DE69233535T2

DE69233535T2 - Ionisch vernetzte Karboxylgruppe enthaltende Polysaccharide zur Verhütung von Gewebeverklebung

Info

Publication number: DE69233535T2
Application number: DE69233535T
Authority: DE
Inventors: W. James Somerville Huang; Douglas B. Milford Johns; Richard L. Fair Lawn Kronenthal
Original assignee: Lifecore Biomedical Inc
Current assignee: Lifecore Biomedical Inc
Priority date: 1991-04-05
Filing date: 1992-04-03
Publication date: 2006-04-20
Anticipated expiration: 2012-04-04
Also published as: JPH05124968A; CA2065111A1; ATE299706T1; DE69233535D1; AU647905B2; CA2065111C; JP2702641B2; GR920100122A; EP0507604A2; BR9201215A; EP1593394A3; ES2246490T3; EP0507604A3; EP1593394A2; US5532221A; EP0507604B1; AU1401592A

Description

Hintergrund der Erfindung
Diese Erfindung bezieht sich auf eine Behandlung zur Vorbeugung der postoperativen Adhäsionsbildung. Adhäsionen sind ungewollte Gewebeverwachsungen, die zwischen den Schichten von benachbartem Körpergewebe oder zwischen Gewebe und inneren Organen auftreten, wenn der Heilungsprozeß nach einem chirurgischen Eingriff beginnt. Spezieller bezieht sich die Erfindung auf ein Verfahren, welches die Verwendung von ionisch vernetzten Carboxylgruppen-enthaltenden Polysacchariden zur Kontrolle des Vorkommens und des Ausmaßes der Adhäsionsbildung an einer Stelle eines Operationstraumas einsetzt.
Die medizinische und wissenschaftliche Gemeinschaft untersuchte umfassend die therapeutischen Verwendungen von Carboxylgruppen-enthaltenden Polysacchariden und ihren wasserlöslichen Salzen über gut ein Jahrzehnt. Beispielsweise offenbart US-Patent 4,141,973 (Balazs-Patent) die Verwendung einer nicht-entzündlichen Hyaluronsäurefraktion (HA-Fraktion) für zahlreiche therapeutische Anwendungen. Diese Anwendungen umfassen unter anderem die Vorbeugung der Fasergewebebildung, beispielsweise die Vorbeugung von Adhäsionen; den Schutz von Hautwunden; und die erfolgreichste Anwendung bis heute, die Verwendung von HA als ein viskoelastisches Augenheilmittel während der Augenchirurgie.
Die Vorbeugung oder Verringerung der Adhäsionsbildung nach dem chirurgischen Eingriff erfordert ein therapeutisches Mittel, welches eine akzeptable Halbwertszeit in Körpergewebe aufweist. HA, in freier Säureform oder als sein Salz (Natrium, Kalium usw.) ist in den meisten Umgebungen stark löslich. Diese hohe Löslichkeit sowie Empfindlichkeit für natürlich vorkommende Enzyme führt zu einer sehr kurzen Halbwertszeit von ungefähr 1 bis 3 Tagen im Körpergewebe. Während dies zur Vorbeu gung von Adhäsionen bei gewissen Indikationen akzeptabel sein kann, ist für andere eine lange Halbwertszeit wünschenswert.
Folglich sind Versuche durchgeführt worden, um die Halbwertszeit von HA und anderen Carboxylgruppen-enthaltenden Polysacchariden ohne den Verzicht auf die therapeutische Wirksamkeit von diesen Verbindungen, speziell zur Adhäsionsprävention, zu erhöhen. Beispielsweise offenbart US-Patent 4,772,419 das Vernetzen von HA mit einem polyfunktionellen Vernetzungsmittel, welches Ether-, Ester- oder Amidverknüpfungen erzeugt. Das kovalent vernetzende HA bildet ein Gel, und es wird offenbart, daß dieses Gel zur Vorbeugung von Adhäsionen und Ablagerung von Geweben wirksam ist. Die PCT-Anmeldung WO 89/02445 offenbart ein wasserunlösliches Derivat von HA, das durch das Umsetzen von HA mit irgendeiner Anzahl von unterschiedlichen Aktivierungsmitteln hergestellt wurde, um eine kovalent vernetzte HA-Fraktion herzustellen. Die PCT-Anmeldung WO 86/00912 offenbart das Vernetzen von HA oder anderen Carboxylgruppen-enthaltenden Polysacchariden mit einem polyfunktionellen Epoxid, um ein abbaubares Gel zur Vorbeugung von Adhäsionen oder Ablagerungen von Körpergewebe herzustellen.
