DE69529482T2 - Chinazoline als Chemotherapeutika - Google Patents

Chinazoline als Chemotherapeutika

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Description

  • Die vorliegende Erfindung betrifft bestimmte Chinazolinonverbindungen, die dahingehend von Interesse sind, dass sie zumindest potenziell geeignete Chemotherapeutika sind, und zwar aufgrund der Fähigkeit, die Aktivität des Enzyms Poly-ADP-Ribosyltransferase (E. C. 2.4.2.30), das auch als Poly(ADP-ribose)-Polymerase bekannt ist und gebräuchlich als ADPRT oder PARP bezeichnet wird, zu hemmen. In der vorliegenden Beschreibung wird im Allgemeinen die letztgenannte Abkürzung, PARP, verwendet.
  • Zumindest in höheren Organismen ist von dem Enzym Poly-ADP-Ribosyltransferase bekannt, dass es einen Transfer des ADP-Ribose-Rests der oxidierten Form von Nicotinamidadenindinucleotid, NAD&spplus;, auf Kern-Akzeptorproteine katalysiert, so dass Homo-ADP- Ribosepolymere gebildet werden, und dieser Prozess wurde in einer Anzahl von zellulären Ereignissen, wie z. B. der Reparatur von DNA-Beschädigungen, der Entwicklung der zellulären Differenzierung, der Transformation von Zellen durch Onkogene und der Genexpression festgestellt. Ein gemeinsames Merkmal in einer Anzahl dieser Prozesse ist die Bildung und die Reparatur von DNA-Strangbrüchen und die Stufe, bei der das PARP-Enzym beteiligt ist, scheint die Stufe der DNA-Ligase II-vermittelten Strang-Wiedervereinigung zu sein. In der Mehrzahl von Fällen zeigte sich eine Rolle für die Poly-ADP-Ribosylierung durch die Verwendung von Inhibitoren bzw. Hemmstoffen des PARP-Enzyms und dies hat zu Vorschlägen geführt, dass solche Inhibitoren durch die Störung des intrazellulären DNA- Reparaturmechanismus insofern eine nützliche chemotherapeutische Rolle spielen könnten, als sie Behandlungsresistenzcharakteristika modifizieren und die Effektivität cytotoxischer Arzneistoffe bei der Chemotherapie oder die Effektivität von Strahlung bei der Strahlentherapie verstärken oder erhöhen sollten, bei denen ein primärer Effekt der Behandlung darin liegt, dass eine DNA-Beschädigung in Zielzellen verursacht wird, wie dies z. B. bei vielen Formen der Antitumor-Therapie der Fall ist.
  • In diesem Zusammenhang sind mehrere Klassen von PARP-Inhibitoren bereits bekannt, einschließlich Benzamid selbst und verschiedene Nicotinamid- und Benzamid-Analoga, insbesondere 3-substituierte Benzamide mit kleinen Substituentengruppen, wie z. B. 3-Amino-, 3- Hydroxy- und 3-Methoxygruppen. Die PARP-hemmende Aktivität bestimmter N-substituierter Benzamide wurde auch in der EP-A-0305008 beschrieben, worin auch vorgeschlagen wurde, diese Verbindungen in der Medizin zur Erhöhung der Cytotoxizität von Strahlung oder chemotherapeutischer Arzneistoffe zu verwenden.
  • Bezüglich dieser Verwendung von Benzamiden als chemotherapeutische Mittel haben verschiedene Studien über solche Verbindungen, von denen bekannt ist, dass sie eine PARP- hemmende Aktivität aufweisen, bestätigt, dass sie die Cytotoxizität verschiedener Antitumormittel in vitro verstärken können, wie z. B. Bleomycin und methylierende Arzneistoffe. Eingeschränktere Daten haben ferner gezeigt, dass solche Benzamide auch die Aktivität cytotoxischer Arzneistoffe in vivo potenzieren können, obwohl die Dosierungsanforderungen ziemlich hoch erschienen (z. B. im Bereich von 0,5 g/kg pro Dosis für 3-Aminobenzamid), und dass damit zusammenhängende Probleme bei der Herstellung zufriedenstellender pharmazeutischer Formulierungen und bei der Vermeidung von Toxizitätsbeschränkungen auftreten. Ferner wurde von einer Anzahl bekannter Benzamide auch klar gezeigt, dass sie ein Potenzial als Strahlensensibilisator aufweisen und z. B. die durch ionisierende Strahlung induzierte Tumorzellenabtötung sowohl in vitro als auch in vivo erhöhen, und es wird angenommen, dass dieser Effekt in vielen Fällen mit diesen Verbindungen zusammenhängt, die als PARP- Inhibitoren wirken und die DNA-Reparatur stören.
  • Ungeachtet der vorhandenen Daten von in vitro- und in vivo-Studien, die nahelegen, dass PARP-Inhibitoren ein beträchtliches Potenzial als geeignete chemotherapeutische Mittel aufweisen, die eine weitere klinische Bewertung lohnen, z. B. in Verbindung mit einer Krebstherapie, werden gegenwärtig verfügbare bekannte PARP-Inhibitoren noch nicht als vollständig geeignete potenzielle Arzneistoffe betrachtet. Demgemäß besteht ein Bedarf zur Auffindung und Entwicklung eines größeren Bereichs von Verbindungen mit potenziell geeigneten PARP-hemmenden Eigenschaften.
  • Die vorliegende Erfindung betrifft einen neuen Bereich oder neue Bereiche von Verbindungen, die als PARP-Inhibitoren von Interesse sind, die in der Medizin von Nutzen sein können, insbesondere wenn sie in Verbindung mit mindestens bestimmten cytotoxischen Arzneistoffen oder in Verbindung mit einer Strahlentherapie zur Erhöhung der cytotoxischen Effektivität derselben verabreicht werden. Im Allgemeinen umfassen die erfindungsgemäßen Verbindungen, wie sie nachstehend definiert sind, bestimmte Chinazolinone, von denen mindestens einige durch molekulare Umlagerung verwandter Benzamidverbindungen gebildet werden können. Aufgrund ihrer Struktur sind solche Verbindungen allgemein angepasst, um als alternatives Substrat für NAD&spplus; für das PARP-Enzym zu wirken.
  • Insbesondere betrifft die Erfindung in einem Aspekt die Verwendung einer Verbindung, wie sie hier definiert ist, zur Herstellung eines medizinischen oder veterinärmedizinischen Präparats zur Verwendung in einer Therapie zum Hemmen der Aktivität des Enzyms Poly(ADP- ribose)polymerase oder PARP (auch als ADP-Ribosyltransferase oder ADPRT bekannt), wobei eine derartige Enzymhemmung ein Element einer therapeutischen Behandlung darstellt, wobei die Verbindung das aktive PARP-Enzym-hemmende Mittel bereitstellt und eine Chinazolinonverbindung der allgemeinen Strukturformel II
  • oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon ist,
  • dadurch gekennzeichnet, dass
  • X' eine Hydroxylgruppe, eine Alkylgruppe, eine Alkoxygruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aryl- (z. B. Phenyl-) oder Aralkylgruppe (z. B. Benzylgruppe) ist, und
  • Y' ein Wasserstoffatom, eine Alkylgruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aryl- (z. B. Phenyl-) oderAralkylgruppe (z. B. Benzylgruppe) ist.
  • Die Erfindung stellt auch die Verwendung von Chinazolinonverbindungen der allgemeinen Strukturformel II (oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon) zur Verwendung in der Therapie als aktive therapeutische Substanzen bereit, wobei
  • X' eine Hydroxylgruppe, eine Alkylgruppe oder eine Alkoxygruppe ist, und
  • Y' eine Alkylgruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aralkylgruppe (z. B. Benzylgruppe) oder eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe ist, die von einer Phenylgruppe mit einem 4-Propoxysubstituenten oder einem 2-Alkoxysubstituenten verschieden ist,
  • mit der Maßgabe, dass dann,
  • wenn X' eine Methylgruppe ist, Y' keine Butylgruppe ist,
  • wenn X' eine Methoxygruppe ist, Y' keine Methylgruppe oder 4-Hydroxyphenylgruppe ist, und
  • wenn X' eine Hydroxygruppe ist, Y' keine Methyl-, Ethyl- oder Phenylgruppe ist.
  • Die Erfindung stellt ferner neue Chinazolinonverbindungen der allgemeinen Strukturformel II (oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon) bereit, wobei
  • X' eine Hydroxylgruppe, eine Alkylgruppe oder eine Alkoxygruppe ist,
  • und
  • Y' eine Alkylgruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aralkylgruppe (z. B. Benzylgruppe) oder eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe ist, die von einer Phenylgruppe mit einem 4-Propoxysubstituenten oder einem 2-Alkoxysubstituenten verschieden ist,
  • mit der Maßgabe, dass dann,
  • wenn X' eine Methylgruppe ist, Y' keine Butyl-, Isopropyl-, Phenyl- oder 2- Aminophenylgruppe ist,
  • wenn X' eine Ethylgruppe ist, Y' keine 4-Hydroxyphenylgruppe ist,
  • wenn X' eine Methoxygruppe ist, Y' keine Methyl-, Isopropyl-, 4-Methylphenyl-, 4- Hydroxyphenyl- oder 4-Methoxyphenylgruppe ist,
  • wenn X' eine Ethoxygruppe ist, Y' keine Isopropylgruppe ist,
  • wenn X' eine Propoxygruppe ist, Y' keine halogensubstituierte Phenylgruppe ist, und
  • wenn X' eine Hydroxygruppe ist, Y' keine Methyl-, Ethyl- oder Phenylgruppe ist.
