SK411691A3

SK411691A3 - Cyclosporine derivatives

Info

Publication number: SK411691A3
Application number: SK4116-91A
Authority: SK
Inventors: Marcel K Eberle
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1989-07-24
Filing date: 1991-12-27
Publication date: 1995-07-11
Also published as: IL95154A0; KR910002902A; HU904224D0; PT94790A; IE902669A1; FI903706A0; HK1004268A1; NZ234613A; PT94790B; JPH0730113B2; EP0414632A3; GR3021667T3; ES2092500T3; FI94355B; AU631667B2; JPH03218396A; DK0414632T3; DE69028967T2; CA2021788A1; AU5972790A

Description

Vynález se týká nových derivátú cyklosporinu, jejich použití jako farmaceutik a farmaceutických kompozic, které je obsahuj!, jakož i zpúsobú jejich výroby.

Dosavadní_stay_techniky

Cyklosporiny predstavuj! tŕídu štrukturálne odlišných cyklických poly-N-methylovaných undekapeptidú, které obecné mají farmakologickou, pŕedevším imunosupresivní, protizánétlivou a/nebo antiparazitární aktivitu. První z cyklosporinň, který byl izolován, byl v pŕírodé se vyskytující metabolit hub Ciclosporin nebo Cyclosporine, rovnež známý jako cyklosporin A a komerčné , fl fl dostupný pod chráneným názvea SANDIMMUN nebo SANDIMiOíE . Ciclosporin je cyklosporin vzorce A:

-MeBmt- <XAbu-Sar-íáeLeu-Val-MeLeu-Ala-(D) Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 /V, ve kterém skupina MeBmt značí N-methyl-(4R')-4-but-2E-en-l-yl-4-methyl-(L)threonylovou skupinu obecného vzorce B

-CH-COCs)

- 2 ve kterém skupina -x-y- značí skupinu -CH=CH- /trans/.

Od doby púvodního objevu Ciclosporinu byla izolována a identifikována široká paleta v pŕírodé se vyskytujících cyklosporinú a mnoho^ dalších, v pŕírodé se nevyskytuj í cích cyklosporinú, bylo pripraveno totálné syntetickými nebo polosyntetickými cestami nebo aplikací modifikovaných kultivačních technik. Trída, kterou cyklosporiny tvorí, je tedy v současnosti rozsáhlá a zahrnuje napríklad v pŕírodé se vyskytující cyklosporiny £ až Z /viz Traber se sp., 1, Helv. Chim. Acta, 60, 1247 - 1255, 1977/; Traber se sp., 2, Helv. Chim. Acta, 6£, 1655 - 1667 /1982/; Hobel se sp., Európ. J. Applied Microbiology and Hiotechnology,

14, 273 - 240, 1982; a von Wartburg se sp., Progress in Allergy, 38, 28 - 45, 1986/, jakož i rúzné, v pŕírodé se nevyskytující deriváty cyklosporinú a umélé nebo syntetické cyklosporiny včetné dihydrocyklosporinú /ve kterých skupina -x-y- ve skupine MeBmt v obecném vzorci B vyše je nasycená a predstavuje skupinu -χ-y-, t j. skupinu -C^-C^-/; derivatizované cyklosporiny /ve kterých atóm kyslíku 3*-0- ve skupiné MeBmt je acylován nebo je zaveden další substituent na atómu alfa-uhlíku v sarkosylové skupiné v poloze 3/; cyklosporiny; ve kterých skupina MeBmt je prítomna v isomerní formé /ve kterých napríklad konfigurace mezi polohami 6* a 7^# ve skupiné MeBmt je cis spíše než trans/; a cyklosporiny, ve kterých jsou rúzné aminokyseliny inkorporovány ve špecifických polohách uvnitŕ sekvence peptidú, napríklad pri použití totálné syntetické metódy pro prípravu cyklosporinú, kterou vyvinul H. Wenger; viz napríklad Traber se sp. 1, Traber se sp. 2 a Kobel se sp., loc. cit.; USA pat. spisy č. 4,108,985, 4,220,641, 4,288,431, 4,554,351, 4,396,542 a 4,798,823; Evropské pat. spisy č. 34,567A, 56,782A, 300,784A a 3OO,785A; Mezinárodní pat. spis č. WO 86/02080 a britské pat. spisy č. 2,206,119 a 2,207,678; Wenger 1, Transp. Proc., 15 Suppl. 1:2230 /1983/; Wenger 2. , Angew. Chem. Int. Ed. 24 77 /1985/ a iYenger 3. , Progress in the Chemistry of Organic Natural Products, £0, 123 /1986/

- 3 Trída, kterou tvorí cyklosporiny, je tedy nyní opravdu velmi široká a obsahuje napríklad /Thr/^-, /Val/^-, /Nva/^-, dále /Nva/ -/Nva/²-Ciclosporin /rovnéž známé jako cyklosporiny C, D, ô a M/ /3-0-acetyl-MeBmt/l-Ciclosporin /rovnéž známy jako acetát cyklosporinu A/, /dihydro-MeBmt/ -/Val/ -Ciclosporin /rovnéž známy jako dihydro-cyklosporin L/, /(D)Ser/ -Ciclosporin, /MeIle/¹¹-Ciclosporin, /(D)MeVal/^^-Ciclosporin /rovnéž známy jako cyklosporin H/, /MeAla/^-Ciclosporin, /(D)Pro/^-Ciclosporin apod.

