ES2320754T3

ES2320754T3 - Tratamiento de la diabetes.

Info

Publication number: ES2320754T3
Application number: ES03774936T
Authority: ES
Inventors: Stephen J. Brand; Antonio Cruz; Aleksandra Pastrak; Yin Hew
Original assignee: Waratah Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Waratah Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2002-10-22
Filing date: 2003-10-22
Publication date: 2009-05-28
Anticipated expiration: 2023-10-22
Also published as: EP1569680A2; ATE421333T1; PL376473A1; JP2006506386A; NO20052419L; MXPA05004202A; NO20052419D0; EP2080521A1; BR0315523A; EP1569680B1; KR20050074492A; WO2004037195A3; WO2004037195A2; DK1569680T3; US20090036381A1; CA2501677A1; AU2003283004A1; US20060189520A1; DE60326002D1; EP1569680A4

Abstract

Composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK, un ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón (GLP-1), y un soporte farmacéuticamente aceptable, para tratar la diabetes.

Description

Tratamiento de la diabetes.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a procedimientos y composiciones para tratar a un sujeto diabético con terapia de neogénesis de islotes y un agente de inmunosupresión, con formulaciones y procedimientos para la administración local y para la liberación controlada de las composiciones.

Antecedentes de la invención

Las formas graves de la enfermedad común Diabetes Mellitus están causadas por una ausencia o deficiencia relativa de secreción de insulina en las células \beta pancreáticas. En consecuencia, los diabéticos dependen de inyecciones de insulina exógena para prevenir las complicaciones de un nivel elevado de glucosa en sangre (hiperglucemia) que pueden poner en peligro su vida. A menos que los pacientes se sometan a un régimen muy exigente de ensayos de glucosa y tratamiento de insulina (tratamiento intensivo de insulina), el tratamiento con insulina no previene las complicaciones crónicas a largo término de los daños causados en los órganos por la hiperglucemia. El tratamiento intensivo con insulina aumenta el riesgo de hipoglucemia aguda debida a la sobredosis de insulina, con alteraciones agudas y graves del estado de conciencia que pueden resultar fatales.

Aproximadamente un millón de personas en Estados Unidos sufren diabetes juvenil o de tipo I, y se producen aproximadamente 30.000 nuevos casos al año. Además, un número extremadamente grande y en rápido crecimiento de pacientes presentan formas de diabetes de tipo II (también llamada diabetes del adulto o de resistencia a la insulina), en un nivel de proporciones epidémicas, una enfermedad que puede provocar agotamiento pancreático e insuficiencia de insulina.

El nivel anormalmente elevado de glucosa en sangre (hiperglucemia) que caracteriza a la diabetes, si no se trata, provoca una serie de afecciones patológicas, como por ejemplo úlceras vasculares periféricas sin cicatrización, daños en la retina que conducen a la ceguera e insuficiencia renal. La diabetes de los tipos I y II se trata con inyección de insulina como respuesta a los niveles de glucosa en sangre determinados por autocontrol de la glucosa por parte del paciente, aunque no todos los pacientes de tipo II llegan a requerir terapia con insulina. Típicamente, el paciente se administra diversas dosis de insulina por día. Las consecuencias patológicas graves de la diabetes están relacionadas con un control menos riguroso del nivel de glucosa en sangre.

Un tratamiento potencial para la diabetes consistiría en restaurar la función de las células \beta, de tal modo que la liberación de insulina se regule dinámicamente en respuesta a los cambios en los niveles de glucosa en sangre. Esto se puede alcanzar mediante el transplante del páncreas, pero este enfoque se limita típicamente a los diabéticos que requieren transplantes renales a causa de insuficiencia renal. Además, el transplante de páncreas puede requerir inmunosupresión de por vida a efectos de impedir el rechazo alogénico del injerto y la destrucción autoinmune del páncreas trasplantado.

Recientemente, los trasplantes de preparaciones de islotes humanos aislados han invertido con éxito la diabetes en sujetos humanos durante períodos prolongados. Sin embargo, se requiere una gran cantidad de material celular de islote de dador para cada receptor, y la administración de material celular de islote no ha sido suficiente para satisfacer la demanda.

Sumario

Una característica de la presente invención es un procedimiento destinado al tratamiento de una condición diabética, incluyendo dicho procedimiento la administración a un mamífero de una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK y un factor para complementar la gastrina para una terapia de neogénesis de islotes (FACGINT), siempre y cuando el FACGINT no sea un ligando del receptor de EGF.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término FACGINT se refiere, por lo menos, a un ligando seleccionado de entre el grupo constituido por: un ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón; un ligando del receptor del péptido 2 de tipo glucagón; un ligando del receptor de polipéptido inhibidor gástrico (GIP); un ligando del receptor de factor de crecimiento de queratinocitos (KGF); un inhibidor de dipeptidil peptidasa IV; un ligando del receptor de proteína REG; una hormona del crecimiento; un ligando del receptor de prolactina (PRL); un factor de crecimiento de tipo insulina (IGF); un ligando del receptor de proteína relacionada con PTH (PTHrP); un ligando del receptor de factor de crecimiento de hepatocitos (HGF); un ligando del receptor de proteína morfogenética ósea (BMP); un factor \beta de crecimiento transformante (TGF-\beta); un ligando del receptor de laminina; un ligando del receptor de péptido intestinal vasoactivo (VIP); un ligando del receptor de factor de crecimiento de fibroblastos (FGF); un ligando del receptor de factor de crecimiento de queratinocitos; un ligando del receptor de factor de crecimiento nervioso (NGF); un ligando del receptor de proteína asociada a neogénesis de islotes (INGAP); un ligando del receptor de activina-A; un ligando del receptor de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF); un ligando del receptor de eritropoyetina (EPO); un ligando del receptor de polipéptido activador de adenilato ciclasa de pituitaria (PACAP); un ligando del receptor de factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF); un ligando del receptor de factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF); un ligando del receptor de factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y un ligando del receptor de secretina.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "diabetes" se refiere a cualquier indicación fisiológica de falta de insulina, producción de anticuerpos contra la insulina o exceso de azúcar en sangre. Algunos tipos de diabetes, aunque la misma no se limita a los mismos, son diabetes I, diabetes II, diabetes gestacional y una condición prediabética. Tal como se utiliza en la presente memoria, el término "mamífero" tiene el significado habitual de cualquier miembro de la familia de los mamíferos, incluyendo los humanos.

En formas de realización relacionadas, el FACGINT es un ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón (GLP-1); un ligando del receptor del péptido 2 de tipo glucagón (GLP-2); o un miembro de la familia de ligandos de receptor de hormona del crecimiento, y puede ser una hormona del crecimiento, tal como la hormona del crecimiento humano (HGH), un lactógeno placentario (PL) o una prolactina (PRL) o una exendina, tal como exendina-4.

Otra característica de la presente invención da a conocer un procedimiento para tratar la diabetes, incluyendo dicho procedimiento poner en contacto ex vivo una serie de células con una composición que presenta, por lo menos, uno de entre un FACGINT y un ligando del receptor de gastrina/CCK, siempre y cuando el FACGINT no sea un ligando del receptor de EGF; y administrar dichas células a un mamífero que presente necesidad de ellas, tratándose de este modo la diabetes. En una forma de realización del procedimiento, las células son autólogas, es decir, del propio sujeto. Alternativamente, las células proceden de otro individuo de la misma especie, o incluso de otras especies. En el procedimiento que utiliza células ex vivo, las células pueden ser células ductales pancreáticas. Las células pancreáticas son una fuente de células precursoras de islotes. Otra forma de realización del presente procedimiento incluye, antes de la etapa de implante, el tratamiento de las células ex vivo con la composición. Un procedimiento relacionado incluye además, antes de la etapa de puesta en contacto, el cultivo de las células ex vivo.

Generalmente, los términos "administrar" o "poner en contacto" significan que al usuario del procedimiento se le proporciona la composición en una cantidad eficaz para incrementar la cantidad de células secretoras de insulina en el mamífero.

Generalmente, en estos procedimientos, la composición se administra sistémicamente. Además, la cantidad de FACGINT en la composición es sustancialmente menor que la dosis mínima eficaz del FACGINT requerido a efectos de reducir la glucosa en sangre en un mamífero diabético en ausencia de un ligando del receptor de gastrina/CCK. El procedimiento puede incluir además la medición de un parámetro seleccionado de entre el grupo constituido por: glucosa en sangre, glucosa en suero, hemoglobina glucosilada en sangre, masa de células \beta pancreáticas, insulina en suero, contenido de insulina pancreática y masa de células \beta determinada morfométricamente. En general, el experto en la materia de diagnosis de la diabetes mediría un nivel de glucosa en sangre o suero después de un ayuno, es decir, de un período de no alimentar al sujeto o paciente, con una duración típica de dicha diagnosis. La medición estándar es un ensayo de glucosa en sangre en ayuno, o FBG.

Los procedimientos in vivo de la presente invención pueden incluir además la medición de un parámetro seleccionado de entre el grupo constituido por: cantidad de células secretoras de insulina, respuesta a la glucosa de las células secretoras de insulina, cantidad de proliferación de células precursoras de islotes y cantidad de células maduras secretoras de insulina, llevándose a cabo dichas mediciones en un mamífero que es un animal experimental, tal como un ratón genéticamente diabético (ratón NOD) o un roedor en el que se ha inducido la diabetes (con estreptozoticina o STZ).

Otra forma de realización de la presente invención es un procedimiento para inducir la neogénesis de islotes pancreáticos en un mamífero que consiste en administrar a dicho mamífero una composición que comprende una combinación de un FACGINT y un ligando del receptor de gastrina/CCK, siempre y cuando el FACGINT no sea un ligando del receptor de EGF, en una cantidad suficiente para aumentar la proliferación de células precursoras de islotes en el tejido pancreático, induciéndose de este modo la neogénesis de islotes pancreáticos.

Otra forma de realización de la presente invención es un procedimiento para inducir la neogénesis de islotes pancreáticos en un mamífero, que consiste en administrar a dicho mamífero una composición que comprende una combinación de un FACGINT y un ligando del receptor de gastrina/CCK, siempre y cuando el FACGINT no sea un ligando del receptor de EGF, en una cantidad suficiente para aumentar la proliferación de células precursoras de islotes en el tejido pancreático, induciéndose de este modo la neogénesis de islotes pancreáticos.

Correspondientemente, una forma de realización de la invención es una composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT, siempre y cuando el FACGINT no sea un ligando del receptor de EGF. En algunas formas de realización, la composición se suministra en una dosis eficaz para inducir la proliferación de células precursoras de islotes en una cantidad aumentada de células maduras secretoras de insulina. Similarmente, en algunas formas de realización la composición se suministra en una dosis eficaz para inducir la diferenciación de una célula precursora de islotes en una célula madura secretora de insulina.

La composición se puede suministrar en un soporte farmacéuticamente aceptable.

La presente invención también da a conocer un kit para tratar la diabetes que contiene una composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT, un recipiente e instrucciones de uso, siempre y cuando el FACGINT no sea un ligando del receptor de EFG. La composición se puede suministrar en una o más dosis unitarias. La composición del kit incluye además un soporte farmacéuticamente aceptable.

Otra característica de la presente invención es un procedimiento para expandir y diferenciar las células madre en células secretoras de insulina en un receptor diabético de células implantadas, que incluye implantar las células madre en el receptor y administrarle una composición que contiene una dosis eficaz de un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT, siempre y cuando el FACGINT no sea un ligando del receptor de EGF. En este procedimiento, las células se pueden obtener, por ejemplo, de un humano o un porcino. Además, las células implantadas se obtienen de islotes pancreáticos, cordones umbilicales, embriones o líneas de células madre. Alternativamente, un procedimiento para expandir y diferenciar células madre en un receptor diabético de las células en células secretoras de insulina es: implantar las células en un receptor; y administrar una composición de liberación controlada que comprende una dosis eficaz de un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT o un ligando del receptor de EGF.

En general, de acuerdo con estos procedimientos, el ligando del receptor de gastrina/CCK es la gastrina. En formas de realización relacionadas, la gastrina es gastrina-17, por ejemplo, la gastrina es gastrina 1-17Leu15 humana.

Además, de acuerdo con estos procedimientos, la implantación de las células en el receptor se lleva a cabo utilizando una vía tal como la inyección directa en un órgano y la administración intravenosa. Inyectar las células es suministrarlas localmente a un órgano, por ejemplo, el páncreas, el riñón o el hígado. Además, inyectar las células es suministrarlas a la vena portal por vía percutánea o transhepática. En todos estos procedimientos, se puede insertar un catéter en una vena o arteria que procede del órgano o conduce al mismo, utilizando tecnología de imagen, tal como ultrasonido o MRI, durante el procedimiento.

La forma de suministro local de las células se puede seleccionar de entre diversas tecnologías, incluyendo colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (ERCP); administración mediante aguja fina dirigida endoscópicamente por ultrasonidos (EUS-FNAD); inyección a una arteria pancreática; inyección en una vena portal; inyección intrapancreática; e inyección en una arteria hepática. En estas tecnologías, el usuario puede guiarse mediante una de las diversas tecnologías de imagen, incluyendo ultrasonidos o MRI, durante el procedimiento.

Otra característica de la presente invención es un procedimiento para reducir una cantidad de células madre requeridas para el transplante para tratar la diabetes humana, incluyendo dicho procedimiento la administración al receptor de una dosis eficaz de ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT, reduciéndose la cantidad de células en comparación con la implantación de células en ausencia de administración de dosis eficaz a un receptor, por lo demás idéntico, siempre y cuando el FACGINT no sea un ligando del receptor de EGF.

En una forma de realización relacionada de la invención, la presente invención da a conocer una composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT, siempre y cuando el FACGINT no sea un ligando del receptor de EGF. La composición se suministra en una dosis eficaz para inducir la diferenciación de una célula precursora de islotes en una célula madura secretora de insulina. La composición se puede suministrar además en un soporte farmacéuticamente aceptable.

Se da a conocer un kit para tratar la diabetes, conteniendo dicho kit una composición que comprende, por lo menos, un FACGINT, siempre y cuando el FACGINT no sea un ligando del receptor de EGF.

Cualquiera de los procedimientos anteriores puede incluir además la administración al sujeto de un agente para la supresión de una respuesta inmune. En cualquiera de los procedimientos anteriores, los componentes de la combinación se pueden administrar simultáneamente, por ejemplo, dentro de una hora o de un día, o se pueden administrar secuencialmente, por ejemplo, en un intervalo mayor de un día, mayor de dos o más días, o mayor de una semana.

Un ejemplo de agente para la supresión de la respuesta inmune es un fármaco, por ejemplo es, por lo menos, uno de entre el grupo constituido por una rapamicina; un corticoesteroide; una azatioprina; micofenolato de mofetilo; una ciclosporina; una ciclofosfamida; un metotrexato; una 6-mercaptopurina; FK506; 15-desoxiespergualina; un FTY 720; una mitoxantrona; un 2-amino-1,3-propandiol; un hidrocloruro de 2-amino-2[2-(4-octilfenil)etil]propan-1,3-diol; una 6-(3-dimetil-aminopropionil)forscolina; y una demetimmunomicina.

Alternativamente, un ejemplo de agente para la supresión de la respuesta inmune es una proteína, por ejemplo, comprendiendo dicha proteína una secuencia de aminoácidos de un anticuerpo. Correspondientemente, el agente para la supresión de la respuesta inmune es, por lo menos, un agente seleccionado de entre: hul 124; BTI-322; allotrap-HLA-B270; OKT4A; Enlimomab; ABX-CBL; OKT3; ATGAM; basiliximab; daclizumab; timoglobulina; ISAtx247; Medi-500; Medi-507; Alefacept; efalizumab; infliximab; y un interferón. La composición de terapia de neogénesis de islotes y el agente de supresión de la respuesta inmune se administran secuencialmente, o se pueden administrar simultáneamente.