  • Wenn Alkylgruppen als solche oder als Rest in anderen Gruppen, wie z. B. einer Alkoxygruppe vorliegen, sind sie im Allgemeinen aus 1 bis 8 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise aus 1 bis 6 Kohlenstoffatomen und insbesondere aus 1 bis 4 Kohlenstoffatomen zusammengesetzt.
  • Es wurde gefunden, dass bei dem Versuch, Benzoxazol-4-carboxamidverbindungen der Strukturformel IV
  • worin R&sub5; ein Wasserstoffatom, eine Alkylgruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aralkylgruppe oder Arylgruppe ist, bei manchen Herstellungsverfahren, von denen erwartet werden könnte, dass sie das gewünschte Produkt ergeben würden, das Produkt zu einer molekularen Umlagerung neigt (insbesondere dann, wenn zur Bildung des Carboxamids flüssiger Ammoniak verwendet wird) und anstelle des erwarteten Benzoxazols ein 8- Hydroxychinazolinonderivat erhalten wird. Überraschenderweise wurde gefunden, dass mindestens einige dieser Chinazolinonderivate, die natürlich mit verschiedenen anderen Verfahren hergestellt werden können, eine potenziell sehr nützliche starke biologische Aktivität als PARP-Inhibitoren aufweisen. Beispiele solcher Verbindungen, die von besonderem Interesse sind, umfassen:
  • (a) 8-Hydroxy-2-methylchinazolin-4-[3H]on;
  • (b) 8-Hydroxychinazolin-4-[3H]on;
  • (c) 8-Hydroxy-2-(4-nitrophenyl)-chinazolin-4-on;
  • (d) 8-Methoxy-2-methylchinazolin-4[3H]-on;
  • (e) 8-Methoxy-2-phenylchinazolin-4[3H]-on;
  • (f) 8-Hydroxy-2-phenylchinazolin-4[3H]-on;
  • (g) 2,8-Dimethylchinazolin-4[3H]-on.
  • Die Erfindung umfasst auch oder erstreckt sich auch auf Verfahren zur Herstellung von Verbindungen, wie sie vorstehend definiert worden sind (in manchen Fällen einschließlich Zwischenprodukten) und auf die therapeutische Verwendung solcher Verbindungen. Diese umfasst deren Verwendung zur Herstellung von medizinischen oder veterinärmedizinischen Präparaten bzw. Zubereitungen oder pharmazeutischen Formulierungen, die eine effektive PARP-hemmende Menge des Wirkstoffs zur Verabreichung an einen Patienten im Zusammenhang mit einem cytotoxischen Arzneistoff oder einer Strahlentherapie zur Erhöhung der cytotoxischen Effektivität des cytotoxischen Arzneistoffs oder der Strahlentherapie. Solche Zubereitungen oder Formulierungen können zur Verabreichung in einer beliebigen geeigneten Weise wie z. B. oral, parenteral (einschließlich subkutan, intramuskulär oder intravenös) oder lokal gemäß beliebiger, in der Pharmazie bekannter Verfahren hergestellt werden, wobei die Art der Verabreichung, die Art der Zubereitungen oder Formulierung und die Dosierung im Allgemeinen durch die Details der damit zusammenhängenden Chemotherapie mit cytotoxischen Arzneistoffen oder der Strahlentherapie, die verstärkt werden sollen, bestimmt werden.
  • Wie es bereits erwähnt worden ist, haben die erfindungsgemäßen Verbindungen mindestens ein Potenzial als PARP-Inhibitoren und nachstehend beschriebene in-vitro-Tests haben eine positive pharmakologische Aktivität gezeigt, von der angenommen wird, dass sie die Aktivität widerspiegelt, die in vivo im Verlauf einer therapeutischen klinischen Verwendung gefunden wird.
  • Es sollte beachtet werden, dass dann, wenn in dieser Beschreibung auf Verbindungen der Formel II Bezug benommen wird, eine solche Bezugnahme so betrachtet werden sollte, dass sie sich auch auf die pharmazeutisch verträglichen Salze bezieht, wo dies relevant ist. Wenn eine beliebige der genannten Verbindungen in mehr als einer enantiomeren Form vorliegen kann, dann sind alle diese Formen, deren Gemische und deren Herstellung und Verwendungen vom Schutzbereich der Erfindung umfasst.
  • Die nachstehenden Beispiele und Beschreibungen von Stufen in Synthesewegen zur Herstellung verschiedener bevorzugter interessierender Verbindungen dienen der weiteren Veranschaulichung der vorliegenden Erfindung und sind nicht beschränkend aufzufassen.
  • Im ersten Beispiel (Beispiel 1) wird ein Verfahren zur Herstellung einer Zwischenverbindungen beschrieben, die in Beispiel 2 verwendet wird.
    • Beispiel 1 Methyl-2-(4-nitrophenyl)benzoxazol-4-carboxylat (a) 1. Stufe - Herstellung von Methyl-3-hydroxy-2-(N-4-nitrobenzoyl)aminobenzoat
  • Methyl-2-amino-3-hydroxybenzoat (0,5 g, 2,99 mmol) wurde in m-Xylol (40 ml) unter Erwärmen auf 60ºC gelöst. 4-Nitrobenzoylchlorid (0,556 ml, 2,99 mmol) wurde tropfenweise zugegeben und es wurde 4 Stunden gerührt. Die Lösung wurde auf Raumtemperatur abgekühlt und das m-Xylol wurde unter vermindertem Druck entfernt. Der Feststoff wurde in Wasser (100 ml) gelöst und die organischen Anteile wurden in Ethylacetat (3 · 50 ml) extrahiert. Die organischen Fraktionen wurden vereinigt, über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt.
  • Die Titelverbindung wurde mittels Säulenchromatographie (1 : 4 Ethylacetat : Petrolether als Eluent) gereinigt, wobei ein orangefarbener Feststoff (49%) erhalten wurde.
  • IR (cm&supmin;¹): 3443 (OH), 2953, 1697, 1649, 1404. m/z 316 (15% M&spplus;).
  • ¹H (CDCl&sub3;): δ = 3,95 (3H, s, OCH&sub3;), 7,25 (1H, t, H&sub5;, J = 8 Hz), 7,31 (1H, t, H&sub5;, J = 6, & 2 Hz), 7,67 (1H, dd, H&sub6;), 8,26 (2H, dd, H&sub2;', H&sub6;', J = 2,3 Hz), 8,30 (2H, dd, H&sub3;', H&sub5;', J = 2,2 Hz), 9,81 (1H, s, OH), 12,30 (1H, s, NH).
    • (b) 2. Stufe - Herstellung von Methyl-2-(4-nitrophenyl)-benzoxazol-4-carboxylat
  • Methyl-3-hydroxy-2-(N-4-nitrobenzoyl)aminobenzoat (0,1 g, 0,34 mmol) wurde in m-Xylol (20 ml) gelöst und dieser Lösung wurde Trimethylamin (0.033 ml, 0,45 mmol) und Pyridinium- 4-toluolsulfonat (0,070 g, 0,28 mmol) zugesetzt. Dieses Gemisch wurde 32 Stunden unter Rückfluss gehalten. Das m-Xylol wurde unter vermindertem Druck entfernt und der verbliebene Feststoff wurde in Wasser gelöst. Die organischen Bestandteile wurden in Ethylacetat (3 · 30 ml) extrahiert, getrocknet, filtriert und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei ein ziegelroter Feststoff erhalten wurde (74%).
  • IR (cm&supmin;¹): 1726, 1522, 1556, m/z 298 (84%, M&spplus;) 267 (100%, -OCH&sub3;), 240 (-CO).
  • ¹H (CDCl&sub3;): δ = 4,01 (3H, s, OCH&sub3;), 7,44 (1H, t, H&sub6;, J = 8,1 Hz), 7,76 (1H, dd, H&sub7;, J = 7,2, & 1 Hz), 8,04 (1H, dd, H&sub5;'), 8,35 (2H, dd; H&sub2;', H&sub6;', J = 2,2 Hz), 8,46 (2H, d, H&sub3;', H&sub5;', J = 2,2 Hz).
    • Beispiel 2 8-Hydroxy-2-(4-nitrophenyl)chinazolin-4-on (Verbindung NU1057)
  • Methyl-2-(4-nitrophenyl)benzoxazol-4-carboxylat (0,20 g), das gemäß Beispiel 1 (2. Stufe) erhalten worden ist, wurde in flüssigem Ammoniak (30 ml) gelöst und in einen Autoklaven eingebracht. Das Reaktionsgemisch wurde 20 Stunden bei 55ºC, 20 bar stehengelassen. Unter diesen Bedingungen lagerte sich das erwartete 2-(4-Nitrophenyl)benzoxazol-Derivat offensichtlich um, wobei das entsprechende Chinazolinonderivat erhalten wurde. Sobald die Umsetzung abgeschlossen war, wurde der Ammoniak entfernt und der resultierende Feststoff wurde aus siedendem Ethylacetat und Petrolether umkristallisiert (84%).
  • IR (cm&supmin;¹); m/z 283 (38%, M&spplus;) 267 (100%, -NH&sub2;), 240 (-CO).
  • ¹H (CDCl&sub3;): δ = 7,35 (1H, dd, H&sub5;), 7,5 (1H, t, H&sub6;), 7,7 (1H, dd, H&sub7;), 8,45 (2H, d, H&sub2;', H&sub6;'), 8,79 (2H, d, H&sub3;', H&sub5;'), 9,98 (1H, br s, NH), 12,8 (1H, br s, NH).
