DE69028967T2

DE69028967T2 - Cyclosporin- Derivate

Info

Publication number: DE69028967T2
Application number: DE69028967T
Authority: DE
Inventors: Marcel Karl Eberle
Original assignee: Sandoz AG
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 1989-07-24
Filing date: 1990-07-23
Publication date: 1997-05-15
Anticipated expiration: 2010-07-24
Also published as: IL95154A0; KR910002902A; HU904224D0; PT94790A; IE902669A1; FI903706A0; HK1004268A1; NZ234613A; PT94790B; SK411691A3; JPH0730113B2; EP0414632A3; GR3021667T3; ES2092500T3; FI94355B; AU631667B2; JPH03218396A; DK0414632T3; CA2021788A1; AU5972790A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft neue Cyclosporine, deren Verwendung als Pharmazeutika und pharmazeutische Zusammensetzungen, die sie enthalten, ebenso wie Verfahren zu ihrer Herstellung.
Die Cyclosporine umfassen eine Klasse von strukturell verschiedenen, Cyclischen, poly-N-methylierten Undecapeptiden, die allgemein pharmakologische, insbesondere immunsuppressive, entzündungshemmende und/oder antiparasitische Aktivität aufweisen. Das erste isolierte Cyclosporin war der natürlich vorkommende Pilzmetabolit Ciclosporin oder Cyclosporin, auch bekannt als Cyclosporin A, und im Handel erhältlich unter der eingetragenen Marke SANDIMMUN oder SANDIMMUNE . Ciclosporin ist das Cyclosporin der Formel A. worin MeBmt den N-Methyl-(4R)-4-but-2E-en-l-yl-4-methyl(L)threonylrest der Formel B bedeutet, worin -x-y- -CH=CH- (trans) ist.
Seit der ursprünglichen Entdeckung von Ciclosporin wurden eine Vielzahl von natürlich vorkommenden Cyclosporinen isoliert und identifiziert und viele weitere nicht natürliche Cyclosporine wurden hergestellt mit vollsynthetischen oder halbsynthetischen Mitteln oder durch Anwendung von modifizierten Kulturtechniken. Die Klasse, die von den Cyclosporinen gebildet wird, ist daher nun ziemlich bedeutend und schließt zum Beispiel die natürlich vorkommenden Cyclosporin A bis Z [siehe Traber et al., 1, Helv. Chim. Acta, 60, 1247 - 1255 (1977); Traber et al., 2, Helv. Chim. Acta 65, 1655 - 1667 (1982); Kobel et al., Europ. J. Applied Microbiology and Biotechnology, L4, 273 - 240 (1982) und von wartburg et al., Progress in Allergy, 38, 28 - 45, (1986)] ebenso wie verschiedene nicht natürliche Cyclosporinderivate und künstliche oder synthetische Cyclosporine einschließlich Dihydrocyclosporine [bei denen der Anteil -x-y- des MeBmt-Rests (Formel B oben) gesättigt ist, was -x-y- = -CH&sub2;-CH&sub2;- er gibt]; derivatisierte Cyclosporine (bei denen zum Beispiel das 3'-O-Atom im MeBmt-Rest acyliert ist oder bei denen ein weiterer Substituent am a-Kohlenstoffatom des Sarcosylrests an Position 3 eingeführt ist); Cyclosporine, bei denen der MeBmt-Rest in isomerer Form vorhanden ist (zum Beispiel bei denen die Konfiguration über die Positionen 6' und 7' des MeBmt-Rests cis statt trans ist) und Cyclosporine, bei denen andere Aminosäuren an spezifischen Positionen innerhalb der Peptidsequenz eingebaut sind, zum Beispiel unter Anwendung des vollsynthetischen Verfahrens zur Herstellung von Cyclosporinen, das von R. wenger entwickelt wurde - siehe zum Beispiel Traber et al., 1, Traber et al., 2 und Kobel et al., loc. cit.; US-Patente Nr. 4,108,985, 4,220,641, 4,288,431, 4,554,351, 4,396,542 und 4,798,823; EP-A 0 034 567, EP-A 0 056 782, EP-A 0 300 784 und EP-A 0 300 785; die internationale Patentschrift wo 86/02 080 und GB-A 2 206 119 und GB-A 2 207 678; wenger, 1., Transpl. Proc., 15 Suppl. 1:2230 (1983); wenger 2., Angew. Chem. Int. Ed. 24 77 (1985) und wenger 3., Progress in the Chemistry of organic Natural Products, 50, 123 (1986).