V souhlase s obvyklou nomenklatúrou jsou cyklosporiny definovaný všude v této pŕihlášce a v nárocích s odkážem na strukturu[ciclosporinu /tj. cyklosporinu A/. To je dáno pŕedevším označením takových skupín v molekule, které se liší od téch, které jsou prítomný v Ciclosporinu a potom aplikací termínu Ciclosporin** k charakterizaci ostatních skupín, které jsou totožné s témi, jež jsou prítomný v Ciclosporinu. Zároveň predpona **dihydro** je použitá k označení takových cyklosporinú, ve kterých je skupina MeBmt hydrogenována /dihydro-MeBmt/, tj. kde skupina -x-y- v obecném vzorci B značí skupinu -CHg-C^”· Tedy /Thr/²-Ciclosporin je derivát cyklosporinu, který má sekvenci uvedenou ve vzorci A, ve kterém ale skupina C<Abu v poloze 2 je nahražena skupinou Thr; a /dihydro-MeBmt/ -/Val/ -Ciclosporin je derivát cyklosporinu, který má sekvenci uvedenou ve vzorci A, ve kterém ale skupina MeBmt v poloze 1 je hydrogenována a skupina ďAbu v poloze 2 je nahražena skupinou Val.

Dodatkem k pŕedešlému jsou zbytky aminokyselín, které jsou označovaný zkrfetkami, jako je napríklad Ala, MeVal, Abu atd., v souhlase s obvyklou praxi, uvažovány s (L)-konfiguraci, pokud to není uvedeno jinak, jako napríklad v prípadé **(D)Ala**. Zkratky skupín, kterým pŕedchází Me , jako v prípadé * *MeLeu** , znamenají <X-N-methylovanou skupinu. Jednotlivé části molekuly cyklosporinu jsou číslovány, jak je to v praxi obvyklé, ve sméru hodinových ručiček, pŕičemž se začína se skupinou MeBmt nebo dihydro-MeBmt v poloze 1. Stejný sled číslování je použit všude v této pŕihlášce a v nárocích.

- 4 Ve shodš s tímto vynálezem bylo nyní nalezeno, že deriváty cyklosporínu, ve kterých skupina v poloze 8 je zbytek hydroxysubstituovaného (Ľ)-serinu, projevují mimoŕádné zajímavé farmaceutické vlastnosti.

Vynález se tedy tyká derivátu cyklosporínu, ve kterém skupina v poloze 8 je skupina obecného vzorce I (/3) ce₂-o-ch₂-ch₂-or

I /1/,

-NE-CE-CO/D/ ve kterém R značí atóm vodíku nebo acylovou skupinu.

S výhodou R značí atóm vodíku. Když R značí acylovou skupinu, rndže j i pŕedst&vovat fyziologicky hydrolýzovatelná a prijatelná acylová skupina, tzn. taková skupina, která je odštšpitelná za fyziologických podmínek za vzniku kyseliny /ROH/, která sama je fyziologicky tolerovatelná v dávkáeh, které mají být podávány. Vhodné acylové skupiny R zahrnuj í /C^ - ^alkyl/karbonylovou skupinu, napríklad acetylovou skupinu, a monocyklickou arylkarbonylovou skupinu, napríklad benzoylovou nebo salicyloylovou skupinu.

Výhodné deriváty cyklosporínu podie tohoto vynálezu jsou deriváty obecného vzorce II

-X-Y-Sar-MeLeu-Val-MeLeu-Ala-Q-Meleu-MeLeu-MeVal125 4 5 6 789 10 11 /11/, ve kterém X značí skupinu MeBmt nebo skupinu dihydro-MeBmt,

- 5 Y značí o<Äbu_t Val, Thr nebo Nva,

Q je skupina obecného vzorce I, jak je uvedeno vyše.

NejvýhodnéjŠí sloučeninou podie vynálezu je /0-(2-hydroxyQ ethyl)( L)Ser/ -Ciclosporin, tzn. cyklosporin obecného vzorce II, ve kterém X značí skupinu MeBmt, Y značí oáAbu a Q je skupina obecného vzorce I, ve kterém R značí atóm vodíku.

