CZ411691A3

CZ411691A3 - Deriváty cyklosporinu

Info

Publication number: CZ411691A3
Application number: CS914116A
Authority: CZ
Inventors: Marcel Karl Eberle
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 1989-07-24
Filing date: 1991-12-27
Publication date: 1998-06-17
Also published as: ES2092500T3; HU206127B; FI94355B; NZ234613A; ATE144536T1; HUT54714A; GB8916901D0; PT94790A; AU631667B2; DE69028967T2; CA2021788A1; SA91110205B1; HK1004268A1; HU904224D0; DK0414632T3; EP0414632A3; PT94790B; IE902669A1; GR3021667T3; CA2021788C

Description

Oblast techniky

-----------i , , .

—1 ' z ‘

Vynález sé týká nových derivátů cyklosporinu, jeJTOl pou-’ ^ži-ti^.iako^farmac.eut.ik^a^jEaraiaQ.euti.ck.^ch^kpjap.ozi.c .. které je obsahají, jakož'i způsobů jejich výroby.

Dosavadní _stav_tec.hniky

Cyklosporiny představují třídu strukturálně odlišných cyklických poly-N-methylovaných undekapeptidů, které obecně mají farmakologickOu, především imunosupresivní, protizánětlivou a/nebo antiparazitární aktivitu. První z cyklosporinů, který byl izolován, byl v přírodě se vyskytující metabolit hub Ciclosporin

Á· nebo Cyclosporine, rovněž .známý jako eyklosporin A a komerčně dostupný ,pod chráněným názvem SANLIi&íUN^ nebo SANDIMMUNS^S. Ciclosporin je eyklosporin vzorce A:

-SieBmt-c(Abu-Sar^áeLeu-Val-iíeIeu-Ala-(D)Ala-íAeLeu-MeLeu-iíeVal1 2 3 4 5 ' 6 7 8 9 10 11 /V, ve kterém-skupina MeBmt značí N-methyl-(4R)-4-but-2S-en-l-yl-4‘ -methyl-(í)threonylovou’skupinu obecného vzorce B t

CH, • I ³

X

/B/,

- 2 ve kterém skupina -x-y- značí skupinu -CH=ČH- /trans/.

- Oá doby původního objevu Ciclosporinubyla izolována a identifikována široká,paleta v přírodě se vyskytujících cyklosporinů a mnoho dalších,“ v přírodě se nevyskytujících cyklosporinú, bylo připraveno totálně syntetickými nebo polosyntetickými ces...... r-tami nebo -aplikací’modifikovaných· kultivačních 'technikT*Třídá/ ' kterou cyklosporiny tvoří, je tedy v současnosti rozsáhlá a za hmuje například v přírodě se vyskytující-* cyklosporiny & až 2 /viz Traber se sp., 1, Helv. Chim. Acta,.60, 1247 - 1255, 1977/;

Traber se sp., 2, Helv. Chim.. Acta, 6^, 1655 - 1667 /1932/; Eo___bel se sp. , Europ. J. Applied Microb iology and Biotechnology;______

14, 273 - 240,' 1982; a von Wartburg se Sp., Progrees ín.Allergy, .

£8, ,28 - 45, 1986/, jakož i různé, v přírodě; sé nevyskytující deriváty, cyklosporinú a umělé nebo syntetické cyklosporiny včet- > t 3r. .η· - j ně dihydrocyklosporinů /ve kterých skupina -x-y- ve skupině MeBmt v obecném vzorci B výše je nasycená a představuje'skupinu -χ-y-, tj. skupinu -GH-g-CHg-/; derivátizováné cyklosporiny/ve kterých atom kyslíku 3^,-0- ve skupině MeSmt je acylován nebo je zaveden další substituent na atomu alfa-uhlíku v sarkosylové skupině v poloze 3/;. cyklosporiny, ve kterých skupina MeBmt .je ,_fpřítomna v isomerní formě /ve kterých například konfigurace mezi ‘ polohami 6' a 7' ve skupině MeBmtje cis spíše než trans/; a cy'1 , klosporiny,,ve kterých jsou .různé aminokyseliny inkorporovány ve specifických polohách uvnitř sekvence peptidů, například při použití totálně syntetické metody pro přípravu, cyklosporinú, kterou vyvinul H. Wenger; viz například Traber se sp. 1, Traber se sp. 2 a Kobel se sp., loc. cit.; USA pat. spisy č, 4,108,985,

4,220,641, 4,288,431, 4,554,351, 4,396,542 a 4,798,823; Evropské pat,-spisy č. 34,567A, 56,782A, 300,784A a 3OO,785A; Mezinárodní pat, spis č. WQ 86/02080 a britské pat. spisy č. 2,206,119 a 2,207,678; Wenger i, Transp. Proč., 15 Suppl. 1:2230 /1983/;

Wenger 2., Angew. Chem, Int. Ed. 2$ 77 /1985/ a ííenger 3., Progrese in the Chemistry of Organic Natural Products, 123 /1986/.

