CN100356978C - 新型exendin激动剂制剂及其给药方法 - Google Patents

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Abstract

提供新型exendin和exendin激动剂化合物制剂及其剂量和给药方法。这些组合物和方法可用于治疗糖尿病和得益于降低血浆血糖或延迟和/或减慢胃排空或抑制摄取食物的病症。

Description

新型exendin激动剂制剂及其给药方法
相关申请
本申请要求以下申请的优先权：1999年1月14日申请的题为“新型exendin激动剂制剂及其给药方法”的美国临时申请60/116,380和1999年1月14日申请的题为“exendin及其激动剂用于调节甘油三酯水平以及治疗脂质紊乱的用途”的美国临时申请60/[仍未转让]，其内容通过引用结合到本文中。
发明领域
本发明涉及新型exendin和肽exendin激动剂制剂、剂量以及具有生物活性而且可通过注射和非注射途径例如呼吸道、口和胃肠道传递的制剂。这些制剂和剂量以及给药方法可用于治疗包括I型和II型糖尿病在内的糖尿病、治疗得益于降低血浆血糖水平的药物的病症和治疗得益于给予有效延迟和/或减慢胃排空或减少摄取食物的药物的病症。
背景技术
以下描述包含对理解本发明可能有用的信息。但既不是承认在此提供的任何信息是目前要求保护的本发明或有关申请的现有技术，也不是承认任何具体或隐含涉及的公开是现有技术。
Exendin是一种肽，存在于原产于Arizona和Northern Mexico的爬行动物Gila畸形体和Mexican Beaded Lizard蜥蜴的唾液分泌物中。Exendin-3[SEQ.ID.NO.1：His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu SerLys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys AsnGly Gly Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser-NH2]存在于Helodermahorridum(Mexican Beaded Lizard)的唾液分泌物中，而exendin-4[SEQ.ID.NO.2：His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met GluGlu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser SerGly Ala Pro Pro Pro Ser-NH2]存在于Heloderma suspectum(Gila畸形体)的唾液分泌物中(Eng，J.等， J.Biol.Chem.，265：20259-62，1990；Eng，J.等， J.Biol.Chem.，267：7402-05，1992)。Exendin-3的氨基酸序列见图1。Exendin-4的氨基酸序列见图2。最初认为exendin-4是毒液中的一种(潜在毒性)组分。目前认为exendin-4是无毒性，相反它产生于Gila畸形体唾液腺。
Exendin部分序列与胰高血糖素样肽家族的数个成员相似，与GLP-1[7-36]NH2[SEQ.ID.NO.3]的最高同源性为53％(Goke等， J. Biol.Chem.，268：19650-55，1993)。GLP-1[7-36]NH2也称为胰高血糖素原[78-107]，或者简称为“GLP-1”，本文最常使用后者。GLP-1具有促胰岛素作用，刺激胰腺β细胞分泌胰岛素。据报道，GLP-1还抑制胰腺α细胞分泌胰高血糖素(rsov等， Diabetes，42：658-61，1993；D’Alessio等， J.Clin.Invest.，97：133-38，1996)。GLP-1的氨基酸序列见图3。据报道GLP-1抑制胃排空(Willms B等， J Clin Endocrinol Metab 81(1)：327-32，1996；Wettergren A等， Dig Dis Sci38(4)：665-73，1993)和胃酸分泌(Schjoldager BT等， Dig Dis Sci 34(5)：703-8，1989；O’Halloran DJ等， J Endocrinol 126(1)：169-73，1990；Wettergren A等，Dig Dis Sci 38(4)：665-73，1993))。GLP-1[7-37]在其羧基末端具有一个额外甘氨酸残基，它也刺激人类胰岛素分泌(rsov等， Diabetes，42：658-61，1993)。据报道已从β细胞系克隆出跨膜G蛋白偶联腺苷酸环化酶的受体，据认为它至少部分与GLP-1的促胰岛素作用有关(Thorens，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：8641-45，1992)。
近年来，因为文献报道的GLP-1作用，例如增强刺激产生胰岛素(Byrne MM，Goke B.，用胰高血糖素样肽-1在人体进行研究的教训：所述胃肠激素在临床应用中的潜力，载于：Fehmann HC，Goke B.促胰岛素胃肠激素胰高血糖素样肽1，Basel，Switzerland：Karger，1997：219-33)、抑制胃排空(Wettergren A.等，截短的GLP-1(胰高血糖素原78-107-酰胺)抑制人体胃以及胰腺功能， Dig.Dis.Sci.1993年4月；38(4)：665-73)、抑制胰高血糖素分泌(Creutzfeldt WOC等，外源性胰高血糖素样肽I(7-36)酰胺对I型糖尿病患者的抑制胰高血糖素和降低空腹高血糖的作用， Diabetes Care 1996；19(6)：580-6)以及食欲控制作用(Turton MD等，胰高血糖素样肽-1在进食的中枢调节中的作用，Nature 1996年1月；379(6560)：69-72)，使GLP-1成为重要研究的焦点。还报道GLP-1可恢复老年大鼠胰岛细胞对葡萄糖的敏感性，使其葡萄糖耐受性恢复到年轻大鼠的水平(Egan JM等，胰高血糖素样肽-1恢复老年大鼠的急性期胰岛素释放，Diabetologia 1997年6月，40(增刊1)：A130)。GLP-1的体内生物作用时间短是其特征之一，这妨碍它开发为治疗药物。
药理学研究证实了exendin-4和GLP-1之间的相似与不同。据报道exendin-4作用于分泌胰岛素的βTC1细胞上的GLP-1受体、豚鼠胰腺分散的腺泡细胞和胃壁细胞。还报道所述肽刺激促生长素抑制素的释放和抑制立体胃中的胃泌素释放(Goke等， J.Biol.Chem.268：19650-55，1993；Schepp等， Eur.J.Pharmacol.，69：183-91，1994；Eissele等， Life Sci.，55：629-34，1994)。报道发现exendin-3和exendin-4刺激胰腺腺泡细胞产生cAMP和释放淀粉酶(Malhotra，R.等， Regulatory Peptides，41：149-56，1992；Raufman等， J.Biol.Chem.267：21432-37，1992；Singh等， Regul.Pept.53：47-59，1994)。Exendin-4的作用时间较GLP-1明显延长。例如在一个实验中，报道exendin-4降低糖尿病小鼠葡萄糖的作用持续数小时，而且根据剂量最长长达24小时(Eng J.，exendin-4对db/db小鼠高血糖的作用延长， Diabetes1996年5月；45(增刊2)：152A(摘要554))。根据exendin-3和exendin-4的促胰岛素活性，提出将其用于治疗糖尿病以及防止高血糖(Eng，美国专利号5,424,286)。
据报道，C末端截短的exendin肽例如exendin-4[9-39]、羧酰胺分子和3-39至9-39的片段是GLP-1的有效选择性拮抗剂(Goke等， J. Biol.Chem.，268：19650-55，1993；Raufman，J.P.等， J.Biol.Chem.266：2897-902，1991；Schepp，W.等， Eur.J.Pharm.269：183-91，1994；Montrose-Rafizadeh等， Diabetes，45(增刊2)：152A，1996)。据认为，exendin-4[9-39]在体内阻断内源性GLP-1，导致胰岛素分泌减少。Wang等， J.Clin.Invest.，95：417-21，1995；D’Alessio等， J.Clin. Invest.，97：133-38，1996)。文献报道，从大鼠胰岛细胞克隆出了与GLP-1在大鼠促胰岛素作用明显有关的受体(Thorens，B.， Proc.Natl.Acad.Sci. USA 89：8641-8645，1992)。人们认为exendin类和exendin-4[9-39]结合克隆的大鼠GLP-1受体(大鼠胰腺β细胞GLP-1受体(Fehmann HC等，Peptides 15(3)：453-6，1994)和人GLP-1受体(Thorens B等， Diabetes42(11)：1678-82，1993))。文献报道，在用克隆的GLP-1受体转染的细胞中，exendin-4为激动剂，即它增加cAMP，而exendin[9-39]鉴定为拮抗剂，即它阻止exendin-4和GLP-1的刺激作用。同上。
还报道exendin-4[9-39]起作全长exendin的拮抗剂作用，抑制exendin-3和exendin-4对胰腺腺泡细胞的刺激作用(Raufman等， J.Biol. Chem.266：2897-902，1991；Raufman等， J.Biol.Chem.266：21432-37，1992)。还报道exendin[9-39]抑制exendin-4对血浆胰岛素水平的刺激作用，以及抑制exendin-4和GLP-1的刺激促生长素抑制素释放和抑制胃泌素释放的活性(Kolligs，F.等， Diabetes，44：16-19，1995；Eissele等，Life Sciences，55：629-34，1994)。Exendin[9-39]已经用于研究中枢GLP-1在控制摄取食物中的生理相关性(Turton，M.D.等， Nature 379：69-72，1996)。脑室内注射给予的GLP-1抑制大鼠摄取食物。据报道，脑室内注射给予的GLP-1产生的这种饱感作用受到脑室内注射的exendin[9-39]的抑制(Turton， 同上)。但是，文献报道当外周注射给予GLP-1时，不能抑制小鼠摄取食物(Turton，M.D.， Nature379：69-72，1996；Bhavsar，S.P.， Soc.Neurosci.Abstr.21：460(188.8)，1995)。
Chen和Drucker从Gila畸形体克隆出了exendin基因，他们报道了exendin是否为哺乳动物GLP-1的种同系物的研究结果(J.Biol.Chem.272(7)：4108-15(1997))。观测结果为：Gila畸形体也具有不同胰高血糖素基因(由加工GLP-1而得)，该胰高血糖素基因与哺乳动物胰高血糖素基因更相似(相对于exendin)，说明exendin类不是GLP-1的种同系物。
发现用来延迟胃排空的药物在医学上可用作胃肠道放射学检查的诊断性辅助手段。例如胰高血糖素是一种Langerhans胰岛α细胞产生的多肽激素。它是通过激活肝脏糖元分解代谢葡萄糖的高血糖药物。它能够在较低程度上刺激分泌胰岛素。例如当不能静脉内给予葡萄糖时，胰高血糖素可用于治疗胰岛素引起的低血糖。然而，因为胰高血糖素降低胃肠道动力，所以也可用作胃肠道放射学检查的诊断性辅助手段。在数个研究中还使用胰高血糖素治疗与痉挛有关的各种疼痛性胃肠道疾病。Daniel等(Br.Med.J.，3：720，1974)报道，与采用镇痛剂或抗痉挛剂治疗相比，采用胰高血糖素治疗急性憩室炎患者的症状缓解更快。Glauser等( J.Am.Coll.Emergency Physns，8：228，1979)的综述描述在胰高血糖素治疗后缓解急性食道食物梗阻。另一文献报道，与用安慰剂治疗的22名患者比较，胰高血糖素明显缓解21名胆道疾病患者的疼痛和触疼(M.J.Stower等， Br.J.Surg.，69：591-2，1982)。
1995年3月16日公开的共同拥有的国际申请号PCT/US94/10225描述了采用糊精激动剂调节胃肠道动力的方法。
1997年8月8日申请的题为“调节胃肠道动力的方法”的共同拥有的美国专利申请序号08/908,867描述了应用exendin激动剂调节胃肠道动力的方法，所述申请为1996年8月8日申请的美国专利申请序号08/694,954的部分连续申请。
1998年1月7日申请的题为“应用Exendin及其激动剂减少摄取食物”的共同拥有的美国专利申请序号09/003,869描述了应用exendin激动剂减少摄取食物的方法，该申请要求以下申请的权益：1997年1月7日申请的美国临时申请号60/034,905、1997年8月7日申请的60/055,404、1997年11月14日申请的60/065,442和1997年11月14日申请的60/066,029。
还报道，exendin具有促胰岛素作用和利尿作用，如1999年2月5日申请的共同拥有的国际专利申请号PCT/US99/02554所述，它要求1998年2月13日申请的临时申请号60/075,122的权益。
1998年8月6日申请的题为“新型exendin激动剂化合物”的共同拥有的PCT申请序号PCT/US98/16387描述了新型exendin激动剂化合物，该申请要求1997年8月8日申请的美国专利申请序号60/055,404的权益。
1998年11月13日申请的题为“新型exendin激动剂化合物”的共同拥有的PCT专利申请序号PCT/US98/24210描述了其它新型exendin激动剂，该申请要求1997年11月14日申请的美国临时申请号60/065,442的权益。
1998年11月13日申请的题为“新型exendin激动剂化合物”的共同拥有的PCT专利申请序号PCT/US98/24273描述了其它新型exendin激动剂，该申请要求1997年11月14日申请的美国临时申请号60/066,029的权益。
自从出现基因工程生产的第一批治疗性活性肽类以来，就越来越需要通过胃肠途径传递这些药物。但是，这受阻于肽和蛋白的特有性质，使其不能象目前广泛使用的小分子药物一样经胃肠给药。这些性质包括分子大小问题、易被蛋白酶水解、血浆清除率快、特有的剂量效应曲线、免疫原性、生物相容性以及肽类和蛋白易于发生聚集、吸附和变性。
人们一般认为，通过皮下或静脉内注射或静脉内输注途径以外的途径给予肽类药物通常是不可行的，因为例如口服给药时，在胃肠道内既会发生酶降解同时又不会吸收。因此，仍然需要开发不方便、有时是痛苦的注射给予肽类药物例如上述的exendin类和exendin激动剂类似物肽的替代方法。除了注射给予exendin类和exendin激动剂的有效制剂和剂量之外，本文描述并要求保护解决了这些问题而且有效地非注射传递治疗有效量的exendin和exendin激动剂的制剂、剂量制剂(dosage formulation)和方法。
上述论文、专利和专利申请以及其中提及或引用的所有其它文献的内容均通过引用整体结合到本文中。申请人保留任何这样的论文、专利、专利申请或其中提及或引用的其它文献中的任何以及所有材料和信息真正结合到该申请中的权利。
发明概述
按照一个方面，本发明提供具有优良特性的新型exendin和exendin激动剂化合物的制剂和剂量，所述优良特性包括有效减慢胃排空和降低血浆葡萄糖水平。因此，本发明的该方面包括exendin和exendin激动剂的制剂，该制剂包含与缓冲剂(优选醋酸盐缓冲剂)、等渗调节剂(优选山梨醇)和任选包含防腐剂(优选间甲酚)混合在一起的exendin或exendin激动剂，所述制剂的pH约3.0-约7.0(优选约4.0-约5.0)。“exendin激动剂”是指模拟exendin的一种或多种作用的化合物，例如通过与exendin产生其中一种或多种作用的受体结合，或者激活exendin由其产生其中一种或多种作用的信号级联。Exendin激动剂包括exendin激动剂肽类，例如具有exendin的一种或多种需要活性的exendin-3和exendin-4的类似物和衍生物。本文鉴定或引用了各种exendin激动剂类似物。
本发明范围的其它exendin和exendin激动剂制剂包括胃肠外液体剂型、冻干单位剂型、冻干多用剂型、和这些剂型的改进剂型，它们可用于经口、鼻、颊、舌下、气管内和肺传递exendin和exendin激动剂。
所以，本发明包括胃肠外液体剂型，它于液体系统中分别包含约0.005-约0.4％，更具体为约0.005-约0.02％、或约0.005-约0.05％(w/v)的所述活性成分，同时它还包含约0.02-0.5％(w/v)醋酸盐、磷酸盐或谷氨酸盐或单独的或组合的类似缓冲剂，使最终组合物的pH约3.0-7.0，更具体为约4.0-约6.0、或约4.0-5.0，以及它还包括约1.0-10％(w/v)碳水化合物或多元醇等渗调节剂(优选山梨醇)或者最高可含约0.9％盐水或者含有以上二者的混合物，使得水连续相为等张或等渗溶液。如果所述制剂用多用容器包装，则还包含约0.005-1.0％(w/v)选自以下的抗微生物防腐剂：间甲酚、苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯以及酚。加入足够量注射用水获得需要浓度的溶液。如果需要的话，还可以含有氯化钠以及其它赋形剂。但是，这类赋形剂必须保持所述活性成分的整体稳定性。可用的多元醇包括诸如山梨醇、甘露醇、甘油和聚乙二醇(PEG)的化合物。所述多元醇和碳水化合物将有效稳定蛋白质，以抵抗温度升高或冻融或冻干工艺引起的蛋白质变性。合适的碳水化合物包括半乳糖、阿拉伯糖、乳糖或任何其它碳水化合物，如果所述碳水化合物用于该用途，它们对糖尿病患者没有副作用，即所述碳水化合物不会代谢形成高浓度的血糖。本发明的肽类优选与诸如山梨醇、甘露醇、肌醇、甘油、木糖醇和聚丙二醇/乙二醇共聚物的多元醇以及分子量为200、400、1450、3350、4000、6000和8000的各种聚乙二醇(PEG)。甘露醇为优选的多元醇。
此外，本发明的冻干单位剂量制剂稳定，而不需要是等张和/或等渗的。它们包含活性成分、有助于结块的增量剂(它们在复制时还可起作张力剂和/或等渗调节剂的作用，有助于稳定所述活性成分和/或缓解注射疼痛)，而且还可以包含有益于结块特性和/或有助于复制的表面活性剂。本发明的冻干单位剂量制剂包含约0.005-约0.4％、更具体为约0.005-约0.02％或0.005-0.05％(w/v)的所述活性成分。如果预计在复制的活性成分稳定期内可用完容器中的冻干内容物，所述制剂不必包含缓冲剂和/或用缓冲剂复制所述冻干物。如果使用缓冲剂，它可包含于所述冻干物或复制溶剂中。所以，所述制剂和/或复制溶剂单计或总计含有约0.02-0.5％(w/v)单独的或组合的醋酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐或谷氨酸盐缓冲剂，使得最终组合物的pH约为3.0-7.0，更具体为约4.0-约6.0或者约4.0-5.0。所述增量剂包括约1.0-10％(w/v)碳水化合物或多元醇等渗调节剂(如上所述)或0.9％以内的盐水或二者的组合物，使复制的水相为等张或等渗溶液。可包含表面活性剂，优选约0.1-约1.0％(w/v)吐温80或其它非离子去垢剂。如上所述，需要的话，冻干的单位剂量制剂还可含有氯化钠以及其它赋形剂。冻干前的本发明液体制剂在冻干前基本上为等张和/或等渗或者在复制后能够形成等张和/或等渗溶液。
本发明还包括冻干和液体多剂量制剂。与上述胃肠外液体和冻干单位剂量制剂一样，冻干的多单位剂型应该含有有助于形成结块的增量剂。可包含有助于患者多次使用的防腐剂。这些剂型分别包含约0.005-约0.4％、更具体为约0.005-约0.02％或约0.005-0.05％(w/v)所述活性成分。如果使用缓冲剂，它可包含于所述冻干物或复制溶剂中，而所述制剂和/或复制溶剂单计或总计含有约0.02-0.5％(w/v)单独的或组合的醋酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐或谷氨酸盐缓冲剂，使得最终组合物的pH为约3.0-7.0，更具体为约4.0-约6.0或者约4.0-5.0。所述增量剂包括约1.0-10％(w/v)碳水化合物或多元醇等渗调节剂(优选甘露醇)或0.9％以内的盐水，或二者的组合物，使复制的水相为等张或等渗溶液。可包含表面活性剂，优选约0.1-约1.0(w/v)吐温80或其它非离子去垢剂。如果所述制剂用多用容器包装，则还包含约0.005-1.0％(w/v)选自以下的抗微生物防腐剂：间甲酚、苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯以及酚(优选间甲酚)。需要的话，还可含有氯化钠以及其它赋形剂。本发明液体制剂在冻干前基本上为等张和/或等渗或者在复制后能够形成等张和/或等渗溶液。
本发明还包括用于经口、颊、舌下、气管内、鼻和肺传递的固体剂型。最有利于肺和/或气管内剂型的制剂为防腐或非防腐液体制剂和/或干粉制剂。该防腐或非防腐液体制剂与防腐或非防腐胃肠外液体制剂的上述制剂基本相同。所述溶液的pH约3.0-7.0，更具体为约4.0-6.0或约4.0-5.0，最优选pH高于或等于约5.0，以便减小气管收缩的可能性。干粉制剂可含有增量剂和/或盐类，有助于形成的一定大小的颗粒和合适的颗粒大小分布。表面活性剂和/或盐类还有助于颗粒形态学特性和/或促进组织摄取所述活性成分。干粉剂型的活性成分含量范围分别为1％-100％(w/w)。不必含有有助于形成一定颗粒大小和/或颗粒大小分布的增量剂和/或盐类。所述增量剂和/或盐类可包含约0-99％(w/w)碳水化合物或多元醇或者约0-99％盐或者二者的组合物，使得颗粒大小为优选的颗粒大小和分布。可包含表面活性剂，优选约0.1-约1.0％(w/w)吐温80或其它非离子去垢剂。如果需要的话，还可以存在氯化钠和其它赋形剂。但是，这样的赋形剂保持所述活性成分的整体稳定性以及有助于合适水平的水化作用。
还属于本发明范畴的是在含有或不含防腐剂的30mM醋酸盐缓冲液(pH约4.5)和甘露醇中含有50mg/ml以内的exendin或exendin激动剂的制剂。
此外，属于本发明范畴的还有当注射给药或经其它途径给药时，exendin和exendin激动剂的优选剂量。因此，提供相当效力的exendin和exendin激动剂的制剂，以便注射给予约0.1-约0.5μg/Kg，每天以1-3次给药。通常例如对于体重约70公斤(1型糖尿病的平均体重)至约90公斤(2型糖尿病的平均体重)的糖尿病患者而言，每天单次或多次总计给予约10-约120μg。如果分次给药，所述剂量优选以每天2-3次给予，更优选每天2次。
在一个优选注射方法中，胃肠外、更优选注射(例如外周注射)给予exendin或exendin激动剂。优选每天给予约1μg-30μg至约1mgexendin或exendin激动剂。更优选每天给予约1-30μg至约500μg、或者约1-30μg至约50μg exendin或exendin激动剂。更优选根据患者体重和所给予化合物的效力，每天给予约3μg-约50μg exendin或exendin激动剂。大致具有exendin-4效力的化合物的基于患者体重的优选剂量范围为约0.005μg/kg/剂至约0.2μg/kg/剂。更优选大致具有exendin-4效力的化合物的基于患者体重的剂量范围为约0.02μg/kg/剂至约0.1μg/kg/剂。最优选大致具有exendin-4效力的化合物的基于患者体重的剂量范围为约0.05μg/kg/剂至约0.1μg/kg/剂。这些剂量每天以1-4次给予、优选每天1-2次。如果连续输注给药，通常exendin或exendin激动剂的剂量更低。如果通过非注射方法给药，例如口服、颊、舌下、鼻、肺、或皮肤贴片局部给药，exendin或exendin激动剂的剂量通常更高。
按照本发明的口服剂量包括约50至约100倍的所述活性成分，例如以单剂或多剂给药的剂量为每天约500至约12,000μg、优选每天约500至约5,000μg。按照本发明的肺部给药剂量包括约10至约100倍的所述活性成分，例如以单剂或多剂给药的剂量为每天约100至约12,000μg、优选每天约500-1000μg。按照本发明的鼻、颊和舌下给药剂量也包括约10至约100倍的所述活性成分，例如以单剂或多剂给药的剂量为每天约100至约12,000μg。
经鼻给药的优选剂量为每天约10-1000至约1200-12,000μg，经颊给药的优选剂量为每天约10-1000至约1200-12,000μg，舌下给药的优选剂量为每天约10-1000至约1200-8,000μg。最好是舌下剂量低于颊剂量。根据上述剂量和本文其它地方所述剂量，适当增加或降低效力低于或高于exendin-4的exendin激动剂的给药剂量。
此外，属于本发明范畴的还有通过皮下注射或静脉输注的替代给药途径(包括例如经鼻给药、经肺给药、口服给药、气管内给药、舌下给药和经颊给药)给予所述新型exendin激动剂化合物制剂的方法和剂量。
按照另一方面，本发明提供以下新型exendin激动剂化合物制剂和剂量及其给药方法，它们可用于治疗糖尿病(包括1型和2型糖尿病)、肥胖症和其它得益于减慢胃排空、降低血浆葡萄糖水平和减少摄取食物的给药疗法的病症。
本发明还包括通过给予exendin或exendin激动剂治疗患者的方法，以便增强胰岛素敏感性。可使用本文所述的exendin和exendin激动剂制剂和剂量增强患者对内源性或外源性胰岛素的敏感性。
一个优选方面，本发明方法中使用的exendin或exendin激动剂为exendin-3[SEQ.ID.NO.1]。另一个优选方面，所述exendin是exendin-4[SEQ.ID.NO.2]。其它优选exendin激动剂包括exendin-4(1-30)[SEQ.ID.NO.6：His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met GluGlu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly]、exendin-4(1-30)酰胺[SEQ.ID.NO.7：His Gly Glu Gly Thr Phe Thr SerAsp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu TrpLeu Lys Asn Gly Gly-NH2]、exendin-4(1-28)酰胺[SEQ.ID.NO.40：HisGly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu Glu AlaVal Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2]、14Leu、25Phe exendin-4[SEQ.ID.NO.9：His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys GlnLeu Glu Glu GLu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly GlyPro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser-NH2]、14Leu、25Phe exendin-4(1-28)酰胺[SEQ.ID.NO.41：His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser LysGln Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2]和14Leu、22Ala、25Phe exendin-4(1-28)酰胺[SEQ.ID.NO.8：His GlyGlu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu GLu Glu Ala ValArg Leu Ala Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2]。
本发明的其它特征和优势由以下描述的其优选实施方案和权利要求书显而易见。
按照本发明以及作为本文使用的以下术语，定义为具有以下涵义，除非另有明确说明。“药学上可接受的盐”包括这类化合物和有机酸或无机酸化合产生的本发明化合物的盐。实际上使用盐形式等于使用碱形式。本发明的化合物既可以游离碱又可以盐形式使用，两种形式均属于本发明范畴。
附图简述
图1图示exendin-3的氨基酸序列[SEQ.ID.NO.1]。
图2图示exendin-4的氨基酸序列[SEQ.ID.NO.2]。
图3图示GLP-1[7-36]NH2(GLP-1)的氨基酸序列[SEQ.ID.NO.3]。
图4图示气管内给予exendin-4后大鼠的血浆水平。
图5a图示气管内滴注给予后db/db小鼠的血浆exendin-4浓度。
图5b图示气管内给予exendin-4对db/db小鼠血浆葡萄糖的影响。
图6a和6b图示气管内给予exendin-4对ob/ob小鼠血浆葡萄糖的影响。
图7a图示气管内滴注后大鼠血浆exendin-4浓度。
图7b图示气管内滴注后大鼠的exendin-4生物利用度。
图8图示暴露于气溶胶exendin-4大鼠的血浆exendin-4浓度。
