PT94790B

PT94790B - Processo para a preparacao de derivados de ciclosporina

Info

Publication number: PT94790B
Application number: PT94790A
Authority: PT
Inventors: Marcel Karl Eberle
Original assignee: Sandoz Sa
Priority date: 1989-07-24
Filing date: 1990-07-23
Publication date: 1997-04-30
Also published as: IL95154A0; KR910002902A; HU904224D0; PT94790A; IE902669A1; FI903706A0; HK1004268A1; NZ234613A; SK411691A3; JPH0730113B2; EP0414632A3; GR3021667T3; ES2092500T3; FI94355B; AU631667B2; JPH03218396A; DK0414632T3; DE69028967T2; CA2021788A1; AU5972790A

Description

PATENTE DE INVENÇÃO

N.° 94.790

REQUERENTE: SANDOZ S.A.. suiça. industrial, com sede em CH-4002 Basel. Suiça

EPÍGRAFE: PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE DERIVADOS DE

CICLOSPORINA

INVENTORES: Mareei Karl Eberle

Reivindicação do direito de prioridade ao abrigo do artigo 4.° da Convenção de Paris de 20 de Março de 1883.

ReinoUnido. 24 de Julho 1989. No.8916901

INPI MOD 113 RF 18732

SANDOZ S.A.

PROCESSO PARA A PREPARACÀO DE DERIVADOS DE CICLOSPORINA

MEMÓRIA DESCRITIVA

Resumo

O presente invento dis respeito a um processo para a 8 preparação de derivadas de I(D)Ser3 -Ciclosporin substituída com θ hidroxilo, particularmente CQ-<2-hidroxietil)(D)Ser3 -Ciclospoin, que apresenta propriedades farmacológicas vantajosas e são úteis como imunossupressores, por exemplo no tratamento da rejeição de transplante e doenças autoimunes.

Os referidos compostos pode ser preparados, par exemplo para a produção de uma ciclosporina em que o resíduo na posição 8 é um resíduo de fórmula de estrutura I

CH^-O-CH^-CH^-OR j - - - (1)

-NH-CH-CO(D) na qual R representa acilo, a esterificação da ciclosporina correspondente em que R representa hidrogénio.

presente invento refere-se a novas ciclosporinas, à sua utilização como fármacos e em composições farmacêuticas que as contêm, assim como aos processos para a sua preparação.

As ciclosporinas compreendem uma classe de undecapeptídeos poli-N-metilados cíclicos estruturalmente inconfundíveis, possuindo geralmente actividade farmacológica, em particular imunossupressora, anti-inflamatória e/ou antiparasítica. A primeira das ciclosporinas a ser isolada foi a Ciclosporin do metabolito fungoso que ocorre naturalmente, também conhecida por ciclosporina A e comercialmente disponível sob a Marca Registada SANBIMMUN^ ou SANDIMMUNE®. A Ciclosporin é a ciclosporina de fórmula A:

I—MeBm t~cc Abu-Sar—MeLeu-Va 1 -MeLeu-A1 a- (D) A1 a-MeLeu-MeLeu-MeVa1 | 1 2 3 4 5 ó 7 8 9 10 11)

I_l (A>

em que MeBmt representa o resíduo

N-meti1-(4R >-4-but-2E-en-1-i1-4-meti1-(L >-treonilo de fórmula de estrutura B:

^CHT, ϊ

y \

CH,,

HD (R) Ah \ / \

CH (R) CH-. (B)

-N—Ah-COi em que -x-y- representa -CH=CH- (trans).

Desde a descoberta original da Ciclosporin, uma grande variedade de ciclosporinas de ocorrência natural tem sido isolada e identificada e muitas outras ciclosporinas não naturais têm sido preparadas por meios totalmente sintéticos ou semi-sintéticos ou pela aplicação de técnicas de cultura modificadas. A classe abrangida pelas ciclosporinas é agora por conseguinte vasta e inclui, por exemplo, as ciclosporinas de ocorrência natural de A até Z Ccf. Traber et al., 1, Helv. Chim. Acta, 60, 1274-1255 (1977); Traber et al., 2, Helv. Chim. Acta, 65, 1655) -1667 (1982); Kobel et al., Europ. J. Applied Microbiology and