GB-A 2 155 936 offenbart [O-Acetyl-(D)-Ser]&sup8;-Cyclosporin.
Die Klasse, die von den Cyclosporinen gebildet wird, ist sehr groß und schließt zum Beispiel [Thr]²-, [Val)²-, (Nva]²- und [Nva]²-[Nva]&sup5;-Ciclosporin (auch bekannt als Cyclosporin C, D, G beziehungsweise M), [3-O-Acetyl-MeBmt]¹-Ciclosporin (auch bekannt als Cyclosporin-A-Acetat), [Dihydro-MeBmt]¹-[Val]²-Ciclosporin (auch bekannt als Dihydro-Cyclosporin D), [(D)Ser]&sup8;-Ciclosporin, [MeIle]¹¹-Ciclosporin, [(D)MeVal]¹¹-Ciclosporin (auch bekannt als Cyclosporin H), [MeAla]&sup6;-Ciclosporin, [(D)Pro]³-Ciclosporin und so weiter ein.
Nach der üblichen Nomendatur für Cyclosporine werden diese in der gesamten Beschreibung und den Ansprüchen unter Bezugnahme auf die Strukturformeln für Ciclosporin (das heißt Cyclosporin A) definiert. Dies erfolgt, indem zuerst die Reste in dem Molekül angegeben werden, die sich von denen, die in Ciclosporin vorhanden sind, unterscheiden und dann der Ausdruck "Ciclosporin" angewendet wird, um die verbleibenden Reste zu kennzeichnen, die identisch mit denen in Ciclosporin vorhandenen sind. Gleichzeitig wird die Vorsilbe "Dihydro" angewendet, um Cyclosporine zu bezeichnen, bei denen der MeBmt-Rest hydriert ist (Dihydro-MeBmt), das heißt, worin -x-y- in Formel B -CH&sub2;-CH&sub2;- ist. Somit ist ein [Thr]²-Ciclosporin das Cyclosporin der in Formel A gezeigten Sequenz, worin aber αabu an Position 2 durch Thr ersetzt ist und [Dihydro-MeBmt]¹-[Val]²-Ciclosporin ist das Cyclosporin der in Formel A gezeigten Sequenz, worin aber der MeBmt-Rest an Position 1 hydriert ist und αabu an Position 2 durch Val ersetzt ist.
Außerdem werden die Angaben für Aminosäurereste, die mit Abkürzungen bezeichnet werden, zum Beispiel Ala, Meval, αAbu etc., nach üblicher Praxis so verstanden, daß sie die (L)-Konfiguration haben, wenn nicht anders angegeben, zum Beispiel im Fall "(D)Ala". Abkürzungen für Reste, denen "Me" vorangeht, wie im Fall von "MeLeu", bedeuten a-N-methylierte Reste. Einzelne Reste des Cyclosporinmoleküls werden, wie im Stand der Technik, im Uhrzeigersinn beginnend mit dem Rest MeBmt oder Dihydro-MeBmt in Position 1 numeriert. Die gleiche numerische Reihenfolge wird in der ganzen Beschreibung und den Ansprüchen verwendet.
Erfindungsgemäß wurde nun gefunden, daß Cyclosporine, bei denen der Rest an Position 8 ein hydroxysubstituierter (D)- Serinrest ist, besonders interessante pharmazeutische Eigenschaften aufweisen. Die vorliegende Erfindung liefert daher ein Cyclosporin, bei dem der Rest an Position 8 ein Rest der Formel I ist, worin R Wasserstoff oder ein Acylrest ist.
Bevorzugt ist R Wasserstoff. Wenn R ein Acylrest ist, kann dies ein physiologisch hydrolysierbarer und annehmbarer Acylrest sein, das heißt ein Rest, der unter physiologischen Bedingungen abspaltbar ist, was eine Säure (ROH) liefert, die selbst wiederum physiologisch tolerierbar ist, in den zu verabreichenden Dosierungen. Geeignete Acylgruppen R schließen (C&sub1;&submin;&sub4;alkyl)carbonyl-, zum Beispiel Acetylreste, und monocyclische Arylcarbonylreste, zum Beispiel Benzoyl- und Salicylreste, ein. Bevorzugte erfindungsgemäße Cyclosporine sind solche der Formel II
worin X MeBmt oder Dihydro-MeBmt ist, Y αabu, Val, Thr oder Nva ist und Q ein Rest der Formel I, wie oben beschrieben, ist.
