JP2006506386A - 糖尿病の処置 - Google Patents

Abstract

ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを補完する因子群の構成因子を含む、膵島新生療法のための組成物および方法を、徐放性送達および標的器官への局所送達のための処方物、装置および方法とともに提供する。また、哺乳動物において膵島新生を誘導する方法、および哺乳動物において膵島新生を誘導する方法が提供される。さらに、糖尿病を処置するためのキットが提供され、このキットは、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドでない場合に、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴ、容器、ならびに使用のための指示書を含む。

Description

（発明の分野）
本発明は、糖尿病の被験者を、組成物を局所送達および徐放性処方物および方法を用いて、膵島新生療法および免疫抑制剤によって処置する方法および組成物に関する。

（発明の背景）
一般的な病気である糖尿病の重症型は、膵臓のβ細胞からのインシュリン分泌が全くないか、相対的に欠乏していることが原因で生じる。そのため、糖尿病患者は、生死に関わる高血糖（高血糖症）合併症を予防するために、外部からのインシュリン注射に依存している。血糖測定とインシュリン治療（インシュリン集中治療（ｉｎｔｅｎｓｉｖｅ ｉｎｓｕｌｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）という非常に厳格な養生法を忠実に守らない限り、高血糖症に起因する慢性的で長期間にわたる器官損傷合併症を防ぐことはできない。インシュリン集中治療は、インシュリンの過剰投与によって、致命的ともなり得る急性かつ重篤な意識変容状態を伴う急性低血糖症のリスクを増加させる。

アメリカ合衆国の人口中約百万人の人々が、若年性またはＩ型の糖尿病を患っており、毎年約３万件ずつ新たな症例が増加している。さらに、膵臓疲労およびインシュリン欠乏をもたらす可能性があるＩＩ型糖尿病（成人発症型糖尿病またはインシュリン抵抗性糖尿病とも呼ばれる）の病態を有する患者の数が、疫病のレベルで非常に大量かつ急速に増加している。

糖尿病の特徴である異常に高い血糖値（高血糖症）は、治療しないでいると、例えば非治癒性末梢血管潰瘍、失明に至る網膜損傷、腎不全など、さまざまな病的状態を生じる。糖尿病のＩ型もＩＩ型も、患者による血糖値自己測定によって決定した血糖値に応じたインシュリン注射によって処置するが、ＩＩ型患者のすべてがインシュリン療法を必要とするまで進行するとは限らない。典型的には、一日当たり患者によってインシュリンの反復投与が行われる。糖尿病が重篤な病理状態に至るのは、血糖量の厳格な調節を行わなかったことと相関する。

糖尿病の治療法の可能性として、β細胞の機能を回復して、血糖量の変化に応じてインシュリン放出を動的に制御することが考えられる。これは、膵臓移植によって実現可能であるが、この方法は、一般的には、腎不全のために腎臓移植を必要とする糖尿病患者に限られている。また、膵臓移植は、同種移植拒絶および自己免疫による移植膵臓の破壊を防ぐために一生の間免疫抑制を必要とする可能性がある。

最近、単離されたヒト膵島調製物の移植によって、長期間ヒト被験者のインシュリン型糖尿病を逆転させることに成功した。しかし、各レシピエントにつき大量のドナー膵島細胞材料が必要であるため、膵島細胞材料の供給が需要に見合うほど十分ではない。

（要旨）
本発明の特徴は、糖尿病症状を処置する方法であって、膵島新生療法のためにガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、およびガストリンを補完する因子（ＦＡＣＧＩＮＴ）を含む組成物を、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドではない場合に、哺乳動物に治療有効量投与する方法である。

本明細書において、ＦＡＣＧＩＮＴは、以下の群から選択される。グルカゴン様ペプチド１レセプターリガンド、グルカゴン様ペプチド２レセプターリガンド、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）レセプターリガンド、ジペプチジルペプチダーゼＩＶインヒビター、ＲＥＧタンパク質レセプターリガンド、成長ホルモンレセプターリガンド、プロラクチン（ＰＲＬ）レセプターリガンド、インシュリン様成長因子（ＩＧＦ）レセプターリガンド、ＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）レセプターリガンド、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）レセプターリガンド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）レセプターリガンド、トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）レセプターリガンド、ラミニンレセプターリガンド、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）レセプターリガンド、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子レセプターリガンド、神経発育因子（ＮＧＦ）レセプターリガンド、膵島新生関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）レセプターリガンド、アクチビン−Ａレセプターリガンド、血管上皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）レセプターリガンド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）レセプターリガンド、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）レセプターリガンド、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）レセプターリガンド、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）レセプターリガンド、およびセクレチンレセプターリガンド。

本明細書において、「糖尿病」とは、インシュリンの欠乏、インシュリンに対する抗体産生、または血糖の過剰という生理的な指標を意味する。糖尿病の例は、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、妊娠性糖尿病、および前糖尿病症状であるが、これらに限定されるものではない。本明細書において、「哺乳動物」とは、哺乳綱のあらゆる構成生物という通常の意味をもち、ヒトを含む。

関連する実施形態において、ＦＡＣＧＩＮＴは、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）レセプターリガンド、グルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ−２）レセプターリガンド、または、成長ホルモンのレセプターリガンドファミリーのリガンドであり、また、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）、胎盤性ラクトゲン（ＰＬ）、またはプロラクチン（ＰＲＬ）などの成長ホルモン、またはエキセンジン−４（ｅｘｅｎｄｉｎ−４）などのエキセンジンでもよい。

本発明の別の特徴は、糖尿病を処置する方法であって、複数の細胞をエキソビボで、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドでない場合に、少なくとも１つのＦＡＣＧＩＮＴおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含む組成物に接触させること、および、それらの細胞を、それらを必要とする哺乳動物に投与して、糖尿病を処置する工程を包含する方法を提供する。該方法の１つの実施形態において、細胞は自家性すなわち被験者由来のものである。あるいは、細胞は、同種の別の個体、またさらには異種に由来する。細胞をエキソビボで使用する方法においては、細胞は膵管細胞でもよい。膵臓細胞は、膵島前駆細胞の供給源である。該方法のさらなる実施形態は、移植段階の前に、細胞をエキソビボで組成物によって処理する工程を包含する。さらに、関連する方法は、この接触段階の前に、細胞をエキソビボで培養する工程を包含する。

一般的に、「投与する」または「接触させる」とは、該方法の利用者が、組成物を、哺乳動物のインシュリン分泌細胞の量を増加させるのに有効な量提供されることを意味する。

一般的にこれらの方法では、組成物は全身に投与される。さらに、組成物におけるＦＡＣＧＩＮＴの量は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド不在下で糖尿病の哺乳動物の血糖値を下げるのに必要とされるＦＡＣＧＩＮＴの最小有効量よりも実質的に少ない。該方法は、さらに、血中グルコース、血清グルコース、血中グリコシル化ヘモグロビン、膵臓β細胞塊、血清インシュリン、膵臓インシュリン含量、および形態計測によって決定されたβ細胞塊からなる群から選択されたパラメーターを測定する工程を包含する。一般的に、糖尿病診断を行う当業者は、その診断に一般的な期間絶食させた後、すなわち被験者または患者に食事を与えない期間の後、血液または血清のグルコース量を測定するであろう。標準的な測定法は空腹時血糖（ＦＢＧ）測定法である。

本明細書において、インビボ法は、インシュリン分泌細胞量、インシュリン分泌細胞のグルコース応答性、膵島前駆細胞の増殖量、および成熟インシュリン分泌細胞の量からなる群から選ばれたパラメーターの測定であって、遺伝的糖尿病マウス（ＮＯＤマウス）または（ストレプトゾトシンすなわちＳＴＺによって）糖尿病を誘発された齧歯類などの実験動物である哺乳動物において測定する工程をさらに包含する。

本明細書における別の実施形態は、哺乳動物において膵島新生を誘導する方法であって、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドでなければ、ＦＡＣＧＩＮＴおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを一緒に含む組成物を、膵島前駆細胞の膵組織内での増殖を増加させるのに十分な量、哺乳動物に投与して膵島新生を誘導する方法である。

本明細書におけるさらに別の実施形態は、哺乳動物において膵島新生を誘導する方法であって、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドでない、ＦＡＣＧＩＮＴおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを合わせて含む組成物を、膵臓のインシュリン分泌β細胞の数を哺乳動物の体内で増加させるのに十分な量投与する工程を包含する方法である。

したがって、本発明の実施形態は、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドでない場合に、ＦＡＣＧＩＮＴおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含む組成物である。実施形態によっては、組成物は、膵島前駆細胞の増殖を誘発して、成熟したインシュリン分泌細胞の数を増加させるのに効果的な投与量で提供される。同様に、いくつかの実施形態において、組成物は、膵島前駆細胞を成熟したインシュリン分泌細胞に分化させるのに効果的な投与量で提供される。

組成物は、医薬的に許容されるキャリアに入れて提供することも可能である。

また、本明細書において提供されるのは、糖尿病を処置するためのキットであって、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドでない場合に、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴ、容器、ならびに使用説明書を含むキットである。キットの組成物は、１つ以上の単位用量にして提供することも可能である。キットの組成物は、医薬的に許容されるキャリアをさらに含む。

本明細書における発明の別の特徴は、移植細胞の糖尿病レシピエントにおいて、幹細胞をインシュリン分泌細胞へと増大および分化させ、また、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドでない場合に、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴのそれぞれを有効量含む組成物をレシピエントに投与する方法である。該方法において、細胞は、例えばヒトまたはブタから得ることができる。さらに、移植細胞は、膵島、臍帯、胚または幹細胞株から得られる。あるいは、幹細胞を細胞の糖尿病レシピエントの体内でインシュリン分泌細胞へと増大および分化させる方法は、細胞をレシピエントに移植して、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドならびにＦＡＣＧＩＮＴまたはＥＧＦレセプターリガンドをそれぞれ有効量含む徐放型組成物を投与することである。

これらの方法によれば、一般的にガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドはガストリンである。関連する実施形態において、ガストリンはガストリン−１７であり、例えばこのガストリンはガストリン１−１７Ｌｅｕ１５である。

さらに、これらの方法によれば、レシピエントに細胞を移植するには、器官の中に直接注射したり、静脈投与したりという経路を使用する。細胞を注射するとは、例えば膵臓、腎臓および肺などの器官の中に局所的に送達することである。さらに、細胞を注射するとは、経皮的または経肝的に門脈に送達される。これらの方法のいずれかにおいて、処置の間超音波またはＭＲＩなどの画像化技術を用いて、器官から、または器官へと続く静脈または動脈にカテーテルを挿入することも可能である。

局所的に細胞を送達する方法は、内視鏡的逆行性胆道膵管造影法（ＥＲＣＰ）、超音波内視鏡誘導細針送達（ＥＵＳ−ＦＮＡＤ）、膵臓動脈への注射、門脈への注射、膵臓内注射、および肝動脈への注射などいくつかの方法から選択される。これらの技術では、使用者は、処置の間、超音波またはＭＲＩなど、いくつかの画像化技術の１つに従って行うことも可能である。

提供される本発明の別の特徴は、ヒトの糖尿病を処置するための移植に必要とされる幹細胞の量を減少させる方法であって、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドでない場合に、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴのそれぞれの有効量を投与する工程を包含するが、有効量の投与がない以外では同じレシピエントに細胞を移植するときに比べて細胞量が低下している方法である。

本発明の関連実施形態において、本発明は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、およびＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドでない場合に、１種類以上のＦＡＣＧＩＮＴを含む組成物を提供する。組成物は、膵島前駆細胞の成熟したインシュリン分泌細胞への分化を誘導するのに効果的な用量で提供される。組成物は、医薬的に許容されるキャリアに入れて提供することも可能である。

糖尿病を処置するために、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドでない場合に、１種類以上のＦＡＣＧＩＮＴ、およびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、容器および使用のための指示書を備えるキットがさらに提供される。

上記方法のいずれも、被験者に免疫抑制剤を投与する工程をさらに包含することも可能である。上記方法のいずれにおいても、併用する成分を同時に、例えば１時間以内または１日以内に送達することが可能であり、または、例えば１日よりも長い間隔、２日以上よりも長い間隔、１週間よりも長い間隔など、連続的に送達することも可能である。

免疫応答を抑制するための薬剤の例は、例えばラパマイシン、コルチコステロイド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、シクロスポリン、シクロホスファミド、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、ＦＫ５０６、１５−デオキシスペルグアリン（１５−ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、ＦＴＹ７２０、ミトキサントロン、２−アミノ−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオールヒドロクロリド、６−（３−ジメチル−アミノプロピオニル）フォルスコリン、およびデメチムノマイシン（ｄｅｍｅｔｈｉｍｍｕｎｏｍｙｃｉｎ）からなる群の少なくとも１つの薬剤である。

あるいは、免疫応答を抑制するための薬剤の例は、例えば抗体のアミノ酸配列を含むタンパク質である。したがって、免疫応答を抑制するための薬剤は、ｈｕｌ １２４、ＢＴＩ−３２２、アロトラップ（ａｌｌｏｔｒａｐ）−ＨＬＡ−Ｂ２７０、ＯＫＴ４Ａ、エンリモマブ（Ｅｎｌｉｍｏｍａｂ）、ＡＢＸ−ＣＢＬ、ＯＫＴ３、ＡＴＧＡＭ、バシリキシマブ（ｂａｓｉｌｉｘｉｍａｂ）、ダクリズマブ（ｄａｃｌｉｚｕｍａｂ）、チモグロブリン（ｔｈｙｍｏｇｌｏｂｕｌｉｎ）、ＩＳＡｔｘ２４７、Ｍｅｄｉ−５００、Ｍｅｄｉ−５０７、アレファセプト、エファリズマブ（ｅｆａｌｉｚｕｍａｂ）、インフリキシマブ（ｉｎｆｌｉｘｉｍａｂ）およびインターフェロンの少なくとも１つである。膵島新生療法用組成物および免疫応答抑制用薬剤は、連続的に投与されるか、同時に投与することも可能である。

特定の実施形態において、膵島新生療法用組成物の少なくとも１つ、および免疫応答抑制用薬剤が全身に投与される。例えば、膵島新生療法用組成物はボーラスとして投与される。したがって、少なくとも１つの膵島新生療法用組成物および免疫応答抑制用薬剤は、静脈内、皮下、腹腔内または筋肉内という経路によって投与される。さらに、ある実施形態において、免疫応答抑制用薬剤は経口投与される。一般的に、免疫応答抑制用薬剤は、ＦＫ５０６、ラパマイシン、およびダクリズマブの少なくとも１つである。さらに、一定の実験的パラメーターの測定を必要としない、本明細書における方法のいずれか１つの実施形態によれば、被験者はヒトである。

また、本明細書において特徴としているのは、容器、免疫抑制剤、およびＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドでない場合に、ＦＡＣＧＩＮＴを含むＩＮＴ組成物を含む、糖尿病の被験者を処置するキットである。

また、本明細書において提供されるのは、Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ治療組成物を徐放するための薬学的組成物であって、ガストリンレセプターリガンド、およびＥＦＧレセプターまたはＦＡＣＧＩＮＴを含み、少なくとも１つのガストリンレセプターリガンドまたはＥＧＦレセプターリガンドもしくはＦＡＣＧＩＮＴが徐放性処方物になっている組成物である。本組成物は、さらに免疫抑制のための薬剤を含むことも可能である。徐放性処方物の実施形態の例は、組成物の少なくとも１つの成分のＰＥＧ化であり、および少なくとも１つの成分の処方物が多小胞（ｍｕｌｔｉｖｅｓｉｃｕｌａｒ）脂質ベースのリポソームになっているものである。ＥＧＦレセプターリガンドの例は、ＥＧＦおよびＴＧＦαからなる群から選択される。ＦＡＣＧＩＮＴの例は、グルカゴン様ペプチド１レセプターリガンド、グルカゴン様ペプチド２レセプターリガンド、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）レセプターリガンド、ジペプチジルペプチダーゼＩＶインヒビター、ＲＥＧタンパク質レセプターリガンド、成長ホルモンレセプターリガンド、プロラクチン（ＰＲＬ）レセプターリガンド、インシュリン様成長因子（ＩＧＦ）レセプターリガンド、ＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）レセプターリガンド、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）レセプターリガンド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）レセプターリガンド、トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）レセプターリガンド、ラミニンレセプターリガンド、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）レセプターリガンド、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子レセプターリガンド、神経発育因子（ＮＧＦ）レセプターリガンド、膵島新生関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）レセプターリガンド、アクチビン−Ａレセプターリガンド、血管上皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）レセプターリガンド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）レセプターリガンド、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）レセプターリガンド、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）レセプターリガンド、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）レセプターリガンド、およびセクレチンレセプターリガンドからなる群から選ばれた少なくとも１つである。あるいは、ＥＧＦレセプターリガンドは低分子量薬剤である。組成物は、非経口投与のために処方することも可能である。あるいは、組成物を経口投与用に処方することも可能である。組成物は、皮下、腹腔内、静脈内、および筋肉内への注射からなる群から選ばれた投与経路用に処方することも可能である。１つの実施形態において、ガストリンレセプターリガンド、またはＥＧＦレセプターリガンドもしくはＦＡＣＧＩＮＴの少なくとも１つを全身投与用に処方する。

さらに、上記組成物を局所送達用に処方することも可能であり、局所送達は膵臓を標的とする。局所送達の類型の例には、内視鏡的逆行性胆道膵管造影法（ＥＲＣＰ）、超音波内視鏡誘導細針送達（ＥＵＳ−ＦＮＡＤ）、膵臓動脈への注射、門脈への注射、膵臓内注射、および肝動脈への注射などがある。これらは、処置の間行われる超音波およびＭＲＩなどの画像化技術と併用することが可能である。