- 3 #*

Třída, kterou, tvoří cyklosporiny, je tedy nyní opravdu velmi široká a obsahuje například /Thr/^-, /Val//Nva/^-, dále /Nva/2-/Nva/5-Ciclosporin /rovněž známé jako cyklosporiny C, D,

G a M/, /S-O-acetyl-Mefímt/^-Ciclosporin /rovněž známý jako acetát cyklosporinu á/, /dihydro-ííeBmt/^-/Val/^-Ciclosporin/rovněž

Q známý jako dihydro-cyklosporin D/. /(D)Ser/ -Ciclosporin, *'* ---------.....— --— ----⁷ 3. ------------A η¹ ........... · ή; ... .. ...............

/Melle/ -Ciclosporin, /(D]MeVal/ -Ciclosporin /rovněž známý jako cyklosporin H/, /MeAla/^-Ciclosporin, /(D)Pro/^-Ciolosporin apod.

V souhlase s obvyklou nomenklaturou jsou cyklosporiny definovány všude v této přihlášce a v nárocích s odkazem na strukturuje i cl o spor inu /tj. cyklosporinu ň/« To je dáno především označením takových skupin v molekule, které se liší od těch, které jsou přítomny v Ciclosporinu a potom aplikací termínu *'Ciclosporin* * k charakterizaci ostatních skupin, které jsou totožné s těmi, jež jsou přítomny v Ciclosporinu, Zároveň předpona dihydro je použita k označení takových cyklosporinů, ve kterých je skupina MeBmt hydrogenována /dihydro-Mefimt/, tj, kde skupina -x-y- v obecném vzorci B značí skupinu -CHg-CHg·· Tedy /Thr/²-Ciclosporin je derivát cyklosporinu, který má sekvenci uvedenou ve vzorci A, ve kterém ale skupina c<Abu v poloze 2 je.nahrazena skupinou Thr; a /dihydro-MeBmt/ -/Val/ -Ciclosporin je derivát cyklosporinu, který má sekvenci uvedenou ve vzorci A, ve kterém ale skupina MeBmt v poloze 1 je hydrogenována a skupina oíÁbu v poloze 2 je nahrazena skupinou Val.

Dodatkem k předešlému jsou zbytky aminokyselin, které jsou označovány zkratkami, jako je například Ala, MeVal, <xAbu atd., v souhlase s obvyklou praxí, uvažovány s fL) -konfigurací, pokud to není uvedeno jinak, jako například v případě ^z*(D)Ala'^r*. Zkratky skupin, kterým předchází Me , jako v případě **MeLeu , znamenají (X-N-methylo vanou skupinu. Jednotlivé části molekuly cyklosporinu jsou číslovány, jak je to v praxi obvyklé, ve směru hodinových ručiček, přičemž se začíná se skupinou MeBmt nebo dihydro-MeBmt v poloze 1. Stejný sled číslování je použit všude v této přihlášce a v nárocích.

- 4 Ve shodě; s_vtímto vynálezem bylo nyní nalezeno, že.deriváty * ' · ’ cyklosporinu, ve kterých skupina v poloze 8 je zbytek hydroxy'substituovaného (D)-šeřinu, projevují mimořádně zajímavé farmaceutické vlastnosti.

í . J .

b £°ástata_yynálezu '' _t

Ϊ *.

Vynález se tedy týká^derivátu cyklosporinu, ve·kterém skupina v poloze'8 je skupina obecného, vzorce 1’ “ ’ ’ ' í

f/3j ce₀-o-ch₀-ch₉-or

-,|² - · ^{2 2} j

-NH-CH-C0- i? · *

*' 7d/. ' ··· ·' : ·<’;

/1/, ve kterém R značí atom vodíku nebo acylovou skupinu·:

S výhodou R značí atom vodíku. Když R značí acylovou skupinu, může ji představovat fyziologicky hydrolýzovatelná á přijatelná acylová skupina, tzn. taková skupina, která je odětěpitel₍ ná za fyziologických .podmínek za vznikni kyseliny /ROH/,' která sama je fyziologicky tolerovatelná v dávkách, které mají být podávány. Vhodné acylové skupiny R zahrnují /C_n .alkyl/karbonylovou skupinu,, například acetylovou skupinu, á monocyklickou arylkarbonylovou skupinu, například benzoylovou nebo salicyloylovou skupinu.

Výhodné deriváty cyklosporinu podle tohoto vynálezu jsou deriváty obecného vzorce II. . .

-X-y-Sar-MeLeu-Val-MeLeu-Ala-Q-MeLeu-MeLeu-MeVal123 4 5 6 789 10 11 /Π/, ve kterém X značí skupinu MeBmt nebo skupinu dihydro-MeBmt,

- 5 Y značí cxÁbu, Val, Thr nebo Nva,

Q je skupina obecného vzorce I, jak je uvedeno výše.