En algunas formas de realización, por lo menos uno de entre la composición de terapia de neogénesis de islotes y el agente para la supresión de la respuesta inmune se administran sistémicamente. Por ejemplo, la composición de terapia de neogénesis de islotes se administra en forma de bolus. De este modo, por lo menos uno de entre la composición de terapia de neogénesis de islotes y el agente para la supresión de la respuesta inmune se administran mediante vía intravenosa, subcutánea, intraperitoneal o intramuscular. Además, en algunas formas de realización, el agente para la supresión de la respuesta inmune se administra oralmente. En general, el agente para la supresión de la respuesta inmune es, por lo menos, uno de entre FK506, rapamicina y daclizumab. Además, según formas de realización de cualquiera de los procedimientos de la presente memoria distintos de los que requieren la medición de determinados parámetros experimentales, el sujeto puede ser un humano.

La presente memoria también da a conocer un kit para el tratamiento de un sujeto diabético que comprende un recipiente, un agente inmunosupresor y una composición INT que comprende un FACGINT, siempre y cuando el FACGINT no sea un ligando del receptor de EGF.

La presente invención da a conocer asimismo una composición farmacéutica para la liberación controlada de una composición terapéutica I.N.T.^{TM}, comprendiendo dicha composición: un ligando del receptor de gastrina; y un ligando del receptor de EFG o un FACGINT; siendo, por lo menos, uno de entre el ligando del receptor de gastrina, o el ligando del receptor de EGF o el FACGINT, una formulación de liberación controlada. La presente composición puede comprender asimismo un agente de inmunosupresión. Son ejemplos de formas de realización de la formulación de liberación controlada la pegilación, por lo menos, de uno de los componentes de la composición, y la formulación, por lo menos, de un componente en un liposoma multivesicular basado en lípidos. Los ejemplos del ligando del receptor de EGF se seleccionan de entre el grupo constituido por un EGF y un TGF-\alpha. Los ejemplos de FACGINT son, por lo menos, uno seleccionado de entre el grupo constituido por: un ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón; un ligando del receptor del péptido 2 de tipo glucagón; un ligando del receptor de polipéptido inhibidor gástrico (GIP); un ligando del receptor de factor de crecimiento de queratinocitos (KGF); un inhibidor de dipeptidil peptidasa IV; un ligando del receptor de proteína REG; un ligando del receptor de hormona del crecimiento; un ligando del receptor de prolactina (PRL); un factor de crecimiento de tipo insulina (IGF); un ligando del receptor de proteína relacionada con PTH (PTHrP); un ligando del receptor de factor de crecimiento de hepatocitos (HGF); un ligando del receptor de proteína morfogenética ósea (BMP); un ligando del receptor de factor \beta de crecimiento transformante (TGF-\beta); un ligando del receptor de laminina; un ligando del receptor de péptido intestinal vasoactivo (VIP); un ligando del receptor de factor de crecimiento de fibroblastos (FGF); un ligando del receptor de factor de crecimiento de queratinocitos; un ligando del receptor de factor de crecimiento nervioso (NGF); un ligando del receptor de proteína asociada a neogénesis de islotes (INGAP); un ligando del receptor de activina-A; un ligando del receptor de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF); un ligando del receptor de eritropoyetina (EPO); un ligando del receptor de polipéptido activador de adenilato ciclasa de pituitaria (PACAP); un ligando del receptor de factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF); un ligando del receptor de factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF); un ligando del receptor de factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y un ligando del receptor de secretina. Alternativamente, el ligando del receptor de EGF es un fármaco de bajo peso molecular. La composición se puede formular para la administración parenteral. Alternativamente, la composición se puede formular para la administración oral. La composición se puede formular para una vía de administración seleccionada de entre el grupo constituido por inyección subcutánea, intraperitoneal, intravenosa e intramuscular. En una forma de realización, por lo menos uno de entre el ligando del receptor de gastrina, el ligando del receptor de EGF, o el FACGINT, se formula para la administración sistémica.

Además, las composiciones anteriores se pueden formular para la administración local, por ejemplo, dirigiéndose dicha administración local al páncreas. Los ejemplos de tipos de administración local incluyen colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (ERCP); administración mediante una aguja fina dirigida endoscópicamente por ultrasonidos (EUS-FNAD); inyección a una arteria pancreática; inyección en una vena portal; inyección intrapancreática; e inyección en una arteria hepática. Los ejemplos anteriores se pueden combinar con tecnologías de imagen, tales como ultrasonidos y MRI, durante el procedimiento.

En algunas formas de realización, la composición se formula para una vía de administración seleccionada de entre el grupo constituido por administración transdérmica y administración mucosal. Cualquiera de estas composiciones se puede formular para la administración con un dispositivo mecánico, en combinación con una formulación para la liberación controlada, o alternativamente, la utilización del dispositivo mecánico para suministrar la formulación a lo largo de un periodo de tiempo prolongado.

Las composiciones y composiciones farmacéuticas anteriores se pueden formular para una vía de administración seleccionada de entre el grupo constituido por: subcutánea, intraperitoneal, intravenosa e intrapancreática. Por ejemplo, la vía intravenosa se dirige a una vena portal. Se puede utilizar un dispositivo, y dicho dispositivo puede ser una bomba. Con las formulaciones de liberación controlada, así como con algunos de los procedimientos y composiciones anteriores, la administración puede ser local. Por ejemplo, la administración local se puede suministrar mediante una vía seleccionada de entre el grupo constituido por: colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (ERCP); administración mediante aguja fina dirigida endoscópicamente por ultrasonidos (EUS-FNAD); inyección a una arteria pancreática; inyección en una vena portal; inyección intrapancreática; e inyección en una arteria hepática. Alternativamente, con las formulaciones y dispositivos de liberación controlada, la administración puede ser sistémica. La composición farmacéutica se puede suministrar en una dosis eficaz. La presente memoria también da a conocer un kit que comprende, por lo menos, una dosis de una composición de cualquiera de las formulaciones de liberación controlada anteriores.

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También se da a conocer un procedimiento de reducción de la frecuencia de tratamiento de un sujeto diabético con una composición I.N.T.^{TM}, incluyendo dicho procedimiento la preparación, por lo menos, de un componente de la composición como formulación de liberación controlada; y la administración de la composición al sujeto según un protocolo que presenta intervalos mayores entre tratamientos que para la composición no formulada de este modo y, por lo demás, idéntica. La administración puede ser el suministro a través de una vía seleccionada de entre: colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (ERCP); administración mediante aguja fina dirigida endoscópicamente por ultrasonidos (EUS-FNAD); inyección a una arteria pancreática; inyección en una vena portal; inyección intrapancreática; o inyección en una arteria hepática. Se puede utilizar tecnología de imagen a efectos de dirigir un catéter al lugar adecuado durante dichos procedimientos.

También se da a conocer un procedimiento para aumentar la eficacia de una composición I.N.T.^{TM} en un sujeto diabético, incluyendo dicho procedimiento: administrar al sujeto una composición I.N.T.^{TM} que presenta, por lo menos, un componente de la composición formulada para producir una liberación controlada; y comparar la eficacia, en el tratamiento del sujeto, de una cantidad de la composición administrada, con la eficacia de una composición que no presenta un componente formulado de este modo y, por lo demás, idéntica, de tal modo que aumenta la eficacia de la composición I.N.T.^{TM} que presenta una composición formulada como de liberación controlada, que se mide por la disminución de la cantidad del agente formulado como de liberación controlada necesario para reducir o eliminar los síntomas de diabetes en el sujeto. En una forma de realización de estos procedimientos, comparar la eficacia incluye además analizar la toxicidad de la composición, de tal modo que la reducción o suavización de los síntomas no deseados tras la administración de la composición indica una menor toxicidad en la composición que presenta, por lo menos, un componente formulado para producir una liberación controlada, en comparación con la toxicidad de la composición I.N.T.^{TM} que no presenta un componente formulado de este modo y, por lo demás, idéntica. En todos estos procedimientos, son ejemplos de formulaciones de liberación controlada del componente la pegilación y un liposoma multivesicular basado en lípidos.

En todos estos procedimientos, que aumentan la eficacia de una composición I.N.T.^{TM}, el componente que presenta la formulación de liberación controlada es un ligando del receptor de EGF seleccionado de entre el grupo constituido por un EGF y un TGF-\alpha. Alternativamente, en formas de realización de estos procedimientos, el FACGINT es, por lo menos, un ligando seleccionado de entre el grupo constituido por: un ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón; un ligando del receptor del péptido 2 de tipo glucagón; un ligando del receptor de polipéptido inhibidor gástrico (GIP); un ligando del receptor de factor de crecimiento de queratinocito (KGF); un inhibidor de dipeptidil peptidasa IV; un ligando del receptor de proteína REG; un ligando del receptor de hormona del crecimiento; un ligando del receptor de prolactina (PRL); un factor de crecimiento de tipo insulina (IGF); un ligando del receptor de proteína relacionada con PTH (PTHrP); un ligando del receptor de factor de crecimiento de hepatocitos (HGF); un ligando del receptor de proteína morfogenética ósea (BMP); un ligando del receptor de factor \beta de crecimiento transformante (TGF-\beta); un ligando del receptor de laminina; un ligando del receptor de péptido intestinal vasoactivo (VIP); un ligando del receptor de factor de crecimiento de fibroblastos (FGF); un ligando del receptor de factor de crecimiento de queratinocitos; un ligando del receptor de factor de crecimiento nervioso (NGF); un ligando del receptor de proteína asociada a neogénesis de islotes (INGAP); un ligando del receptor de activina-A; un ligando del receptor de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF); un ligando del receptor de eritropoyetina (EPO); un ligando del receptor de polipéptido activador de adenilato ciclasa de pituitaria (PACAP); un ligando del receptor de factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF); un ligando del receptor de factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF); un ligando del receptor de factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF) y un ligando del receptor de secretina. Además, como alternativa, un componente es un fármaco de bajo peso molecular. En cualquiera de estos procedimientos, administrar significa suministrar a través de una vía seleccionada de entre el grupo constituido por vía parenteral, oral, transdérmica, subcutánea, mucosal, intraperitoneal, intravenosa, intrapancreática e intramuscular.

Por ejemplo, la administración produce una distribución local. Además, el procedimiento incluye administrar la composición en una dosis eficaz. Además, el procedimiento incluye, antes de la administración, que la composición se formule para utilizar un dispositivo de liberación controlada. Por ejemplo, el dispositivo se selecciona de entre el grupo constituido por: implante degradable; parche transcutáneo; catéter; bomba implantable; bomba percutánea; bomba de infusión; y dispositivo de iontoforesis. Por ejemplo, el dispositivo es una bomba. Administrar en cualquiera de estos procedimientos puede ser, por vía intravenosa, inyectando en la vena portal.

También se da a conocer un procedimiento para reducir la frecuencia de tratamiento de un sujeto diabético, comprendiendo dicho procedimiento la preparación de un dispositivo para administrar una composición I.N.T.^{TM} al sujeto por liberación continua durante un periodo prolongado; proporcionar el dispositivo al sujeto; y tratar repetidamente dicho sujeto reemplazando o rellenando el dispositivo, por ejemplo, un dispositivo que es una bomba. La bomba puede ser una bomba percutánea; una bomba de propulsante de fluorocarbono; una bomba osmótica; una bomba miniosmótica; una bomba implantable; o una bomba de infusión. Alternativamente, el dispositivo se selecciona de entre el grupo constituido por: un implante degradable; un implante no degradable; un implante mucoadhesivo; un parche transcutáneo; un catéter; y un dispositivo de iontoforesis. Un implante no degradable a título de ejemplo es el Silastic. Otros ejemplos de implantes degradables pueden ser, por lo menos, uno de los materiales seleccionados de entre el grupo constituido por: almidón; almidón vinílico; diacrilato de dipropilenglicol (DPGDA); diacrilato de tripropilenglicol (TPGDA); pectina; acetato de celulosa; propionato de celulosa; acetato butirato de celulosa; acetato propionato de celulosa (CAP); hidroxipropilcelulosa (HPC); hidroxipropilcelulosa/acetato propionato de celulosa (HPC/CAP); metacrilato de metilo (MMA); metacrilato de butilo (BMA); metacrilato de hidroximetilo (HEMA); acrilato de etilhexilo (EHA); metacrilato de octadecilo (ODMA); y dimetacrilato de etilenglicol (EGDMA).

También se da a conocer un procedimiento para expandir y diferenciar células madre en células secretoras de insulina en un receptor diabético de las células, presentando dicho procedimiento las etapas de: implantar las células en el receptor; y administrar una composición de liberación controlada que comprende una dosis eficaz de cada uno de entre: un ligando del receptor de gastrina/CCK; y un FACGINT o un ligando del receptor de EGF, expandiéndose y diferenciándose las células madre en células secretoras de insulina en el receptor.

También se da a conocer una composición para el tratamiento de la diabetes que comprende un ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón (GLP-1) y un ligando del receptor de gastrina/CCK. Por ejemplo, el ligando del receptor GLP-1 es GLP-1. También se da a conocer una composición para tratar la diabetes que comprende un ligando del receptor de hormona del crecimiento (GH) y un ligando del receptor de gastrina/CCK. Por ejemplo, la GH es la hormona del crecimiento humano (HGH). También se da a conocer una composición para tratar la diabetes que comprende un ligando del receptor de prolactina (PL) y un ligando del receptor de gastrina/CCK. Por ejemplo, la PL es la PL humana. En cualquiera de estas composiciones, la gastrina a título de ejemplo es gastrina I con 17 aminoácidos, con un residuo Leu en el aminoácido de la posición 15. Cualquiera de estas composiciones puede presentar además un agente de inmunosupresión. Además, cualquiera de estas composiciones se puede formular para una liberación controlada.

También se da a conocer un procedimiento para tratar un sujeto diabético que consiste en administrar a dicho sujeto una composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK y un ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón (GLP-1). También se da a conocer un procedimiento para tratar un sujeto diabético que consiste en administrar a dicho sujeto una composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK y un ligando del receptor de hormona del crecimiento (GH). También se da a conocer un procedimiento para tratar un sujeto diabético que consiste en administrar a dicho sujeto una composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK y un ligando del receptor de prolactina (PL). Cualquiera de estos procedimientos puede incluir la administración de un agente de inmunosupresión. Cualquiera de estos procedimientos puede incluir además la administración, por lo menos, de uno de los ligandos de receptor o agentes utilizando un dispositivo de liberación controlada. Cualquiera de estos procedimientos puede incluir además la formulación, por lo menos, de uno de los ligandos de receptor o agentes para una liberación controlada. Cualquiera de estos procedimientos puede ser utilizado en el sujeto diabético que presenta diabetes tipo I o diabetes tipo II.

Asimismo, se da a conocer un procedimiento para expandir una masa de células \beta funcionales de trasplantes de islotes pancreáticos en un paciente diabético receptor de un transplante de islotes purificados, consistiendo dicho procedimiento en administrar al mamífero una dosis eficaz de un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT.

También se da a conocer un procedimiento de tratamiento de la diabetes humana que comprende transplantar una preparación de islotes pancreáticos a un paciente diabético; y administrar a dicho paciente una dosis eficaz de un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT. Correspondientemente, en este procedimiento, el FACGINT comprende un ligando del receptor de prolactina que es prolactina.

Descripción detallada de las formas de realización específicas

Las composiciones para la terapia de neogénesis de islotes (I.N.T.^{TM}) comprenden un ligando del receptor de gastrina/CCK y un ligando del receptor de EGF o un factor complementario de la terapia de neogénesis de islotes por gastrina (FACGINT).