Obwohl die Versuche, die Halbwertszeit von HA sowie anderen Carboxylgruppen-enthaltenden Polysacchariden durch kovalentes Vernetzen des ausgewählten Polysaccharids zu verbessern, Erfolg hatten, ist nichts über die Bioverträglichkeit und die Toxizität der Vernetzungsmittel, die zum kovalenten Binden verwendet werden, bekannt. Außerdem ist der Grad der Verringerung des Vorkommens oder der Adhäsionsprävention, obwohl leicht besser als HA in seiner nicht-vernetzten Form, noch für zahlreiche Anwendungen unzureichend. Deshalb würde es im Hinblick auf die Fehler des Standes der Technik wünschenswert sein, ein derivatisiertes Carboxylgruppen-enthaltendes Polysaccharid herzustellen, das mit Körpergewebe biokompatibel ist und einen hohen Grad an Adhäsionsprävention oder Reduktion in bezug auf entweder die nativen oder die kovalent vernetzten Carboxylgruppen-enthaltenden Polysaccharide, die in der Literatur beschrieben sind, zeigen.
CS 264719 (Galatik et al), übersetzt von Allen Translation Service, offenbart Alkalimetallhyaluronate mit hohem Molekulargewicht und hoher Viskosität, die mit Mg²⁺, Al³⁺, Ca²⁺, Cr³⁺, Zn²⁺ oder Zr⁴⁺ in dimeren, trimeren oder höheren Komplexen vernetzt sind. Die Komplexe können ebenso mit Fe³⁺ (nicht bevorzugt) vernetzt werden und können verwendet werden, um postoperative Adhäsion zu verhindern.
Zusammenfassung der Erfindung
Die Erfindung ist eine Behandlung zum Verringern des Vorkommens von postoperativer Adhäsionsbildung. Die Erfindung umfaßt den Schritt des topischen Auftragens als ein Adhäsionsschutzmittel einer wirksamen Menge eines ionisch vernetzten Carboxylgruppen-enthaltenden Polysaccharids oder eines pharmakologisch akzeptablen Salzes davon auf eine Stelle eines Operationstraumas.
Das Adhäsionsschutzmittel in bevorzugten Ausführungsformen dieser Erfindung weist eine Halbwertszeit von mehr als der des entsprechenden nicht-vernetzten Polysaccharids auf, und ist vergleichbar mit dem eines entsprechenden kovalent vernetzten Polysaccharids. Wenn das Adhäsionsschutzmittel topisch auf eine Stelle eines Operationstraumas aufgetragen wird, zeigt es eine erhöhte Tendenz der Verringerung des Vorkommens von postoperativer Adhäsionsbildung in bezug auf entweder ein nicht-vernetztes Carboxylgruppen-enthaltendes Polysaccharid oder ein kovalent vernetztes Carboxylgruppen-enthaltendes Polysaccharid. Außerdem sind die Vernetzungsmittel, die zum Herstellen des Adhäsionsschutzmittels verwendet werden, biokompatibel und für Körpergewebe nicht-toxisch.
Die Behandlung dieser Erfindung kann bei den Anwendungen verwendet werden, die eine Verringerung des Vorkommens von postoperativer Adhäsionsbildung erforderlich machen, oder für jede andere Anwendung, die direkt oder indirekt von einer solchen therapeutischen Verwendung profitieren kann, beispielsweise Augen- und Orthopädieanwendungen. Das ionisch vernetze Carboxylgruppen-enthaltende Polysaccharid kann ebenso als ein Arzneimittelzufuhrsystem nützlich sein, beispielsweise zur Zufuhr von Wundheilmitteln, Antibiotika usw.