Tento vynález se rovnéž týká zpusobu výroby derivátú cyklosporinu podie vynálezu, napríklad výroby derivátú cyklosporinu obecného vzorce II, jehož podstata spočívá v tom, že se i/ pro prípravu derivátu cyklosporinu /napríklad obecného vzorce II/, ve kterém skupina v poloze 8 /Q v obecném vzorci II/ je skupina obecného vzorce I, jak je definována vyše a ve které R značí atóm vodíku, redukuje odpovídající derivát cyklosporinu, ve kterém skupina v poloze 8 je skupina obecného vzorce III ch₂-o-ch₂-co-o-r'

I /m/,

-NH-CH-CO/D/ ve kterém R* značí - ^alkylovou skupinu, napríklad derivát cyklosporinu obecného vzorce IV

-X-Y-Sar-MeLeu-Val-MeLeu-Ala-Q *—MeLeu-MeLeu-MeVal123 4 5 6 78 9 10 11 /IV/, ve kterém X a.Y značí totéž, co je uvedeno u obecného vzorce II a Q je skupina obecného vzorce III, jak je definována vyše; nebo že se

- 6 ii/ pro prípravu derivátu cyklosporinu, napríklad obecného vzorce II, ve kterém skupina v poloze 8 /Q v obecném vzorci II/ je skupina obecného vzorce I, jak je definovaná vyše, ve které

R značí acylovou skupinu, esterifikuje odpovídající derivát cyklosporinu, ve kterém R značí atóm vodíku.

Redukci podie preparativní varianty i/ zpúsobu podie vynálezu lze realizovat s použitím obvyklých metód pro redukci esterových skupín na hydroxymethylové skupiny, napríklad púsobením lithiumborohydridu v atmosfére netečného plynu, ve vhodném rozpouštédle nebo zreäovadle, pri teploté místnosti nebo pri teploté mírné zvýšené. Lithiumborohydrid múže být obvykle náhražen natriumborohydridem v prítomnosti halogenidu lithia.

Esterifikaci podie prepars,tivní varianty ii/ zpúsobu podie vynálezu lze provádšt analogicky podie obvyklých postupú, napríklad reakcí s halogenidy nebo anhydridy kyselín, napríklad s /C^_^alkyl/karbonylhalogenidy, v prítomnosti činidla poutajícího kyselinu.

Výchozí materiál pro preparativní variantu i/ zpúsobu podie vynálezu lze získávat podie následujícího reakčního schématu /pro stručnost je uvedená pouze skupina v poloze 8, která se méní/:

ch₂-oh

Hal-CH₂-CO-OR' ch ₂-o-ch ₂-c o-c-r

-NH-CH-CO/D/

-NH-CH-CO/D/ /V/ /VI/ /m/ kde R* je definováno vyše a s výhodou značí alkylovou skupinu se tremi atómy uhlíku, zejména isopropylovou skupinu a Hal značí atóm brómu nebo jódu. Reakce se účelné provádí stejným nebo obdobným obecným postupem, který je uveden v príkladu provedení 1 níže.

Deriváty cyklosporinu, ve kterých skupina v poloze 8 má obecný vzorec V /tj. (L)Ser/, napríklad /(D)Ser/⁸-Ciclosporin, jsou známé a jsou popsány včetné zpúsobu jejich výroby napríklad v Evropském pat. spise č. 56 782 A a britské pat. pŕihlášce č. 2 155 936 A.

Deriváty cyklosporinu podie vynálezu se mohou vyskytovat v tuhém stavu v amorfní podobé nebo v jedné nebo více kryštalických formách. Napríklad sloučenina z níže uvedeného príkladu 2 existuje v amorfní podobé nebo nejméné ve trech kryštalických formách, které lze rozlišit rentgenovou difrakcí a které se označují jako modifikace A, B a C. Z téchto forem je hydrát 3, který lze získat rekrystalizací ze smési acetónu s vodou, modifikaci nejstabilnéjší a proto se jí dává pŕednost.

Deriváty cyklosporinu, u kterých skupina v poloze 8 je skupina obecného vzorce III, jak je definovaná výše, jsou nové a jsou tedy součástí tohoto vynálezu.

Následující príklady provedení, ve kterých všechny teploty jsou udány ve stupních Celsia, vynález blíže ilustrujú.

Príklady-ΕΐθΣθ^ení„vynálezu

Príklad 1 /O-(isopropyloxykarbonylmethyl)(D)Ser/⁸-Ciclosporin

21,89 g /(D) Ser/^Q-Ciclosporinu /čistota 88,7 /«, materiál z chromatografické frakce fermentačního média, tj. 19,42 g,

15,93 mMol látky o čistoté 100 °/o/ se rozpustí ve 160 ml toluénu a pridá se 1,03 g /3,2 mídol/ tetra-N-butylamoniumbromidu.

