CZ348299A3 - Bakteriální plasmidy - Google Patents
Bakteriální plasmidy Download PDFInfo
- Publication number
- CZ348299A3 CZ348299A3 CZ19993482A CZ348299A CZ348299A3 CZ 348299 A3 CZ348299 A3 CZ 348299A3 CZ 19993482 A CZ19993482 A CZ 19993482A CZ 348299 A CZ348299 A CZ 348299A CZ 348299 A3 CZ348299 A3 CZ 348299A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- plasmid
- dna
- plasmids
- sequence
- microliters
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Oncology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Vynález se týká bakteriálních plasmidů a jejich použití pří mikrobiologických analytických a/nebo diagnostických postupech.
Dosavadní stav techniky
Bakteriální plasmidy jsou zpravidla cirkulární, uzavřené kovalentním způsobem a šroubovicové. Často obsahují geny pro odolnost proti antibiotikům nebo těžkým kovům, geny pro metabolizaci netypických substrátů nebo geny, typické pro určitý druh organismu, například metabolické vlastnosti nebo faktory virulence. Řadu plasmidů je možno přenést z určitých buněk do jiných buněk. Vzhledem k tomu, že podle současných názorů je pathogenita bakterií podmíněna také vlastnostmi plasmidů, soustředí se na plasmidy a na vysvětlení jejich vlastností velký zájem.
Mezi organismy enterobacteriaceae, k nimž náleží 14 hlavních čeledí a 6 dalších čeledí je známo, že tyto bakterie mohou vytvářet odlišné vlastnosti. Typickým příkladem mohou být Escherichia, Salmonella a Klebsiella. Escherichia coli je klasickým objektem genetiky bakterií. Až objev a vysvětlení různých faktorů virulence u tohoto mikroorganismu umožnily nalézt uspokojivé vysvětlení jevu, který spočívá v tom, že kmeny tohoto mikroorganismu mají rozdílnou patogenitu pro člověka a další živočichy, a to od avirulentních kmenů až ke kmenům s vysokou virulencí, jako tomu je v případě nově zjištěné varianty EHEC. Pro kmeny E.coli, žijící ve střevech i mimo střevo jíž byla zjištěna celá řada faktorů virulence a některé z těchto faktorů jsou již dobře charakterizovány. V případě pathogeních kmenů Sero-skupiny O6:K5 byly například
• ·« · ·· ·· 9· • · · 99 9 9 9 9 9 ·
9999 9 9 9 9 9 9
99 9 9 9 999 999
9 9 9 9 9 9
999 99 999 9999 99 99 prokázány jako faktory virulence haemolysin a adhesin na fimbrie, které se nevyskytují u nepatogeních bakterií této skupiny.
Geny pro virulenci je možno nalézt u enterobakterií zpravidla ve velkých plasmidech s molekulovou hmotností přibližně 60 000. Vyskytují se však také enterobakterie s malými, tzv. kryptickými plasmidy, jejichž funkce až dosud nebyla s jistotou prokázána.
Vzhledem k tomu, že je známo, že v případě E.coli jsou faktory pro virulenci alespoň z části uloženy v genech plasmidů, je zapotřebí dále zkoumat a charakterizovat plasmidy enterobakterií a zvláště a escherichií pro zlepšení diagnózy a léčení onemocnění, vyvolaných těmito mikroorganismy. Plasmidy nebo jejich bakteriální nosiče nebo odpovídajícím způsobem syntetizovaná DNA mohou být využity pro mikrobiologickou analýzu nebo k diagnostickým účelům a také k léčení poruch zažívacího ústrojí. Mimo to jsou plasmidy a zvláště právě plasmidy E.coli známými vektory pro expresi v genetické technologii, což zvyšuje zájem o lepší poznání jejich vlastností.
K tomuto účelu byly provedeny genetické výzkumy kmene E.coli DSM 6601. Sekvence DNA, získané z tohoto kmene byly analyzovány pomocí počítače a automatického analyzátoru sekvencí a srovnávány se známými sekvencemi DNA jiných bakterii. Podstata vynálezu
Kmen DSM 6601 obsahuje 2 malé plasmidy s velikostí 3177 a 5552 párů baží (bp) , tyto plasmidy byly označeny jako pMUTl a pMUT2.