Ausführliche Beschreibung der Erfindung
Beispiele von Carboxylgruppen-enthaltenden Polysacchariden, die aus dem Umfang der Erfindung fallen, umfassen Carboxymethylcellulose, Carboxymethylchitin, Carboxymethylchitosan, Carboxymethylstärke, Alginsäure, Pektin, Carboxymethyldextran und Glucosaminoglycane, wie Heparin, Heparinsulfat und Chondroitinsulfat. Das erfindungsgemäße Carboxylgruppen-enthaltende Polysaccharid ist HA.
Das Adhäsionsschutzmittel kann das Carboxylgruppen-enthaltende Polysaccharid in freier Säureform einsetzen, oder alternativ kann ein pharmakologisch akzeptables Salz des Polysaccharids verwendet werden. Vorzugsweise setzt das Adhäsionsschutzmittel das pharmakologisch akzeptable Salz des Carboxylgruppen-enthaltenden Polysaccharids ein, um die Bildung von Adhäsionen zu verhindern. Dieses Adhäsionsschutzmittel ist Natriumhyaluronat.
Carboxylgruppen-enthaltende Polysaccharide, die aus dem Umfang der Erfindung fallen, die verwendet werden können, um Adhäsionsschutzmittel herzustellen, sind bekannte Verbindungen, die beispielsweise in den US-Patenten Nr. 4,517,295 und US-Patent 4,141,973; und Handbook of Water Soluble Gums and Resins, Kapitel 4, von Stelzer & Klug, veröffentlicht von McGraw-Hill, 1980, beschrieben werden. Verfahren zur Herstellung von HA werden in dem Balazs-Patent, welches die Verfahrensweise zum Extrahieren von HA aus Hahnenkämmen ausführlich erklärt, und in US-Patent 4,517,295, welches ein Fermentationsverfahren zur Herstellung von HA beschreibt, dargestellt. Die HA, die verwendet wird, um das Adhäsionsschutzmittel herzustellen, sollte für chirurgische Anwendungen stark gereinigt werden (medizinische Qualität).
Die Vernetzungsmittel, die verwendet werden können, um das Carboxylgruppen-enthaltende Polysaccharid ionisch zu vernetzen, sind aufgrund ihrer geringen Toxizität und Bioverträglichkeit mit Körpergewebe Verbindungen, die ein mehrwertiges Kation, nämlich das dreiwertige Kation Eisen(III)-chlorid, besitzen.
Die Vernetzungsreaktion tritt typischerweise fast sofort auf, wenn eine wässerige Polykationlösung mit einer wässerigen Lösung von mindestens 0,5 Gew.-% des Carboxylgruppen-enthaltenden Polysaccharids kontaktiert wird. Die Konzentration der polykationischen Spezies, die in dem Reaktionsgemisch vorliegt, sollte eine Konzentration sein, die ausreichend ist, mindestens 10% der Carboxylgruppen des Polysaccharids zu vernetzen. Nach der Reaktion ist es normalerweise wünschenswert, den pH auf etwa neutral einzustellen. In einigen Fällen ist es notwenig, den pH der Polysaccharidlösung auf einen sauren pH voreinzustellen, um die Ausfällung der HA bei der Zugabe der Polykationlösung zu verhindern. Dies wird oftmals notwendig, wenn starke ionische Bindungen erzeugt werden, wenn das verwendete Vernetzungsmittel Eisen(III)-chlorid ist.
Die Vernetzungsreaktion nutzt ein Polysaccharid, welches anionische Gruppen an jeder der Carboxylstellen besitzt. Diese anionischen Gruppen werden ionisch an die mehrwertigen Kationen gebunden. Das ionische vernetzte Polysaccharid, das das Adhäsionsschutzmittel darstellt, welches in dem erfindungsgemäßen Verfahren verwendet wird, ist durch die Tendenz gekennzeichnet, allmählich in seine separaten ionischen Spezies zu dissoziieren, wenn sie in ein ionisches Medium, beispielsweise physiologische Kochsalzlösung gegeben werden.