图9a图示暴露于气溶胶exendin-4 10分钟对db/db小鼠血浆葡萄糖的影响。
图9b图示db/db小鼠暴露于气溶胶exendin-4 10分钟后的血浆exendin-4浓度。
图10图示鼻内给予exendin-4后大鼠的血浆exendin-4浓度。
图11图示胃内给予exendin-4对db/db小鼠血浆葡萄糖的影响。
图12a图示舌下给予db/db小鼠后血浆exendin-4浓度。
图12b图示舌下给予exendin-4对db/db小鼠血浆葡萄糖的影响。
图12c图示舌下给予大鼠后的血浆exendin-4浓度。
图12d图示舌下给予后的exendin-4生物利用度。
图12e图示舌下给予exendin-4的Cmax。
图13图示exendin-4(每天腹膜内注射给予2次)对摄取食物(a)、体重变化(b)(最初体重为441±39g)或者血红蛋白A1c变化(c)(0周为7.68±0.20％)的影响。剂量-效应(右侧组)为6周治疗中的最后2周的平均值。
图14图示对ZDF大鼠进行钳法(clamp procedure)的血浆葡萄糖浓度(a)、维持血糖正常需要的葡萄糖输注率(b)和血浆乳酸盐浓度(c)，大鼠预先用特定剂量的exendin-4治疗(每天腹膜注射2次)6周。葡萄糖输注率和血浆乳酸盐浓度的剂量-效应基于钳法60-180分钟之间获得的平均值。
图15图示用于本发明的某些exendin激动剂化合物的氨基酸序列[SEQ.ID.NO.9-39]。
图16和17图示实施例12描述的降低葡萄糖临床研究的结果。
发明详述
Exendin和exendin激动剂
Exendin-3和exendin-4是从Gila畸形体和Mexican Beaded Lizard唾液分泌物分离获得的天然肽类。用exendin-4进行动物试验表明，它能够持续降低血糖数小时。Exendin-4为39个氨基酸的多肽，如本文所述可用固相合成法合成制得，而且已经证实这种合成物质与天然exendin-4相同。
研究了exendin-4的各方面非临床药理学。在大脑中，exendin-4主要结合到后脑的最后区和孤束核区以及前脑的穹隆下器官(subfomical organ)。在大鼠和小鼠的大脑和肾脏观测到exendin-4的结合。不知道exendin-4在肾脏中的结合部位。
许多其它试验比较了exendin-4和GLP-1的生物学作用，证实了exendin-4更有利的特性谱。对db/db(糖尿病)和ob/ob(肥胖型糖尿病)小鼠单剂皮下给予exendin-4，降低血浆葡萄糖高达40％。在DiabeticFatty Zucker(ZDF)大鼠，用exendin-4治疗5周降低HbA1c(糖基化血红蛋白测量值，用以评价血浆葡萄糖水平)高达41％。治疗肥胖型ZDF大鼠5周后胰岛素敏感性也提高76％。在葡萄糖耐受不良的灵长类动物，也观测到剂量依赖性血浆葡萄糖降低。此外参见实施例6，它描述了一个试验结果，说明exendin在增强葡萄糖刺激的胰岛素释放方面比GLP-1更强和/或更有效。而且实施例8描述了一项研究，证明exendin-4在体内降低葡萄糖的能力比GLP-1强3430倍。
用啮齿动物也观测到exendin-4的促胰岛素作用，改善非禁食的Harlan Sprague Dawley(HSD)大鼠对葡萄糖的胰岛素效应100％以上，而改善非禁食的db/db小鼠对葡萄糖的胰岛素效应高达约10倍。较高的治疗前血浆葡萄糖浓度与降低葡萄糖的作用更强有关。因此，对exendin-4观测到的降低葡萄糖作用似乎是葡萄糖依赖性的，而且如果动物的血糖已经是正常的，则其降低作用最小。Exendin-4治疗还与血糖指标和胰岛素敏感性改善有关，如实施例9和13所述。
Exendin-4呈剂量依赖性降低HSD大鼠的胃排空，而且该作用比GLP-1强约90倍。还证实exendin-4在外周给予后降低NIH/Sw(Swiss)小鼠的摄取食物量，其作用比GLP-1更强至少1000倍。Exendin-4降低高胰岛素、高血糖钳状态的麻醉ZDF大鼠的血浆胰高血糖素浓度约40％，但是不会影响正常大鼠正常血糖状态的血浆胰高血糖素浓度。参见实施例4。证实exendin-4剂量依赖性降低肥胖型ZDF大鼠的体重，同时在瘦型ZDF大鼠所观测到体重降低似乎是暂时性的。
由于exendin-4具有增强和恢复胰岛素分泌以及抑制胰高血糖素分泌的作用，所以它可用于保持分泌胰岛素能力的2型糖尿病患者。其抑制摄取食物、胃排空、调节营养吸收的其它机制以及抑制胰高血糖素的作用还支持exendin-4用于治疗例如肥胖症、1型糖尿病和胰岛素分泌减少的2型糖尿病患者。
用小鼠、大鼠和猴以单剂量研究，用大鼠和猴以重复剂量(最高为28个连续日剂量)研究以及突变和染色体畸变的体外实验研究了exendin-4的毒理学。迄今，没有发生死亡，没有观测到治疗相关性血液学、临床化学变化或者肉眼或显微镜组织学变化。证实exendin-4无致突变作用，而且在所测试的浓度(最高为5000μg/mL)不会引起染色体畸变。
为了有利于研究exendin-4的非临床药代动力学和机理，建立了许多免疫测定。在最初的药代动力学研究中使用了敏感性有限(约100pM)的放射免疫测定。然后用更低定量限为15pM的验证exendin-4的两点IRMA测定。参见实施例5和7。采用放射免疫测定发现皮下给予的exendin-4的生物利用度约50-80％。这类似于腹膜内给予后观测到的结果(48-60％)。在30-43分钟(Tmax)之间出现血浆峰浓度(Cmax)。Cmax和AUC值均只与剂量有关。皮下给予exendin-4的表观终末半衰期约90-110分钟。这明显比静脉给药后观测到的14-41分钟长。采用IRMA测定获得类似的结果。比较exendin-4与GLP-1的降解研究表明，exendin-4相对耐受降解。
研究评价可能涉及exendin抗糖尿病活性、其代谢稳定性和改善其物理特性的结构活性关系(SAR)，特别是因为它涉及肽稳定性和替代传递系统的可能性(amenability)，使得发现了exendin激动剂肽化合物。Exendin激动剂包括exendin肽类似物，其中一个或多个天然氨基酸被去除或被另一个氨基酸取代。优选的exendin激动剂为exendin-4激动剂类似物。特别优选的exendin激动剂为描述于1998年8月6日申请的题为“新型exendin激动剂化合物”的国际申请号PCT/US98/16387中的exendin激动剂，所述申请要求1997年8月8日申请的美国临时申请号60/055,404的权益，包括下式(I)[SEQ.ID.NO.3]的化合物：Xaa1 Xaa2 Xaa3 Gly Thr Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8Ser Lys Gln Xaa9 Glu Glu Glu Ala Val Arg LeuXaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Leu Lys Asn Gly Gly Xaa14Ser Ser Gly Ala Xaa15 Xaa16 Xaa17 Xaa18-Z其中Xaa1为His、Arg或Tyr；Xaa2为Ser、Gly、Ala或Thr；Xaa3为Asp或Glu；Xaa4为Phe、Tyr或萘基丙氨酸；Xaa5为Thr或Ser；Xaa6为Ser或Thr；Xaa7为Asp或Glu；Xaa8为Leu、Ile、Val、苯基甘氨酸或Met；Xaa9为Leu、Ile、苯基甘氨酸、Val或Met；Xaa10为Phe、Tyr或萘基丙氨酸；Xaa11为Ile、Val、Leu、苯基甘氨酸、叔丁基甘氨酸或Met；Xaa12为Glu或Asp；Xaa13为Trp、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；Xaa14、Xaa15、Xaa16和Xaa17独立为Pro、高脯氨酸(homoproline)、3Hyp、4Hyp、硫脯氨酸、N-烷基甘氨酸、N-烷基苯基甘氨酸或N-烷基丙氨酸；Xaa18为Ser、Thr或Tyr；而Z为-OH或-NH2；前提是所述化合物不是exendin-3或exendin-4。
N-烷基甘氨酸、N-烷基苯基甘氨酸和N-烷基丙氨酸的优选N-烷基包括优选1-约6个碳原子、更优选1-4个碳原子的低级烷基。合适的化合物包括具有SEQ.ID.NO.9-39的氨基酸序列的图1所示的化合物。
优选的exendin激动剂化合物包括其中Xaa1为His或Tyr的化合物。更优选Xaa1为His。
优选其中Xaa2为Gly的化合物。
优选其中Xaa9为Leu、苯基甘氨酸或Met的化合物。
优选的化合物包括其中Xaa13为Trp或Phe的化合物。
还优选其中Xaa4为Phe或萘基丙氨酸；Xaa11为Ile或Val，而Xaa14、Xaa15、Xaa16和Xaa17独立选自Pro、高脯氨酸、硫脯氨酸或N-烷基丙氨酸的化合物。N-烷基丙氨酸最好具有1-约6个碳原子的N-烷基。
按照一个特别优选的方面，Xaa15、Xaa16和Xaa17为相同的氨基酸残基。
优选其中Xaa18为Ser或Tyr、更优选Ser的化合物。
优选Z为-NH2。
按照一个方面，优选这样的式(I)化合物：其中Xaa1为His或Tyr、更优选His；Xaa2为Gly；Xaa4为Phe或萘基丙氨酸；Xaa9为Leu、苯基甘氨酸或Met；Xaa10为Phe或萘基丙氨酸；Xaa11为Ile或Val；Xaa14、Xaa15、Xaa16和Xaa17独立选自Pro、高脯氨酸、硫脯氨酸或N-甲基丙氨酸；而Xaa18为Ser或Tyr、更优选Ser。更优选Z为-NH2。
按照一个特别优选的方面，特别优选的化合物包括这样的式(I)化合物，其中：Xaa1为His或Arg；Xaa2为Gly；Xaa3为Asp或Glu；Xaa4为Phe或萘基丙氨酸；Xaa5为Thr或Ser；Xaa6为Ser或Thr；Xaa7为Asp或Glu；Xaa8为Leu或苯基甘氨酸；Xaa9为Leu或苯基甘氨酸；Xaa10为Phe或萘基丙氨酸；Xaa11为Ile、Val或叔丁基甘氨酸；Xaa12为Glu或Asp；Xaa13为Trp或Phe；Xaa14、Xaa15、Xaa16和Xaa17独立为Pro、高脯氨酸、硫脯氨酸或N-甲基丙氨酸；Xaa18为Ser或Tyr；Z为-OH或NH2；前提是所述化合物不具有SEQ.ID.NO.1或2的分子式。更优选Z为-NH2。特别优选的化合物包括具有SEQ.ID.NO.9、10、21、22、23、26、28、34、35和39的氨基酸序列的化合物。
按照一个特别优选的方面，提供以下这样的化合物：其中Xaa9为Leu、Ile、Val或苯基甘氨酸，更优选Leu或苯基甘氨酸，而Xaa13为Phe、Tyr或萘基丙氨酸，更优选Phe或萘基丙氨酸。这些化合物将具有有利的作用持续时间，而且在体外和体内以及合成所述化合物期间均不容易氧化降解。
Exendin激动剂化合物还包括描述于1998年11月13日申请的题为“新型exendin激动剂化合物”的国际申请号PCT/US98/24210中的化合物，所述申请要求1997年11月14日申请的美国临时申请号60/065,442的权益，包括下式(II)[SEQ.ID.NO.4]的化合物：Xaa1 Xaa2 Xaa3 Gly Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28-Z1；其中
Xaa1为His、Arg或Tyr；
Xaa2为Ser、Gly、Ala或Thr；
Xaa3为Asp或Glu；
Xaa5为Ala或Thr；
Xaa6为Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa7为Thr或Ser；
Xaa8为Ala、Ser或Thr；
Xaa9为Asp或Glu；
Xaa10为Ala、Leu、Ile、Val、苯基甘氨酸或Met；
Xaa11为Ala或Ser；
Xaa12为Ala或Lys；
Xaa13为Ala或Gln；
Xaa14为Ala、Leu、Ile、苯基甘氨酸、Val或Met；
Xaa15为Ala或Glu；
Xaa16为Ala或Glu；
Xaa17为Ala或Glu；
Xaa19为Ala或Val；
Xaa20为Ala或Arg；
Xaa21为Ala或Leu；
Xaa22为Ala、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa23为Ile、Val、Leu、苯基甘氨酸、叔丁基甘氨酸或Met；
Xaa24为Ala、Glu或Asp；
Xaa25为Ala、Trp、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa26为Ala或Leu；
Xaa27为Ala或Lys；
Xaa28为Ala或Asn；
Z1为
-OH，
-NH2
Gly-Z2，
Gly Gly-Z2，
Gly Gly Xaa31-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37-Z2或
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2；
Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立为Pro、高脯氨酸、3Hyp、4Hyp、硫脯氨酸、N-烷基甘氨酸、N-烷基苯基甘氨酸或N-烷基丙氨酸；以及
Z2为-OH或-NH2；
前提是Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27和Xaa28中不多于3个为Ala。
N-烷基甘氨酸、N-烷基苯基甘氨酸和N-烷基丙氨酸的优选N-烷基包括优选1-约6个碳原子、更优选1-4个碳原子的低级烷基。
优选的exendin激动剂化合物包括其中Xaa1为His或Tyr的化合物。更优选Xaa1为His。
优选其中Xaa2为Gly的化合物。
优选其中Xaa14为Leu、苯基甘氨酸或Met的化合物。
优选的化合物为其中Xaa25为Trp或Phe的化合物。
优选的化合物为其中Xaa6为Phe或萘基丙氨酸；Xaa22为Phe或萘基丙氨酸；而Xaa23为Ile或Val的化合物。
优选其中Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立选自Pro、高脯氨酸、硫脯氨酸和N-烷基丙氨酸的化合物。
优选Z1为-NH2。
优选Z2为-NH2。
按照一个方面，优选式(II)的化合物，其中Xaa1为His或Tyr、更优选His；Xaa2为Gly；Xaa6为Phe或萘基丙氨酸；Xaa14为Leu、苯基甘氨酸或Met；Xaa22为Phe或萘基丙氨酸；Xaa23为Ile或Val；Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立选自Pro、高脯氨酸、硫脯氨酸或N-烷基丙氨酸。更优选Z1为-NH2。
按照一个特别优选的方面，特别优选的化合物包括式(II)的化合物，其中：Xaa1为His或Arg；Xaa2为Gly或Ala；Xaa3为Asp或Glu；Xaa5为Ala或Thr；Xaa6为Ala、Phe或萘基丙氨酸；Xaa7为Thr或Ser；Xaa8为Ala、Ser或Thr；Xaa9为Asp或Glu；Xaa10为Ala、Leu或苯基甘氨酸；Xaa11为Ala或Ser；Xaa12为Ala或Lys；Xaa13为Ala或Gln；Xaa14为Ala、Leu或苯基甘氨酸；Xaa15为Ala或Glu；Xaa16为Ala或Glu；Xaa17为Ala或Glu；Xaa19为Ala或Val；Xaa20为Ala或Arg；Xaa21为Ala或Leu；Xaa22为Phe或萘基丙氨酸；Xaa23为Ile、Val或叔丁基甘氨酸；Xaa24为Ala、Glu或Asp；Xaa25为Ala、Trp或Phe；Xaa26为Ala或Leu；Xaa27为Ala或Lys；Xaa28为Ala或Asn；Z1为-OH、-NH2、Gly-Z2、Gly Gly-Z2、Gly Gly Xaa31-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly AlaXaa36 Xaa37-Z2、Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2；Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立为Pro高脯氨酸、硫脯氨酸或N-甲基丙氨酸；而Z2为-OH或-NH2；前提是Xaa3、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27和Xaa28中不多于3个为Ala。特别优选的化合物包括具有SEQ.ID.NO.40-61氨基酸序列的化合物。
按照一个特别优选的方面，提供这样的化合物：其中Xaa14为Leu、Ile、Val或苯基甘氨酸，更优选Leu或苯基甘氨酸，而Xaa25为Phe、Tyr或萘基丙氨酸，更优选Phe或萘基丙氨酸。这些化合物在体外和体内以及合成所述化合物期间均不容易氧化降解。
exendin激动剂化合物还包括描述于1998年11月13日申请的题为“新型exendin激动剂化合物”的国际专利申请号PCT/US98/24273中的化合物，所述申请要求1997年11月14日申请的美国临时申请号60/065,029的权益，包括下式(III)[SEQ.ID.NO.5]的化合物：Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 Xaa17 Ala Xaa19 Xaa20Xaa21 Xaa22 Xaa23 Xaa24 Xaa25 Xaa26 Xaa27 Xaa28-Z1；
其中
Xaa1为His、Arg、Tyr、Ala、Norval、Val或Norleu；
Xaa2为Ser、Gly、Ala或Thr；
Xaa3为Ala、Asp或Glu；
Xaa4为Ala、Norval、Val、Norleu或Gly；
Xaa5为Ala或Thr；
Xaa6为Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa7为Thr或Ser；
Xaa8为Ala、Ser或Thr；
Xaa9为Ala、Norval、Val、Norleu、Asp或Glu；
Xaa10为Ala、Leu、Ile、Val、苯基甘氨酸或Met；
Xaa11为Ala或Ser；
Xaa12为Ala或Lys；
Xaa13为Ala或Gln；
Xaa14为Ala、Leu、Ile、苯基甘氨酸、Val或Met；
Xaa15为Ala或Glu；
Xaa16为Ala或Glu；
Xaa17为Ala或Glu；
Xaa19为Ala或Val；
Xaa20为Ala或Arg；
Xaa21为Ala或Leu；
Xaa22为Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa23为Ile、Val、Leu、苯基甘氨酸、叔丁基甘氨酸或Met；
Xaa24为Ala、 Glu或Asp；
Xaa25为Ala、Trp、Phe、Tyr或萘基丙氨酸；
Xaa26为Ala或Leu；
Xaa27为Ala或Lys；
Xaa28为Ala或Asn；
Z1为
-OH，
-NH2，
Gly-Z2，
Gly Gly-Z2，
Gly Gly Xaa31-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser Ser-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37-Z2，
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38-Z2或
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Z2；
Gly Gly Xaa31 Ser Ser Gly Ala Xaa36 Xaa37 Xaa38 Xaa39-Z2；
其中Xaa31、Xaa36、Xaa37和Xaa38独立为Pro、高脯氨酸、3Hyp、4Hyp、硫脯氨酸、N-烷基甘氨酸、N-烷基苯基甘氨酸或N-烷基丙氨酸；以及
Z2为-OH或-NH2；
前提是Xaa3、Xaa4、Xaa5、Xaa6、Xaa8、Xaa9、Xaa10、Xaa11、Xaa12、Xaa13、Xaa14、Xaa15、Xaa16、Xaa17、Xaa19、Xaa20、Xaa21、Xaa24、Xaa25、Xaa26、Xaa27和Xaa28中不多于3个为Ala；另一前提是：如果Xaa1为His、Arg或Tyr，则Xaa3、Xaa4和Xaa9中的至少一个为Ala。
化合物的制备
应用标准固相肽合成技术而且优选自动或半自动肽合成仪可合成组成所述制剂活性成分的化合物以及本发明用量。在下文实施例1和2中描述exendin-3和exendin-4的制备。其它exendin激动剂肽类似物的制备描述于下文的实施例13-198。
通常采用自动或半自动肽合成技术，在一种碱如二异丙基乙胺存在下，在偶联剂如二环己基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑存在下，在惰性溶剂如二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯二酮(N-methylpyrrolidinone)或二氯甲烷中，于室温下使α-N-氨基甲酰基保护的氨基酸和连接在树脂上的延长肽链的氨基酸偶联。采用试剂如三氟乙酸或哌啶从产生的肽-树脂去除α-N-氨基甲酰基保护基，用加入到所述肽链的下一个需要的N-保护的氨基酸重复偶联反应。合适的N-保护基团是本领域众所周知的，本发明优选叔丁氧基羰基(tBoc)和芴基甲氧基羰基(Fmoc)。
用于肽合成仪的溶剂、氨基酸衍生物和4-甲基二苯甲基-胺树脂可购自Applied Biosystems Inc.(Foster City，CA)。以下侧链保护的氨基酸可购自Applied Biosystems，Inc.：Boc-Arg(Mts)、Fmoc-Arg(Pmc)、Boc-Thr(Bzl)、Fmoc-Thr(t-Bu)、Boc-Ser(Bzl)、Fmoc-Ser(t-Bu)、Boc-Tyr(BrZ)、Fmoc-Tyr(t-Bu)、Boc-Lys(Cl-Z)、Fmoc-Lys(Boc)、Boc-Glu(Bzl)、Fmoc-Glu(t-Bu)、Fmoc-His(Trt)、Fmoc-Asn(Trt)和Fmoc-Gln(Trt)。Boc-His(BOM)可购自Applied Biosystems，Inc.或Bachem Inc.(Torrance，CA)。茴香醚、二甲基硫化物、酚、乙二硫醇和硫茴香醚可得自Aldrich Chemical Company(Milwaukee，WI)。AirProducts和Chemicals(Allentown，PA)提供HF。乙醚、乙酸和甲醇可购自Fisher S cientific(Pittsburgh，PA)。
利用NMP/HOBt(Option 1)系统和封端的tBoc或Fmoc化学(参见Applied Biosystems的ABI 430A肽合成仪用户使用手册，1.3B版，1998年7月1日，第6部分，第49-70页，Applied Biosystems，Inc.，FosterCity，CA)，使用自动肽合成仪(430A型，Applied Biosystems Inc.，FosterCity，CA)可进行固相肽合成。用HF(-5℃-0℃，1小时)裂解Boc-肽-树脂。交替用水和乙酸从树脂提取肽，冻干滤液。按照标准方法( 裂解 技术介绍，Applied Biosystems，Inc.，1990，第6-12页)裂解Fmoc-肽树脂。采用Advanced Chem Tech合成仪(MPS 350型，Louisville，Kentucky)又可以装配肽。
可采用Waters Delta Prep 3000系统经RP-HPLC(制备型和分析型)纯化肽。C4、C8或C18制备型柱(10μ，2.2×25cm；Vydac，Hesperia，CA)可用来分离肽，可用C4、C8或C18分析型柱(5μ，0.46×25cm；Vydac)测定纯度。可以1.0ml/min流速将溶剂(A＝0.1％TFA/水，而B＝0.1％TFA/CH3CN)输送至分析型柱，以15ml/min输送至制备型柱。可用Waters Pico Tag系统进行氨基酸分析，采用Maxima程序进行处理。可通过汽相酸水解(115℃，20-24h)水解肽。可用标准方法(Cohen等，Pico Tag方法：氨基酸分析先进技术手册，第11-52页，MilloporeCorporation，Milford，MA(1989))产生并分析水解产物。可用M-Scan，Incorporated(West Chester，PA)进行快原子轰击分析。可用碘化铯或碘化铯/甘油进行质量校正(mass calibration)。可用Applied BiosystemsBio-Ion 20质谱仪进行利用飞行时间检测的血浆解析离子分析。可用VG-Trio仪器进行电子喷雾质谱分析。
也可以采用本领域已知的方法，用重组DNA技术制备可用于本发明制剂和剂量的肽活性成分化合物。参见例如Sambrook等，Molecular Clonging：A Laboratory Manual，第二版，Cold Spring Harbor(1989)。
实用性
鉴于其药理特性，本文所述制剂和剂量是有效的。具体地说，本发明的制剂和剂量作为exendin和exendin激动剂是有效的，具有降低血糖药物的活性，而且可调节胃动力以及减慢胃排空，其证据是它们能够降低哺乳动物的餐后血糖水平。
制剂和给药方法
鉴于其exendin样作用，本发明的exendin和exendin激动剂制剂和剂量是有效的，而且可以方便地提供适合胃肠外(包括静脉内、肌内和皮下)给药的制剂形式。本文还描述了可用于替代传递途径(包括口、鼻、颊、舌下和肺)的制剂和剂量。
可以注射或输注用胃肠外组合物提供用于本发明的化合物。一般来说，它们可例如悬浮于惰性油、合适的植物油如芝麻油、花生油、橄榄油或者其它可接受的载体中。它们最好是悬浮于水性载体中，例如pH约3.0-约7.0、更特别约4.0-6.0以及优选约4.0-约5.0的等张缓冲液。这些组合物可用常规消毒技术消毒或者可以过滤除菌。根据需要，所述组合物可以含有药学上可接受的辅助物质，以接近生理状态，例如pH缓冲剂。有效的缓冲剂包括例如醋酸钠/醋酸缓冲剂。可采用氯化钠或其它药学上可接受的物质例如葡萄糖、硼酸、酒石酸钠、聚乙二醇、多元醇(例如甘露醇和山梨醇)或其它无机溶质或有机溶质达到需要的等张性。对于含钠离子的缓冲剂特别优选氯化钠。
所述exendin和exendin激动剂化合物也可以配制为药学上可接受的盐(例如酸加成盐)和/或其复合物。药学上可接受的盐为在其给予浓度无毒的盐。这样的盐的制剂通过改变所述组合物的物理化学特性而不会妨碍所述组合物发挥其生理作用，从而能促进所述药理作用。有用的物理特性改变的实例包括降低熔点，以有助于经粘膜给药以及增加溶解性而有助于给予更高浓度的所述药物。
药学上可接受的盐包括酸加成盐，例如含硫酸盐、盐酸盐、磷酸盐、氨基磺酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、环己基氨基磺酸盐和奎尼酸盐的酸加成盐。能够由以下酸获得药学上可接受的盐，所述酸例如盐酸、硫酸、磷酸、氨基磺酸、醋酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己基氨基磺酸和奎尼酸。可如下制得这样的盐：例如使游离酸或游离碱形式的所述制品与一个或多个相当量的合适碱或酸在其中所述盐是不溶性的溶剂或介质中进行反应，或者在溶剂如水中反应，然后通过真空或冷冻干燥去除所述溶剂，或者在合适的离子交换树脂上使现存盐的离子交换为另一种离子而制得。
一般来说，也可以使用载体或赋形剂，以有助于给予本发明的剂量。载体和赋形剂的实例包括碳酸钙、磷酸钙、各种糖如乳糖、或者各种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油、聚乙二醇和生理学上相容的溶剂。
如果需要的话，可用增稠剂例如甲基纤维素增稠上述剂量组合物溶液。它们可以制成油包水或水包油的乳化形式。可以应用各种各样的药学上可接受的乳化剂中的任何一种，包括例如金合欢胶粉、非离子表面活性剂(例如吐温)或离子表面活性剂(例如碱金属聚醚醇硫酸盐或磺酸盐，例如Triton)。
一般来说，按照周知的方法混合所述成分制备本发明的制剂和剂量组合物。例如，在混合器或其它标准装置中简单混合所选定的组分以便产生浓缩的混合物，然后加入水或增稠剂调节至最终浓度和粘度，可加入缓冲剂控制pH或者加入额外溶质控制张力。
其它药学上可接受的载体及其制剂描述于标准制剂疗法，例如E.W.Martin编著的 Remingon’s Pharmaceutical Sciences。此外参见Wang，Y.J.和Hanson，MA.“蛋白质和肽类的胃肠外制剂：稳定性和稳定剂”， Journal of Parenteral Science and Technology，第10号技术报告，增刊42：2S(1988)。
为了便于医生应用，所述化合物以单位剂型提供，所述单位剂型含有一定量的exendin激动剂，可以含有或不含有另一治疗药物，例如降低葡萄糖药物、胃排空调节剂、降低脂质药物或摄取食物抑制剂。用于控制血糖或控制胃排空和得益于胃排空减慢或胃排空调节的病症的exendin激动剂的治疗有效量为降低餐后血糖水平的剂量，优选在约8-9 mM范围内或者使血糖水平按照需要降低的剂量。在糖尿病或葡萄糖耐受不良的个体，血浆葡萄糖水平比正常个体高。在这类个体中，可达到有益地降低餐后血糖水平或者使餐后血糖水平“平滑”。本领域技术人员已知，治疗药物的有效量随许多因素而变化，包括患者的机体状况、血糖水平或需要达到抑制胃排空的水平、或者需要降低摄取食物的水平以及其它因素。