Nej výhodnější sloučeninou podle vynálezu je /0- (2-hydroxyethyl)( L)Ser/®-Ciclosporin, tzn. cyklosporin obecného vzorce II, ve kterém X značí skupinu MeBmt, Y značí c^Abu a Q je skupina

II I Mil. i»m ιμίιιιιιιί 1.1.1. ΓΙ-llTlin.il Ι·υ ,i-ifti..nr>ir.TtÍ. T.„ 1.. -------,-- ,_ΓΤΤΓ ny-_Γΐι;ζ_τ. .φ.γ,, J _T obecného vzorce-I, ve kterém B. značí atom vodíku.

Tento vynález se rovněž týká způsobu výroby derivátů cyklosporinu podle.vynálezu, například výroby derivátů cyklosporinu obecného vzorce ..II, jehož podstata spočívá v tom, že se i/ pro přípravu derivátu cyklosporinu /například obecného vzorce II/j ve kterém skupina v poloze 8 /Q v obecném vzorci II/ je skupina obecného vzorce I, jak je definována výše a ve které Ř značí atom vodíku*, redukuje.odpovídající derivát cýklospori-y nu’ ve kterém skupina v poloze S je skupina .obecného, vzorce III ch₂-o-ch₂-cq-o-r' I /111/,

-NH-CH-CO.- : .

- ' /D/ ' ' ‘ ...... * - --- ' ;

ve kterém R* značí Cj - ^alkylovou skupinu, například derivát cyklosporinu- obecného vzorce IV

-X-Y-Sar-MeLeu-Val-MeLeu-Ala-Q eLeu-MeLeu-Me Val123 4 5 6 78 9 10 11 ve kterém Xa,Y značí totéž, co je uvedeno u obecného vzorce IX a Q' je skupina obecného vzorce III, jak je definována výše; nebo že se /IV/,

- 6 ii/ pro přípravu derivátu cykl o spor inu,, například obecného vzorce II, ve kterém skupina v poloze 8 /Q v obecném vzorci II/ je skupina obecného vzorce.I, jak je definována výše, ve které ¹ . H značí acylovou skupinu, esterifikuje odpovídající derivát cyklosporinu, ve kterém R značí atom vodíku. “ ' ^l\ . . Redukci, podle.-preparativní varianty- i/-způsobu -podle--vyná- - r,. ’ · · >

lezu lze realizovat s použitím obvyklých metod’pro redukci es#·. _s '• 'terových-skupin“ na hydroxymethylové skupiny, například působě- ~ .ním lithiumborohydridu v atmosféře netečného plynu,' ve vhodném rozpouštědle nebo zřeloyaďle, při teplotě místnosti nebo''při teplotě mí mě^J zvýšené. Lithiumbořohýdriď může'být obvykle náhra* ' žen •n&triumborohýdridem v přítomnosti halogenidu lithia.

•' Ssterifikaci podle prepárativní. varianty ii/.. způsobu podle vynálezu lze provádět analogicky podle, ob vykly ch“ postupů, na, I» příklad reakcí s ♦halogsaiďy nebo anhydridy kyselin/'například · s /C^_^alkyl/karboríylhalogenidy, v přítomnosti činidla poutajícího'kyselinu.

Výchozí materiál pro preparativní variantui/ způsobu podle vynálezu lze·;-získávat podle následujícího reakčního schématu /pro stručnost je uvedena pouze, skupina v poloze 8/ která se mění/: . ,.. ....... ’ ch₂-oh

-NH-CH-CO'/V

Hal-CH₂-CO-OR' ch₂-o-ch₂-cq-o~r'

-NH-CH-CO/D/ , /V/ /VI/ /111/ kde R* je definováno výše a s výhodou značí alkylovou skupinu se třemi atomy uhlíku, zejména isopropylovou skupinu a Hal značí atom bromu nebo jodu. Reakce se účelně provádí stejným nebo obdobným obecným postupem, který je uveden v příkladu provedení 1 níže.

——l·- 7 Deriváty cyklosporinu, ve kterých skupina v poloze 8 má obecný vzorec V /tj. (D)Ser/, například /(D)Ser/®-Ciclosporin, jsou známé a jsou popsány včetně způsobu jejich výroby například v Evropském pat. spise č. 56 782 A a britské pat. přihlášce č. 2 155 936 A,

Deriváty cyklosporinu podle vynálezu se mohou vyskytovat v tuhém stavu v amorfní podobě nebo v jedné nebo více krystalických formách. Například sloučenina z níže uvedeného příkla* du 2 existuje v amorfní podobě nebo nejméně ve třech krystalických formách, které lze rozlišit rentgenovou difrakcí a které se označují jako modifikace A, B a C. 2 těchto forem je hydrát 3, který lze získat rekrystalizací ze směsi acetonu s vodou, modifikací nej stabilnější a proto se jí dává přednost.

Deriváty cyklosporinu, u kterých skupina v poloze 8 je sku· pina obecného vzorce III, jak je definována výše, jsou nové a jsou tedy součástí tohoto.vynálezu.

Následující příklady provedení, ve kterých všechny teploty jsou udány ve stupních Celsia, vynález blíže ilustrují.

jarov e derá jrynálezu

Příklad_l /0-(i30propyloxykarbonylmethyl) (d) Ser/⁸-Ciclosporin

21,89 g /(D)Ser/⁸-Ciclosporinu /čistota 88,7 ¢, materiál z chromatografické frakce fermentačního media, tj. 19,42 g,

15,93 mMol látky o Čistotě 100 %/ se rozpustí ve 160 ml toluenu a přidá se 1,03 g /3,2 mííol/ tetra-fl-butylamoniumbromidu.