Die Viskosität des Adhäsionsschutzmittels kann durch Verändern der Konzentration von Polysacchariden in der Lösung oder durch Variieren der Konzentration des Polykations zur Kontrolle der Vernetzungsdichte kontrolliert werden. Das Adhäsionsschutzmittel kann in Form eines Gels bei relativ hohen Viskositäten existieren, oder kann alternativ als eine Flüssigkeit mit geringer Viskosität existieren. Ungeachtet der Viskosität, welche das Adhäsionsschutzmittel aufweist, kann es eine erhöhte Halbwertszeit im Vergleich zu dem nicht-vernetzten Polysaccharid aufgrund seiner vernetzten Struktur aufweisen.
Wie hierin verwendet, bezieht sich die topische Auftragung auf die Verabreichung des Adhäsionsschutzmittels nichtsystemisch auf die Oberfläche des Körpergewebes, das behandelt werden soll. Der Ausdruck „Stelle eines Operationstraumas" bedeutet, daß er die Stelle von Gewebe umfaßt, das in irgendeiner Weise verletzt wurde, und beispielsweise Gewebestellen umfaßt, die Inzision, Trocknen, Nähen, Exzision, Abrasion, Kontusion, Lazeration, Anastomose, Manipulation, Prosthesenchirurgie, Kürettage, Orthopädiechirurgie, Neurochirurgie, Herz- und Gefäßchirurgie oder plastischer oder rekonstruktiver Chirurgie unterlagen. „Stelle eines Operationstraumas" umfaßt ebenso Gewebe, das an das verletzte Gewebe angrenzt.
Die Behandlung dieser Erfindung kann verwendet werden, um postoperative Adhäsionen bei jedem Tier, das für ungewünschte Adhäsionsbildung nach dem operativen Eingriff anfällig ist, zu verhindern. Vorteilhafterweise wird das Verfahren verwendet, um Adhäsionen vor der Entwicklung bei Säugern, vorzugsweise Menschen, zu verhindern.
Die Behandlung dieser Erfindung ist in irgendeiner chirurgischen Verfahrensweise nützlich, bei der es wünschenswert ist, die Bildung von postoperativen Adhäsionen zu inhibieren. Es ist daher weitgehend in allen Typen der Chirurgie, bei denen die Adhäsionsbildung eine Komplikation sein kann, nützlich. Beispielsweise ist die Erfindung in der Abdominalchirurgie, Gynäkologiechirurgie, Thoraxchirurgie, Orthopädiechirurgie, die die Sehnen, Bänder usw. betrifft, Neurochirurgie, die die harte Hirnhaut betrifft, Leberchirurgie und dergleichen nützlich.
Das Adhäsionsschutzmittel kann auf die Stelle eines Operationstraumas durch irgendeine günstige Weise, wie beispielsweise durch Spülung, durch Überziehen direkt auf der Stelle in einem Gel, einer Creme, einem Film oder einem Schaum oder durch irgendeine andere günstige Weise aufgebracht werden. Vorzugsweise wird das Adhäsionsschutzmittel direkt auf die Operationsstelle durch Injektion mittels einer Spritze aufgetragen.
Die Verabreichung des Adhäsionsschutzmittels kann zu jedem Zeitpunkt, bevor die signifikante Wundheilung stattfand, auftreten. Es ist bevorzugt und meistens günstig, das Adhäsionsschutzmittel während der Operation oder zum Schluß des Operationsverfahrens noch vor dem Schließen der Wunde zu verabreichen. Jedoch kann es in einigen Fällen wünschenswert sein, das Adhäsionsschutzmittel kontinuierlich über einen Zeitraum zu verabreichen.
Eine „wirksame Menge" an Adhäsionsschutzmittel, die topisch auf die Stelle des Operationstraumas aufgetragen wird, ist eine Menge, die notwendig ist, eine Verringerung des Vorkommens der postoperativen chirurgischen Adhäsionsbildung zu beeinflussen. Die aufgetragene Menge wird von zahlreichen Faktoren abhängen, wobei der signifikanteste davon die Oberfläche der Stelle eines Operationstraumas ist. Vorzugsweise sollte die Menge des aufgetragenen Schutzmittels ausreichend sein, um die vollständige Fläche zu bedecken, die dem Operationstrauma ausgesetzt ist, und wenn notwendig oder gewünscht, eine zusätzliche Menge, die ausreichend ist, um Körpergewebe zu bedecken, welches den Flächen benachbart ist, die tatsächlich dem Operationstrauma ausgesetzt sind. Die wirksame Menge kann ohne weiteres empirisch bestimmt werden.