这样的药用组合物可用于增加患者的胰岛素敏感性，也可以用于有益地增加对胰岛素的敏感性的疾病，例如糖尿病。
可以使用一种贮藏或“储存(depot)”缓释制剂，使得治疗有效量的所述制剂在经皮注射或其它传递形式数小时或数天内输送入血流。
介绍了所述化合物的有效日剂量。主治医师可决定需要给予的准确剂量，而且准确剂量还取决于所使用的具体exendin或exendin激动剂化合物的效力以及个体的年龄、体重和身体状况。给予患者本申请化合物的最佳模式取决于本领域已知的因素，例如具体的疾病或紊乱、所需要的作用和患者的类型。尽管所述化合物常规用于治疗人类患者，但是也可以用来治疗其它脊椎动物的相似或相同疾病，所述脊椎动物例如其它灵长类动物，家禽如猪、牛和鸡，以及体育运动动物和宠物例如马、狗和猫。
本发明包括exendin和exendin激动剂的制剂，它包含exendin或exendin激动剂和混合在一起的缓冲剂(优选醋酸盐缓冲剂)、等渗调节剂(优选甘露醇)以及任选包含防腐剂(优选间甲酚)，所述制剂的pH约3.0-约7.0(优选约4.0-约5.0)。
最有利于胃肠外液体剂型的制剂为所述活性成分是稳定的、具有足够的缓冲能力以在所述产品的预定储藏期内维持所述溶液的pH。该剂型应该是等张和/或等渗溶液，以有助于稳定所述活性成分或者缓解注射部位疼痛或者二者兼而有之。然而传送非常微量的注射体积的装置可能不要求所述制剂为等张和/或等渗。如果所述剂型包装为单位剂量，则可含有防腐剂，但是不是必须的。然而如果所述剂型用多用容器包装，则防腐剂是必需的。
这些剂型在水性体系中分别含有约0.005-约0.4％、更优选约0.005-约0.02％或者约0.005-约0.05％(w/v)所述活性成分，所述剂型同时含有约0.02-0.5％(w/v)单独的或组合的醋酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐或谷氨酸盐或类似的缓冲剂，以使最终组合物的pH约3.0-7.0、更优选约4.0-约6.0或者约4.0-5.0，以及含有约1.0-10％(w/v)碳水化合物或多元醇等渗调节剂(优选甘露醇)或最高约0.9％盐水或二者的混合物，使得连续水相为等张或等渗溶液。如果所述制剂用多用容器包装，则还可含有约0.005-1.0％(w/v)抗微生物的防腐剂，防腐剂选自间甲酚、苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯以及酚。加入足够量的注射用水获得需要浓度的溶液。如果需要的话，也可以含有氯化钠以及其它赋形剂。但是这样的赋形剂必须保持所述活性成分的整体稳定性。
多元醇和碳水化合物具有相同的主链特征，即-CHOH-CHOH-。多元醇包括诸如山梨醇、甘露醇、甘油和聚乙二醇(PEG)的化合物。这些化合物是直链分子。另一方面，诸如甘露糖、核糖、海藻糖、麦芽糖、甘油、肌醇、葡萄糖和乳糖的碳水化合物是可含有一个酮基或醛基的环形分子。这两类化合物也可有效稳定蛋白质，以抵抗温度升高和冻融或冻干工艺引起的蛋白质变性。合适的碳水化合物包括半乳糖、阿拉伯糖、乳糖或任何其它对糖尿病患者没有副作用的碳水化合物，也就是所述碳水化合物不会代谢形成高浓度的血糖。适合糖尿病的这样的碳水化合物是本领域众所周知的。
本发明的肽最好与以下成分混合：一种诸如山梨醇、甘露醇、肌醇、甘油、木糖醇和聚丙二醇/乙二醇共聚物的多元醇以及分子量为200、400、1450、3350、4000、6000和8000的各种聚乙二醇(PEG)。甘露醇为优选的多元醇。
本发明的液体制剂应该为大致等张和/或等渗的。等张溶液可定义为这样的溶液：与将导入其中的溶液的渗透压相同的电解质浓度或电解质和非电解质组合物浓度的溶液，在本文中如果胃肠外注射给予所述制剂，则溶液的渗透压将与哺乳动物组织渗透压相同。同样，等渗溶液可定义为这样的溶液：与将导入其中的溶液的渗透压相同的非电解质浓度的溶液。本文使用的“大致等张”是指±20％的等张性，优选在±10％范围内。本文使用的“大致等渗”是指±20％等重量克分子渗透浓度，优选在±10％范围内。配制的注射制品包装于容器中，通常例如为小瓶、药筒、预灌注的注射器或一次性笔。
最有利于单位剂量的胃肠外冻干剂型的制剂是其中所述活性成分相当稳定、具有或不具有足够缓冲能力以维持复制制品在预定保存期内的溶液pH的制剂。所述剂型应含有有助于结块的增量剂。所述增量剂在复制时还可用作张力剂和/或等重量克分子渗透浓度调节剂，以有助于稳定所述活性成分和/或减轻注射疼痛。如上所述，传送非常微量注射体积的装置可能不需要所述制剂是等张和/或等渗的。表面活性剂也有利于结块性质和/或有助于复制。
这些剂型包含约0.005-约0.4％、更优选约0.005-约0.02％或者约0.005-约0.05％(w/v)所述活性成分。所述制剂不必包含缓冲剂和/或如果在复制的活性成分决定的稳定期内用完容器内的内容物，不必用缓冲液复制所述冻干制剂。如果使用缓冲剂，它可包含于所述冻干物或复制溶剂中。所以，所述制剂和/或复制溶剂单计或总计含有约0.02-0.5％(w/v)单独的或组合的醋酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐或谷氨酸盐缓冲剂，使得最终组合物的pH约为3.0-7.0，更具体为约4.0-约6.0或者约4.0-5.0。所述增量剂包括约1.0-10％(w/v)碳水化合物或多元醇等渗调节剂(如上所述)或0.9％以内的盐水或二者的组合物，使复制的水相为等张或等渗溶液。可包含表面活性剂，优选约0.1-约1.0％(w/v)吐温80或其它非离子去垢剂。如上所述，需要的话，冻干的单位剂量制剂还可含有氯化钠以及其它赋形剂。但是，这样的赋形剂必须保持所述活性成分的整体稳定性。在鉴定用以维持所述活性成分稳定性的有效参数范围内冻干所述制剂。
冻干前的本发明液体制剂应该在冻干前基本上为等张和/或等渗或者在复制后能够形成等张和/或等渗溶液。所述制剂应该在冻干形式和复制后的保存期研究确立的时间内使用。所述冻干制品包装在容器中，通常例如为小瓶。如果使用其它容器，例如药筒、预灌装的注射器或一次性笔，则也可以包含所述复制溶剂。
与上述胃肠外液体制剂和冻干单位剂量制剂一样，最有利于多剂胃肠外冻干剂型的制剂是其中所述活性成分相当稳定、具有足够缓冲能力以维持所述溶液在所述制品预定“有效”保存期内的pH的制剂。所述剂型应含有有助于结块的增量剂。所述增量剂在复制时还可用作张力剂和/或等重量克分子渗透浓度调节剂，以有助于稳定所述活性成分和/或减轻注射疼痛或者二者兼而有之。再者，传送非常微量注射体积的装置可能不需要所述制剂是等张和/或等渗的。但是表面活性剂是必需的，以有利于患者多次使用。
这些剂型分别包含约0.005-约0.4％、更优选约0.005-约0.02％或者约0.005-约0.05％(w/v)所述活性成分。所述制剂不必包含缓冲剂和/或如果在复制的活性成分决定的稳定期内用完容器内的内容物，不必用缓冲液复制所述冻干制剂。如果使用缓冲剂，它可包含于所述冻干物或复制溶剂中。所以，所述制剂和/或复制溶剂单计或总计含有约0.02-0.5％(w/v)单独的或组合的醋酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐或谷氨酸盐缓冲剂，使得最终组合物的pH约为3.0-7.0，更具体为约4.0-约6.0或者约4.0-5.0。所述增量剂包括约1.0-10％(w/v)碳水化合物或多元醇等渗调节剂(优选甘露醇)或0.9％以内的盐水或二者的组合物，使复制的水相为等张或等渗溶液。可包含表面活性剂，优选约0.1-约1.0％(w/v)吐温80或其它非离子去垢剂。如果所述制剂用多用容器包装，则还包含约0.005-1.0％(w/v)选自以下的抗微生物防腐剂：间甲酚、苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯以及酚(优选间甲酚)。如果需要的话，还可以含有氯化钠以及其它赋形剂。但是，再者，这类赋形剂必须保持所述活性成分的整体稳定性。在鉴定用以维持所述活性成分稳定性的有效参数范围内冻干所述制剂。本发明液体制剂应该在冻干前基本上为等张和/或等渗或者在复制后能够形成等张和/或等渗溶液。所述制剂应该在冻干形式和复制后的保存期研究确定的时间内使用。所述冻干制品包装在容器中，通常例如为小瓶。如果使用其它容器，例如药筒、预灌装的注射器或一次性笔，则也可以包含复制溶剂。
最有利于口服、鼻、肺和/或气管内剂型的制剂为防腐或非防腐的液体制剂和/或干粉制剂，或者对于口服给药，为固体制剂。该防腐或非防腐液体制剂与防腐或非防腐胃肠外液体制剂的上述制剂基本相同。所述溶液的pH应该约3.0-7.0，最优选pH高于或等于约5.0，以便减小气管收缩的可能性。干粉制剂可含有增量剂和/或盐类，有助于形成的一定大小的颗粒和合适的颗粒大小分布。表面活性剂和/或盐类还有助于颗粒形态学特性和/或促进组织摄取所述活性成分。
这些干粉剂型的活性成分含量范围分别为1％-100％(w/w)。不必含有有助于形成一定颗粒大小和/或颗粒大小分布的增量剂和/或盐类。所述增量剂和/或盐类可包含约0-99％(w/w)碳水化合物或多元醇或者约0-99％盐或者二者的组合物，使得颗粒大小为优选的颗粒大小和分布。可包含表面活性剂，优选约0.1-约1.0％(w/w)吐温80或其它非离子去垢剂。如果需要的话，还可以存在氯化钠和其它赋形剂。但是，这样的赋形剂必须保持所述活性成分的整体稳定性以及有助于合适水平的水化作用。
最有利于鼻和/或气管内剂型的制剂为上述防腐或非防腐的液体制剂。
可使用可溶凝胶和/或贴片促进口颊部给药。可用不同类型的淀粉和/或纤维素衍生物制备所述凝胶。
类似于上述的胃肠外液体制剂或复制后的胃肠外冻干制剂的液体制剂可能最有利于舌下给药，不同的是该剂型不需要为等张和/或等渗溶液。固体剂型可类似于口服固体剂型，不同的是它们必须容易在舌下溶解。
类似于所述胃肠外液体制剂的液体(凝胶盖)制剂可能最有利于口服给药，不同的是所述溶液浓度可以更高而且可含有其它有助于小肠吸收所述活性成分的添加剂。固体剂型含有惰性成分和所述活性成分，以有助于制片。这些成分可包括多元醇(甘露醇)、碳水化合物或各种类型的淀粉、纤维素衍生物和/或其它惰性生理相容性物质。所述片剂可进行肠溶包衣，以使其在胃内的消化减至最小，因此促进溶解以及进一步沿消化道吸收。
本发明还包括注射给药以及通过其它途径给药的exendin和exendin激动剂的优选剂量。因此，本发明提供相当效力的exendin和exendin激动剂的制剂供注射给药，包括约0.1-约0.5μg/Kg，每天1-3次。通常例如对于体重约70公斤(1型糖尿病的平均体重)至约90公斤(2型糖尿病的平均体重)的糖尿病患者而言，每天单次或分次总计给予约10-约120μg。如果分次给药，所述剂量优选以每天2-3次给予，更优选每天2次。
在一个优选注射方法中，胃肠外、更优选注射(例如外周注射)给予exendin或exendin激动剂。优选每天给予约1μg-30μg至约1mgexendin或exendin激动剂。更优选每天给予约1-30μg至约500μg、或者约1-30μg至约50μg exendin或exendin激动剂。更优选根据患者体重和所给予化合物的效力，每天给予约3μg-约50μg exendin或exendin激动剂。大致具有exendin-4效力的化合物的基于患者体重的优选剂量范围为约0.005μg/kg/剂至约0.2μg/kg/剂。更优选大致具有exendin-4效力的化合物的基于患者体重的剂量范围为约0.02μg/kg/剂至约0.1μg/kg/剂。最优选大致具有exendin-4效力的化合物的基于患者体重的剂量范围为约0.05μg/kg/剂至约0.1μg/kg/剂。这些剂量每天以1-4次给予、优选每天1-2次。如果连续输注给药，通常exendin或exendin激动剂的剂量更低。如果通过非注射方法给药，例如口服、颊、舌下、鼻、肺、或皮肤贴片局部给药，exendin或exendin激动剂的剂量通常更高。
按照本发明的口服剂量包含约50至约100倍的所述活性成分，也就是说，每天单剂或多剂剂量约500至约12,000μg、优选每天约500至约5,000μg。按照本发明的肺部剂量包含约10至约100倍的所述活性成分，也就是说，每天单剂或多剂约100至约12,000μg、优选每天约500-1000μg。按照本发明的鼻、颊和舌下给药剂量也包含约10至约100倍的所述活性成分，也就是说每天单剂或多剂剂量约100至约12,000μg。
经鼻给药的优选剂量为每天约10-1000至约1200-12,000μg，经颊给药的优选剂量为每天约10-1000至约1200-12,000μg，舌下给药的优选剂量为每天约10-1000至约1200-8,000μg。最好是舌下剂量低于颊剂量。根据上述剂量和本文其它地方所述剂量，适当增加或降低效力低于或高于exendin-4的exendin激动剂的给药剂量。
临床研究
如下文实施例10所述，进行了双盲、安慰剂对照的不断递增的单剂量(single ascending dose)研究，在健康志愿者检测皮下给予exendin-4的安全性、耐受性和药代动力学。对40名空腹健康男性志愿者进行5个单剂量(0.01、0.05、0.1、0.2或0.3μg/kg)的皮下给予exendin-4的研究。在给药后1-2小时达到最大血浆exendin-4浓度，所检测的各剂量之间差异微小。检测数据表明，Cmax呈剂量依赖性增加。本研究报道没有严重副作用。
参与本研究的健康男性志愿者对exendin-4的最高(包括)为0.1μg/kg的皮下给予剂量的耐受性良好。在该剂量也观测到血浆葡萄糖浓度下降。在剂量为0.2μg/kg以及更高剂量时，观测到的最常见副作用是头痛、恶心、呕吐、头晕和体位性低血压。给予剂量为0.05μg/kg以及更高剂量后，血浆葡萄糖浓度短暂下降。
下文的实施例12描述了低于0.1μg/kg剂量的exendin-4降低葡萄糖的作用的剂量-效应关系的进一步研究。饮食±口服降糖药物治疗的2型糖尿病患者14名[平均年龄55±2(±SE)；平均BMI(30.2±1.6kg/m2)]，在停止口服药物10-14天后对其进行了研究。在禁食过夜后，在不同的实验日按照随机皮下注射安慰剂、0.01、0.02、0.05和0.1μg/kg exendin-4，对其进行评价。注射给药，然后立即进食Sustacal标准餐(7 kcal/kg)，然后在随后的300分钟内以不同的间隔收集血浆葡萄糖样品。
血糖效应定量为5小时内的血浆葡萄糖浓度的时间加权平均值(time-weighted mean)(±SE)变化。治疗效应是：对于安慰剂，血糖浓度比空腹血糖浓度增高+42.0±7.9mg/dL，相比之下，0.1μg/kgexendin-4的血糖浓度比空腹血糖浓度降低30.5±8.6mg/dL。
降低葡萄糖作用的ED50为0.038μg/kg。低于0.1μg/kg的exendin-4剂量似乎与胃肠道副作用的降低葡萄糖的作用无关。实施例12表明，在剂量低于0.1μg/kg时不仅能够良好耐受exendin-4，而且这样的剂量可显著降低2型糖尿病患者的餐后血浆葡萄糖浓度(ED50为0.038μg/kg)。
替代给药途径
通过检测循环中的exendin-4结合观测给药后的生物效应，例如降低糖尿病动物的血浆葡萄糖，从而探索exendin-4的替代给药途径的可行性。研究了exendin-4通过呼吸道(鼻、气管和肺途径)和胃肠道(舌下、管饲法和十二指肠内途径)的几个表面的给药。观测了通过呼吸道的每个给药途径以及通过胃肠道的舌下和管饲肽的生物效应和exendin-4在血中的存在情况。
气管内给药-如本文所述，对禁食大鼠气管内给予exendin-4(20μg/50μL/动物)，在给药后5-10分钟内使平均血浆exendin-4浓度升高至2060±960 pg/mL。升高的血浆exendin-4浓度在滴注后至少保持1小时(参见图4)。在糖尿病db/db小鼠，气管内滴注exendin-4(1μg/动物)使血浆葡萄糖浓度降低30％，而溶媒对照组在处理后1.5小时血浆葡萄糖浓度升高41％。在这些动物中，exendin-4的平均血浆浓度在治疗后4.5小时为777±365pg/ml(参见图5a和5b)。
在糖尿病ob/ob小鼠，气管内滴注exendin-4(1μg/动物)后4小时使血浆葡萄糖浓度降低为治疗前水平的43％，而溶媒对照组没有变化(参见图6a和6b)。
9只雄性Sprague Dawley大鼠(年龄96-115天，体重365-395g，平均385g)，禁食过夜，用氟烷麻醉，切开气管，通过股动脉插管。t＝0分钟时，将溶解2.1μg(n＝3)、21μg(n＝3)或210μg exendin-4的30μL盐水滴注入插管水平以上的气管内。在5、10、20、30、60、90、120、150、180、240、300和360分钟后取血样品，离心，血浆保存于-20℃，供随后的针对完整exendin-4分子的N-末端和C-末端表位的免疫放射分析(IRMA)之用。气管内给药后5分钟内观测到61-74％血浆峰浓度。Tmax出现于给药后20-30分钟。AUC和Cmax与剂量成正比。在2.1μg(1.5nmol/kg)剂量时，血浆浓度约50pM(此时在人类观测到降低葡萄糖的作用)，生物利用度为7.3％。变异系数为44％。更高剂量时，生物利用度略微降低，而CV更高(参见图7a和7b)。对于气管给药途径，最低剂量的t1/2(实际定义为血浆Cmax降低50％的时间)为30-60分钟，而较高的2个剂量为60-90分钟。总而言之，exendin-4的生物有效量通过气管迅速吸收，而不会引起明显的呼吸窘迫。呼吸道为exendin-4适用的给药途径。
肺部给药-对暴露于气溶胶exendin-4的大鼠检测exendin-4血浆浓度的升高情况。使大鼠暴露于每mL空气约8ng气溶胶exendin-410分钟，治疗后5分钟exendin-4血浆峰浓度为300-1900pg/mL(参见图8)。使糖尿病db/db小鼠同样暴露于气溶胶exendin-4，1小时后血浆葡萄糖浓度降低33％，而exendin-4平均血浆浓度为170±67pg/mL。使对照组的糖尿病db/db小鼠暴露于气溶胶盐水，未记录到血浆葡萄糖浓度变化(参见图9a和9b)。
经鼻给药-将exendin-4施用于大鼠鼻腔，其血浆浓度升高。分别给予1μg和100μg exendin-4(溶解于2μL盐水)后10分钟，检测到的峰值为300pg/mL和6757pg/mL(参见图10)。
经肠道给药-使雄性db/db小鼠(体重约50g)禁食2小时，胃内给予盐水或exendin-4之前以及之后。于1mg/200μl/动物观测到血浆葡萄糖浓度降低9％，于3mg/200μl/动物观测到血浆葡萄糖浓度降低15％，相比之下，对照动物在治疗后1小时的血浆葡萄糖浓度升高10％(参见图11)。
舌下给药-将exendin-4(100μg/5μL/动物)舌下用于糖尿病db/db小鼠，治疗后1小时小鼠的血浆葡萄糖浓度降低15％。对于接受盐水的对照组小鼠观测到血浆葡萄糖浓度升高30％。60分钟时exendin-4平均血浆水平为4520±1846pg/mL(参见图12a、12b和12c)。
8只Sprague Dawley大鼠(约300g)，用metophane短暂麻醉，吸取含10μg/3μL(n＝4)或100μg/3μL(n＝4)的溶液置于舌下。然后从局部麻醉的尾部收集血液样品，通过IRMA分析exendin-4。血浆浓度在给药后3分钟开始升高，在给药(分别为10μg和100μg剂量)后10分钟和30分钟达到最高。然后exendin-4血浆浓度保持在定量低限(LLOQ)以上5小时以上。用梯形法计算每个实验结束后的曲线下面积。获得2个数值，一个数值得自总的免疫反应性，另一个数值得自高于t＝0时的非0数值的增量。比较这些数值和相同动物模型的快速静脉内浓注给药的数据，以分别获得生物利用度的高估计值和低估计值。对于10μg剂量，舌下给药的生物利用度为3.1-9.6％，对于100μg剂量，生物利用度降低，为1.3-1.5％。AUC的变异性在给药后的最初1小时最大(10和100μg剂量的CV为74％和128％)。5小时整的AUC变异系数分别为20％和64％。舌下给药后与皮下给药后一样，迅速(Tmax约30分钟)出现血浆峰浓度(Cmax)。舌下给予10μg exendin-4的Cmax是快速静脉内浓注后的1.5％，但是为皮下快速浓注后获得Cmax的14.5％。舌下给予100μg exendin-4后的Cmax仅为静脉内快速浓注后观测到的Cmax的0.29％，为皮下快速浓注后获得的Cmax的6.1％(参见图12d和12e)。因此，通过舌下途径可传递生物有效剂量的exendin-4。舌下给药剂量最小时其生物利用度和Cmax最大，Tmax最短，而生物利用度变异性最小。最小的舌下给药剂量达到的血浆浓度与预期有效降低人类葡萄糖(约50-100pM)的血浆浓度相似。
为了有助于理解本发明，下面提供描述了一系列实验结果的实施例。当然，不能将与本发明有关的实验解释为特别限制本发明，而且认为在本领域技术人员技术范围内的目前已知或进一步发展的本发明的这类改变属于本文所述以及后面要求保护的本发明范畴。
实施例1-exendin-3的制备
His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser-NH2[SEQ.ID.NO.1]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽。一般来说，整个合成中使用一个偶联循环，而且利用Fast Moc(HBTU活化)化学。应用哌啶使延长的肽链去保护(去除Fmoc基团)。最后按照标准方法(裂解技术介绍，Applied Biosystems，Inc.)应用三乙基硅烷(0.2mL)、乙二硫醇(0.2mL)、茴香醚(0.2mL)、水(0.2mL)和三氟乙酸(15mL)的混合物使完成合成的肽树脂去保护。用乙醚/水(50mL)沉淀肽并离心。用冰醋酸复制所述沉淀物并冻干。用水溶解冻干的肽。粗制品纯度约75％。
在实施例1和2的纯化步骤和分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。
将含肽的溶液加样于制备型C-18柱上并纯化(在40分钟内为在溶剂A中的10％-40％溶剂B)。用C-18分析型柱等度测定各流分的纯度。合并纯化流分，获得上述肽。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为19.2分钟。
实施例2-exendin-4的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser-NH2[SEQ.ID.NO.2]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，按照类似于实施例1所述的exendin-3的方法，从树脂裂解肽、去保护以及纯化。在分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的36％-46％的溶剂B)获得产品肽，观测到的保留时间为14.9分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值为4186.6；实测值为8186.0-4186.8(四批)。
实施例3-exendin-4在Gila畸形体蜥蜴体内
为循环性膳食相关性肽
本实验研究exendin-4在Gila畸形体蜥蜴本身体内是否具有代谢作用。为了研究在进食影响下exendin-4是否出现在Gila畸形体血液中，从禁食7周的一只蜥蜴取血，摄食一只小大鼠之前以及之后30分钟取血。采用针对exendin-4 N-末端和C-末端表位的单克隆抗体对的免疫放射分析分析血浆中的全长exendin-4。禁食蜥蜴的exendin-4血浆浓度为76pg/mL，接近定量低限。进食后，血浆浓度升高300倍，为23,120pg/mL。
在第二个实验中，使2只蜥蜴禁食5周，在进食1或2只小大鼠(47-49g)之前和之后连续取血样品。进食后exendin-4血浆浓度立即升高23-36倍(4860、8340pg/mL)，与exendin-4从唾液腺直接进入血液一致。进食第二只大鼠(t＝30min)后，一只Gila蜥蜴的exendin-4血浆浓度进一步升高至27,209pg/mL。Exendin-4血浆浓度降低的t1/2分别为5.00和5.33小时。总之，已知exendin-4产生于Gila畸形体的唾液腺，在进食后其在血液中的浓度立即升高。这可能代表膳食相关信号，以进一步抑制进食和促进储藏营养。
实施例4-exendin-4降低糖尿病肥胖型Zucker大鼠高血糖钳
期间的胰高血糖素分泌
绝对或相对的高胰高血糖素血症常常是1型和2型糖尿病的特征之一，采用胰高血糖素抑制剂抑制过量胰高血糖素分泌是潜在有益的疗法。在本实施例中，检测exendin-4对麻醉的雄性糖尿病肥胖型Zuker(ZDF)大鼠的胰高血糖素分泌的影响。采用高胰岛素高血糖钳法方案(hyperinsulinemic hyperglycemic clamp protocol)使影响胰高血糖素分泌的因素保持恒定。开始静脉内输注盐水(n＝7)或exendin-4(0.21μg+2.1μg/mL/h；n＝7)之前60分钟使血浆葡萄糖钳式控制(clamp)于约34mM。两组在输注前测得的血浆胰高血糖素浓度相似(分别为306±30pM与252±32 pM；没有显著性差别(n.s.))。
在所述钳法的最后60分钟，输注exendin-4大鼠的平均血浆胰高血糖素浓度几乎是输注盐水大鼠的二分之一(分别为165±18pM与298±26pM；p＜0.002)。高血糖钳法方案还能够检测胰岛素敏感性。相对于对照大鼠，exendin-4治疗组大鼠在钳法期间的葡萄糖输注率增加111±7％(P＜0.001)。换句话说，在高血糖钳法研究期间exendin-4对ZDF大鼠具有抑制胰高血糖素的作用，这种作用对糖尿病病人具有有益的治疗作用。
实施例5-对大鼠静脉内、皮下和腹膜内给予
exendin-4后的药代动力学
本实施例描述了定义静脉内快速浓注、皮下和腹膜内给予2.1、21、210μg/大鼠以及静脉内输注2.1、21、210μg/hr/大鼠(3hr)后，exendin-4在大鼠(每只大鼠体重约350g)体内的血浆药代动力学的研究。应用有效的免疫放射分析(IRMA)分析系列血浆样品(约120μL)。这种三明治型检测应用与exendin-4反应而不与GLP-1或exendin-4或GLP-1的受试代谢物反应的基于小鼠的单克隆抗体。定量低限为15pM(63pg/mL)。静脉内快速浓注exendin-4的估计t1/2为18-41分钟，连续静脉内输注的t1/2为28-49分钟，皮下给药为90-216分钟，而腹膜内注射给药为125-174分钟。皮下注射和腹膜内注射的生物利用度为65-76％。静脉内输注测得的清除率为4-8mL/min。每种给药途径的Cmax和AUC值均与剂量成正比。分布容积为457-867mL。清除率和生物利用度不是剂量依赖性的。Cmax(或稳态血浆浓度；Css)见下表。
Cmax或Css(nM)
给药途径 静脉内快速浓注 静脉内输注 皮下注射 腹膜内注射
剂量
2.1μg 2.9±0.4 1.1±0.1 0.56±0.12 0.26±0.04
21μg 70±3 19±1.9 4.1±1.5 3.9±1
210μg 645±12 262±60 28±4 35±6
实施例6-比较exendin-4和胰高血糖素样肽-1(GLP-1)
在大鼠静脉内葡萄糖攻击期间的促胰岛素作用
本实验比较静脉注射(i.v.)葡萄糖攻击大鼠后合成的exendin-4和GLP-1在体内的促胰岛素作用。用氟烷麻醉Sprague-Dawley大鼠(约400g)，进行股动脉和隐静脉插管。在90分钟恢复期后，静脉注射给予(1ml/h，2小时；各组n＝4-5)盐水或肽(30pmol/kg/min/只)。开始输注后30分钟，静脉注射D-葡萄糖(5.7mmol/kg，0.8ml)。在盐水处理、exendin-4治疗和GLP-1治疗大鼠，注射前的血浆葡萄糖浓度相似(9.3±0.3，9.7±0.3，10.3±0.4mM)，注射葡萄糖后升高量相似(21.7、21.3、23.7mM)而且60分钟的葡萄糖AUC也相似(分别为987±39、907±30、1096±68mM·min)。也就是说，各治疗组的血糖刺激相似。用葡萄糖攻击后盐水处理大鼠的血浆胰岛素浓度升高3.3倍(从230±53至峰值765±188pM)。关于exendin-4输注，血浆胰岛素浓度增加6.8倍(363±60至2486±365pM)。关于GLP-1，血浆胰岛素浓度增加2.9倍(391±27至1145±169pM)，类似于盐水处理大鼠的变化。盐水处理大鼠的60分钟胰岛素AUC为24±6nM·min，exendin治疗大鼠增加2.8倍(67±8nM·min；与盐水组相比，P＜0.003；与GLP-1相比，P＜0.02)，GLP-1治疗大鼠增加20％(与盐水处理组相比没有显著性差别)。还测试发现，输注速率为3和300pmol/kg/min时exendin-4增强葡萄糖刺激的胰岛素释放，证实该作用是剂量依赖性的。因此，exendin-4对整体大鼠的葡萄糖刺激的胰岛素释放的增强作用比GLP-1更强和/或更有效。
实施例7-建立并验证用于定量血浆exendin-4
的免疫放射分析法(IRMA)及其
在临床前毒性和I期临床评价中的应用