Die am meisten bevorzugte Verbindung der Erfindung ist [o-(2-Hydroxyethyl) (D)Ser]&sup8;-Ciclosporin, das heißt das Cyclosporin der Formel II, worin X MeBmt ist, Y αabu ist und Q ein Rest der Formel I ist, worin R Wasserstoff ist.
Die vorliegende Erfindung liefert auch ein Verfahren zur Herstellung von Cyclosporinen der vorliegenden Erfindung, zum Beispiel für die Herstellung von Cyclosporinen der Formel II, wobei das Verfahren umfaßt:
i) für die Herstellung eines Cyclosporins (zum Beispiel der Formel II), worin der Rest an Position 8 (Q in Formel II) ein Rest der Formel I, wie oben definiert, ist, worin R Wasserstoff ist, indem man ein entsprechendes Cyclosporin, worin der Rest an Position 8 ein Rest der Formel III ist
worin R' ein C&sub1;&submin;&sub3;-Alkylrest ist, reduziert zum Beispiel ein Cyclosporin der Formel IV worin X und Y die für Formel II angegebenen Bedeutungen haben und Q' ein Rest der Formel III, wie oben definiert, ist, reduziert oder
ii) zur Herstellung eines Cyclosporins, zum Beispiel der Formel II, bei dem der Rest an Position 8 (Q in Formel II) ein Rest der Formel I, wie oben definiert, ist, worin R ein Acylrest ist, indem man das entsprechende Cyclosporin, worin R Wasserstoff ist, verestert.
Die Reduktion gemäß der Verfahrensvariante i) kann unter Anwendung üblicher Methoden zur Reduktion von Estergruppen zu Hydroxymethylgruppen durchgeführt werden, zum Beispiel durch Behandlung mit Lithiumborhydrid unter Inertatmosphäre in einem geeigneten Lösungsmittel oder Verdünnungsmittel bei Umgebungstemperatur oder leicht erhöhter Temperatur. Das Lithiumborhydrid kann geeigneterweise durch Natriumborhydrid ersetzt werden in Gegenwart eines Lithiumhalogenids.
Die Veresterung gemäß Verfahrensvariante ii) kann mit üblichen Verfahren durchgeführt werden, zum Beispiel durch Reaktion mit Säurehalogeniden oder Anhydriden, zum Beispiel (C&sub1;&submin;&sub4;alkyl)carbonylhalogeniden in Gegenwart eines säurebindenden Mittels.
Die Ausgangsmaterialien für Verfahrensvariante i) können mit den folgenden Reaktionsverfahren hergestellt werden (der Einfachheit halber ist nur der umgewandelte Rest an Position 8 gezeigt): worin R' wie oben definiert ist und bevorzugt ein C&sub3;-Alkylrest ist, insbesondere ein Isopropylrest, und Hal Brom oder bd ist. Die Reaktion wird geeigneterweise gemäß dem allgemeinen Verfahren von Beispiel 1 unten oder analog dazu durchgeführt.
Cyclosporine, bei denen der Rest an Position 8 die Formel V hat (das heißt (D)Ser)) zum Beispiel [(D)Ser]&sup8;-Ciclosporin, sind bekannt und werden mit Verfahren zu ihrer Herstellung zum Beispiel in EP-A 0 056 782 und GB-A 2 155 936 beschrieben.
Erfindungsgemäße Cyclosporine können in festem Zustand, in amorpher Form oder in ein oder mehreren kristallinen Formen vorliegen. Zum Beispiel gibt es die Verbindung von Beispiel 2 unten in amorpher Form oder in mindestens drei kristallinen Formen, die durch Röntgenbeugung unterscheidbar sind und als Modifikationen A, B und C bezeichnet werden. Von diesen ist die Form B, ein Hydrat, das durch Umkristallisation aus Aceton/Wasser erhältlich ist, am stabilsten und daher die bevorzugte Form.
Cyclosporine, bei denen der Rest an Position 8 ein Rest der Formel III, wie oben definiert, ist, sind neu und bilden auch einen Teil der Erfindung.
Die folgenden Beispiele, in denen alle Temperaturen in ºC angegeben sind, erläutern die Erfindung.