K roztoku se přidá 14,41 g /79,7 mMol/ isopropylesteru kyseliny bromoctové v průběhu 5 Blin při teplotě 20 až 25 °C a směs se míchá po dobu.30 min při teplotě 20 až 25 °C, přičemž se přikapává 53,1 g 3Ó?ťhího vodného roztoku hydroxidu sodného /tj. 15,93 g · - 8 čistého hydroxidu sodného, 598 mMol/.Po míchání po dobu. dalších 50 min při teplotě 20 až 25 °C se vodná fáze oddělí a extrahuje 63 ml toluenu.Toluenové fáze se spojí a promyjí.80 ml nasyceného vodného roztoku chloridu amonného a potom 43 ml vody, oosléze vysuší nad oxidem hlinitým, zfiltrují a odpaří za,vzniku 22 až. .32 g-tuhé žluté· pěný.^: - > . — - -------- ·>......

i.·.·

- \ Odparek se vyjme do 31 ml toluenu á roztok se zahřeje na teplotu 65 až 66 °C. K .teplému roztoku* se' přikape v průběhu 90 min 125 ml n-hexanu a směs, se v průběhu 4 h ochladí na 20 až / 25 °C, Pak se míchá po dobu 10 h 'při·'teplotě* místnosti, ··& nakonec ochladí v průběhu 3 h na teplotu-0 až 3 °C a míchá při této teplotě 2 h< Vyloučené _;krystaly’se odfiltrují, promyjí-42 ml ledově studené směsi toluenu š hexanem /v objemovém poměru 1 :

4/ a vysuší ve vakuu při teplotě 60-°Cj získá se 19,2 g titul- ní sloučeniny v. podobě béžových krystalů o čistotě 87,9 % /stanoveno vysokotlakou kapalinovou chromatografií,· HP1C/, použitelných v následujícím stupni bez dalšího čistění?* ^:~

Případná další rekrystalizace poskytne čistou titulní sloučeninu v podobě bílých„krystalů, s teplotou tání 168 až 170 °C; /ο(/ρθ s -162,4 ⁰ /methanol, c. = 0,37/.

, k

Příklad 2 /0-f2-hydroxyethyl) ÍD)Ser/^S-Giclosporin ·*» /<. λ ' ·. · . i- !

Stupe n ji/_surový _ produkt

14,1 g Surového produktu z příkladu 1 /čistota 87,9 tj. 12,39 g, 9,4 wMol čisté látky/ se rozpustí ve 315 ml absolutního ethanolu a zahřeje na teplotu 30 až 35 °G v atmosféře dusíku. É rpztoku.se přidá v’průběhu 6 h v 7.dávkách celkem 1,29 g borohydridu lithného /čistota 95 %,* tj. 1,225 g, 56,3 mMol, 6 ekvivalentů čisté látky/. Po· každém přidání proběhne

slabě exotermní reakce s vývinem plynu. Vzniklá béžová suspenze se míchá po dobu 14 h při teplotě 50 až 55 °C, potom se o'chladí na teplotu 20 až 25 °C a okyselí 25 ml 20%ního vodného roztoku kyseliny octové. Čirý, světle žlutý roztok s hodnotou „p2«5,»až^6.. šetrníchá do dobu 50 min a potom odpařením poskytne přibližně 30 ml olejovitého odparku.

Odparek se rozdělí mezi .130 ml isopropylacetátu /IPA/ a 80 ml vody a vodná fáze se ještě jednou extrahuje 40 ml IPA. Spojené isopropylacetátové vrstvy se promyjí 25 ml nasyceného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného, potom 30 ml vody a rozpouštědlo se odpaří, čímž se získá 13,44 g surové titulní sloučeniny v podobě béžové pěny /čistota 81,8 %, stanoveno pomocí HPLC/.

¹ «

Stune 2 -bí ·. _ É

36,2 g surového produktu ze stupně a/ se rozpustí v methylisobutylketonu /iíIBK/ nasyceném vodou a ehromatografuje se na sloupci s obsahem 885 g kremeliny /velikost zrna.0,04 až 0,063 mm, velikost sloupce 460 x 70 mm/ s použitím methyl i sobutylke-,. tonu nasyceného vodou jako elučního činidla. Po odebrání předního podílu o objemu 2 litry, se odebírají frakce obsahující látku o čistotě vyšší než 95 % /při stanovení pomocí H1PC/ a získá se přibližně 11,5 litru roztoku, který odpařením ve vakuu k suchu poskytne 24,3 £ amorfní titulní sloučeniny v podobě béžové pěny; čistota stanovená pomocí HPLC je 95,2