采用合成exendin-4作免疫原建立用于定量血浆exendin-4浓度的敏感特异的三明治型免疫放射(IRMA)分析法。一种小鼠产生的单克隆抗体识别exendin-4上的C-末端表位(捕获抗体)，但是它不与GLP-1交叉反应。第二种抗体(用125I标记的检测抗体)识别exendin-4和GLP-1上的N-末端表位，而且需要结合末端组氨酸。因此，所述检测整体上不能检测GLP-1(7-36)NH2、GLP-1(7-36)COOH或exendin(3-39)。用大鼠、猴、狗、兔和人体血浆验证检测法表明，检测内和检测间变异系数分别小于20％和10％，与目标低、中和高对照的精确度为±15％，定量低限和高限分别为62.8和2512pg/mL。采用IRMA评价exendin-4在大鼠和猴的28天皮下注射毒性评价以及正常个体的I期临床研究中的血浆样品。动物研究的Cmax值见下表。皮下给予0.05、0.1、0.2和0.3μg/kg的人体样品获得的Cmax值为90、224、370和587pg/mL。
Cmax(pg/mL)
剂量(μg/kg) 10 100 1000
大鼠 7,000 127,000 1,180,000
猴 20,000 170,000 1,890,000
实施例8-比较GLP-1和exendin-4
对GLP-1受体的结合/激活以及降低葡萄糖的作用
用固相肽合成技术合成exendin-4，与合成GLP-1比较，其在体外结合以及激活GLP-1受体以及在体内降低糖尿病db/db小鼠血浆葡萄糖的作用。用表达GLP-1受体的大鼠胰岛瘤细胞系(RINm5f)的浆膜制备物，检测所述肽结合以及置换放射性标记的GLP-1的能力及其刺激产生cAMP的能力。发现其结合效力的相对位次是GLP-1＞exendin-4。活化环化酶的相对位次为GLP-1＝exendin-4。如下表所示，亲和力相差4-5倍。相反，体内降低葡萄糖的效力相差3430倍。Exendin-4的效力比GLP-1强3430倍。Exendin-4的体内效力与对GLP-1受体的效力不一致，可能是因为聚集特性的累积作用所致。
结合IC50(nM) 环化酶EC50(nM) 降低葡萄糖的ED50(μg)
GLP-1 0.15 0.28 20.6
exendin-4 0.66 0.30 0.006
实施例9-比较配对饲养、exendin-4治疗的
糖尿病肥胖型Zucker大鼠的血糖指标和胰岛素敏感性
本实施例测试exendin-4在ZDF大鼠的有益作用是否继发产生于摄取食物的变化。比较exendin-4的作用与盐水处理的配对大鼠的作用，配对大鼠进食相同量的食物，实验ZDF大鼠每日2次皮下注射10μg exendin-4。每周检测血浆葡萄糖和HbAlc，连续6周。最后一次治疗后1天，用氟烷麻醉动物，使其接受高胰岛素(50mU/kg/min)正常血糖钳法。治疗组之间的6周的HbAlc变化不同(P＜0.001 ANOVA)，任意进食饲养(n＝5)和配对饲养(n＝5)大鼠的HbAlc升高，但是exendin-4治疗大鼠(n＝5)下降。同样，治疗组间的血浆葡萄糖变化也不同(P＜0.002 ANOVA)，任意进食饲养和配对饲养的ZDF大鼠的血浆葡萄糖升高，而exendin-4治疗大鼠的血浆葡萄糖下降。在3小时钳法的最后1小时中，exendin-4治疗大鼠的葡萄糖输注速率分别比配对饲养(+105％)和任意进食饲养(+20％)对照高(10.14±1.43 n＝5，8.46±0.87n＝4，4.93±2.02mg/kg/min n＝3；P＝0.09 ANOVA，没有显著性差别)。另一个胰岛素敏感性指标是血浆乳酸盐浓度，在治疗组间明显不同(P＜0.02 ANOVA)，exendin-4治疗大鼠最低。所以，exendin-4治疗与血糖指标和胰岛素敏感性改善有关，部分而不是完全与进食相同量食物的对照饲养大鼠一致，说明exendin-4对ZDF大鼠的代谢控制的改善至少部分是由于热量限制以外的机制所致。
实施例10-在禁食过夜的健康志愿者的临床研究以及
皮下给予合成exendin-4对内源性胰岛素分泌的刺激作用
用双盲、安慰剂对照的逐渐增加的单剂量临床试验研究合成exendin-4的安全性和耐受性以及药代动力学，配制exendin-4用于皮下注射，在健康男性志愿者进行评价，同时评价其对血浆葡萄糖和胰岛素浓度的影响。在40名空腹、健康男性志愿者进行5个皮下注射给予exendin-4的单剂量研究(0.01、0.05、0.1、0.2或0.3μg/kg)。在给药后1-2小时达到exendin-4最大血浆浓度，所检测的各剂量之间差异微小。检测数据表明，Cmax呈剂量依赖性增加。本研究报道没有严重副作用，而且参与本研究的健康男性志愿者对exendin-4的最高(包括)为0.1μg/kg的皮下给予剂量的耐受性良好。在该剂量也观测到血浆葡萄糖浓度下降。在剂量为0.2μg/kg以及更高剂量时，观测到的最常见副作用是头痛、恶心、呕吐、头晕和体位性低血压。给予剂量为0.05μg/kg以及更高剂量后，血浆葡萄糖浓度短暂下降。
40名健康瘦型(平均BMI(±SE)22.7±1.2)个体，年龄18-40岁，将他们随机分为5组。每组8人，6人接受exendin-4，2人接受安慰剂(PBO)。禁食过夜后给予exendin-4(0.01、0.05、0.1、0.2或0.3μg/kg)或安慰剂，监测血浆exendin-4浓度、葡萄糖和胰岛素浓度以及安全性和耐受性。没有观测到安全性问题。剂量≤0.1μg/kg时的耐受性与PBO相同，而0.2和0.3μg/kg剂量产生剂量依赖性的恶心和呕吐增加。Exendin-4血浆峰浓度呈剂量依赖性的升高，0.1μg/kg后，exendin-4免疫反应性持续360分钟。除了0.01μg/kg之外，所有剂量后的血浆葡萄糖降低，30分钟时达到最低点，180分钟内恢复到基线。接受0.3μg/kg的个体在给药后30分钟进食热量饮料，其资料排除在比较范围之外。血浆葡萄糖的平均变化(0-180分钟)：PBO、0.01、0.05、0.1和0.2μg/kg分别为0.03±0.07、-0.07±0.08、-0.38±0.14、-0.85±0.13和-0.83±0.23mmol/L；与PBO的P≤0.02。记录到的最低血浆葡萄糖为3.4mmol/L。相应的血浆胰岛素平均变化(0-120分钟)是：0.43±0.59、2.37±0.58、2.28±0.66、4.91±1.23和14.00±3.34μU/mL；与PBO 0.1和0.2μg/kg组的P≤0.01。因此，对健康禁食过夜的志愿者皮下注射exendin-4：(1)没有安全性问题，(2)剂量≤0.1μg/kg时能够良好耐受，(3)血浆exendin-4免疫反应性长达6小时，(4)以剂量依赖性方式增加血浆胰岛素以及降低血浆葡萄糖，而不会导致低血糖。
实施例11-exendin-4的替代给药途径
在啮齿动物的效果
本实施例测试注射替代途径对exendin-4的传递，以及检测其以足够量经粘膜表面传递发挥生物作用的能力。在db/db小鼠，经气管、气溶胶雾(肺)、管饲法(口)以及舌下(舌下)给予含不同剂量合成exendin-4的盐水溶液，观测血浆葡萄糖浓度和完整合成exendin-4浓度(用2点免疫放射分析法测量)的变化。在大鼠测试相同的给药途径以及十二指肠和经鼻给予途径，计算例如舌下和气管内途径的生物利用度。经各上述途径给予小鼠exendin-4在给药后1-4小时产生明显的降低葡萄糖活性(db/db小鼠气管内给药P＜0.02；ob/ob小鼠气管内给药P＜0.0002；db/db小鼠气溶胶给药P＜0.0001；管饲法P＜0.002；舌下给药P＜0.02)。剂量依赖性增加exendin-4血浆浓度最高达777±365pg/mL(db/db小鼠气管内)；170±67pg/mL(db/db小鼠气溶胶)；4520±1846pg/mL(db/db小鼠舌下)。同样，在大鼠观测到的exendin-4浓度最高达68,682±38,661pg/mL(气管内)；1900pg/mL(肺)；6757pg/mL(鼻)；3,862±2,844pg/mL(舌下)；但是十二指肠内给药没有明显的吸收或生物利用度。经气管给药时低剂量的exendin-4盐水的生物利用度约7.3％，在5分钟内观测到的Cmax为61-74％。此后的动力学类似于舌下给药观测到的动力学。舌下给药的exendin-4盐水的生物利用度在低剂量时为3.1-9.6％。这些研究经常规非注射途径给予生物有效量的exendin-4及其肽激动剂类似物。
实施例12-对经皮下注射给予2型糖尿病患者
一定剂量范围的合成exendin-4的代谢作用
的单盲安慰剂对照研究
本实施例描述了2个部分的单盲安慰剂对照研究，以观察皮下途径给予II型糖尿病患者一定剂量范围的合成exendin-4的代谢作用的结果。参与该研究的患者为诊断为II型糖尿病而且控制饮食和/或口服降糖药(OHA)以及筛选检查时HbAlc浓度≥7.0％但是≤12.0％的个体。
本研究首先进行筛选检查，然后指示服用OHA的个体中止该治疗，大约14天后OHA作用消失时返回门诊部。参与第1个部分的患者在第1次给药前一天的下午到达门诊部并开始3或4个预定给药日。预计各次给药间隔24小时。
同意并筛选后，随机分配个体接受合成exendin-4或安慰剂。在研究的第一部分，6名患者在入住病人临床研究单位住院3-4天，并指定接受4个治疗程序之一，他们接受以下剂量中的一个剂量：安慰剂或0.1或0.01的合成exendin-4或者可能为0.001μg/kg。禁食过夜后皮下给予各剂量。注射所述研究药物后15分钟接受标准液体膳食。下表说明第1部分的给药方案。
第1天 第2天 第3天 第4天*
患者1 安慰剂 0.1μg/kg 0.01μg/kg 0.001μg/kg
患者2 安慰剂 0.1μg/kg 0.01μg/kg 0.001μg/kg
患者3 0.1μg/kg 安慰剂 0.01μg/kg 0.001μg/kg
患者4 0.1μg/kg 安慰剂 0.01μg/kg 0.001μg/kg
患者5 0.1μg/kg 0.01μg/kg 安慰剂 0.001μg/kg
患者6 0.1μg/kg 0.01μg/kg 安慰剂 0.001μg/kg
*只有在第3天观测到对葡萄糖的效应时才进行。
在第2部分研究中，第1部分完成后约3天，指定8名患者入住住院病人临床研究单位住院4天。该部分的患者不是参与第1部分的患者。第2部分的研究方法和计划方案与第1部分相同。在分析第1部分对葡萄糖的作用后确定各剂量。
因为在第1部分于0.01μg/kg没有观测到明显作用，所以，按照以下第2部分计划表对各患者给药：
第1天 第2天 第3天 第4天
A组 安慰剂 0.02μg/kg 0.05μg/kg 0.1μg/kg
B组 0.02μg/kg 0.1μg/kg 安慰剂 0.05μg/kg
C组 0.05μg/kg 安慰剂 0.1μg/kg 0.02μg/kg
D组 0.1μg/kg 0.05μg/kg 0.02μg/kg 安慰剂
以相同方式在再审查第1部分的资料后，才开始对参与第2部分的患者进行给药。所有患者在从住院病人单位出院后4-6天返回门诊部进行安全性再评价。
用于该研究的合成exendin-4为用醋酸钠缓冲液(pH 4.5)配制而且含有作为等重量克分子渗透浓度调节剂的4.3％甘露醇、供皮下注射用的透明、无色无菌溶液。合成exendin-4注射剂的规格为0.1mg/mL。1ml溶液以带橡胶塞的3mL小瓶供应。用相同的无菌配方制备安慰剂溶液，但是不含所述药物物质合成exendin-4。
本研究结果见图16和17。它们图示不同剂量的exendin-4(0.02μg/kg、0.05μg/kg和0.1μg/kg)降低2型糖尿病患者的血糖能力。
实施例13
本实施例描述了测定exendin-4及其激动剂在糖尿病肥胖型Zucker大鼠对胰岛素的增敏作用的剂量-效应的实验。在这些研究中使用的exendin-4得自Bachem(Torrance，CA；Cat H8730，Lot 506189)、American Peptides(Sunnyvale，CA；Cat 301577，Lot K1005ITI)和独特的固相合成(lot AR1374-11；肽含量93.3％)。将39只雄性糖尿病肥胖型Zucker大鼠(ZDF)/GmiTM-(fa/fa)(年龄116±20天；体重441±39g)分为5个治疗组：只注射生理盐水(n＝9)、注射exendin-4 0.1、1、10或100μg(分别n＝9、10、6、5)。其中，35只大鼠用于高胰岛素正常血糖钳法研究(分别n＝9、7、9、5、5)。治疗前从禁食过夜清醒大鼠的局部麻醉的尾尖(Hurricaine牌20％局部应用的苯佐卡因溶液，Beutlich，Waukegan，IL)取血，以及在治疗期间每隔1周取血，连续5周，血液样品用于分析血红蛋白Alc(DCA2000 latex immuno-agglutination inhibition，Bayer Diagnostics，Tarrytown，NY)。每日测量体重。
治疗6周后，最后一次给予exendin-4(或盐水)后约16小时以及禁食过夜后，对氟烷麻醉大鼠进行高胰岛素正常血糖钳法(DeFronzo RA，Tobin JD，Andres R：Glucose clamp technique：a method for quantifyinginsulin secretion and resistance.Amer J Physiol 237：E214-23，1979)。对大鼠进行温度调节，切开气管，进行隐静脉插管用于输注20％D-葡萄糖和胰岛素，经股动脉取血并监测血压(P23XL频谱转换器，Spectramed，Oxnard，CA；通用放大器，Gould，Valley View，OH；A/D转换，Data Translation，Wilmington，DE)。从t＝-30min开始以50mU/kg/min输注胰岛素(Humulin-R，Eli Lilly，Indianapolis，IN)，连续输注直到t＝+180min。以不同速率输注葡萄糖，根据葡萄糖样品测定而且间隔5分钟分析一次(固定的葡萄糖氧化酶法；YSI 2300-Stat Analyzer，Yellow Springs，OH)保持血糖正常。钳法控制期间的平均血浆葡萄糖为103.9mg/dL(平均变异系数为5.8％)。在效应接近稳态的t＝60-180min获取葡萄糖输注速率数据供分析。还收集血浆乳酸盐数据，它们得自与葡萄糖分析仪连接的固定的乳酸盐氧化酶传感器。
在星期一至星期五的8 a.m.和4 p.m.左右以及在星期六和星期天的10 a.m.左右腹膜内注射给药。
采用Student t检验方法(Instat v3.0，GraphPad Software，San Diego，CA)以P＜0.05为显著性水平，进行配对统计分析。采用单因素方差分析(Prism v3.0，GraphPad Software，San Diego，CA)检验利用4-参数逻辑回归的剂量-效应分析以及总体效果。
结果表明，用不同剂量exendin-4治疗糖尿病肥胖型Zucker大鼠6周，摄取食物(ED50 0.14μg±0.15 log；参见图13a)和体重(ED50 0.42μg±0.15 log；参见图13b)呈剂量依赖性降低，体重最高为27±2g，表示相对于注射盐水的对照，体重降低5.6±0.5％。
在这组大鼠中，糖尿病病程出现恶化，因为所有组的血红蛋白Alc开始升高。尽管如此，注射exendin-4似乎呈剂量依赖性抑制作用而且逆转血红蛋白Alc升高(参见图13c)。在治疗的最后2周测得的exendin-4对血红蛋白Alc的剂量-效应作用具有一般统计学意义(P＝0.05ANOVA)，而在1μg和100μg剂量时特别明显(分别为P＜0.005，P＜0.02)。关于治疗的最后2周的空腹血浆甘油三酯，观测到相似的分布变化，其血浆浓度在所有剂量均明显降低51％-65％(P＜0.002ANOVA)。
进行本研究的39只大鼠中的35只在其最后治疗后约16小时发展为高胰岛素的正常血糖钳。盐水处理(489±28mg/dL)大鼠的初始空腹血浆葡萄糖浓度比exendin处理大鼠高，随着输注胰岛素而降低，然后控制在相似的血浆葡萄糖浓度(60-180min时105.6mg/dL；平均变异系数为4.6％；参见图14a)。用exendin-4治疗的初期，维持正常血糖需要的葡萄糖输注速率呈剂量依赖性增加(ED50 1.0μg±0.41 log；参见图14b)。相对于盐水处理对照，exendin-4治疗增加葡萄糖输注速率高达48％。
钳法之前和期间的血浆乳酸盐浓度在exendin-4治疗初期呈剂量依赖性降低(ED50 4μg±0.25 log；参见图14c)。这种作用表示在所述钳法的60-180分钟的平均血浆乳酸盐浓度降低最高达42％，这主要是由于钳法前(基线)乳酸盐浓度降低；高胰岛素血症期间的血浆乳酸盐增加量在所有治疗组相似。钳法前或期间测得的平均动脉压没有治疗相关性差异。
鉴于exendin-4在体外的胰岛素敏感组织中没有急性作用的观测结果(即，在分离的比目鱼肌中，对基础或胰岛素刺激的放射性标记的葡萄糖掺入糖元没有作用，或者对基础或胰岛素刺激的放射性标记的葡萄糖掺入分离的脂肪细胞的脂质中没有作用；Pittner等，未公开)，所以，慢性给予exendin-4后观测到胰岛素敏感性增加约50％既是重要的又是令人惊奇的。尽管不能忽略改善血糖控制以及减少葡萄糖毒性一定程度上可增强胰岛素敏感性的可能性，但是据报道，包括没有归类为增敏胰岛素的疗法在内的各种抗糖尿病疗法的胰岛素敏感性增加的变异相当大，而且据报道，GLP-1急性治疗似乎不能立即改变人体的胰岛素敏感性(Orskov L，Holst JJ，Moller J，Orskov C，Moller N，Alberti KG，Schmitz O：GLP-1不会快速影响健康人体的胰岛素敏感性。Diabetologia 39：1227-32，1996；Ahren B，Larsson H，Holst JJ：胰高血糖素样肽-1对非胰岛素依赖性糖尿病的胰岛功能和胰岛素敏感性的影响。J Clin Endocrinol Metab 82：473-8，1997；UK前展性糖尿病研究组：用磺酰脲类或胰岛素增强相对于常规治疗的控制血糖以及2型糖尿病患者的并发症风险(UKPDS 33)。Lancet 352：837-53，1998)。因此慢性给予exendin-4似乎与胰岛素敏感性增加有关，胰岛素敏感性增加与用其它治疗药物包括胰岛素增敏药物(例如噻唑烷二酮类和甲福明)观测到的胰岛素增敏作用同样重要，如果不是更重要的话。
实施例14
具有SEQ.ID.NO.9的酰胺肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽。一般来说，整个合成中使用一个偶联循环，而且利用Fast Moc(HBTU活化)化学。然而，某些位置的偶联效率较低，需要偶联2次。具体来说，残基Asp9、Thr7和Phe6均需要偶联2次。应用哌啶使延长的肽链去保护(去除Fmoc基团)不一定有效。位置Arg20、Val19和Leu14需要去保护2次。最后按照标准方法(裂解技术介绍，Applied Biosystems，Inc.)应用三乙基硅烷(0.2mL)、乙二硫醇(0.2mL)、茴香醚(0.2mL)、水(0.2mL)和三氟乙酸(15mL)的混合物使完成合成的肽树脂去保护。用乙醚/水(50mL)沉淀所述肽并离心。用冰醋酸复制所述沉淀物并冻干。用水溶解冻干的肽。粗制品纯度约55％。
纯化步骤和分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。
将含肽的溶液加样于制备型C-18柱上并纯化(在40分钟内为在溶剂A中的10％-40％溶剂B)。用C-18分析型柱等度测定各流分的纯度。合并纯化流分，获得上述肽。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为14.5分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4131.7；实测值4129.3。
实施例15
具有SEQ.ID.NO.10的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的25％-75％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为21.5分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4168.6；实测值4171.2。
实施例16
具有SEQ.ID.NO.11的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为17.9分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4147.6；实测值4150.2。
实施例17
具有SEQ.ID.NO.12的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的35％-65％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为19.7分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4212.6；实测值4213.2。
实施例18
具有SEQ.ID.NO.13的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例1 4的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-50％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为16.3分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4262.7；实测值4262.4。
实施例19
具有SEQ.ID.NO.14的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4172.6。
实施例20
具有SEQ.ID.NO.15的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4224.7。
实施例21
具有SEQ.ID.NO.16的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4 172.6。
实施例22
具有SEQ.ID.NO.17的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4186.6。
实施例23
具有SEQ.ID.NO.18的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4200.7。
实施例24
具有SEQ.ID.NO.19的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4200.7。
实施例25
具有SEQ.ID.NO.20的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4202.7。
实施例26
具有SEQ.ID.NO.21的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4145.6。
实施例27
具有SEQ.ID.NO.22的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4184.6。
实施例28
具有SEQ.ID.NO.23的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4145.6。
实施例29
具有SEQ.ID.NO.24的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4224.7。
实施例30
具有SEQ.ID.NO.25的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4172.6。
实施例31
具有SEQ.ID.NO.26的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4115.5。
实施例32
具有SEQ.ID.NO.27的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4188.6。
实施例33
具有SEQ.ID.NO.28的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4131.6。
实施例34
具有SEQ.ID.NO.29的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4172.6。
实施例35
具有SEQ.ID.NO.30的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4145.6。
实施例36
具有SEQ.ID.NO.31的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。在硫脯氨酸位置38、37、36和3 1需要再进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4266.8。
实施例37
具有SEQ.ID.NO.32的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。在硫脯氨酸位置38、37和36需要再进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4246.8。
实施例38
具有SEQ.ID.NO.33的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。在高脯氨酸位置38、37、36和31需要再进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4250.8。
实施例39
具有SEQ.ID.NO.34的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。在高脯氨酸位置38、37和36需要再进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4234.8。
实施例40
具有SEQ.ID.NO.35的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。在硫脯氨酸位置38、37、36和31需要再进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4209.8。
实施例41
具有SEQ.ID.NO.36的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。在高脯氨酸位置38、37、36和31需要再进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4193.7。
实施例42
具有SEQ.ID.NO.37的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。在N-甲基丙氨酸位置38、37、36和31需要再进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3858.2。
实施例43
具有SEQ.ID.NO.38的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。在N-甲基丙氨酸位置38、37和36需要再进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3940.3。
实施例44
具有SEQ.ID.NO.39的肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。在N-甲基丙氨酸位置38、37、36和31需要再进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3801.1。
实施例45
相当于上述C末端酰胺序列的C末端羧酸肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在所谓的Wang树脂(对烷氧基苄醇树脂(Bachem，0.54mmole/g)上装配合成上述实施例1-30的肽，以类似于实施例14的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析获得实验测定的(M)。
实施例46
具有SEQ.ID.NO.7的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly-
NH2[SEQ.ID.NO.7]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽。一般来说，整个合成中使用一个偶联循环，而且利用Fast Moc(HBTU活化)化学。应用哌啶使延长的肽链去保护(去除Fmoc基团)。最后按照标准方法(裂解技术介绍，Applied Biosystems，Inc.)应用三乙基硅烷(0.2mL)、乙二硫醇(0.2mL)、茴香醚(0.2mL)、水(0.2mL)和三氟乙酸(15mL)的混合物使完成合成的肽树脂去保护。用乙醚/水(50mL)沉淀所述肽并离心。用冰醋酸复制所述沉淀物并冻干。用水溶解冻干的肽。粗制品纯度约75％。
纯化步骤和分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。