  • Entsprechend unterlag bei dem Versuch der Herstellung von Benzoxazole-4-carboxamid das Produkt einer molekularen Umlagerung, wobei 8-Hydroxychinazolin-4-[3H]on (Verbindung NU1026) erhalten wurde, das eine ziemlich starke PARP-hemmende Aktivität aufwies.
  • Nachstehend sind weitere Beispiele für die Herstellung weiterer Chinazolinonverbindungen angegeben, die von besonderem Interesse sind.
    • Beispiel 3 8-Methox-2-methylchylchinazolin-4-[3H]-on (Verbindung NU1063) Verfahren A (a) 1. Stufe - Herstellung von 3-Methoxy-2-nitrobenzamid
  • Eine Lösung von 3-Methoxy-2-nitrobenzoesäure (0,1 g, 5,1 mmol), Thionylchlorid (0,55 ml, 7,6 mmol) und Dimethylformamid (0,2 ml) in THF (10 ml) wurde 12 Stunden bei 25ºC unter Stickstoff gerührt. Wässriger Ammoniak (6 ml) wurde vorsichtig zugegeben und das Gemisch wurde weitere 15 min gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und der verbleibende Feststoff wurde mit eiskaltem Wasser gewaschen und gesammelt (0,74 g, 75%), Schmp.: 219-222ºC.
  • δH (200 MHz, d&sub6;-DMSO): 4,01 (s, 3H, OCH&sub3;), 7,41-7,46 (dd, 1H, Ar-4H), 7,55-7,60 (dd, 1H, Ar-6H), 7,69-7,77 (m, 1H, Ar-5H), 1,84 (br s, 1H, -NH), 8,31 (br s, 1H, -NH); m/z 196 (34,3%, M&spplus;).
  • νmax/cm&supmin;¹: 3350 (br), 3180 (br), 3000, 2970, 2920, 2820, 1675.
  • Elementaranalyse: gefunden: C 49,03, H 3,93, N 13,97, C&sub8;H&sub8;N&sub2;O&sub4; erfordert C 48,98, H 4,11, N 14,28%.
    • (b) 2. Stufe - Herstellung von 2-Amino-3-methoxybenzamid
  • 3-Methoxy-2-nitrobenzamid (0,5 g, 2,5 mmol) wurde in trockenem Methanol (40 ml) gelöst und unter Verwendung eines Palladium-Kohlenstoff-Katalysators (80 mg) hydriert. Der Katalysator wurde mittels Filtration durch Celite entfernt und das verbliebene Produkt (0,35 g) wurde gesammelt und getrocknet (83%), Schmp.: 145-147ºC.
  • δH (200 MHz, d&sub6;-DMSO): 3,88 (s, 3H, -OCH&sub3;), 6,40 (br s, 2H, -NHz), 6,54-6,62 (t, 1H, Ar-5H), 6,96-6,99 (dd, 1H, Ar-4H), 7,23 (br s, 1H, -NH), 7,29-7,33 (dd, 1H, Ar-6H), 7,85 (br s, 1H, - NH); m/z 166 (43,8%, M&spplus;).
  • νmax/cm&supmin;¹: 3480, 3370, 3330, 3150, 2970, 2850, 1680, 1620.
  • Elementaranalyse: gefunden: C 57,54, H 5,99, N 16,61, C&sub8;H&sub1;&sub0;N&sub2;O&sub2; erfordert C 57,82, H 6,07, N 16,86%.
    • (c) 3. Stufe - Herstellung von 2-N-Acetylamino-3-methoxybenzamid
  • Einer Lösung von 2-Amino-3-methoxybenzamid (0,5 g, 3 mmol) in trockenem THF (15 ml), die Pyridin (0,3 ml, 3,9 mmol) enthält, wurde Acetylchlorid (0,2 ml, 3,3 mmol) in THF (2 ml) tropfenweise zugesetzt und das Reaktionsgemisch wurde über Nacht unter Stickstoff gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und die verbliebene weiße Aufschlämmung wurde mit wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen, filtriert und mit Wasser gewaschen. Das weiße Produkt (0,19 g, 31%) wurde gesammelt und getrocknet. Schmp.: 243-246ºC.
  • δH (200 MHz, d&sub6;-DMSO): 2,05 (s, 3H, -CH&sub3;), 3,88 (s, 3H, -OCH&sub3;), 7,14-7,18 (dd, 1H, Ar-4H), 7,21-7,25 (dd, 1H, Ar-6H), 7,33-7,41 (m, 2H, -NH und Ar-5H), 7,53 (br s, 1H, -NH), 9,27 (br s, 1H, -NH); m/z 208 (16,6, M&spplus;).
  • νmax/cm&supmin;¹: 3420, 3240 (br), 3160, 3020, 2980, 2870, 1660.
  • Elementaranalyse: gefunden: C 56,98, H 5,38, N 12,78, C&sub1;&sub0;H&sub1;&sub2;N&sub2;O&sub3; erfordert C 57,68, H 5,81, N 13,46%.
    • (d) Letzte Stufe - Herstellung von 8-Methoxy-2-methylchinazolin-4-[3H]-on
  • 2-N-Acetylamino-3-methoxybenzamid (0,07 g, 0,34 mmol) aus der 3. Stufe wurde in wässriger Natriumhydroxidlösung gelöst (2% w/v, 2 ml) und die Lösung wurde 12 Stunden bei 25ºC gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit verdünnter wässriger Chlorwasserstoffsäure neutralisiert und der resultierende weiße Niederschlag, der abgelagert wurde, wurde mittels Filtration gesammelt und gründlich mit Wasser gewaschen. Die Titelverbindung wurde aus Ethylacetat umkristallisiert (0,043 g, 67%), Schmp.: 202-204ºC (sublimiert).
    • Beispiel 3a 8-Methoxy-2-methylchinazolin-4-[3H]-on (Verbindung NU1063) Alternativverfahren B
  • Einem Gemisch aus 2-Amino-3-methoxybenzamid (1,0 g, 6 mmol) aus der zweiten Stufe von Beispiel 3 und Pyridin (0,6 ml, 7,8 mmol) in trockenem THF (25 ml) wurde eine Lösung von Acetylchlorid (0,9 ml, 13 mmol) in THF (2 ml) tropfenweise zugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht unter Stickstoff gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und die verbliebene weiße Aufschlämmung wurde in 2-prozentiger wässriger Natriumhydroxidlösung resuspendiert und mit wässriger Chlorwasserstoffsäure neutralisiert, worauf sich ein weißer Niederschlag bildete. Das Produkt wurde durch Filtration gesammelt und aus Methanol-Wasser umkristallisiert (0,915 g, 80%), Schmp.: 202-204ºC (sublimiert).
  • δH (200 MHz, d&sub6;-DMSO): 2,43 (s, 3H, -CH&sub3;), 3,97 (s, 3H, -OCH&sub3;), 7,37-7,50 (m, 2H, Ar-6/7H), 7,68-7,73 (dd, 1H, Ar-5H), δC (d&sub6;-DMSO): 21,83 (-CH&sub3;), 56,05 (-OCH&sub3;), 114,96, 116,99 (Ar6/7C), 121,95 (C-CH&sub3;), 126,5 (Ar-5C), 140,0 (Ar-8AC), 153,26 (Ar-8C), 154,33 (Ar-4aC), 162,04 (C=O), m/z 190 (96,6%, M&spplus;).
  • νmax/cm&supmin;¹ 3171, 3034, 2903, 1676, 1620, 1574, 1483,.
  • Elementaranalyse: gefunden: C 62,14, 62,36, H 5,18, 5,29, N 14,23, 14,36; C&sub1;&sub0;H&sub1;&sub0;N&sub2;O&sub2; erfordert C 63,15, H 5,30, N 14,73%.
    • Beispiel 4 8-Hydroxy-2-methylchinazolin-4-[3H]-on (Verbindung NU1025)
  • Eine Lösung von 8-Methoxy-2-methylchinazolin-4-[3H]-on (0,7 g, 3,7 mmol) von Beispiel 3 in BBr&sub3; (1,0 M in CH&sub2;Cl&sub2;, 8,4 ml, 8,4 mmol) wurde 24 Stunden unter Stickstoff unter Rückfluss erhitzt. Die Lösungsmittel wurden durch Destillation unter vermindertem Druck entfernt und der verbliebene Rückstand wurde mit Natriumhydroxidlösung (10% w/v) hydrolysiert. Nach dem Ansäuern mit wässriger Chlorwasserstoffsäure wurde ein weißer Niederschlag erhalten, der entfernt wurde. Das Filtrat wurde mit Ethylacetat (3 · 30 ml) extrahiert, getrocknet (MgSO&sub4;) und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt. Eine Umkristallisation aus Propan-2-ol/Wasser ergab die Zielverbindung (65%), Schmp.: 253-258ºC.
  • δH (200 MHz, d&sub6;-DMSO): 2,48 (s, 3H, -CH&sub3;), 7,22-7,41 (m, 2H, Ar = 6/7H), 7,57-7,62 (dd, 1H, Ar-5H), 9,57 (s, 1H, -OH), 12,26 (s, 1H, -NH), δC (d&sub6;-DMSO): 21,83 (-CH&sub3;), 115,78, 118,42 (Ar-6/7C), 121,76 (C-CH&sub3;), 126,54 (Ar-5C), 138,27 (Ar-8aC), 152,58 (Ar-8C), 152,87 (Ar- 4aC), 162,05 (C=O), m/z 176 (100%, M&spplus;).