K roztoku se pridá 14,41 g /79,7 mMol/ isopropylesteru kyseliny bromoctové v prúbéhu 5 min pri teploté 20 až 25 °C a smés se míchá po dobu 30 min pri teploté 20 až 25 °C, pŕičemž se pŕikapává 53,1 g 30%ního vodného roztoku hydroxidu sodného /tj. 15,93 g čistého hydroxidu. sodného, 398 mMol/.Po míchání po dobu další ch 30 min pri teplotš 20 až 25 °C se vodná fáze oddšlí a extrahuje 63 ml toluénu.Tolueňové fáze se spojí a promyjí 80 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a potom 48 ml vody, posléze vysuší nad oxidem hlinitým, zfiltrují a odparí za vzniku 22 až 32 g tuhé žluté pšny.

Odparek se vyjme do 31 ml toluénu a roztok se zahreje na teplotu 65 až 68 °C. K teplému roztoku se pŕikape v prúbšhu 90 min 125 ml n-hexanu a smšs se v prúbšhu 4 h ochladí na 20 až 25 °C, pak se míchá po dobu 10 h pri teplotš místnosti a nakonec ochladí v prúbšhu 3 h na teplotu 0 až 3 °C a míchá pri této teplotš 2 h. Vyloučené kryštály se odfiltrují, promyjí 42 ml ledovš studené smšsi toluénu s hexanem /v objemovém pomeru 1 :

4/ a vysuší ve vákuu pri teplotš 60 °C; získá se 19,2 g titulní sloučeniny v podobe béžových kryštálu o čistote 87,9 % /stanoveno vysokotlakou kapalinovou chromatografií, HPLC/, použitelných v následujícím stupni bez dalšího čistení.

Prípadná další rekrystalizace poskytne čistou titulní sloučeninu v podobe bílých krystalú, s teplotou tání 168 až 170 °C; /c</p° = -162,4 ⁰ /methanol, c = 0,37/.

?fíklad_2 /0-(2-hydroxyethyl) (D)Ser/®-Ciclosporin Stupeň _a/ p _sur oyý _pro dukt

14,1 g surového produktu z príkladu 1 /čistota 87,9 ý>, tj. 12,39 S,9,4 mMol čisté látky/ se rozpustí ve 315 ml absolutního ethanolu a zahreje na teplotu 30 až 35 °C v atmosfére dusíku. K roztoku.se pridá v prubéhu 6 h v 7 dávkach celkem 1,29 g borohydridu lithného /čistota 95 tj. 1,225 g, 56,3 mMol, 6 ekvivalentú čisté látky/. Po každém pŕidání probšhne slabé exotermní reakce s vývinem plynu. Vznikla béžová suspenze se michá po dobu 14 h pri teploté 50 až 55 °C, potom se ochladí na teplotu 20 až 25 °C a okyselí 25 ml 20%ního vodného roztoku kyseliny octové, čirý, svétle žlutý roztok s hodnotou pH 5 až 6, se michá po dobu 50 min a potom odparením poskytne približné 50 ml olejovitého odparku.

Odparek se rozdélí mezi 150 ml isopropylacetátu /IPA/ a 80 ml vody a vodná fáze se jesté jednou extrahuje 40 ml IPÄ. Spojené isopropylacetátové vrstvy se promyji 25 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, potom 50 ml vody a rozpouštédlo se odparí, čímž se získa 15,44 g surové titulní sloučeniny v podobé béžové pény /čistota 81,8 %,·Stanoveno pomoci HPLC/.

Stupeň _b,/j__ čišténi

56,2 g surového produktu ze stupné a/ se rozpustí v methyl isobutylketonu /MIBK/ nasyceném vodou a chromatografuje se na sloupci s obsahem 885 g kŕemeliny /velikost zrna 0,04 až 0,065 mm, velikost sloupce 460 x 70 mm/ s použitím methylisobutylketonu nasyceného vodou jako elučni ho činidla. Po odebrání pŕedního podílu o objemu 2 litry, se odebírají frakce obsahujúci látku o čistoté vyšší než 95 $ /pri stanovení pomoci HLPC/ a získá se približne 11,5 litru roztoku, který odparením ve vákuu k suchu poskytne 24,3 g amorfní titulní sloučeniny v podobé béžové peny; čistota stanovená pomoci HPLC je 95,2 %.

Tuhý produkt se rozpustí ve 40 ml acetónu a svétle žlutý roztok se filtruje filtrem s vložkou ze slinutého skla a potom promyje 21 ml acetónu. Ke spojeným acetonovým roztokúm se pŕikapává v prúbéhu 90 min 61 ml vody, pŕičemž se objeví kryštály. Jemná suspenze se michá po dobu 16 h pri teploté mistnosti, potom se v prúbéhu 1 h ochladí na teplotu 0 až 3 °C, michá se po dobu dalších 4 h, potom zfiltruje, promyje ledové studenou smésí acetónu s vodou /v objemovém poméru 1 : 1/ a vlhké kryštály se suší po dobu 14 b. pri teploté 60 °C za částečného vakua, čímž se získa 20,76 g čisté titulní sloučeniny v podobé bílých krystalô modifikace B, o čistoté, stanovené pomoci HPLC, 98 %, s teplotou tání približné 130 °C /za rozkladu/.