将含肽的溶液加样于制备型C-18柱上并纯化(在40分钟内为在溶剂A中的10％-40％溶剂B)。用C-18分析型柱等度测定各流分的纯度。合并纯化流分，获得上述肽。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-50％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为18.9分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3408.0；实测值3408.9。
实施例47
具有SEQ.ID.NO.40的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu PheIle Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.No.40]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-40％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为17.9分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3294.7；实测值3294.8。
实施例48
具有SEQ.ID.NO.41的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.41]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的29％-36％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为20.7分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3237.6；实测值3240。
实施例49
具有SEQ.ID.NO.42的肽的制备
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.42]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的36％-46％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为15.2分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3251.6；实测值3251.5。
实施例50
具有SEQ.ID.NO.43的肽的制备
His Gly Glu Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu
Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.43]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的36％-46％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为13.1分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3207.6；实测值3208.3。
实施例51
具有SEQ.ID.NO.44的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Ala Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.44]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的35％-45％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为12.8分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3161.5；实测值3163。
实施例52
具有SEQ.ID.NO.45的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ala Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.45]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的36％-46％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为15.2分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3221.6；实测值3222.7。
实施例53
具有SEQ.ID.NO.46的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.46]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的34％-44％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为14.3分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3195.5；实测值3199.4。
实施例54
具有SEQ.ID.NO.47的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ala Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.47]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的38％-48％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为15.7分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3221.6；实测值3221.6。
实施例55
具有SEQ.ID.NO.48的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ala Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.48]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的38％-48％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为18.1分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3180.5；实测值3180.9。
实施例56
具有SEQ.ID.NO.49的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Ala Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.49]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的36％-46％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为17.0分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3180.6；实测值3182.8。
实施例57
具有SEQ.ID.NO.50的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Ala Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.50]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的32％-42％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为14.9分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3195.5；实测值3195.9。
实施例58
具有SEQ.ID.NO.51的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Ala
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.51]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的37％-47％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为17.9分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3179.6；实测值3179.0。
实施例59
具有SEQ.ID.NO.52的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Ala Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.52]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的37％-47％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为14.3分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3179.6；实测值3180.0。
实施例60
具有SEQ.ID.NO.53的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Ala Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.53]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的37％-47％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为13.7分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3179.6；实测值3179.0。
实施例61
具有SEQ.ID.NO.54的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Ala Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.54]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的35％-45％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为14.0分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3209.6；实测值3212.8。
实施例62
具有SEQ.ID.NO.55的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Ala Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.55]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的38％-48％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为14.3分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3152.5；实测值3153.5。
实施例63
具有SEQ.ID.NO.56的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Ala Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.56]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的35％-45％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为12.1分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3195.5；实测值3197.7。
实施例64
具有SEQ.ID.NO.57的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Ala Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.57]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的38％-48％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为10.9分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3179.6；实测值3180.5。
实施例65
具有SEQ.ID.NO.58的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Ala Leu Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.58]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的32％-42％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为17.5分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3161.5；实测值3163.0。
实施例66
具有SEQ.ID.NO.59的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Ala Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.59]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的32％-42％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为19.5分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3195.5；实测值3199。
实施例67
具有SEQ.ID.NO.60的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Ala Asn-NH2[SEQ.ID.NO.60]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的38％-48％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为14.5分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3180.5；实测值3183.7。
实施例68
具有SEQ.ID.NO.61的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Ala-NH2[SEQ.ID.NO.61]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸NBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的34％-44％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为22.8分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3194.6；实测值3197.6。
实施例69
具有SEQ.ID.NO.62的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro-NH2[SEQ.ID.NO.62]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4099.6。
实施例70
具有SEQ.ID.NO.63的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro-NH2[SEQ.ID.NO.63]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4042.5。
实施例71
具有SEQ.ID.NO.64的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro-NH2[SEQ.ID.No.64]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4002.4。
实施例72
具有SEQ.ID.NO.65的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro-NH2[SEQ.ID.No.65]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3945.4。
实施例73
具有SEQ.ID.NO.66的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro-NH2[SEQ.ID.NO.66]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3905.3。
实施例74
具有SEQ.ID.NO.67的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro-NH2[SEQ.ID.No.67]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3848.2。
实施例75
具有SEQ.ID.NO.68的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala-NH2[SEQ.ID.NO.68]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3808.2。
实施例76
具有SEQ.ID.NO.69的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala-NH2[SEQ.ID.NO.69]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3751.1。
实施例77
具有SEQ.ID.NO.70的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly-NH2[SEQ.ID.NO.70]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3737.1。
实施例78
具有SEQ.ID.NO.71的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly-NH2[SEQ.ID.NO.71]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3680.1。
实施例79
具有SEQ.ID.NO.72的肽的制备
HiS Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser-NH2[SEQ.ID.NO.72]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3680.1。
实施例80
具有SEQ.ID.NO.73的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser-NH2[SEQ.ID.NO.73]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3623.0。
实施例81
具有SEQ.ID.NO.74的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser-NH2[SEQ.ID.NO.74]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3593.0。
实施例82
具有SEQ.ID.NO.75的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser-NH2[SEQ.ID.NO.75]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3535.9。
实施例83
具有SEQ.ID.NO.76的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro-NH2[SEQ.ID.NO.76]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3505.94。
实施例84
具有SEQ.ID.NO.77的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro-NH2[SEQ.ID.NO.77]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3448.8。
实施例85
具有SEQ.ID.NO.78的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly-
NH2[SEQ.ID.NO.78]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3351.7。
实施例86
具有SEQ.ID.NO.79的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly-NH2
[SEQ.ID.NO.79]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3351.8。
实施例87
具有SEQ.ID.NO.80的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly-NH2
[SEQ.ID.NO.80]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3294.7。
实施例88
具有SEQ.ID.NO.81的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
tPro Ser Ser Gly Ala tPro tPro tPro-NH2[SEQ.ID.NO.81]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。残基37、36和31需要进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4197.1。
实施例89
具有SEQ.ID.NO.82的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala tPro tPro tPro-NH2[SEQ.ID.NO.82]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。残基37、36和31需要进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4179.1。
实施例90
具有SEQ.ID.NO.83的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
NMeala Ser Ser Gly Ala Pro Pro-NH2[SEQ.ID.NO.83]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。残基36和31需要进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3948.3。
实施例91
具有SEQ.ID.NO.84的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
NMeala Ser Ser Gly Ala NMeala Nmeala-NH2[SEQ.ID.NO.84]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。残基36和31需要进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3840.1。
实施例92
具有SEQ.ID.NO.85的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
hPro Ser Ser Gly Ala hPro hPro-NH2[SEQ.ID.NO.85]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。残基36和31需要进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4050.1。
实施例93
具有SEQ.ID.NO.86的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Mer Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
hPro Ser Ser Gly Ala hPro-NH2[SEQ.ID.NO.86]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。残基31需要进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3937.1。
实施例94
具有SEQ.ID.NO.87的肽的制备
Arg Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala-NH2[SEQ.ID.NO.87]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3827.2。
实施例95
具有SEQ.ID.NO.88的肽的制备
His Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly-
NH2[SEQ.ID.NO.88]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3394.8。
实施例96
具有SEQ.ID.NO.89的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Naphthylala Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln
Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-
NH2[SEQ.ID.NO.89]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3289.5。
实施例97
具有SEQ.ID.NO.90的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.90]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3280.7。
实施例98
具有SEQ.ID.NO.91的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Thr Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.91]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3294.7。
实施例99
具有SEQ.ID.NO.92的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Lys Gln Met Ala