  • νmax/cm&supmin;¹: 3320, 3175, 3030, 2900, 2800, 1670.
  • Elementaranalyse: gefunden: C 61,39, H 4,54, N 15,88, C&sub9;H&sub8;N&sub2;O&sub2; erfordert C 61,36, H 4,58, N 15,94%.
    • Beispiel 5 8-Methoxy-2-phenylchinazolin-4-[3H]-on (Verbindung NU1065) Verfahren A (a) 1. Stufe - Herstellung von 2-N-Benzoylamino-3-methoxybenzamid
  • Einer gerührten Lösung von 2-Amino-3-methoxybenzamid (0,5 g, 3 mmol) aus der zweiten Stufe von Beispiel 5 in trockenem THF (15 ml), das Pyridin (0,3 ml, 3,0 mmol) enthielt, wurde Benzoylchlorid (0,4 ml, 3,3 mmol) in THF (2 ml) tropfenweise zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde unter Stickstoff bei 25ºC gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, wobei eine weiße Aufschlämmung erhalten wurde, die mit Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen, filtriert und mit Wasser gewaschen wurde. Eine Umkristallisation aus Methanol-Wasser ergab die Titelverbindung (0,2 g, 41%), Schmp.: 176-180ºC.
  • δH (200 MHz, d&sub6;-DMSO): 3,88 (s, 3H, -OCH&sub3;), 7,24-7,32 (m, 2H, Ar-4/6H), 7,41-7,49 (m, 2H, - NH, Ar-5H), 7,59-7,73 (m, 4H, -NH, Ph-3'/4'H), 8,04-8,08 (dd, 2H, Ph-2'H), 9,85 (s, 1H, -NH), m/z 270 (74,6%, M&spplus;).
    • (b) 2. Stufe - Herstellung von 8-Methoxy-2-phenylchinazolin-4-[3H]-on
  • 2-N-Benzoylamino-3-methoxybenzamid (0,2 g, 0,74 mmol) wurde in wässriger Natriumhydroxidlösung (2% w/v, 2 ml) gelöst und die Lösung wurde 12 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde mit Chlorwasserstoffsäure neutralisiert und der resultierende weiße Niederschlag, der sich gebildet hatte, wurde durch Filtration gesammelt und aus Methanol/Wasser umkristallisiert (0,12 g, 65%), Schmp.: 252-256ºC.
    • Beispiel 5a 8-Methoxy-2-phenylchinazolin-4-[3H]-on (Verbindung NU1065) Alternativverfahren B
  • Einer Lösung von 2-Amino-3-methoxybenzamid (1,0 g, 6 mmol) (aus der zweiten Stufe von Beispiel 3) und Pyridin (0,6 ml, 7,8 mmol) in trockenem THF (25 ml) wurde eine Lösung von Benzoylchlorid (0,8 ml, 6,6 mmol) in THF (2 ml) tropfenweise zugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht unter Stickstoff gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und die verbliebene weiße Aufschlämmung wurde in 2-prozentiger wässriger Natriumhydroxidlösung resuspendiert und mit wässriger Chlorwasserstoffsäure neutralisiert, worauf sich ein weißer Niederschlag bildete. Das Produkt wurde durch Filtration gesammelt und aus Methanol-Wasser umkristallisiert (1,1 g, 75%), Schmp.: 252-256ºC.
  • δH (200 MHz, d&sub6;-DMSO): 4,06 (s, 3H, -OCH&sub3;), 7,47-7,61 (m, 2H, Ar-4/6H), 7,63-7,69 (m, 3H, Ph-3'/4'H), 7,80-7,85 (dd, 1H, Ar-5H), 8,27-8,32 (m, 2H, Ph-2'H), 12,70 (s, 1H, -NH), m/z 252 (100%, M&spplus;).
  • νmax/cm&supmin;¹: 3330, 3190, 3170, 3120, 3070, 2950, 2890, 2830, 1660.
  • Elementaranalyse: gefunden: C 71,38, H 4,39, N 11,17, C&sub1;&sub5;H&sub1;&sub2;N&sub2;O&sub2; erfordert C 71,42, H 4,79, N 11,10%.
    • Beispiel 6 8-Hydroxy-2-phenylchinazolin-4-[3H]-on (Verbindung NU1068)
  • Eine Lösung von 8-Methoxy-2-phenylchinazolin-4-[3H]-on (0,5 g, 2 mmol) von Beispiel 5 oder 5a in BBr&sub3; (1,0 M in CH&sub2;Cl&sub2;, 6 ml, 6 mmol) wurde 24 Stunden unter Stickstoff unter Rückfluss erhitzt. Die Lösungsmittel wurden durch Destillation unter vermindertem Druck entfernt und der verbliebene Rückstand wurde mit Natriumhydroxidlösung (10% w/v) hydrolysiert. Nach dem Ansäuern mit wässriger Chlorwasserstoffsäure wurde ein weißer Niederschlag erhalten, der entfernt wurde. Das Filtrat wurde mit Ethylacetat (3 · 30 ml) extrahiert, getrocknet (MgSO&sub4;) und das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt. Eine Umkristallisation aus Propan-2-ol/Wasser ergab die Zielverbindung (0,187 mg, 67%), Schmp.: 280- 284ºC.
  • δH (200 MHz), d&sub6;-DMSO): 7,73-7,50 (m, 2H, Ar-6/7H), 7,66-7,72 (m, 4H, Ar-5H, Ph-3'/4'H), 8,51-8,54 (dd, 2H, Ph-2H), 9,75 (bs, 1H, -OH), 12,60 (bs, 1H, -NH), δC (d&sub6;-DMSO): 116,01, 118,68 (Ar-6/7C), 122,03 (C-Ph), 127,43-128,76 (Ph-1'/2'/3'/4'C), 137,98 (Ar 8aC), 150,72 (Ar-8C), 153,31 (Ar-4aC), 162,62 (C=O), m/z 238 (100%, M&spplus;).
  • νmax/cm&supmin;¹ (ca.-Werte): 3380 (br), 3180, 3120, 3050, 2940, 1640.
  • Elementaranalyse: gefunden: C 69,54, H 4,05, N 11,46, C&sub1;&sub4;H&sub1;&sub0;N&sub2;O&sub2; erfordert C 70,58, H 4,23, N 11,76%.
    • Beispiel 7 2,8-Dimethylchinazolin-4-[3H]-on (Verbindung NU1069)
  • Einer Lösung von 2-Amino-3-methylbenzamid (0,5 g, 3,3 mmol) (mit herkömmlichen Verfahren hergestellt) und Pyridin (0,35 ml, 4,3 mmol) in trockenem THF (15 ml) wurde einer Lösung von Acetylchlorid (0,36 ml, 5,0 mmol) in THF (2 ml) tropfenweise zugesetzt und das Gemisch wurde über Nacht unter Stickstoff gerührt. Das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt und die verbliebene weiße Aufschlämmung wurde in 2- prozentiger wässriger Natriumhydroxidlösung resuspendiert und mit wässriger Chlorwasserstolffsäure neutralisiert, worauf sich ein weißer Niederschlag bildete. Der Feststoff wurde gesammelt und aus Methanol-Wasser umkristallisiert, wobei das entsprechende Chinazolinon erhalten wurde (0,47 g, 81%), Schmp.: 217-220ºC.
  • δH (200 MHz, d&sub6;-DMSO): 2,44 (s, 3H, -CH&sub3;), 2,57 (s, 3H, -CH&sub3;), 7,36-7,44 (t, 1H, Ar-6H), 7,68-7,72 (dd, 1H, Ar-7H), 7,97-8,01 (dd, 1H, Ar-5H), 12,25 (br s, 1H, -NH), m/z 174 (100%, M&spplus;).
  • νmax/cm&supmin;¹ 3325, 3180, 3040, 2990, 2910, 2880, 2795, 1680, 1620.
  • Elementaranalyse: gefunden: C 68,76, H 5,57, N 15,90, C&sub1;&sub0;H&sub1;&sub0;N&sub2;O erfordert C 68,94, H 5,76, N 16,08%.
    • Test auf PARP-hemmende Aktivität
  • Erfindungsgemäße Verbindungen, insbesondere diejenigen, die in den vorstehenden Beispielen detailliert dargestellt worden sind, wurden unter Verwendung der nachstehenden Verfahren und Materialien in vitro hinsichtlich der Aktivität als PARP-Inhibitoren getestet.
  • Im Prinzip beruht der verwendete PARP-Test auf der Aktivierung endogener PARP (wie es nachstehend beschrieben ist) in Zellen, die exogenes [³²P]-NAD&spplus; enthalten, das durch Suspendieren der Zellen in einer Lösung von [³²P]-NAD&spplus; in diese eingeführt worden ist, nachdem die Zellen in einem anfänglichen Vorbehandlungsschritt dafür durchlässig gemacht worden sind. Die Poly(ADP-ribose), die dann durch das Enzym synthetisiert wird, kann durch Trichloressigsäure (TCA) gefällt werden und die Menge an darin enthaltenem radioaktiv markierten ³²P kann z. B. unter Verwendung eines Szintillationszählers gemessen werden, wobei sich ein Maß für die Aktivität von PARP unter den jeweiligen Bedingungen des Experiments ergibt. Durch Wiederholen des Experiments gemäß dem gleichen Verfahren und unter den gleichen Bedingungen können dann in Gegenwart jeder zu testenden Verbindung die Verminderung der Enzymaktivität, die für den hemmenden Effekt der Testverbindung repräsentativ ist, aus der Verminderung, falls diese vorliegt, der Menge an [³²P] bestimmt werden, die in der mit TCA gefällten Poly(ADP-ribose) vorliegt.