いくつかの実施形態において、本組成物は、経皮および粘膜からの送達からなる群から選ばれる投与経路用に処方される。これらの組成物のいずれも、徐放用の処方と組み合わせて機械装置によって送達するために処方することも可能であり、あるいは、機械装置を使用して処方物を長時間にわたって送達するように処方することも可能である。この装置は、例えば、分解可能なインプラント、経皮パッチ、カテーテル、埋め込みポンプ、経皮ポンプ、輸液ポンプ、およびイオン導入装置である。

上記組成物および医薬的組成物は、皮下、腹腔内、静脈内、および膵臓内からなる群から選択される投与経路用に処方することも可能である。例えば、静脈内経路は門脈の中に通じている。装置を使用することができ、その装置はポンプでもよい。上記方法および組成物によるのと同様、徐放性処方物によって投与を局所的に行うことが可能である。例えば、局所投与は、内視鏡的逆行性胆道膵管造影法（ＥＲＣＰ）、超音波内視鏡誘導細針送達（ＥＵＳ−ＦＮＡＤ）、膵臓動脈への注射、門脈への注射、膵臓内注射、および肝動脈への注射からなる群から選択された経路によって送達される。あるいは、徐放性の処方物および装置によって投与は全身的になり得る。薬学的組成物は有効量で提供することができる。また、本明細書において特徴的なのは、上記徐放性処方物のいずれかの組成物を１回投与量以上含むキットである。

また特徴的なのは、糖尿病被験者をＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物で処置する頻度を減らす方法であって、組成物の少なくとも１つの成分を徐放性処方物として調製する工程、および同じ組成物を異なって処方したものの場合よりも処置の間隔を長く開けたプロトコールにしたがって、被験者に組成物を投与する工程を包含する方法である。投与は、内視鏡的逆行性胆道膵管造影法（ＥＲＣＰ）、超音波内視鏡誘導細針送達（ＥＵＳ−ＦＮＡＤ）、膵臓動脈への注射、門脈への注射、膵臓内注射、および肝動脈への注射からなる群から選択された経路によって送達することが可能である。画像化技術を用いて、これらの処置の間、カテーテルを正しい位置に導くことが可能である。

また、特徴とするのは、糖尿病である被験者においてＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物の効力を高める方法であって、成分の少なくとも１つが、徐放を生じさせるよう処方されているＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物を被験者に投与する工程、および、被験者の治療において、投与された該組成物の効果と、上記のように処方された成分は含まないが、それ以外は同一である組成物の効果とを、被験者における糖尿病の症状を緩和または消失させるために必要となる徐放性処方物量の減少を測定して比較すると、徐放性処方組成物を有するＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物の効果が促進される結果となる工程を包含する方法である。該方法の一実施形態において、効果の比較とは、さらに組成物の毒性を分析して、組成物投与後の好ましくない症状の減少または緩和が、成分の少なくとも１つが徐放を生じさせるよう処方されている組成物における毒性が、そのように処方されている成分は含まないが、それ以外は同一である組成物に比較して低下していることを示すことである。これらの方法のいずれかにおいて、成分の徐放性処方物の例は、ＰＥＧ化および多小胞脂質ベースのリポソームである。

Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物の効果を促進する、これらの方法のいずれかにおいて、徐放性処方物を有する成分は、ＥＧＦおよびＴＧＦαからなる群から選ばれるＥＧＦレセプターリガンドである。あるいは、これらの方法の実施形態において、ＦＡＣＧＩＮＴは、グルカゴン様ペプチド１レセプターリガンド、グルカゴン様ペプチド２レセプターリガンド、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）レセプターリガンド、ジペプチジルペプチダーゼＩＶインヒビター、ＲＥＧタンパク質レセプターリガンド、成長ホルモンレセプターリガンド、プロラクチン（ＰＲＬ）レセプターリガンド、インシュリン様成長因子（ＩＧＦ）レセプターリガンド、ＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）レセプターリガンド、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）レセプターリガンド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）レセプターリガンド、トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）レセプターリガンド、ラミニンレセプターリガンド、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）レセプターリガンド、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子レセプターリガンド、神経発育因子（ＮＧＦ）レセプターリガンド、膵島新生関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）レセプターリガンド、アクチビン−Ａレセプターリガンド、血管上皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）レセプターリガンド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）レセプターリガンド、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）レセプターリガンド、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）レセプターリガンド、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）レセプターリガンド、およびセクレチンレセプターリガンドからなる群から選ばれた少なくとも１つである。さらに、代替的には、成分は低分子量薬剤である。これらの方法のいずれかにおいて、投与とは、非経口、経口、経皮、皮下、筋肉、腹腔内、静脈内、膵内および筋肉内からなる群から選択される経路によって送達することである。

例えば、投与によって局所的分布が生じる。さらに、該方法は、組成物を有効量にして投与する工程を包含する。またさらに、該方法は、投与前に、徐放装置を使用するために組成物を処方する工程を包含する。例えば、該装置は、分解性インプラント、経皮貼布、カテーテル、埋め込み式ポンプ、経皮ポンプ、輸液ポンプ、およびイオン導入装置からなる群から選ばれる。例えば、該装置はポンプである。これらの方法のいずれかにおける投与は、門脈への注射という、静脈内経路によることも可能である。

また、特徴とするのは、糖尿病被験者を処置する頻度を減少させる方法であって、Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物を長時間継続して放出させることにより被験者に投与するための装置、例えばポンプを調製すること、該装置を被験者に提供する工程、および、該装置を置換または再充填して被験者を繰り返し処置する工程を包含する方法である。該ポンプは経皮ポンプ、フルオロカーボン（ｆｌｕｒｏｒｃａｒｂｏｎ）噴霧ポンプ、浸透圧ポンプ、ミニ浸透圧ポンプ、埋め込み式ポンプ、または輸液ポンプでもよい。あるいは、該装置は、分解性インプラント、非分解性インプラント、粘膜付着性インプラント、経皮貼布、カテーテル、およびイオン導入装置からなる群から選ばれる。非分解性インプラントの例はシラスティックである。分解性インプラントの別の例は、デンプン、ビニルスターチ（ｖｉｎｙｌｓｔａｒｃｈ）、ジプロピレングリコールジアクリレート（ＤＰＧＤＡ）、トリプロピレングリコールジアクリレート（ＴＰＧＤＡ）、ペクチン、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸プロピオン酸セルロース（ＣＡＰ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース／酢酸プロピオン酸セルロース（ＨＰＣ／ＣＡＰ）、メタクリル酸メチル（ＭＭＡ）、メタクリル酸ブチル（ＢＭＡ）、メタクリル酸ヒドロキシメチル（ＨＥＭＡ）、アクリル酸エチルへキシル（ＥＨＡ）、メタクリル酸オクタデシル（ＯＤＭＡ）およびジメタクリル酸エチレングリコール（ＥＧＤＭＡ）からなる群から選ばれる少なくとも１つであってもよい。

また、特徴とするのは、細胞を受容する糖尿病患者の体内で幹細胞をインシュリン分泌細胞に増大および分化させる方法であって、以下のステップ、レシピエントに細胞を移植するステップ、および、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドならびにＦＡＣＧＩＮＴもしくはＥＧＦレセプターリガンドのそれぞれを有効量含む徐放性組成物を投与するステップを含み、該幹細胞がレシピエントの体内でインシュリン分泌細胞に増大および分化する方法である。

また、特徴とするのは、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）レセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含む、糖尿病を処置するための組成物である。例えば、ＧＬＰ−１レセプターリガンドはＧＬＰ−１である。また、特徴とするのは、成長ホルモン（ＧＨ）レセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含む、糖尿病を処置するための組成物である。例えば、ＧＨはヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）である。また、特徴とするのは、プロラクチン（ＰＬ）レセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含む、糖尿病を処置するための組成物である。例えば、ＰＬはヒトＰＬである。これらの組成物のいずれかにおいて、ガストリンの例は、１５位アミノ酸にＬｅｕ残基をもつ１７アミノ酸のガストリンＩである。これらの組成物のいずれも、さらに免疫抑制用の薬剤を有することが可能である。これらの組成物のいずれも、さらに徐放用に処方することが可能である。

また、特徴とするのは、糖尿病の被験者を処置するための方法であって、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）レセプターリガンドを含む組成物を被験者に投与する方法である。また、特徴とするのは、糖尿病の被験者を処置するための方法であって、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび成長ホルモン（ＧＨ）レセプターリガンドを含む組成物を被験者に投与する方法である。また、特徴とするのは、糖尿病の被験者を処置するための方法であって、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびプロラクチン（ＰＬ）レセプターリガンドを含む組成物を被験者に投与する方法である。これらの方法のいずれも、免疫抑制用の薬剤投与する工程を包含し得る。これらの方法のいずれも、少なくとも１つのレセプターリガンドまたは薬剤を、徐放性装置を用いて投与する工程を包含することも可能である。これらの方法のいずれも、少なくとも１つのレセプターリガンドまたは徐放性薬剤を処方する工程を包含することも可能である。これらの方法のいずれも、Ｉ型糖尿病またはＩＩ型糖尿病になっている糖尿病被験者で使用することが可能である。

また、特徴とするのは、膵島移植物の機能性β細胞塊を、精製された膵島移植物を受容する糖尿病患者レシピエントの体中で増大する方法であって、哺乳動物に有効量のガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴを投与する方法である。

また、特徴とするのは、糖尿病患者に膵島調製物を移植する工程、および有効量のガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴを投与する工程を包含する、ヒト糖尿病を処置する方法である。したがって、この方法において、ＦＡＣＧＩＮＴは、プロラクチンであるプロラクチンレセプターリガンドを含む。

（特定の実施形態の詳細な説明）
膵島新生治療（Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ）のための組成物は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、ならびにＥＦＧレセプターリガンドまたはガストリン膵島新生療法補完因子（ＦＡＣＧＩＮＴ）を含む。

ＦＡＣＧＩＮＴ、および、例えばガストリンなどのガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの併用剤を用いた投与による糖尿病治療は、いずれの単一成分のみによる治療に対しても、驚くほどの効力、効能および有用性の促進をもたらす。このため、本明細書において、ＦＡＣＧＩＮＴという用語は「ガストリン」は、ガストリンの投与を「補完する」ことを意味する。「補完する」という用語は、必ずしもガストリンとＦＡＣＧＩＮＴの協同作用を意味するわけではなく、この用語は、ガストリンとＦＡＣＧＩＮＴの投与に比べると、併用剤を投与した方が、併用剤で使用する用量では糖尿病を改善するのにずっと効果的であることを意味する。

本明細書において、特定のリガンドに対するレセプターに関連して用いられる場合、「レセプターリガンド」という用語は、そのレセプターと結合または相互作用するか、それを刺激する組成物または化合物を意味する。

「ＦＡＣＧＩＮＴ」という用語は、多種多様な成長因子成長ホルモン、１種類以上の該因子ホルモンを修飾する因子、および、これらの成長ホルモンおよび成長因子の結合に関係する１種類以上のレセプターに対するリガンドおよびエフェクターを含み、これらの用語は、通常、以下のものと理解され、以下に例示されるが、これらに限定されるものではない。ＰＴＨｒＰなどのＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）レセプターリガンド（ＰＴＨｒＰ；Ｇａｒｃｉａ−Ｏｃａｎａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．Ｍｅｔａｂ．８６：９８４−９８８）；ＨＧＦなどの肝細胞成長因子（ＨＧＦ）レセプターリガンド（ＨＧＦ；Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａ１．，１９９９，Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ７７：６２−６６）；ＦＧＦなどの線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）；ＫＧＦなどのケラチノサイト成長因子レセプターリガンド；ＮＧＦなどの神経発育因子（ＮＧＦ）レセプターリガンド；ＧＩＰなどの胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）レセプター；ＴＧＦβなどのトランスフォーミング成長因子−ベータ（ＴＧＦ−β）レセプターリガンド（米国特許出願第２００２／００７２１１５号（２００２年６月１３日公開））；ラミニン−１などのラミニンレセプターリガンド；ＩＮＧＡＰなどの膵島新生関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）レセプターリガンド；ＢＭＰ−２などの骨形成タンパク質（ＢＭＰ）レセプターリガンド；ＶＩＰなどの血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）レセプターリガンド；ＧＬＰ−１およびエキセンジン−４などのグルカゴン様ペプチド１レセプターリガンド、ＧＬＰ−２などのグルカゴン様ペプチド２（ＧＬＰ−２）レセプターリガンド、および、その完全性に関与する酵素を阻害することによってＧＬＰ−１のレベルに間接的に影響を与えるジペプチジルペプチダーゼＩＶインヒビター（Ｈｕｇｈｅｓ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，２００２，Ａｍ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃ Ａｂｓｔｒａｃｔ ２７２−ｏｒ）；ＲＥＧタンパク質などのＲＥＧタンパク質レセプターリガンド；ＧＨなどの成長ホルモン（ＧＨ）レセプターリガンド、ＰＲＬおよび胎盤性ラクトゲン（ＰＬ）などのプロラクチン（ＰＲＬ）レセプターリガンド；ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２などのインシュリン様成長因子（１型および２型）レセプターリガンド；ＥＰＯなどのエリスロポエチン（ＥＰＯ）レセプターリガンド（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｒｉｎｅｔ．ｏｒｇ／ｈｔｍｌ／ａｕｇｕｓｔ＿２００２＿．ｈｔｍ）；ベータセルリン（同じくＥＧＦファミリーの一員と考えられている）；アクチビンＡなどのアクチビン−Ａレセプターリガンド；ＶＥＧＦなどの血管上皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）レセプターリガンド；ＢＭＰ−２などの骨形成タンパク質（ＢＭＰ）レセプターリガンド；ＶＩＰなどの血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）レセプターリガンド；ＶＥＧＦなどの血管上皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）レセプターリガンド；ＰＡＣＡＰなどの下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）レセプターリガンド；Ｇ−ＣＳＦなどの顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）レセプターリガンド；ＧＭ−ＣＳＨなどの顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；ＰＤＧＦなどの血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）レセプターリガンド；およびセクレチンなどのセクレチンレセプターリガンド。

本明細書においてＦＡＣＧＩＮＴの例として示されている成長因子、酵素、酵素インヒビター、ペプチド、タンパク質およびホルモンのいかなるものについても、既知の類似体、変異体および誘導体のすべてが、天然のものであるか、変異誘発法によって作成されたものであるか、また設計されて合成されたものであるかを問わず、すべてそのＦＡＣＧＩＮＴと同等と見なされるべきである。また、同等と見なされるものの中には、複合体、すなわち１つ以上の化学基を付加して誘導された組成物、およびその混合物が含まれる。コードする遺伝子は、例えば、オリゴヌクレオチド特異的変異誘発法によってヒト組換体の類似体など、そのＦＡＣＧＩＮＴ類似体を作成することによって改変することも可能である。さらに、１つ以上のアミノ酸残基の同一性または位置は、標的変異法（ｔａｒｇｅｔｅｄ ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）によって変えることができる。タンパク質の一次アミノ酸配列は、グリコシル化、アセチル化、または、１種類以上の脂質、リン酸、および／またはアセチル基など、その他の補助的分子の付加によるなど、複合体によって増強することができる。さらに、鎖の中の各アミノ酸残基は、酸化、還元、またはその他の誘導体化によって修飾することができる。ＦＡＣＧＩＮＴを切断して、活性を保持している断片を得ることができる。ＦＡＣＧＩＮＴのアゴニスト、プロドラッグ、または代謝生成物は、そのＦＡＣＧＩＮＴと同等である。ポリペプチドまたはタンパク質の全体または断片を、免疫グロブリンおよびその他のサイトカインなど、他のペプチドまたはタンパク質と融合させることができる。本質的にタンパク質性であるＦＡＣＧＩＮＴの変異体には、一次転写産物の選択的スプライシングによって、タンパク質分解的切断によって、または、二量体化、重合、リン酸化、グリコシル化、硫酸化および脱アミドなど、その他の翻訳後改変によって得ることができる。複合体は、例えば、ポリアルキレングリコール部分を含む非天然性ポリマーに結合したＦＡＣＧＩＮＴを含む組成物などがある。また、この用語は、元となるペプチドのアミノ酸残基を１個以上、例えばアルキル化、アシル化、エステル形成またはアミド形成など化学修飾して得られる誘導体も含む。さらに、ＦＡＣＧＩＮＴの合成を誘導するか、またはＦＡＣＧＩＮＴの作用を模倣する薬剤も、同等の化合物と考えられる。単数形で「ＦＡＣＧＩＮＴ」と表記しても、本明細書記載の例示的ＦＡＣＧＩＮＴから得られる１種類以上の化合物を意味することもある。

本明細書におけるこの用語のいくつかの使用法において、ＦＡＣＧＩＮＴという用語は、文脈において明らかなように、ＥＧＦレセプターリガンドを含まないと明記されている。しかし、ＥＧＦやＴＧＦなどのＥＧＦレセプターリガンドは、糖尿病の症状を改善するためにガストリンを補完することができるため、本明細書に定義されているとおりＦＡＣＧＩＮＴの例であって、本明細書における組成物、方法およびキットの他の具体的実施形態における成分に含まれる。ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドとともにＥＧＦレセプターリガンドを投与することを含むＩ．Ｎ．Ｔ．療法のある実施形態については、以前に記載されているため（米国特許第５，８８５，９５６号および第６，２８８，３０１号）、本明細書に示されているような併用剤や処方物においてこれらの薬剤を使用しない旨記載している。