Biotechnology, 14. 273-240 (1982); e von Wartburg et al . , F‘roqress in Allergy, 38, 28-45 (1986)3, bem como vários derivados de ciclosporinas não naturais e ciclosporinas artificiais ou sintéticas que incluem di-hidro-ciclosporinas Cem que a porção -x-yda resíduo MeBmt (fórmula de estrutura B anterior) é saturada para dar -χ-y- = -CH^-C-H^,- 3; ciclosporinas derivadas (e. g. em que o átomo 3'—0 do resíduo MeBmt é acilado ou é introduzido um outro substituinte no átomo de carbono α do resíduo de sarcosilo na posição 3); cic1osporinas em que o residuo MeBmt está presente na forma isómera (e. g. em que a configuração sobre as posições 6' e 7' do resíduo MeBmt é mais cis do que trans); e ciclosporinas em que são incorporados aminoácidos variantes em posições específicas dentro da sequência de peptídeo, e. g. empregando o método sintético total para a produção de ciclosporinas desenvolvido por R„ Wenger - ver e. g. Traber et al. 1, Traber et al. 2 e Kobel et al . , loc. cit.; Patentes dos E.U.A. Nos. 4 108 985, 4 220 641, 4 288 431, 4 554 351, 4 396 542 e 4 798 823, Pedidos de Patente Europeia Nos. 34 567A, 56 782A, 300 784A e 300 785A; Pedido de Patente Internacional N° WO 86/02080 e Pedidos de Patente do Reino Unido Nos. 2 206 119 e 2 207 678; Wenger, 1, Transpl. Proc., 15 Suppl. 1:2230 (1983); Wenger, 2, Angew. Chem. Int. Ed., 24, 77 (1985) e Wenger, 3, Progress in the Chemistry of organic Natural Products, 50, 123 (1986).

A classe abrangida pelas ciclosporinas, por conseguinte, ê agora na verdade muito vasta e inclui, por exemplo, CThrl'^--, EVal3^-, CNva3^- e ENva3^—ENvai^-Cic losporin (também conhecidas por ciclosporinas C, D, S e M, respectivamente),

E3-0~acetil-MeBmt3 -Ciclosporin (também conhecida por acetato de 1 ί cic1osporina A), EDi-hidro-MeBmt3 -EValJ^-Ciclosporin (também θ conhecida por di-hidro-ciclosporina D), E(D)Ser3 -Ciclosporin,

EMelle3^-Ciclosporin, E(D)MeVal3^-Ciclosporin (também conhecida 6 3 por ciclosporina H), CMeAlal -Ciclosporin, E(D)Pro3-Ciclosporin e assim por diante.

De acordo com a nomenclatura convencional para as ciclosporinas, estas são definidas ao longo da presente memória descritiva e reivindicações por referência à estrutura da Ciclosporin (i. e. ciclosporina A). Isto é feito indicando primeiro os resíduos na molécula que diferem doe presentes na Ciclosporin e em seguida aplicando o termo Ciclosporin para caracterizar os restantes resíduos que são idênticos aos presentes na )

Ciclasporin. Aa mesmo tempo o prefixo di—hidro é empregue para designar as ciclosporinas em que o resíduo MeBmt ê hidrogenado (di-hidro-MeBmt) i. e. onde -x-y- na fórmula de estrutura B é 2

-CH_r.-CH^-. Nestes termos, CThrl Cic 1 osporin é a ciclosporina que tem a sequência que se mostra na Fórmula A mas em que aAbu na 1 v posição 2 è substituído por Thr e CDi-hidro-MeBmt1 -CVall -Ciclosporin è a ciclosporina que tem a sequência que se mostra na Fórmula A mas em que o resíduo na posição 1 ê hidrogenado e aAbu na posição 2 é substituído por Vai.

Em aditamento, os resíduos de aminoácido referidos por abreviatura, e. g. Ala, MeVal, aAbu, etc. devem, de acordo com a prática convencional, ser compreendidos como tendo a configuração (L) , a menos que seja, indicado de outra maneira, e. g. como no caso de (D)Ala. As abreviaturas de resíduas precedidas por Me como no caso de MeLeu, representam resíduos a—N-meti1ados (resíduos meti lados no átomo de azoto a). Os resíduos individuais da molécula de ciclosporina são numerados, como na técnica, no sentida da movimento des ponteiros da relógio e a começar com o resíduo MeBmt ou di-hidro-MeBmt na posição 1. A mesma sequência numérica é empregue através na presente memória descritiva e respectivas reivindicações.

De acordo com o presente inventa, verificou-se agora que as ciclosporinas em que o resíduo na posição 8 é um resíduo de serina <D) substituída com hidroxilo mostram propriedades farmacêuticas particularmente interessantes.

□ presente invento proporciona assim uma ciclosporina em que o resíduo na posição 8 é um residuo de fórmula de estrutura I (β) CH^-O-CH^-CH^-OR ί <Ι>

-NH-CH-CO(D) em que R representa hidrogénio ou acilo.

Preferivelmente, R representa hidrogénio. Quando R representa acilo, isto pode representar um resíduo de acilo fisiologicamente hidrolizável e aceitável, que ê um residuo que è separável sob condiçoes fisiológicas para dar origem a um ácido (ROH) que ê ele próprio fisiologicamente tolerável nas dosagens a ser administradas. Os grupos R de acilo adequados incluem alquil(0}^Icarbonilo, por exemplo acetilo, e arilcarbonilo monocíclico, por exemplo benzoilo e salicilo.