  • Die Ergebnisse dieses Tests können als prozentuale Hemmung oder Verminderung der Aktivität für eine oder mehrere verschiedene Konzentrationen jeder getesteten Verbindung oder als Konzentration der getesteten Verbindung ausgedrückt werden, welche die Enzymaktivität um 50% vermindert, d. h. als IC&sub5;&sub0;-Wert. Folglich kann mit einem Bereich verschiedener Verbindungen ein Satz von Vergleichswerten für die Hemmaktivität erhalten werden.
  • In der Praxis wurden L1210-Maus-Leukämiezellen als Quelle des PARP-Enzyms verwendet, nachdem sie durch Aussetzen gegenüber einem hypotonischen Puffer und einem Kälteschock für exogenes [³²P]-NAD durchlässig gemacht worden sind. Bei der entwickelten bevorzugten Technik, die zu exakten und reproduzierbaren Ergebnissen führt, wurde eine definierte Menge einnes kleinen synthetischen Oligonucleotids, insbesondere ein einzelsträngiges Oligonucleotid mit der Palindromsequenz CGGAATTCCG, zur Aktivierung des PARP- Enzyms in die Zellsuspension eingebracht. Diese Oligonucleotidsequenz klappt unter Bildung eines doppelsträngigen Moleküls mit einem einzelnen Blunt-Ende auf sich selbst zurück und stellt ein effektives Substrat für die PARP-Aktivierung bereit. Dessen Verhalten als wirksames Aktivierungsmittel des Enzyms wurde in den durchgeführten Tests bestätigt.
  • Der verwendete experimentelle Ablauf, bei dem ein synthetisches Oligonucleotid wie vorstehend erwähnt als spezifisches PARP-Aktivierungsmittel eingebracht wird, unterscheidet zwischen PARP und anderen mono-ADP-Ribosyltransferasen in den Zellen. Folglich verursacht die Einführung solcher synthetischer Oligonucleotide eine 5- bis 6-fache Stimulierung des eingebrachten radioaktiven Markers und dies ist einzig und allein auf die PARP-Aktivität zurückzuführen.
  • Weitere Details des Tests sind nachstehend angegeben.
    • Materialien
  • Die verwendeten Materialien umfassen die folgenden Materialien:
    • DTT (Dithiothreitol)
  • Eine 100 mM-Lösung (15,4 mg/ml) (zur Verwendung als Antioxidationsmittel) wurde hergestellt, in 500 ul-Aliquots aufgeteilt und bei -20ºC gelagert.
    • Hyhotonischer Puffer
  • 9 mM Hepes (214 mg/100 ml)
  • 4,5% Dextran (4,5 g/100 ml)
  • 4,5 mM MgCl&sub2; (92 mg/100 ml)
  • Die vorstehenden Bestandteile wurden in etwa 80 ml destilliertem Wasser gelöst, der pH- Wert wurde auf 7,8 eingestellt (NaOH/HCl), die Lösung wurde anschließend mit destilliertem Wasser auf 100 ml aufgefüllt und in einem Kühlschrank gelagert. Unmittelbar vor der Verwendung wurde DTT bis zu einer Konzentration von 5 mM zugegeben (50 ul/ml).
    • Isotonischer Puffer
  • 40 mM Hepes (1,9 g/200 ml)
  • 130 mM KCl (1,94 g/200 ml)
  • 4% Dextran (8 g/200 ml)
  • 2 mM EGTA (152 mg/200 ml)
  • 2,3 mM MgCl&sub2; (94 mg/200 ml)
  • 225 mM Saccharose (15,39 g/200 ml)
  • Die vorstehenden Bestandteile wurden in etwa 150 ml destilliertem Wasser gelöst, der pH- Wert wurde auf 7, 8 eingestellt (NaOH/HCl), die Lösung wurde anschließend mit destilliertem Wasser auf 200 ml aufgefüllt und in einem Kühlschrank gelagert. Unmittelbar vor der Verwendung wurde DTT bis zu einer Konzentration von 2,5 mM zugegeben (25 ul/ml).
    • NAD
  • NAD wurde als Feststoff in vorher abgewogenen Aliquots bei -20ºC gelagert. Von diesen Aliquots wurden kurz vor der Durchführung eines Tests Lösungen mit einer Konzentration von etwa 6 mM (4 bis 4,5 mg/ml) frisch hergestellt und die Molarität wurde durch Messen der optischen Dichte (O. D.) bei 260 nm bestimmt. Die Vorratslösung wurde dann mit Wasser auf eine Konzentration von 600 uM verdünnt und eine kleine Menge ³²P-markiertes NAD wurde zugesetzt (z. B. 2 bis 5 ul/ml).
    • Oligonucleotid
  • Das Oligonucleotid mit der Palindromsequenz CGGAATTCCG, das mit herkömmlichen Mitteln synthetisiert worden ist, wurde unter vermindertem Druck getrocknet und in Form von Pellets in einem Gefrierschrank gelagert. Vor der Verwendung wurde es in 10 mM Tris/HCl auf eine Konzentration von 200 ug/ml, pH 7,8, gebracht, wobei jedes Pellet vollständig in 50 ml Puffer gelöst wurde. Die Lösung wurde dann in einem Wasserbad 15 min auf 60ºC erhitzt und langsam abkühlen gelassen, um eine korrekte Renaturierung sicherzustellen. Nach der Zugabe von 9,5 ml Puffer wurde die Konzentration durch Messen der optischen Dichte einer verdünnten Probe bei 260 nm überprüft. Die Hauptlösung wurde dann auf eine Konzentration von 200 ug/ml verdünnt und in 500 ul-Aliquots gebrauchsfertig in einem Gefrierschrank gelagert.
    • TCA
  • Lösungen von TCA (Trichloressigsäure) wurden in zwei Konzentrationen hergestellt, und zwar 10% TCA + 10% Natriumpyrophosphat und 1% TCA + 1% Natriumpyrophosphat.
    • Zellen
  • Die als Quelle für das PARP-Enzym verwendeten L1210-Zellen wurden als Suspensionskultur in RPMI-Medium + 10% fetalem Rinderserum + Glutamin und Antibiotika (Penicillin und Streptomycin) gehalten. Es wurden auch HEPES und Natriumhydrogencarbonat zugesetzt und die Zellen in 100 bis 200 ml Medium derart ausgesät, dass zum Zeitpunkt der Durchführung des Tests eine Konzentration von etwa 8 · 105/ml vorliegt.
    • Verfahren
  • Die zu testenden Verbindungen wurden im Allgemeinen als konzentrierte Lösung in DMSO (Dimethylsulfoxid) bereitgestellt. Die Löslichkeit der Verbindung wurde dann durch Zugeben einer Menge der DMSO-Lösung zu einer Menge des isotonischen Puffers überprüft, und zwar in den erforderlichen Endanteilen, die zur Durchführung des Tests verwendet werden sollen, und nach einem Zeitraum wurde die Lösung im Hinblick auf jegliche Anzeichen einer Kristallbildung unter einem Mikroskop untersucht.
  • Eine gewünschte Menge der Zellen, die durch Zählen mit einem Hämozytometer bestimmt wurde, wurde dann zentrifugiert (5 min bei 1500 U/min in einer Zentrifuge (Modell "Europa 24M"), der Überstand wurde entfernt und die erhaltenen Pellets wurden in 20 ml Dul A bei 4ºC resuspendiert, bevor sie erneut bei 1500 U/min und 4ºC zentrifugiert wurden. Nach dem erneuten Entfernen des Überstands wurden die Zellen bei einer Konzentration von 3 · 10&sup7; Zellen/ml in eiskaltem hypotonischen Puffer resuspendiert und 30 min auf Eis stehengelassen. Anschließend wurden neun Volumina von eiskaltem isotonischem Puffer zugesetzt und die Zellen, die nun gegenüber exogenem NAD&spplus; durchlässig gemacht worden sind, wurden dann innerhalb der folgenden Stunde zur Durchführung eines Tests verwendet. Die Permeabilisierung der Zellen kann auf dieser Stufe durch Zugeben doppelter Aliquots von Zellen zu einem gleichen Volumen von Trypan-Blau, Stehenlassen für 5 min und anschließend Zählen auf einem Hämozytometer überprüft werden.
  • Der Test wurde dann unter zweckmäßiger Verwendung von 15 ml-Kunststoffteströhrchen mit konischem Boden durchgeführt, die in ein Schüttelwasserbad bei 26ºC, das die optimale Temperatur für dieses Enzym ist, gestellt worden sind. Bei einem typischen Test unter Verwendung der Oligonucleotidlösung bei einer Konzentration von 5 ug/ml und der Testverbindung/DMSO-Lösung bei einer Konzentration von 2% und vierfacher Durchführung des Tests würden dann in jedes Teströhrchen 5 ul der Oligonucleotidlösung, 50 ul der 600 um NAD + [³²P]-NAD-Lösung, 8 ul der Testverbindung/DMSO-Lösung und 37 ul Wasser eingebracht werden. Vor Beginn des Experiments würde dieser "Cocktail" so wie die Zellsuspension 7 min bei 26ºC vorgewärmt werden. Die Reaktion würde dann durch Zugeben von 300 ul der Zellsuspension gestartet werden. Die Reaktion würde durch Zugeben von 2 ml der 10% TCA + 10% Natriumpyrophosphatlösung gestoppt werden.