BEISPIEL 1

[O-(Isoprooyloxvcarbonylmethyl(D)Ser]&sup8;-Ciclosporin

[(D)Ser]&sup8;-Ciclosporin (21,89 g 88,7 % reines Material von einer Chromatographiefraktion einer Fermentationsbrühe = 19,42 g, 15,93 mmol des 100 %igen Materials) wird in Toluol (160 ml) gelöst und Tetra-N-butylamoniumbromid (1,03 g, 3,2 mmol) wird zugegeben. Zu der Lösung wird Bromessigsäureisopropylester (14,41 g, 79,7 mmol) 5 Minuten lang bei 20º bis 25º zugegeben und die Mischung wird 30 Minuten lang bei 20º bis 25º gerührt, während 30 %ige wäßrige Natriumhydroxidlösung (53,1 g = 15,93 g reines NaOH, 398 mmol) tropfenweise zugegeben wird. Nach weiterem 30- minütigem Rühren bei 20º bis 25º wird die wäßrige Phase abgetrennt und mit Toluol (63 ml) extrahiert. Die Toluolphasen werden vereinigt und mit gesättigter wäßriger Ammoniumchloridlösung (80 ml) und dann mit Wasser (48 ml) gewaschen, dann uber Aluminiumoxid getrocknet, filtriert und zu einem festen gelben Schaum (22 bis 32 g) eingeengt.
Der Rückstand wird in Toluol (31 ml) aufgenommen und die Lösung auf 65º bis 68º erwärmt. Zu der warmen Lösung werden tropfenweise 90 Minuten lang 125 ml n-Hexan zugegeben und die Mischung 4 Stunden lang auf 20º bis 25º abgekühlt, 10 Stunden lang
bei Raumtemperatur gerührt und schließlich 3 Stunden lang auf 0º bis 3º gekühlt und bei dieser Temperatur 2 Stunden lang gerührt. Die entstehenden Kristalle werden abfiltriert, mit eiskaltem Toluol/Hexan 1 : 4 ( 42 ml) gewaschen und bei 60º im Vakuum getrocknet, was das Titelprodukt (19,2 g) in Form beiger Kristalle mit einer Reinheit von 87,9 % (bestimmt mit Hochdruckflüssigchromatograpie, HPLC) liefert, die in der nächsten Stufe ohne weitere Reinigung verwendet werden können.
Alternativ ergibt eine weiter Umkristallisation das reine Titelprodukt in Form weißer Kristalle, Schmelzpunkt 186º bis 170º; [α]D²&sup0; = -162,4º (Methanol, c = 0,37).

BEISPIEL 2

[O-(2-Hydroxyethyl)(D)Ser]&sup9;-Ciclosdorin

Stufe a): Rohes Produkt

Das rohe Produkt von Beispiel 1 (14,1 g, 87,9 % Reinheit = 12,39 g, 9,4 mol reines Material) wird in absolutem Methanol (315 ml) gelöst und unter Stickstoffatmosphäre auf 30º bis 35º erwärmt. Zu der Lsung wird in 7 Anteilen 6 Stunden lang Lithiumborhydrid (insgesamt 1,29 g, 95 % Reinheit = 1,225 g, 56,3 mol, 6 Äquivalente reines Material) zugegeben. Nach jeder Zugabe tritt eine leicht exotherme Reaktion auf, wobei Gas entwickelt wird. Die entstehende beige Suspension wird 14 Stunden lang bei 30º bis 35º gerührt, dann auf 20º bis 25º gekühlt und mit 23 ml einer 20 %igen wäßrigen Lösung von Essigsäure versetzt. Die klare fahlgelbe Lösung (pH 5 bis 6) wird 30 Minuten lang gerührt und dann eingedampft, was ungefähr 30 ml eines öligen Rückstands ergibt.
Der Rückstand wird zwischen Isopropylacetat (IPA) (130 ml) und Wasser (80 ml) aufgetrennt und die wäßrige Phase mit IPA (40 ml) wieder extrahiert. Die vereinigten IPA-Phasen werden mit 25 ml gesättigter wäßriger Natriumbicarbonatlösung, dann mit 30 ml Wasser gewaschen und das Lösungsmittel verdampft, was das rohe Titelprodukt als beigen Schaum ergibt (13,44 g, Reinheit 81,8 % bestimmt mit HPLC).

Stufe b): Reinigung

Das rohe Produkt von Stufe a) (36,2 g) wird in Methylisobutylketon (MIBK), das mit Wasser gesättigt ist, gelöst und auf Kieselgel 0,04 bis 0,063 mm (885 g) chromatographiert, wobei die Dimensionen der Säule 460 x 70 mm Durchmesser sind, wobei mit Wasser gesättigtes MIBK als Elutionsmittel verwendet wird. Nach einem anfänglichen Durchlauf von 2 1 werden Fraktionen, die das Material in einer Reinheit von > 95 % enthalten, bestimmt mit HPLC, gesammelt, was ungefähr 11,5 1 Lösung ergibt, die zur Trocknung im Vakuum eingedampft wird, was 24,3 g des amorphen Titelprodukts als beigen Schaum ergibt; Reinheit gemäß HPLC = 95,2 %.
Das feste Produkt wird in Aceton (40 ml) gelöst und die fahlgelbe Lösung durch einen gesinterten Glastrichter filtriert, der dann mit Aceton (21 ml) gespült wird. Zu der vereinigten Acetonlösung wird Wasser (61 ml) 90 Minuten lang tropfenweise zugegeben, wobei Kristalle erscheinen. Die feine Suspension wird 16 Stunden lang bei Raumtemperatur gerührt, dann 1 Stunde lang auf 0 bis 3º gekühlt, weitere 4 Stunden lang gerührt und dann filtriert, mit eiskaltem Aceton/Wasser 1 : 1 gewaschen und die feuchten Kristalle 14 Stunden lang bei 60º unter einem Teilvakuum getrocknet, was das reine Titelprodukt (20,76 g) in Form weißer Kristalle der Modifikation B ergibt, Reinheit gemäß HPLC 98 %, Schmelzpunkt ungefihr 130º (Zers.).
Eine weitere Umkristallisation aus Aceton/Wasser ergibt ein Material mit noch höherer Reinheit.
Aus dem, wie oben beschrieben, erhaltenen amorphen Material wird die Kristallmodifikation A erhalten durch Umkristallisation aus Polyethylenglycol/Wasser und die Kristallmodifikation C wird durch Umkristallisation aus Ethanol/Wasser oder durch Ultraschallbehandlung einer Suspension der amorphen Form in Ethanol/Wasser erhalten. Schmelzpunkte: Modifikation A: ungefähr 148ºC; Modifikation C: ungefähr 120ºC.