Tuhý produkt se rozpustí ve 40 ml acetonu a světle žlutý roztok se filtruje filtrem s vložkou ze slinutého skla a potom promyje 21 ml acetonu. Ke spojeným acetonovým roztokům se přikapává v průběhu 90 min 61 ml vody, přičemž se objeví krystaly. Jemná suspenze 3e míchá po dobu 16 h při teplotě místnosti, potom se v průběhu 1 h ochladí na teplotu 0 až 3 °C, míchá se po dobu dalších 4 h, potom zfiltruje, promyje ledově studenou směsí acetonu s vodou /v objemovém poměru 1 : 1/ a vlhké krystaly

-10 se suší po dobu 14 h při teplotě 60 °C za částečného* vakua, , čímž se získá 20,76 g’čisté titulní sloučeniny v podobě‘bílých . krystalů, modifikace B, o čistotě, stanovené pomocí HPLC, 98 s teplotou tání přibližně 130 °Č /za rozkladu/.

. * ' * š ¹ ‘ <.

, > . Γ. _ - . . -/-· ' ^--^Z » Liř.T^V · . · - · i F. - ’*.£ ' .....Dalšími rěkrystalizacemi ze směsi acetonu s vodou lze získat materiál ještě vyšší,Čistoty. ...... . .·’

Z amorfního materiálu, který byl připraven výše uvedeným postupem, jse získá krystalická modifikace.A překry stalo váním ze ^směsi^polyethylenglykolu s vodou; krystalická modifikace C se získá překrystalováním ze_τsměsi ethanolu s vodou nebo působením ultrazvuku'nasuspenzi amorfní modifikace ve směsi ethanolu s vodou, Teploty tání: modifikace A přibližně 148 °C; modifikace C přibližně 120 °C.

Příklady3 * · · , /0{2-acetyloxyethylHD)Ser/⁸-Ciclosporin '

600 mg /0,47 mM.ol/'z· příkladu 2, stupeň a/, se rozpustí ve/30 ml pyridinu a smíchá s 30 ml. acetanhyďridu. Směs se nechá v k-lidii po'dobu, 2,5 hpři teplotě místnosti,'potom.se pyridin a přebytek acetanhydridu odpaří za sníženého tlaku a odparek se chromatografuje ná křemelině s použitím směsi etheru s ethylacetátem v objemovém poměru 4 : 1 jako elučního činidla a získá se 430 mg titulní sloučeniny. /<χ/^° = -175,8 ⁰ /c » 0,25 v methanolu/,

Cyklosporiny, které obsahují výše definovanou skupinu obecného vzorce I v poloze 8 /dále označované, jako cyklosporiny podle vynálezu* V, zejména cyklosporiny výše uvedeného obecného vzorce I, jsou farmaceuticky použitelné, jak lze napři. · * klad prokázat následujícími testovacími metodami:

1, Lokalizovaná reakce příjemce na štěp /Ford se sp, , TRáNSPL. PROČ. 10 /1970/ 258/

Buňky ze sleziny /1 3C 10?/ 6 měsíců starých krysích samic .kmene~>/i3tar/.Purth/««/iY7/M.se_winjikují_>,nultého_wrdne^subkutánnŠ_do__ levé zadní tlapky krysích samic kmene /F344 x W/F^ o hmotnosti okolo 100 g. Na.zvířata se takto, působí čtyři po sobě následující dnya sedmého dne se odstraní podkolenní lymfatické uzliny a zváží. Rozdíl hmotností mezi oběma lymfatickými uzlinami slouží jako parametr pro vyhodnocování reakce.

Cyklošporiny podle vynálezu inhibují reakci příjemce na štěp při výše uvedené testovací metodě po čtyřnásobné aplikaci v dávkách asi od 10 až asi do 30· mg/kg perorálně nebo asi od 1,5 až asi dó.5 mg/kg subkutánně.

2. Reakce ledvin na cizorodý štěp u krysy i

Jedna ledvina z krysí samice kmene Fisher 344 se transplantuje na renální cévu jednostranně /ná levé straně/, nefrektomováné krysy kmene WF jako příjemce, a to s použitímanasto-. mózy provedené metodou end-to-end* Anastomoza uretry je rovněž provedena metodou end-to-end. S podáváním léčiva se začne v den t 4 transplantace a pokračuje se po dobu 14 dní. Sedm dní po transplantaci se provede kontralaterální nefrektomie·a příjemce je odkázán na činnost dárcovy ledviny. Přežití Štěpu slouží jako parametr pro funkční štěp,

Cyklošporiny podlé vynálezu jsou účinné při udržování přežívání štěpu při výše uvedené testovací metodě, když se aplikují v denních dávkách asi od 2 až asi do 5 mg/kg denně perorálně.