  • Zusätzlich zu dem Vorstehenden würden gewöhnlich sechs Teströhrchen als Blindproben verwendet werden, welche die gleichen Bestandteile, wie sie vorstehend erwähnt worden sind, enthalten, jedoch wird vor der Zugabe der Zellsuspension eine TCA-Lösung zugegeben, um jegliche Reaktion zu unterdrücken. Dies ermöglicht die Durchführung von Korrekturen für jegliches nicht-spezifische Binden des markierten Materials für den verwendeten Filter (siehe unten).
  • Nach der Zugabe der Zellsuspension an zeitlich gesteuerten Intervallen zu jedem der Teströhrchen wurde das 10% TCA + 10% Natriumpyrophosphat bei 4ºC genau 5 min nach der Zugabe der Zellsuspension zu dem Röhrchen jedem der Teströhrchen zugesetzt. Nachdem die Röhrchen für einen minimalen Zeitraum von einer Stunde auf Eis stehengelassen worden sind, wurde der Inhalt jedes einzelnen Röhrchens durch einen einzelnen Filtertrichter einer Absaugfiltervorrichtung unter Verwendung von GF/C-Filterelementen (rauhe Seite nach oben) filtriert, düe mit 10% TCA angefeuchtet waren. Nach dem Filtrieren des Inhalts jedes Röhrchens und mehrmaligem Spülen der Filter mit 1% TCA + 1% Natriumpyrophosphat- Lösung wurden die Filter vorsichtig entfernt und getrocknet, bevor sie in einzelne Szintillationsgefäße eingebracht wurden. Vier zusätzliche Szintillationsgefäße wurden auch als Bezugsstandards verwendet, die 10 ul der 600 um NAD + [³²P]-NAD-Lösung enthielten, wobei jedem Gefäß 10 ml Szintillationsmittel zugesetzt wurden. Die Zählung wurde 2 min auf einem β-Zähler durchgeführt, um Messungen des vorhandenen ³²P und folglich der Menge der Poly(ADP-ribose) und der Aktivität des PARP-Enzyms zu erhalten.
    • Ergebnisse der in vitro-PARP-Hemmstudien
  • Neben der Anwendung des PARP-Enzymtests gemäß dem vorstehend erläuterten Standardverfahren auf eine Reihe von Verbindungen, die erfindungsgemäß hergestellt worden sind, wurde der Test für Vergleichszwecke auch auf bestimmte Benzamidverbindungen angewandt, insbesondere auf 3-Hydroxybenzamid, 3-Methoxybenzamid und 3- Aminobenzamid, von denen bereits bekannt ist, dass sie eine gewisse PARP-Hemmaktivität aufweisen. Eine vollständig tabellierte Liste der Verbindungen, die hergestellt und/oder studiert worden sind, wird nachstehend in Tabelle III gezeigt, und zwar zusammen mit den Ergebnissen des PARP-Hemmtests, die in verschiedenen Experimenten für verschiedene Konzentrationen der Verbindungen erhalten worden sind, die unter Verwendung des vorstehend beschriebenen Tests getestet wurden.
  • Bei dieser IListe können die bekannten PARP-Inhibitoren 3-Aminobenzamid, 3- Methoxybenzamid und 3-Hydroxybenzamid als Referenzverbindungen betrachtet werden. Obwohl eine beträchtliche Variation der Aktivität vorlag und in manchen Fällen zumindest die höheren Konzentrationen für wässrige Lösungen der Testverbindungen aufgrund einer niedrigen Löslichkeit nicht erhalten werden konnten, zeigten die getesteten erfindungsgemäßen Verbindungen im Allgemeinen ein brauchbares Maß an Hemmaktivität, insbesondere die Verbindungen IVU1025, NU1057, NU1063, NU1068 und NU1069.
  • Im Gegensatz zu den Ergebnissen, die für die erfindungsgemäßen Verbindungen erhalten worden sind, die in vielen Fällen PARP-Enzym-hemmende Eigenschaften zeigten, die weit über dem Durchschnitt liegen und die mindestens mit den Eigenschaften anderer bekannter PARP-Inhibitoren vergleichbar, wenn nicht besser sind, zeigten verschiedene analoge Nikotinamidverbindungen, die studiert worden sind, keine oder nur eine sehr geringe hemmende Aktivität, wenn sie in der gleichen Weise bei entsprechenden Konzentrationen getestet wurden.
    • Weitere biologische Aktivitätsstudien
  • Unter erneuter Verwendung der Maus-Leukämie-Zelllinie L1210 wurden Wachstumshemmexperimente durchgeführt, um die cytostatischen Effekte der Verbindungen zu bewerten, und klonogene Überlebenstests wurden durchgeführt, um die Cytotoxizität zu bewerten, insbesondere bezüglich der Verwendung der Verbindungen im Zusammenhang mit DNAbeschädigenden cytotoxischen Mitteln, wie z. B. cytotoxischen Antitumorarzneistoffen oder hochenergetischer Strahlung. Auch die DNA-Beschädigung und der Effekt der PARP- Inhibitoren auf den Vorgang der Bildung und Reparatur von DNA-Strangbrüchen wurde unter Verwendung von DNA-Strangbruchtests und -beobachtung durch alkalische Elution gemäß publizierter Techniken bewertet.
  • Als Beispiel werden nachstehend einige weitere Details von Studien beschrieben, die unter Verwendung der Chinazolinonverbindungen mit den Referenznummern NU1025 und NU1057 (ableitbar durch molekulare Umlagerung von entsprechenden Benzoxazolverbindungen) als repräsentative Beispiele der erfindungsgemäßen PARP-hemmenden Verbindungen und auch zum Vergleich mit den bekannten PARP-Inhibitoren 3-Aminobenzamid (3AB) und Benzamid (BZ) selbst durchgeführt worden sind, die Ergebnisse der Experimente unter Verwendung des Alkylierungsmittels Temozolomid (TM) werden auch beschrieben, wobei diese Verbindung als veranschaulichendes Beispiel eines cytotoxischen DNA- beschädigenden Antitumor-Arzneistoffs verwendet wird, und in manchen der durchgeführten Studien wurde zur Beschädigung der Zellen eine Bestrahlung mit Gammastrahlen durchgeführt.
  • Bei den Wachstumshemmtests würden die L1210-Zellen typischerweise dreifach bei 1 · 10&sup4;/ml in 24-Well-Multiplatten ausgesät und 24 Stunden später werden die zu testenden Verbindungen oder Arzneistoffe in ausgewählten Kombinationen und Konzentrationen zugegeben werden. An diesem Zeitpunkt würde ein Satz von Replikationen unter Verwendung eines Coulter-Zählers gezählt (N&sub0;) und 48 Stunden die restlichen Proben gezählt (N&sub1;) werden. Die prozentuale (%) Wachstumshemmung von Arzneistoff-behandelten Proben könnte dann abgeschätzt werden. Bei Arzneistoff-Kombinationsexperimenten würde dann, wenn Hinweise auf synergistische Effekte auf das Zeliwachstum oder die Klonogenizität erwünscht waren, eine einzelne feststehende Konzentration einer Probe eines cytotoxischen Arzneistoffs, z. B. Temozolomid als Kontrollwert genommen.
  • Als Veranschaulichung der erhaltenen Ergebnisse sind in der Tabelle I am Ende dieser Beschreibung die IC&sub5;&sub0;-Werte der vorstehend genannten PARP-Inhibitoren gezeigt, und zwar wenn sie allein und in Verbindung mit einer feststehenden Konzentration (100 uM) von Temozolomid verwendet wurden, wie es aus den Wachstumshemmtests abgeschätzt worden ist. Obwohl dies nicht gezeigt ist, sollte beachtet werden, dass das Aussetzen der Zellen gegenüber TM allein eine Hemmung des Zellwachstums mit einem IC&sub5;&sub0;-Wert von 361 ± 25 uM verursachte. Es wurde auch ermittelt, dass ein gleichzeitiges Aussetzen der Zellen gegenüber 100 uM TM mit steigenden Konzentrationen der PARP-Inhibitoren eine synergistische Zunahme der Wachstumshemmung über einen Bereich von Konzentrationen verursachte.
  • Aus Tabelle I ist ersichtlich, dass gegenüber dem Fall, bei dem die Verbindung NU1025 in Verbindung mit 100 uM TM verwendet wurde, 10 bis 20-fach höhere Konzentrationen der Verbindung NLI1025 allein erforderlich waren, um das Zellwachstum zu hemmen. Beispielsweise betrug der IC&sub5;&sub0;-Wert von NU1025 allein 0,41 mM, wobei dieser Wert in Gegenwart von TM auf 0,04 mM vermindert wurde. Im Vergleich dazu wurden mit 3AB und BZ nur zwei- bis dreifache Unterschiede erhalten, wobei es eine beträchtliche Überlappung zwischen den wachstumshemmenden Effekten der Verbindungen an sich und ihren Effekten in Verbindung mit TM gab. Eine identische Reihenfolge wurde beim Vergleich der Wirksamkeit der Verbindungen als PARP-Inhibitoren und deren Fähigkeit zur Hemmung des Zellwachstums erhalten, was zumindest nahelegt, dass die PARP-Funktion für das Zellwachstum essenziell ist.