本明細書において「膵前駆細胞」または「β細胞前駆細胞」または「膵島前駆細胞」という用語は、膵臓のβ膵島細胞に分化することのできる前駆細胞であって、無制限に自己再生できるという幹細胞の特徴を有していても、いなくてもよい。「β細胞新生」または「膵島新生」とは、分化によって新しいβ細胞が形成されることを意味し、無制限に自己再生できるという幹細胞の特徴を有していても、いなくてもよい。「グルコース応答的に」インシュリンを分泌するとは、血液中のグルコース濃度に応じてインシュリンを分泌することを意味する。生理学的に正常な哺乳動物では、血中グルコース濃度が上昇すると、ランゲルハンス島のβ細胞がインシュリンを分泌する。すなわち、血中グルコース濃度に応答してインシュリン分泌が誘導されるのである。

レセプターの「アゴニスト」とは、例えば、哺乳動物に内在するポリペプチド成長因子またはサイトカイン、またはその変異体もしくは一部、または類似体、ペプチド性模倣剤もしくは低分子薬剤などであって、その内在性ポリペプチド因子のレセプターに結合してそれを活性化できるあらゆる組成物である。本明細書に記載されている成長因子またはサイトカインのいずれについても、同等のものとは、アミノ酸配列が実質的に同一と見なされるものであって、例えば、本明細書に記載されているペプチドまたはタンパク質と５０％の配列同一性、６０％の配列同一性、７０％の配列同一性、または８０％の配列同一性を有する。別の実施形態において、本明細書におけるアゴニスト組成物は、アゴニスト誘導物質を含むが、それらは、動物に投与されたとき、または、培養中の細胞、器官または組織に提供されたとき、その動物、細胞、器官または組織によって産生されるアゴニストの量を増加させることのできる物質であると考えられる。例えば、プロラクチン放出ペプチドは、プロラクチンに分泌を促進する。レセプターリガンドは、その定義の範囲内に、特定のＦＡＣＧＩＮＴに対するレセプターに対するレセプターアゴニストを含み、そのアゴニストが構造的にＦＡＣＧＩＮＴに関連していると否とを問わない。

１つの実施形態において、本発明は、例えばガストリンなどのガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、およびＧＬＰ−１、ＰＲＬまたはＧＨなどのＦＡＣＧＩＮＴの両者を含む組成物を投与することによって、糖尿病などの糖尿病症状を処置する方法を提供する。特定のメカニズムによって限定されることなく、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴは、それぞれ膵島前駆細胞の成熟したインシュリン分泌細胞への分化をもたらすのに十分な量提供される。組成物中のＦＡＣＧＩＮＴおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドのそれぞれを全身的または局所的に投与することができる。あるいは、ＦＡＣＧＩＮＴおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの一方または両者を、発現ベクターに組み込まれた核酸融合構築物を有する細胞によってインサイチュで発現させることも可能である。融合構築物は、典型的には、プレプロガストリンペプチド前駆体をコードする配列、およびＦＡＣＧＩＮＴをコードする配列も含む。

ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＥＧＦレセプターリガンドの投与は、治療を停止した後も治療効果が続くように、膵島新生の効果を長引かせるように行うことができる。２００２年７月１８日に公開されたＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ０２／００６８５（ＷＯ ０２／０５５１５２）を参照のこと。治療効果の持続時間は、組成物投与のためのプロトコール継続時間よりも長い。

残存する多能膵管細胞から成熟インシュリン分泌細胞への再生的分化は、糖尿病、特に若年開始型糖尿病を処置するために提供されている組成物および方法を用いることによって、また、全身投与のため、または膵臓内でインサイチュ発現させるために提供されている因子または組成物をこのように併用することによって得ることができる。

細胞移植の必要性をなくすβ細胞置換法とは、β細胞の再生促進法である。初期の研究では、β細胞は限られた再生能しか持たないと示唆されていたが、膵臓のインシュリン分泌β細胞は動的な細胞集団を含まれることが次第に認識されるようになっている。β細胞塊は、存在するβ細胞の増殖によって膨張することができる（β細胞増殖）。妊娠中、成長ホルモンであるプロラクチン（Ｈｏｌｓｔａｄ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１６３：２２９−２３４）と胎盤性ラクトゲン（Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｊ．Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．７７：６２−６６，１９９９）はβ細胞の増殖を促進して、β細胞塊を増加させる。しかし、この拡大した細胞塊大は、ホルモンの刺激が続くことに依存している。出産後、拡大したβ細胞塊は、プロラクチンと胎盤性ラクトゲンの減少に応答して、妊娠していない時のレベルまで縮小する（Ｌｏｇｏｔｈｅｔｏｐｏｕｌｏｓ，Ｊ．（１９７２）ｉｎ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ（Ａｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｏｃ．，Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ，ＤＣ），Ｓｅｃｔｉｏｎ ７，Ｃｈａｐｔｅｒ ３，ｐｐ６７−７６）。

この生理学的情報から、ガストリンレセプターリガンド、およびＥＧＦレセプターリガンドまたはＦＡＣＧＩＮＴのいずれかの投与に応答したβ細胞再分化を評価する上で重要な側面は、成長因子による処理を停止した後、拡大したβ細胞塊を相当な時間維持できるか否かという点である。免疫抑制剤の有無を問わず、Ｉ．Ｎ．Ｔ．組成物と併用して徐放性処方物を使用することで、医療現場を頻繁に訪れる必要や自己治療の必要がなくなる。

β細胞の新生は、細胞数および細胞塊の両面における増加として測定され、血漿インシュリン量または膵臓インシュリン含量の増加をもたらす。糖尿病治療において長期に効力を保つことが、Ｉ．Ｎ．Ｔ．の所望の結果である。

本発明の実施形態は、ガストリン／ＣＣＫリガンドとともに投与されるＦＡＣＧＩＮＴを、糖尿病を処置するために使用するための改善された方法および組成物を提供する。１つの実施形態において本発明は、成分単独で達成されるよりも高い効能、効力および有用性を達成するためにガストリンとＦＡＣＧＩＮＴの併用剤を提供して、この併用剤について治療可能比の改善をもたらす。ガストリンとＦＡＣＧＩＮＴの併用剤による治療は、成分単独で治療した後に観察されるよりも大きな血糖値低下をもたらし、この血糖量の低下は、治療を停止した後長時間維持さえる。本明細書において「ＦＡＣＧＩＮＴ」という語句は、「１種類以上のＦＡＣＧＩＮＴ」または「少なくとも１種類のＦＡＣＧＩＮＴ」も意味する。

β細胞促進剤であるエキセンジン（ＧＬＰ−１アナログ）が、グルコースに対する耐性を向上させ、軽い糖尿病をもつ部分的膵切除モデルの体内でβ細胞塊を増大させた（Ｘｕ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４８：２２７０−２２７６，１９９９）。しかし、グルコース耐性の向上とβ細胞再生との間の因果関係は、最終的に確認されてはいなかった。本明細書においてＦＡＣＧＩＮＴの例として示されているＧＬＰ−１は、単独で投与されると食欲を減退させて、インシュリン耐性を低下させることによってグルコースのクリアランスを促進するが、このプロセスは、β細胞刺激とは別個であるかもしれない。したがって、エキセンジン処理群において、血漿インシュリンレベルが上がらずに下がったという知見は、観察されたグルコース耐性の改善は、β細胞刺激の結果でなかったことを示唆している。さらに、β細胞増殖に対するエキセンジンの効果を評価は、これらの研究で使用された膵切除モデルによって複雑化している。膵臓の外科的アブレーションによって生じる炎症は、単独で膵島再生を促進するガストリンおよびＴＧＦαなど、膵島に作用する成長因子の発現を引き起こす。実際、膵切除だけを行った後にβ細胞再生が促進されたことが報告されている（Ｂｏｎｎｅｒ−Ｗｅｉｒ，Ｓ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４２：１７１５−１７２０，１９９３；Ｓｈａｒｍａ，Ａ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ ４８：５０７−５１３，１９９９）。したがって、膵切除によって誘導されるこれら因子の不在下で、エキセンジンがβ細胞再生を促進できたかはこれまで明確ではなかった。

本明細書において、「糖尿病」という用語は、実験動物モデルを含む哺乳動物において現れる糖尿病症状であって、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、初期糖尿病、および軽微なインシュリン減少または血糖量の軽微な上昇を特徴とする前糖尿病症状などヒト型を含む症状を意味する。「前糖尿病症状」とは、糖尿病またはその関連症に罹っていると思われる哺乳動物を記述するもので、例えば、糖尿病とは正式に診断されていないが、インシュリンまたはグルコースのレベルに関して徴候を示している哺乳動物、家族歴、遺伝的素因、またはＩＩ型糖尿病の場合には肥満によって糖尿病または関連症に感受性である哺乳動物、または、以前糖尿病または関連症に罹っていて、再発の危険にさらされている哺乳動物を表している。

本明細書において、「ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド」という用語は、ガストリン／ＣＣＫレセプターに結合し、それと相互作用し、または、それを刺激する化合物の如何なるものも包含する。このようなガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの例は、２００１年９月１１日米国特許第６，２８８，３０１号に示されており、ガストリン３４（大ガストリン）、ガストリン１７（小ガストリン）、およびガストリン８（ミニガストリン）など、さまざまな形態のガストリン、ＣＣＫ ５８、ＣＣＫ ３３、ＣＣＫ ２２、ＣＣＫ １２およびＣＣＫ ８など、さまざまな形態のコレシストキニン、およびその他のガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含む。一般的に、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ａｓｐ−Ｐｈｅ−アミドというカルボキシル末端アミノ酸配列を共通して有する。また、上記の活性型類似体、および上記の断片およびその他の修飾体も想定されており、ペプチドおよび非ペプチドのアゴニスト、またはＡ７１３７８など、ガストリン／ＣＣＫレセプターの部分アゴニストなどがある（Ｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２５８（４ Ｐｔ １）：Ｇ６４８，１９９０）。

ガストリン１７などの小型ガストリンは、ペプチド合成によって経済的に調製され、合成ペプチドは市販されている。１５位にメチオニンまたはロイシンを有するヒトガストリン１７などの合成ヒトガストリン１７も、Ｂａｃｈｅｍ ＡＧ，Ｂｕｂｅｎｄｏｒｆ，ＳｗｉｔｚｅｒｌａｎｄおよびＲｅｓｅａｒｃｈｐｌｕｓから購入することができる。また、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、上記リガンドの活性型類似体、断片およびその他の修飾体を含み、例えば、内在性哺乳動物ガストリンとアミノ酸配列を共有し、例えば６０％の配列同一性、７０％の同一性、または８０％の同一性を有する。また、このようなリガンドには、内在性ガストリン、コレシストキニン、または組織保存所から得られる同様の活性をもつ活性型ペプチドの分泌を増加させる化合物も含まれる。これらの例は、胃放出ペプチド、胃酸の分泌を抑制するオメプラゾール、およびＣＣＫ刺激を増加させるダイズトリプシンインヒビターである。

糖尿病治療を必要としている個体において、糖尿病を処置する方法は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドとＦＡＣＧＩＮＴの両者を提供する組成物を個体に投与する工程を包含する。特定のメカニズムによって限定されることなく、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴは、膵島前駆細胞を成熟したインシュリン分泌細胞に分化させるのに十分な用量提供される。

本明細書において、「処置する」または「改善する」という用語は、糖尿病の症状を１つ以上軽減または除去することを意味する。本明細書において提供される方法は、特定のメカニズムによって限定されることなく、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴの両者を、糖尿病の哺乳動物に分化再生させる量投与して、膵臓内で機能的なグルコース応答型インシュリン分泌β細胞の数を増加させるために膵島新生を促進させる工程を包含する。該方法は、一般的に、Ｉ型または若年性糖尿病などの糖尿病に対して有効である。ガストリンとＦＡＣＧＩＮＴの併用は、それぞれの成分で見られるよりも顕著な膵島新生応答の促進をもたらすと考えられる。ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの一例はガストリンであり、ＦＡＣＧＩＮＴの例はＧＬＰ−１、ＰＲＬおよびＧＨである。

本明細書における本発明の別の実施形態は、外植された膵臓組織をガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴによってエクスビボで処理する工程、および、処理された膵臓組織を哺乳動物に導入する工程を包含する方法である。この方法においても、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの一例はガストリンであり、ＦＡＣＧＩＮＴの例はＧＬＰ−１、ＰＲＬおよびＧＨである。

別の実施形態において、本発明は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを刺激する方法であって、キメラインシュリンプロモーターとガストリンとの融合遺伝子を膵臟細胞に提供して該遺伝子を発現させる工程を包含する方法を提供する。さらに別の実施形態において、ＦＡＣＧＩＮＴを刺激する方法であって、遺伝子組換えによって哺乳動物に導入された、例えばＧＬＰ−１、ＰＲＬまたはＧＨであるＦＡＣＧＩＮＴをコードする遺伝子を発現させる工程を包含する方法が提供される。ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド遺伝子も、同様に遺伝子組換えによって、好ましくは米国特許第５，８８５，８５６号に示されているようなヒトプレプロガストリンペプチド前駆体を提供することが可能である。

本明細書において、哺乳動物という用語は、ヒト、サル、マウスやラットなどの齧歯類、イヌ、ネコ、農業上重要な動物、すなわちプロテインブタ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ゴリラやチンバンジーなどのサルなど哺乳綱の動物を含むが、これらに限定されるものではない。各哺乳動物は、本明細書で特定されているように非糖尿病、前糖尿病、または糖尿病である。

全身投与方式は、経皮、髄腔内、筋内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、および経口の経路を含むが、これらに限定されるものではない。組成物は、例えば、輸液またはボーラス注射によって、上皮または粘膜皮膚上皮（例えば口腔粘膜、直腸、膣、鼻腔、および腸粘膜など）を通しての吸収によって、適当な経路で投与することができ、また、他の生物活性薬剤とともに投与することも可能である。投与経路の例は、例えば皮下注射によるなど、全身的なものである。

本明細書において、「プロラクチン」という用語は、この用語が、例えばヒトプロラクチンなど、プロラクチンの活性を有するタンパク質因子の技術分野において知られているように、内在性哺乳動物プロラクチンと実質的な配列類似性を共有するポリペプチドを意味する。内在性ヒトプロラクチンは、下垂体によって産生される１９９アミノ酸のポリペプチドである。この用語は、内在性プロラクチンの欠失、挿入、または置換による変異体であって、その活性を保持しているプロラクチンの類似体を包含し、他の生物種および天然の変異体に由来するプロラクチンを含む。プロラクチンの機能は、米国特許第６，３３３，０３１号（活性化アミノ酸配列）および第６，４１３，９５２号（金属錯体リガンドアゴニスト）に記載されているような、プロラクチンレセプターに対するアゴニスト活性をもつ組成物、ならびにプロラクチンアゴニストとして作用するヒト成長ホルモンの類似体であるＧ１２０ＲｈＧＨ（Ｍｏｄｅ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１３７（２）：４４７−４５４）、および米国特許第５，５０６，１０７号および第５，８３７，４６０号に記載されているようなプロラクチンレセプターに対するリガンドを含む。また、プロラクチン関連タンパク質であるＳ１７９Ｄ、ヒトプロラクチン、および胎盤性ラクトゲンも含まれる。

ＰＲＬ、ＧＨおよびＰＬは、構造的、免疫学的および生物学的機能が共通なポリペプチドホルモンファミリーの仲間であるから（「Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ Ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ」，Ｅｄ．Ｎ．Ｓａｒｖｅｔｎｉｃｋ，Ｃｈ．１．Ｂｒｅｊｉｅ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，１９９７に概説されている）、本明細書においてＰＲＬ／ＧＨ／ＰＬファミリーと呼ばれている。ＰＲＬおよびＧＨは、脊椎動物の下垂体前葉によって分泌される。ＰＲＬは、浸透圧調節、生殖、泌乳、および免疫調節を含む広範な生物学的機能に関与する。ＧＨは、成長および形態形成に関係する生理学的プロセスに関係している。関連するレセプターリガンドは、「ＰＲＬ／ＧＨ／ＰＬ」レセプターリガンドと呼ばれる。ＦＡＣＧＩＮＴを、ペプチドおよびタンパク質の構造的類似性、ガストリンの補完に関する機能的類似性、１種類以上のレセプターへの結合に関する機能的類似性などに基づいてさまざまな群に分類することも、それぞれ本発明のさまざまな実施形態の範囲に含まれる。プロラクチンレセプターリガンドは、ＰＲＬおよびＰＬを含み、成長ホルモンレセプターリガンドはＧＨを含む。

本明細書において、「ＧＬＰ−１レセプターリガンド」という用語は、ＧＬＰ−１レセプターに結合し、それと相互作用し、または、それを刺激する化合物の如何なるものも包含する。ＧＬＰ−１レセプターの例はＧＬＰ−１およびエキセンジン−４である。グルカゴン様ペプチド−１は、腸内内分泌細胞の中で、アミドであるＧＬＰ−１の分子形（従来７−３６位と指定された残基を有する）に、ＧＬＰ−１（７−３７）と同じように合成される。ＧＬＰ−１の生物活性に関する初期の研究は、完全長のＮ−末端伸長型のＧＬＰ−１（１−３７および１−３６、ただし後者はアミド）を利用した。より長いＧＬＰ−１分子は、通常、生物活性をもたない。後になって、最初の６アミノ酸を除去すると、実質的に生物活性が促進されたＧＬＰ−１分子の短縮形になることが分かった。