Ďalšími rekrystalizacemi ze smési acetónu s vodou lze získat materiál ješté vyšší čistoty.

Z amorfního materiálu, který byl pŕipraven vyše uvedeným postupem, se získa kryštalická modifikace A pŕekrystalováním ze smési polyethylenglykolu s vodou; kryštalická modifikace C se získá pŕekrystalováním ze smési ethanolu s vodou nebo pôsobením ultrazvuku na suspenzi amorfní modifikace ve smési ethanolu s vodou. Teploty tání: modifikace A približne 148 °C; modifikace C približné 120 °C.

Príklad 3 /0(2-acetyloxyethyl)(D)Ser/⁸-Ciclosporin

600 mg /0,47 mMol/ z príkladu 2, stupeň a/, se rozpustí ve 30 ml pyridinu a smíchá s 30 ml acetanhyďridu. Smés se nechá v klidu po dobu 2,5 h pri teploté místnosti, potom se pyridin a prebytek acetanhydridu odparí za sniženého tlaku a odparek se chromatografuje na kŕemeliné s použitím smesi etheru s ethylacetatem v objemovém poméru 4 : 1 jako elučního činidla a získá se 430 mg titulní sloučeniny. /(Χ/^θ = -175,8 ⁰ /c = 0,25 v methanolu/.

Cyklosporiny, které obsahují vyše definovanou skupinu obecného vzorce I v poloze 8 /dále označované jako **cyklosporiny podie vynálezu* */, zejména cyklosporiny vyše uvedeného obecného vzorce I, jsou farmaceutický použitelné, jak lze napríklad prokázat následujícími testovacími metódami:

1. Lokalizovaná reakce príjemce na štép /Ford se sp., TRANSPL. PROC. 10 /1970/ 258/

Bunky ze sleziny /1 X 10^/ 6 mésícú starých krysích samíc kmene Wistar/Furth/ /WF/ se injikují nultého dne suhkutánné do levé zadní tlapky krysích samic kmene /F344 x WF/F·^ o hmotnosti okolo 100 g. Na zvíŕata se takto púsobí čtyri po sobé následující dny a sedmého dne se odstráni podkolenní lymfatické uzliny a zváži. Rozdíl hmotností mezi obéma lymfatickými uzlinami slouží jako parametr pro vyhodnocovaní reakce.

Cyklosporiny podie vynálezu inhibují reakci príjemce na štep pri vyše uvedené testovací metodš po čtyŕnásobné aplikaci v dávkách asi od 10 až asi do 30 mg/kg perorálné nebo asi od 1,5 až asi do 5 mg/kg subkutánne.

2. Reakce ledvin na cizorodý štšp u krysy

Jedna ledvina z krysí samice kmene Fisher 344 se transplantuje na renální cévu jednostranne /na levé strane/ nefrektomované krysy kmene ?<F jako príjemce, a to s použitím anastomózy provedené metodou end-to-end. Anastomóza uretry je rovnež provedena metodou end-to-end. S podáváním léčiva se začne v den transplantace a pokračuje se po dobu 14 dní. Sedm dní po transplantaci se provede kontralaterální nefrektomie a príjemce je odkázán na činnost dárcovy ledviny. Prežití štépu slouží jako parametr pro funkční štep.

Cyklosporiny podie vynálezu jsou účinné pri udržování preži vání štépu pri výše uvedené testovací metodé, když se aplikují v denních dávkách asi od 2 až asi do 5 mg/kg denné perorálné.

3. Experimentálne vyvolaná alergická encefalomyelitida /EAE/ u krýs /Levine se sp., AM. J. PATH. 47 /1965/ 61; McFarlin se sp. ,

J. IMMUNOL. 113 /1974/ 712; Borel, TRANSPLANT AND CLIN.

IMMUNOL. 13 /1981/ 3/

Krysím samcúm kmene Wistar se injikuje do zadních tlapek smšs hovezí míchy a kompletního Freundova adjuvans. Symptóm,’ onemocnéní /paralýza ocasu a obou zadních tlapek/ se obvykle vývine v prubéhu 16 dnú. Počet onemocnélých zvíŕat a rovnéž doba nástupu onemocnéní se zaznamenávaj!.

Pri podávání v denních dávkách asi od 12,5 až asi do 25 mg/ kg perorálné inhibují cyklosporiny podie vynálezu pri výše popsaném modelovém testu nástup onemocnéní.

4. Artritída vyvolaná Fre.undovým adjuvans /Winter a Nuss, ARTHRITIS AND RH2UMATISM 2 /1966/ 394;

Billingham a Davies, HANDBOOK 0? SXPERIMENTAL PHARMACOL.