As ciclosporinas preferidas de acordo com o presente invento são as de fórmula de estrutura II

I—X-Y-Sa r-MeLeu-Va1-MeLeu-A1a-Q-MeLeu-MeLeu-MeVa1 — j 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1Ô 11 j (II)

I_________I na qual

X representa MeBmt ou di-hidro-Me&mt,

Y representa ctAbu, Val, Thr ou Nva e Q representa um resíduo de fórmula de estrutura I do mesmo modo que anteriormente.

definida □ composto mais preferido do invento é CO-<2-hidroxi8 etil)(D)Ser3 -Ciclosporina, isto é, a ciclosporina de fórmula de estrutura II em que X representa MeBmt, Y representa aAbu e Q representa um resíduo de fórmula de estrutura I em que R representa hidrogénio.

V presente invento também proporciona um processo para a produção de ciclosporinas do presente invento, e. g. para a produção de ciclosporinas de fórmula de estrutura II, processo esse que compreende:

i) para a produção de uma ciclosporina (e. g. de fórmula de estrutura II) em que o resíduo na posição 8 (Q na. fórmula de estrutura II) é um resíduo de fórmula de estrutura I definida do mesmo modo que anteriormente na qual R representa hidrogénio, a redução de uma ciclosporina correspondente em que o resíduo na posição 8 é um resíduo de fórmula de estrutura III

O-U-O-Cf-L-CO-O-R'

I ( III )

-NH-CH-CO (D) em que R’ representa alquilo Cj_^, por exemplo a redução de uma ciclosporina de fórmula de estrutura IV

I—X-Y-Sar-MeLeu-Val-MeLeu—Ala-Q'—MeLeu-MeLeu-MeVal—| | 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 ( (II) ) 1_____ I em que X e Y têm os significados dados para a fórmula de estrutura III definida do mesmo modo que anteriormente; ou ii) para a produção de uma ciclosporina (e. g. de fórmula de estrutura II) em que o resíduo na posição 8 (Q na fórmula de estrutura II) é um resíduo de fórmula de estrutura I definida do mesmo modo que anteriormente na qual R representa acilo, a esterificação da ciclosporina correspondente em que R representa hidrogénio.

A redução de acordo com a variante de processo i) pode ser levada a cabo empregando métodos convencionais para a redução de grupos éster para grupos hidroximetilo, por exemplo por tratamento com boro-hidreto de lítio sob uma atmosfera inerte, num solvente ou diluente apropriado à temperatura ambiente ou a temperatura moderadamente elevada. 0 boro-hidreto de lítio pode convencionalmente ser substituído por boro-hidreto de sódio na. presença de um haleto de lítio.

A esterificação de acordo com a variante de processa ii) pode ser levada a cabo de acordo com processos convencionais, por exemplo por reacção com haletos de ácido ou anidridos, e. g. haletos de a 1qui1()carboni1 o, na presença de um agente de ligação ácido.

Os materiais de partida para a variante de processo i) podem ser preparados de acordo com o método de reacção seguinte (por conveniência, apenas o resíduo transformado na posição 8 é indicado);

ch₇-oh

-NH-Íh-CO(D)

CH^-O-CH^-CO-O-R' Hal-CH„-CO~OR' (

-±-> -NH-CH-CO— (D) (V) (VI) ( III ) em que R' é definida do mesmo modo que anteriormente, e é preferivelmente alquilo C-., particularmente isopropilo; e Hal é bromo ou iodo. A reacção ê adequadamente realizada de acordo com ou analogamente aos processos do Exemplo 1 que se segue.

As ciclesporinas em que o residuo na posição 8 é de 8 fórmula de estrutura V (isto é, (D)Ser), por exemplo C(D))Ser] -Ciclosporin, são conhecidas e são descritas conjuntamente com os processos para a sua produção, e. g. no Pedido de Patente Europeia. 56 782 A e Pedido de Patente Britânica 2 155 936 A.

As ciclosporinas de acordo com o invento podem existir no estado sólido em forma amorfa ou. numa ou mais formas cristalinas. Por exemplo, o composto da Exemplo 2 seguinte existe em forma amorfa ou em pelo menos três formas cristalinas, distinguíveis por difracção de Raios-X, e designadas modificações A, B e C. E^estas, a forma B, um hidrato que se pode obter por recristalizaçãa a partir de acetona / água, é a mais estável e, por conseguinte, é a forma preferida.

As ciclosporinas em gue o resíduo na posição 8 é de fórmula de estrutura III definida do mesmo modo que anteriormente são novas e também fazem parte do presente invento.