Das Adhäsionsschutzmittel, das verwendet wird, um die Adhäsionsbildung zu verhindern, wie in dieser Erfindung beschrieben, kann ebenso als ein Zufuhrvehikel für andere adhäsionsverhindernde Hilfsstoffe verwendet werden. Beispielsweise kann das Schutzmittel als ein Zufuhrvehikel für andere allgemein bekannte Adhäsionsschutzmittel verwendet werden, beispielsweise Tolmetin oder andere nicht-steroide entzündungshemmende Arzneimittel (NSAIDS), wie in US-Patent 4,937,254 beschrieben, oder Gewebe-Plasminogen-Aktivator (tPA), wie in dem Europäischen Patent Nr. 297860 beschrieben. Eine solche Kombination kann eine synergistische Wirkung zwischen Tolmetin und dem Adhäsionsschutzmittel erzeugen, um signifikant die Wirksamkeit jedes therapeutischen Mittels, das allein verwendet wird, zu verbessern. Alternativ kann das Adhäsionsschutzmittel nicht nur zur Verringerung von Adhäsionen, sondern ebenso als Zufuhrvehikel für andere therapeutische Mittel, wie Antibiotika, Wachstumsfaktoren und andere Medikamente, verwendet werden.
Die folgenden Beispiele sollen die beanspruchte Erfindung darstellen.
BEISPIEL 1
Eisen-vernetztes HA-Gel mit hoher Vernetzungsdichte als ein Adhäsionsschutzmittel
(a) Herstellung von Gel
0,634 g Natriumhyaluronat mit einem durchschnittlichen Molekulargewicht von etwa 600.000 wurden in 39,36 g Wasser zur Injektion in einem Becherglas gelöst. Nachdem eine homogene wässerige Lösung erhalten wurde, wurden 1,2 Milliliter von 1 N HCl unter Rühren zugegeben, um den pH der Lösung einzustellen. Dann wurden 5,2 Milliliter einer 1,5%igen Eisen(III)-chloridlösung unter Rühren zugegeben. Schließlich wurden 2,493 ml einer 1,7 N NH₄OH-Lösung unter Rühren zugegeben, bis ein homogenes Gel mit einem pH nahe neutral erhalten wurde. Das resultierende Gel zeigte eine Viskosität von etwa 88.600 cPs.
(b) Testprotokoll und Wirksamkeit des Adhäsionsschutzmittels
Long Evans Ratten (jeweils mit einem Gewicht von etwa 250 g) wurden in dieser Studie verwendet. Die Anästhesie wurde durch Ketamin (60 mg/kg) und Xylazin (10 mg/kg), die intraperitoneal verabreicht wurden, erreicht. Um Adhäsionen zu stimulieren, wurde der Blinddarm nach außen verlagert und Abrasionen wurden durch Abwischen des Blinddarms mit Mull, bis sich die punktierte Blutung entwickelt, durchgeführt. Drei 8 mm Läsionen wurden auf jeder Seite der Abdominalwand durch Entfernen einer Schicht des Bauchfells und des queren Bauchmuskels mit einer Edelstahlbiopsiestanze erzeugt. Alle zugänglichen Oberflächen der Leber wurden durch deren Abreiben mit dem stumpfen Ende eines sterilen Tupfers ausgeschabt. Sechs Ratten erhalten das Eisen(III)-chlorid-vernetzte HA-Gel, das durch das Verfahren, das in dem obigen Unterpunkt (a) beschrieben wird, hergestellt wurde. Drei (3) ml des Eisen(III)-HA-Gels wurden auf den Blinddarm, die Biopsiestanzstellen und die Leber beim Schließen des Schnitts aufgetragen.