- 12 3. Experimentálně vyvolaná alergická encefalomyelitida /EA3/ u krys ‘ /Levine se sp. , AM. J.. PATH. 47 /1965/ 61; íicParlin se sp., J. IMMUNOL. 113 /1974/ 712; Borel, TRáNSPLANT ANDCLIN. IMMUNOL. .13 /1981/ 3/ ' ' ‘ ........... *' V' ^f ' 'Krysím samcům kmene Wistar se injikuje do zadních'tlapek 1 .

směs hovězí míchy a kompletního Preundova. adjuvans. Symptome ^: onemocnění /paralýza ocasu a obou zadních tlapek/ se obvykle vyvine v průběhu 16 dnů.^JPočet onemocnělých zvířat a rovněž doba nástupu onemocnění se zaznamenávají. ------' .-·—·— \ 7 Při podávání v denních dávkách asi od l2,5 až asi do 25 mg/ kg perorálně inhibují cyklosporiny -podle vynálezu při výše-popsaném modelovém testu nástup onemocnění. /

4. Artritida vyvolaná Preundovým adjuvans /Winter a Russ, ARTHRITIS AND RHEUWISM £ /19 66/,.39 4;

Billingham a Davies, HANDBOOK OP EXPERDdENTAL-EHARMACOL.

/Vane and Perreira Eds, Springer-Verlag,. Berlin/ 2Q/II, ' /1979/108 - 144/

Krysám kmene OPA a Wistar /samci,nebo marnice.«tělesná hmotr

- ··' .' ,,-n; ·' : i ..... ' ’ , · < - . ·· ' · .·< ” .

nost ..1.50 g/ se injikuje intrakútánně u kořene ocasu nebo do zadní tlapky 0,1 ml minerálního oleje, který obsahuje 0,6 mg . lyofilizovaných, teplem usmrcených buněk Mycobacteriom smegmatis. Při vývoji modelové artritidy se léčení zahájí okamžitě po injekci adjuvans /dny 1 až 18/; u rozvinuté modelové artritidy se léčení'zahájí 14. den, kdy je sekundární zánět dobře

X ¹ vyvinut /dny 14 až 20/. Na závěr pokusu.se měří otok kloubů pomocí posuvného mikroměřítka.

Cyklosporiny podle vynálezu jsou účinné při prevenci nebo inhibici postupu onemocnění jak při vyvíjejícím se tak i při vyvinutém zkušebním modelu po aplikaci denních dávek asi od 3 až asi do 20 mg/kg perorálně.

Cyklosporiny podle vynálezu vykazují rovněž příznivou toxicitu, například hepatotoxicitu a/nebó nefrotoxicitu, jak vyplývá ze srovnání se známými cyklosporiny, například s Ciclosporinem, jak lze prokázat při stanovení jejich působení na ^sř’o vnatělné^ pařahětrý7^M^^iaP^^:íklad^,*na“ krevní· kře atininy-rychlost--glomerulární filtrace, na hladiny močoviny, bilirubinu a žlučových kyselin, po dlouhodobé aplikaci krysám v takových dávkách, které jsou imunosupresivně účinné. Cyklosporiny podle vynálezu jsou tedy při- srovnání se známými cyklosporiny charakterizovány lepším terapeutickým indexem.

Cyklosporiny podle vynálezu jsou tedy použitelné jako farmaceutika, například nejen jako imunosupresivně, nýbrž i jako protizánětlivě účinné látky.

Cyklosporiny podle vynálezu jsou použitelné zejména při prevenci odmítnutí transplantovaného orgánu nebo tkáně, například při premedikaci příjemců transplantátů srdce, plic, kom•I binace srdce-plíce, jater, ledvin, pankreatu, kůže nebo rohovky. Jsou rovněž indikovány při prevenci onemocněni v důsledku odmítnutí štěpu příjemcem, jaká například následují po transplantaci kostní dřeně.

Cyklosporiny podle vynálezu jsou rovněž použitelné při léčení autoimunních onemocnění a zánětlivých stavů, především zánětlivých stavů, s takovou étiologií, která zahrnuje autoimunní komponentu, jako je zánět kloubů /například reumatoidni artritida, arthritis chronica progrediens a arthritis deformans/ a reumatická onemocnění. Specifická autoimunní onemocnění, při kterých mohou být použity cyklosporiny podle vynálezu, zahrnují autoimunní hematologické poruchy /včetně například hemolytické anemie, aplastické anemie, čisté anemie červených krvinek a idiopatické trombocytopenie/, systémový lupus erthemaiosus, polychondritis, sklerodoma, Wegenerovu granulomatosis, dermatomyositis, chronickou aktivní hepatitidu, myasthenia gravis,

- 14 psoriasis, Steven-Johnsonův syndrom, idiopatickou sprue, autoimunní zánětlivá onemocnění vnitřních.orgánů /například'včetně ulcerativní kolitidy a Crohnovy choroby/, endokrinní.oftalmopatie, Gravesovu chorobu, sarkoidosu, sklerosu multiplex, primární biliární cirhózu,· juvenilní diabetes /diabetes melli-. tus typu 1/, uveitis /anterior a posterior/, keratoconjuncti,, .. „ .._vi-ti_s·.siccaa vemální keratoconjuctivitis,' ihtefštičiálňí'plic-* ní fibrózu, psoriatickou artritidu aglomerulonefritidu /s ne' fřotickym syndromem i bez něho, například včetně idiopatického' neurotického syndromu nebo nefropatie s minimálními změnami/.