Os exemplos seguintes, nos quais todas as temperaturas estão em graus centígrados, ilustram o inventa.

EXEMPLO 1 θ

EO-<Isopropiloxicarbonilmetil)(D)Ser3 —Ciclosporin

É dissolvida C(D)S1 -Ciclosporin (21,89 g de material 88,7 7. puro a partir de uma fracção cromatográfica de uma cultura de fermentação; = 19,42 g, 15,93 mmol de material a ICO 7.) em tolueno (160 ml ) e é adicionado brometo de tetra-N-buti1amónio (1,03 g; 3,2 mmol). À solução é adicionado éster de isopropilo do ácido bromoacético (14,41 g; 79,7 mmol) durante 5 min a 20-25 ^C'C, e a mistura é agitada durante 30 min a 20-25 °C enquanto é adicionada gota a gota uma solução aquosa de hidróxido de sódio a 30 7. (53,1 g: = 15,93 g de NaOH puro; 398 mmol). Após agitação durante mais 30 min a 20-25 °C, a fase aquosa é separada e extractada com tolueno <63 ml). As fases de tolueno são combinadas e lavadas com solução aquosa saturada de cloreto de amónio (80 ml) e em seguida com água, e depois o combinado ê seco sobre óxido de alumínio, filtrado e evaporado para dar uma espuma amarela sólida (22-32 g).

resíduo é recebido em tolueno (31 ml) e a solução é aquecida até 65-68 °C. À solução quente é adicionada gota a gota durante 90 min 125 ml de n-hexano e a mistura é arrefecida até 20-25 °C durante 4 h, agitada durante 10 h à temperatura ambiente e finalmente arrefecida durante 3 h até 0-3 °C e agitada a esta temperatura durante 2 h. Os cristais resultantes são separadas por filtração, lavados com uma mistura tolueno / hexano 1:4 (42 ml) arrefecida em gelo e secos a 60 *C sob vácuo para dar o produto mencionado em título (19,2 g) na forma de cristais beqes de pureza 89,7 7. (por cromatograf ia líquida de alta pressão, HPLC) que podem ser utilizados no próximo passo sem purificação posterior.

Alternativamente, uma recristalização adicional produto mencionado em título na forma de cristais brancos, lóS-170 *C.

dá

p.f [q] = -162,4 *C (metanol, c = 0,37).

EXEMPLO 2 [Q-(Hidroxietil)(D)Serl^Ciclosporin

Passo a): Produto Cru produto cru do Exempla 1 (14,1 g; 87,9 V. de pureza: = 12,39 g, 9,4 mmol, de material puro) έ dissolvido em etanol absoluto (315 ml) e é aquecido até 30-35 °C sob uma atmosfera de azoto, é adicionado à solução, em 7 porçoes durante 6 h, boro-hidreto de lítio (total de 1,29 g de pureza 95 %: = 1,225 g, 56,3 mmol, 6 equivalentes, de material puro). Após cada adição, ocorre uma reacção ligeiramente exotérmica, com evolução de qás. A suspensão bege resultante é agitada durante 14 h a 30-35 °C, em seguida é arrefecida até 20-25 ^,;,C e tratada com 23 ml de uma solução aquosa de ácido acético a 20 7.. A solução amarelo pálido límpida (pH 5-6) é agitada durante 30 min. e em seguida é evaporada para dar aproximadamente 30 ml de um resíduo oleoso.

resíduo é repartido entre acetato de isopropilo (IPA) (130 ml) e água (80 ml) e a fase aquosa é re-extractada com (IPA) (40 ml). As camadas de IPA combinadas são lavadas com 25 ml de solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e em seguida com 30 ml de água e o solvente é evaporado para dar o produto mencionado em título, cru, na forma de uma espuma bege (13,44 g; 81,8 7. de pureza por HPLC).

Passo b): Purificação produto cru do passo a.) (36,2 g) é dissolvida em meti 1-isobuti1cetona (MIBK) saturada com água e é cromatografado em Kieselgel (0,04-0,063 mm (885 g), dimensões da coluna 460 x 70 mm de diâmetro, utilizando MIBK saturada de água como eluente.

Depois de uma separação de fracçSes iniciais de 2 litros, as fracções que contem o material de pureza >95 7, medida por HPLC são recolhidas dando aproximadamente 11,5 1 de solução, que é evaporada até à secura sob vácuo para dar 24,3 g do produto mencionada em título, amorfo, na forma de uma espuma bege; pureza

L por HPLC = 95,2 7..

