ｂ−シクラーゼ活性化実験
アッセイ緩衝液は、５０ ｍＭの ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）中に１０μＭのＧＴＰ、０．７５ｍＭのＡＴＰ、２．５ｍＭのＭｇＣｌ₂、０．５ｍＭのホスホクレアチン，１２．５Ｕ／ｍｌのクレアチンキナーゼ、０．４ｍｇ／ｍｌアプロチニンを含有していた。膜およびペプチドを、９６ウェルフィルター底部プレート（Millipore Corp., Bedford, MA)中の１００ｍｌのアッセイ緩衝液中で組合わせた。３７℃での２０分間のインキュベーション後、Millipore真空マニフォールドを用い、新らしい９６ウェルプレートへの濾過による上清の導入によって該アッセイを停止した。上清ｃＡＭＰ内容物はＳＰＡイムノアッセイによって定量した。ペプチド試料は１０^-6Ｍないし１０^-12Ｍの濃度範囲にわたる７希釈での三連点として該アッセイで実行して、応答曲線を作成した。特定の試料の生物学的活性は上述のようにして計算したＥＣ₅₀値として表わした。
【０４９２】
実施例Ｃ−ｄｂ／ｄｂマウスにおける血中グルコースレベルの測定
少なくとも３月齢のＣ５７ＢＬＫＳ／Ｊ−ｍ−ｄｂマウスを実験で利用した。該マウスはJackson Laboratoryから入手し、用いる前に少なくとも１週間順応させた。午前６時に明かりをつける１２：１２の明：暗サイクルにて２２℃±１℃で、マウスを１０のグループで収容した。ベースライン血液試料を採取する前に、全ての動物には２時間食物を与えなかった。メトファンでの軽い麻酔の後、目穿刺を介してほぼ７０μｌの血液を各マウスから吸い取った。ベースライン血液試料を収集した後、血漿中グルコース濃度を測定するために、ビヒクル（１０．９％ ＮａＣｌ）、エキセンジン−４またはビヒクル中のテスト化合物（１μｇ）のいずれかの皮下注射を全ての動物に受けさせた。該注射から正確に１時間後、同一手法を用いて、血液試料を再度吸い取り、血漿中グルコース濃度を測定した。各動物につき、ベースライン値からの血漿中値における％変化を計算した。
【０４９３】
実施例Ｄ−ｄｂ／ｄｂマウスにおける血中グルコースレベルの用量応答測定
少なくとも３月齢のＣ５７ＢＬＫＳ／Ｊ−ｍ−ｄｂ／ｄｂマウスを実験で利用した。該マウスはJackson Laboratoryから入手し、用いる前に少なくとも１週間順応させた。午前６時に明かりをつける１２：１２の明：暗サイクルにて２２℃±１℃で、マウスを１０のグループで収容した。ベースライン血液試料を採取する前に、全ての動物には２時間食物を与えなかった。メトファンでの軽い麻酔の後、目穿刺を介してほぼ７０μｌの血液を各マウスから吸い取った。ベースライン血液試料を収集した後、血漿中グルコース濃度を測定するために、ビヒクル、エキセンジン−４または示唆された濃度のテスト化合物のいずれかの皮下注射を全ての動物に受けさせた。該注射から正確に１時間後、同一手法を用いて、血液試料を再度吸い取り、血漿中グルコース濃度を測定した。各動物につき、ベースライン値からの血漿中値における％変化を計算し、Graphpad Prizm^TMソフトウェアを用いて用量依存性関係を評価した。
【０４９４】
実施例Ｅ−胃の空化
ラットにおける胃の空化に対するエキセンジン−４および／またはエキセンジンアゴニスト化合物の影響を調べるために以下の実験を行ったし、また行うことができる。この実験はScarpignato等による Arch. Int.Pharmacodyn. Ther. 246:286-94, 1980の方法の変形例に従った。雄のHarlan Sprague Dawley (HSD)ラットを用いた。１２：１２時間の明：暗サイクル（実験は明サイクルの間に行った）で２２．７±０．８℃において全ての動物を収容し、自由に食事を与え水を飲ませた（Diet LM-485, Teklad, Madison, WI)。エキセンジン−４は標準的なペプチド合成方法に従って合成した。エキセンジン−４の調製は実施例１４に記載されている。後述する方法による胃の空化の測定はほぼ２０時間の絶食後に行って、胃が分光光度吸光度測定に干渉するであろうキームスを含有しないことを保証した。
【０４９５】
意識のあるラットに胃管栄養法により１．５％のメチルセルロース（M-0262, Sigma Cemichal Co, St Louis, MO)および０．０５％のフェノールレッドインジケータを含有する１．５ｍｌの無カロリー(acaloric)ゲルを摂取させた。胃管栄養法の２０分後、５％ハロタンを用いてラットを麻酔し、胃を暴露し、動脈鉗子を用いて幽門および下部食道括約筋で固定し、摘出し、一定の容量までのアルカリ性溶液中に開いた。胃の内容物を５６０ｎｍの波長における吸光度によって測定したアルカリ性溶液中のフェノールレッドの強度から導き出した。７匹のラットでの別々の実験において、胃および小腸を共に切開し、アルカリ性溶液中に開いた。胃管栄養法から２０分以内に上部胃腸管から回収することができたフェノールレッドの量は８９±４％であり；腸管腔表面に非可逆的に結合するように思われる色素は残りを占めるであろう。１００％未満の最大色素回収を説明するために、２０分後に残る胃の内容物のパーセントを、同実験における胃管栄養法直後に犠牲にした対照ラットから回収した胃の内容物の分率として表わした。パーセント残存胃内容物＝（２０分における吸光度）／（０mmにおける吸光度）×１００
【０４９６】
本明細書中に示し、記載したものに加えて本発明の種々の変形は、これまでの記載から当業者に明白であろうし、またそれらは特許請求の範囲内のものである。
【図面の簡単な記載】
【図１】 エキセンジン−３についてのアミノ酸配列を示す［配列番号１］。
【図２】 エキセンジン−４についてのアミノ酸配列を示す［配列番号２］。
【図３】 ＧＬＰ−１［７−３６］ＮＨ₂（ＧＬＰ−１）についてのアミノ酸配列を示す［配列番号３］。
【図４】 気管内投与後におけるラットでのエキセンジン−４の血漿中レベルを示す。
【図５Ａ】 ｄｂ／ｄｂマウスにおける気管内点滴注入後における血漿中エキセンジン−４濃度を示す。
【図５Ｂ】 ｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿中グルコースに対するエキセンジン−４の気管内投与の効果を示す。
【図６Ａ及び図６Ｂ】 ｏｂ／ｏｂマウスにおける血漿中グルコースに対するエキセンジン−４の気管内投与の効果を示す。
【図７Ａ】 ラットへの気管内注入後における血漿中エキセンジン−４の濃度を示す。
【図７Ｂ】 ラットへの気管内注入後におけるエキセンジン−４の生物学的利用性を示す。
【図８】 エアロゾル化エキセンジン−４に暴露されたラットにおける血漿中エキセンジン−４濃度を示す。
【図９Ａ】 ｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿中グルコースに対するエアロゾル化エキセンジン−４への１０分間の暴露の効果を示す。
【図９Ｂ】 エアロゾル化エキセンジン−４へのｄｂ／ｄｂマウスの１０分間の暴露後における血漿中エキセンジン−４の濃度を示す。
【図１０】 エキセンジン−４の鼻孔内投与後におけるラットでの血漿中エキセンジン−４濃度を示す。
【図１１】 ｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿中グルコースに対するエキセンジン−４の胃内投与の効果を示す。
【図１２Ａ】 ｄｂ／ｄｂマウスに対する舌下投与後における血漿中エキセンジン−４濃度を示す。
【図１２Ｂ】 ｄｂ／ｄｂマウスにおける血漿中グルコースに対するエキセンジン−４の舌下投与の効果を示す。
【図１２Ｃ】 ラットに対する舌下投与後における血漿中エキセンジン−４濃度を示す。
【図１２Ｄ】 舌下投与後におけるエキセンジン−４の生物学的利用性を示す。
【図１２Ｅ】 舌下エキセンジン−４のＣｍａｘを示す。
【図１３】 食物接種（ａ）に対する、体重の変化（ｂ）（初期体重４４１±３９ｇ）、またはヘモグロビンＡ_1cの変化（ｃ）（０週において７．６８±０．２０％）に対する（毎日２回腹腔内投与した）エキセンジン−４の効果を示す。用量応答（右側パネル）は６週間の処置の内の最後の２週間にわたる平均である。
【図１４】 特定用量のエキセンジン−４で６週間予め処置した（毎日２回腹腔内）ＺＤＦラットで行ったクランプ手法における血漿グルコース濃度（ａ）、正常血糖を維持するのに必要なグルコース注入速度（ｂ）および血漿中乳酸濃度（ｃ）を示す。グルコース注入速度および血漿中乳酸濃度についての用量応答は、クランプ手法の６０および１８０分の間に得られた平均値に基づく。
【図１５】 本発明で有用なある種のエキセンジンアゴニスト化合物についてのアミノ酸配列を示す（配列番号９−３９）。
【図１６および図１７】 実施例１２に示す臨床実験からのグルコース−降下結果を示す。