DNA menšího plasmidů pMUTl byla po rozštěpení restrikčním enzymem HindlII subklonována jako lineární fragment
99 9 99 99 99 • · 9 · 9 · 9 9 · 9 9
9 99 9 · · · · 9
9 9 · 9 9 99··«·
9 9 9 9 9 9
999 99 999 9999 99 99 ve vektoru pUC18 a pak byla stanovena sekvence DNA. Tato sekvence je také znázorněna na obr. 1. Takto získaná sekvence DNA byla podrobena srovnání homologie při použití banky sekvencí GenEMBL. Výsledky tohoto postupu jsou znázorněny na obr.2.
Pro toto srovnání bylo místo štěpení enzymem HindlII označeno jako poloha 1. Od polohy 200 až 800 bp měla DNA plasmidu pMUTl značnou homologii s různými počátky replikace jiných plasmidů enterobakterií, zvláště s plasmidy NTP1,
NTP16 a CloDFl3. V oblasti polohy 950 bp začíná úsek o 570 bp s vysokou homologii s plasmidem NTP16, který byl původně izolován ze Salmonella typhimurium. Tato homologie zahrnuje gen mobA, který je důležitý pro mobilizovatelnost plasmidu NTP16 a také počátek přenosu (oriT). Mimo to je možno od polohy 1790 do polohy 1920 bp pozorovat značnou homologii s geny parA a cer, které mají význam pro stálost a kontinuální rozdělování a doplňování molekul plasmidu při dělení buněk. Pro zbývající oblasti DNA nebylo možno prokázat žádnou významnou homologii.
Mimo to byla sekvence DNA plasmidu pMUTl přepsána do sekvence aminokyselin a analyzována na přítomnost otevřených čtecích rámců. Bylo analyzováno 6 různých možností čtecích rámců, čímž bylo prokázáno 5 otevřených čtecích rámců s velikostí 143, 62, 56, 48 a 49 aminokyselin. Grafické vyjádření analýzy je znázorněno na obr.3.
DNA velkého plasmidu pMUT2 byla po linearizaci pomocí restrikčního enzymu Sphl rovněž subklonována ve vektoru pUC18 a pak byla úplně stanovena její sekvence nukleotidů.Tato sekvence je znázorněna na obr. 4. Takto získaná sekvence byla pomocí banky GenEMBL vyšetřena na homologii s již známými
99
9 9
999
9 9 9
9 9
9 9 9
99 99 99
9 · 9 9 9 9 ·
9 9 9 9 9 · 9 999 999
9 9 9
999 9999 99 99 sekvencemi DNA. Výsledek je graficky znázorněn na obr.5. DNA plasmidu pMUT2 má významnou homologii s oblastí replikonu různých plasmidů ColEl z E.coli od polohy 890 do polohy 1660 bp. Další význačná homologie s uvedenými plasmidy se nachází v oblasti poloh 3800 až 4950 bp. Jde o homologii mobilizačních oblastí plasmidů ColEl. V oblasti poloh 3770 až 4980 bp byla prokázána homologie s plasmidem kmene AI Pasteurella haemolytica. Na tomto plasmidu se nacházejí kódové geny pro odolnost uvedeného mikroorganismu proti antimikrobiálním lát10 kám. Homologie zasahuje až do oblasti mezi jednotlivými geny, takže jde pravděpodobně také o sekvence, nezbytné pro mobilizovatelnost plasmidu.
Byly také identifikovány dvě oblasti s význačnou homologii s jinými plasmidy enterobakterii. Jde o oblasti počátku replikace a o oblasti mob, které jsou nutné pro mobilizovatelnost plasmidu. V případě plasmidu pMUT2 nebylo možno ve zbývajících úsecích DNA prokázat žádnou další význačnou homologii.
Také sekvence DNA plasmidu pMUT2 byla přepsána do sekvence aminokyselin a analyzována na přítomnost otevřených čtecích rámců. Výsledek tohoto sledování je graficky znázorněn rovněž na obr. 3. Bylo prokázáno 5 otevřených čtecích rámců se sekvencí aminokyselin, obsahující 327, 318, 264, 76 a 63 aminokyselin.