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.92]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3250.7。
实施例100
具有SEQ.ID.NO.93的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp pentylgly Ser Lys Gln
Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-
NH2[SEQ.ID.NO.93]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3253.5。
实施例101
具有SEQ.ID.NO.94的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Naphthylala Ile Glu Phe Leu Lys Asn-
NH2[SEQ.ID.NO.94]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3289.5。
实施例102
具有SEQ.ID.NO.95的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe tButylgly Glu Trp Leu Lys Asn-NH2
[SEQ.ID.NO.95]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3183.4。
实施例103
具有SEQ.ID.NO.96的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Asp Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.96]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3237.6。
实施例104
具有SEQ.ID.NO.97的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser-NH2[SEQ.ID.NO.97]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3637.9。
实施例105
具有SEQ.ID.NO.98的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly-NH2
[SEQ.ID.NO.98]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3309.7。
实施例106
具有SEQ.ID.NO.99的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
hPro Ser Ser Gly Ala hPro hPro-NH2[SEQ.ID.NO.99]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例46的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。残基36和3 1需要进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3711.1。
实施例107
相当于上述SEQ.ID.NO.7、40-61、68-75、78-80和87-98的C末
端酰胺序列的C末端羧酸肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在所谓的Wang树脂(对烷氧基苄醇树脂(Bachem，0.54mmole/g)上装配合成具有SEQ.ID.NO.7、40-61、68-75、78-80和87-98的序列的肽，以类似于实施例46的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析获得实验测定的(M)。
实施例108
相当于上述SEQ.ID.NO.62-67、76、77、81-86和99的C末端酰
胺序列的C末端羧酸肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在2-氯三苯甲基氯树脂(200-400目)、2％DVB(Novabiochem，0.4-1.0mmole/g)上装配合成具有SEQ.ID.NO.62-67、76、77、81-86和99的序列的肽，以类似于实施例46的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析获得实验测定的(M)。
实施例109
具有SEQ.ID.NO.100的肽的制备
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.100]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽。一般来说，整个合成中使用一个偶联循环，而且利用Fast Moc(HBTU活化)化学。应用哌啶使延长的肽链去保护(去除Fmoc基团)。最后按照标准方法(裂解技术介绍，Applied Biosystems，Inc.)应用三乙基硅烷(0.2mL)、乙二硫醇(0.2mL)、茴香醚(0.2mL)、水(0.2mL)和三氟乙酸(15mL)的混合物使完成合成的肽树脂去保护。用乙醚/水(50mL)沉淀所述肽并离心。用冰醋酸复制所述沉淀物并冻干。用水溶解冻干的肽。粗制品纯度约75％。
纯化步骤和分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。
将含肽的溶液加样于制备型C-18柱上并纯化(在40分钟内为在溶剂A中的10％-40％溶剂B)。用C-18分析型柱等度测定各流分的纯度。合并纯化流分，获得上述肽。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为19.2分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3171.6；实测值3172。
实施例110
具有SEQ.ID.NO.101的肽的制备
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.101]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的36％-46％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为14.9分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3179.6；实测值3180。
实施例111
具有SEQ.ID.NO.102的肽的制备
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.102]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的37％-47％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为12.2分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3251.6；实测值3253.3。
实施例112
具有SEQ.ID.NO.103的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.103]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的35％-45％的溶剂B)获得产品肽，观测到其保留时间为16.3分钟。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3193.6；实测值3197。
实施例113
具有SEQ.ID.NO.104的肽的制备
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.No.104]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3228.6。
实施例114
具有SEQ.ID.NO.105的肽的制备
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.No.105]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3234.7。
实施例115
具有SEQ.ID.NO.106的肽的制备
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2
[SEQ.ID.NO.106]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3308.7。
实施例116
具有SEQ.ID.NO.107的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.107]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3250.7。
实施例117
具有SEQ.ID.NO.108的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.108]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3252.6。
实施例118
具有SEQ.ID.NO.109的肽的制备
Ala Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.109]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3200.6。
实施例119
具有SEQ.ID.NO.110的肽的制备
Ala Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.110]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3143.5。
实施例120
具有SEQ.ID.NO.111的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.111]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3214.6。
实施例121
具有SEQ.ID.NO.112的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.112]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3157.5。
实施例122
具有SEQ.ID.NO.113的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.113]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3184.6。
实施例123
具有SEQ.ID.NO.114的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.114]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3127.5。
实施例124
具有SEQ.ID.NO.115的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr NaphthylAla Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln
Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-
NH2[SEQ.ID.NO.115]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3266.4。
实施例125
具有SEQ.ID.NO.116的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Naphthylala Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln
Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-
NH2[SEQ.ID.NO.116]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3209.4。
实施例126
具有SEQ.ID.NO.117的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Ser Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.117]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3200.6。
实施例127
具有SEQ.ID.NO.118的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Ser Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.118]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3143.5。
实施例128
具有SEQ.ID.NO.119的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ala Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.119]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3198.6。
实施例129
具有SEQ.ID.NO.120的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ala Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.120]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3141.5。
实施例130
具有SEQ.ID.NO.121的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.121]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3170.6。
实施例131
具有SEQ.ID.NO.122的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.122]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3113.5。
实施例132
具有SEQ.ID.NO.123的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.123]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3228.6。
实施例133
具有SEQ.ID.NO.124的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.124]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3171.6。
实施例134
具有SEQ.ID.NO.125的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.125]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3172.5。
实施例135
具有SEQ.ID.NO.126的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.126]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3115.4。
实施例136
具有SEQ.ID.NO.127的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Pentylgly Ser Lys Gln
Met Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-
NH2[SEQ.ID.NO.127]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3230.4。
实施例137
具有SEQ.ID.NO.128的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Pentylgly Ser Lys Gln
Leu Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-
NH2[SEQ.ID.NO.128]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3198.6。
实施例138
具有SEQ.ID.NO.129的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ala Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.129]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3141.5。
实施例139
具有SEQ.ID.NO.130的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ala Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.130]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3157.5。
实施例140
具有SEQ.ID.NO.131的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ala Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.131]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3100.4。
实施例141
具有SEQ.ID.NO.132的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ala Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.132]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3157.6。
实施例142
具有SEQ.ID.NO.133的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Ala Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.133]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3100.5。
实施例143
具有SEQ.ID.NO.134的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Ala Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.134]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3100.5。
实施例144
具有SEQ.ID.NO.135的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Ala Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.135]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3154.5。
实施例145
具有SEQ.ID.NO.136的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Ala Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.136]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3115.5。
实施例146
具有SEQ.ID.NO.137的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln
Pentylgly Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu
Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.137]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3212.4。
实施例147
具有SEQ.ID.NO.138的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln
Pentylgly Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu
Lys Asn-NH2[SEQ.ID.NO.138]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3173.4。
实施例148
具有SEQ.ID.NO.139的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Ala
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.139]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3156.6。
实施例149
具有SEQ.ID.NO.140的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Ala
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.140]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3099.5。
实施例150
具有SEQ.ID.NO.141的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Ala Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.141]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3156.6。
实施例151
具有SEQ.ID.NO.142的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Ala Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.142]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3099.5。
实施例152
具有SEQ.ID.NO.143的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Ala Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.143]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3156.6。
实施例153
具有SEQ.ID.NO.144的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu ser Lys Gln Leu Glu
Glu Ala Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.144]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3099.5。
实施例154
具有SEQ.ID.NO.145的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Ala Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.145]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3186.6。
实施例155
具有SEQ.ID.NO.146的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Ala Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.146]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3129.5。
实施例156
具有SEQ.ID.NO.147的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Ala Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.147]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3129.5。
实施例157
具有SEQ.ID.NO.148的肽的制备
Ala Gly Asp GlyThr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Ala Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.148]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3072.4。
实施例158
具有SEQ.ID.NO.149的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Ala Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.149]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3172.5。
实施例159
具有SEQ.ID.NO.150的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Ala Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.150]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3115.5。
实施例160
具有SEQ.ID.NO.151的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Naphthylala Ile Glu Trp Leu Lys Asn-
NH2[SEQ.ID.NO.151]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3266.4。
实施例161
具有SEQ.ID.NO.152的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Naphthylala Ile Glu Phe Leu Lys Asn-
NH2[SEQ.ID.NO.152]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3209.4。
实施例162
具有SEQ.ID.NO.153的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Val Glu Trp Leu LysAsn-NH2[SEQ.