BEISPIEL 3

[O-(2-Acetyloxvethyl)(D)Serl&sup8;-Ciclosporin

Das Produkt von Stufe a) von Beispiel 2 (600 mg, 0,47 mol) wird in Pyridin (30 ml) gelöst und mit Essigsäureanhydrid (30 ml) vermischt. Die Mischung wird 2,5 Stunden lang auf Raumtemperatur gehalten, wonach das Pyridin und überschüssiges Essigsäureanhydrid bei vermindertem Druck verdampft werden und der Rückstand auf Silicagel mit Ether/Ethylacetat 4 : 1 als Elutionsmittel chromatographiert wird, was das Titelprodukt (430 mg) liefert. [α]20º = -175,8 (c = 0,25 in Methanol).
Cyclosporine, die einen Rest der Formel I, wie vorher definiert, an Position 8 enthalten (im folgenden "Produkt-Cyclosporine"), insbesondere Cyclosporine mit der Formel II, wie vorher definiert, haben pharmazeutischen Nutzen, wie zum Beispiel mit den folgenden Testmethoden gezeigt werden kann:

1. Lokalisierte Graft-versus-Host-(GvH)-Reaktion bei Ratten

[Ford et al., TRANSPL. PROC. 10 (1970) 258].

Milzzellen (1 x 10&sup7;) von 6 Wochen alten weiblichen Wistar/Furth-(WF)-Ratten werden subkutan am Tag 0 in die linke Hinterpfote von weiblichen (F344 x WF)F&sub1;-Ratten, die etwa 100 g wiegen, injiziert. Die Tiere werden an 4 aufeinanderfolgenden Tagen behandelt und die poplitealen Lymphknoten entfernt und am Tag 7 gewogen. Der Gewichtsunterschied zwischen den 2 Lymphknoten wird als Parameter zur Auswertung der Reaktion genommen.
Die Produkt-Cyclosporine hemmen die GvH-Reaktion bei dem obigen Testverfahren bei Verabreichung von 4 Dosierungen mit etwa 10 bis etwa 30 mg/kg p.o. oder etwa 1,5 bis 5 mg/kg s.c..

2. Nieren-Allo-Transolantat-Reaktion bei der Ratte

Eine Niere aus einer weiblichen Fischer-344-Ratte wird auf das Nierengefäß einer WF-Empfängerratte, bei der an einer Seite (linke Seite) die Niere entnommen wurde, unter Verwendung einer Ende-zu-Ende Anastamose transplantiert. Die Hamleiteranastamose ist ebenfalls Ende-zu-Ende. Die Behandlung beginnt am Tag der Transplantation und wird 14 Tage lang fortgesetzt. Eine kontralaterale Entnahme der Niere erfolgt 7 Tage nach der Transplantation, wodurch der Empfänger auf die Leistung der Spenderniere angewiesen ist. Das überleben der Transplantation wird als Parameter fur eine funktionelle Transplantation genommen.
Die Produkt-Cyclosporine sind wirksam für die Erhaltung des Überlebens des Transplantats in dem obigen Testverfahren bei Verabreichung von Dosierungen von etwa 2 bis etwa 5 mg/kg/Tag p.o..

3. Exderimentell induzierte allergische Encedhalomvelitis bei Ratten (Levine et al., AM. J. PATH. 47 (1965) 61; McFarlin et al., J. IMMUNOL. 113 (1974) 712; Borel, TRANSPLANT & CLIN. IMUUNOL. 13 (1981) 3].