□ produtD sólido é dissolvido em acetona (40 ml ) e a solução amarelo pálido é filtrada através de um funil de vidro sinterizado que é em seguida enxaguado com acetona (21 ml). À j solução combinada de acetona é adicionada água (61 ml) gota a gota durante 9Θ min, com o aparecimento de cristais. A suspensão fina é agitada durante 16 h à temperatura ambiente, em seguida é arrefecida até 0-3 ‘-C durante lhe agitada durante outras 4 h e depois é filtrada, lavada com uma mistura acetona / água 1:1 arrefecida em gelo e ds cristais humedecidos são secos a 60 *C sob vácuo parcial para dar o produto mencionada em título (20,76 g) na forma de cristais brancos da modificação B, de pureza por HPLC de 98 7., p.f. aprox. 130 °C (dec.).

Outras recristalizações a partir de acetona / água dão material de pureza ainda mais elevada.

) A partir do material amorfo obtido como se descreveu anteriormente, o cristal da modificação A é obtida por recristalízação a partir de polieti1eno-g1icol / água; e o cristal de modificação C obtém-se por recristalização a partir de etanol / água ou por tratamento de ultra—sons de uma suspensão da forma

J amorfa em etanol / água. Pontos de fusão: modificação A: 148° aprox.; modificação C: 120 °C aprox..

EXEMPLO 3

C0-(2—ftcetiloxietí1)(D)Ser3^-Ciclosporin produto do passo a) do Exemplo 2 (600 mg; 0,47 mmol) ê dissolvida em piridina (30 ml) e misturada com anidrido acético (30 ml). A mistura é mantida à temperatura ambiente durante 2,5 h, depois do que a piridina e o excesso de anidrido acético são evaporados sob pressão reduzida e o resíduo é cromatografado sobre sílica gel com éter / acetato de etilo como eluente para se produzir o produto mencionado em titulo (43Θ mg).

C«3_d ²⁰ = -175,8° (c = 0,25 em metanol).

As ciclosporinas que compreendem um residuo de fórmula de estrutura I como aqui foi definida anteriormente na posição 8 (de aqui em diante Ciclosporinas de Produto), em particular as ciclosporinas de fórmula de estrutura II como aqui foi definida anteriormente, possuem utilidade farmacêutica como pode ser demonstrado, por exemplo, nos seguintes métodos de teste:

1. Reacção Enxerto-versus-Hospedeiro (EvH) Localizada na

Ratazana

CFord et al . , TRANSPL. PROC. 10 258 (1970)3

Células de baço (1 x 10 ) de ratazanas Wistar/Furth (Wl· ) fêmeas de ó semanas de idade são injectadas subcutaneamente no dia 0 na pata traseira esquerda de ratazanas fêmeas (F344 :·: WF)Fj que pesam cerca de 100 g. Os animais são tratados durante 4 dias consecutivos e os nódulos de linfa poplítea são removidos e pesados no dia 7. A diferença de peso entre os dois nódulos de linfa é tomado como parâmetro para avaliação da reacção.

As Ciclosporinas de Froduto inibem a reacção GvH no método de teste anterior por meio de administração 4x em dosagens desde cerca de 10 até cerca de 30 mg/kg p.o. ou cerca de 1,5 até 5 mg/kg s.c..

2. Reaccão de Aloenxerto de Rim na Ratazana

Um rim de uma ratazana Fisher 344 fêmea é transplantado para o recipiente renal de uma ratazana WF receptora nefrectomizada unilateralmente (lado esquerdo) utilizando uma anastomose ) ponta a ponta. A anastomose. uretérica é também ponta a ponta. O tratamento começa no dia da transplantação e continua durante 14 dias. Uma nefrectomia contralateral é feita sete dias depois da transplantação, deixando o receptor confiar no desempenho do rim do doador. A sobrevivência do enxerto é tomada como parâmetro para um enxerto funcional.

As Ciclosporinas de Produto são eficazes na manutenção da sobrevivência do enxerto no método de teste anterior por meio de administração em dosagens desde cerca de 2 até cerca de 5 mg/kg p.o..

3. Encefalomielite Alérgica Induzida Experimentalmente (EAE) na

J Ratazana

CLevine et al.. AM. J. PATH. 47 61 (1965); McFarlin et al.. J. IMMUNOL. 113 712 (1974); Borel, TRANSPLANT & CLIN.

IMMUNOL. 13 3 (1981)1 )

Ratazanas Wistar machos são injectadas nas patas traseiras com uma mistura de espinal medula bovina e adjuvante de Freund completo. Os sintomas da doença (paralisia da cauda e de ambas as pernas traseiras) desenvolvem—se normalmente dentro de dias. 0 número de animais doentes assim como o tempo de estabelecimento da doença são registados.

Por meio de administração em dosagens desde cerca de 12,5 atê cerca de 25 mg/kg p.o. as Ciclosporinas de Produto inibem o estabelecimento da doença no modelo de teste anterior.