Sechs Ratten in dieser Studie erhalten keine Behandlung und dienen als Kontrollgruppe. Sechs Ratten wurden mit einem lyophilisierten porösen Schaum von HA, kovalent vernetzt mit Vernetzer CX-100 Polyfunctional Aziridine Crosslinker (von ICI Resins, U.S.), behandelt. Ein Stück mit einem Durchmesser von 6 cm des kovalent vernetzten HA-Schaums wurde in kleinere Stücke geschnitten und dann über den ausgeschabten Leberflächen plaziert. Physiologische Kochsalzlösung wurde auf den Schaum bis zur Sättigung aufgetragen, um den Schaum zu hydratisieren.
Sieben Tage nach dem operativen Eingriff wurden die Ratten durch Kohlendioxidinhalation getötet und die Stellen wurden hinsichtlich des Ausmaßes von Adhäsionen untersucht. Die Anzahl an Stellen und Flächen von Blinddarmadhäsionen wurde gemessen und aufgezeichnet. Das Ausmaß von Leberadhäsionen an drei Stellen wurde auf einer Skala von 0 bis 6 eingestuft, wobei ein maximaler Gesamtwertpunkt von 18 die stärkste Adhäsionsbildung darstellt. Die Einteilung der Gesamtwertpunkte der drei Leberstellen wurde in der statistischen Analyse der Experimentenergebnisse verwendet. Die Ergebnisse werden in Tabelle 1 zusammengefaßt. Tabelle 1 Wirksamkeit des Eisen-vernetzten HA-Gels mit hoher Vernetzungsdichte zum Reduzieren von Adhäsionen

* HA-Schaum, nur auf die Leber aufgetragen.
** Zwei Ratten starben.
*** Statistisch unterschiedlich von jeder Kontrolle oder HA-Schaum.

Die Ergebnisse deuten darauf hin, daß das Eisen-vernetzte HA-Gel signifikant geringere Adhäsionen an dem Blinddarm und zwischen Leberlappen in bezug auf die Häufigkeit von Adhäsionen, die eine unbehandelte Kontrolle oder ein kovalent vernetztes HA-Adhäsionsschutzmittel zeigten, zeigt.
BEISPIEL 2
Eisen-vernetztes HA-Gel mit geringer Vernetzungsdichte als Adhäsionsschutzmittel
Die Verfahrensweise, die in Beispiel 1 beschrieben wurde, zur Herstellung des Eisenvernetzten HA-Gels sowie sein Testprotokoll werden im wesentlichen wiederholt, um ein Eisen-vernetztes HA-Gel mit geringer Vernetzungsdichte als ein Adhäsionsschutzmittel herzustellen und zu bewerten. Die folgenden Veränderungen wurden vorgenommen:

(a) Die Hälfte der Menge der Eisen(III)-chloridlösung wurde zur Herstellung des Eisen-vernetzten HA-Gels verwendet, um die Vernetzungsdichte zu verringern, beispielsweise wurden 2,6 ml einer 1,5%igen Eisen(III)-chloridlösung zu der HA-Lösung anstelle von 5,2 ml der Lösung zugegeben, was zu einem Gel mit niedrigerer Viskosität, d. h. 60.200 cPs führt;
(b) das Adhäsionsschutzmittel wurde mit einem lyophilisierten porösen Schaum aus HA, der mit 1,4-Butandioldiglycidylether anstelle des Polyfunctional Aziridine Crosslinker kovalent vernetzt wurde, verglichen; und
(c) das Adhäsionsschutzmittel wurde außerdem mit dem nicht-vernetzten Natriumhyaluronat in physiologischer Kochsalzlösung, die eine Viskosität von etwa 93.800 cPs aufweist, verglichen.

Die Ergebnisse der Studie werden in Tabelle 2 gezeigt. Tabelle 2 Wirksamkeit des Eisen-vernetzten HA-Gels mit geringer Vernetzungsdichte zum Reduzieren von Adhäsionen

* Nur fünf Ratten in dieser Gruppe.