El tratamiento de la diabetes mediante administración de una combinación de un FACGINT y un ligando del receptor de gastrina/CCK, por ejemplo gastrina, da lugar a un nivel sorprendente de aumento de la potencia, la eficacia y la utilidad con respecto al tratamiento con cualquiera de los componentes individualmente. Por esta razón, el término FACGINT, tal como se utiliza en la presente memoria, significa "complementario" a la administración de gastrina. El término "complementario" no pretende implicar necesariamente una sinergia entre la gastrina y el FACGINT; más bien, el término significa que, en comparación con la administración de la gastrina y el FACGINT, la administración de la combinación es más eficaz para combatir la diabetes en las dosis utilizadas en la combinación.

la expresión "ligando del receptor", tal como se utiliza en la presente memoria en conexión con un receptor para un ligando particular, se refiere a cualquier composición o compuesto que se enlaza a dicho receptor, interactúa con el mismo o lo estimula.

El término "FACGINT" incluye una amplia variedad de factores de crecimiento y hormonas del crecimiento, agentes que modifican una o más de las hormonas de factores, y ligandos y efectores para uno o más receptores implicados en el enlazamiento de estas hormonas de crecimiento y factores de crecimiento, tal como se entienden generalmente dichos términos, ejemplificados, aunque no limitados a los mismos, por: un ligando del receptor de proteína relacionada con PTH (PTHrP), tal como PTHrP (PTHrP; Garcia-Ocana, A. et al, 2001, J. clin. Endocrin. Metab. 86: 984-988); un ligando del receptor de factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), tal como HGF (HGF; Nielsen, J. et al, 1999, J Mol Med 77: 62-66); un factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), tal como FGF, un ligando del receptor de factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), tal como KGF; un ligando del receptor de factor de crecimiento nervioso (NGF), tal como NGF; un receptor del polipéptido inhibidor gástrico (GIP), tal como GIP; un ligando del receptor del factor de crecimiento transformante beta (TGF-\beta), tal como TGF-\beta (solicitud de patente US 2002/0072115 publicada el 13 de junio de 2002), un ligando del receptor de laminina, tal como laminina-1; un ligando del receptor de proteína asociada a la neogénesis de islotes (INGAP), tal como INGAP; un ligando del receptor de factor morfogenético óseo (BMP), tal como BMP-2; un ligando del receptor del péptido intestinal vasoactivo (VIP), tal como VIP; un ligando del receptor del péptido 1 de tipo GLP, tal como GLP-1 y exendina-4, un ligando del receptor del péptido 2 de tipo GLP (GLP-2), tal como GLP-2, e inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV, que afectan indirectamente a los niveles de GLP-1 (Hughes, T. et al, 2002, Am Diabetes Assoc Abstract 272) inhibiendo una enzima implicada en su integridad; un ligando del receptor de REG, tal como la proteína REG; un ligando del receptor de hormona del crecimiento (GH), tal como GH, un ligando del receptor de prolactina (PRL), tal como PRL y lactógeno placentario (PL); un ligando del receptor de factor de crecimiento similar a insulina (tipo 1 y 2), tal como IGF-1 e IGF-2; un ligando del receptor de eritropoyetina (EPO), tal como EPO (http://www.drinet.org/html/august2002.htm); una betacelulina (también considerada un miembro de la familia de EGF); un ligando del receptor de activina-A, tal como activina-A; un ligando del receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), tal como VEGF; un ligando del receptor del factor de morfogénesis ósea (BMP), tal como BMP-2; un ligando del receptor del péptido intestinal vasoactivo (VIP), tal como VIP; un ligando del receptor del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), tal como VEGF; un ligando del receptor del polipéptido activador de la adenilato ciclasa de la pituitaria (PACAP), tal como PACAP; un ligando del receptor del factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), tal como GCSF; un ligando del receptor del factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF), tal como GM-CSH; un ligando del receptor del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), tal como PDGF, y un ligando del receptor de secretina, tal como secretina.

Para todos los compuestos de factores de crecimiento, enzimas, inhibidores enzimáticos, péptidos, proteínas y hormonas de la presente memoria, indicados como ejemplos de FACGINT, todos los análogos, variantes y derivados, ya sean de procedencia natural, o preparados por mutagénesis, o diseñados y sintetizados, se considerarán equivalentes al FACGINT. También se consideran entre los equivalentes los conjugados, es decir, las composiciones derivadas por adición de uno o más grupos químicos, y mezclas de los mismos. Los genes codificadores pueden ser modificados, por ejemplo, por mutagénesis dirigida por oligonucleótidos, a efectos de producir análogos FACGINT de los mismos, tales como los análogos recombinantes humanos. Además, la identidad o colocación de uno o más residuos aminoácidos se puede modificar por mutagénesis dirigida. La secuencia de aminoácidos primaria de la proteína puede ser aumentada mediante conjugados, tal como por glucosilación, acilación, o por adición de cualquier otra molecular complementaria, tal como una o más de entre un líquido, un fosfato y/o un grupo acetilo. Además, los residuos aminoácidos individuales de la cadena se pueden modificar por oxidación, reducción u otra derivación. El FACGINT se puede disociar a efectos de obtener fragmentos que mantengan la actividad. Un agonista, un profármaco o un metabolito de un FACGINT es equivalente a dicho FACGINT. El polipéptido o proteína, o cualquier fragmento de los mismos, se puede fusionar con cualquier otro péptido o proteína, tal como inmunoglobulinas y otras citoquinas. Las variantes de los FACGINT que son de naturaleza proteinácea pueden proceder del splicing alternativo de un transcrito primario, de una disociación proteolítica o de otras modificaciones postraducción, incluyendo dimerización, polimerización, fosforilación, glucosilación, sulfación y desamidación. Los conjugados pueden incluir, por ejemplo, una composición que comprende el FACGINT acoplado a un polímero de procedencia no natural que comprende un resto de polialquilenglicol. El término también comprende derivados obtenidos modificando químicamente uno o más residuos aminoácidos del péptido original, por ejemplo por alquilación, acilación, formación de ésteres o formación de amidas. Además, los agentes que inducen la síntesis del FACGINT o imitan la acción del mismo se contemplan como compuestos equivalentes. La forma singular "FACGINT" puede significar cualquier compuesto o compuestos de entre los FACGINT mostrados en la presente memoria a título de ejemplo.

En diversos usos del término en la presente memoria, el término FACGINT se especifica como no incluyendo un ligando del receptor de EGF, tal como se hace evidente en el contexto. Sin embargo, los ligandos del receptor de EGF, tales como EGF y TGF, son capaces de complementar la gastrina para remediar condiciones diabéticas y, en consecuencia, son ejemplos de FACGINT tal como se definen en la presente memoria, y se incluyen como componentes en otras formas de realización de las composiciones, procedimientos y kits de la presente memoria. Algunas formas de realización de la terapia I.N.T. que comprenden la administración de un ligando del receptor de EGF en combinación con un ligando del receptor de gastrina/CCK han sido descritas anteriormente (patentes US nº 5.885.956 y nº 6.288.301), referencias que no utilizan dichos agentes en determinadas combinaciones y formulaciones tal como se muestran en la presente memoria.

Las expresiones "célula progenitora pancreática" o "progenitor de células beta" o "célula precursora de islote", tal como se utiliza en la presente memoria, es una célula precursora capaz de diferenciarse en una célula de islote beta pancreática que puede o no o tener característica de célula madre, es decir, capacidad de reproducirse de manera ilimitada. Las expresiones "neogénesis de células beta" o "neogénesis de islotes" se refieren a la formación de nuevas células beta por diferenciación, que pueden o no tener característica de células madre, es decir, capacidad de reproducirse de manera ilimitada. Secretar insulina de un modo "receptivo a glucosa" se refiere a secretar insulina según la concentración de glucosa en la sangre. En un mamífero fisiológicamente normal, las células beta de los islotes de Langerhans secretan insulina a medida que aumenta el nivel de glucosa, es decir, son inducidas a secretar insulina como respuesta al nivel de glucosa en sangre.

Un "agonista" de receptor es cualquier composición, sin limitación, por ejemplo un factor de crecimiento polipeptídico o una citoquina, que se encuentran de forma endógena en el mamífero, o una variante o porción de los mismos, o un análogo, o cualquier peptidomimético o fármaco de bajo peso molecular que tenga la capacidad de enlazarse y activar el receptor del factor polipeptídico que se encuentra de forma endógena. Para cualquiera de los factores de crecimiento o citoquinas descritos en la presente memoria, se considera un equivalente al que es sustancialmente idéntico en la secuencia de aminoácidos, por ejemplo, el que comparte un 50% de identidad de secuencia, el que comparte un 60% de identidad de secuencia, el que comparte un 70% de identidad de secuencia o el que comparte un 80% de identidad de secuencia con un péptido o proteína de procedencia natural, tal como se describe en la presente memoria. En otras formas de realización, las composiciones agonistas según la presente memoria incluyen un agente inductor de agonista, que se consideran sustancias que, cuando se suministran a un animal o se proporcionan a una célula, un órgano o tejido en cultivo, son capaces de aumentar la cantidad de dicho agonista producido por el animal, célula, órgano o tejido. Por ejemplo, un péptido de liberación de prolactina estimula la secreción de prolactina. Dentro del alcance de la definición, un ligando de receptor incluye un agonista de receptor para el receptor para cualquier FACGINT particular, esté estructuralmente relacionado o no el agonista con el FACGINT.

En una forma de realización, la invención da a conocer un procedimiento para tratar condiciones diabéticas, tales como diabetes mellitus, mediante la administración de una composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK, por ejemplo gastrina, y un FACGINT, por ejemplo GLP-1, PRL o GH. Sin limitarse a ningún mecanismo en particular, el ligando del receptor de gastrina/CCK y el FACGINT se suministran cada uno en una cantidad suficiente para llevar a cabo la diferenciación de células precursoras de islotes pancreáticos a células secretoras de insulina maduras. El FACGINT y el ligando del receptor de gastrina/CCK de la composición se pueden administrar sistémica o localmente. Alternativamente, el FACGINT y el ligando del receptor de gastrina/CCK, uno de ellos o los dos, pueden ser expresados in situ por células a las que se ha proporcionado un constructo de fusión de ácido nucleico en un vector de expresión. Típicamente, el constructo de fusión incluye una secuencia codificadora del precursor del péptido preprogastrina y también una secuencia codificadora para un FACGINT.

La administración de un ligando del receptor de gastrina/CCK y un ligando del receptor de EGF puede alcanzar una eficacia prolongada de neogénesis de células de islotes, de tal modo que se mantiene durante un periodo prolongado el beneficio terapéutico tras la interrupción del tratamiento. Véase solicitud PCT PCT/US02/00685 (WO 02/055152), publicada del 18 de julio de 2002. La duración del beneficio terapéutico es mayor que la duración del protocolo para la administración de la composición.

La diferenciación regenerativa de las células ductales pancreáticas pluripotentes residuales en células secretoras de insulina maduras se obtiene con las composiciones y procedimientos dados a conocer para el tratamiento de la diabetes mellitus, particularmente la diabetes juvenil, y mediante la administración terapéutica de la combinación de factores o composiciones proporcionadas para la administración sistémica, o para la expresión in situ dentro del páncreas. Un enfoque de la sustitución de células \beta que elimina el requisito del transplante de células es la estimulación de la regeneración de células \beta. Aunque los primeros estudios sugerían que una célula \beta tiene una capacidad limitada de regeneración, cada vez se ha puesto más de manifiesto que las células \beta secretoras de insulina del páncreas comprenden una población celular dinámica. La masa de células \beta se puede expandir a través de la proliferación de las células \beta existentes (replicación de células \beta). Durante el embarazo, la prolactina, la hormona del crecimiento (Holstad, M. et al, J. Endocrinol. 163: 229-234) y el lactógeno placentario (Nielsen, J. H., et al, J. Mol. Med. 77: 62-66, 1999) estimulan la proliferación de células \beta a efectos de incrementar la masa de células \beta. Sin embargo, esta masa expandida de células depende de la estimulación hormonal continuada. Tras el parto, la masa de células \beta expandida disminuye a los niveles propios de ausencia de embarazo como respuesta a la disminución de la prolactina y el lactógeno placentario (Logothetopoulos, J. (1972) en Handbook of Physiology (Am. Physiol. Soc., Washington, DC), sección 7, capítulo 3, p. 67-76).

A partir de esta información fisiológica, un aspecto importante al evaluar la regeneración de las células \beta como respuesta a la administración de un ligando del receptor de gastrina y un ligando del receptor de EGF o un FACGINT es si una masa de células \beta expandida puede mantenerse durante un tiempo significativo tras la interrupción del tratamiento con factores de crecimiento. La utilización de una formulación de liberación controlada en combinación con la composición I.N.T., con o sin un agente de inmunosupresión, puede evitar el requisito de frecuentes visitas a una dependencia médica o el requisito de automedicación.

La neogénesis de las células \beta se mide como el incremento en el número de células y en la masa celular, lo que resulta en un aumento de los niveles de insulina en plasma o del contenido de insulina pancreática. Un resultado deseado de la I.N.T. es una eficacia prolongada en el tratamiento de la diabetes.

Una forma de realización de la presente invención da a conocer procedimientos y composiciones mejorados para la utilización de un FACGINT administrado con un ligando de gastrina/CCK para tratar la diabetes. La presente invención, en una forma de realización, da a conocer una combinación de gastrina con un FACGINT a efectos de alcanzar una mayor eficacia, potencia y utilidad de la que se alcanza con un solo componente, lo que resulta en una relación terapéutica mejorada para la combinación. El tratamiento con una combinación de gastrina y un FACGINT proporciona una reducción de la glucosa en sangre mayor que la observada tras el tratamiento con un único componente, y dicha reducción de la glucosa en sangre se mantuvo durante un periodo prolongado tras la interrupción del tratamiento. La expresión "un FACGINT", tal como se utiliza en la presente memoria, también puede referirse a "uno o más FACGINT" o a "por lo menos, un FACGINT".

El estimulante de células \beta exendina (un análogo de GLP-1) mejoró la tolerancia a la glucosa y disminuyó la masa de células \beta en un modelo de pancreatectomía parcial con diabetes leve (Xu, G. et al, Diabetes 48:2270-2276, 1999). Sin embargo, no se estableció de forma concluyente ninguna relación causal entre el aumento de tolerancia a la glucosa y la regeneración de células \beta. Cuando se administra solo, el GLP-1, tal como se muestra en la presente memoria como ejemplo de FACGINT, elimina el apetito y favorece la eliminación de la glucosa reduciendo la resistencia a la insulina, un procedimiento que puede ser independiente de la estimulación de las células \beta. De este modo, el descubrimiento de que los niveles de insulina en plasma son menores, no mayores, en un grupo tratado con exendina, sugiere que la mayor tolerancia a la glucosa observada no es resultado de la estimulación de las células \beta. Además, la evaluación del efecto de la exendina sobre el crecimiento de las células \beta se ve complicado por el modelo de pancreatectomía de diabetes utilizado en estos estudios. La inflamación resultante de la extirpación quirúrgica del páncreas provoca la expresión de factores de crecimiento que actúan sobre islotes tales como gastrina y TGF-\alpha, que estimulan por sí mismos la regeneración de los islotes. De hecho, se ha documentado una regeneración de células \beta mejorada tras la pancreatectomía individual (Bonner-Weir, S., Diabetes 42: 1715-1720, 1993; Sharma, A., et al, Diabetes 48:507-513, 1999). Así, anteriormente no estaba claro que la exendina pudiera estimular una regeneración de las células \beta aumentada en ausencia de estos factores de crecimiento inducidos por la pancreatectomía.

El término "diabetes", tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a cualquier síntoma de diabetes que se haya manifestado en cualquier mamífero, incluyendo modelos animales experimentales, e incluyendo formas humanas tales como diabetes de tipo I y de tipo II, diabetes en estado precoz y una condición prediabética caracterizada por una leve disminución de la insulina o unos niveles de glucosa en sangre ligeramente elevados. El término "condición prediabética" describe un mamífero del que se sospecha que tiene una condición diabética o relacionada, por ejemplo, no diagnosticada formalmente como diabetes, pero mostrando un síntoma en términos de nivel de insulina o nivel de glucosa, y una susceptibilidad hacia la diabetes o condición relacionada debida al historial familiar, a una predisposición genética, o a la obesidad en el caso de la diabetes de tipo II, o que ha sufrido previamente diabetes o una condición relacionada, y presenta riesgo de reincidencia.

Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "ligando del receptor de gastrina/CCK" comprende cualquier compuesto que se enlaza al receptor de gastrina/CCK, interactúa con el mismo o lo estimula. En la patente US nº 6.288.301, publicada el 11 de septiembre de 2001, se indican ejemplos de dichos ligandos del receptor de gastrina/CCK, que incluyen diversas formas de gastrina, tales como la gastrina 34 (gastrina grande), la gastrina 17 (gastrina pequeña), y la gastrina 8 (mini gastrina); así como diversas formas de colecistoquinina, tales como CCK 58, CCK 33, CCK 22, CCK 12 y CCK 8; y otros ligandos del receptor de gastrina/CCK. En general, los ligandos del receptor de gastrina/CCK comparten una secuencia carboxi terminal de aminoácidos Trp-Met-Asp-Phe-amida. También se contemplan análogos activos, fragmentos activos y otras modificaciones activas de los anteriores, incluyendo agonistas peptídicos y no peptídicos, o agonistas parciales del receptor de gastrina/CCK, tales como A71378 (Lin et al, Am. J. Physiol. 258 (4 Pt 1): G648, 1990).

Las formas pequeñas de gastrina, tales como la gastrina 17, se preparan económicamente mediante síntesis peptídica, y los péptidos sintéticos están disponibles comercialmente. La gastrina 17 humana sintética, tal como la gastrina 17 humana con metionina o leucina en la posición 15, también están disponibles a través de Bachem AG, Bubendorf, Suiza, y de Researchplus. Así, los ligandos del receptor de gastrina/CCK incluyen análogos activos, fragmentos activos y otras modificaciones activas de los ligandos anteriores, que por ejemplo comparten la secuencia de aminoácidos con una gastrina de mamífero endógena, por ejemplo, comparten el 60% de herencia de secuencia, o el 70% de identidad, o el 80% de identidad. Dichos ligandos incluyen también compuestos que incrementan la secreción de gastrinas endógenas, colecistoquininas o péptidos similarmente activos procedentes de los lugares de almacenamiento en tejido. Son ejemplos de los mismos el péptido liberador de gastrina, la omeprazola, que inhibe la secreción de ácidos gástricos, y el inhibidor de tripsina de soja, que aumenta la estimulación de CCK.

El procedimiento para tratar la diabetes mellitus en un individuo que lo necesita incluye la administración a dicho individuo de una composición que proporciona un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT. Sin limitarse a ningún mecanismo en particular, el ligando del receptor de gastrina/CCK y el FACGINT se suministran en dosis suficientes para llevar a cabo la diferenciación de células precursoras de islotes pancreáticos a células secretoras de insulina maduras.

El término "tratar" o "mejorar", tal como se utiliza en la presente memoria, significa reducir o eliminar uno o más síntomas de una diabetes. Un procedimiento dado a conocer en la presente memoria para tratar la diabetes comprende la administración, sin quedar limitado por ningún mecanismo específico, de una cantidad regeneradora de la diferenciación de un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT, a un mamífero diabético, a efectos de simular la neogénesis de islotes para incrementar el número de células \beta secretoras de insulina sensible a la glucosa funcional en el páncreas. El procedimiento es eficaz para la diabetes en general, incluyendo la diabetes mellitus de tipo I o la diabetes mellitus juvenil. La combinación de gastrina y FACGINT provocan un aumento significativo de la respuesta a neogénesis de islotes con respecto a la observada con los componentes individuales. Un ejemplo de ligando del receptor de gastrina/CCK es la gastrina, y ejemplos de FACGINT son GLP-1, PRL y GH.

Otra forma de realización de la presente invención es un procedimiento que comprende tratar tejido pancreático explantado de un mamífero con un ligando del receptor de gastrina/CCK y FACGINT ex vivo, e introducir el tejido pancreático tratado en el mamífero. En este procedimiento, nuevamente, un ejemplo de ligando del receptor de gastrina/CCK es la gastrina, y ejemplos de FACGINT son GLP-1, PRL y GH.

En otra forma de realización, la presente invención da a conocer un procedimiento para la estimulación de un ligando del receptor de gastrina/CCK, comprendiendo dicho procedimiento el suministro de un gen quimérico de fusión promotor de insulina-gastrina a las células pancreáticas y la expresión de dicho gen. En otra forma de realización, se da a conocer un procedimiento de estimulación de FACGINT que comprende expresar un gen de FACGINT que se ha introducido transgénicamente en un mamífero, por ejemplo, un gen codificador de un FACGINT, por ejemplo, GLP-1, PRL o GH. Similarmente, el gen del ligando del receptor de gastrina/CCK se puede obtener transgénicamente, preferentemente un gen de precursor de péptido de preprogastrina tal como se muestra en la patente US nº 5.885.956.

Tal como se utiliza en la presente memoria, el término mamífero incluye, sin limitación, cualquier miembro de la familia de los mamíferos, tal como un humano, un simio, un roedor, tal como un ratón o una rata, un perro, un gato, un animal de importancia agrícola o un cerdo dador de proteínas, una cabra, una oveja, un caballo, o un simio, tal como un gorila o un chimpancé. Un mamífero individual puede ser no diabético, prediabético, o diabético, tal como se especifica en la presente memoria.

Los modos de administración sistémica incluyen, sin limitarse a las mismas, las vías transdérmica, intratecal, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, subcutánea, intranasal y oral. Los compuestos se pueden administrar por cualquier vía adecuada, por ejemplo, por infusión o inyección de bolus, por absorción a través de los revestimientos epiteliales o mucocutáneos (por ejemplo, mucosa oral, mucosa rectal, vaginal, nasal e intestinal, etc.), y se pueden administrar junto con otros agentes activos biológicos. Un ejemplo de vía de administración es la vía sistémica, por ejemplo, por inyección subcutánea.

El término "prolactina", tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a cualquier polipéptido que comparte una similitud de secuencia sustancial con una prolactina de mamífero endógena, tal como dicho término se conoce en la técnica de los factores proteínicos, por ejemplo prolactina humana, y que posee la actividad de una prolactina. La prolactina humana endógena es un polipéptido de 199 aminoácidos producido por la glándula pituitaria. El término incluye análogos de prolactina que son mutantes de eliminación, inserción o sustitución de la prolactina endógena, y que mantienen su actividad, e incluye prolactinas procedentes de otras especies y variantes de procedencia natural. La función de prolactina incluye una composición que presenta actividad agonista para el receptor de la prolactina, tal como se da a conocer en las patentes US nº 6.333.031 (secuencia de aminoácidos activadora) y nº 6.413.952 (agonista del ligando del receptor complejado con metal), y G 120RhGH, que es un análogo de la hormona del crecimiento humano que actúa como agonista de la prolactina (Mode et al, 1966, Endocrinol. 137(2): 447-454), y un ligando para el receptor de la prolactina, tal como se describe en las patentes US nº 5.506.107 y nº 5.837.460. También se incluyen la proteína relacionada con prolactina S179D, la prolactina humana y lactógenos placentarios.

PRL, GH y PL son miembros de una familia de hormonas polipeptídicas que comparten función estructural, inmunológica y biológica (referenciado en "Pancreatic Growth and Regeneration", Ed. N. Sarvetnick, cap. 1; Brejie, T. et al, 1997), y en consecuencia designados en la presente memoria como la familia PRL/GH/PL. PRL y GH son segregadas por la pituitaria anterior de los animales vertebrados. PRL está implicada en una gran variedad de funciones biológicas, que incluye regulación osmótica, reproducción, lactancia e inmunomodulación. GH está asociada a procedimientos fisiológicos relacionados con el crecimiento y la morfogénesis. Los ligandos de receptor relacionados se designan ligandos de receptor "PRL/GH/PL". La clasificación de los FACGINT en diversos grupos en base a la similitud estructural de los péptidos y proteínas, la similitud funcional con respecto a la complementación de la gastrina, similitud funcional con respecto al enlazamiento de uno o más receptores, están dentro del alcance de diversas formas de realización de la presente invención. Los ligandos del receptor de prolactina incluyen PRL y PL, y los ligandos de receptor de hormona del crecimiento incluyen GH.

Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "ligando del receptor de GLP-1" comprende cualquier compuesto que se enlaza al receptor de GLP-1, interactúa con el mismo o lo estimula. Los ejemplos de ligando del receptor de GLP-1 incluyen GLP-1 y exendina-4. El péptido 1 de tipo glucagón se sintetiza en las células intestinales endocrinas en las formas moleculares GLP-1 (presentando residuos designados convencionalmente como posiciones 7-36), que es una amida, y similarmente como GLP-1(7-37). Estudios iniciales de actividad biológica del GLP-1 han utilizado las formas extendidas N-terminales de longitud completa del GLP-1 (1-37 y 1-36, siendo la última una amida). Generalmente, las moléculas mayores de GLP-1 no presentaban actividad biológica. Posteriormente, se descubrió que la eliminación de los primeros seis aminoácidos daba lugar a una versión más corta de la molécula de GLP-1, con una actividad biológica sustancialmente aumentada.

La mayoría del GLP-1 biológicamente activo en circulación se encuentra en forma de GLP-1(7-36)amida, detectándose también cantidades menores de la forma bioactiva GLP-1(7-37). Véase Orskov, C. et al, Diabetes 1994, 43: 335-339. Los dos péptidos muestran aproximadamente la misma cantidad de función biológica. GLP-1 se secreta a partir de células endocrinas intestinales como respuesta a la ingestión de nutrientes, y tiene diversos papeles en la homeostasis metabólica que sigue a la absorción de dichos nutrientes. La regulación del GLP-1 tiene lugar por degradación N-terminal del péptido mediante disociación mediada por dipeptidil peptidasa (DPP-IV) en el residuo de alanina de la posición 2. Para una visión general, véase DPP-IV. Las actividades biológicas del GLP-1 incluyen estimulación de la secreción de insulina dependiente de glucosa y de la biosíntesis de insulina, inhibición de la secreción de glucagón y vaciado gástrico, e inhibición de la ingesta. El GLP-1 parece tener una serie de efectos adicionales en el tracto GI y el sistema nervioso central, tal como aparece en Drucker, D., Endocrin 142: 521-527, 2001. Los ejemplos de composiciones de GLP-1 incluyen: BIM 51077 (análogo de GLP-1 resistente a digestión con DPP-IV, disponible a través de Beaufour Ipsen); AC2592 (GLP-1, a través de Amylin, San Diego CA); ThGLP-1 (GLP-1, aminoácidos modificados y unión de ácidos grasos, a través de Theratechnologies, Saint-Laurent, Québec, Canadá); CJC-1131, también conocido como DAC^{TM}:GLP-1 (análogo de GLP-1 diseñado para su enlazamiento covalente a albúmina, Conjuchem, Montreal, Québec, Canadá), LY315902 y LY315902 de liberación controlada (análogo de GLP-1 resistente a DDP-IV, a través de Eli Lilly, Indianápolis, IN); mimético de GLP-1 de bajo peso molecular; Albugon (albúmina: péptido de fusión de GLP-1 a través de Human Genome Sciences, Rockville, MD); Liraglutide, también conocido como NN2211 (derivado de GLP-1 prolongada que se obtiene por acilación de la molécula de GLP-1, que tras entrar en el flujo sanguíneo se enlaza mayoritariamente a la albúmina que lo protege de la degradación por DPP-IV y reduce su eliminación a través del riñón, disponible a través de Novo Nordisk, Dinamarca; Elbrond et al, Diabetes Care, agosto de 2002 25(8): 1398-404).

La exendina-4, un ejemplo de exendina, es un péptido novedoso procedente de veneno de Heloderma suspectum (monstruo de Gila), que presenta un 53% de homología con la GLP-1(7-36)amida. Funciona como un potente agonista de acción prolongada del receptor del péptido 1 de tipo glucagón (GLP-1), ya que es resistente a la degradación por DDP-IV. La exendina-4 tiene propiedades similares al GLP-1, y regula el vaciado gástrico, la secreción de insulina, la ingesta de alimentos y la secreción de glucagón. Los ejemplos de exendina-4 incluyen exenatida (forma sintética conocida también como AC2993, Amylin); exenatida LAR (forma de acción prolongada); ZP10 (exendina-4 modificada con una adición de seis residuos de lisina, Aventis/Zealand Pharma); y AP 10 (formulación de acción prolongada, Alkermes, Cambridge MA). Los estudios fisiológicos indican que la expresión continuada de exendina-4 en los mamíferos transgénicos no afecta a la homeostasis de la glucosa, a la masa celular o a la ingesta de alimentos (Biaggio, L. et al, J Biol Chem 275: 34472-34477, 2000), de tal modo que los efectos fisiológicos de la exendina-4 todavía no se comprenden completamente.

Inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV (DPP-IV) se refiere a compuestos que inhiben la actividad de la DPP-IV, una peptidasa asociada a la membrana que presenta 766 aminoácidos que incluye en sus substratos GLP-1, GLP-2 y GIP. La inactivación del GLP-1 mediada por DPP-IV es un factor determinante de la bioactividad del GLP-1 in vivo. Los ejemplos de inhibidores de DPP-IV incluyen tiazolidida de isoleucina, valina-purrolidida, NVP-DPP738 (Novartis, Cambridge, MA), LAF237 (Novartis), P32/98 (Probiodrug AG, Halle, Alemania), y P93/01 (Probiodrug).

Tal como se utiliza en la presente memoria, la expresión "ligando del receptor de EGF" incluye compuestos que estimulan el receptor de EGF de tal modo que, cuando los receptores de gastrina/CCK del mismo tejido o tejido adyacente o en el mismo individuo también se estimulan, se induce la neogénesis de células de islotes pancreáticos productoras de insulina. Los ejemplos de estos receptores de EGF incluyen EGF de longitud completa, que es EGF1-53, e incluyen además EGF1-48, EGF1-49, EGF1-52, así como fragmentos y análogos activos de los mismos. Otros ejemplos de ligandos del receptor de EGF son las formas de TGF-\alpha que incluyen 1-48, 1-47, 1-51, y el factor de crecimiento de anfiregulina y virus de la viruela, así como cualquier ligando del receptor de EGF que muestre la misma actividad sinérgica con los ligandos del receptor de gastrina/CCK. Estos incluyen análogos activos, fragmentos y modificaciones de los mismos. Véase también Carpenter y Wahl, capítulo 4, en Peptide Growth Factors (ed. Sporn y Roberts), Springer Verlag, 1990.

El grupo de compuestos que comprende los ligandos del receptor de EGF incluye además "EGF modificado", que incluye variantes de EGF normal o de tipo salvaje. Se ha puesto de manifiesto que las modificaciones afectan a una o más actividades biológicas, tales como la velocidad de eliminación de EGF. El término incluye péptidos que presentan una secuencia de aminoácidos sustancialmente similar a la del EGF humano, por ejemplo, con una o unas pocas sustituciones de aminoácidos en diversas posiciones de residuo.