Claims (6)

1. 多数回投与に適した安定した非経口液体投与用の医薬製剤であって、
   ０．００５％〜０．４％（ｗ／ｖ）のエキセンジン−４と、
   ０．０２％〜０．５％（ｗ／ｖ）の酢酸塩緩衝液と、
   １％〜１０％（ｗ／ｖ）のマンニトールと、
   ０．００５％〜１．０％（ｗ／ｖ）のｍ−クレゾールと、
   を含有し、前記医薬製剤は４．０〜５．０のｐＨを有する医薬製剤。
2. エキセンジン−４は０．００５％〜０．０５％（ｗ／ｖ）の濃度で存在する請求項１に記載の製剤。
3. 安定した液体投与形態は、キログラム当たり０．１〜０．５μｇのエキセンジン−４の投与を達成する注射による投与に適している請求項１または２に記載の製剤。
4. 安定した液体投与形態は、１日当たり１μｇ〜１ｍｇのエキセンジン−４の投与を達成する注射による投与に適している請求項１から３のいずれか１つに記載の製剤。
5. 製剤は、投与毎に０．００５μｇ／ｋｇから投与毎に０．２μｇ／ｋｇまでのエキセンジン−４の投与を達成する注射による投与に適している請求項１から４のいずれか１つに記載の製剤。
6. 内因性または外因性インスリンに対する対象者の感受性を増加させるのに使用するための請求項１から５のいずれか１つに記載の製剤。

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