4. Artrite Adjuvante de Freund

EWinter «t Nuss, ARTHRITIS AND RHEUMATIM 9 394 (1966); Billingham & Davies, HANDBOOK OF EXPERIMENTAL PHARMACOL. (Vane & Ferreira Eds, Springer-Verlag, Berlin), 50/II 108-144 (1979)3

Ratazanas Wistar e OFA (machos ou fêmeas, de 150 g de peso corporal) são injectadas i.c. na base da cauda ou na pata traseira com 0,1 ml de óleo mineral que contém O,6 g de Mycobacterium smegmatis morto por calor, liofilizado. No modelo de artrite em desenvolvimento, o tratamento começa imediatamente a seguir à injecção do adjuvante (dias 1-18); no modelo de artrite estabelecida o tratamento começa no dia 14, quando a inflamação secundária está bem desenvolvida (dias 14-20). No fim da experiência, o inchaço das articulações é medido por meio de um micro-compasso de calibre.

As Ciclosporinas de Produto são eficazes na prevenção ou inibição da progressão da doença, quer no modelo de teste de desenvolvimento quer no modelo de teste de estabelecimento, por meio de administração em dosagens desde cerca de 3 até cerca de 20 mg/kg p.o..

As Ciclosporinas de Produto também mostram toxicidade favorável, e. g. perfis hepatotóxiccis e/ou nefrotóxicos quando comparadas com ciclosporinas conhecidas, por exemplo Ciclosporin, como pode ser demonstrado por determinação da sua influência em parâmetros relevantes, e. g. creatinina do sangue, razão de filtração glomerulsr, níveis de ureia, bilirrubina e ácido da bílis, a seguir à administração a longo prazo a ratazanas em razões de dosagem imuncssupressora eficazes. As Ciclosporinas de Produto são por conseguinte caracterizadas por uma razão terapêutica melhorada quando comparadas com ciclosporinas conhecidas.

As Ciclosporinas de Produto são por consequência úteis como substâncias farmacêuticas, e. g. como imunossupressores bem como agentes anti-inflamatórios.

As Ciclosporinas de Produto são úteis em particular para a prevenção da rejeição do transplante de tecida ou órgão, e. g. para o tratamento de receptores de transplantes de coração, pulmão, coração-pulmão combinados, fígado, rim, pâncreas, pele ou córnea. São também indicadas para a prevenção da doença exerto-versus-hospedeiro, tal como a que se segue a transplantes de medula óssea.,

As Ciclosporinas de Produto são também úteis para o tratamento da doença auto-imune e de condições inflamatórias, em particular de condições inflamatórias com uma etiologia que inclui uma componente auto-imune tal como artrite (por exemplo artrite reumatóide, artrite crónica progressiva e artrite defor— raante) e doenças reumáticas. As doenças auto—imunes específicas para as quais as Ciclosporinas de Produto podem ser empregues incluem desordens hematológicas auto-imunes (incluindo e. g. anemia hemolitica, anemia aplástica, anemia de glóbulo vermelho puro e trombocitopenia ideopática), lúpus eritematoso sistémico, policondrite,, esclerodoma, granulamatose de Wegener, dermatomiosite, hepatite activa crónica, miastenia gravis, psoríase, síndroma de Steven-Johnson, psilose ideopática, doença inflamatória autoimune do intestino (incluindo e. g. colite ulcerante e doença de Crohn), oftalmopatia endócrina, doença de Graves, sarcoidose, esclerose múltipla, cirrose biliar primária, diabetes juvenil (diabetes mellitus do tipo I), uveíte (anterior e poste/ rior), ceratoconjuntivite sicca e ceratoconjuntivite vernal, fibrose do pulmão intersticial, artrite psoriática e glomerulonefrite (com e sem síndroma nefróticc·, e. g. incluindo síndroma nefrótica ideopátíca ou nefropatia de alteração mínima).

) As Ciclospc-rinas de Produto são ainda indicadas para utilização no tratamento de outras condições ou doenças para as quais a terapia por ciclosporina, e. g. por Ciclosporin, é praticada ou proposta, por exemplo, para o tratamento da alopecia / promoção do crescimento do cabelo e para o tratamento da asma, e. g. por meio de administração por inalação. Elas estão também indicadas para a utilização como agentes antiparasíticos, em particular para α tratamento de infecção ou invasão parasítica, e. g. protozoária, fúngica ou vermicular, por exemplo no tratamento de filaríase, esquistosomíase, coccidiomicose ou infecção plasmódica, e. g. malária. Elas estão também ainda indicadas para utilização na inversão da resistência induzida de malignidades a outra quimioterapia, assim como para a intensificação da cura de } feridas.