Se han diseñado genéticamente formas recombinantes de EGF para que presenten modificaciones en su estructura y sus actividades; por ejemplo, se ha descrito un EGF en el que una metionina de la posición 21 se sustituye por un residuo de leucina (patente US nº 4.760.023). Los EGF recombinantes humanos (hEGF) con 51 residuos, es decir, en los que faltan los dos residuos C-terminales de las posiciones 52 y 53 de hEGF, y presentan una sustitución de aminoácido neutro en la posición 51, mantienen la actividad de EGF y son más resistentes a la degradación por proteasa durante un procedimiento de producción microbiano y después de la administración a un sujeto. Se han descrito una serie de moléculas de ácidos nucleicos que codifican una familia de proteínas que presentan una similitud significativa con EGF y TGF-\alpha (WO 00/29438). Se han descrito (WO 93/03757) muteinas de EGF (EGF mutado) que presentan la histidina del residuo 16 sustituida con un aminoácido neutro o ácido, manteniendo dichas formas la actividad para valores bajos de pH. Los análogos químicos y fragmentos de EGF y TGF-\alpha mantienen la capacidad de enlazar diversos miembros de la familia de receptores de EGF (patente US nº 4.686.283). Diversas modificaciones de EGF o TGF-\alpha confieren propiedades ventajosas que afectan a una o más de las producciones de proteína recombinante, a la estabilidad in vitro e in vivo, y a la actividad in vivo. Un ejemplo de ligando del receptor de EGF recombinante modificado utilizado en los ejemplos de la presente memoria es una forma con eliminación en el terminal C de EGF humano de 51 aminoácidos de longitud, que presenta asparagina en la posición 51 (designado EGF51N en la presente memoria), que mantiene sustancialmente la actividad I.N.T.^{TM} completa, y que presenta una estabilidad in vivo y/o in vitro que es, por lo menos, aproximadamente tan grande o mayor que la del hEGF normal o de tipo salvaje (S. Magil et al, publicado el 15 de mayo de 2003 como PCT/US02/33907, he incorporado en la presente memoria como referencia en su totalidad).

La expresión "hormona de crecimiento", tal como se utiliza en la presente memoria, incluye cualquier polipéptido que comparta una identidad sustancial de secuencia de aminoácidos con una hormona del crecimiento de mamífero endógena y posea la actividad biológica de una hormona del crecimiento de mamífero. La hormona del crecimiento humano es un polipéptido que contiene 191 aminoácidos en una única cadena, y presenta un peso molecular de aproximadamente 22 kD (Goeddel et al, 1979, Nature 281: 544-548; Gray et al, 1985, Gene 39: 247-254). El término incluye análogos que presentan eliminaciones, inserciones o sustituciones, y hormonas del crecimiento procedentes de otras especies y variantes de procedencia natural. Véase Cunningham et al, 1989, Science 243: 1330-1336, y 1989, Science 244: 1081-1085; y WO 90/05185, y patente US nº 5.506.107.

El término "eritropoyetina" (EPO), tal como se utiliza en la presente memoria, es cualquier EPO de mamífero endógena o variante de la misma, o cualquier agonista del receptor de EPO, por ejemplo el mimético de EPO EMP1 (Johnson et al, 2000, Nephr Dial Tranpl 15:1274-1277); o miméticos descritos (Wrighton et al, 1996, Science 273:458-464; patente USA 5.773.569; Kaushansky, 2001, Ann NY Acad Sci 938: 131-138); un anticuerpo que presenta actividad de agonista del receptor de EPO (véase, por ejemplo, la patente US nº 5.885.574; WO 96/40231); y la secuencia de aminoácidos dada a conocer en la patente US nº 6.333.031 y nº 6.413.952.

El término "PACAP", tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a un PACAP producido endógenamente, o a un análogo o variante del mismo, que comparte una identidad o similitud de aminoácidos sustancial, o presenta actividad biológica como agonista del receptor de PACAP, tal como maxadilan (Moro et al, 1997, J Biol Chem 272:966-970). Las variantes útiles de PACAP incluyen, sin limitación, variantes de 38 aminoácidos y 27 aminoácidos, tal como se dan a conocer en las patentes US nº 5.128.242; nº 5.198.542; nº 5.208.320; y nº 6.242.563).

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Composiciones farmacéuticas

La presente invención da a conocer, en diversas formas de realización, composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de un FACGINT y un ligando del receptor de gastrina/CCK. Todas las composiciones farmacéuticas descritas en la presente memoria se pueden formular con o sin un agente de inmunosupresión, y con o sin componentes o dispositivos de liberación controlada, para su administración local o sistémica. Se puede añadir un soporte o excipiente farmacéuticamente aceptable. Dicho soporte incluye, aunque sin limitarse a los mismos, solución salina, solución salina tamponada, dextrosa, agua, glicerol, etanol y combinaciones de los mismos. La formulación debe adecuarse al modo de administración. La expresión "cantidad eficaz", tal como se utiliza en la presente memoria, es una cantidad de agente terapéutico o combinación de agentes suficiente a efectos de alcanzar un objetivo médico reconocido, en este caso la paliación de un síntoma de diabetes. La cantidad eficaz puede ser determinada empíricamente por parte del experto en la materia según los procedimientos establecidos de medición de los parámetros relevantes, tal como se describe en la presente memoria.

Las composiciones de la presente memoria pueden comprender asimismo unos agentes humectantes o emulsionantes, o agentes tamponadores del pH. La composición puede ser una solución líquida, una suspensión, una emulsión, un comprimido, una píldora, una cápsula, una formulación de liberación controlada o polvos. Las composiciones se pueden formular en forma de supositorio, con aglutinantes y soportes tradicionales, tales como los triglicéridos. La formulación oral puede incluir soportes estándar, tales como grados farmacéuticos de manitol, lactosa, almidón, estearato de magnesio, sacarina sódica, celulosa, carbonato de magnesio, etc. se conocen diversos sistemas de suministro que pueden ser utilizados a efectos de administrar una composición según la presente invención, por ejemplo, encapsulación en liposomas, micropartículas, microcápsulas y similares.

En una forma de realización a título de ejemplo, una composición según la presente invención se formula según procedimientos de rutina como composición farmacéutica adaptada, por ejemplo, para la administración subcutánea a los seres humanos. Típicamente, las composiciones para la administración subcutánea son soluciones en tampón acuoso isotónico estéril. Cuando sea necesario, la composición también puede incluir un agente disolvente y un anestésico local a efectos de suavizar el dolor en el lugar de inyección. Generalmente, los ingredientes se suministran por separado, o mezclados en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, como polvos secos liofilizados o como concentrado sin agua en un recipiente cerrado herméticamente, tal como una ampolla o sobre, por ejemplo, en el que se indica la cantidad de agente activo. En el caso en que la composición se debe administrar por infusión, la misma se puede dispensar con una botella de infusión que contenga agua, tampón o solución salina estéril de grado farmacéutico. En el caso en el que la composición se debe administrar por inyección, se puede proporcionar una ampolla de agua o solución salina estériles para inyección, de tal modo que los ingredientes se pueden mezclar antes de su administración. Las composiciones según la presente invención, en diversos componentes de las mismas, se pueden formular como supositorios, que contienen ingrediente activo en un intervalo comprendido entre aproximadamente 0,5% y aproximadamente 10% en peso; las formulaciones orales contienen preferentemente de aproximadamente 10% a aproximadamente 95% de ingrediente activo en peso.

La dosis diaria se administra como dosis individual, o se divide en una serie de dosis fraccionadas más pequeñas que se deben administrar diversas veces durante el día.

Las composiciones según la presente invención se pueden formular en forma de composición neutra o en forma de sal. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las formadas con grupos amino libres, tales como las derivadas de los ácidos clorhídrico, fosfórico, acético, oxálico, tartárico, etc., y las formadas con grupos carboxilo libres, tales como las derivadas de hidróxido de sodio, potasio, amonio, calcio, hidróxido férrico, isopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanol, histidina, procaína, etc.

La cantidad del producto terapéutico según la presente invención que resultará eficaz en el tratamiento de un desorden o condición particular dependerá de la naturaleza del desorden o condición, y se puede determinar mediante técnicas clínicas estándar. La dosis precisa que se debe emplear en la formulación también dependerá de la vía de administración y de la gravedad de la enfermedad o desorden, y se deberá decidir en función del juicio del médico y de las circunstancias de cada paciente. Las determinaciones de rutina de los niveles en sangre de insulina o de péptido C, y de los niveles de abstinencia de glucosa o retos de glucosa, pueden ser determinados por un experto en la materia. Las dosis eficaces pueden ser extrapoladas a partir de curvas de respuesta a la dosis derivadas de sistemas de ensayo in vitro o de modelos animales por parte de un experto en farmacología. Los intervalos adecuados de dosis para la administración están comprendidos generalmente entre aproximadamente 0,01 microgramos y aproximadamente 10.000 microgramos de cada compuesto activo I.N.T.^{TM} por kilogramo de peso corporal por día, por ejemplo, entre aproximadamente 0,01 microgramos y aproximadamente 1 microgramo/kg, entre aproximadamente 0,1 microgramos/kg y aproximadamente 10 microgramos/kg, entre aproximadamente 1 microgramo/kg y aproximadamente 500 microgramos/kg, o entre aproximadamente 10 microgramos/kg y aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal por día. Así, los intervalos adecuados de dosificación para la administración están comprendidos generalmente entre aproximadamente 0,01 microgramos/kg de peso corporal/día y aproximadamente 10 mg/kg de peso corporal/día.

En otras formas de realización, la presente invención da a conocer un paquete farmacéutico o kit que comprende uno o más recipientes rellenados con uno o más de los ingredientes de las composiciones farmacéuticas según la presente invención. En un paquete o kit de este tipo se puede encontrar un recipiente con una dosis unitaria de cada uno o ambos de entre un ligando del receptor de gastrina/CCK y/o uno o más FACGINT, o un ligando del receptor de EGF, y uno o más agentes inmunosupresores. Uno o más de estos componentes del paquete o kit se pueden formular para su liberación controlada o para su introducción como recarga en un dispositivo de liberación controlada, o se pueden formular para su administración local. Dicho recipiente o recipientes pueden ir acompañados de diversos materiales escritos, tales como instrucciones de uso, o una notificación, en la forma prescrita por la agencia gubernamental encargada de la regulación de la fabricación, el uso o la venta de productos farmacéuticos o biológicos, que refleje la aprobación por parte de dicha agencia de la fabricación, el uso o la venta del producto para la administración a humanos. En algunas formas de realización, el kit o paquete puede ir acompañado de software incluido en un formato legible por un ordenador.

En un aspecto, la presente invención da a conocer composiciones y procedimientos para terapia de neogénesis de islotes (I.N.T.^{TM}), por ejemplo, una gastrina y un FACGINT, en combinación con agentes inmunosupresores, a efectos de estimular el crecimiento de nuevas células \beta in vivo, incrementar la masa de islotes y alcanzar una mejor tolerancia a la glucosa en sujetos diabéticos, por ejemplo, en humanos y animales diabéticos.

El ligando del receptor de gastrina/CCK y el ligando del receptor de EGF o FACGINT se pueden administrar en una única dosis combinada, o se pueden administrar por separado y en cualquier orden. Una "dosis combinada eficaz" de estas composiciones es una dosis que provoca una disminución de la glucosa en sangre en ayuno, o un aumento en la cantidad de células secretoras de insulina, o un aumento en el nivel de insulina en sangre, o un aumento de la masa de células \beta. En una forma de realización, el ligando del receptor de gastrina/CCK es gastrina humana con una longitud de 17 residuos de aminoácido, siendo el residuo de la posición 15 la leucina (1-17Leu15, en adelante designada gastrin17leu15); además, el ligando del receptor de EGF es EGF51N humano (S. Magil et al, publicado el 12 de mayo de 2003 como PCT/US02/33907, e incorporado en la presente memoria como referencia en su totalidad). La dosis eficaz puede contener una relación entre ligando del receptor de gastrina/CCK y ligando del receptor de EGF mayor de 1, por ejemplo, la dosis eficaz contiene una relación entre ligando del receptor de gastrina/CCK y ligando del receptor de EGF mayor de 10. Una vía conveniente de administración de la dosis consiste en una inyección sistémica, por ejemplo, bolus subcutáneo.

En otra forma de realización, se administra al sujeto receptor un agente que inhibe el sistema inmune. Por ejemplo, dicho agente es una sustancia química de bajo peso molecular, por ejemplo, es por lo menos una sustancia de entre tacrolimus, sirolimus, ciclosporina y cortisona, y otros fármacos, tal como se muestran en la tabla 1. En una forma de realización alternativa, el agente es un anticuerpo, por ejemplo, el anticuerpo es anti-CD11a y otros anticuerpos indicados asimismo en la tabla 1. En otra alternativa, el agente inmunosupresor puede ser un anticuerpo elaborado por el sujeto tras un programa de inmunización, por ejemplo, contra GFAP o contra S100\beta. El sujeto puede ser diabético; por ejemplo, el sujeto es un ratón diabético no obeso (ratón NOD) o un ratón tratado con estreptozoticina. El sujeto puede ser un humano, por ejemplo un paciente diabético que presenta diabetes de tipo I o de tipo II, o que presenta una condición prediabética, o que presenta diabetes gestacional, o que ha tenido diabetes en el pasado, por ejemplo ha tenido diabetes gestacional en un embarazo pasado.

Además, evaluar el tamaño y la función de las células \beta secretoras de insulina o islotes nuevamente desarrollados consiste en medir un parámetro fisiológico o parámetro de diagnóstico estándar, incluyendo: masa de células \beta de islotes, número de células \beta de islotes, porcentaje de células \beta de islotes, glucosa en sangre, glucosa en suero, hemoglobina glucosilada en sangre, masa de células \beta pancreáticas, número de células \beta pancreáticas, contenido de péptido C en plasma en ayuno, insulina en suero y contenido de insulina pancreática.

Dado que, en algunos casos, la diabetes es una enfermedad autoinmune, una forma de realización de la I.N.T.^{TM} consiste en la administración sistémica de dosis terapéuticamente eficaces, por ejemplo, de ligandos de receptores para EGF y gastrina/CCK, o para un FACGINT y gastrina/CCK, tal como una combinación de una gastrina y un EGF, o una combinación de un FACGINT y una gastrina/CCK, a sujetos o pacientes que también se tratan con uno o más agentes que reprimen el sistema inmune, es decir, agentes inmunosupresores.

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Se puede utilizar una serie de diferentes puntos finales para determinar si el tratamiento con gastrina y EGF o FACGINT, o el tratamiento con la combinación de gastrina y EGF o FACGINT y un agente inmunosupresor, mejora la diabetes, por ejemplo, hace aumentar la masa funcional de células \beta en los transplantes de islotes. Estos incluyen la medición del aumento de los niveles en plasma de péptido C humano en circulación y de insulina humana tras inyectar estimulantes de células \beta, tales como glucosa o arginina, a los ratones; una respuesta al tratamiento con gastrina/EGF, puesta de manifiesto por un aumento de la inmunoreactividad a la insulina humana o de los niveles de ARNm extraído de los transplantes de islotes; y un aumento del número de células \beta, determinado por la medición morfométrica de los islotes en los animales tratados.

El término "trasplantar", tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a introducir una composición celular, de tejido o de órgano en el cuerpo de un mamífero mediante cualquier procedimiento establecido en la técnica, o tal como se indica en la presente memoria. La composición es un "trasplante", y el mamífero es el receptor. El transplante y el receptor pueden ser singénicos, alogénicos o xenogénicos. El término "autólogo", tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a que el transplante se deriva de las células, tejidos u órganos del receptor.

El aumento de función de las células \beta de los islotes humanos se puede poner de manifiesto asimismo por la inversión de la hiperglucemia en ratones receptores que presentan diabetes inducida por estreptozoticina o genética (utilizando una cepa de ratones conocida como de ratones diabéticos no obesos, o NOD). El aumento de función de las células \beta tras el tratamiento del sujeto receptor diabético con gastrina, con EGF o FACGINT y con uno o más agentes inmunosupresores se pone de manifiesto por el aumento de supervivencia tras la extracción de insulina, y por la corrección de la hiperglucemia, tal como indica el nivel de glucosa en sangre en ayuno. Además, se observan aumentos de la insulina pancreática y del péptido C en plasma.