循環している生物活性型ＧＬＰ−１の大部分は、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドの形で見られ、少量であるが生物活性型ＧＬＰ−１（７−３７）も検出される。Ｏｒｓｋｏｖ，Ｃ．ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ １９９４，４３：３３５−３３９を参照。両ペプチドとも、ほぼ同じ量の生物活性を示す。ＧＬＰ−１は、栄養分の摂取に応答して腸の内分泌細胞から分泌され、栄養吸収後の代謝恒常性において複合的な役割を演じる。ＧＬＰ−１の調節は、ジペプチジルペプチダーゼ（ＤＰＰ−ＩＶ）による第２位のアラニン残基におけるペプチドのＮ末端分解によって生じる。概要についてはＤＰＰ−ＩＶを参照。ＧＬＰ−１の生物活性は、グルコース依存型インシュリン分泌の促進、インシュリンの生合成の促進、グルカゴン分泌の阻害の促進、胃内容排出の促進、および食物摂取の阻害を含む。Ｄｒｕｃｋｅｒ，Ｄ．，Ｅｎｄｏｃｒｉｎ １４２：５２１−５２７，２００１に概説されているように、ＧＬＰ−１は、さらにいくつかの作用を消化管および中枢神経系において有すると考えられる。ＧＬＰ−１組成物の例には、ＢＩＭ ５１０７７（ＤＰＰ−ＩＶによる分解に耐性のＧＬＰ−１アナログ類似体。Ｂｅａｕｆｏｕｒ Ｉｐｓｅｎより購入可能）、ＡＣ２５９２（ＧＬＰ−１、Ａｍｙｌｉｎ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ ＣＡより）、ＴｈＧＬＰ−１（ＧＬＰ−１、修飾アミノ酸および脂肪酸が結合。Ｔｈｅｒａｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｓａｉｎｔ−Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａより）、ＤＡＣ（商標）としても知られているＣＪＣ−１１３１、ＧＬＰ−１（アルブミンに共有結合するよう加工されたＧＬＰ−１類似体。Ｃｏｎｊｕｃｈｅｍ，Ｍｏｎｔｒｅａｌ，Ｑｕｅｂｅｃ，Ｃａｎａｄａ）、ＬＹ３１５９０２および徐放性ＬＹ３１５９０２（ＤＰＰ−ＩＶ耐性のＧＬＰ−１アナログ類似体。Ｅｌｉ Ｌｉｌｌｙ，Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮより）、低分子量ＧＬＰ−１模倣薬、アルブゴン（Ａｌｂｕｇｏｎ）（Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｏｍｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｒｏｃｈｖｉｌｌｅ，ＭＤから発売されているアルブミン：ＧＬＰ−１融合ペプチド）、ＮＮ２２１１としても知られているリラグルタイド（Ｌｉｒａｇｌｕｔｉｄｅ）（ＧＬＰ−１分子をアシル化することで得られた長時間作用型ＧＬＰ−１誘導体で、血流に入ると、ＤＰＰ−ＩＶによる分解および腎クリアランスから守ってくれるアルブミンとさかんに結合する。Ｎｏｖｏ Ｎｏｒｄｉｓｋ，Ｄｅｎｍａｒｋより購入可能。Ｅｌｂｒｏｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｃａｒｅ ２００２ Ａｕｇ ２５（８）：１３９８−４０４）。

エキセンジンの一例であるエキセンジン−４は、Ｈｅｌｏｄｅｒｍａ ｓｕｓｐｅｃｔｕｍ（アメリカドクトカゲ）の毒液から得られた新規のペプチドであり、ＧＬＰ−１（７−３６）アミドに５３％の相同性を示す。これは、ＤＰＰ−ＩＶによる分解に耐性であるため、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）レセプターの長時間作用型で強力なアゴニストとして機能する。エキセンジン−４は、ＧＬＰ−１と同様の性質をもち、胃内容排出、インシュリン分泌、食物摂取、およびスルカゴン分泌を調節する。エキセンジン−４の例は、エキセナチド（ｅｘｅｎａｔｉｄｅ）（ＡＣ２９９３としても知られる合成型。Ａｍｙｌｉｎ）、エキセナチドＬＡＲ（長時間作用型）、ＺＰ１０（６個のリジン残基が付加された修飾型エキセンジン−４。Ａｖｅｎｔｉｓ／Ｚｅａｌａｎｄ Ｐｈａｒｍａ）、およびＡＰ１０（長時間作用用処方物。Ａｌｋｅｒｍｅｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ ＭＡ）などである。生理学的研究から、トランスジェニック哺乳動物におけるエキセンジン−４の持続発現が、グルコース恒常性、細胞塊、または食物摂取に混乱を与えないこと（Ｂｉａｇｇｉｏ，Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７５：３４４７２−３４４７７，２０００）が示されているため、エキセンジン−４の生理学的作用については完全に理解されていない。

ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰ−ＩＶ）インヒビターは、７７６アミノ酸からなり、その基質にＧＬＰ−１、ＧＬＰ−２およびＧＩＰを含む膜結合型ペプチダーゼＤＰＰ−ＩＶの活性を阻害する化合物を意味する。ＤＰＰ−ＩＶによるＧＬＰ−１の不活性化が、生体内におけるＧＬＰ−１の生物活性を決定する因子である。ＤＰＰ−ＩＶインヒビターの例は、イソロイシン・チアゾリジド（ｔｈｉａｚｏｌｉｄｉｄｅ）、バリン−プルロリジド（ｐｕｒｒｏｌｉｄｉｄｅ）、ＮＶＰ−ＤＰＰ７３８（Ｎｏｖａｒｔｉｓ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）、ＬＡＦ２３７（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、Ｐ３２／９８（Ｐｒｏｂｉｏｄｒｕｇ ＡＧ，Ｈａｌｌｅ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、およびＰ９３／０１（Ｐｒｏｂｉｏｄｒｕｇ）などである。

本明細書において、「ＥＧＦレセプターリガンド」という用語は、ＥＧＦレセプターを刺激して、同じまたは隣接する組織内、または同一個体の中でガストリン／ＣＣＫレセプターも刺激されると、インシュリン産生膵島細胞の新生を誘導する化合物を含む。そのようなＥＧＦレセプターリガンドの例は、ＥＧＦ１−５３である全長ＥＧＦなどであり、さらに、ＥＧＦ１−４８、ＥＧＦ１−４９、ＥＧＦ１−５２、ならびにそれらの断片および活性型類似体などである。ＥＧＦレセプターリガンドの別の例は、１−４８、１−４７、１−５１、ならびにアンフィレグリン（ａｍｐｈｉｒｅｇｕｌｉｎ）およびポックス・ウイルス成長因子を含むＴＧＦα型、ならびに、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドと同じ相乗作用を示すＥＧＦレセプターリガンドなどである。これらは、上記したものの活性型類似体、断片および修飾体を含む。また、ＣａｒｐｅｎｔｅｒおよびＷａｈｌ、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ（ＳｐｏｒｎおよびＲｏｂｅｒｔｓ 編）、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ、１９９０年の第４章を参照。

ＥＦＧレセプターリガンドを含む化合物グループには、さらに「修飾されたＥＧＦ」が含まれ、正常型または野生型のＥＧＦの変異体を含む。修飾は、ＥＧＦのクリアランス速度など、１種類以上の生物活性に影響することが示されている。この用語は、例えば、さまざまな残基位置に１つ以上のアミノ酸置換をもつヒトＥＧＦの配列と実質的に類似したアミノ酸配列をもつペプチドを含む。

組換え型ＥＧＦは、構造および活性が変化するように遺伝子改変されており、例えば、２１位のメチオニンがロイシン残基で置換されているＥＧＦが記載されている（米国特許第４，７６０，０２３号）。５１残基の組換えヒトＥＧＦ（ｈＥＧＦ）、すなわちｈＥＧＦの５２位と５３位にあるＣ末端残基２個を欠失し、５１位に中性アミノ酸置換をもつものは、ＥＧＦ活性を保持し、微生物生産の間および被験者に投与した後、プロテアーゼ分解に対してより耐性が強い。ＥＧＦおよびＴＧＦαと有意な類似性を有するタンパク質ファミリーをコードする一連の核酸分子が記述されてきた（ＷＯ ００／２９４３８）。中性または酸性のアミノ酸で置換される１６位の残基にヒスチジンをもつＥＧＦムテイン（変異型ＥＧＦ）であって、低いｐＨ値で活性を保持する型が記載されている（ＷＯ ９３／０３７５７）。ＥＧＦおよびＴＧＦαの化学的類似化合物および断片は、ＥＧＦレセプターファミリーのさまざまな分子に結合する能力を保持している（米国特許第４，６８６，２８３号）。ＥＧＦまたはＴＧＦαのさまざまな改変によって、組換えタンパク質の産生、インビトロおよびインビボでの安定性、およびインビボ活性の１つ以上に影響を与える有益な特性が付与される。本明細書の実施例において使用される組換え改変型ＥＧＦレセプターリガンドの一例は、長さ５１アミノ酸で、５１位にアスパラギンを有するＣ末端欠失型ヒトＥＧＦ（本明細書においてＥＧＦ５１Ｎと呼ぶ）であって、実質的にＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ活性を保持し、正常型または野生型のｈＥＧＦと少なくともほぼ同じかそれよりも高いインビボおよび／またはインビトロでの安定性を有する（ＰＣＴ／ＵＳ０２／３３９０７として２００３年５月１５日に公開され、その全体が参照として本明細書に組み込まれるＳ．Ｍａｇｉｌ ｅｔ ａｌ．）。

本明細書において、「成長ホルモン」という用語は、内在性の哺乳動物成長ホルモンと実質的なアミノ酸配列同一性をもち、哺乳動物の成長ホルモンの生物活性を有するポリペプチドを含む。ヒト成長ホルモンは、１９１アミノ酸を一本鎖で含み、分子量約２２ ｋＤａｌのポリペプチドである（Ｇｏｅｄｄｅｌ ｅｔ ａｌ．，１９７９，Ｎａｔｕｒｅ ２８１：５４４−５４８；Ｇｒａｙ ｅｔ ａｌ．，１９８５，Ｇｅｎｅ ３９：２４７−２５４）。本用語は、欠失、挿入または置換を有する類似体、および別種生物および自然変異体由来の成長ホルモンを包含する。Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ｅｔ ａｌ．，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４３：１３３０−１３３６および１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１０８１−１０８５、ならびにＷＯ ９０／０５１８５および米国特許第５，５０６，１０７号参照。

本明細書において、「エリスロポエチン」という用語は、内在性哺乳動物ＥＰＯまたはその変異体、または、例えばＥＰＯ模倣薬ＥＭＰ１などのＥＰＯレセプターアゴニスト（Ｊｏｈｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｎｅｐｈｒ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｐｌ １５：１２７４−１２７７）、または既述されている模倣薬（Ｗｒｉｇｈｔｏｎ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７３：４５８−４６４；米国特許第５，７７３，５６９号；Ｋａｕｓｈａｎｓｋｙ，２００１，Ａｎｎ ＮＹ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ９３８：１３１−１３８）、ＥＰＯレセプターアゴニスト活性を有する抗体（例えば米国特許第５，８８５，５７４号、ＷＯ ９６／４０２３１など参照）、および米国特許第６，３３３，０３１号および第６，４１３，９５２号に開示されているアミノ酸配列である。

本明細書において、「ＰＡＣＡＰ」という用語は、内在的に産生されるＰＡＣＡＰ、またはその類似体もしくは変異体であって、実質的なアミノ酸同一性または類似性を有するか、またはマクサディラン（ｍａｘａｄｉｌａｎ）（Ｍｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２７２：９６６−９７０）などのＰＡＣＡＰレセプターアゴニストと同じ生物活性を有するものを意味する。有用なＰＡＣＡＰ変異体は、米国特許第５，１２８，２４２号、第５，１９８，５４２号、第５，２０８，３２０号、および第６，２４２，５６３号に開示されている３８アミノ酸および２７アミノ酸の変異体であるが、これらに限定されるものではない。

（薬学的組成物）
さまざまな実施形態において、本発明は、ＦＡＣＧＩＮＴとガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを併用したものを治療上有効な量含む薬学的組成物を提供する。本明細書に記載された薬学的組成物はすべて、免疫抑制剤の有無を問わず、徐放のため、局所または全身に送達するための成分または装置の有無を問わず処方することが可能である。薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤を付加することも可能である。キャリアは、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびこれらを併用したものなどであるが、これらに限定されるものではない。処方物は、投与方式に適合したものでなければならない。本明細書において、「有効量」とは、認められている医学的エンドポイント、この場合には、糖尿病の症状の改善を達成するのに十分な量の治療薬剤または併用薬剤の量である。有効量は、本明細書に記載されているように、関連するパラメーターを測定する既存の方法によって当業者が実験的に決定することも可能である。

本明細書において、組成物は、湿潤剤もしくは乳化剤またはｐＨ緩衝剤を含むことも可能である。組成物は、溶液、懸濁液、乳液、錠剤、丸薬、カプセル、徐放用処方物、または粉末にすることができる。組成物は、トリグリセリドなどの伝統的な結合剤またはキャリアを用いて坐薬として処方することも可能である。経口用処方物は、医薬品等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなど、通常のキャリアを含むことも可能である。例えば、リポソームへの封入、微粒子、マイクロカプセルなど、さまざまな送達系が知られており、本発明に係る組成物を投与するために使用することができる。

例示的な実施形態において、本明細書では、組成物は、例えば人間に皮下投与に適合させた薬学的組成物として通常の手順で処方される。典型的には、皮下投与用の組成物は、滅菌した等張水性緩衝液である。必要ならば、組成物は、注射部位の痛みを和らげるために可溶化剤および局所麻酔薬を含むことも可能である。一般的に、成分は、例えば乾燥粉末、凍結乾燥粉末、または無水濃縮液として、活性成分量を表示したアンプルまたは小袋に入れて、別々に、または一投薬単位として一緒に提供される。輸液によって投与される場合には、滅菌された医薬品等級の水、緩衝液、または食塩水を含んだ輸液瓶で調剤することができる。注射によって投与される場合には、注射用滅菌水または食塩水のアンプルを提供して、投与する前に成分を混合するようにしてもよい。本明細書において、組成物は、さまざまな成分にして、坐薬として処方して、重量で約０．５％から約１０％の活性成分を含むものとすることが可能であり、また、経口用処方物は、好ましくは約１０％から約９５％の活性成分を含む。

一日分の投薬量は、一回で投与するか、複数に小分けした用量に分け、一日に何度か投与する。

本発明に係る組成物は、中性型または塩型として処方することも可能である。医薬的に許容される塩類は、塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などからの遊離アミノ基によって形成されるもの、および、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２−エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどからの遊離カルボキシル基によって形成されるものなどである。

具体的な疾患または症状を処置するのに有効な、本発明に係る治療薬の量は、その疾患または症状の性質によって異なり、通常の臨床技術によって決定することができる。処方物中の正確な使用用量も、投与経路によって、また、病気または疾患の重篤さによっても異なるので、臨床医および各患者の環境を判断して決定されるべきである。インシュリンまたはＣペプチドの血中量、および空腹時のグルコースまたはグルコース投与量の通常の測定は、当業者によって測定される。有用用量は、インビトロまたは動物モデル実験系から得られた用量応答曲線から、薬理学分野の当業者によって推定され得る。投与に適した用量範囲は、通常、１日あたり、体重１ｋｇに対し約０．０１マイクログラムから約１０，０００マイクログラムのＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ化合物であり、例えば、１日あたり、１ｋｇに対して約０．０１マイクログラムから約１マイクログラム、約０．１マイクログラムから約１０マイクログラム、約１マイクログラムから約５００マイクログラム、約１０マイクログラムから約１０ｍｇである。このように、適当な投与用量の範囲は、通常、１日あたり、体重１ｋｇに対し約０．０１マイクログラムから約１０ミリグラムである。

他の実施形態において、本発明は、本発明に係る薬学的組成物の成分が１種類以上入った容器を１個以上含む医薬用パックまたはキットを提供する。このようなパックまたはキットには、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび／または１種類以上のＦＡＣＧＩＮＴ、またはＥＧＦレセプターリガンド、および１種類以上の免疫抑制剤を個別または合わせたものを１単位投薬量含む容器が存在する。パックまたはキットのこれら成分の１つ以上を、徐放用に、または徐放用装置の補充薬として挿入するために処方することができ、または、局所送達するために処方することができる。このような容器には、使用説明書、医薬品または生物関連商品の製造、使用または販売を規制する行政機関によって定められた形式の注意書であって、ヒト用に製造、使用または販売することに対する該機関の承認を示す注意書など、さまざまな資料を添付することができる。いくつかの実施形態において、キットまたはパックには、コンピューターによって読み取り可能な形式にして組み込まれたソフトウエアを付随させることも可能である。

１つの態様において、本発明は、膵島新生治療（Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ）の組成物および方法を特徴としており、例えば、ガストリンとＦＡＣＧＩＮＴを免疫抑制剤と併用して、新生のβ細胞の成長を生体内で促進して、膵島量を増加させ、例えば糖尿病のヒトおよび動物において、糖尿病患者における糖耐性の改善をもたらすことを特徴としている。

ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＥＧＦレセプターリガンドもしくはＦＡＣＧＩＮＴは、１回の併用量で投与することができ、または、ある順序で別々に投与することも可能である。これらの組成物の「有効な併用量」とは、空腹時血糖の減少、またはインシュリン分泌細胞の量の増加、またはインシュリンの血中濃度の増加、またはβ細胞塊の増大をもたらす量である。１つの実施形態において、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、長さ１７アミノ酸残基で、１５位の残基がロイシン（１−１７Ｌｅｕ１５、本明細書では１７Ｌｅｕ１５という）になっているヒトガストリンであり、さらに、ＥＧＦレセプターリガンドはヒトＥＧＦ５１Ｎ（ＰＣＴ／ＵＳ０２／３３９０７として２００３年５月１２日に公開され、その全体が参照として本明細書に組み込まれるＳ．Ｍａｇｉｌ ｅｔ ａｌ．）である。有効量は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド対ＥＧＦレセプターリガンドを１よりも大きな比率で含む。例えば、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド対ＥＧＦレセプターリガンドの比率が１０よりも大きな比率で含む。利用しやすい投薬経路は、例えば皮下ボーラスなどの全身注射である。

さらなる実施形態において、レシピエント被験者は、免疫系を抑制する薬剤を投与される。例えば、この薬剤は、低分子量の有機化学薬であって、例えば、タクロリムス、シロリムス、シクロスポリン、およびコルチゾン、および表１に示すような他の薬剤の少なくとも１つである。別の実施形態において、この薬剤は抗体であり、例えば、この抗体は、抗ＣＤ１１ａ、およびこれも表１に示すような抗体である。さらに別の代替的態様において、免疫抑制剤は、例えば抗ＧＦＡＰまたは抗Ｓ１００βなど、免疫スケジュール後に被験者によって産生される抗体でもよい。被験者は糖尿病であってもよく、例えば、被験者は非肥満性糖尿病またはストレプトゾトシン処理したマウス（ＮＯＤマウス）である。被験者はヒトでもよく、例えば、Ｉ型またはＩＩ型の糖尿病患者、前糖尿病症状を示す患者、または妊娠性糖尿病の患者、または、過去に糖尿病であった患者、例えば、過去に妊娠していたときに妊娠性糖尿病であった患者などである。

さらに、新たに成長したβインシュリン分泌細胞または膵島の大きさおよび機能を評価するとは、膵島β細胞塊、膵島β細胞数、膵島β細胞の割合、血中グルコース、血清グルコース、血中グリコシル化ヘモグロビン、膵臓β細胞塊、膵臓β細胞数、空腹時血漿Ｃペプチド含量、血清インシュリン、および膵臓インシュリン含量など、通常の生理的または診断用のパラメーターを測定することである。

糖尿病としては、一定の場合に自己免疫疾患であるため、Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭの実施形態は、治療有効量の、例えば、ＥＧＦおよびガストリン／ＣＣＫのそれぞれに対するレセプターのリガンド、または、ガストリンとＥＧＦの組み合わせ、およびＦＡＣＧＩＮＴとガストリン／ＣＣＫの組み合わせなど、ＦＡＣＧＩＮＴおよびガストリン／ＣＣＫのそれぞれを、免疫系を抑制する１種類以上の薬剤、すなわち免疫抑制剤でも治療されている被験者または患者に全身投与する態様である。

いくつか異なったエンドポイントを用いて、ガストリンおよびＥＧＦもしくはＦＡＣＧＩＮＴによる治療と、ガストリンおよびＥＧＦもしくはＦＡＣＧＩＮＴを併用したものによる治療のいずれと、免疫抑制剤とが糖尿病を改善、すなわち、膵島移植物において機能的なβ細胞塊を増加させるか判断することができる。それらは、マウスに、グルコースまたはアルギニンなどのβ細胞刺激剤を注射した後、循環ヒトＣペプチドおよびヒトインシュリンの血漿における濃度上昇を測定すること；ヒトインシュリン免疫応答性の増加または膵島移植物から抽出されたｍＲＮＡ量の増加によって示されるガストリン／ＥＧＦ治療に対する応答；および、処理された動物の膵島を形態計測によって測定されるβ細胞数の増加などである。

本明細書において、「移植する」という用語は、細胞、組織、または器官の組成物を、当技術分野において確立された方法または本明細書に記載されている方法によって哺乳動物の体内に導入することを意味する。組成物は「移植物」であり、哺乳動物はレシピエントである。移植物およびレシピエントは同系、同種異系または異種である。本明細書において、「自己の」という用語は、移植物がレシピエントの細胞、組織、または器官に由来することを意味する。

ヒトの膵島のβ細胞機能が促進したことは、ストレプトゾトシンで誘導されたか、または遺伝的に（非肥満性糖尿病またはＮＯＤとして知られているマウス系統を用いて）糖尿病になったレシピエントマウスにおいて高血糖症が逆転することによっても示され得る。ガストリンによって、ＥＧＦまたはＦＡＣＧＩＮＴによって、および１種類以上の免疫抑制剤によって糖尿病レシピエント被験者を処理した後のβ細胞機能の上昇は、インシュリンを中止したときの生存率の向上、および、空腹時血糖値で表される高血糖症の矯正によって示される。さらに、膵臓インシュリンおよび血漿Ｃ−ペプチドがともに増加することが観察されている。

（表１．免疫抑制剤の例とその商業的供給源）

本明細書において、「免疫抑制剤」または「免疫を抑制するための薬剤」という用語は、免疫応答を抑制する薬剤を意味する。免疫抑制剤の例を表１に示す。また、これらの薬剤の誘導体または機能的等価物は、本明細書および請求の範囲に記載された発明の実施形態にとって適当だと考えられる。

本明細書において、投薬スケジュールとは、例えば、Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物を構成する成分、または、ＦＡＣＧＩＮＴとガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの併用、および１種類以上の免疫抑制剤をそれぞれ有効量にして、同時または互いに特定の間隔、例えば、互いに１日以内に、または併合調処方物として、または別々に投与される、本明細書で提供される組成物のいずれかを投与するためのプロトコールを意味し、１日あたりなどという単位時間当たりに送達される組成物の量、および各組成物が投与される時間の長さまたは周期を含む。

インシュリン依存性の糖尿病患者のほとんどが、少なくとも毎日インシュリン注射を必要とする。一定の病気の状況の下では、糖尿病患者は、１日に複数回インシュリンを投与したり、糖尿病を管理するための食事をしたり、また、頻繁にグルコース量を観察した結果でインシュリン投与を表示したり、病気を最適に管理するために糖尿病患者に必要とされる他の活動であって、１日に５回も行う必要がある活動をしたりする必要がある。

免疫抑制剤との併用による膵島新生療法の成功によって糖尿病から寛解したことは、空腹時血糖量が低下することによって、また、糖消費を規定食により投与するとそれに反応して上昇する血糖量とその期間とが減少することによって示される。膵島新生に成功すると、血糖量を監視して得られるデータが示すように、インシュリン投与を、例えば、１日に５回注射していたのを２回に、１日に２回注射していたのを１回に、１回から０回に減らすことができる。糖尿病学における当業者は、糖尿病患者を処置する際に、インシュリン投与量を空腹時で他の生理的な条件下における血糖量に調整することに慣れている。

被験者に投与される組成物の投薬量は、吸収、分布、循環液における半減期速度、代謝、排出、および本明細書記載の実施形態のレセプターリガンドの毒性に関する基準を含む標準的なデータにおける、例えば、霊長類と齧歯類の各種など、生物種ごとの既知の違いに合わせて調整される。一般に、齧歯類に対しては、霊長類の約６倍から約１００倍高い投薬用量に調整する。

表１の免疫抑制剤またはその他同等の薬剤は、製造業者から提供されたところに従って投与され、薬理学分野の当業者に知られているとおり、被験者の体重に対して標準化する。例えば、タクロリムスは、通常、注射または経口で投与され、シロリムスは、通常経口で投与される。

レセプターリガンド組成物および免疫抑制剤を投与する方式は、皮下、経皮、髄腔内、筋内、腹腔内、静脈内、鼻腔内、および経口という経路などであるが、これらに限定されるものではない。化合物は、例えば、輸液またはボーラス注射によって、ポンプによって、上皮または粘膜皮膚上皮（例えば口腔粘膜、直腸、および腸粘膜など）を通しての吸収によって、適当な経路で投与することができる。本明細書においてレセプターリガンドは、単一のまたは複数の他の生物活性薬剤と併用して投与することができる。例えば、本明細書記載の組成物および方法を受けるレシピエントには、もし細菌感染が見られたら、１種類以上の抗生物質を投与することが可能であり、また、頭痛がするようならアスピリンを投与することも可能である。本明細書におけるレセプターリガンドの投与は、好ましくは、全身経路による。

１つの実施形態において、本発明は、例えばガストリンなどのガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドと、ＥＧＦレセプターリガンドか、例えばＧＬＰ−１、ＧＨまたはプロラクチンなどのＦＡＣＧＩＮＴかのいずれかを含み、徐放するように処方された組成物を投与して、膵島前駆細胞を成熟したインシュリン分泌細胞に分化させることによって糖尿病を処置する方法を提供する。組成物中のＦＡＣＧＩＮＴおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドはともに全身に、または経口で投与することができる。

特定のメカニズムによって限定されることなく、ガストリンなどのガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドと、ＥＧＦレセプターリガンドか、または本明細書で定義した、例えば、ＧＬＰ−１、ＧＨもしくはプロラクチンなど１種類以上のＦＡＣＧＩＮＴかいずれか一方とを、それらだけで、または免疫抑制剤とともに、また、これら１種類以上のレセプターリガンドもしくは因子もしくは薬剤のいずれかを、本明細書に記載されているようにして、または薬理学分野における当業者に知られている同等の方法によって、徐放するよう処方して投与した後、長期間有効な膵島新生が達成される。

一般的な実施形態において、本発明は、糖尿病を予防または処置する方法であって、１種類以上のＥＧＦレセプターリガンド、またはＧＬＰ−１、エキセンジン−４、成長ホルモン、プロラクチンなどのＦＡＣＧＩＮＴを、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドと併用して含み、ＥＧＦレセプターリガンドもしくはＦＡＣＧＩＮＴならびにガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドのそれぞれが、哺乳動物においてインシュリン分泌β細胞の数を増加させるのに十分な量になっている徐放性処方物を含む組成物を、それを必要とする哺乳動物に投与して、それによって糖尿病を治療または予防することを含む方法を提供する。

糖尿病被験者および患者をＦＡＣＧＩＮＴの徐放性処方物で処置するための組成物は、ＰＴＨｒＰなどのＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）レセプターリガンド（ＰＴＨｒＰ；Ｇａｒｃｉａ−Ｏｃａｎａ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．Ｍｅｔａｂ．８６：９８４−９８８）；ＨＧＦなどの肝細胞成長因子（ＨＧＦ）レセプターリガンド（ＨＧＦ；Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｊ．ｅｔ ａ１．，１９９９，Ｊ Ｍｏｌ Ｍｅｄ ７７：６２−６６）；ＦＧＦなどの線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）；ＫＧＦなどのケラチノサイト成長因子レセプターリガンド；ＮＧＦなどの神経発育因子（ＮＧＦ）レセプターリガンド；ＧＩＰなどの胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）レセプター；ＴＧＦβなどのトランスフォーミング成長因子ベータ（ＴＧＦβ）レセプターリガンド（米国特許出願第２００２／００７２１１５号（２００２年６月１３日公開））；ラミニン−１などのラミニンレセプターリガンド；ＩＮＧＡＰなどの膵島新生関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）レセプターリガンド；ＢＭＰ−２などの骨形成タンパク質（ＢＭＰ）レセプターリガンド；ＶＩＰなどの血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）レセプターリガンド；ＧＬＰ−１およびエキセンジン−４などのグルカゴン様ペプチド１レセプターリガンド、ＧＬＰ−２などのグルカゴン様ペプチド２レセプターリガンド、および、その完全性に関与する酵素を阻害することによってＧＬＰ−１のレベルに間接的に影響を与えるジペプチジルペプチダーゼＩＶインヒビター（Ｈｕｇｈｅｓ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，２００２，Ａｍ Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ａｓｓｏｃ Ａｂｓｔｒａｃｔ ２７２−ｏｒ）；ＲＥＧタンパク質などのＲＥＧレセプターリガンド；ＧＨなどの成長ホルモン（ＧＨ）レセプターリガンド、ＰＲＬおよび胎盤性ラクトゲン（ＰＬ）などのプロラクチン（ＰＲＬ）レセプターリガンド；ＩＧＦ１およびＩＧＦ−２などのインシュリン様成長因子（１型および２型）レセプターリガンド；ＥＰＯなどのエリスロポエチン（ＥＰＯ）レセプターリガンド（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｄｒｉｎｅｔ．ｏｒｇ／ｈｔｍｌ／ａｕｇｕｓｔ＿２００２＿．ｈｔｍ）；ベータセルリン（ＥＧＦファミリーの一員と考えられている）；アクチビンＡなどのアクチビン−Ａレセプターリガンド；血管アクチビン−Ａ；ＶＥＧＦなどの血管上皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）レセプターリガンド；ＢＭＰ−２などの骨形成タンパク質（ＢＭＰ）レセプターリガンド；ＶＩＰなどの血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）レセプターリガンド；ＶＥＧＦなどの血管上皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）レセプターリガンド；ＰＡＣＡＰなどの下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）レセプターリガンド；Ｇ−ＣＳＦなどの顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）レセプターリガンド；ＧＭ−ＣＳＨなどの顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）；ＰＤＧＦなどの血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）レセプターリガンド；およびセクレチンなどのセクレチンレセプターリガンド。これらの徐放性処方物は、免疫を抑制する薬剤を含むこともできる。

１つの実施形態において、組成物の徐放性処方物は全身に投与される。あるいは、組成物を局所的に投与するか、局所送達用の装置または手段を用いることもできる。哺乳動物は糖尿病の哺乳動物であり、例えば、哺乳動物は、その哺乳動物の寿命の約１％以上の期間糖尿病が続いている。一般的に、組成物中のガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、ＦＡＣＧＩＮＴまたはＥＧＦレセプターリガンドの徐放性処方物の量は、単独で糖尿病の哺乳動物において血糖を低下させるのに必要とされる最少有効量よりも実質的に低い。ＦＡＣＧＩＮＴもしくはＥＧＦレセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドは、併用して、長期間にわたって膵島前駆細胞の分化を誘導してグルコース応答性インシュリン分泌膵島細胞にするのに十分な量にして提供される。

本発明の別の実施形態は、ＦＡＣＧＩＮＴまたはＥＧＦレセプターリガンドと、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを併用して、膵島前駆細胞の増殖を増加させて膵臓組織とならせ、それによって糖尿病を治療または予防するのに十分な量になるようにして含む組成物の徐放性処方物を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、糖尿病を予防または処置する方法を提供する。

別の態様において、本発明は、糖尿病を予防または処置する方法であって、ＦＡＣＧＩＮＴまたはＥＧＦレセプターリガンドと、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを併用し、それぞれが、哺乳動物の体内で膵臓インシュリン分泌β細胞の数を増加させるのに十分な量になるようにして含む組成物の徐放性処方物を、それを必要とする哺乳動物に投与すること、および、膵島新生の量を測定することを含み、それによって糖尿病を予防または処置する方法を提供する。組成物を投与すると、該組成物を投与する前に測定した血糖量よりも血糖量が低くなり、例えば、組成物の投与によって、血糖が、該組成物を投与する前に測定した血糖量よりも約５０％または約７０％低下する。哺乳動物では、グリコシル化ヘモグロビン濃度が、該組成物を投与する前に測定したグリコシル化ヘモグロビン濃度に比べ低下する。哺乳動物では、血清インシュリン濃度が、該組成物を投与する前に測定した血清インシュリン濃度に比べ上昇する。哺乳動物では、膵臓インシュリン濃度が、該組成物を投与する前に測定した膵臓インシュリン濃度に比べ上昇する。

別の態様において、本発明は、哺乳動物において膵島新生を誘導する方法であって、ＦＡＣＧＩＮＴまたはＥＧＦレセプターリガンドと、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを併用して、それぞれが、膵島前駆細胞の増殖を増加させて膵臓組織とならせるのに十分な量になるようにして含む組成物の徐放性処方物を哺乳動物に投与し、それによって糖尿病を予防または処置することを含む、糖尿病を予防または処置する方法を提供する。

別の態様において、本発明は、哺乳動物において膵島新生を誘導する方法であって、ＦＡＣＧＩＮＴまたはＥＧＦレセプターリガンドと、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを併用した徐放性処方物を含む組成物を、それぞれが、哺乳動物の体内で膵臓のインシュリン分泌β細胞の数を増加させるのに十分な量にして投与することを含む方法を提供する。

別の態様において、本発明は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、およびＦＡＣＧＩＮＴもしくはＥＧＦレセプターリガンドを含むが、これらの薬剤のいずれかが徐放性処方物に処方されている組成物を特徴とする。該組成物は、膵島前駆細胞の増殖を誘導して、成熟したインシュリン分泌細胞とするのに有効な量になっている。さらに、該組成物は、膵島前駆細胞の分化を誘導して、成熟したインシュリン分泌細胞とするのに有効な量になっている。この組成物は医薬上許容され得るキャリアに入れることが可能である。この組成物は、免疫応答を抑制する薬剤を含むこともできる。

別の態様において、本発明は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、およびＦＡＣＧＩＮＴもしくはＥＧＦレセプターリガンドを含む組成物であるが、これらの薬剤のいずれかが徐放性処方物として存在する組成物、容器、および使用説明書を含む、糖尿病を治療または予防するためのキットを提供する。該組成物は、免疫抑制のための薬剤を含むことも可能である。キットの組成物は、医薬上許容され得るキャリアをさらに含むことも可能である。キットの組成物は、単位投薬量で存在することも可能である。