Männlichen Wistar-Ratten wird in die Hinterpfoten eine Mischung von Rinderrückenmark und komplettem Freund'schen Adjuvant injiziert. Symptome der Krankheit (Lähmung des Schwanzes und der beiden hinteren Pfoten) werden gewöhnlich innerhalb von 16 Tagen entwickelt. Die Anzahl der erkrankten Tiere, ebenso wie die Zeit bis zum Einsetzen der Krankheit, wird aufgezeichnet.
Bei Verabreichung von Dosierungen von etwa 12,5 bis etwa 25 mg/kg/Tag p.o. hemmen die Produkt-Cyclosporine das Einsetzen der Krankheit beim obigen Testmodell.

4. Arthritis durch Freund's-Adluvans

[Winter & Nuss, ARTHRITIS AND RHEUMATISM 9 (1966) 394; Billingham & Davies, HANDBOOK OF EXPERIMENTAL PHARMACOL (Vane & Ferreira Eds, Springer-Verlag, Berlin) 50/II. (1979) 108 - 144].

OFA- und Wistar-Ratten (männlich oder weiblich, 150 g Körpergewicht) wird am Beginn des Schwanzes oder in die Hinterpfote 0,1 ml Mineralöl, das 0,6 mg lyophilisiertes, durch Wärme abgetötetes Mycobakterium smegmatis enthält, injiziert. Bei dem sich entwickelnden Arthritismodell wird die Behandlung sofort nach der Injektion des Adjuvants (Tage 1 - 18) begonnen; bei der Modellbehandlung für bestehende Arthritis wird am Tag 14 begonnen, wenn die sekundäre Entzündung gut entwickelt ist (Tage 14 - 20). Am Ende des Versuchs wird das Anschwellen der Gelenke mit einer Mikros chublehre gemessen.
Die Produkt-Cyclosporine sind wirksam für die Verhütung oder Hemmung des Fortschreitens der Krankheit sowohl bei den Entwicklungstestmodellen als auch bei den Testmodellen der entwickelten Krankheit bei Verabreichung von Dosierungen von etwa 3 bis etwa 20 mg/kg/Tag p.o..
Die Produkt-Cyclosporine zeigen auch eine vorteilhafte Toxizität, zum Beispiel bei den hepatotoxischen und/oder nephrotoxischen Profilen, verglichen mit bekannten Cyclosporinen, zum Beispiel Ciclosporin, was bestimmt werden kann durch die Bestimmung des Einflusses auf relevante Parameter, zum Beispiel Blutcreatinin, die glomeruläre Filtrationsrate, Harnstoff-, Bilirubinund Gallensäuregehalte nach langzeitiger Verabreichung an Ratten in immunsuppressiv wirksamen Dosierungsraten. Die Produkt-Cyclosporine sind daher durch eine verbesserte therapeutische Breite, verglichen mit bekannten Cyclosporinen, gekennzeichnet.
Die Produkt-Cyclosporine sind daher geeignet als Pharmazeutika, zum Beispiel als Immunsuppressiva, ebenso wie als entzündungshemende Mittel.
Die Produkt-Cyclosporine sind besonders geeignet zur Verhütung der Zurückweisung von Organ- oder Gewebetransplantaten, zum Beispiel für die Behandlung von Empfängern von Herz-, Lungen-, kombinierten Herz-Lungen-, Leber-, Nieren-, Pankreas-, Haut- oder Hornhauttransplantaten. Sie sind auch indiziert zur Verhütung der Graft-versus-Host-Krankheit, zum Beispiel nach einer Knochenmarkstransplantation.
Die Produkt-Cyclosporine sind auch geeignet zur Behandlung von Autoimmunkrankheiten und entzündlichen Zuständen, insbesondere entzündlichen Zuständen mit einer Aetiologie, an der eine Autoimmunkomponente beteiligt ist, wie Arthritis (zum Beispiel Polyarthitis, Arthritis chronica progrediente und Arthritis deformans) und rheumatische Erkrankungen. Spezifische Autoimmunkrankheiten, für die die Produkt-Cyclosporine angewendet werden können, schließen autoimunhämatologische Störungen (einschließlich zum Beispiel hämolytische Anämie, aplastische Anämie, Sichelzellenanämie und idiopathische Thrombocytopenie), systemischen Lupus erythematodes, Polychondritis, Sklerodermien, Wegener-Granulamatose, Dermatomyositis, chronisch aktive Hepatitis, Mysthenia gravis, Psoriasis, Steven-Johnson-Syndrom, idiopatische Sprue, entzündliche Autoimmunkrankheiten des Darms (zum Beispiel einschließlich Kolitis ulcerativa und Morbus Crohn), endocrine Ophthalmopathie, Graves-Krankheit, Sarcoidose, multiple Sklerose, primäre bihäre Leberzirrhose, jugendlichen Diabetes (Diabetes mellitus Typ I), Uveitis (anterior und posterior), Keratoconjunctivitis sicca und vernale Keratoconjunktivitis, interstitielle Lungenfibrose, Arthritis psoriatica und Glomerulonephritis (mit und ohne nephrotisches Syndrom, zum Beispiel einschließlich idiopathischem Nierensyndrom oder minimal veränderte Nephropathie), ein.
Die Produkt-Cyclosporine sind weiterhin indiziert zur Verwendung zur Behandlung von anderen Erkrankungen oder Zuständen, für die eine Cyclosporin-, zum Beispiel Ciclosporin-, Therapie durchgeführt oder vorgeschlagen wird, zum Beispiel zur Behandlung von Alopezie/zur Förderung des Haarwachstums und zur Behandlung von Asthma, zum Beispiel bei Verabreichung durch Inhalation. Sie sind auch indiziert zur Verwendung als antiparasitische Mittel, insbesondere für die Behandlung von parasitischen Infektionen oder Parasitenbefall, zum Beispiel durch Protozone, Pilze oder Würmer, zum Beispiel zur Behandlung von Filariasis, Schistosomiasis, Coccidiomycose oder Plasmodieninfektion, zum Beispiel Malaria. Sie sind weiterhin indiziert zur Verwendung, um eine induzierte Resistenz von bösartigen Erkrankungen gegenüber einer Chemotherapie umzuwandeln, ebenso wie zur Verbesserung der Wundheilung.