ID.NO.153]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3200.6。
实施例163
具有SEQ.ID.NO.154的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Val Glu Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.154]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3143.5。
实施例164
具有SEQ.ID.NO.155的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Al a Val Arg Leu Phe tButylgly Glu Trp Leu Lys Asn-NH2
[SEQ.ID.NO.155]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3216.5。
实施例165
具有SEQ.ID.NO.156的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe tButylgly Glu Phe Leu Lys Asn-NH2
[SEQ.ID.NO.156]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3159.4。
实施例166
具有SEQ.ID.NO.157的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Asp Trp Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.157]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3200.6。
实施例167
具有SEQ.ID.NO.158的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Asp Phe Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.158]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3143.5。
实施例168
具有SEQ.ID.NO.159的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Ala Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.159]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3099.5。
实施例169
具有SEQ.ID.NO.160的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Ala Leu Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.160]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3081.4。
实施例170
具有SEQ.ID.NO.161的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Ala Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.161]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3172.5。
实施例171
具有SEQ.ID.NO.162的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Ala Lys Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.162]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3115.5。
实施例172
具有SEQ.ID.NO.163的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Ala Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.163]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3157.5。
实施例173
具有SEQ.ID.NO.164的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Ala Asn-NH2[SEQ.
ID.NO.164]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3100.4。
实施例174
具有SEQ.ID.NO.165的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Ala-NH2[SEQ.
ID.NO.165]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3171.6。
实施例175
具有SEQ.ID.NO.166的肽的制备
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Lau Phe Ile Glu Phe Leu Lys Ala-NH2[SEQ.
ID.NO.166]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3114.5。
实施例176
具有SEQ.ID.NO.167的肽的制备
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro-NH2[SEQ.ID.NO.167]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4033.5。
实施例177
具有SEQ.ID.NO.168的肽的制备
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro-NH2[SEQ.ID.NO.168]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3984.4。
实施例178
具有SEQ.ID.NO.169的肽的制备
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro-NH2[SEQ.ID.NO.169]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4016.5。
实施例179
具有SEQ.ID.NO.170的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro-NH2[SEQ.ID.NO.170]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3861.3。
实施例180
具有SEQ.ID.NO.171的肽的制备
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro-NH2[SEQ.ID.NO.171]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3746.1。
实施例181
具有SEQ.ID.NO.172的肽的制备
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala-NH2[SEQ.ID.NO.172]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3742.1。
实施例182
具有SEQ.ID.NO.173的肽的制备
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala-NH2[SEQ.ID.NO.173]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3693.1。
实施例183
具有SEQ.ID.NO.174的肽的制备
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly-NH2[SEQ.ID.NO.174]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3751.2。
实施例184
具有SEQ.ID.NO.175的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser-NH2[SEQ.ID.NO.175]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3634.1。
实施例185
具有SEQ.ID.NO.176的肽的制备
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser-NH2[SEQ.ID.NO.176]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3526.9。
实施例186
具有SEQ.ID.NO.177的肽的制备
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser-NH2[SEQ.ID.NO.177]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3477.9。
实施例187
具有SEQ.ID.NO.178的肽的制备
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro-NH2[SEQ.ID.NO.178]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3519.9。
实施例188
具有SEQ.ID.NO.179的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly-
NH2[SEQ.ID.NO.179]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3307.7。
实施例189
具有SEQ.ID.NO.180的肽的制备
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly-NH2
[SEQ.ID.NO.180]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3186.5。
实施例190
具有SEQ.ID.NO.181的肽的制备
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
tPro Ser Ser Gly Ala tPro tPro tPro-NH2[SEQ.ID.No.181]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。残基37、36和31时需要进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4121.1。
实施例191
具有SEQ.ID.NO.182的肽的制备
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala tPro tPro tPro-NH2[SEQ.ID.NO.182]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。残基37、36和31需要进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4173.2。
实施例192
具有SEQ.ID.NO.183的肽的制备
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
NMeala Ser Ser Gly Ala NMeala NMeala-NH2[SEQ.ID.NO.183]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。残基36和31需要进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3796.1。
实施例193
具有SEQ.ID.NO.184的肽的制备
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
hPro Ser Ser Gly Ala hPro-NH2 [SEQ.ID.NO.184]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。残基31需要进行2次偶联反应。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3871.1。
实施例194
具有SEQ.ID.NO.185的肽的制备
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala-NH2[SEQ.ID.NO.185]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3750.2。
实施例195
具有SEQ.ID.NO.186的肽的制备
His Gly Asp Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly-
NH2[SEQ.ID.NO.186]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值3408.8。
实施例196
具有SEQ.ID.NO.187的肽的制备
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser-NH2[SEQ.ID.NO.187]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4120.6。
实施例197
具有SEQ.ID.NO.188的肽的制备
Ala Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu ser Lys Gln Leu Glu
Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser-NH2[SEQ.ID.NO.188]
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在4-(2’-4’-二甲氧基苯基)-Fmoc氨基甲基苯氧基乙酰胺正亮氨酸MBHA树脂(Novabiochem，0.55mmole/g)上装配合成上述酰胺肽，以类似于实施例109的方法从所述树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析(M)：计算值4005.5。
实施例198
相当于具有SEQ.ID.NO.100-166、172-177、179-180和185-188的
肽的以上C末端酰胺序列的C末端羧酸肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在所谓的Wang树脂(对烷氧基苄醇树脂(Bachem，0.54mmole/g)上装配合成相当于酰胺化SEQ.ID.NO.100-166、172-177、179-180和185-188的C末端羧酸肽，以类似于实施例109的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析获得实验测定的(M)。
实施例199
相当于具有SEQ.ID.NO.167-171、178和181-184的肽的以上C末
端酰胺序列的C末端羧酸肽的制备
采用Fmoc-保护的氨基酸(Applied Biosystems，Inc.)在2-氯三苯甲基氯树脂(200-400目)、2％DVB(Novabiochem，0.4-1.0mmole/g)上装配合成相当于酰胺化SEQ.ID.NO.167-171、178和181-184的C末端羧酸肽，以类似于实施例109的方法从树脂裂解、去保护以及纯化肽。分析中使用溶剂A(0.1％TFA的水溶液)和溶剂B(0.1％TFA的ACN)。然后对冻干的肽进行分析型RP-HPLC(在30分钟内的梯度为在溶剂A中的30％-60％的溶剂B)以测定所述产品肽的保留时间。电子喷雾质谱分析获得实验测定的(M)。
实施例A-E
使用的试剂
GLP-1[7-36]NH2(GLP-1)购自Bachem(Torrance，CA)。所有其它肽用合成方法如本文描述的方法制得。所有化学物质为最高工业级。cAMP SPA免疫测定购自Amersham。放射配体购自New EnglandNuclear(Boston，MA)。RINm5f细胞(American Type Tissue Collection，Rockville，MD)培养于含10％胎牛血清和2mM L-谷氨酰胺的DME/F12培养基中。细胞培养于37℃以及5％二氧化碳/95％湿化空气下，每2-3天更换一次培养基。细胞生长至融合时，收获细胞并用Polytron匀浆器匀浆。细胞匀浆冰冻保存于-70℃备用。
实施例A-GLP-1受体结合研究
受体结合通过测量从RINm5f膜置换的[125I]GLP-1或[125I]exendin(9-39)而进行评价。检测缓冲液于20mM HEPES，pH 7.4中含有5μg/rl苯丁抑制素、1μg/ml磷酰二肽、1mg/ml牛血清白蛋白(fraction V)、1mg/ml杆菌肽和1mM氯化镁。为了检测结合情况，使30μg膜蛋白(Bradford蛋白测定)重悬浮于200μl检测缓冲液中，使其在96孔滤膜底(filter-bottom)板(Nagle Nunc，Rochester，NY)中于23℃下与60pM[125I]GLP-1或[125I]exendin(9-39)和未标记的肽温育120分钟。采用Tomtec Mach II板收集器(Wallac Inc.，Gaithersburg，MD)，以冷的磷酸缓冲盐水，pH 7.4通过聚乙二亚胺处理的GF/B玻璃纤维滤膜(WallacInc.，Gaithersburg，MD)快速过滤而中止温育。干燥滤膜，与闪烁剂混合，用Betaplate液体闪烁计数器(Wallac Inc.)检测放射活性。
以10-6M至10-12M浓度范围的6个稀释度对肽样品以复点进行检测，获得效应曲线。样品的生物活性表示为IC50值，IC50值是采用利用4-参数逻辑方程(Prizm，GraphPAD Software)的迭代曲线拟合程序根据原始数据计算而得。
实施例B-环化酶活化研究
检测缓冲液在50mM HEPES，pH 7.4中含有10μMGTP、0.75mM ATP、2.5mM氯化镁、0.5mM磷酸肌苷、12.5U/ml肌苷激酶、0.4mg/ml抑酶肽、1μM IBMX。在96孔滤膜底板(Millipore Corp.，Bedford，MA)中用100ml检测缓冲液混合膜和肽。于37℃温育20分钟后，用Millipore真空复式接头使上清液过滤到新的96孔板中从而中止所述检测。用SPA免疫测定定量上清液中的cAMP含量。以10-6M至10-12M浓度范围的7个稀释度对肽样品以3个复点进行检测，获得效应曲线。具体样品的生物活性表示为如上所述计算而得的EC50值。
实施例C-db/db小鼠血糖水平的测定
至少3月龄的C57BLKS/J-m-db小鼠用于本研究。小鼠得自Jackson Laboratory，使用前让其适应环境至少1周。小鼠分组饲养，每组10只，温度为22℃±1℃，12:12光:黑暗周期，6a.m.开始光照。所有动物禁食2小时，然后取基础血样品。用metophane轻度麻醉后，通过眼睛穿刺从每只小鼠取约70μl血。收集基础血样品后，为了检测血浆葡萄糖浓度，所有动物皮下注射溶媒(10.9％NaCl)、溶解于溶媒的exendin-4或受试化合物(1μg)。注射后1小时整再用相同方法取血，并检测血浆葡萄糖浓度。计算每只动物相对于基础值的血浆值变化(％)。
实施例D-db/db小鼠血糖水平的剂量效应测定
至少3月龄的C57BLKS/J-m-db/db小鼠用于本研究。小鼠得自Jackson Laboratory，使用前让其适应环境至少1周。小鼠分组饲养，每组10只，温度为22℃±1℃，12:12光:黑暗周期，6a.m.开始光照。所有动物禁食2小时，然后取基础血样品。用metophane轻度麻醉后，通过眼睛穿刺从每只小鼠取约70μl血。收集基础血样品后，为了检测血浆葡萄糖浓度，所有动物皮下注射溶媒、所示浓度的exendin-4或受试化合物。注射后1小时整再用相同方法取血，并检测血浆葡萄糖浓度。计算每只动物相对于基础值的血浆值变化(％)，并采用Graphpad PrizmTM软件评价剂量依赖关系。
实施例E-胃排空
进行或可进行以下研究以验证exendin-4和/或exendin激动剂化合物对大鼠胃排空的影响。本实验按照改良的Scarpignato等， Arch.Int. Pharmacodyn.Ther.246：286-94，1980的方法进行。使用雄性HarlanSprague Dawley(HSD)大鼠。所有动物饲养于22.7±0.8℃、12:12小时光:黑暗周期(在光照周期中进行实验)环境下，随意进食和饮水(Diet LM-485，Teklad，Madison，WI)。按照标准肽合成法合成exendin-4。按照实施例14所述制备exendin-4。在禁食约20小时后用如下所述的方法测定胃排空，以保证胃内没有干扰分光光度的吸光度测量的食糜。
对清醒大鼠管饲1.5ml含1.5％甲基纤维素(M-0262，SigmaChemical Co.，St Louis，MO)和0.05％酚红指示剂的无热量凝胶。管饲后20分钟，用5％氟烷麻醉大鼠，暴露胃，用动脉夹夹住幽门和食管下部括约肌，将其取出并通入配制成固定体积的碱性溶液。胃内容物可从于560nm波长测得的碱性溶液酚红强度知道。在7只大鼠的另一实验中，切除胃和小肠并通入碱性溶液。在管饲20分钟内从上消化道能够回收的酚红量为89±4％；与肠腔表面结合不能回收的染料可解释所述平衡。为了解释最大染料回收小于100％，20分钟后滞留的胃内容物表示为从相同实验中管饲后立即处死的对照大鼠回收的胃内容物的百分率。滞留的胃内容物百分率＝(20分钟的吸光度)/(0分钟的吸光度)×100。
除了本文所示和描述的这些内容之外，本发明的各种改进对于本领域技术人员而言可由前面的描述显而易见，而且它们属于以下的权利要求书范围。
序列表
<110>Amylin Pharmaceuticals.Inc.
      Young.Andrew et al.
<120>新型exendin激动剂制剂及其给药方法
<130>030639.0027.CN(249/146)
<140>PCT US 00/00902
<141>2000-01-14
<150>US 60/116,380
<151>1999-01-14
<150>US 60/132,017
<151>1999-04-30
<150>US 60/175,365
<151>2000-01-10
<160>188
<170>PatentIn Ver.2.1
<210>1
<211>39
<212>PRT
<213>Heloderma horridum
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>1
His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>2
<211>39
<212>PRT
<213>Heloderma suspectum
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>2
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>3
<211>40
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(1)
<223>His，Arg或Thr
<220>
<221>变异体
<222>(2)
<223>Ser，Gly，Ala或Thr
<220>
<221>变异体
<222>(3)
<223>Asp或Glu
<220>
<221>变异体
<222>(6)
<223>Phe，Tyr或萘基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(7)
<223>Thr或Ser
<220>
<221>变异体
<222>(8)
<223>Ser或Thr
<220>
<221>变异体
<222>(9)
<223>Asp或Glu
<220>
<221>变异体
<222>(10)
<223>Leu，Ile，Val，戊基甘氨酸或Met
<220>
<221>变异体
<222>(14)
<223>Leu，Ile，戊基甘氨酸，Val或Met
<220>
<221>变异体
<222>(22)
<223>Phe，Tyr或萘基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(23)
<223>Ile，Val，Leu，戊基甘氨酸，叔丁基甘氨酸或
     Met
<220>
<221>变异体
<222>(24)
<223>Glu或Asp
<220>
<221>变异体
<222>(25)
<223>Trp，Phe，Tyr或萘基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>独立为Pro，高脯氨酸，3-羟基脯氨酸，
4-羟基脯氨酸，硫脯氨酸， N-烷基甘氨酸，
N-烷基戊基甘氨酸或N-烷基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>独立为Pro，高脯氨酸，3-羟基脯氨酸，
4-羟基脯氨酸，硫脯氨酸，N-烷基甘氨酸，
N-烷基戊基甘氨酸或N-烷基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(39)
<223>Ser，Thr或Tyr
<220>
<221>变异体
<222>(40)
<223>-OH或NH2，前提是所述化合物不具有SEQ.ID.N0.1或2的分子式.