本明細書で提供される本発明の別の実施形態は、幹細胞を、細胞の糖尿病レシピエントの体内でインシュリン分泌細胞に増大させ分化させる方法であって、レシピエントに細胞を移植すること、および、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドならびにＦＡＣＧＩＮＴもしくはＥＧＦレセプターリガンドを、そのうちの１つ以上が徐放性処方物として存在するものを、それぞれ有効量含む組成物を投与することを含む方法である。例えば、移植される細胞はヒトから得られる。さらに、移植される細胞は、膵島、臍帯、胚、または幹細胞株列から得られる。一般的に、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドはヒトガストリン１−１７Ｌｅｕ１５である。一般的に、ＥＧＦレセプターリガンドは、ＥＧＦまたはＴＧＦα、あるいは、構造的に、ＥＧＦまたはＴＧＦαのそれぞれに実質的に一致するポリペプチドであって、ＥＧＦまたはＴＧＦαのそれぞれの生物学的機能と実質的に同一の機能を有するポリペプチドである。関連する実施形態において、例えば幹細胞などの細胞は、器官への直接注射、および静脈内投与から選択された経路によって移植される。例えば、膵臓、腎臓、および肝臓から選択された器官に細胞を注射する。あるいは、経皮または経肝経路を用いて、細胞を門脈に投与する。どちらの場合も、移植前に、細胞をエクスビボで組成物によって処理することができる。

本明細書で提供される本発明の別の実施形態は、有効量の投与がなければ同じレシピエントに移植される細胞と比較して少ない細胞量の幹細胞を糖尿病レシピエントに移植してヒト糖尿病患者を処置する方法であって、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドならびにＦＡＣＧＩＮＴもしくはＥＧＦレセプターリガンドの徐放性処方物を有効量レシピエントに投与することを含む方法である。レシピエントには、免疫系を抑制する薬剤をさらに投与することも可能である。例えば、この薬剤は、ＦＫ５０６、ラパマイシン、シクロスポリン、およびコルチゾンからなる群から選択された化学薬剤である。あるいは、該薬剤は抗体であり、例えば、抗体は抗ＣＤ−４である。提供される方法で幹細胞を含むものにおいて、移植前の細胞は、家族の一員から得ることができ、後に使用するために保存しておくことができる。

本発明の一実施形態は、ガストリン／ＣＣＫリガンドとともに投与されるＦＡＣＧＩＮＴまたはＥＧＦレセプターリガンドであって、その１種類以上が徐放性処方物に処方されているものを使用して糖尿病を処置するための改良法および組成物を提供する。１つの実施形態において、本発明は、ＦＡＣＧＩＮＴまたはＥＧＦレセプターリガンドと併用されるガストリンのいずれかの徐放処方物であって、ＦＡＣＧＩＮＴまたはＥＧＦレセプターリガンド単独で、または、処方物全体の即時の生体利用度を提供するために投与されるこれら３つの薬剤のいずれかを併用して達成されるよりも高い効力、効能および有用性を達成する徐放性処方物を提供する。本発明は、徐放性処方物について、即時に生体利用が可能な処方物よりも優れた治療可能比を提供する。

徐放性処方物の使用によって、さらに一層長い時間血糖の低下を続けることが可能になる。

ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドと、ＥＧＦレセプターリガンドまたはＦＡＣＧＩＮＴとを徐放性処方物において全身投与に併用すると、非徐放性直接的処方物にして投与したときよりも高い効力を有した。ガストリン／ＦＡＣＧＩＮＴを併用、またはガストリン／ＥＧＦレセプターリガンドを併用した徐放性処方物でグルコース耐性の向上および膵臓のインシュリン量の増加が見られた。

治療法を必要としている個体において糖尿病を処置するための方法は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴ、またはガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＥＧＦレセプターリガンドを提供する組成物であって、膵島前駆細胞の成熟したインシュリン分泌細胞への分化をもたらすのに十分な量の組成物の徐放性処方物を個体に投与することを含む。分化する細胞は、膵管に残留している潜在的膵島前駆細胞である。インシュリン依存性糖尿病、特にＩ型または若年性の糖尿病を処置する方法は、好ましくは全身に、分化再生させる量のガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴ、またはガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＥＧＦレセプターリガンドを、どちらか一方または両方の薬剤が徐放性処方物になっているものを、糖尿病の哺乳動物に投与して、膵島新生を促進し、膵臓内で機能的なグルコース応答型インシュリン分泌β細胞の数を増加させることを含む。いずれかが徐放性処方物になっている、ガストリンと、ＦＡＣＧＩＮＴまたはＥＧＦレセプターリガンドを併用することによって、同じ薬剤を非徐放性の直接的処方物にした場合に見られる膵島新生よりも顕著な膵島新生反応の促進がもたらされるはずである。ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの例は、本明細書に記載したとおり、ガストリンまたはその合成ガストリン誘導体であり、ＦＡＣＧＩＮＴの例は、ＧＬＰ−１、ＧＨ、およびプロラクチンである。ＥＧＦレセプターリガンドの例は、組換えヒトＥＧＦ、例えば、Ｃ末端と５１位のアスパラギン残基に欠失をもつ、長さ５１アミノ酸のヒト組換え変異型ＥＧＦであるＥＧＦ５１Ｎである。

あるいは、経皮または経肝経路を用いて、細胞を門脈に投与する。どちらの場合も、移植前に、細胞をエクスビボで組成物によって処理することができる。

（徐放および局所送達のための処方および投与法）
ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、またはＥＧＦレセプターリガンドもしくはＦＡＣＧＩＮＴである薬剤の少なくとも１つの投与が、持続的または調節された放出によって行われるように処方する。本明細書において「徐放」とは、少なくとも１種類のＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ治療薬の材料、装置、処方、および／または投与を組み合わせて、その組み合わせもしくは１種類以上のＩ．Ｎ．Ｔ．剤、または免疫抑制剤が、時間に応じてレシピエントに一定量、継続的に、または周期的など非継続的に供給されるようにすることを意味する。放出が持続する時間は分単位、時間単位、日単位、週単位、またさらには月単位となることもある。活性物質の放出を、長時間にわたって一定に行うことも可能であり、あるいは、放出が長時間にわたって周期的に行われるようにすることも可能である。放出は無条件に行うことができ、あるいは、環境中にある組成物または他の外部事象に応答して放出を開始させることも可能である。例えば、インシュリンやグルコースなど内在性の組成物によって放出を開始させることもでき、または、薬剤の投与に応ずるなどして、外部から供給される組成物によって開始させることもできる。

徐放は、治療薬の全用量を即時もしくは非常に急速に送達するか、その組成物の全部を投与後非常に短時間に生体利用可能にして、薬剤の大部分を非常に短時間でレシピエントが生体利用できるようにする非徐放性処方物と対比される。一服用量を実質的に即座に生体利用可能にする例は、ボーラスの腹腔内注射など非経口的にまたは経口的に投与されるか、またはさらに、数時間にわたる静脈内点滴によって投与される薬剤水溶液などである。すなわち、心臓血管造影剤を静脈内に投与すると、１５分以内に動脈系全体に循環し、抗腫瘍薬を静脈内に点滴すると、点滴が終了して数秒間でその全部が生体利用可能となる。これに対し、徐放性処方物は、長期間にわたって生体利用可能性をもたらすこと、また、薬剤の初期濃度が高いことによって生じる可能性のある副作用を防ぐという二点でレシピエントである患者のためになる。Ｍａｔｈｉｏｗｉｔｚ，Ｅ．，Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ．１９９９．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ参照。

徐放性処方物は、薬剤の局所（または標的）投与だけでなく、全身投与を提供するために開発されてきた。本明細書において概説されている、さまざまな材料、装置および投与経路が、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、およびＥＧＦレセプターリガンドまたはＦＡＣＧＩＮＴなどのＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ剤とともに使用される。

例えば、複数のタイプのペレットを含むハードゼラチンカプセルであって、一部のペレットのコーティングがより速く溶けるように、各タイプが異なった厚さにコーティングされているカプセルなど、経口の徐放系も利用可能になっている。Ｂａｎｇａ，Ａ．，Ｂｕｓ．Ｂｒｉｅｆ．：Ｐｈａｒｍａｔｅｃｈ ２００２：１５１−１５４参照。経口浸透系では、半透性膜を通って錠剤に入り込んだ液体が、胃腸管の変わりやすい条件とは独立して中心成分に浸透圧を生じさせる。例えば、成長因子のようなタンパク質など、高分子である薬剤を保護するために、部位特異的送達、プロテアーゼインヒビター、キャリア系、または、ポリアクリル酸骨格および生体接着性を含むヒドロゲルなどの処方物を含む方法がある。

ほとんどのタンパク質薬剤は、非経口的に送達され、タンパク質の非経口的送達のための調節放出法は、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド；ＰＬＧＡ）などの乳酸のポリマーであって、薬剤を含む中心を有する生物分解性小球体を形成して、約１ヶ月間にわたって薬剤を放出するポリマーの使用を含む。さらに、タンパク質、またはタンパク質を含むリポソーム（下記参照）を、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を共有結合的に付加してＰＥＧ化することも可能である。

全身への送達および局所送達の両方に経皮送達を利用することが可能である。前記したような浸透促進剤を、経皮貼布と併用して送達を向上させたり、イオン導入、フォノフォレシス（ｐｈｏｎｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、マイクロポレーション（ｍｉｃｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ）、または電気穿孔のための装置と、可能な装用電気装置とともに併用したりして使用することができる。

本明細書において「局所送達」とは、他の器官や組織は治療しないで特定の標的器官または組織を実質的に処置するような、または、標的組織または器官が受ける治療の程度が、非標的組織または器官よりも２倍以上、５倍以上、１０倍以上になるような、経路ならびに処方物もしくは装置またはその両者によって投与することを意味する。
本明細書において「徐放」とは、を意味する。通常、本明細書では、標的器官は膵臓である。本明細書において示すように、移植または多細胞移植物用の細胞は、門脈への注射によって膵臟に局所送達することができ、すなわち、膵動脈、肝動脈、門脈または膵管に注射して薬剤を送達することができる。埋め込まれていないポンプ、すなわち外部にあって、ポンプを器官に接続させるカテーテルによって組成物を膵臓などの標的器官に送達するポンプを使用することも可能である。埋め込み式ポンプを使用して組成物を局所送達することも可能である。

局所送達するための他の方法は、内視鏡的逆行性胆道膵管造影法（ＥＲＣＰ）、サンプリングのためではなく、本明細書で提供される薬学的組成物の送達に適応させた超音波内視鏡下穿刺生検法（ＥＵＳ−ＦＮＡＢ）などであるが、これらに限定されるものではない。例えば、Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｔｒａｎｓｐｌ．Ｉｎｔ．１９９５，８：２６８−２７２参照。これらの技術は、診断または予後判定の目的で工夫されたものであるが、本明細書記載の組成物である、本明細書記載のＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物などを免疫抑制剤と併用し、および／または徐放性処方物として送達するために適合させることができる。Ｙａｎｏ ｅｔ．ａｌ．，１９９４，Ｔｒａｎｓｐｌ Ｉｎｔ ７ Ｓｕｐｐｌ １：Ｓ１８７−１９３；Ｒｉｃｏｒｄｉ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｔｒａｎｓｐｌ Ｐｒｏｃ．２６：３４７９；およびＭｕｎｏｚ−Ａｃｅｄｏ ｅｔ ａｌ．，１９９５，Ｊ Ｅｎｄｏｃｒｉｎ １４５：２２７−２３４も参照。

薬剤送達のための埋め込み式ポンプ、または埋め込みできない（外部）ポンプが、例えば癌や糖尿病など、いくつかの病気を処置するための薬剤送達に使用されている。ポンプは、蠕動ポンプ、フルオロカーボン噴霧ポンプ、または、ミニ浸透圧ポンプ（Ｂｌａｎｃｈａｒｄ，Ｓ．，１９９６，Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｎｏｒｔｈ Ｃａｒｏｌｉｎａ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ）などの浸透圧ポンプなどであり得る。蠕動ポンプは、ポンプのヘッドを作動させる各電気パルスによって一定量の薬剤を送達する。このポンプ、電子機器および電源は、シラスティックで覆われたチタン製容器の中に置かれる。薬剤保存容器は、例えば６０ ｐｓｉという実質的圧力にも耐えることができるシリコンゴム製の小袋である。この保存容器は、ポリプロピレン製の引き込み口から再補給することができる。フルオロカーボンポンプは、ポンプを操作するために液体フルオロカーボンを使用する。浸透圧ポンプは、一定の速度で薬剤を放出するために浸透圧を利用する。ポンプの例は、ＭｉｎｉＭｅｄ ＭｉｃｒｏＭｅｄ ４０７Ｃポンプである（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ，Ｉｎｃ．，Ｎｏｒｔｈｒｉｄｇｅ，ＣＡ）。さらに、２種類の埋め込み可能な部品、輸液ポンプ、および髄腔内カテーテルを含む、髄腔内薬剤送達装置（Ｍｅｄｒｏｎｉｃ）を使用することも可能である。カテーテルが脊髄の髄腔内に挿入されていて、皮膚の下をくぐってポンプに接続されている間に、ポンプを腹部から皮下ポケットに挿入する。そして、一定の流速または速度を変えて薬剤を送達する。さらに、腹腔内ポンプ、例えば埋め込み式ポンプを用いて、本明細書記載の組成物を、例えばカテーテルによって局所的に、または全身に送達することができる。

湿らせた状態を維持し、その直下に血管系がある上皮領域への粘膜送達は、乾いた上皮表面の組織を通って経皮送達するよりもより効率がよいことがある。粘膜表面とは、鼻、胚、直腸、口腔、眼、および性器などである。粘膜表面の例は、鼻および肺である。

徐放用小球体（ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅ）に使用される材料は、主にポリマーであり、記述されているように、ＰＥＧ、また、ポリエチレンオキシド（ＰＥＯ）と呼ばれるもの、およびＰＧＬＡである。ポリマー媒体を直接注射して、被験者の体内で次第に加水分解または分解されて治療薬剤を放出することも可能である。例えばＰＥＧなどのポリメラーゼの分子量は、放出速度を調節するために変えることができる。タンパク質治療薬をＰＥＧ化またはＰＥＧを共有結合させることによって、細網内皮系（ＲＥＳ）のクリアランス機構などのクリアランス機構に関係するレセプターからタンパク質を保護する。あるいは、多糖類を使用して、ＲＥＳに対する因子を標的することも可能である（１９９６年９月１０日発行の米国特許第５，５５４，３８６号）。ＲＥＳの器官は、肝臓、脾臓および骨髄などである。

ホモポリマー、またはポリ（乳酸−コ−エチレングリコール）すなわちＰＬＡ−ＰＥＧなどのコポリマーは、粘性液を形成することができ、治療用タンパク質薬と混合できる。粘度は、ＰＬＡ−ＰＥＧの分子量によって変化する。一定の条件下では、治療薬は、被験者に注射されるとポリマーと共沈殿し、拡散によって溶媒が消失して、好ましい放出速度をもつ持続性薬剤が形成される（Ｗｈｉｔａｋｅｒ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｕｓ．Ｂｒｉｅｆ：Ｐｈａｒｍａｔｅｃｈ ２００２：１−５）。

治療薬を封入した小球体の重合体から微粒子が形成される。小球体に使用するポリマーは、ポリ（乳酸）またはＰＬＡ、ポリ（グリコール酸）またはＰＧＡ、およびＰＬＡ−ＰＧＡコポリマーなどである。本発明に係るタンパク質など、ある量の治療薬は、まず、粒子の外側に非特異的に結合しているタンパク質が噴出し、その後の拡散による段階、そして浸食による最後の段階であって、ポリマー組成、分子量、微粒子の大きさ、およびｐＨなどの生理学的条件によって制御することができる段階などの複数の段階で放出される。タンパク質は、溶媒で、または凍結噴霧（ｆｒｏｚｅｎ−ａｔｏｍｉｚａｔｉｏｎ）処理または超音波処理によって乳化し、さらに溶媒を抽出するために、その懸濁液を液体窒素中で凍結させた凍結乾燥粉末などの固体になっていれば、小球体の製造工程でのタンパク質の安定性が増進される。小球体は、例えば超臨界二酸化炭素（ｓｃＣＯ_２）などの超臨界流体から作ることができる。

薬剤送達に適した生物分解性ブロックポリマーとその合成法が、Ｋｕｍａｒ，Ｎ．ｅｔ ａｌ．，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．５３（２００１）：２３−４４に記載されている。コポリマーは、ランダム、交互、またはブロック（ジ型またはトリ型）でよく、形状は、直鎖状、または星状または接ぎ木状（ｇｒａｆｔ）（櫛形）でよい。ポリマーは、大量の水性溶液を保持する三次元の疎水性ポリマーネットワークであるヒドロゲルを形成することができる。ヒドロゲルに使用されるポリマーは、クロスリンキングまたは他の化学的付加体によって不溶性となる。

デンプン、ビニルデンプン、ジプロピレングリコールジアクリレート（ＤＰＧＤＡ）、トリプロピレングリコールジアクリレート（ＴＰＧＤＡ）、ペクチン、酢酸セルロース、プロピオン酸セルロース、酢酸酪酸セルロース、酢酸プロピオン酸セルロース（ＣＡＰ）、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒドロキシプロピルセルロース／酢酸プロピオン酸セルロース（ＨＰＣ／ＣＡＰ）、メタクリル酸メチル（ＭＭＡ）、メタクリル酸ブチル（ＢＭＡ）、メタクリル酸ヒドロキシメチル（ＨＥＭＡ）、アクリル酸エチルへキシル（ＥＨＡ）、メタクリル酸オクタデシル（ＯＤＭＡ）およびジメタクリル酸エチレングリコール（ＥＧＤＭＡ）からなる群から選ばれる少なくとも１つなどの材料から生物分解性のインプラントを調製することができる。Ｇｉｌ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｏｌｅｔｉｍ ｄｅ Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌｏｇｉａ ２００２，７２：１３−１９参照。