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(Tabla pasa a página siguiente)

TABLA 1 Ejemplos de agentes de inmunosupresión y fuentes comerciales

1

TABLA 1 (continuación)

2

TABLA 1 (continuación)

3

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Tal como se utiliza en la presente memoria, las expresiones "inmunosupresor" o "agente para inmunosupresión" se refieren a cualquier agente que inhiba la respuesta inmune. En la tabla 1 se indican ejemplos de agentes inmunosupresores, y cualquier derivado o equivalente funcional de dichos agentes se considera apropiado para formas de realización de la presente invención, tal como se describe en la presente descripción y en las reivindicaciones adjuntas.

Tal como se utiliza en la presente memoria, un programa de dosificación se refiere a un protocolo de administración de cualquiera de las composiciones según la presente invención, por ejemplo, los componentes que constituyen la composición I.N.T.^{TM} o la combinación de un FACGINT y un ligando del receptor de gastrina/CCK, y uno o más agentes inmunosupresores, cada uno de ellos en una dosis eficaz, administrados simultáneamente o dentro de un intervalo particular entre ellos, por ejemplo, dentro de un día uno respecto del otro, o como una preparación combinada, o por separado, e incluye la cantidad de la composición administrada por unidad de tiempo, por ejemplo por día, y la duración o período a lo largo del cual se administra cada composición.

La mayoría de pacientes diabéticos dependientes de insulina requieren inyección de insulina por lo menos diariamente. Son necesarias múltiples dosis por día de insulina en determinadas circunstancias de enfermedad o de dieta para el manejo de la diabetes, y la administración de insulina viene indicada por resultados de control frecuente de la glucosa, otra actividad que se le exige a un paciente de diabetes para un manejo óptimo de la enfermedad, y que se lleva a cabo, por ejemplo, tan a menudo como cinco veces al día.

La remisión de la diabetes debido a la neogénesis exitosa de islotes en combinación con un agente inmunosupresor viene indicada por una disminución del nivel en sangre en ayuno de glucosa, y por una disminución del nivel y la duración de glucosa elevada en sangre como respuesta a un reto de dieta de consumo de azúcar. Tras alcanzar una neogénesis de islotes exitosa, la administración de insulina se reduce, por ejemplo, de cinco inyecciones a dos inyecciones por día; de dos inyecciones a una inyección por día; y de una a ninguna, tal como indican los datos obtenidos mediante el control de los niveles de glucosa en sangre. El experto en la técnica de la diabetología está familiarizado con el ajuste de la dosificación de insulina a los niveles de glucosa en sangre tras el ayuno y en otras condiciones fisiológicas cuando trata a un paciente diabético.

Las dosificaciones de las composiciones que se deben administrar a un sujeto se ajustan a las variaciones conocidas de una especie a otra en datos estándar que comprenden criterios para absorción, distribución, cinética de vida media en circulación, metabolismo, excreción y toxicología de los ligandos de receptor de las formas de realización de la presente invención, por ejemplo, para cada especie de primate y de roedor. En general, las dosificaciones se ajustan a un valor de aproximadamente 6 veces a aproximadamente 100 veces mayor para una especie de roedor que para una especie de primate.

Los agentes inmunosupresores de la tabla 1 u otros agentes equivalentes se administran según sean suministrados por los fabricantes, normalizándolos al peso corporal del sujeto, tal como es conocido por el experto en técnicas farmacológicas. Por ejemplo, generalmente el tacrolimus se administra por inyección u oralmente, y generalmente el sirolimus se administra oralmente.

Los modos de administración de las composiciones de ligando de receptor y agentes inmunosupresores incluyen, sin limitarse a las mismas, las vías subcutánea, transdérmica, intratecal, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, intranasal y oral. Los compuestos se pueden administrar por cualquier vía adecuada, por ejemplo, por infusión o inyección de bolus, mediante bomba, por absorción a través de los recubrimientos epitelial o mucocutáneo (por ejemplo, mucosa oral, mucosa rectal e intestinal, etc.). Los ligandos de receptor según la presente invención se pueden administrar en combinación con uno o con una serie de otros agentes biológicamente activos. Por ejemplo, a un receptor de las composiciones y procedimientos según la presente invención se le pueden administrar uno o más antibióticos si sufre una infección bacteriana, o una aspirina si sufre dolor de cabeza. La administración de los ligandos de receptor según la presente invención se lleva a cabo preferentemente a través de una vía sistémica.

En una forma de realización, la presente invención da a conocer un procedimiento para tratar la diabetes mellitus administrando una composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK, por ejemplo gastrina, y un ligando del receptor de EGF, o un FACGINT, por ejemplo GLP-1, GH o prolactina en una formulación para la liberación controlada, a efectos de provocar una diferenciación de células precursoras de islotes pancreáticos a células maduras secretoras de insulina. Tanto el FACGINT como el ligando del receptor de gastrina/CCK de la composición se pueden administrar de forma sistémica o local.

Sin limitarse a ningún mecanismo en particular, la neogénesis celular de islotes de eficacia prolongada se alcanza tras la administración de un ligando del receptor de gastrina/CCK, tal como gastrina, y un ligando del receptor de EGF o uno o más miembros del grupo de los FACGINT, tal como se definen en la presente memoria, tal como GLP-1, GH o prolactina, solos o con un agente de inmunosupresión, y uno o más de dichos ligandos de receptor o factores o agentes que se formulan para la liberación controlada, tal como se describe en la presente memoria, o por procedimientos equivalentes conocidos por el experto en las técnicas farmacológicas.

En una forma de realización general, la presente invención da a conocer un procedimiento para prevenir o tratar la diabetes, comprendiendo dicho procedimiento la administración a un mamífero que lo requiera de una composición que comprende una formulación de liberación controlada, por lo menos, uno de entre un ligando del receptor de EGF o un FACGINT, tal como GLP-1, una exendina-4, una hormona del crecimiento, una prolactina, en combinación con un ligando del receptor de gastrina/CCK, cada uno de entre el ligando del receptor de EGF o el FACGINT y el ligando del receptor de gastrina/CCK en una cantidad suficiente para incrementar el número de células \beta pancreáticas secretoras de insulina, tratándose o previniéndose de este modo la diabetes. Las composiciones para tratar sujetos y pacientes diabéticos con una formulación de liberación controlada de un FACGINT comprenden: un ligando del receptor de proteína relacionada con PTH (PTHrP), tal como PTHrP (PTHrP; Garcia-Ocana, A. et al, 2001, J. clin. Endocrin. Metab. 86: 984-988); un ligando del receptor de factor de crecimiento de hepatocitos (HGF), tal como HGF (HGF; Nielsen, J. et al, 1999, J Mol Med 77: 62-66); un ligando del receptor de factor de crecimiento de fibroblastos (FGF), tal como FGF, un ligando del receptor de factor de crecimiento de queratinocitos (KGF), tal como KGF; un ligando del receptor de factor de crecimiento nervioso (NGF), tal como NGF; un ligando del receptor de polipéptido inhibidor gástrico (GIP), tal como GIP; un ligando del receptor de factor \beta de crecimiento transformante (TGF-\beta), tal como TGF-\beta (solicitud de patente US 2002/0072115, publicada el 13 de junio de 2002), un ligando del receptor de laminina, tal como laminina-1; un ligando del receptor de proteína asociada a neogénesis de islotes (INGAP), tal como INGAP; un ligando del receptor de proteína morfogenética ósea (BMP), tal como BMP-2; un ligando del receptor de péptido intestinal vasoactivo (VIP), tal como VIP; un ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón, tal como GLP-1 y una exendina-4, un ligando del receptor del péptido 2 de tipo glucagón (GLP-2), tal como GLP-2, e inhibidores de dipeptidil peptidasa IV que afectan indirectamente a los niveles de GLP-1 (Hughes, T. et al, 2002, Am Diabetes Assoc Abstract 272) inhibiendo una enzima involucrada en su integridad; un ligando del receptor de proteína REG, tal como proteína REG; un ligando del receptor de hormona del crecimiento (GH), tal como GH, un ligando del receptor de prolactina (PRL), tal como PRL y lactógeno placentario (PL); un ligando del receptor de factor de crecimiento similar a insulina (tipo 1 y 2), tal como IGF1 e IGF-2; un ligando del receptor de eritropoyetina (EPO), tal como EPO (http: //www.drmet.org/html/august_2002_.htm); una betacelulina (también considerada como miembro de la familia EGF); un ligando del receptor de activina-A, tal como activina-A; una activina-A vascular; un ligando del receptor de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), tal como VEGF; un ligando del receptor de proteína morfogenética ósea (BMP), tal como BMP-2; un ligando del receptor de péptido intestinal vasoactivo (VIP), tal como VIP; un ligando del receptor de factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), tal como VEGF; un ligando del receptor de polipéptido activador de adenilato ciclasa de pituitaria (PACAP), tal como PACAP; un ligando del receptor de factor estimulante de colonias de granulocitos (G-CSF), tal como G-CSF; un ligando del receptor de factor estimulante de colonias de granulocitos-macrófagos (GM-CSF), tal como GM-CSH; un ligando del receptor de factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF), tal como PDGF; y un ligando del receptor de secretina, tal como secretina. Estas formulaciones de liberación controlada pueden incluir un agente de inmunosupresión.

En una forma de realización, la formulación de liberación controlada de la composición se administra sistémicamente. Alternativamente, la composición se administra localmente, o con un dispositivo o medio para la administración local. El mamífero es un mamífero diabético; por ejemplo, el mamífero ha sido diabético durante un período, por lo menos, de aproximadamente el 1% de su vida. En general, la cantidad de la formulación de liberación controlada del ligando del receptor de gastrina/CCK, el FACGINT o el ligando del receptor de EGF en la composición, es sustancialmente menor que la dosis eficaz mínima de cualquiera de ellos individualmente necesaria para reducir la glucosa en sangre en el mamífero diabético. El FACGINT o el ligando del receptor de EGF y el ligando del receptor de gastrina/CCK se suministra en cantidades suficientes en combinación a efectos de inducir la diferenciación de las células precursoras de islotes pancreáticos en células de islotes secretoras de insulina sensibles a la glucosa durante un periodo de tiempo prolongado.

Otra forma de realización de la presente invención da a conocer un procedimiento para prevenir o tratar la diabetes, comprendiendo dicho procedimiento la administración a un mamífero que lo necesite de una formulación de liberación controlada de una composición que comprende una combinación de un FACGINT o un ligando del receptor de EGF, y un ligando del receptor de gastrina/CCK, en una cantidad suficiente para incrementar la proliferación de células precursoras de islotes en el tejido pancreático, tratándose o previniéndose de este modo la diabetes.

En otro aspecto, la presente invención da a conocer un procedimiento para prevenir o tratar la diabetes, comprendiendo dicho procedimiento la administración a un mamífero que lo necesite de una formulación de liberación controlada de una composición que comprende una combinación de un FACGINT o un ligando del receptor de EGF, y un ligando del receptor de gastrina/CCK, cada uno de ellos en una cantidad suficiente para incrementar el número de células \beta pancreáticas secretoras de insulina en el mamífero; y la determinación de la cantidad de neogénesis de islotes, tratándose o previniéndose de este modo la diabetes. La administración de la composición reduce la glucosa en sangre en comparación con la glucosa en sangre medida antes de la administración de la composición; por ejemplo, la administración de la composición reduce la mucosa en sangre en aproximadamente 50%, o en aproximadamente 70%, en comparación con la glucosa en sangre medida antes de la administración de la composición. La concentración de hemoglobina glucosilada se reduce en comparación con la concentración de hemoglobina glucosilada en el mamífero medida antes de la administración de la composición. La concentración de insulina en el suero aumenta en comparación con la concentración de insulina en suero en el mamífero medida antes de la administración de la composición. La concentración de insulina pancreática aumenta en comparación con la concentración de insulina pancreática en el mamífero medida antes de la administración de la composición.

En otro aspecto, la presente invención da a conocer un procedimiento para inducir la neogénesis de islotes pancreáticos en un mamífero, comprendiendo dicho procedimiento la administración al mamífero de una formulación de liberación controlada de una composición que comprende una combinación de un FACGINT o un ligando del receptor de EGF y un ligando del receptor de gastrina/CCK, cada uno de ellos en una cantidad suficiente para incrementar la proliferación de células precursoras de islotes en el tejido pancreático, induciéndose de este modo la neogénesis de islotes pancreáticos.

En otro aspecto, la presente invención da a conocer un procedimiento para inducir la neogénesis de islotes pancreáticos en un mamífero, comprendiendo dicho procedimiento la administración de una composición que comprende una formulación de liberación controlada de una combinación de un FACGINT o un ligando del receptor de EGF y un ligando del receptor de gastrina/CCK, cada uno de ellos en una cantidad suficiente para incrementar el número de células \beta pancreáticas secretoras de insulina en el mamífero.

En otro aspecto, la presente invención da a conocer una composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK, y un FACGINT o un ligando del receptor de EGF, formulándose cualquiera de dichos agentes en una formulación de liberación controlada. La composición se administra en una dosificación eficaz para inducir la proliferación de células precursoras de islotes en una mayor cantidad de células maduras secretoras de insulina. Además, la composición se administra en una dosificación eficaz para inducir la diferenciación de una célula precursora de islotes en una célula madura secretora de insulina. La composición puede estar presente en un soporte farmacéuticamente aceptable. La composición puede incluir un agente para la inhibición de una respuesta inmune.

En otro aspecto, la presente invención da a conocer un kit para tratar o prevenir la diabetes que contiene una composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT o un ligando del receptor de EGF, estando presentes cualquiera de ellos en una formulación de liberación controlada, un recipiente e instrucciones de uso. La composición puede incluir un agente de inmunosupresión. La composición del kit puede comprender además un soporte farmacéuticamente aceptable. La composición del kit puede estar presente en una dosis unitaria.

Otra forma de realización de la presente invención consiste en un procedimiento para expandir y diferenciar células madre en un receptor diabético de las células en células secretoras de insulina, que comprende implantar las células en dicho receptor y administrar una composición que contiene una dosis eficaz de un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT o un ligando del receptor de EGF, uno o más de los cuales están presentes como formulación de liberación controlada. Por ejemplo, las células implantadas se obtienen de un humano. Además, las células implantadas se obtienen de islotes pancreáticos, cordones umbilicales, embriones o líneas de células madre. Generalmente, el ligando del receptor de gastrina/CCK es gastrina humana 1-17Leu15. Generalmente, el ligando del receptor de EGF es un EGF o un TGF-\alpha, o es un polipéptido que estructuralmente es sustancialmente idéntico a EGF o TGF-\alpha, respectivamente, y tiene sustancialmente la misma función biológica que EGF o TGF-\alpha. En una forma de realización relacionada, se implantan células, por ejemplo células madre, mediante una vía seleccionada de entre: inyección directa en un órgano y administración intravenosa. Por ejemplo, las células se indican en un órgano seleccionado de entre el páncreas, el riñón y el hígado. Alternativamente, las células se administran a la vena portal utilizando una vía percutánea o transhepática. En todos los casos, las células se pueden tratar ex vivo con la composición antes del implante.

Otra forma de realización de la presente invención es un procedimiento para tratar la diabetes humana implantando una cantidad reducida de células madre en un receptor diabético, comprendiendo dicho procedimiento la administración al receptor de una dosis eficaz, cada uno de entre una formulación de liberación controlada de un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT o un ligando del receptor de EGF, reduciéndose la cantidad de células en comparación con la implantación de células en un receptor, por lo demás idéntico, en ausencia de administración de dosis eficaz. Además, se puede administrar al receptor un agente que inhiba el sistema inmune. Por ejemplo, el agente es una sustancia química seleccionada de entre el grupo constituido por FK506, rapamicina, ciclosporina y cortisona. Alternativamente, el agente es un anticuerpo; por ejemplo, el anticuerpo es anti-CD4. En todos los procedimientos dados a conocer que incluyen células madre, las células se pueden obtener, antes del implante, de un miembro de la familia, y almacenarse para su uso posterior.