Para as indicações anteriores, a dosagem apropriada de certo variará dependendo, por exemplo, da Ciclosporina de Produto empregue em particular, do sujeito a ser tratado, do modo de administração e da natureza e severidade da condição a ser tratada. Contudo, são obtidos resultados satisfatórios em animais com dosagens diárias desde cerca de 1 até cerca de 10 mg/kg/dia p.o.. Em mamíferos maiores, por exemplo humanos, uma dosagem diária indicada situa-se na gama desde cerca de 50 até cerca de

SCO mg de Ciclosporina de Produto administrada oralmente uma vez ou, mais adequadamente, em dosagens divididas duas ou quatro vezes / dia.

Na transplatação de órgãos em humanos, é indicada uma dose oral única inicial de 10-15 mg/kg de Ciclosporina de Produto

4-12 horas antes da cirurgia. A dose diária é mantida durante uma ou duas semanas após a operação, antes de ser gradualmente reduzida, de acordo com os níveis de sangue, até ser alcançada a dose de manutenção de cerca de 2-6 mg/kg/dia. Quando as Ciclosporinas de Produto são dadas conjuntamente com outros imunossupressores (e. g, com corticosteróides como parte de uma terapia de droga tripla ou quádrupla) podem ser utilizadas doses inferiores (e. g. 1 mg/kg/dia i.v.; ó mg/kg/dia inicialmente oral).

As Ciclosporinas de Produto podem ser administradas por qualquer via convencional, em particular entericamente, e. g. oralmente, por exemplo na forma de soluções para beber, comprimidos ou cápsulas, ou. parentericamente, por exemplo na forma de soluções ou suspensões injectáveis. Normalmente são preferidas formas de dosagem oral para administração sistémica, ainda que para algumas condições, por exemplo para a prevenção da rejeição de transplantes de fígado, seja desejável uma forma injectável intravenosamente. As Ciclosporinas de Produto também podem ser administradas tópicamente ou dermicamente, e. g. na forma de um creme ou gel dérmico ou preparação semelhante, ou, com o fim de se aplicar ao olho, na forma de uma preparação ocular de creme ou gel ou gotas para os olhos. As formas de dosagem unitárias adequadas para administração oral compreendem e. g. desde 25 até 200 mg de Ciclosporina de Produto por dosagem.

As formulações galénicas preferidas para as Ciclosporinas de Produto incluem as que se baseiam em microemulsões.

como se encontra descrito no Pedido de Patente Britânica NQ 2 222 770A, que incluem formas tópicas assim como orais; e também as formas orais e injectáveis obtidas a partir de soluções sólidas que compreendem um monoéster sacarídeo de ácido gordo, e. g. mortolaurato de sacarose, como se encontra descrito no

Pedido de Patente Britânica NQ 2 269 671AOs Exemplos de formulações particularmente preferidas adequadas para d enchimento de cápsulas de gelatina moles para administração oral incluem:

)

EXEMPLO fl

Formulação

Produto do Ex. 2 Glicofurol 75 Miglyol 812 Cremophor RH40 α-Tocoferol

50,O mg 180,0 mg

90,0 mg 180,0 mg 0,5 mg

EXEMPLO B

Formulação

Produto Jd Ex. 2	1 00,0	mg
Tetrag1icol	20,0	mg
Captex 800	20,0	mg
Nikkol HCO-40	860,0	mg
Buti1-hidroxi-tolueno	1,0	mg

(BHT)

J

EXEMPLO C

Formulação

Produto do Ex. 2	25,0	mg
Blicofurol 75	1 00,0	mg
Miglyol 812	35,0	mg
Cremophor RH40	90,0	mg
Butil-hidroxi-anisole	0,2	mg

(BHA)

EXEMPLO D

Formulação

Produto do Ex. 2	1 0,0	mg
Tetrag1icol	10,0	mg
Miritol	5,0	mg
Cremophor RH40	75,0	mg
α-Tocoferol	0,1	mg

Os componentes individuais destas formulações, assim como os métodos para a sua preparação, estão completamente descritos no Pedido de Patente Britânica NQ 2 222 770A, conteúdos esses que são aqui incorporados por referência.

Ds valores ED determinados nos Métodos de Teste 1 até 4 anteriormente descritos para a ciclosporina do Exemplo 2 são indicados a seguir:

MÉTODO TESTE	ED mg/kg	= Dosagem requerida ...
1	OC- (ED50)	... para reduzir a diferença média de peso entre pares de nódulos em 50 */. quando comparados com os controlos não tratados.
o	cr X , U	... para prolongar a sobrevivência para >100 dias em 10Θ 7. das ratazanas tratadas.
	nr	. .. para reduzir a sintomatologia da doença em 100 7. quando comparada com os controlos não tratados.
4	20	. . . para reduzir o inchaço para o registado nos controlos não tratados.