Kromě až dosud neznámých plasmidů pMUTl a pMUT2 nebyla dosud nalezena ani kombinace těchto plasmidů v žádném kmenu E.coli ani v jiných enterobakteriích.
Přítomnost plasmidu je pravděpodobně spojená s metabolickými, k léčebným účelům využitelnými vlastnostmi kmene *· •
999
9 9
9 • 9 • 9 99 • 9 9 ♦ » 9 9 9 •99 ···
9
9· 99
DSM 6601. Další možnost využití je ke zlepšení výživy nebo k probiotickým účelům.
Analýza plasmidu umožňuje přesnější stanovení a analýzu vlastností enterobakterií a zvláště skupiny Escherichia. Mimo to jsou plasmidy využitelné jako vektory pro expresi při genetických technologiích.
Přehled obrázků na výkrese
Obr.l vyjadřuje sekvenci DNA plasmidu pMUTl.
Obr.2 znázorňuje oblasti homologie plasmidu pMUTl se sekvencí jiných plasmidů.
Obr.3 vyjadřuje analýzu otevřených čtecích rámců v plasmidech pMUTl a pMUT2.
Obr.4 znázorňuje sekvenci DNA plasmidu pMUT2.
Obr.5 graficky vyjadřuje oblasti homologie plasmidu pMUT2 se sekvencemi jiných plasmidů.
Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1: izolace plasmidu
DNA plasmidu byla izolována podle publikace Birnboim, A.C. a Doly, J. 1979, Nucl.Acids Res. 7:1513-1523: A rapid alkaline extraction proceduře for screening recombinant plasmid DNA.
ml prostředí LB bylo naočkováno kolonií bakterií a inkubováno přes noc za protřepávání při teplotě 37 °C. Pak byla kultura odstředěna v Eppendorfově nádobce a zbytek prostředí byl odstraněn pomocí pipety. Usazenina buněk byla • 4 44 • 4 4 4
4 4 4 ·»· 444
4
44 uvedena v suspenzi ve 100 mikrolitrech roztoku I, který obsahoval 50 mM glukózy, 10 mM EDTA, pH 8 a 25 mM Tris-HCl, pH 8. Po inkubaci 5 minut při teplotě místnosti bylo přidáno 200 mikrolitrů roztoku II s obsahem 0,2 N NaOH a 1 % SDS, směs byla míchána až do vzniku čirého roztoku a Eppendorfova nádobka pak byla ještě na 5 minut uložena do ledu. Pak bylo přidáno 150 mikrolitrů roztoku III s obsahem 3 M octanu sodného o pH 4,8, nádobka byla krátce protřepána až do vysrážení chromosomální DNA ve formě vloček, načež byla směs ještě na 5 minut uložena do ledu. Vysrážená chromosomální DNA a zbytky buněk byly 5 minut odstředěny a supernatant, obsahující DNA plasmidu byl přenesen do jiné nádobky. K čištění této DNA bylo přidáno 50 mikrolitrů fenolu a 150 mikrolitrů směsi chloroformu a isoamylalkoholu v poměru 24:1 a po krátkém protřepání na 2 minuty byla směs odstředěna. Vodná fáze byla pipetou přenesena do nové nádobky. DNA plasmidu byla vysrážena přidáním 2 objemů ledového ethanolu a směs byla 10 minut odstředěna. Usazenina byla promyta 70% ethanolem a usušena v zařízení Speedvac. DNA plasmidu byla znovu uvedena do suspenze ve 20 mikrolitrech bidestilované vody a suspenze byla uložena při teplotě -20 °C.
Příklad 2: analýza sekvence DNA
Sekvence DNA byla analyzována způsobem podle publikace Sanger,F., Nicklen, S. a Coulson, A.R. 1977, Proč. Nati. Acad. Sci. USA 74:5463-5467: DNA sequencing with chain terminatíng ínhíbitors.
Analýza sekvence DNA byla uskutečněna při použití balíčku pro analýzu T7 (Pharmacia LKB).