** Eine Ratte starb.
*** Behandlungsgruppen mit demselben Buchstaben unterscheiden sich nicht signifikant; die Buchstabenbezeichnung „C" stellt die besten statistischen Ergebnisse zur Verhinderung von Adhäsionen dar.

Die Ergebnisse deuten darauf hin, daß das Eisen-vernetzte HA-Gel signifikant geringere Adhäsionen an dem Blinddarm und zwischen den Leberlappen in bezug auf die Häufigkeit von Adhäsionen, die eine nicht behandelte Kontrolle, ein nicht-vernetztes HA-Adhäsionsschutzmittel oder ein kovalent vernetztes HA-Adhäsionsschutzmittel zeigten, zeigt.
VERGLEICHSBEISPIEL 3
Aluminium-vernetztes HA-Gel als Adhäsionsschutzmittel
(a) Herstellung von Gel
1,917 g Natriumhyaluronat wurde in 118,1 g Wasser zur Injektion in einem Becherglas gelöst. Nachdem eine homogene wässerige Lösung erhalten wurde, wurden 7,2 Milliliter einer 5%igen Aluminiumchloridhexahydratlösung unter Rühren zugege ben. Dann wurden 2,2 Milliliter einer 1,7 N NH₄OH-Lösung unter Rühren zugegeben, bis ein homogenes Gel mit einem pH nahe neutral erhalten wurde.
(b) Testprotokoll und Wirksamkeit des Adhäsionsschutzmittels
Weibliche weiße New Zealand-Kaninchen im Fortpflanzungsalter (jedes mit einem Gewicht von etwa 3,0 bis 3,5 kg) wurde der Uterushornchirurgie, um die Abdominaladhäsion zu induzieren, unterzogen. Die Verfahrensweise umfaßte das Herstellen eines Mittelschnittes in den Bauch, das Traumatisieren beider Uterushörner, Auftragen des vernetzten HA-Gels und Schließen der Wunde. Zwanzig (20) Kaninchen wurden gleichmäßig in zwei Gruppen aufgeteilt: die Kontrollgruppe, die keine Behandlung vorm Schließen der Wunde erhielt, und eine Gruppe, die mit Aluminium-vernetzter HA behandelt wurde. Für die behandelte Gruppe wurden 10 Milliliter vernetztes HA-Gel (hergestellt gemäß dem obigen Unterpunkt (a)) direkt auf den Uterus gespritzt, wo immer Adhäsionen noch vor dem Schließen der Wunde erwartet wurden. Sieben Tage nach dem operativen Eingriff wurde jedes Kaninchen getötet und eine zweite Verfahrensweise wurde durchgeführt, um das Ausmaß von Adhäsionen zu bewerten. Die Adhäsionen wurden auf einer Skala von 0 (keine Adhäsion) bis 4 (starke Adhäsion) in Stufen von 0,5 in einer blinden zufälligen Weise subjektiv bewertet. Tabelle 3 faßt die Ergebnisse zusammen.
Tabelle 3 Wirksamkeit des Aluminium-vernetzten HA-Gels zum Reduzieren von Adhäsionen
Die Ergebnisse zeigen, daß die Verwendung eines Aluminium-vernetzten HA-Gels als Adhäsionsschutzmittel das Vorkommen von postoperativer Adhäsionsbildung signifikant verringert.
BEISPIEL 4
Gewebereaktion und Halbwertzeit des Eisen-vernetzten HA-Gels
Das hergestellte Eisen(III)-chlorid-vernetzte HA-Gel von Beispiel 2 (als „Testfall" bezeichnet) und Natriumhyaluronatlösung (als „Kontrollfall" bezeichnet) wurden in die Abdominalsubkutangewebe von Ratten injiziert und an den Tagen 1, 3, 7 und 14 analysiert (4 Ratten/Zeitraum), um die Gewebereaktion und Absorptionsmerkmale zu bestimmen. Jedes Tier wies 2 Test- und 2 Kontroll-0,5-cm³-Injektionsstellen auf. Die Fixierung erfolgt entweder durch 10% Formalin oder ein Fixiermittel mit einem pH von 7,4, das aus 3% Formaldehyd, 0,5% Cetylpyridinchlorid und 30 mM NaCl in einem 0,1 M Phosphatpuffer besteht. Das letztere Fixiermittel bildet einen nicht löslichen Komplex mit Glycosaminoglycanen (Ref: J. Histochem. und Cytochem., 33: 1060–1066, 1985). Hemantoxylin & Eosin (H&E) Färbung wurde mit selektiven Stellen verwendet, die mit Alcian-Blau gefärbt wurden, um die HA besser zu visualisieren. Die Gewebereaktionsbewertung ist subjektiv.