ポリマーに加えて、天然および合成の脂質を徐放性処方物に使用することができる。ＤｅｐｏＦｏａｍ（商標）（Ｓｋｙｅ Ｐｈａｒｍａ，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｅｎｇｌａｎｄ）は、治療薬を封入するために多小胞の脂質粒子（リポソーム）を形成する（米国特許第５，９９３，８５０号、およびＹｅ，Ｑ．ｅｔ ａｌ．，２０００ Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌ．６４：１５５−１６６参照）。脂質は、正味負荷電の両親媒性であり、ステロール、または両性イオン性脂質であり、リポソームを作成する方法は非酸性的である。リポソームに活性治療薬を取り込む方法も提供されている。治療薬は、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、ＥＧＦレセプターリガンド、およびＦＡＣＧＩＮＴの１つ以上であり得る。

別のリポソーム用脂質も本発明の範囲に含まれる。例えばコムギセラミドなどのセラミドなどである植物の極性脂質は、プロラミンなどのタンパク質とともにゲルを形成するのに有効で、その中に経皮または経粘膜で送達するための１種類以上の治療薬を入れることができる。２００２年６月２５日発行の米国特許第６，４１０，０４８号参照。プロラミンの例は、コムギグリアジン、トウモロコシゼインなどである。徐放性薬処方物および装置に使用される他の天然ポリマーは、コラーゲン（ＥＰ−Ａ−Ｏ ６２１ ０４４）、キチン（米国特許第４，３９３，３７３号）、およびキトサン、脱アシル化型キチンなどである。

例えば糖脂質、非エステル型脂肪酸、脂肪族アルコール、脂肪族アルコールの脂肪酸エステル型、シクロヘキサノール、脂肪酸、グルセロールのエステル、グリコール、または脂肪族アルコールのエーテルまたはグリコールなどの浸透促進剤が、典型的な浸透促進剤であり、安定化剤、可溶化剤、界面活性剤および可塑剤など、その他の成分も、経皮装置に入れることができる。２００２年９月１２日に公開された米国特許出願第２００２０１２７２５４号参照。

脂質およびさまざまなタイプのポリマーを使用して、薬剤送達のための「ナノ粒子」を形成させる。Ｍ．Ｋｕｍａｒ，２００２，Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｓｃｉ．３：２３４−２５８に概説されている。これらの粒子中の薬剤荷重は、ほとんどの脂質親和性薬剤でもっとも大きいことが分かっている。ポリ乳酸、レシチンおよびホスファチジルコリンもしくはコレステロールを含むリポソームで、長期継続する放出が見いだされている。

本明細書に記載した方法によって、例えば、ＲＥＳを標的するよう設計された材料、またはＲＥＳの細胞を避けるようためにさまざまな材料からなるリポソームを使用して局所的（標的）徐放が得られる。さらに別の標的法は、抗体または可溶性組換えレポーターをリポソームまたは小球体の外部表面に連結させて使用することなどである。さらに、本明細書に記載されているような徐放性処方物は、特定の標的器官に局所送達するために、例えばポンプなど本明細書記載の装置のいずれかで使用できるように調整することが可能である。

別の実施形態において、本発明は、治療有効量のＦＡＣＧＩＮＴまたはＥＧＦレセプターリガンド、およびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの併用剤を含む徐放性薬学的組成物を提供する。薬学的に受容可能なキャリアまたは賦形剤を加えることもできる。キャリアは、食塩水、緩衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびこれらを併用したものなどであるが、これらに限定されるものではない。処方物は、投与方式に適合したものでなければならない。

別段の定義がない場合、本明細書における科学技術用語はすべて、本発明の属する技術分野における当業者に広く理解されている意味をもつものとする。本明細書に記載されている方法および材料と類似または同等のものも、本発明を実施する際に使用することができる。以上、本発明をさまざまな実施形態で十分に説明したが、更なる実施形態を以下の実施例および請求の範囲において例示的に記載するが、それらは、本発明をさらに制限するものと解してはならない。引用文献のすべての内容は、その全体が参照として本明細書に組み込まれる。

（実施例）
（実施例１：ＧＬＰ−１レセプターリガンド、グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）、およびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドであるガストリンによる治療は、発病間もない糖尿病のＮＯＤマウスの病気進行を防止する。）
非肥満型糖尿病マウス（ＮＯＤ）系統は、ヒトＩ型糖尿病の病因と多くの共通する特徴をもつ表現型をもつ。典型的には、ＮＯＤマウスは、４週齢になると早くも、破壊性の自己免疫性膵島炎とβ細胞破壊を示す。これらのマウスでは、通常１０〜１５週齢で糖尿病を発症し、典型的な血糖濃度が約７ｍＭから約１０ｍＭとなり（これに対し、正常なマウスでは約３．０〜６．６ｍＭである）、膵臓のインシュリン量が、正常なマウスのそれよりも約９５％より大きく減少する。病気が進行するにつれて、ＮＯＤマウスは、次第に慢性糖尿病の深刻な徴候を示し、血糖量は約２５から約３０ｍＭとなり、膵臓のインシュリン量は実質的に０にまで低下する。このように病気が重篤になった段階では、約９９％よりも多い量のβ細胞が破壊されている。

本実施例では、ＧＬＰ−１およびガストリンの両方を投与すれば、高血糖症、ケトアシドーシスおよび死亡を防止でき、また、発病間もない糖尿病のＮＯＤマウスにおいて膵島インシュリン含量を増加させるかどうかを判定するために、発病間もない糖尿病のＮＯＤマウスにおけるＧＬＰ−１とガストリンを併用して治療した場合の効果を調べた。使用したＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ化合物は、１５位アミノ酸にＬｅｕ残基をもつ１７アミノ酸残基の合成ヒトガストリンＩというガストリンである。使用されたＧＬＰ−１は、ヒト／マウスＧＬＰ−１の生物活性断片（該断片が切り出された前駆体と比較すると７−３６位にある残基を有する。Ｂａｃｈｅｍ Ｈ６７９５から得た）であるＧＬＰ−１である。

１２〜１４週齢の非肥満型糖尿病（ＮＯＤ）マウスの雌を、糖尿病の発病（空腹時血糖＞８．０から１５ｍｍｏｌ／ｌ）について観察し、症状が出てきてから４８時間以内に２つのマウス群を以下のように処理した。一方の群は媒体だけで処理し、もう一方の群には１００μｇ／ｋｇ／日のＧＬＰ−１を投与したが、各処理は１日２回腹腔内経路で投与した。

治療を１４日間行った。動物の空腹時血糖量（ＦＢＧ）を毎週測定した。絶食させてから１２時間後、また、最後のペプチドまたは媒体を注射してから２４時間後にＦＢＧ値を測定した。治療を停止してから、その後４週間（２週目から６週目）すべてのマウスのＦＢＧ値を観察して、治療的処理を終了した後にも高血糖症の防止が継続するかを判定した。１４日目に処理を停止し、ＦＢＧ値を得るため１８日目にマウスをサンプリングした（表２に示す）。

（表２．グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）およびガストリン併用療法により、発病間もない糖尿病のＮＯＤマウスを処置する。）

ＧＬＰ−１（１００μｇ／ｋｇ／日）およびガストリン（３μｇ／ｋｇ／日）を腹腔内注射により、それぞれ上記した群のＮＯＤ雌マウスに１日２回投与した。１２〜１４週の糖尿病マウスを、糖尿病が発症してから２日以内に使用した（通常、６．５ｍＭよりも高いＦＢＧをもつと考えられる）。

プロトコールには、これらのマウスを６週目に再びサンプリングして、ＦＢＧとＣ−ペプチドを測定するために血液を採取すること、および、膵臓インシュリンを測定して、膵島の炎症（膵島炎）のスコアを付けるためにマウスを殺すことが含まれている。処理を開始してからは、マウスは、インシュリン置換処理も免疫抑制も受けなかった。以下のパラメーターを測定した。生存率、膵臓インシュリン値、膵島の炎症の有無、および空腹時血糖値。

結果は、媒体で処理された対照群（群１）の動物では、この模擬処理を受けている期間中空腹時血糖（ＦＢＧ）値が連続的に上昇し、０日目の１１ｍＭから１８日目には２４ｍＭになった。

これに対し、ＧＬＰ−１およびガストリンで処理されたマウスではＦＢＧ値（７．９ｍＭ グルコース）が、媒体で処理されたマウス（２４．４ｍＭ）と比較して顕著に低くなり、実際、媒体で処理されたマウスで生じた血糖値の３分の１よりも低い値にまで低下した（表２）。もっとも重要で驚くべきことには、ＦＢＧ値を低下させる上で、ＧＬＰ−１とガストリンを併用した方が、ガストリン単独またはＧＬＰ−１単独のとき（それぞれ１９．０ｍＭおよび１５．８ｍＭというＦＢＧ値）よりも効果的であった。この併用で処理されたマウスにおいてのみ、ＦＢＧが正常の範囲に入るレベルにまで低下した。ＧＬＰ−１およびガストリンで処理されたマウスにおける血糖値の改良調節法は、これらマウスの膵臓におけるインシュリン存在量の顕著な増加と関連していることが期待される。

要するに、本実験におけるこれらの結果は、糖尿病を発症して間もないマウスにおいて、短時間低用量のＧＬＰ−１およびガストリンによる処理は、病気の進行を防止し、症状を逆転させて、ほぼ正常な血糖値が得られたことを示している。さらに、ＧＬＰ−１およびガストリンで処理されたマウスにおけるこの顕著な血糖値の減少は、治療を停止した後も一定期持続した。これらの動物において、データが、膵臓のインシュリン存在量の改善を示すこと、および、これらの効果が、治療終了後も長い期間持続することが明らかになることが期待されている。

ＮＯＤ雌マウスの別の群を、プロラクチンレセプターリガンドであるプロラクチン（ＰＲＬ）と、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドで、また、成長ホルモンレセプターリガンドである成長ホルモン（ＧＨ）と、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドであるガストリンで処理した。これらの処理によってＦＢＧとその他のパラメーターについて、本明細書においてＧＬＰ−１で得られたデータと同じようなデータが示されると予想される。

（実施例２：ＰＥＧ化の有無による組成物の比較）
徐放性処方物が、ボーラスまたは非徐放的送達用に処方物されている以外は同じ処方物よりも、高い効能を提供できるか否かを決定するために、ＰＥＧ化処方物か非ＰＥＧ化処方物のいずれかにしたＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物でＮＯＤマウスを処理するプロトコールを比較して実験を行う。Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物の１つ以上の成分をＰＥＧ化すると、治療薬が体内で活性型に保持される時間の長さを延長することができる。

本実験は、Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物の１つ以上の薬剤の徐放性処方物を投与すると、直接投与用、すなわち非徐放性放出投与用に処方物された、Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物と比較して、ＮＯＤマウスの糖尿病症状を改善できることを示す。

（実施例３：組成物投与の投薬頻度の比較）
徐放性処方物が、非徐放性の直接用処方物よりも高い効能を提供できるか否かを決定するために、Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物をＮＯＤマウスに１日に３回投与するプロトコールと１日に１回投与するプロトコールとを比較するように実験を工夫する。

その結果、Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物の徐放性処方物で得られたものに匹敵するような、Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物の長期にわたる生体利用能によって、効能を改善できる、すなわち、Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物の直接的または非徐放性の処方物と比較すると、ＮＯＤマウスの糖尿病症状の病状をより改善でき、そのような症状の改善に必要とされる投薬頻度を減らせることが示される。

Claims (110)