/Vane and Ferreira Eds, Springer-Verlag, Berlín/ /1979/108 - 144/

Krysám kmene OFA a Wistar /samci nebo samice, telesná hmotno.st 150 g/ se injikuje intrakutánné u korene ocasu nebo dozadní tlapky 0,1 ml minerálního oleje, který obsahuje 0,6 mg lyofilizovaných, teplem usmrcených bunék Mycobacterium smegmatis. Pri vývoji modelové artritídy se léčení zaháji okamžité po injekci adjuvans /dny 1 až 18/; u rozvinuté modelové artritídy se léčení zaháji 14. den, kdy je sekundárni zánét dobre vyvinut /dny 14 až 20/. Na závér pokusu se méŕí otok kloubú pomoci posuvného mikromšritka.

Cyklosporiny podie vynálezu jsou účinné pri prevenci nebo inhibici postupu onemocnéní jak pri vyvíjejícím se tak i pri vyvinutém zkušebním modelu po aplikaci denních dávek asi od 3 až asi do 20 mg/kg perorálné.

- 13 Cyklosporiny podie vynálezu vykazují rovnéž pŕíznivou toxicitu, napríklad hepatotoxicitu a/nebo nefrotoxicitu, jak vyplývá ze srovnání se známymi cyklosporiny, napríklad s Ciclosporinem, jak lze prokázat pri stanovení jejich. pôsobení na srovnatelné parametry, napríklad na krevní kreatinin, rychlost glomerulární filtrace, na hladiny močoviny, bilirubinu a žlučových kyselin, po dlouhodobé aplikaci krysám v takových dávkách, které jsou imunosupresivné účinné. Cyklosporiny podie vynálezu jsou tedy pri srovnání se známymi cyklosporiny charaktexiz;ovány lepším terapeutickým indexem.

Cyklosporiny podie vynálezu jsou tedy použitelné jako farmaceutika, napríklad nejen jako imunosupresivné, nýbrž i jako protizánétlive účinné látky.

Cyklosporiny podie vynálezu jsou použitelné zejména pri prevenci odmítnutí transplantovaného orgánu nebo tkáné, napríklad pri premedikaci príjemcô transplantáte srdce, plic, kombinace srdce-plíce, jater, ledvin, pankreatu, káže nebo rohovky. Jsou rovnéž indikovány pri preveňci onemocnení v dôsledku odmítnutí štépu príjemcem, jaka napríklad následují po transplantaci kostní drene.

Cyklosporiny podie vynálezu jsou rovnéž použitelné pri léčení autoimunních onemocnéní a zánétlivých stavu, pŕedevším zánétlivých stavô s takovou etiologií, která zahrnuje autoimunní komponentu, jako je zánét kloubô /napríklad reumatoidní artritída, arthritis chronica progrediens a arthritis deformans/ a reumatická onemocnení. Špecifická autoimunní onemocnení, pri kterých mohou být použitý cyklosporiny podie vynálezu, zahrnují autoimunní hematologické poruchy /včetné napríklad hemolytické anemie, aplastické anemie, čisté anemie červených krvinek a idiopatické trombocytopenie/, systémový lupus erthematosus, polychondritis, sklerodoma, Wegenerovu granulomatosis, dermatomyositis, chronickou aktivní hepatitídu, myasthenia gravis,

- 14 psoriasis, Steven-Johnsonúv syndróm, idiopatickou spme, autoimunní zánétlivá onemocnení vnitŕních. oŕgánú /napríklad včetné ulcerativní kolitidy a Crohnovy choroby/, endokrinní oftalmopatie, Gravesovu chorobu., sarkoidosu, sklerosu multiplex, primárni biliární cirhózu,· juvenilní diabetes /diabetes mellitus typu 1/, uveitis /anterior a posterior/, keratoconjunctivitis sicca a vemální keratoconjuctivitis, intersticiální plieni fibrózu, psoriatickou artritídu a glomemlonefritidu /s nefrotickým syndronem i bez neho, napríklad včetné idiopatického nefrotického syndrómu nebo nefropatie s minimálními zmenami/.

Cyklosporiny podie vynálezu jsou dále indikovaný pro použití pri léčení dalšich nemocí a stavu, u kterých cyklosporin, napríklad Ciclosporin, je terapeuticky používán nebo doporučován, napríklad k léčení alopecie nebo k podpore rústu vlasú a k léčení astmatu, napríklad pri aplikaci inhalací. Cyklosporiny jsou rovnéž indikovaný jako antiparazitámí látky, pŕedevším pri léčení parazitárních infekcí a invazí, napríklad protozálních, houbových nebo vermikulámích, jako jsou napríklad filarióza, schistosomiáza, kokcidiomykóza nebo plasmodiální infekce, jako je napríklad malárie. Dále jsou ješté indikovaný pro použití pri zvratu indukované rezistence malignit na j inou terapii a konečné k urýchlení hojení ran.