Gewebereaktionen an Test- und Kontrollstellen reichten von Spuren bis mäßig an den Tagen 1 und 3. Neutrophile und Makrophagen liegen an Tag 1 vor. An Tag 3 liegen überwiegend Makrophagen mit kleineren Zahlen von Neutrophilen und Fibroblasten vor. Häufige Makrophagen an den Teststellen an Tag 3 wiesen feine goldbraune intrazytoplasmatische Pigmente auf. HA liegt in der Mehrheit von Stellen an Tag 3 vor.
An den Teststellen an Tag 7 sind grobe Pigment-enthaltende Makrophagen der überwiegende Zelltyp, der eine minimale bis mäßige Gewebereaktion umfaßt. Die Gewebereaktionen an den Kontrollstellen sind entweder null oder Spuren bis minimal und bestehen überwiegend aus Fibroblasten. Es ist die gesamte Absorption von HA an allen Kontrollstellen offensichtlich. Eine minimale Menge von HA liegt noch an 3/7 der Teststellen vor.
An Tag 14 sind die Reaktionen an den Teststellen minimal mit einer Verringerung in den Gesamtzahlen von Pigment-enhaltenden Makrophagen. Die Mehrheit von Kontrollstellen ist aufgrund des Mangels an restlicher Gewebereaktion schwierig zu loka lisieren. HA ist an allen Test- und Kontrollstellen an Tag 14 vollständig absorbiert worden.
Die Gewebereaktionen von beiden Proben liegen in den akzeptablen Grenzen.

Claims

Zusammensetzung, umfassend ein ionisch vernetztes Carboxylgruppen-enthaltendes Polysaccharid-Wassergel, wobei das Carboxylgruppen-enthaltende Polysaccharid von medizinischer Qualität ist und hochgereinigte Hyaluronsäure oder Natriumhyaluronat mit Carboxylgruppen ist, die mit einem Fe³⁺-Kation in einer Menge, die ausreichend ist, um mindestens 10% der Carboxylgruppen des Polysaccharids zu vernetzen, ionisch vernetzt sind.
Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das Carboxylgruppen-enthaltende Polysaccharid Natriumhyaluronat ist.
Gelzusammensetzung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, wobei das Carboxylgruppen-enthaltende Polysaccharid mit Eisen(III)chlorid vernetzt ist.
Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, die ferner ein Arzneimittel umfaßt.
Zusammensetzung nach Anspruch 4, wobei das Arzneimittel ein adhäsionsverhindernder Hilfsstoff, ein antibiotischer Faktor oder ein Wachstumsfaktor ist.
Zusammensetzung nach Anspruch 5, wobei der adhäsionsverhindernde Hilfsstoff ein nicht-steroidales entzündungshemmendes Arzneimittel, vorzugsweise Tolmetin, ist.
Topisch anwendbare Zusammensetzung zur Anwendung auf eine Stelle eines Operationstraumas zur Verhinderung der Adhäsion, umfassend eine Zusam mensetzung nach einem der Ansprüche 1 bis 6.
Zusammensetzung nach Anspruch 7, die direkt auf die Stelle eines Operationstraumas in einer Anwendung durch Injektion durch eine Spritze topisch anwendbar ist.
Arzneimittelzufuhrsystem, umfassend eine Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 4 bis 8.
Verwendung einer ionisch vernetzten Carboxylgruppen-enthaltenden Polysaccharidzusammensetzung, wie in einem der Ansprüche 1 bis 8 definiert, zur Herstellung eines topisch anwendbaren Medikaments zur Verwendung in der Adhäsionsprävention.