Una forma de realización de la presente invención da a conocer procedimientos y composiciones mejorados para la utilización de un FACGINT o un ligando del receptor de EGF administrados con un ligando del receptor de gastrina/CCK, formulándose uno cualquiera o más de estos agentes para su liberación controlada a efectos de tratar la diabetes. En una forma de realización, la presente invención da a conocer una formulación de liberación controlada de cualquiera de entre: una gastrina, en combinación con un FACGINT o un ligando del receptor de EGF, a efectos de alcanzar una mayor eficacia, potencia y utilidad que las alcanzadas con un FACGINT o un ligando del receptor de EGF individualmente, o con una combinación de cualquiera de estos agentes, administrados a efectos de proporcionar una biodisponibilidad inmediata de toda la formulación. La presente invención da a conocer una relación terapéutica mejorada para la formulación de liberación controlada en comparación con la formulación inmediatamente biodisponible.

La utilización de una formulación de liberación controlada puede extender la reducción del azúcar en sangre durante un período de tiempo incluso mayor.

La combinación de un ligando del receptor de gastrina/CCK y un ligando del receptor de EGF o FACGINT en una formulación de liberación controlada, con administración sistémica, presenta una mayor potencia que cuando se administró en una formulación directa no de liberación controlada. Se observó una mejora en la tolerancia a la glucosa y un aumento de los niveles de insulina pancreática con una formulación de liberación controlada de la combinación de gastrina/FACGINT o de la combinación de gastrina/ligando del receptor de EGF.

El procedimiento para tratar la diabetes mellitus en un individuo que necesita dicho tratamiento incluye la administración a dicho individuo de una formulación de liberación controlada de una composición que proporciona un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT, o un ligando del receptor de gastrina/CCK y un ligando del receptor de EGF, dichas composiciones en dosis suficientes para llevar a cabo la diferenciación de células precursoras de islotes pancreáticos a células maduras secretoras de insulina. Las células diferenciadas son células precursoras de islotes latentes residuales en el ducto pancreático. Un procedimiento para tratar la diabetes dependiente de insulina, particularmente la diabetes mellitus de tipo I o juvenil, comprende la administración, preferentemente sistémica, de una cantidad regeneradora de diferenciación de un ligando del receptor de gastrina/CCK y un FACGINT o un ligando del receptor de gastrina/CCK y un ligando del receptor de EGF, cada uno de ellos o ambos agentes en una formulación de liberación controlada, a un mamífero diabético, a efectos de estimular la neogénesis de islotes a efectos de incrementar el número de células \beta secretoras de insulina sensibles a glucosa funcional en el páncreas. La combinación de una gastrina y de un FACGINT o un ligando del receptor de EGF, cualquiera de ellos en una formulación de liberación controlada, da lugar a un aumento significativo de la respuesta de neogénesis de islotes con respecto a la observada con los mismos agentes pero en una formulación directa no de liberación controlada. Un ejemplo de un ligando del receptor de gastrina/CCK es la gastrina o su derivado de gastrina sintético, tal como se describe en la presente memoria, y ejemplos de los FACGINT son GLP-1, GH y prolactina. Un ejemplo de ligando del receptor de EGF es un EGF humano recombinante, por ejemplo, EGF51N, un EGF mutante recombinante humano de 51 aminoácidos de longitud que presenta una eliminación en el terminal C y un residuo de asparagina en la posición 51.

Alternativamente, las células se administran a la vena portal utilizando una vía percutánea o transhepática. En cualquier caso, antes del implante, las células pueden tratarse ex vivo con la composición.

Formulaciones para liberación controlada y administración local y procedimientos de administración

Se formula que la administración, por lo menos, de uno de los agentes que son un ligando del receptor de gastrina/CCK, o un ligando del receptor de EGF o un FACGINT, ocurre por liberación sostenida o controlada. "Liberación controlada", tal como se utiliza en la presente descripción y en las reivindicaciones adjuntas, se refiere a una combinación de materiales, dispositivos, formulación y/o administración, por lo menos, de un agente terapéutico I.N.T.^{TM}, que crea un suministro continuo o discontinuo, por ejemplo cíclico, de una cantidad de la combinación o por lo menos un agente I.N.T.^{TM}, o agente inmunosupresor, al receptor, en función del tiempo. El periodo de tiempo a lo largo del cual se puede prolongar la liberación pueden ser minutos, horas, días, semanas o incluso meses. La liberación del agente activo puede ser constante a lo largo de un período prolongado; alternativamente, la liberación puede ser cíclica a lo largo del periodo prolongado de liberación. La liberación puede ser independiente de las condiciones; alternativamente, la liberación se puede desencadenar como respuesta a una composición presente en el entorno o a otros acontecimientos externos. Por ejemplo, la liberación se puede desencadenar mediante una composición endógena, tal como insulina o glucosa, o la liberación se puede desencadenar mediante una composición suministrada externamente, por ejemplo como respuesta a la administración de un fármaco. Una formulación de liberación controlada se diferencia de una formulación no de liberación controlada en el hecho de que esta suministra toda la dosis de agente terapéutico de forma instantánea o muy rápida, o está biodisponible en la totalidad de la composición en un período muy corto tras su administración, haciendo que una gran proporción del agente esté disponible para el receptor en un período de tiempo muy corto. Los ejemplos de la biodisponibilidad sustancialmente instantánea de una dosis incluyen soluciones acuosas de agentes que se administran parenteralmente, por ejemplo mediante una inyección intraperitoneal de bolus, u oralmente, o incluso que se administran mediante un dispositivo de goteo a lo largo de un período de diversas horas. Por ejemplo, la administración intravenosa de un agente cardiovascular de imagen circula a través del sistema arterial en 15 segundos; la administración intravenosa gota a gota de un agente antitumoral está completamente biodisponible en pocos segundos después de haber finalizado el goteo. En cambio, las formulaciones de liberación controlada benefician al paciente receptor proporcionándole una biodisponibilidad a largo término y protegiéndolo, evitando los efectos secundarios potenciales que se pueden derivar de los elevados niveles iniciales de agente. Véase Mathiowitz, E., Encyclopedia of Controlled Drug Delivery. 1999. Nueva York: John Wiley.

Las formulaciones de liberación controlada se han desarrollado para proporcionar una administración sistémica y local (o dirigida) de agentes. Una variedad de materiales, dispositivos y vías de administración, descritos en la presente memoria, se utilizan con el agente I.N.T.^{TM}, tal como el ligando del receptor de gastrina/CCK y el ligando del receptor de EGF o el FACGINT.

Los sistemas orales de liberación controlada han estado disponibles, por ejemplo, como cápsulas de gelatina dura que contienen una serie de tipos de comprimidos, presentando cada tipo un grosor de recubrimiento diferente, de tal modo que algunos comprimidos se despojan más rápidamente de su recubrimiento. Véase Banga, A., Bus. Brief.: Pharmatech 2002: 151-154. En sistemas osmóticos orales, el fluido que entra en un comprimido a través de una membrana semipermeable genera una presión osmótica de componentes nucleares independiente de las variables del tracto gastrointestinal. Para proteger los agentes que son macromoléculas, por ejemplo proteínas tales como factores de crecimiento, los procedimientos incluyen la utilización de administración específica de lugar, inhibidores de la proteasa, sistemas soportes o formulaciones tales como hidrogeles, que contienen esqueletos de ácido poliacrílico y propiedades bioadhesivas.

Muchos agentes proteínicos se administran por vía parenteral, y los procedimientos de liberación controlada para la administración parenteral de proteínas incluyen la utilización de polímeros basados en ácido láctico, tales como poli(D,L-láctido-co-glicólido) (PLGA), que forma microesferas biodegradables con un núcleo que contiene el agente, y se libera el agente a lo largo de un período de tiempo de aproximadamente un mes. Además, las proteínas o liposomas (véase a continuación) que contienen proteínas se pueden pegilar mediante adición covalente de polietilenglicol (PEG).

La administración transdérmica se puede utilizar para la administración sistémica y local. Los mejoradores de la permeación, tal como se describen a continuación, pueden ser utilizados en combinación con un parche transdérmico para mejorar la administración, o en combinación con un dispositivo para iontoforesis, fonoforesis, microporación o electroporación con dispositivos eléctricos que puedan llevarse encima.

La expresión "administración local", tal como se utiliza en la presente memoria, se refiere a la administración mediante una vía y una formulación o un dispositivo o ambos, de tal modo que un órgano o tejido diana particular es tratado sustancialmente, mientras que otros órganos y tejidos no son tratados, o de tal modo que la extensión del tratamiento del tejido u órgano diana recibe, por lo menos, una dosis dos veces, por lo menos cinco veces, o por lo menos 10 veces mayor que los tejidos u órganos que no son diana. En general, en la presente invención, el órgano diana es el páncreas. Tal como se ha mostrado en la presente memoria, las células para el transplante o los transplantes multicelulares pueden ser administradas localmente al páncreas mediante inyección a la vena portal; los fármacos se pueden administrar por inyección a las arterias pancreáticas, arterias hepáticas, la vena portal o el ducto pancreático. Es posible utilizar una bomba sin implantarla, es decir que permanece externa y suministra la composición a un órgano diana, tal como el páncreas, mediante un catéter que conecta la bomba al órgano. También es posible utilizar una bomba implantable a efectos de suministrar la composición localmente.

Otros procedimientos para la administración local incluyen, sin limitarse a los mismos, colangiopancreatografía retrógrada endoscópica (ERCP); biopsia de aspiración por aguja fina dirigida endoscópicamente por ultrasonidos (EUS-FNAB), que se adapta para la administración de las composiciones farmacéuticas dadas a conocer en la presente memoria en lugar de utilizarse para tomar muestras. Véase, por ejemplo, Wang et al, Transpl. Int 1995, 8: 268-272. aunque estas tecnologías están pensadas para propósitos diagnósticos o de pronóstico, se pueden adaptar para la administración de composiciones según la presente invención, que pueden incluir composiciones I.N.T.^{TM} tal como se describen en la presente memoria, combinarse con agentes inmunosupresores, y/o como formulaciones de liberación controlada. Véase, también, Yano et al, 1994, Transpl Int 7 Suppl 1: S187-193; Ricordi et al, 1994, Transpl Proc 26: 3479; y Munoz-Acedo et al, 1995, J Endocrin 145: 227-234.

Se utilizan bombas, que pueden ser bombas implantables o no implantables (externas), para la administración del fármaco en el tratamiento de diversas enfermedades, por ejemplo, para el cáncer y la diabetes. Una bomba puede ser una bomba peristáltica, una bomba de propulsante de fluorocarbono, o una bomba osmótica, incluyendo una bomba miniosmótica (Blanchard, S., 1996 Biomedical Engineering Applications, North Carolina State University). Las bombas peristálticas suministran una cantidad determinada del fármaco con cada pulso eléctrico que activa el cabezal de la bomba. La bomba, el sistema electrónico y la fuente de alimentación están dispuestos en un compartimiento de titanio cubierto de Silastic. Los compartimientos de fármaco son bolsas de goma de silicona que pueden soportar una presión sustancial, por ejemplo de 60 psi. El compartimiento se puede rellenar por vía percutánea a través de un puerto de polipropileno. las bombas de fluorocarbono utilizan un líquido de fluorocarbono para hacer funcionar la bomba. Las bombas osmóticas utilizan presión osmótica para liberar el fármaco a una velocidad constante. Un ejemplo de bomba es la bomba MiniMed MicroMed 407C (Medtronic, Inc., Northridge, CA). Además, se puede utilizar un sistema de administración del fármaco intratecal (Medronic) que incluye dos componentes implantables, una bomba de infusión y un catéter intraespinal. La bomba se inserta por vía abdominal en un compartimiento subcutáneo, mientras que el catéter se inserta en el espacio intratecal de la columna, se conduce por debajo de la piel y se conecta a la bomba. A continuación, la medicación se administra a una velocidad de flujo constante o variable. Además, se puede utilizar una bomba intraperitoneal, por ejemplo una bomba implantable, a efectos de administrar las composiciones según la presente invención por vía local, por ejemplo a través de un catéter, o sistémicamente.

La administración mucosal a zonas epiteliales que se mantienen en una condición húmeda y que tienen vasos sanguíneos cercanos, puede ser más eficiente que la administración transdérmica a través de un tejido que es una superficie epidérmica seca. Las superficies mucosales incluyen: nasal, pulmonar, rectal, bucal, ocular y genital. Ejemplos de superficies mucosales son la nasal y la pulmonar.

Los materiales utilizados para microesferas para la liberación controlada son principalmente polímeros, incluyendo PEG, también designado óxido de polietileno (PEO), y PLGA, tal como se ha descrito. Un vehículo polimérico se puede inyectar directamente, permitiendo la hidrólisis o degradación gradual en el sujeto a efectos de liberar el agente terapéutico. El peso molecular del polímero, por ejemplo PEG, se puede variar a efectos de controlar la velocidad de liberación. La pegilación, o unión covalente del PEG a un agente terapéutico proteínico, protege la proteína de los receptores involucrados en los mecanismos de eliminación, tales como el del sistema reticuloendotelial (RES). Alternativamente, se pueden utilizar polisacáridos a efectos de dirigir un agente al RES (patente USA 5.554.386, presentada el 10 de septiembre de 1996). Los órganos del RES incluyen el hígado, el bazo y la médula ósea.

Los homopolímeros o copolímeros, tales como poli(ácido láctico-co-etilenglicol) o PLA-PEG, pueden formar un líquido viscoso que se mezcla con un agente terapéutico proteínico. La viscosidad varía mediante el peso molecular de PLA-PEG. En ciertas condiciones, el agente terapéutico precipita juntamente con el polímero tras la inyección en el sujeto y la pérdida del disolvente por difusión, de tal modo que se forma un depósito que presenta una cinética de liberación favorable (Whitaker, M., et al Bus. Brief: Pharmatech 2002: 1-5).

Se forman micropartículas de microesferas poliméricas que encapsulan el agente terapéutico. Los polímeros para la utilización en microesferas incluyen poli(ácido láctico) o PLA; poli (ácido glicólico) o PGA; y copolímero PLA-PGA. Una cantidad del agente terapéutico, tal como las proteínas según la presente invención, se libera en etapas, tal como una explosión inicial de proteína no específicamente asociada con el exterior de las partículas, una etapa posterior de difusión, y una etapa final de erosión, que se pueden controlar mediante la composición del polímero, el peso molecular, el tamaño de las micropartículas y las condiciones fisiológicas, tales como el pH. La estabilidad de las proteínas durante la preparación de las microesferas aumenta si la proteína se encuentra en forma sólida, tal como un polvo liofilizado, que se emulsiona con disolvente o mediante un procedimiento de atomización congelada o un procedimiento de sonicación, y a continuación la suspensión se congela en nitrógeno líquido para la posterior extracción con disolvente. Las microesferas se pueden producir a partir de un fluido supercrítico, por ejemplo, dióxido de carbono supercrítico (scCO_{2}).

Los polímeros de bloque biodegradables adecuados para la administración de fármacos y sus procedimientos de síntesis se describen en Kumar, N. et al, Adv. Drug Deliv. Rev. 53 (2001): 23-44. Los copolímeros pueden ser aleatorios, alternados, o de bloque (de tipo di o tri), y pueden presentar una configuración lineal, estrellada o de injerto (en forma de peine). Un polímero puede formar un hidrogel, que es una red polimérica hidrofílica tridimensional que retiene una gran cantidad de fluido acuoso. El polímero utilizado en un hidrogel se vuelve insoluble por reticulación u otros aductos químicos.

Los implantes biodegradables se pueden preparar a partir de materiales tales como, por lo menos, uno de los materiales seleccionados de entre el grupo constituido por: almidón; almidón vinílico; diacrilato de dipropilenglicol (DPGDA); diacrilato de tripropilenglicol (TPGDA); pectina; acetato de celulosa; propionato de celulosa; acetato butirato de celulosa; acetato propionato de celulosa (CAP); hidroxipropilcelulosa (HPC); hidroxipropilcelulosa/acetato propionato de celulosa (HPC/CAP); metacrilato de metilo (MMA); metacrilato de butilo (BMA); metacrilato de hidroximetilo (HEMA); acrilato de etilhexilo (EHA); metacrilato de octadecilo (ODMA); y dimetacrilato de etilenglicol (EGDMA). Véase Gil, M. et al, Boletim de Biotecnologia 2002, 72: 13-19.