Ϊ7 .. * V* * ' ' ' . . . ’ , » .· .. . .. · ¹ · ’ -Λ*’ · i 6 __ Cyklosporiný_podle jyynálezu j sou_dá,le_indikovány pro^poušití při léčení'dalších'nemocí a stavů, u kterých cyklosporin, například Ciclosporin, je terapeuticky používán nebo doporučován, například k léčení alopeciě nebo k podpoře růstu vlasů a ' ’ ’ Λ ^Γ · k léčení astmatu, .například při aplikaci inhalací,. Cyklosporiny jsou rovněž indikovány jako antiparazitámí. látky, především při léčení parazitárních infekcí-a, invazí, například protozálních, houbových nebo vermikulámích, jako jsou například filarioza, schistosomiáza,-kokcidiomykóza nebo plasmodiální infekce , jako je například malárie. Dále jsou. ještě indikovány.·pro... použití při zvratu indukované rezistence malignit na jinou terapii a konečně k urychlení hojení ran.

Při výše uvedených indikacích se bude vhodné dávkování samozřejmě měnit, například v závislosti na konkrétním použitém cyklosporinu podle vynálezu, na subjektu, který má'být léčen, . na způsobu podávání a na povaze a vážnosti stavu, který má být léčen. Obecně tedy uspokojující výsledky u zvířat‘mohou být dosaženy při denních dávkách asi od 1 až asi do 10 mg/kg perorálně. U větších savců, například u člověka, je indikovaná denní dávka v rozmezí asi od 50 až asi do 800 mg cyklosporinu podle vynálezu, podávaná bul jednorázově perorálně, popřípadě účelněji, v dělených dávkách dvakrát až Čtyřikrát denně.

.1 ' ^λ -t .

v

Při transplantacích orgánů/u člověka je indikována jedna

- 15 perorální dávka asi 10 až 15 mg/kg cyklosporinu podle vynálezu.

až 12 h před chirurgickým zákrokem. Tato denní dávka se podává po dobu jednoho až dvou týdnů po operaci, před tím, než se postupně sníží podle hladin v krvi. a dosáhne se udržovací dávky ;s i—2-až-6~mg/kg~-de nněj^Edys e* c yk-lo spor-inywpodle-rVynálezu^podávají vedle jiných imunosupresivních látek /například kortikosteroidů jako součásti terapie se třemi až čtyřmi léčivy/ je vhodné podávat nižší dávky /například na začátku denně 1 mg/kg intravenózně, 6 mg/kg; perorálně/.

. * »

Cyklosporiny podle vynálezu lze podávat jakoukoliv obvyklou cestou, především vnitřně, zejména perorálně, například v podobě roztoků k pití, tablet nebo tobolek, nebo parenterálně, například v podobě injikovatelných roztoků nebo suspenzí. Pro systémovou aplikaci se normálně dává přednost perorálním aplikačním formám, ačkoliv za určitých podmínek, například při prevenci odmítnutí jatemích transplantátů, je žádoucí intravenozně aplikovatelná forma. Cykloseriny podle vynálezu mohou být rovněž aplikovány topicky nebo dermálně, například v podobě der málních krémů nebo gelů nebo podobných přípravků, nebo v pří* pádech potřeby aplikace dó oka, v podobě očního krému^-,'gelu> nebo preparátu očních kapek. Vhodné formy jednotkových dávek . pro perorální aplikaci obsahují například 25 až 250 mg cyklosporinu podle vynálezu v jedné dávce. . '

Výhodné galenické přípravky s cyklosporiny podle vynálezu jsou ty, které jsou tvořeny mikroemulzemi, jak je popsáno v britské pat, přihlášce Č. 2 222 77OA, která se týká jak topických tak. i perořálních forem; rovněž perorální a injekční formy, které jsou popsány v britské pat. přihlášce č. 2 209 671A a které lze získat z tuhých roztoků, obsahujících monoester mastné kyseliny se sacharidem, například monolaurát sacharózy, jsou vhodné.

Příklady obzvláště výhodných kompozic, použitelých pro plr není měkkých želatinových tobolek pro perorální aplikaci:

- 16 - ,

Příklad _^2mpozice _A

Produkt z příkladu 2	50,0	mg · . .
Glycofurol 75	180,0	mg-
Miglyol 812	.. 90,0	mg .
' Cremophor RH4O .. ¹⁵	180,0	mg______...........
' ' ‘~ . alf a-Tokoferol	0,5	mg
·- , · . ·' r ' ' ··> ' . - ,r -. v Λ - Příklad'kompozice B ‘ ·’ · . . ’ IJ·
Produkt z příkladu 2	100,0	mg
Tetraglykol .· __	. 20,0	mg—·:—.--·
Captex 800' ’ -	20,0	mg ,’ ·'
Nikkol HC0-40	860;0	mg '
' . Butylhydroxytoluen /BET/	1,0	mg ‘
Příklad kompozice C . ^ř
Produkt z příkladu 2	25,0	mg
Glycofurol 75	100,0	mg
Miglyol 812-	, 55,0	mg
Cremophor BE 40	90,0	mg
Butylhydr.oxyanisol /HRA/	0,2	mg
·.. . . ,. ,..... - .· Příklad kompozice D
Produkt z příkladu 2	10,0	mg
Tetraglykol *	10,0	mg
Myritol	5,0	mg
Cremophor BH 40	75,0	mg
alfa-Tokófeřol	0,1	mg
Jednotlivé složky těchto kompozic,	jakož i	metody jejich

přípravy, jsou. podrobně popsány v britské pat, přihlášce č, 2 222 77OA, na jejíž obsah se odkazuje.