1. 糖尿病を治療するための方法であって、該方法は、処置を必要とする哺乳動物に、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、および膵島新生治療のためにガストリンを補完する因子（ＦＡＣＧＩＮＴ）がＥＧＦレセプターではないという条件で、該ＦＡＣＧＩＮＴを含む組成物の治療有効量を投与する工程を包含する、方法。
2. 前記ＦＡＣＧＩＮＴが、グルカゴン様ペプチド１レセプターリガンド、グルカゴン様ペプチド２レセプターリガンド、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）レセプターリガンド、ジペプチジルペプチダーゼＩＶインヒビター、ＲＥＧタンパク質レセプターリガンド、成長ホルモンレセプターリガンド、プロラクチン（ＰＲＬ）レセプターリガンド、インシュリン様成長因子（ＩＧＦ）レセプターリガンド、ＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）レセプターリガンド、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）レセプターリガンド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）レセプターリガンド、トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）レセプターリガンド、ラミニンレセプターリガンド、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）レセプターリガンド、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子レセプターリガンド、神経発育因子（ＮＧＦ）レセプターリガンド、膵島新生関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）レセプターリガンド、アクチビン−Ａレセプターリガンド、血管上皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）レセプターリガンド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）レセプターリガンド、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）レセプターリガンド、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）レセプターリガンド、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）レセプターリガンド、およびセクレチンレセプターリガンドからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項１に記載の方法。
3. 前記ＦＡＣＧＩＮＴが、ＧＬＰ−１またはエキセンジン−４であるグルカゴン１様ペプチドレセプターリガンドを含む、請求項１に記載の方法。
4. 前記ＦＡＣＧＩＮＴが、成長ホルモンを含む成長ホルモンレセプターリガンドを含む、請求項２に記載の方法。
5. 糖尿病を処置する方法であって、該方法は、以下：
   複数の細胞を、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドではないという条件で、少なくとも１つの該ＦＡＣＧＩＮＴおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含む組成物に、エキソビボで接触させる工程、および、
   該細胞を、それらを必要とする哺乳動物に投与し、それによって、該糖尿病を処置する工程
   を包含する、方法。
6. 前記細胞が自己由来である、請求項５に記載の方法。
7. 前記投与する工程または接触させる工程が、哺乳動物においてインシュリン分泌細胞の量を増加させるのに有効な量で組成物を提供することである、請求項１または５のいずれかに記載の方法。
8. 前記組成物が全身投与される、請求項１または５のいずれかに記載の方法。
9. 前記組成物中のＦＡＣＧＩＮＴの量が、実質的に、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドの非存在下で糖尿病の糖尿病の哺乳動物における血糖値を減少させるために必要とされるＦＡＣＧＩＮＴの最小有効量未満である、請求項１または５のいずれかに記載の方法。
10. 請求項１または５のいずれかに記載の方法であって、血中グルコース、血清グルコース、血中グリコシル化ヘモグロビン、膵臓β細胞塊、血清インシュリン、膵臓インシュリン含量、および形態計測により決定されたβ細胞塊からなる群から選択されるパラメーターを測定する工程をさらに包含する、方法。
11. 前記細胞が膵管細胞である、請求項５に記載の方法。
12. インシュリン分泌細胞の量、インシュリン分泌細胞のグルコース応答性、膵島前駆細胞の増殖量、および成熟インシュリン分泌細胞の量からなる群から選択されるパラメーターを測定する工程をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
13. 哺乳動物において膵島新生を誘導するための方法であって、該方法は、該哺乳動物に、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドではないという条件で、該ＦＡＣＧＩＮＴとガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドとの組み合わせを含む組成物を、膵組織における膵島前駆細胞の増殖を増加させるのに十分な量で投与し、それによって、膵島新生を誘導する工程を包含する、方法。
14. 哺乳動物において膵島新生を誘導するための方法であって、該方法は、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドではないという条件で、該ＦＡＣＧＩＮＴとガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドとの組み合わせを含む組成物を、該哺乳動物における膵臓のインシュリン分泌β細胞の数を増加させるのに十分な量で投与する工程を包含する、方法。
15. 前記接触させる工程の前に、エキソビボで前記細胞を培養する工程をさらに包含する、請求項５に記載の方法。
16. ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、およびＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドではないという条件で、該ＦＡＣＧＩＮＴを含む、組成物。
17. 膵島前駆細胞の成熟インシュリン分泌細胞への分化を誘導するのに有効な投薬量にある、請求項１６に記載の組成物。
18. 薬学的に受容可能なキャリアにある、請求項１６に記載の組成物。
19. 糖尿病を処置または予防するためのキットであって、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドではないという条件で、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴ、容器、ならびに使用のための指示書を備える、キット。
20. 前記組成物が、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、請求項１９に記載のキット。
21. 移植細胞の糖尿病レシピエントにおいて、幹細胞をインシュリン分泌細胞に拡張および分化させるための方法であって、該レシピエントに、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドではないという条件で、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび１つ以上のＦＡＣＧＩＮＴの各々の有効量を含む組成物を投与する工程を包含する、方法。
22. 前記細胞が、ヒトまたはブタから得られる、請求項２１に記載の方法。
23. 前記移植細胞が、膵島、臍帯、胚または幹細胞株から得られる、請求項２１に記載の方法。
24. 前記ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドが、ガストリンである、請求項１、５、１３、１４および２１のいずれかに記載の方法。
25. 前記ガストリンが、ガストリン−１７である、請求項２４に記載の方法。
26. 前記ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドが、ヒトガストリン１−１７Ｌｅｕ１５である、請求項２４に記載の方法。
27. 前記細胞を前記レシピエントに移植する工程が、器官への直接注射、および静脈投与から選択される経路を使用することである、請求項２３に記載の方法。
28. 前記細胞を投与する工程が、膵臓、腎臓および肝臓から選択される器官に局所送達することである、請求項２３に記載の方法。
29. 前記細胞を局所送達する工程が、内視鏡的逆行性胆道膵管造影法（ＥＲＣＰ）、超音波内視鏡誘導細針送達（ＥＵＳ−ＦＮＡＤ）、膵臓動脈への注射、門脈への注射、膵臓内注射、および肝動脈への注射からなる群から選択される工程である、請求項２８に記載の方法。
30. 前記細胞を注射する工程が、門脈に経皮送達することかまたは経肝送達することである、請求項２７に記載の方法。
31. 前記移植する工程の前に、前記細胞をエキソビボで組成物を用いて処理する工程をさらに包含する、請求項２３に記載の方法。
32. ヒトの糖尿病を処置するための移植に必要とされる幹細胞の量を減少させるための方法であって、該方法は、レシピエントに、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドではないという条件で、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴの各々の有効量を投与する工程を包含し、ここで、該必要とされる細胞の量が、該有効量を投与する工程は存在しないが他の点は同一であるレシピエントに対して必要とされる細胞の量と比較して減少される、方法。
33. 前記被験者に、免疫応答を抑制するための薬剤を投与する工程をさらに包含する、請求項１および２のいずれかに記載の方法。
34. 前記免疫応答を抑制するための薬剤が、薬物である、請求項３３に記載の方法。
35. 前記免疫応答を抑制するための薬剤が、ラパマイシン、コルチコステロイド、アザチオプリン、ミコフェノール酸モフェチル、シクロスポリン、シクロホスファミド、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、ＦＫ５０６、１５−デオキシスペルグアリン、ＦＴＹ７２０、ミトキサントロン、２−アミノ−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２［２−（４−オクチルフェニル）エチル］プロパン−１，３−ジオールヒドロクロリド、６−（３−ジメチル−アミノプロピオニル）フォルスコリン、およびデメチムノマイシンからなる群の少なくとも１つから選択される、請求項３２に記載の方法。
36. 前記免疫応答を抑制するための薬剤が、タンパク質である、請求項３２に記載の方法。
37. 前記タンパク質が、抗体のアミノ酸配列を含む、請求項３６に記載の方法。
38. 前記免疫応答を抑制するための薬剤が、ｈｕｌ １２４、ＢＴＩ−３２２、アロトラップ−ＨＬＡ−Ｂ２７０、ＯＫＴ４Ａ、エンリモマブ（Ｅｎｌｉｍｏｍａｂ）、ＡＢＸ−ＣＢＬ、ＯＫＴ３、ＡＴＧＡＭ、バシリキシマブ、ダクリズマブ、チモグロブリン、ＩＳＡｔｘ２４７、Ｍｅｄｉ−５００、Ｍｅｄｉ−５０７、アレファセプト、エファリズマブ、インフリキシマブおよびインターフェロンのうちの少なくとも１つからなる群から選択される、請求項３７に記載の方法。
39. 前記膵島新生治療組成物および前記免疫応答を抑制するための薬剤が、連続投与される、請求項３２に記載の方法。
40. 前記膵島新生治療組成物および前記免疫応答を抑制するための薬剤のうちの少なくとも１つが全身投与される、請求項３２に記載の方法。
41. 前記膵島新生治療組成物がボーラスとして投与される、請求項４０に記載の方法。
42. 前記膵島新生治療組成物および前記免疫応答を抑制するための薬剤のうちの少なくとも１つが、静脈内、皮下、腹腔内または筋肉内からなる群から選択される経路によって投与される、請求項３２に記載の方法。
43. 前記免疫応答を抑制するための薬剤が、経口投与される、請求項３２に記載の方法。
44. 前記免疫応答を抑制するための薬剤が、ＦＫ５０６、ラパマイシン、およびダクリズマブからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項３２に記載の方法。
45. 前記被験者がヒトである、請求項１または３２のいずれかに記載の方法。
46. 糖尿病の被験体の処置のためのキットであって、免疫抑制剤、ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドではないという条件で該ＦＡＣＧＩＮＴを含むＩＮＴ組成物、ならびに容器を備える、キット。
47. ＦＡＣＧＩＮＴがＥＧＦレセプターリガンドではないという条件で該ＦＡＣＧＩＮＴと、免疫抑制のための薬剤を含む、薬学的組成物。
48. Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ治療組成物の徐放のための薬学的組成物であって、該組成物は、ガストリンレセプターリガンド、およびＥＧＦレセプターもしくはＦＡＣＧＩＮＴを含み、ここで、ガストリンレセプターリガンド、またはＥＧＦレセプターリガンドもしくはＦＡＣＧＩＮＴのうちの少なくとも１つが、徐放性処方物である組成物。
49. 免疫抑制のための薬剤をさらに含む、請求項１６および４８のいずれかに記載の組成物。
50. 前記徐放性処方物が、ＰＥＧ化、および多小胞脂質ベースのリポソームからなる群から選択される、請求項４８に記載の組成物。
51. 前記ＥＧＦレセプターリガンドが、ＥＧＦおよびＴＧＦＡからなる群から選択される、請求項４８に記載の組成物。
52. 前記ＦＡＣＧＩＮＴが、グルカゴン様ペプチド１レセプターリガンド、グルカゴン様ペプチド２レセプターリガンド、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）レセプターリガンド、ジペプチジルペプチダーゼＩＶインヒビター、ＲＥＧタンパク質レセプターリガンド、成長ホルモンレセプターリガンド、プロラクチン（ＰＲＬ）レセプターリガンド、インシュリン様成長因子（ＩＧＦ）レセプターリガンド、ＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）レセプターリガンド、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）レセプターリガンド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）レセプターリガンド、トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）レセプターリガンド、ラミニンレセプターリガンド、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）レセプターリガンド、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子レセプターリガンド、神経発育因子（ＮＧＦ）レセプターリガンド、膵島新生関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）レセプターリガンド、アクチビン−Ａレセプターリガンド、血管上皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）レセプターリガンド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）レセプターリガンド、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）レセプターリガンド、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）レセプターリガンド、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）レセプターリガンド、およびセクレチンレセプターリガンドからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項４８に記載の組成物。
53. 前記ＥＧＦレセプターリガンドが低分子量薬物である、請求項５１に記載の組成物。
54. 非経口投与のために処方される、請求項４８に記載の組成物。
55. 経口投与のために処方される、請求項４８に記載の組成物。
56. 皮下注射、腹腔内注射、静脈内注射、および筋肉内注射からなる群から選択される投与経路のために処方される、請求項５０に記載の組成物。
57. 前記ガストリンレセプターリガンド、または前記ＥＧＦレセプターリガンドもしくは前記ＦＡＣＧＩＮＴのうちの少なくとも１つが、全身投与のために処方される、請求項４８に記載の組成物。
58. 局所送達のために処方される、請求項１６および４８のいずれかに記載の組成物。
59. 局所送達が、前記膵臓を標的とする、請求項５８に記載の組成物。
60. 局所送達が、内視鏡的逆行性胆道膵管造影法（ＥＲＣＰ）、超音波内視鏡誘導細針送達（ＥＵＳ−ＦＮＡＤ）、膵臓動脈への注射、門脈への注射、膵臓内注射、および肝動脈への注射からなる群から選択される、請求項５８に記載の組成物。
61. 経皮送達および粘膜送達からなる群から選択される投与経路のために処方される、請求項１６および４８のいずれかに記載の組成物。
62. 機械装置による送達のために処方される、請求項４８に記載の薬学的組成物。
63. 分解性インプラント、経皮パッチ、カテーテル、埋め込み式ポンプ、経皮ポンプ、輸液ポンプ、およびイオン導入装置からなる群から選択される装置による投与のために処方される、請求項１６および４８のいずれかに記載の組成物。
64. 皮下、腹腔内、静脈内、および膵臓内からなる群から選択される投与経路のために処方される、請求項４８に記載の薬学的組成物。
65. 前記静脈内経路が門脈への経路である、請求項６４に記載の薬学的組成物。
66. 前記装置がポンプである、請求項６２に記載の薬学的組成物。
67. 前記投与が局所的である、請求項６２に記載の薬学的組成物。
68. 前記投与が局所的であり、かつ内視鏡的逆行性胆道膵管造影法（ＥＲＣＰ）、超音波内視鏡誘導細針送達（ＥＵＳ−ＦＮＡＤ）、膵臓動脈への注射、門脈への注射、膵臓内注射、および肝動脈への注射からなる群から選択される経路によって送達される、請求項４８に記載の組成物。
69. 前記投与が全身的である、請求項６２に記載の薬学的組成物。
70. 有効量にある、請求項４８に記載の薬学的組成物。
71. 請求項４８に記載の組成物の少なくとも１回用量を備える、キット。
72. 糖尿病の被験者をＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物で治療する頻度を減少させる方法であって、該方法は、以下：
    該組成物の少なくとも１つの成分を徐放性処方物として調製する工程、および
    該組成物をプロトコールに従って該被験体に投与する工程であって、該手順は、このように処方されないが他の点では同一である該組成物に対してよりも処置間の間隔が長い、工程
    を包含する、方法。
73. 前記投与する工程が、内視鏡的逆行性胆道膵管造影法（ＥＲＣＰ）、超音波内視鏡誘導細針送達（ＥＵＳ−ＦＮＡＤ）、膵臓動脈への注射、門脈への注射、膵臓内注射、および肝動脈への注射からなる群から選択される経路によって送達することである、請求項７２に記載の方法。
74. 糖尿病の被験者においてＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物の効力を増強する方法であって、該方法は、以下：
    徐放を生じるよう処方された該組成物の少なくとも１つの成分を含むＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物を、該被験者に投与する工程、および、
    該被験者を処置することにおいて、一定量の該投与された組成物の効力を、そのように処方される成分を含まないが他の点は同一である組成物の効力と比較する工程であって、その結果、該被験体における糖尿病の症状を軽減するかまたは解消するために必要とされる徐放性処方薬剤の量における減少によって測定されるように、徐放性処方組成物を含む該Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物の効力が増強される、工程
    を包含する、方法。
75. 請求項７４に記載の方法であって、前記効力を比較する工程が、前記組成物の毒性を分析する工程をさらに包含し、その結果、該組成物を投与する工程の後に望ましくない症状がより少なくなるかまたはより穏やかになることが、徐放を生じるように処方された少なくとも１つの成分を含む該組成物における毒性が、そのように処方される成分を含まないが他の点は同一である前記Ｉ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物の毒性と比較して、減少されたことを示す、方法。
76. 前記成分の徐放性処方物が、ＰＥＧ化および多小胞脂質ベースのリポソームからなる群から選択される、請求項７３〜７５のいずれかに記載の方法。
77. 前記徐放性処方物を含む前記成分が、ＥＧＦおよびＴＧＦαからなる群から選択されるＥＧＦレセプターリガンドである、請求項７３〜７６のいずれかに記載の方法。
78. 前記ＦＡＣＧＩＮＴが、グルカゴン様ペプチド１レセプターリガンド、グルカゴン様ペプチド２レセプターリガンド、胃抑制ポリペプチド（ＧＩＰ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子（ＫＧＦ）レセプターリガンド、ジペプチジルペプチダーゼＩＶインヒビター、ＲＥＧタンパク質レセプターリガンド、成長ホルモンレセプターリガンド、プロラクチン（ＰＲＬ）レセプターリガンド、インシュリン様成長因子（ＩＧＦ）レセプターリガンド、ＰＴＨ関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）レセプターリガンド、肝細胞成長因子（ＨＧＦ）レセプターリガンド、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）レセプターリガンド、トランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）レセプターリガンド、ラミニンレセプターリガンド、血管作動性腸管ペプチド（ＶＩＰ）レセプターリガンド、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）レセプターリガンド、ケラチノサイト成長因子レセプターリガンド、神経発育因子（ＮＧＦ）レセプターリガンド、膵島新生関連タンパク質（ＩＮＧＡＰ）レセプターリガンド、アクチビン−Ａレセプターリガンド、血管上皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）レセプターリガンド、エリスロポエチン（ＥＰＯ）レセプターリガンド、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ポリペプチド（ＰＡＣＡＰ）レセプターリガンド、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）レセプターリガンド、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）レセプターリガンド、およびセクレチンレセプターリガンドからなる群から選択される少なくとも１つである、請求項７３〜７６のいずれかに記載の方法。
79. 前記成分が低分子量薬物である、請求項７８に記載の方法。
80. 前記投与する工程が、非経口、経口、経皮、皮下、粘膜、腹腔内、静脈内、膵臓内および筋肉内からなる群から選択される経路によって送達することである、請求項７３〜７６のいずれかに記載の方法。
81. 前記投与する工程が、局所分布を生じる、請求項８０に記載の方法。
82. 前記組成物を有効用量で投与する工程をさらに包含する、請求項８２に記載の方法。
83. 前記投与する工程の前に、前記組成物が徐放装置を使用するために処方される、請求項８０に記載の方法。
84. 前記装置が、分解性インプラント、経皮パッチ、カテーテル、埋め込み式ポンプ、経皮ポンプ、輸液ポンプ、およびイオン導入装置からなる群から選択される、請求項８３に記載の方法。
85. 前記装置がポンプである、請求項８４に記載の方法。
86. 前記静脈内経路によって投与する工程が、門脈に注射することである、請求項８０に記載の方法。
87. 糖尿病の被験体を処置する頻度を減少させる方法であって、該方法は、以下：
    長期間の連続放出によって該被験体にＩ．Ｎ．Ｔ．^ＴＭ組成物を投与するための装置を用意する工程；
    該装置を該被験体に提供する工程；および
    該装置を再配置するかまたは再充填することによって該被験体の処置を繰り返す工程
    を包含する、方法。
88. 前記装置がポンプである、請求項８７に記載の方法。
89. 前記ポンプが、経皮ポンプ、フルオロカーボン噴霧ポンプ、浸透圧ポンプ、ミニ浸透圧ポンプ、埋め込み式ポンプ、および輸液ポンプからなる群から選択される、請求項８８に記載の方法。
90. 前記装置が、分解性インプラント、非分解性インプラント、粘膜付着性インプラント、経皮パッチ、カテーテル、およびイオン導入装置からなる群から選択される、請求項８７に記載の方法。
91. 幹細胞を、該幹細胞の糖尿病レシピエントにおいてインシュリン分泌細胞に拡張および分化させるための方法であって、以下：
    該細胞を該レシピエントに移植する工程；および
    ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンド、およびＦＡＣＧＩＮＴもしくはＥＧＦレセプターリガンドの各々の有効量を含む徐放性組成物を投与する工程であって、ここで、該幹細胞が、該レシピエントにおいてインシュリン分泌細胞に拡張および分化される、工程
    を包含する、方法。
92. グルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）レセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含む、糖尿病を処置するための組成物。
93. 前記ＧＬＰ−１レセプターリガンドが、ＧＬＰ−１である、請求項９２に記載の組成物。
94. 成長ホルモン（ＧＨ）レセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含む、糖尿病を処置するための組成物。
95. 前記ＧＨが、ヒト成長ホルモン（ＨＧＨ）である、請求項９４に記載の組成物。
96. プロラクチン（ＰＬ）レセプターリガンドおよびガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドを含む、糖尿病を処置するための組成物。
97. 前記ＰＬが、ヒトＰＬである、請求項９６に記載の組成物。
98. 前記ガストリンが、アミノ酸位置１５にてＬｅｕ残基を含む１７個のアミノ酸を有するガストリンＩである、請求項９２〜９７のいずれかに記載の組成物。
99. 免疫抑制のための薬剤をさらに含む、請求項９２〜９８のいずれかに記載の組成物。
100. さらに徐放のために処方される、請求項９２〜９９のいずれかに記載の組成物。
101. 糖尿病の被験体を処置する方法であって、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびグルカゴン様ペプチド１（ＧＬＰ−１）レセプターリガンドを含む組成物を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。
102. 糖尿病の被験体を処置する方法であって、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよび成長ホルモン（ＧＨ）レセプターリガンドを含む組成物を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。
103. 糖尿病の被験体を処置する方法であって、ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびプロラクチン（ＰＬ）レセプターリガンドを含む組成物を、該被験体に投与する工程を包含する、方法。
104. 免疫抑制のための薬剤を投与する工程をさらに包含する、請求項１０１〜１０３のいずれかに記載の方法。
105. 徐放用装置を使用して、レセプターリガンドまたは薬剤のうちの少なくとも１つを投与する工程をさらに包含する、請求項１０１〜１０４のいずれかに記載の方法。
106. レセプターリガンドまたは徐放性薬剤のうちの少なくとも１つを処方する工程をさらに包含する、請求項１０１〜１０４のいずれかに記載の方法。
107. 前記糖尿病の被験体が、Ｉ型糖尿病またはＩＩ型糖尿病である、請求項１０１〜１０４のいずれかに記載の方法。
108. 膵島移植物の機能性β細胞塊を、精製された膵島移植物を受容する糖尿病の患者において拡張するための方法であって、該方法は、該哺乳動物にガストリンＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴの有効量を投与する工程を包含する、方法。
109. ヒト糖尿病を処置する方法であって、該方法は、以下：
     糖尿病の患者に膵島調製物を移植する工程；および
     ガストリン／ＣＣＫレセプターリガンドおよびＦＡＣＧＩＮＴの有効量を投与する工程
     を包含する、方法。
110. 前記ＦＡＣＧＩＮＴが、プロラクチンであるプロラクチンレセプターリガンドを含む、請求項１に記載の方法。