<400>3
Xaa Xaa Xaa Gly Thr Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ser Lys Gln Xaa Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
         35                  40
<210>4
<211>29
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(1)
<223>His，Arg或Tyr
<220>
<221>变异体
<222>(2)
<223>Ser，Gly，Ala或Thr
<220>
<221>变异体
<222>(3)
<223>Asp或Glu
<220>
<221>变异体
<222>(5)
<223>Ala或Thr
<220>
<221>变异体
<222>(6)
<223>Ala，Phe，Tyr或萘基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(7)
<223>Thr或Ser
<220>
<221>变异体
<222>(8)
<223>Ala，Ser或Thr
<220>
<221>变异体
<222>(9)
<223>Asp或Glu
<220>
<221>变异体
<222>(10)
<223>Ala，Leu，Ile，Val，戊基甘氨酸或Met
<220>
<221>变异体
<222>(11)
<223>Ala或Ser
<220>
<221>变异体
<222>(12)
<223>Ala或Lys
<220>
<221>变异体
<222>(13)
<223>Ala或Gln
<220>
<221>变异体
<222>(14)
<223>Ala，Leu，Ile，戊基甘氨酸，Val或Met
<220>
<221>变异体
<222>(15)..(17)
<223>Ala或Glu
<220>
<221>变异体
<222>(19)
<223>Ala或Val
<220>
<221>变异体
<222>(20)
<223>Ala或Arg
<220>
<221>变异体
<222>(21)
<223>Ala或Leu
<220>
<221>变异体
<222>(22)
<223>Ala，Phe，Tyr或萘基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(23)
<223>Ile，Val，Leu，戊基甘氨酸，叔丁基甘氨酸或
     Met
<220>
<221>变异体
<222>(24)
<223>Ala，Glu或Asp
<220>
<221>变异体
<222>(25)
<223>Ala，Trp，Phe，Tyr或萘基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(26)
<223>Ala或Leu
<220>
<221>变异体
<222>(27)
<223>Ala或Lys
<220>
<221>变异体
<222>(28)
<223>Ala或Asn
<220>
<221>变异体
<222>(29)
<223>OH，NH2，Gly-OH，Gly-NH2，Gly-Gly-OH，Gly-Gly-NH2
以及详见说明书
<400>4
Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
  1               5                  10                  15
Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
             20                  25
<210>5
<211>29
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(1)
<223>His，Arg，Tyr，Ala，正缬氨酸，Val或正亮氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(2)
<223>Ser，Gly，Ala或Thr
<220>
<221>变异体
<222>(3)
<223>Ala，Asp或Glu
<220>
<221>变异体
<222>(4)
<223>Ala，正缬氨酸，Val，正亮氨酸或Gly
<220>
<221>变异体
<222>(5)
<223>Ala或Thr
<220>
<221>变异体
<222>(6)
<223>Phe，Tyr或萘基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(7)
<223>Thr或Ser
<220>
<221>变异体
<222>(8)
<223>Ala，Ser或Thr
<220>
<221>变异体
<222>(9)
<223>Ala，正缬氨酸，Val，正亮氨酸，Asp或Glu
<220>
<221>变异体
<222>(10)
<223>Ala，Leu，Ile，Val，戊基甘氨酸或Met
<220>
<221>变异体
<222>(11)
<223>Ala或Ser
<220>
<221>变异体
<222>(12)
<223>Ala或Lys
<220>
<221>变异体
<222>(13)
<223>Ala或Gln
<220>
<221>变异体
<222>(14)
<223>Ala，Leu，Ile，戊基甘氨酸，Val或Met
<220>
<221>变异体
<222>(15)..(17)
<223>Ala或Glu
<220>
<221>变异体
<222>(19)
<223>Ala或Val
<220>
<221>变异体
<222>(20)
<223>Ala或Arg
<220>
<221>变异体
<222>(21)
<223>Ala或Leu
<220>
<221>变异体
<222>(22)
<223>Phe，Tyr或萘基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(23)
<223>Ile，Val，Leu，戊基甘氨酸，叔丁基甘氨酸或
     Met
<220>
<221>变异体
<222>(24)
<223>Ala，Glu或Asp
<220>
<221>变异体
<222>(25)
<223>Ala，Trp，Phe，Tyr或萘基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(26)
<223>Ala或Leu
<220>
<221>变异体
<222>(27)
<223>Ala或Lys
<220>
<221>变异体
<222>(28)
<223>Ala或Asn
<220>
<221>变异体
<222>(29)
<223>OH，NH2，Gly-OH，Gly-NH2，Gly-Gly-OH，Gly-Gly-NH2
以及详见说明书
<400>5
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
  1               5                  10                  15
Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa
             20                  25
<210>6
<211>30
<212>PRT
<213>合成构建物
<400>6
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
             20                  25                  30
<210>7
<211>30
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(30)
<223>酰胺化，位置30为Gly-NH2
<400>7
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
             20                  25                  30
<210>8
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>8
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Ala Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>9
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>9
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>10
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>10
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>11
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>11
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>12
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>12
Tyr Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>13
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>AMIDATl0N，Position 39 is Tyr-NH2
<400>13
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Tyr
         35
<210>14
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>14
His Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>15
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<220>
<221>变异体
<222>(6)
<223>Xaa为萘基丙氨酸
<400>15
His Gly Glu Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>16
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>16
His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>17
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>17
His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Thr Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>18
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>18
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Thr Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>19
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>19
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>20
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<220>
<221>变异体
<222>(10)
<223>Xaa为戊基甘氨酸
<400>20
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>21
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<220>
<221>变异体
<222>(10)
<223>Xaa为戊基甘氨酸
<400>21
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>22
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<220>
<221>变异体
<222>(14)
<223>Xaa为戊基甘氨酸
<400>22
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>23
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<220>
<221>变异体
<222>(14)
<223>Xaa为戊基甘氨酸
<400>23
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>24
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<220>
<221>变异体
<222>(22)
<223>Xaa为萘基丙氨酸
<400>24
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Xaa Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>25
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>25
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Val Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>26
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>26
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Val Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>27
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(23)
<223>位置23的Xaa为叔丁基甘氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>27
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Xaa Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>28
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(23)
<223>位置23的Xaa为叔丁基甘氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>28
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Xaa Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>29
<21l>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>29
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Asp Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>30
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>30
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>31
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>位置31的Xaa为硫脯氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>位置36、37和38的Xaa为硫脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>31
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa Ser
         35
<210>32
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>位置36、37和38的Xaa为硫脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>32
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa Ser
         35
<210>33
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>位置31的Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>位置36、37和38的Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>33
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa Ser
         35
<210>34
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>位置36、37和38的Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>34
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa Ser
              35
<210>35
<21l>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>位置31的Xaa为硫脯氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>位置36、37和38的Xaa为硫脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>35
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa Ser
         35
<210>36
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>位置31的Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>位置36、37和38的Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>36
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa Ser
         35
<210>37
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>位置31的Xaa为N-甲基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>位置36、37和38的Xaa为N-甲基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>37
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa Ser
         35
<210>38
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>位置36、37和38的Xaa为N-甲基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>38
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa Ser
         35
<210>39
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>位置31的Xaa为N-甲基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>位置36、37和38的Xaa为N-甲基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>39
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa Ser
         35
<210>40
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>40
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>41
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>41
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>42
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>42
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
        20                  25
<210>43
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>43
His Gly Glu Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>44
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>44
His Gly Glu Gly Thr Ala Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>45
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>45
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ala Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>46
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>46
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>47
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>47
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ala Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>48
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>48
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ala Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>49
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>49
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Ala Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>50
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>50
 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Ala Glu Glu
   1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>51
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>51
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Ala Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>52
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>52
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Ala
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>53
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>53
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Ala Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>54
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>54
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Ala Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>55
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>55
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Ala Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>56
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>56
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Ala Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>57
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>57
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Ala Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>58
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>58
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Ala Leu Lys Asn
             20                  25
<210>59
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>59
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Ala Lys Asn
             20                  25
<210>60
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>60
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Ala Asn
             20                  25
<210>61
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Ala-NH2
<400>61
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Ala
             20                  25
<210>62
<211>38
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(38)
<223>酰胺化，位置38为Pro-NH2
<400>62
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro
         35
<210>63
<211>38
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(38)
<223>酰胺化，位置38为Pro-NH2
<400>63
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro
         35
<210>64
<211>37
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(37)
<223>酰胺化，位置37为Pro-NH2
<400>64
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro
         35
<210>65
<211>37
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(37)
<223>酰胺化，位置37为Pro-NH2
<400>65
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro
         35
<210>66
<211>36
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(36)
<223>酰胺化，位置36为Pro-NH2
<400>66
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro
         35
<210>67
<211>36
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(36)
<223>酰胺化，位置36为Pro-NH2
<400>67
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
  1               5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro
         35
<210>68
<211>35
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(35)
<223>酰胺化，位置36为Ala-NH2
<400>68
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  2              5    30
Ser Gly Ala
         35
<210>69
<211>35
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(35)
<223>酰胺化，位置36为Ala-NH2
<400>69
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala
        35
<210>70
<211>34
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(34)
<223>酰胺化，位置34为Gly-NH2
<400>70
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly
<210>71
<211>34
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(34)
<223>酰胺化，位置34为Gly-NH2
<400>71
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly
<210>72
<211>33
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD RES
<222>(33)
<223>酰胺化，位置33为Ser-NH2
<400>72
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser
<210>73
<211>33
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(33)
<223>酰胺化，位置33为Ser-NH2
<400>73
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser
<210>74
<211>32
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(32)
<223>酰胺化，位置32为Ser-NH2
<400>74
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
            20                  25                  30
<210>75
<211>32
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(32)
<223>酰胺化，位置32为Ser-NH2
<400>75
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
<210>76
<211>31
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(31)
<223>酰胺化，位置31为Pro-NH2
<400>76
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro
             20                  25                  30
<210>77
<211>31
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(31)
<223>酰胺化，位置31为Pro-NH2
<400>77
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Ash Gly Gly Pro
             20                  25                  30
<210>78
<211>30
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(30)
<223>酰胺化，位置30为Gly-NH2
<400>78
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
             20                  25                  30
<210>79
<211>29
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(29)
<223>酰胺化，位置29为Gly-NH2
<400>79
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly
             20                  25
<210>80
<211>29
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(29)
<223>酰胺化，位置29为Gly-NH2
<400>80
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe lIe Glu Phe Leu Lys Asn Gly
             20                  25
<210>81
<211>38
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>Xaa为硫脯氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>Xaa为硫脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(38)
<223>酰胺化，位置38为硫脯氨酸-NH2
<400>81
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa
         35
<210>82
<211>38
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>Xaa为硫脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(38)
<223>酰胺化，位置38为硫脯氨酸-NH2
<400>82
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa
         35
<210>83
<211>37
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>Xaa为N-甲基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(37)
<223>酰胺化，位置37为Pro-NH2
<400>83
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro
         35
<210>84
<211>37
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>Xaa为N-甲基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(37)
<223>Xaa为N-甲基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(37)
<223>酰胺化，位置37为N-甲基丙氨酸-NH2
<400>84
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa
         35
<210>85
<211>37
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(37)
<223>Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(37)
<223>酰胺化，位置37为高脯氨酸-NH2
<400>85
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa
         35
<210>86
<211>36
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)
<223>Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(36)
<223>酰胺化，位置36为高脯氨酸-NH2
<400>86
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa
         35
<210>87
<211>35
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(35)
<223>酰胺化，位置36为Ala-NH2
<400>87
Arg Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala
         35
<210>88
<211>30
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(30)
<223>酰胺化，位置30为Gly-NH2
<400>88
His Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
             20                  25                  30
<210>89
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(6)
<223>Xaa为萘基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>89
His Gly Glu Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>90
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>90
His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>91
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>91
His Gly Glu Gly Thr Phe Ser Thr Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>92
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>92
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Lys Gln Met Ala Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>93
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(10)
<223>Xaa为戊基甘氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>93
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>94
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(22)
<223>Xaa为萘基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>94
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Xaa Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>95
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(23)
<223>Xaa是叔丁基甘氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>95
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Xaa Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>96
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>96
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Asp Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>97
<211>33
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(33)
<223>酰胺化，位置33为Ser-NH2
<400>97
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser
<210>98
<211>29
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(29)
<223>酰胺化，位置29为Gly-NH2
<400>98
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly
             20                  25
<210>99
<211>37
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(37)
<223>Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(37)
<223>酰胺化，位置37为高脯氨酸-NH2
<400>99
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa
         35
<210>100
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>100
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>101
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>101
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>102
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>102
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>103
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>103
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>104
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>104
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>105
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>105
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>106
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>106
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>107
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>107
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>108
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>108
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>109
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>109
Ala Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>110
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>110
Ala Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>111
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>111
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>112
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>112
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>113
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>113
Ala Gly Asp Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>114
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>114
Ala Gly Asp Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>115
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(6)
<223>Xaa为萘基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>115
Ala Gly Asp Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>116
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(6)
<223>Xaa为萘基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>116
Ala Gly Asp Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>117
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>117
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Ser Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>118
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>118
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Ser Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>119
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>119
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ala Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>120
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>120
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ala Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10    1              5
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>121
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>121
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>122
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>122
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>123
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>123
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>124
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>124
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Glu Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>125
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>125
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>126
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>126
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>127
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(10)
<223>Xaa为戊基甘氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>127
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>128
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(10)
<223>Xaa为戊基甘氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>128
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>129
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>129
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ala Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>130
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>130
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ala Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>131
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>131
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ala Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>132
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>132
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ala Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>133
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>133
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Ala Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>134
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>134
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Ala Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>135
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>135
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Ala Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>136
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>136
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Ala Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>137
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(14)
<223>Xaa为戊基甘氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>137
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>138
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(14)
<223>Xaa为戊基甘氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>138
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Xaa Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>139
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>139
Ala G1y Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys G1n Met Ala Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>140
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>140
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Ala Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Ash
             20                  25
<210>141
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>141
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Ala
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>142
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>142
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Ala
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>143
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>143
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Ala Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>144
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>144
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Ala Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>145
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>145
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Ala Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>146
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>146
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Ala Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>147
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>147
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Ala Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>148
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>148
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Ala Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>149
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>149
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Ala Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>150
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>150
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Ala Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>151
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(22)
<223>Xaa为萘基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>151
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Xaa Ile Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>152
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(22)
<223>Xaa为萘基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>152
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Xaa Ile Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>153
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>153
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Val Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>154
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>154
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Val Glu Phe Leu Lys Asa
             20                  25
<210>155
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(23)
<223>Xaa是叔丁基甘氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>155
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Xaa Glu Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>156
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(23)
<223>Xaa是叔丁基甘氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>156
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Xaa Glu Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>157
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>157
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Asp Trp Leu Lys Asn
             20                  25
<210>158
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>158
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Asp Phe Leu Lys Asn
             20                  25
<210>159
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>159
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Ala Leu Lys Asn
             20                  25
<210>160
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>160
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Ala Leu Lys Asn
             20                  25
<210>161
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>161
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Ala Lys Asn
             20                  25
<210>162
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>162
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Ala Lys Asn
             20                  25
<210>163
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>163
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Ala Asn
             20                  25
<210>164
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Asn-NH2
<400>164
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Ala Asn
             20                  25
<210>165
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Ala-NH2
<400>165
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Ala
             20                  25
<210>166
<211>28
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(28)
<223>酰胺化，位置28为Ala-NH2
<400>166
Ala Gly Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Ala
             20                  25
<210>167
<211>38
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(38)
<223>酰胺化，位置38为Pro-NH2
<400>167
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro
         35
<210>168
<211>38
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(38)
<223>酰胺化，位置38为Pro-NH2
<400>168
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro
         35
<210>169
<211>37
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(37)
<223>酰胺化，位置37为Pro-NH2
<400>169
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro
         35
<210>170
<211>36
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(36)
<223>酰胺化，位置36为Pro-NH2
<400>170
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro
         35
<210>171
<211>36
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(36)
<223>酰胺化，位置36为Pro-NH2
<400>171
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Ala Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro
         35
<210>172
<211>35
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(35)
<223>酰胺化，位置36为Ala-NH2
<400>172
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala
         35
<210>173
<211>35
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(35)
<223>酰胺化，位置36为Ala-NH2
<400>173
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala
         35
<210>174
<211>34
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(34)
<223>酰胺化，位置34为Gly-NH2
<400>174
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly
<210>175
<211>33
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD RES
<222>(33)
<223>酰胺化，位置33为Ser-NH2
<400>175
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser
<210>176
<211>32
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(32)
<223>酰胺化，位置32为Ser-NH2
<400>176
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
<210>177
<211>32
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(32)
<223>酰胺化，位置32为Ser-NH2
<400>177
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
<210>178
<211>31
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(31)
<223>酰胺化，位置31为Pro-NH2
<400>178
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro
             20                  25                  30
<210>179
<211>30
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(30)
<223>酰胺化，位置30为Gly-NH2
<400>179
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly
             20                  25                  30
<210>180
<211>29
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(29)
<223>酰胺化，位置29为Gly-NH2
<400>180
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                5                   10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly
             20                  25
<210>181
<211>38
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>Xaa为硫脯氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>Xaa为硫脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(38)
<223>酰胺化，位置38为硫脯氨酸-NH2
<400>181
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa Xaa
         35
<210>182
<211>38
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(38)
<223>Xaa为硫脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(38)
<223>酰胺化，位置38为硫脯氨酸-NH2
<400>182
His Gly Glu Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala tPro tPro tPro
         35
<210>183
<211>37
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>Xaa为N-甲基丙氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)..(37)
<223>Xaa为N-甲基丙氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(37)
<223>酰胺化，位置37为N-甲基丙氨酸-NH2
<400>183
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ala Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa Xaa
         35
<210>184
<211>36
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>变异体
<222>(31)
<223>Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>变异体
<222>(36)
<223>Xaa为高脯氨酸
<220>
<221>MOD_RES
<222>(36)
<223>酰胺化，位置36为高脯氨酸-NH2
<400>184
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Xaa Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Xaa
         35
<210>185
<211>35
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(35)
<223>酰胺化，位置36为Ala-NH2
<400>185
His Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala
         35
<210>186
<21l>30
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(30)
<223>酰胺化，位置30为Gly-NH2
<400>186
His Gly Asp Ala Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly
             20                  25                  30
<210>187
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>187
Ala Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35
<210>188
<211>39
<212>PRT
<213>合成构建物
<220>
<221>MOD_RES
<222>(39)
<223>酰胺化，位置39是Ser-NH2
<400>188
Ala Gly Ala Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1                 5                  10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
             20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser
         35

Claims (39)

1.一种药用制剂，该药用制剂适用于多用给药的稳定液体剂型，并包含0.005％至0.4％w/v的exendin-4、缓冲剂、等重量克分子渗透浓度调节剂和0.005％-1.0％w/v的防腐剂，该防腐剂选自间甲酚、酚、苄醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯和对羟基苯甲酸丁酯，所述制剂的pH为3.0至7.0。
2.按照权利要求1的制剂，其中所述稳定液体剂型是一种稳定的胃肠外液体剂型。
3.按照权利要求1或2的制剂，其中所述exendin-4存在的浓度为0.005％至0.05％w/v。
4.按照权利要求1或2的制剂，其中所述exendin-4存在的浓度为0.005％至0.02％w/v。
5.按照权利要求1-4中任一项的制剂，其中所述缓冲剂的浓度为0.02％-0.5％w/v。
6.按照权利要求1-4中任一项的制剂，其中所述缓冲剂为醋酸盐、磷酸盐、柠檬酸盐或谷氨酸盐。
7.按照权利要求6的制剂，其中所述缓冲剂为醋酸盐缓冲剂。
8.按照权利要求1-4中任一项的制剂，其中等重量克分子渗透浓度调节剂的浓度为1.0％-10％w/v。
9.按照权利要求1-4中任一项的制剂，其中等重量克分子渗透浓度调节剂为碳水化合物或多元醇。
10.按照权利要求9的制剂，其中所述多元醇选自山梨醇、甘露醇、肌醇、甘油、木糖醇和聚乙二醇。
11.按照权利要求10的制剂，其中所述多元醇为甘露醇。
12.按照权利要求9的制剂，其中所述碳水化合物选自半乳糖、阿拉伯糖和乳糖。
13.按照权利要求9的制剂，其中所述碳水化合物或多元醇用最高0.9％的盐水代替。
14.按照权利要求1-4中任一项的制剂，其中所述pH为4.0-6.0。
15.按照权利要求1-4中任一项的制剂，其中所述pH为4.0-5.0。
16.按照权利要求1-4中任一项的制剂，其中所述防腐剂为间甲酚。
17.按照权利要求1-4中任一项的制剂，其中该制剂是冻干的。
18.按照权利要求17的制剂，其中所述制剂为包含增量剂的冻干单位剂量制剂或冻干多剂量制剂。
19.按照权利要求18的制剂，其中所述增量剂是等重量克分子渗透浓度调节剂。
20.按照权利要求17的制剂，它还包含表面活性剂。
21.按照权利要求20的制剂，其中所述表面活性剂包括0.1％-1.0％w/v的非离子去垢剂。
22.按照权利要求20的制剂，其中所述表面活性剂为吐温80。
23.一种exendin-4在制备权利要求1-22中任一项的药用制剂的用途，该药物制剂用于治疗I型和II型糖尿病、肥胖症和其它得益于减慢胃排空、降低血浆葡萄糖水平和减少摄取食物的给药疗法的病症。
24.按照权利要求23的用途，其中所述药用制剂配制为每天给予用者1-3次。
25.按照权利要求24的用途，其中所述药用制剂配制为每天给予用者2次。
26.一种exendin-4在制备权利要求1-22中任一项的药用制剂的用途，该药物制剂用于治疗I型和II型糖尿病、肥胖症和其它得益于减慢胃排空、降低血浆葡萄糖水平和减少摄取食物的给药疗法的病症，其中所述药用制剂配制为以0.005μg/kg/剂至0.2μg/kg/剂的剂量给予exendin-4。
27.按照权利要求26的用途，其中所述剂量为0.02μg/kg/剂至0.1μg/kg/剂。
28.按照权利要求26的用途，其中所述剂量为0.05μg/kg/剂至0.1μg/kg/剂。
29.按照权利要求26-28中任一项的用途，其中所述药用制剂配制为每天给予用者1-4次。
30.按照权利要求26-28中任一项的用途，其中所述药用制剂配制为每天给予用者1-2次。
31.一种exendin-4在制备权利要求1-22中任一项的药用制剂的用途，该药物制剂用于增加用者对外源性或内源性胰岛素的敏感性。
32.按照权利要求31的用途，其中所述药用制剂配制为经鼻给药。
33.按照权利要求31的用途，其中所述药用制剂配制为口服给药。
34.按照权利要求31的用途，其中所述药用制剂配制为经肺给药。
35.按照权利要求31的用途，其中所述药用制剂配制为经颊给药。
36.按照权利要求31的用途，其中所述药用制剂配制为经舌下给药。
37.按照权利要求31的用途，其中所述药用制剂配制为经气管内给药。
38.按照权利要求31的用途，其中所述药用制剂配制为通过注射给药。
39.按照权利要求38的用途，其中所述药用制剂配制为通过皮下注射给药。
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