i

- 17 Hodnoty účinných dávek /ED/, stanovené výše popsanými zkušebními metodami 1 až 4 pro cyklosporin z příkladu provedení 2, jsou tyto:

^Zkušební' metoda		k.
SIP ' mg/kg
1	25 /SD5O/ .	ke snížení průměrného rozdílu mezi dvojicemi uzlin o 50 % při srovná- ' ní s neléčenými kontrolami
2 r	2,5	k prodloužení přežití ó více než 100 dní u 100 % léčených krys
3 .	25	. ke zmírnění symptomů choroby o. ’ 100 $ při srovnání s neléčenými kontrolami
4	20	ke zmenšení otoku na velikost zaznamenanou u neléčených kontrol

• -f . ..... . ,_v · ._ ·ϊ ... ..... V ' 7 souhlase s předchozím zahrnuje tento vynález rovněž.dalI ší řadu znaků: , '

A. metodu k vyvolávání imUnosuprese u subjektu-v případě potřeby takového zásahu, která spočívá v tom, že se uvedenému subjektu podává účinné množství cyklosporinu podle vynálezu;

B. metodu

1/ k prevenci odmítnutí transplantovaného orgánu, například, k premedikaci příjemců orgánových transplantátů, zejména u některého výše jmenovaného typu; nebo

2/ k prevenci onemocnění typu Štěp versus příjemce, například u transplantací kostní dřeně;

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY ; ΑΛ3Η0 . AZ31V,.. . ovyn

1, Derivát cyklosporinu, ve kterém skupina v poloze 8 j na obecného vzorce I skupiZ δ !| *ε o fflS.sc

I . ' /Vis e H

-NH-CH-CO- _r ve kterém R značí atom vodíku nebo fyziologicky hydrolýzovatelnou a přijatelnou acylovou skupinu.
2, , Derivát cyklosporinu podle-nároku 1 obecného’vzorce II

-X-Y-Sar-MeLeu-Val-&eLeu-Ala-Q-MeLeu-MeLeu-MeVal• fp·

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 /11/, ve kterém značí:

X skupinu MeBmt nebo. dihydro-MeBmt., .. ...... ......

Y íxABu, Val, Thr nebo Nva a

Q skupinu obecného vzorce I definovanou v nároku 1.
3. Derivát cyklosporinu podle nároku 1 nebo 2, vě kterém R značí atom vodíku.

• · , * L

·. * *
4. /0- (2-hydroxyethyl) (d) Ser/⁸-Ciclosporin.
5. Derivát cyklosporinu podle nároku 1 nebo 2, ve kterém R značí acetylovou skupinu.
6. /0-(2-ácetyloxyethyl)( D)ser/^S-Ciclosporin.

►
7. 2působ výroby derivátu cyklosporinu podle nároku 1, v y z n a Sující se tím, že se

-‘20 •v.

i/, pro přípravu derivátu cyklosporinu, ve kterém skupinu v polozě 8 tvoří skupina obecného vzorce I, ve které R značí atom vodíku, redukuje odpovídající derivát cyklosporinu, ve kterém skupinu v poloze 8 tvoří’skupina obecného vzorce III ch.₂-o-ch₂-co-o-r'

-flH-CH-eO./ΙΠ/, /D/ ve které H* značí alkylovou skupinu s 1 až 3 atomy .uhlíku, nebo se

'.. .» „ \ , ' ..JlJ - ' . . ηί. ’ · - ^; ' ii/ pro příprávu _ derivátu cyklosporinu, ve kterém skupinu v polo-___ ze 8 tvoří skupina obecného vzorce I,· ve.kterém R značí acylovou skupinu, esterifikuje, odpovídajícívderivát cyklosporinu, ve kte-.

'· · . r rém R značí atom vodíku. *
8. Derivát cyklosporinu, ve kterém skupinu v poloze 8, tvoří skupina obecného vzorce III CH₉-0-CH_o-CQ-0-r' i . ^/IIIZ-NR-CH-CÓ- ' ' ’

-. ^/3/ :

- . , . A ? . «7 -f : .· - ·. r ve kterém R* značí alkylovou skupinu s'l až 3 atomy, uhlí ku.
9. /Q-(isopropyloxykarbonylmethyl)(D)Ser/8-Ciclosporin.

¹ ř .
10. Použití derivátu cyklosporinu podle některého z nároků 1 až 6 jako farmaceutika. , . í· , · - * í
11. Farmaceutická kompozice obsahující derivát cyklosporinu podle některého z nároků 1 až 6, v kombinaci s farmaceuticky přijatelným zřeS-Ovadlem nebo nosičem.