  • In den klonogenen Überlebenstests werden die L1210-Zellen typischerweise variierenden Konzentrationen von TM ± einer feststehenden Konzentration eines PARP-Inhibitors für einen feststehenden Zeitraum von 16 Stunden ausgesetzt, und zwar vor dem Zählen und Aussäen zur Koloniebildung in 0,12 bis 0,15%iger Agarose in Arzneistoff-freiem Medium. Nach 7 bis 10 Tagen werden die Kolonien mit 0,5 mg/ml MTT gefärbt und per Auge auf einem mit einem Gitter versehenen Lichtkasten gezählt. Überlebenskurven wurden aufgetragen und typische erhaltene DEF&sub1;&sub0;-Werte sind nachstehend in Tabelle II angegeben (wobei die DEF&sub1;&sub0;- Werte als das Verhältnis der Konzentration von TM, die das Überleben auf 10% vermindert, dividiert durch die Konzentration von TM definiert sind, die das Überleben in Gegenwart einer feststehenden Konzentration eines PARP-Inhibitors auf 10% vermindert). Jeder DEF&sub1;&sub0;-Wert in Tabelle II repräsentiert das Durchschnittsverhältnis ± S. E. (Standardabweichung), das von dem gemittelten 10%-Überleben für TM allein (675 ± 31 uM von 22 unabhängigen Überlebenskurven) dividiert durch die individuellen 10%-Überlebenswerte von mindestens 3 unabhängigen Überlebenskurven, die in Gegenwart einer feststehenden Konzentration des Hemmstoffs erhalten wurden, abgeleitet ist.
  • Eine vernünftige Korrelation wurde zwischen den wachstumshemmenden Effekten und den cytotoxischen Effekten für TM allein mit einem IC&sub5;&sub0;-Wert von 361 ± 25 uM bzw. einem LD&sub5;&sub0;- Wert von 251 ± 13 uM gefunden, und zwar trotz unterschiedlicher Zeiten des Aussetzens (48 Stunden für die Wachstumshemmung und 16 Stunden für die Cytotoxizität). TM hat in Kultur eine Halbwertszeit von etwa 40 Minuten und daher wird es seine Wirkungen vor der minimalen Aussetzdauer von jedem Experiment ausüben. Alle Verbindungen potenzierten die TM- Cytotoxizität, jedoch erzeugte NU1025 etwa die gleichen DEFIO-Werte bei sehr viel niedrigeren Konzentrationen als 3AB bzw. BZ. Beispielsweise ergaben 50 uM NU1025 und 5 mM 3AB äquivalente DEF&sub1;&sub0;-Werte von etwa 4. Für NU1025 wurde die maximale Potenzierung der Cytotoxizität durch eine Konzentration im Bereich von 50-100 uM erreicht und war bei einer niedrigen Dosis von 10 uM signifikant.
  • Bei anderen klonogenen Überlebenstests wurde Gammastrahlen-Bestrahlung zur Beschädigung der Zellen verwendet. Typischerweise wurden L1210-Zellen (3 ml, 4 · 10³/ml in Kunststoff-Fläschchen) bei 4ºC mit variierenden Gammastrahlungsdosen in Gegenwart oder Abwesenheit von 10 mM 3AB oder 200 uM NU1025 und einer Endkonzentration von 2% DMSO bestrahlt. Die Zellen wurden dann 2 Stunden bei 37ºC in bei andauernder Gegenwart oder Abwesenheit eines PARP-Inhibitors vor dem Aussäen zur Koloniebildung inkubiert. Eine signifikante Potenzierung der Gammastrahlen-Cytotoxizität durch NU1057 wurde beobachtet, wobei der DEF&sub1;&sub0;-Wert 1,1 betrug.
  • Die Reparatur einer potenziell letalen Beschädigung (PLD) findet statt, wenn die Zellen nach der Initiierung der PLD in einer stationären Phase gehalten werden, und zwar bevor eine Zellteilung stattfinden kann. In weiteren typischen Experimenten wurden L1210-Zellen eine Gammastrahlen-PLD wie folgt in Gegenwart oder Abwesenheit von 3AB oder NU1025 reparieren gelassen: L1210-Zellen wurden in Kultur gehalten, bis sie eine stationäre Phase erreicht haben (> 10&sup6; Zellen/ml). Sie wurden in konditioniertem Medium auf 1,5 · 10&sup5;/ml von Kulturen in stationärer Phase verdünnt, um eine weitere Zellteilung zu verhindern. Replizierte 2 ml-Proben von Zellen in Kunststoff-Fläschchen wurden vor und unmittelbar nach einer 8 Gray-Gammastrahlenbestrahlung auf Eis aufbewahrt. 1 ml einer 3x-Endkonzentration von 3AB oder NU1025, die in konditioniertem Medium aus stationären Kulturen bereitgestellt worden sind, wurden (unter Erzeugung einer Endkonzentration von 10&sup6; Zellen/ml in 1% DMSO ± 10 mM 3AB oder 200 uM NU1025) zugegeben und die Zellen wurden 0, 2 oder 4 Stunden vor der Resuspendierung in Arzneistoff-freiem Medium und dem Aussäen zur Koloniebildung bei 37ºC inkubiert. Nicht bestrahlte Kulturen in stationärer Phase, die bei 37ºC für 0, 2 oder 4 Stunden mit 1% DMSO ± 10 mM 3AB oder 200 uM NU1025 inkubiert wurden, wurden als geeignete Kontrollen zur Bestimmung des relativen Zellüberlebens verwendet. In Abwesenheit der PARP-Inhibitoren nahm das Überleben der Zellen mit der Zeit zu, was eine PLD-Reparatur zuließ. Beispielsweise überlebten, wenn unmittelbar nach der Bestrahlung ausgesät wurde (keine Reparatur) nur etwa 0,2% der Zellen. Nach einer vierstündigen Reparaturperiode stieg dieser Wert jedoch auf 0,7%. Es wurde beobachtet, das sowohl 3AB als auch NU1025 diese Reparatur blockierte.
  • Es wurden auch die cytotoxischen Effekte der PARP-hemmenden Verbindungen allein untersucht. In einem Satz von Experimenten betrugen die LD&sub5;&sub0;-Werte für ein Aussetzen von L1210-Zellen für 24 Stunden 14 ± 1,0 mM (3AB), 6,0 ± 1,5 mM (BZ) und 1,6 ± 0,1 mM (NU1025). Die LD&sub5;&sub0;-Werte unterschieden sich um das ≤3-fache von den IC&sub5;&sub0;-Werten. Sie blieben jedoch bezüglich ihrer Wirksamkeit als PARP-Inhibitoren in der gleichen Reihenfolge. In Übereinstimrnung mit den Wachstumshemmdaten lag eine ≥ 10-facher Differenz zwischen der Konzentration von NU1025, die erforderlich war, um die maximale Potenzierung der TM- Cytotoxizität zu erzeugen, und der Konzentration vor, die erforderlich war, die Cytotoxizität per se zu erzeugen.
  • Bezüglich der clurchgeführten DNA-Strangbruchtests wurde gefunden, dass eine einstündige Behandlung mit TM zu einer konzentrationsabhängigen Zunahme der Elutionsgeschwindigkeit führte, was ein Maß für den DNA-Strangbruch ist. Änderungen des Ausmaßes des DNA- Strangsbruchs waren bei TM-Konzentrationen von 150 uM nachweisbar, wobei bei dieser Konzentration das Überleben um etwa 30% vermindert wurde. Alle Verbindungen wurden hinsichtlich ihrer Fähigkeit zur Erzeugung von Strangbrüchen bei ihrer alleinigen Verwendung getestet. Eine 24-stündige Inkubation von Zellen mit 1 mM NU1025 und 20 mM 3AB oder BZ hatte keine signifikante Wirkung auf das Ausmaß des DNA-Strangbruchs verglichen mit unbehandelten Zellen. Eine Koinkubation für 1 Stunde mit einer feststehenden Konzentration von TM (150 uM) mit steigenden Konzentrationen aller getesteten PARP-Inhibitoren verursachte eine progressive Zunahme der Elutionsgeschwindigkeit (Ausmaß des Strangbruchs) verglichen mit TM allein.
  • Die Ergebnisse für alle 3 genannten repräsentativen Verbindungen wurden durch Auftragen von Werten eines Parameters, der mit dem Ausmaß des Strangbruchs zusammenhängt, gegen die Hemmstoffkonzentration zusammengefasst. Für alle Verbindungen nahm der Strangbruch linear mit steigender Konzentration zu, wobei jedoch die Werte für NU1025 bei etwa 100 uM signifikant zuzunehmen begannen, wohingegen Konzentrationen von mehr als 3 mM und 5 mM erforderlich waren, um die Werte für BZ bzw. 3AB signifikant zu erhöhen. Auch hier zeigte die Reihenfolge und die Wirksamkeit der Verbindungen in dem DNA- Strangbruchtest eine hervorragende Korrelation mit der PARP-Hemmwirksamkeit in vitro.
  • Insgesamt wird angenommen, dass die durchgeführten Studien klare Beweise dafür liefern, dass die PARP-hemmenden Eigenschaften der getesteten Verbindungen das Vermögen dieser Verbindungen widerspiegeln, die Cytotoxizität von DNA-beschädigenden Mitteln zu verstärken, wie z. B. bestimmter cytotoxischer Antitumor-Arzneistoffe und Strahlung, die in der Strahlentherapie verwendet wird. Demgemäß sollten diese Verbindungen besonders zur Verabreichung im Zusammenhang mit solchen cytotoxischen Arzneistoffen oder der Strahlentherapie zur Verstärkung des cytotoxischen Effekts von cytotoxischen Arzneistoffen oder der Strahlentherapie im Verlauf einer medizinischen Behandlung geeignet sein, wie es vorstehend erwähnt worden ist.