Für die obigen Indikationen variiert die geeignete Dosis natürlich abhängig zum Beispiel von dem jeweils angewendeten Produkt-Cyclosporin, dem zu behandelnden Patienten, der Art der Verabreichung und der Art und Schwere des zu behandelnden Zustands. Im allgemeinen werden jedoch befriedigende Ergebnisse bei Tieren bei täglichen Dosierungen von etwa 1 bis etwa 10 mg/kg/Tag p.o. erhalten. Bei größeren Tieren, zum Beispiel Menschen, liegt eine angezeigte tägliche Dosierung im Bereich von etwa 50 bis etwa 800 mg Produkt-Cyclosporin, das oral einmal, oder geeigneter, in verteilten Dosierungen 2 bis 4 x täglich verabreicht wird.
Bei einer Organtransplantation bei Menschen ist eine anfängliche einzelne orale Dosis von 10 bis 15 mg/kg Produkt- Cyclosporin 4 bis 12 Stunden vor dem chirurgischen Eingriff angezeigt. Diese tägliche Dosis wird 1 bis 2 Wochen nach der Operation aufrechterhalten, bevor sie nach und nach reduziert wird, je nach den Blutgehalten bis eine Aufrechterhaltungsdosis von etwa 2 bis 6 mg/kg/Tag erreicht ist. Wenn die Produkt-Cyclosporine zusammen mit anderen Immunsuppressiva gegeben werden (zum Beispiel mit Corticosteroiden als Teil einer Dreifach- oder Vierfacharzneimitteltherapie) können geringere Dosen (zum Beispiel 1 mg/kg/Tag i.v.; 6 mg/kg/Tag oral anfangs) verwendet werden.
Die Produkt-Cyclosporine können auf jedem üblichen Weg verabreicht werden, insbesondere enteral, zum Beispiel oral, zum Beispiel in Form von Lösungen zum Trinken, Tabletten oder Kapseln, oder parenteral, zum Beispiel in Form von injizierbaren Lösungen oder Suspensionen. Normalerweise sind für die systemische Verabreichung orale Dosierungsformen bevorzugt, obwohl für einige Zustände, zum Beispiel für die Verhütung der Zurückweisung von Lebertransplantaten, eine intravenös injizierbare Form wünschenswert ist. Die Produkt-Cyclosporine können topisch oder dermal verabreicht werden, zum Beispiel in Form einer Hautcreme oder eines Gels oder ähnlicher Präparate, oder, für die Zwecke der Anwendung für das Auge, in Form einer Augencreme, eines Gels oder von Augentropfenpräparaten. Eine geeignete Einheitsdosierungs form für die orale Verabreichung etnhält zum Beispiel 25 bis 200 mg Produkt-Cyclosporin pro Dosierung.
Bevorzugte galenische Präparate für die Produkt-Cyclosporine schließen solche auf Basis von Mikroemulsionen, wie sie in GB-A 2 222 770 beschrieben werden, ein, die sowohl topische als auch orale Formen; auch oral und injizierbare Formen, die aus festen Lösungen, die einen Fettsäuresaccharidmonoester, zum Beispiel Saccharosemonolaurat, enthalten, wie in GB-A 2 209 671 beschrieben, ein.
Beispiele für besonders bevorzugte Präparate, die für das Füllen von Weichgelatinekapseln für die orale Verabreichung geeignet sind, schließen ein: Prädarat Beispiel A: Prädarat Beispiel B: Prädarat Beispiel C: Prädarat Beispiel D:
Die einzelnen Komponenten dieser Präparate, ebenso wie die Methoden zu ihrer Herstellung, werden vollständig in GB-A 2 222 770 beschrieben, deren Inhalt hier durch Bezugnahme eingeschlossen wird.
Bestimme ED-Werte mit den oben beschriebenen Testmethoden 1 bis 4 für das Cyclosporin von Beispiel 2 sind die folgenden:
Nach den vorhergehenden Ausführungen liefert die vorliegende Erfindung auch in einer weiteren Reihe von Ausführungsformen:
Eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung in einer der Methoden (A) oder (B):
A. Verfahren, um eine Immunsuppression bei einem Patienten zu bewirken, der eine solche Behandlung benötigt, wobei das Verfahren umfaßt, daß man dem Patienten eine wirksame Menge eines Produkt-Cyclosporins verabreicht.
B. Ein Verfahren:
1) Zur Verhütung der Zurückweisung eines Organtransplantats, zum Beispiel zur Behandlung von Empfängern von Organtransplantaten der oben aufgeführten Art oder
2) zur Verhütung der Graft-versus-Host-Krankheit, zum Beispiel bei Empfängern von Knochenmarktransplantaten oder
3) zur Behandlung von Autoimunkrankheiten oder zur Behandlung von entzündlichen Zuständen, zum Beispiel zur Behandlung einer der oben aufgeführten Krankheiten oder Zustände oder
4) zur Behandlung von Alopezie oder zur Förderung des Haarwachstums oder
5) zur Behandlung einer parasitischen Infektion oder eines parasitischen Befalls, zum Beispiel zur Behandlung einer Infektion durch Protozoen, Pilze oder Würmer, oder eines Befalls, zum Beispiel zur Behandlung von Coccidiomycose oder Malaria oder
6) um die verminderte Resistenz von bösartigen Erkrankungen gegenüber einer Chemotherapie umzukehren, zur Verbesserung der Wundheilung oder zur Behandlung von Asthma;
bei einem Patienten, der eine solche Behandlung benötigt, wobei das Verfahren umfaßt, daß man den Patienten eine wirksame Menge eines Produkt-Cyclosporins verabreicht.
C. Produkt-Cyclosporin zur Verwendung als Pharmazeutikum, zum Beispiel zur Verwendung als Immunsuppressiva zur Verwendung zur Behandlung irgendeiner Krankheit oder eines Zustands, wie unter B oben ausgeführt.
D. Pharmazeutische Zusammensetzung enthaltend ein Produkt- Cyclosporin zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger.