Además de polímeros, se pueden utilizar lípidos de procedencia natural y sintéticos para las formulaciones de liberación controlada. DepoFoam^{TM} (Skye Pharma, Londres, Inglaterra) forma una partícula multivesicular basada en lípido (liposoma) para encapsular agentes terapéuticos (véase patente USA 5.993.850; y Ye, Q. et al, 2000 J. Controlled Rel. 64: 155-166). Los lípidos son anfipáticos con una carga neta negativa, esteroles, o lípidos zwitteriónicos, y los procedimientos para preparar los liposomas son no ácidos. También se dan a conocer procedimientos para incorporar un agente terapéutico o activo en los liposomas. El agente terapéutico puede ser uno o más de entre un ligando del receptor de gastrina/CCK, un ligando del receptor de EGF y un FACGINT.

Otros lípidos para liposomas entran dentro del alcance de la presente invención. Un lípido polar vegetal, por ejemplo una ceramida, tal como una ceramida de trigo, resulta útil para formar un gel con una proteína, tal como una prolactina, dentro del cual se pueden introducir uno o más agentes terapéuticos para la administración transdérmica o transmucosal. Véase la patente US nº 6.410.048, presentada el 25 de junio de 2002. Los ejemplos de prolaminas incluyen gliadina de trigo y zeína de maíz. Otros polímeros de procedencia natural utilizados en formulaciones de fármaco y dispositivos de liberación controlada incluyen colágeno (EP-A-0 621 044), quitina (patente USA 4.393.373) y quitosano, una forma desacilada de quitina.

Un mejorador de la permeación, por ejemplo, un glucolípido, un ácido graso no esterificado, un alcohol alifático, un éster de ácido graso de un alcohol alifático, un ciclohexanol, un ácido graso, un éster de glicerol, un glicol, o un éter de alcohol alifático o un glicol, son mejoradores de la permeación típicos; otros componentes, tales como un estabilizante, un disolvente, un tensoactivo y un plastificante, pueden estar presentes en un dispositivo transdérmico. Véase solicitud de patente USA 20020127254, publicada el 12 de septiembre de 2002.

Se utilizan lípidos y una variedad de tipos de polímeros para formar "nanopartículas" para la administración de fármacos, descritos en M. Kumar, 2002, J. Pharm. Pharmaceut. Sci. 3: 234-258. Se ha puesto de manifiesto que la carga de fármaco en el interior de estas partículas es mayor con la mayoría de agentes terapéuticos lipofílicos. Se ha obtenido una liberación de larga duración con liposomas que comprenden ácido poliláctico, lecitina y fosfatidilcolina o colesterol.

La liberación controlada local (dirigida) se obtiene mediante procedimientos descritos en la presente memoria, por ejemplo, utilización de liposomas constituidos por material diseñado para dirigirse al RES, o comprendidos por material diferente con el fin de evitar las células del RES. Los procedimientos adicionales de liberación dirigida incluyen la utilización de anticuerpos o receptores recombinantes solubles junto con la superficie exterior de liposomas o microesferas. Además, las formulaciones de liberación controlada descritas en la presente memoria se pueden ajustar adicionalmente para su utilización con cualquiera de los dispositivos descritos en la presente memoria, tales como una bomba, para la administración local a un órgano diana particular.

En otra forma de realización, la presente invención da a conocer composiciones farmacéuticas de liberación controlada que comprenden una cantidad terapéuticamente eficaz de una combinación de un FACGINT o un ligando del receptor de EGF, y un ligando del receptor de gastrina/CCK. Se puede añadir un soporte o excipiente farmacéuticamente aceptable. Dicho soporte incluye, aunque sin limitarse a los mismos, solución salina, solución salina tamponada, dex-
trosa, agua, glicerol, etanol y combinaciones de los mismos. La formulación debe adecuarse al modo

\hbox{de
administración.}

A menos que se definan de otro modo, todos los términos técnicos y científicos de la presente memoria tienen el significado entendido comúnmente por el experto en la materia a la que pertenece la presente invención. Se pueden utilizar procedimientos y materiales similares o equivalentes a los descritos en la presente memoria en la práctica de la presente invención. Habiéndose descrito detalladamente la presente invención en diversas formas de realización, se indican a título de ejemplo formas de realización adicionales a través de los siguientes ejemplos y reivindicaciones, que no se deben entender a título limitativo en ningún sentido. Los contenidos de todas las referencias citadas se incorporan en su totalidad a la presente memoria como referencia.

Ejemplos Ejemplo 1 El tratamiento con un ligando del receptor GLP-1, péptidos 1 similares a glucagón (GLP-1), y un ligando del receptor de gastrina/CCK, gastrina, previene el progreso de la enfermedad en ratones NOD con diabetes de inicio reciente

Los ratones de la cepa de ratones diabéticos no obesos (NOD) tienen un fenotipo que comparte muchas características de la patogénesis de la enfermedad con la diabetes humana de tipo I. Típicamente, los ratones NOD muestran insulitis pancreática autoinmune destructiva y destrucción de células \beta ya a las cuatro semanas de edad. Habitualmente, el inicio de la diabetes se produce a la edad de 10-15 semanas en estos ratones, observándose niveles críticos de glucosa en sangre comprendidos entre aproximadamente 7 mM y aproximadamente 10 mM (en comparación con un intervalo de aproximadamente 3,0-6,6 mM en ratones normales), y un nivel de insulina pancreática menor en más de aproximadamente el 95% que en los ratones normales. A medida que progresa la enfermedad, los ratones NOD exhiben signos cada vez más graves de diabetes crónica, con unos niveles de glucosa en sangre que alcanzan entre aproximadamente 25 y aproximadamente 30 mM, y un nivel de insulina pancreática que disminuye hasta ser prácticamente inexistente. En este grave estadio de la enfermedad, más de aproximadamente el 99% de células \beta han sido destruidas.

En este ejemplo, se analizó el efecto del tratamiento con una combinación de GLP-1 y gastrina en ratones NOD con diabetes de inicio reciente, a efectos de determinar si la administración de GLP-1 y gastrina conjuntamente evitaría la hiperglucemia grave, la cetoacidosis y la muerte, además de provocar el aumento del contenido de insulina pancreática en los ratones NOD con diabetes de inicio reciente. La composición I.N.T.^{TM} utilizada en la gastrina, tal como gastrina humana sintética I con 17 residuos de aminoácido y con un residuo de Leu en el aminoácido de la posición 15. El GLP-1 utilizado fue GLP-1, que es el fragmento biológicamente activo del GLP-1 humano/de ratón (con residuos en las posiciones 7-36 en comparación con el precursor a partir del que se procesa el fragmento; obtenido a partir de Bachem H6795).

Se controló en ratones hembra diabéticos no obesos (NOD) con una edad comprendida entre 12 y 14 semanas el desarrollo del inicio de la diabetes (glucosa en sangre en ayuno > 8,0 a 15 mmol/l), y en las siguientes 48 horas tras el inicio de los síntomas. Dos grupos de ratones se trataron cada uno del siguiente modo: un grupo se trató únicamente con vehículo; al otro grupo se le administraron 100 \mug/kg/día de GLP-1, administrándose cada tratamiento a través de vía intraperitoneal dos veces al día.

La terapia se administró durante 14 días. Cada semana se controlaron los niveles de glucosa en sangre en ayuno (FBG) en los animales. Los niveles FBG se midieron aproximadamente 12 horas después de haber suspendido la alimentación, y 24 horas después de la última inyección de péptido o de vehículo. Tras la interrupción de la terapia, se controlaron en todos los ratones los niveles de FBG durante las siguientes 4 semanas (semanas 2-6), para determinar si la prevención de la hiperglucemia se mantenía tras la terminación del tratamiento terapéutico. A los 14 días, el tratamiento se detuvo, y a los 18 días se tomaron muestras de los ratones a efectos de obtener los niveles de FBG (tal como se indica en la tabla 2).

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TABLA 2 Terapia de combinación de péptido 1 similar a glucagón (GLP-1) y gastrina para tratar diabetes de inicio reciente en ratones NOD

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El protocolo incluye la toma de muestras de estos ratones nuevamente para obtener datos a las 6 semanas, y la recogida de sangre para el ensayo de FBG y de péptido C en plasma; los ratones se sacrifican para las determinaciones de insulina pancreática y la clasificación de la inflamación de los islotes (insulitis). Desde el inicio del tratamiento, los ratones no recibieron tratamiento de sustitución de insulina ni de inmunosupresión. Se midieron los parámetros siguientes: proporciones de supervivencia, niveles de insulina pancreática, presencia de inflamación de islotes y niveles de glucosa en sangre en ayuno.

Los resultados muestran que, en animales del grupo de control tratado con vehículo (grupo 1), los valores de glucosa en sangre en ayuno (FBG) aumentaron progresivamente, durante el periodo de duración de dicho tratamiento placebo, de 11 mM de glucosa en el día 0 a 24 mM en el día 18.

En cambio, en los ratones tratados con GLP-1 y gastrina, los valores de FBG (7,9 mM de glucosa) fueron significativamente menores en comparación con los ratones tratados con vehículo (24,4 mM), reduciéndose a un nivel que, de hecho, es menor de un tercio del nivel desarrollado en los ratones tratados con vehículo (tabla 2). Lo más significativo y sorprendente fue que la combinación de GLP-1 y gastrina fue más eficaz en la disminución de los niveles de FBG que la gastrina sola o el GLP-1 solo (presentando niveles de FBG de 19,0 mM y 15,8 mM, respectivamente). Únicamente en los ratones tratados con la combinación, el valor de FBG se redujo a un nivel correspondiente a un valor normal. El control mejorado de los niveles de glucosa en sangre en los ratones tratados con GLP-1 y gastrina se puede asociar previsiblemente a un contenido significativamente aumentado de insulina en el páncreas de estos ratones.

En resumen, los resultados del presente estudio muestran que el tratamiento durante un período corto con dosis bajas de GLP-1 y gastrina de ratones con diabetes de inicio reciente previene el progreso de la enfermedad e invierte la condición de la enfermedad hasta proporcionar un nivel de glucosa en sangre aproximadamente normal. Además, este nivel de glucosa en sangre significativamente disminuido en los ratones tratados con gastrina y GLP-1 se mantuvo durante un periodo de tiempo adicional tras la suspensión del tratamiento. Se espera que, en estos animales, los datos pondrán de manifiesto un contenido mayor de insulina pancreática, y que estos efectos se demostrarán persistentes durante un período prolongado de tiempo tras la terminación de la terapia.

Grupos adicionales de ratones hembra NOD fueron tratados con un ligando del receptor de prolactina, prolactina (PRL) y un ligando del receptor de gastrina/CCK, y con un ligando del receptor de hormona del crecimiento, hormona del crecimiento (GH) y un ligando del receptor de gastrina/CCK, la gastrina. Se anticipa que los datos indican que estos tratamientos proporcionan unos efectos sobre la FBG y otros parámetros que son similares a los datos obtenidos en la presente invención con GLP-1.

Ejemplo 2 Comparación de composiciones con y sin pegilación

Para determinar si una formulación de liberación controlada proporcionaría una mayor eficacia que una formulación, por lo demás idéntica, formulada para la administración de bolus o no de liberación controlada, se lleva a cabo un estudio de comparación de un protocolo de tratamiento de ratones NOD con una composición I.N.T.^{TM} en una formulación pegilada o no pegilada. La pegilación, por lo menos, de un componente de la composición I.N.T.^{TM} puede prolongar la cantidad de tiempo en el que el agente terapéutico se mantiene en forma activa en el cuerpo.

El estudio pone de manifiesto que la administración de una formulación de liberación controlada de, por lo menos, un agente de una composición I.N.T.^{TM} es capaz de mejorar las condiciones diabéticas de los ratones NOD en comparación con una composición I.N.T.^{TM} formulada para la administración directa, es decir, no de liberación controlada.

Ejemplo 3 Comparación de la frecuencia de dosificaciones de administración de la composición

Para determinar si una formulación de liberación controlada proporcionaría una mayor eficacia que una formulación directa no de liberación controlada, se diseña un experimento en el que se compara un protocolo de administración de tres veces al día con la administración una vez al día de una composición I.N.T.^{TM} a ratones NOD.

Los resultados muestran que la prolongación de la biodisponibilidad de la composición I.N.T.^{TM}, comparable a la obtenida con una formulación de liberación controlada de una composición I.N.T.^{TM}, puede mejorar la eficacia, es decir, puede remediar mejor los síntomas de la condición diabética de los ratones NOD, en comparación con una formulación directa o no de liberación controlada de una composición I.N.T.^{TM}, y puede reducir la frecuencia de las dosificaciones necesarias para dicho remedio de los síntomas.

Claims

1. Composición que comprende un ligando del receptor de gastrina/CCK, un ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón (GLP-1), y un soporte farmacéuticamente aceptable, para tratar la diabetes.

2. Composición según la reivindicación 1, en la que el ligando del receptor GLP-1 es GLP-1.

3. Composición según la reivindicación 1, en la que el ligando del receptor GLP-1 es GLP-1(7-36)amida.

4. Composición según la reivindicación 1, en la que el ligando del receptor GLP-1 es GLP-1(7-37).

5. Composición según la reivindicación 1, en la que el ligando del receptor GLP-1 es exendina-4.

6. Composición según la reivindicación 5, en la que el ligando del receptor GLP-1 es exenatida.

7. Composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en una dosis eficaz para inducir la diferenciación de una célula precursora de islote en una célula madura secretora de insulina.

8. Composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la cantidad de ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón (GLP-1) en la composición es sustancialmente menor que la dosis mínima eficaz del ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón (GLP-1) requerido para reducir la glucosa en sangre en un mamífero diabético en ausencia de un ligando del receptor de gastrina/CCK.

9. Composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la gastrina es gastrina I con 17 aminoácidos, con un residuo Leu en el aminoácido de la posición 15.

10. Composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende asimismo un agente de inmunosupresión.

11. Composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores para la liberación controlada, en la que, por lo menos, uno de entre el ligando del receptor de gastrina o el ligando del receptor del péptido 1 de tipo glucagón (GLP-1) es una formulación de liberación controlada.

12. Kit para el tratamiento o la prevención de la diabetes, comprendiendo dicho kit una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, un recipiente e instrucciones de uso.

13. Utilización de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento de la diabetes.

14. Utilización según la reivindicación 13, en la que la composición se utiliza para poner en contacto una serie de células ex vivo.

15. Utilización según la reivindicación 14, en la que las células son células ductales pancreáticas.

16. Utilización de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para la preparación de un medicamento destinado a inducir la neogénesis de islotes pancreáticos en un mamífero mediante el aumento de la proliferación de células precursoras de islotes en el tejido pancreático, induciéndose de este modo la neogénesis de islotes pancreáticos, o mediante el aumento del número de células beta pancreáticas secretoras de insulina en el mamífero.

17. Utilización de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para la preparación de un medicamento destinado a aumentar la proliferación de células precursoras de islotes en el tejido pancreático de un mamífero.

18. Utilización de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11 para la preparación de un medicamento destinado a expandir y diferenciar las células madre en células secretoras de insulina en un receptor diabético de células implantadas.

19. Procedimiento para producir una preparación de células secretoras de insulina, que comprende poner en contacto unas células capaces de expandirse y diferenciarse en células secretoras de insulina in vitro con una cantidad eficaz de una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 11, para proporcionar una preparación de células secretoras de insulina.

20. Procedimiento según la reivindicación 19, en la que las células son células ductales pancreáticas.