Pri výše uvedených indikacích se bude vhodné dávkování samozrejmé ménit, napríklad v závislosti na konkrétním použitém cyklosporinu podie vynálezu, na subjektu, který má být léčen, na zpúsobu podávání a na povaze a vážnosti stavu, který má být léčen. Obecné tedy uspokojující výsledky u zvíŕat mohou být dosaženy pri denních dávkách asi od 1 až asi do 10 mg/kg perorálné. U vétších savcú, napríklad u človéka, je indikovaná denní dávka v rozmezí asi od 50 až asi do 800 mg cyklosporinu podie vynálezu, podávaná buú jednorázové perorálné, popŕípadé účelné ji, v delených dávkách dvakrát až čtyŕikrát denné.

Pri transplantacích oŕgánú u človéka je indikována jedna

- 15 perorální dávka asi 10 až 15 mg/kg cyklosporinu podie vynálezu 4 až 12 h pred chirurgickým zákrokem. Tato denní dávka se podáva po dobu jednoho až dvou týdnú po operaci, pred tím, než se postupné sníží podie hladín v krvi a dosáhne se udržovací dávky asi 2 až 6 mg/kg denné. Když se cyklosporiny podie vynálezu podávaj! vedie jiných imunosupresivních látek /napríklad kortikosteroidú jako součásti terapie se tremi až čtyŕmi léčivy/ je vhodné podávat nižší dávky /napríklad na začátku denné 1 mg/kg intravenózne, 6 mg/kg; perorálné/.

Cyklosporiny podie vynálezu lze podávat jakoukoliv obvyklou cestou, pŕedevším vnitŕné, zejména perorálné, napfíklad v podobé roztokú k pití, tablet nebo tobolek, nebo parenterálné, napríklad, v podobé injikovateIných roztoku nebo suspenzi. Pro systémovou aplikaci se normálné dává prednost perorálním aplikačním formám, ačkoliv za určitých podmínek, napríklad pri prevenci odmítnutí jatemích transplantáte, je žádoucí intravenózne aplikovatelná forma. Cykloseriny podie vynálezu mohou být rovnéž aplikovány topičky nebo dermálné, napfíklad v podobe der málních kréme nebo geie nebo podobných prípravke, nebo v pŕípadech potreby aplikace do oka, v podobé očního krému, gélu nebo preparátu očních kapek. Vhodné formy jednotkových dávek pro perorální aplikaci obsahují napríklad 25 až 250 mg cyklosporinu podie vynálezu v jedné dávce.

Výhodné galenické prípravky s cyklosporiny podie vynálezu jsou ty, které jsou tvorený mikroemulzemi, jak je popsáno v britské pat. pŕihlášce č. 2 222 770A, která se tyká jak topických tak i perorálních forem; rovnéž perorální a injekční formy, které jsou popsány v britské pat. pŕihlášce č. 2 209 671A a které lze získat z tuhých roztoke, obsahujících monoester mastné kyseliny se sacharidem, napríklad monolaurát sacharózy, jsou vhodné.

Príkladyobzvlášté výhodných kompozic, použitelých pro plnení mékkých želatínových tobolek pro perorální aplikaci;

Príklad _kgmpgzice_k

Produkt z príkladu 2 Glycofurol 75 Miglyol 812 Cremophor BH40 alfa-Tokoŕerol	50,0 mg 180,0 mg 90,0 mg 180,0 mg 0,5 mg
Príklad kompozice B
Produkt z príkladu 2	100,0 mg
Tetraglykol	20,0 mg
Captex 800	20,0 mg
Nikkol HC0-40	860,0 mg
Butylhydroxytoluén /BHT/	1,0 mg
Príklad kompozice C
Produkt z príkladu 2	25,0 mg
Glycofurol 75	100,0 mg
Miglyol 812	35,0 mg
Cremophor BH 40	90,0 mg
Butylhydroxyanisol /ΒΗΔ/	0,2 mg
Príklad kompozice D
Produkt z príkladu 2	10,0 mg
Tetraglykol	10,0 mg
Myritol	5,0 mg
Cremophor BH 40	75,0 mg
alfa-Tokoferol	0,1 mg

Jednotlivé složky téchto kompozic, jakož i metódy jej ich prípravy, jsou podrobné popsány v britské pat. pŕihlásce č.

222 llOk, na jejíŽ obsah se odkazuje.