• ···· • · · · • · · · • ·»· ·· · • · • · · *
V denaturačním stupni bylo smíseno 8 mikrolitrů (1,5 až 2 mikrogramy DNA plasmidu se 2 mikrolitry 2 N NaOH, směs byla krátce odstředěna a inkubována 10 minut při teplotě místnosti. DNA pak byla vysrážena přidáním 3 mikrolitrů 3 M octanu sodného o pH 4,8, 7 mikrolitrů bidestilované vody a 60 mikrolitrů ledově chladného absolutního ethanolu, srážení bylo prováděno 15 minut při teplotě -70 °C. Vysrážená DNA byla 10 minut odstředěna, promyta 70% ethanolem a usušena.
Pro vaznou reakci byla denaturovaná DNA uvedena do suspenze v 10 mikrolitrech bidestilované vody a byly přidány 2 mikrolitry pufru pro provedení vazby a 2 mikrolitry prímeru (40 ng). Výsledná směs byla inkubována 20 minut při teplotě 37 °C k uskutečnění vazby primeru na matrici DNA. Reakční směs pak byla ponechána 10 minut ke zchladnutí na teplotu místnosti a pak bylo provedeno značení nebo byla směs zmrazená na -20 °C do dalšího použití. Značení bylo prováděno tak, že byly 3 mikrolitry směsi pro značení, 1 míkrolítr (alfa-P32) dATP a 2 mikroliry polymerázy T7 (polymeráza byla zředěna v poměru 1:5 pufrem pro ředění enzymů) pipetou uloženy jako reakční směs k uskutečnění vazby a po krátkém promíchání byla směs inkubována 5 minut při teplotě místnosti. V průběhu této doby byla již připravena směs pro analýzu sekvence a pro terminační reakci a byla předem zahřáta na teplotu 37 °C (do jedné nádobky bylo přidáno vždy 2,5 mikrolitrů směsi G, A, T a C). Po ukončení značení byly vždy 4 mikrolitry směsi přidány do 4 směsí pro analýzu sekvence a všechny směsi byly krátce promíchány. Terminační reakční směsi byly inkubovány 5 minut při teplotě 37 °C. K ukončení terminační reakce bylo přidáno vždy 5 mikrolitrů roztoku pro zastavení reakce. Reakční směsi byly přeneseny do inkubátoru s teplotou ··· • · φ φ φ φ φφφ φφφ °C, směsi byly 2 minuty denaturovány a pak uloženy do ledu. Vždy 2,5 mikrolitrů reakční směsi bylo naneseno na gel pro analýzu sekvence, obsahující 25,5 g močoviny, 22 ml bidestilované vody, 6 ml ΙΟχ TBE, 10 ml 40% polyakrylamidu, 2 ml persíranu amonného s koncentrací 16 mg/ml a 60 mikrolitrů
TEMED, postupně byly nanášeny směsi G, A, T a C. Elektroforéza probíhala pří 40 W a napětí 1500 V po dobu 4,5 h.
Zastupuje :
• ·· «99 ·9 »9 · 9 9 · · 9 9 9 9 9 • · · · 9 9 9 9 9 9
9 9 9 » 9 »9999«
Claims (7)
1. Plasmid se sekvencí DNA, znázorněnou na obr.1 a jeho allelové variace.
5
2. Plasmid se sekvencí DNA, znázorněnou na obr.4 a jeho allelové variace.
3. Sekvence DNA se sledem nukleotidů, znázorněným na obr.1
4. Sekvence DNA se sledem nukleotidů, znázorněným na obr.4
10
5. Použití plasmidu podle nároku 1 nebo 2 nebo sekvence
DNA podle nároku 3 nebo 4 pro mikrobiologickou analýzu a/nebo diagnostické účely.
6. Použití plasmidu podle nároku 1 nebo 2 nebo sekvence
DNA podle nároku 3 nebo 4 k lékařským účelům, pro zlepšení výživy nebo k probiotickým účelům.