Claims

1. Cyclosporin, bei dem der Rest an Position 8 ein Rest der Formel I ist worin R Wasserstoff oder ein physiologisch hydrolysierbarer und annehmbarer Acylrest ist.

2. Cyclosporin nach Anspruch 1 der Formel II worin X MeBmt oder Dihydro-MeBmt ist,

Y αabu, Val, Thr oder Nva ist und

Q ein Rest der Formel I, wie in Anspruch 1 definiert, ist.

3. Cyclosporin nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, worin R Wasserstoff ist.

4. [O-(2-Hydroxyethyl) (D)Ser]&sup8;-Ciclosporin.

5. Cyclosporin nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, worin R ein Acetylrest ist.

6. [O-(2-Acetyloxyethyl) (D)Ser]&sup8;-Ciclosporin.

7. Verfahren zur Herstellung eines Cyclosporins nach Anspruch 1, wobei das Verfahren umfaßt:

i) zur Herstellung eines Cyclosporins, bei dem der Rest an Position 8 ein Rest der Formel I ist, worin R Wasserstoff ist, indem man ein entsprechendes Cyclosporin, worin der Rest an Position 8 ein Rest der Formel III ist

worin R' ein C&sub1;&submin;&sub3;-Alkylrest ist, reduziert oder

ii) zur Herstellung eines Cyclosporins, worin der Rest an Position 8 ein Rest der Formel I ist, worin R ein Acylrest ist, das entsprechende Cyclosporin, worin R Wasserstoff ist, verestert.

8. Cyclosporin, bei dem der Rest an Position 8 ein Rest der Formel III ist worin R' ein C&sub1;&submin;&sub3;-Alkylrest ist.

9. [O-(Isopropyloxycarbonylmethyl) (D)Ser]&sup8;-Ciclosporin.

10. Cyclosporin nach einem der Ansprüche 1 bis 6 zur Verwendung als Pharmazeutikum.

11. Pharmazeutische zusammensetzung enthaltend ein Cyclosporin nach einem der Ansprüche 1 bis 6 zusammen mit einem pharmazeutisch annehmbaren Verdünnungsmittel oder Träger.