  • Obwohl die vorliegende Erfindung jedes hier beschriebene neue Merkmal oder jede hier beschriebene neue Kombination von Merkmalen umfasst, umfassen die Hauptaspekte der Erfindung im Wesentlichen, jedoch nicht ausschließlich, im weiteren Sinn die nachstehenden Aspekte:
  • (i) Neue Verbindungen der Formel (II), wie sie hier definiert worden sind;
  • (ii) Verbindungen der Formel (II) mit Substituenten, wie sie hier vorstehend definiert worden sind (einschließlich deren Salzen), zur Therapie oder zur Verwendung in der Medizin und zur Herstellung von medizinischen Zubereitungen, die z. B. als PARP- Inhibitoren zur Verabreichung im Zusammenhang mit cytotoxischen Arzneistoffen oder mit der Strahlentherapie zur Verstärkung der Effektivität der cytotoxischen Arzneistoffe oder der Strahlentherapie bei der Krebsbehandlung verabreicht werden;
  • (iii) Verfahren zur Herstellung neuer Verbindungen der Formel (II), wie sie hier definiert worden sind, einschließlich jeglicher neuer Zwischenverbindungen, die bei der Durchführung solcher Verfahren erzeugt werden;
  • (iv) Pharmazeutische Formulierungen, die eine Verbindung der Formel (II), wie sie hier definiert worden ist, zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger umfassen;
  • (v) Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutischen Formulierung, wie sie vorstehend in (iv) definiert worden ist, z. B. mit den hier beschriebenen Verfahren.
  • (vi) Chinazolinverbindungen der Formel (II), die möglicherweise molekular umgelagerte Verbindungen der Formel (IV) repräsentieren, wie sie hier beschrieben sind, zur Therapie oder zur Verwendung in der Medizin und zur Herstellung von medizinischen Zubereitungen, die z. B. als PARP-Inhibitoren zur Verabreichung im Zusammenhang mit cytotoxischen Arzneistoffen oder mit der Strahlentherapie zur Verstärkung der Effektivität derselben geeignet sind, und pharmazeutische Formulierungen, welche diese Chinazolinverbindungen umfassen. Tabelle I Tabelle II Tabelle III Tabelle III (Fortsetzung)

Claims (19)

1. Verwendung einer Verbindung, wie sie hier definiert ist, zur Herstellung eines medizinischen oder veterinärmedizinischen Präparats zur Verwendung in einer Therapie zum Hemmen der Aktivität des Enzyms Poly(ADP-ribose)polymerase oder PARP (auch als ADP- Ribosyltransferase oder ADPRT bekannt), wobei eine derartige Enzymhemmung ein Element einer therapeutischen Behandlung darstellt, wobei die Verbindung das aktive PARP- Enzym-hemmende Mittel bereitstellt und eine Chinazolinonverbindung der allgemeinen Strukturformel II
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon ist,
dadurch gekennzeichnet, dass
X' eine Hydroxylgruppe, eine Alkylgruppe, eine Alkoxygruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aryl- oder Aralkylgruppe ist, und
Y' ein Wasserstoffatom, eine Alkylgruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aryl- odeir Aralkylgruppe ist.
2. Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1, wobei die in der Verbindung vorhandene Alkylgruppe oder jede in der Verbindung vorhandene Alkylgruppe, entweder als solche oder als Rest in einer Alkoxygruppe oder einer anderen Gruppe, innerhalb der Gruppen X' und Y' 1 bis 6 Kohlenstoffatome enthält.
3. Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Verbindung ein Chinazolinon der allgemeinen Strukturformel II ist, worin Y' eine Phenylgruppe oder eine Phenylgruppe mit einem Substituenten ist, der aus -NO&sub2;, -NH&sub2;, -OH und einer Alkylgruppe ausgewählt ist.
4. Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 3, wobei X' eine Hydroxylgruppe ist.
5. Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Verbindung ein Chinazolinon der allgemeinen Strukturformel II ist, worin X' eine Hydroxylgruppe und Y' eine Alkylgruppe ist.
6. Verwendung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 3 bis 5, wobei die Verbindung durch eine molekulare Umlagerung einer Benzoxazol-4-carboxamidverbindung erzeugt wird.
7. Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 1, wobei die Verbindung eine der nachstehenden Verbindungen ist:
(a) 8-Hydroxy-2-methylchinazolin-4-[3H]on;
(b) 8-Hydroxychinazolin-4-[3H]on;
(c) 8-Hydroxy-2-(4-nitrophenyl)-chinazolin-4-on;
(d) 8-Methoxy-2-methylchinazolin-4[3H]-on;
(e) 8-Methoxy-2-phenylchinazolin-4[3H]-on;
(f) 8-Hydlroxy-2-phenylchinazolin-4[3H]-on;
(g) 2,8-Dimethylchinazolin-4[3H]-on.
8. Eine Chinazolinonverbindung der allgemeinen Strukturformel II
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon,
dadurch gekennzeichnet, dass
X' eine Hydroxylgruppe, eine Alkylgruppe oder eine Alkoxygruppe ist, und
Y' eine Allkylgruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aralkylgruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe ist, die von einer Phenylgruppe mit einem 4- Propoxysubstituenten oder einem 2-Alkoxysubstituenten verschieden ist,
mit der Maßgabe, dass dann,
wenn X' eine Methylgruppe ist, Y' keine Butylgruppe ist,
wenn X' eine Methoxygruppe ist, Y' keine Methylgruppe oder 4-Hydroxyphenylgruppe ist, und
wenn X' eine Hydroxygruppe ist, Y' keine Methyl-, Ethyl- oder Phenylgruppe ist, wobei die Verbindung zur Verwendung als aktive pharmazeutische Substanz in einer Therapie dient.
9. Eine Chinazolinonverbindung der allgemeinen Strukturformel II
oder ein pharmazeutisch verträgliches Salz davon,
dadurch gekennzeichnet, dass
X' eine Hydroxylgruppe, eine Alkylgruppe oder eine Alkoxygruppe ist, und
Y' eine Alkylgruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Aralkylgruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe ist, die von einer Phenylgruppe mit einem 4- Propoxysubstituenten oder einem 2-Alkoxysubstituenten verschieden ist,
mit der Maßgabe, dass dann,
wenn X' eine Methylgruppe ist, Y' keine Butyl-, Isopropyl-, Phenyl- oder 2- Aminophenylgruppe ist,
wenn X', eine Ethylgruppe ist, Y' keine 4-Hydroxyphenylgruppe ist,
wenn X' eine Methoxygruppe ist, Y' keine Methyl-, Isopropyl-, 4-Methylphenyl-, 4- Hydroxyphenyl- oder 4-Methoxyphenylgruppe ist,
wenn X' eine Ethoxygruppe ist, Y' keine Isopropylgruppe ist,
wenn X' eine Propoxygruppe ist, Y' keine halogensubstituierte Phenylgruppe ist, und
wenn X' eine Hydroxygruppe ist, Y' keine Methyl-, Ethyl- oder Phenylgruppe ist.
10. Verbindung nach Anspruch 8 oder 9, bei der die vorhandene Alkylgruppe oder jede vorhandene Alkylgruppe, entweder als solche oder als Rest in einer Alkoxygruppe oder einer anderen Gruppe, innerhalb der Gruppen X' und Y' 1 bis 6 Kohlenstoffatome enthält.
11. Verbindung nach Anspruch 8, 9 oder 10, bei der Y' eine Phenylgruppe mit einem Substituenten ist, der aus -NO&sub2;, -NH&sub2;, -OH und einer Alkylgruppe ausgewählt ist.
12. Verbindung nach Anspruch 11, bei der X' eine Hydroxylgruppe ist.
13. Verbindung nach Anspruch 8, 9 oder 10, bei der X' eine Hydroxylgruppe und Y' eine Alkylgruppe ist.
14. Verbindung nach einem der Ansprüche 11 bis 13, die durch eine molekulare Umlagerung einer Benzoxazol-4-carboxamidverbindung erzeugt wird.
15. Eine Chinazolinonverbindung nach Anspruch 8 oder 9, die eine der nachstehenden Verbindungen ist:
(a) 8-Hydroxy-2-(4-nitrophenyl)-chinazolin-4-on;
(b) 8-Methoxy-2-phenylchinazolin-4[3H]-on;
(c) 2,8-Dimethylchinazolin-4[3H]-on.
16. Verbindung nach einem der Ansprüche 8 bis 15 zur Verwendung als aktive PARPhemmende Substanz bei einer Therapie.
17. Eine pharmazeutische Formulierung oder Zusammensetzung, die eine Verbindung nach Anspruch 16 in einer Einheitsdosierungsform enthält, die zur Verabreichung an einen Säuger zubereitet ist, der wahrscheinlich im Laufe einer Therapie von der Behandlung mit einem PARP-hemmenden Mittel profitiert.
18. Eine pharmazeutische Formulierung oder Zusammensetzung zur medizinischen Verwendung, die eine effektive PARP-hemmende Menge einer Verbindung nach einem der Ansprüche 8 bis 15 zusammen mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger umfasst.
19. Pharmazeutische Formulierung oder Zusammensetzung nach Anspruch 17 oder 18 zur Verwendung zusammen mit cytotoxischen Mitteln bei einer Antitumor-Therapie.
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