7. Použití plasmidu podle nároku 1 nebo 2 nebo sekvence DNA podle nároku 3 nebo 4 jako vektorů pro expresi.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19713543A DE19713543B4 (de) | 1997-04-02 | 1997-04-02 | Bakterielle Plasmide |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ348299A3 true CZ348299A3 (cs) | 2000-05-17 |
| CZ294686B6 CZ294686B6 (cs) | 2005-02-16 |
Family
ID=7825193
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19993482A CZ294686B6 (cs) | 1997-04-02 | 1998-04-01 | Bakteriální plazmid, sekvence DNA a jejich použití |
| CZ2004894A CZ294867B6 (cs) | 1997-04-02 | 1998-04-01 | Bakteriální plasmid, sekvence DNA a jejich použití |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2004894A CZ294867B6 (cs) | 1997-04-02 | 1998-04-01 | Bakteriální plasmid, sekvence DNA a jejich použití |
Country Status (32)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6391631B1 (cs) |
| EP (1) | EP0975774B1 (cs) |
| JP (2) | JP2000514661A (cs) |
| KR (1) | KR100398558B1 (cs) |
| CN (2) | CN100429313C (cs) |
| AR (1) | AR010140A1 (cs) |
| AT (1) | ATE277190T1 (cs) |
| AU (1) | AU739941B2 (cs) |
| BR (1) | BR9808458A (cs) |
| CA (1) | CA2285633C (cs) |
| CO (1) | CO4790114A1 (cs) |
| CZ (2) | CZ294686B6 (cs) |
| DE (2) | DE19713543B4 (cs) |
| DK (1) | DK0975774T3 (cs) |
| DZ (1) | DZ2454A1 (cs) |
| EA (2) | EA003700B1 (cs) |
| EE (1) | EE04944B1 (cs) |
| ES (1) | ES2229492T3 (cs) |
| HK (2) | HK1026233A1 (cs) |
| HU (1) | HU228182B1 (cs) |
| IL (2) | IL132101A0 (cs) |
| NZ (1) | NZ338000A (cs) |
| PE (1) | PE96799A1 (cs) |
| PL (2) | PL192687B1 (cs) |
| PT (1) | PT975774E (cs) |
| SI (1) | SI0975774T1 (cs) |
| SK (2) | SK284928B6 (cs) |
| TR (1) | TR199902434T2 (cs) |
| TW (1) | TW567225B (cs) |
| UA (1) | UA73072C2 (cs) |
| WO (1) | WO1998044134A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA982733B (cs) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19751242C2 (de) | 1997-11-19 | 2001-02-08 | Pharma Zentrale Gmbh | DNA-Sequenzen aus Fimbriengenen von Escherichia coli Stamm DSM 6601 |
| HUP0004409A3 (en) * | 1997-11-19 | 2001-09-28 | Pharma Zentrale Gmbh | Method for identifying escherichia coli strain dsm 6601 |
| DE19915772C2 (de) * | 1998-11-18 | 2001-08-30 | Pharma Zentrale Gmbh | Verfahren zur Identifizierung von Escherichia coli Stamm DSM 6601 |
| DE10155928A1 (de) * | 2001-11-15 | 2003-06-12 | Degussa | recA-negativer und rhaB-negativer Mikroorganismus |
| US7648886B2 (en) * | 2003-01-14 | 2010-01-19 | Globalfoundries Inc. | Shallow trench isolation process |
| DE10328669B4 (de) * | 2003-06-26 | 2005-12-01 | Pharma-Zentrale Gmbh | Plasmidfreier Klon des E. coli Stammes DSM 6601 |
| CN100368549C (zh) * | 2006-03-29 | 2008-02-13 | 北京未名凯拓作物设计中心有限公司 | 一种细菌质粒及其衍生质粒与应用 |
| EP2466678B1 (en) | 2009-08-10 | 2017-11-22 | LG Chem, Ltd. | Lithium secondary battery |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5843882A (en) * | 1995-04-27 | 1998-12-01 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Antiviral proteins and peptides |
| CN1060807C (zh) * | 1995-05-25 | 2001-01-17 | 中国科学院微生物所 | 大肠杆菌中表达外源基因的质粒和牛凝乳酶原的生产方法 |
-
1997
- 1997-04-02 DE DE19713543A patent/DE19713543B4/de not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-01-04 UA UA99105881A patent/UA73072C2/uk unknown
- 1998-03-31 DZ DZ980064A patent/DZ2454A1/xx active
- 1998-04-01 SK SK1338-99A patent/SK284928B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-04-01 HU HU0001857A patent/HU228182B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-04-01 IL IL13210198A patent/IL132101A0/xx active IP Right Grant
- 1998-04-01 EA EA199900893A patent/EA003700B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-04-01 PL PL336156A patent/PL192687B1/pl unknown