Hodnoty účinných dávek /ED/, stanovené výše popsanými zku šebními metódami 1 až 4 pro cyklosporin z príkladu provedení 2 jsou tyto:

Zkušební metóda	ED mg/kg	Dávka potrebná
1	25 /ED5O/	ke snížení prúmšrného rozdílu mezi dvojicemi uzlin o 50 % pri srovnání s neléčenými kontrolami
2	2,5	k prodloužení prežití o více než 100 dní u 100 jo léčených krýs
' 3	25	ke zmárnení symptómu choroby o 100 ^a/o pri srovnání s neléčenými kontrolami
4	20	ke zmenšení otoku na velikost zaznamenanou u neléčených kontrol

V souhlase s pŕedchozím zahrnuje tento vynález rovnež dal ší radu znaku:

A. metódu k vyvolávání imunosuprese u subjektu v pŕípadš potreby takového zásahu, která spočívá v tom, že se uvedenému subjektu podává účinné množství cyklosporínu podie vynálezu;

B. metódu

1/ k prevenci odmítnutí transplantovaného orgánu, napríklad, k premedikaci pŕíjemcú orgánových transplantáte, zejména u nekterého výše jmenovaného typu; nebo

2/ k prevenci onemocnéní typu štšp versus príjemce, napríklad u transplantací kostní dŕenš;

3/ k léčení autoimunního onemocnéní nebo k léčení zánétlivých stavô, napríklad, pri léčení nékterých. chorob nebo stavú j menovaných, výše; nebo

4/ k léčení alopecie nebo k povzbuzení rustu vlasu; nebo

5/ k léčení parazitárních infekcí nebo invazí, napríklad, k léčení protozoálních, houbových nebo vermikulárních infekcí nebo invazí, napríklad k léčení kokcidiózy nebo malárie; nebo

6/ k reverzi snížené odolnosti novotvaru k chemoterapii, ke zlepšenému hojení ran nebo k léčení astmatu, u subjektu, který takovéto léčení potrebuje, pŕičemž tato metóda zahrnuje podávaní účinného množství cyklosporinu podie vynálezu uvedenému subjektu.

C. Cyklosporin podie vynálezu k upotrebení jako léčivo, napríklad k použití jako imunosupresivní látka nebo k použití pri léčení nékterého onemocnéní nebo stavu, jak je uvedeno v odstav ci B vyše.

D. Farmaceutická kompozice obsahujúci cyklosporin podie vynálezu v kombinaci s farmaceutickým zŕeúovadlem nebo nosičem, fyziologicky pŕijatelným.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Derivát cyklosporinu, ve kterém skupina v poloze 8 je skupina obecného vzorce I

CH₂-0-CH₂-CH₂-0R

I /1/,

-NH-CH-CO/D/ ve kterém R značí atóm vodíku nebo fyziologicky hydrolýzovatelnou a pŕijatelnou acylovou skupinu.
2. Derivát cyklosporinu podie nároku 1 obecného vzorce II

-X-Y-Sar-MeLeu-Val-MeLeu-Ala-Q-ifieLeu-MeLeu-MeVal123 4 5 6 78910 11 /11/, ve kterém značí:

X skupinu MeEtat nebo dihydro-MeBmt,

Y cXÄBu, Val, Thr nebo Nva a

Q skupinu obecného vzorce I definovanou v nároku 1.
3. Derivát cyklosporinu podie nároku 1 nebo 2, ve kterém R značí atóm vodíku.
4. /0- (2-hydroxyethyl) (d) Ser/⁸-Ciclosporin.
5. Derivát cyklosporinu podie nároku 1 nebo 2, ve kterém R značí acetylovou skupinu.
6. /0-(2-acetyloxyethyl)( d) Ser/⁸-Ciclosporin.
7. Zpúsob výroby derivátu cyklosporinu podie nároku 1, vyzná čující se t í m , že se i/ pro prípravu, derivátu cyklosporinú, ve kterém skupinu v poloze 8 tvorí skupina obecného vzorce I, ve které R značí atóm vodíku, redukuje odpovídající derivát cyklosporinú, ve kterém skupinu v poloze 8 tvorí skupina obecného vzorce III ch₂-o-ch₂-co-o-r'

I /m/,

-NH-CH-CO/0/ ve které R* značí alkylovou skupinu s 1 až 3 atómy uhlíku, nebo se ii/ pro prípravu derivátu cyklosporinú, ve kterém skupinu v poloze 8 tvorí skupina obecného vzorce I, ve kterém R značí acylovou skupinu, esterifikuje odpovídající derivát cyklosporinú, ve kterém R značí atóm vodíku.
8. Derivát cyklosporinú, ve kterém skupinu v poloze 8 tvorí skupina obecného vzorce III

CH_o-0-CH_o-C0-0-R'

I ^{2 2} /111/,

-NH-CH-CO/B/ ve kterém R* značí alkylovou skupinu s 1 až 3 atómy uhlíku.
9. /0- (isopropyloxykarbonylmethyl)(D)Ser/⁸-Ciclosporin.
10. Použití derivátu cyklosporinú podie nekterého z nároku 1 až 6 jako farraaceutika.
11. Farmaceutická kompozice obsahující derivát cyklosporinú podie nékteráho z nárokú 1 až 6, v kombinaci s farmaceutický pŕijatelným zŕedovadlem nebo nosičem.