De acordo com α precedente, o presente invento também proporciona numa outra série de encorporaçSes:

A. Um método de efectuar a imunossupressão num sujeita em necessidade de tal tratamento, método esse que compreende a administração ao referido sujeito de uma quantidade eficaz de uma Ciclosporina de F'roduto.

B. Um método:

1) para a prevenção da rejeição do transplante de órgão, por exempla para o tratamento de receptores de transplantes de um órgão de qualquer dos tipos listados anteriormente; ou

2) para a prevenção da doença enxerto—versus-hospe— deiro, por exemplo em receptores de tranplantes de medula óssea; ou

3) para ο tratamento de doença auto-imune ou para o tratamento de condições inflamatórias, por exemplo para o tratamento de qualquer das doenças ou condições listadas anteriormente; ou

4) para o tratamento de alopecia ou para a promoção do crescimento dD cabelo; ou

5> para o tratamento de infecção ou invasão parasítica, por exemplo para o tratamento de infecçãD du invasão protozoária, fúngica ou vermicular, e. g, para o tratamento de coccidiomicose ou malária; ou

ò) para a inversão da resistência induzida de malignidades è quimioterapia, para a intensificação da cura de feridas ou para o tratamento da asma;

num sujeito com necessidade de tal tratamento, método esse que compreende a administração ao referido sujeito de uma quantidade eficaz de uma Ciclosporina de Produto .

C. Uma Ciclosporina de Produto para utilização como produto farmacêutico, e. g. para utilização como imunossupressor c<u para utilização no tratamento de qualquer doença ou condição, como anteriormente se estabelece em B.

D. Uma composição farmacêutica que compreende uma Ciclos— porine de Produto em associação com um diluente ou agente de suporte farmaceuticamente aceitável.

Claims

lê. - Processo para a produção de uma ciclosporina de em que o resíduo na posição 8 é um resíduo de fórmula de estrutura I

CH_o-0-CH₂-CH_q-dr

-nh-Íh-co(D) em que R representa hidrogénio ou um resíduo de acilo fisiologicamente hidrolisável e aceitável; caracterizado por compreender:

i) para a produção de uma ciclosporina em que o residuo na posição 8 é um resíduo de fórmula de estrutura I na qual R representa hidrogénio, a redução de uma ciclosporina correspondente em que o resíduo na posição 8 é um resíduo de fórmula de estrutura III

O-L-O-CI-U-CO-O-R'

I ^x (III)

-NH-CH-CO(D>

em que R' representa alqu.ilo C. ou

I j* ‘ ii) para a produção de uma ciclosporina em que o resíduo na posição 8 é um resíduo de fórmula de estrutura I na qual R representa acilo, a esterificação da ciclosporina correspondente em que R representa hidrogénio.

I <
2â. - Processo de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por se preparar uma ciclosporina de fórmula de estrutura II

X—Y-Sar—MeLeu-Va 1 -MeLeu-A1 a-Q-MeLeu-MeLeu-MeVa 1

12 3 4 5 6 78 9 IO 11 ( (II) na qual

X representa MeBmt ou di—hidro-MeBmt,

Y representa aAbu, Vai, Thr ou Nva e

Q representa um resíduo de fórmula de estrutura I definido do mesmo modo que na reivindicação 1.
3â. - Processo de acordD com a reivindicação 1 ou 2 caracterizado por se preparar uma ciclosporina em que R representa hidrogénio.
4é. - Processo de acordo com a reivindicação 1 caracte8 rizado por se preparar C0-(2-hidroxietil)(D)Serl -Ciclosporin.
5é. - Processo de acordo com a reivindicação 1 du 2 caracterizado por se preparar uma ciclosporina em que R representa acetilo.

óê. - Processo de acordo com a reivindicação 1 caracte8 rizado por se preparar C0-<2-acetiloxieti1)(D)Ser3 -Ciclosporin.
7â. - Processo para produção de uma ciclosporina em que o resíduo na posição 8 é um resíduo de fórmula de estrutura III ► t 9

- 27 CI-U-O-CH^-CO-O-R'

I ^Á (111)

-NH-CH-CO(D) onde R' representa alquilo C._7! caracterizado por se fazer reagir uma ciclosporina em que o resíduo na posição 8 é um resíduo de fórmula V.

í. ·

CH_o-0H (V)

-NH

-CH-COCD) com um composto de fórmula VI

Hal-CHp-CD-OR' na qual R'é como anteriormente definido e Hal é bromo ou iodo.
8ã. - Processo de acordo com a reivindicação 7 caracte5 rizado por se preparar C0-(isopropiloxicarbonilmetil)(D) Serl -Cic1osporin.
9ê. - Processo para a preparação de uma composição farmacêutica caracterizado por se misturar de 25 a 200 mg de uma ciclosporina preparada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 até 6 conjuntamente com um agente de suporte ou diluente farmaceuticamente aceitável.