- 1998-04-01 WO PCT/EP1998/001720 patent/WO1998044134A2/de active IP Right Grant
- 1998-04-01 EE EEP199900445A patent/EE04944B1/xx unknown
- 1998-04-01 PL PL373720A patent/PL192699B1/pl unknown
- 1998-04-01 AT AT98919137T patent/ATE277190T1/de active
- 1998-04-01 EP EP98919137A patent/EP0975774B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-01 ES ES98919137T patent/ES2229492T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-01 CA CA002285633A patent/CA2285633C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-01 TR TR1999/02434T patent/TR199902434T2/xx unknown
- 1998-04-01 EA EA200000567A patent/EA003738B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-04-01 KR KR10-1999-7009001A patent/KR100398558B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-04-01 CN CNB2005100059434A patent/CN100429313C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-01 SI SI9830713T patent/SI0975774T1/xx unknown
- 1998-04-01 CN CNB988044471A patent/CN1194093C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-04-01 DE DE59812000T patent/DE59812000D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-04-01 JP JP10541119A patent/JP2000514661A/ja active Pending
- 1998-04-01 SK SK44-2005A patent/SK284929B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1998-04-01 ZA ZA982733A patent/ZA982733B/xx unknown
- 1998-04-01 CZ CZ19993482A patent/CZ294686B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-04-01 AU AU72095/98A patent/AU739941B2/en not_active Ceased
- 1998-04-01 NZ NZ338000A patent/NZ338000A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-04-01 BR BR9808458-5A patent/BR9808458A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-04-01 CZ CZ2004894A patent/CZ294867B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-04-01 PT PT98919137T patent/PT975774E/pt unknown
- 1998-04-01 DK DK98919137T patent/DK0975774T3/da active
- 1998-04-02 AR ARP980101500A patent/AR010140A1/es active IP Right Grant
- 1998-04-02 TW TW087105015A patent/TW567225B/zh not_active IP Right Cessation
- 1998-04-02 CO CO98018666A patent/CO4790114A1/es unknown
- 1998-04-02 PE PE1998000241A patent/PE96799A1/es not_active Application Discontinuation
-
1999
- 1999-09-27 IL IL132101A patent/IL132101A/en not_active IP Right Cessation
-
2000
- 2000-09-01 HK HK00105484A patent/HK1026233A1/xx not_active IP Right Cessation
- 2000-10-02 US US09/676,974 patent/US6391631B1/en not_active Expired - Lifetime
-
2002
- 2002-05-02 JP JP2002130939A patent/JP2003000245A/ja active Pending
-
2006
- 2006-06-07 HK HK06106492.4A patent/HK1086596A1/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3423597B2 (ja) | 細菌の同定方法 | |
| Gibreel et al. | High-level resistance to trimethoprim in clinical isolates of Campylobacter jejuni by acquisition of foreign genes (dfr1 and dfr9) expressing drug-insensitive dihydrofolate reductases | |
| Watterworth et al. | Multiplex PCR-DNA probe assay for the detection of pathogenic Escherichia coli | |
| Petersohn et al. | Identification and transcriptional analysis of new members of the σB regulon in Bacillus subtilis | |
| CZ348299A3 (cs) | Bakteriální plasmidy | |
| Cloeckaert et al. | Polymorphism at the dnaK locus of Brucella species and identification of a Brucella melitensis species-specific marker | |
| RU2508406C2 (ru) | СПОСОБ ВИДОВОЙ ИДЕНТИФИКАЦИИ ЛАКТОБАЦИЛЛ L.casei/paracasei, L.fermentum, L.plantarum И L.rhamnosus | |
| JPH05504672A (ja) | グラム陰性細菌の同定および検出のためのポリヌクレオチドプローブ，方法およびキット | |
| EP3356545B1 (en) | Use of pcr primers and methods for the identification of bacillus coagulans | |
| TWI284150B (en) | Plasmid-free clone of E. coli strain DSM 6601 | |
| US6376185B1 (en) | DNA sequences of genes from fimbriae d'escherichia coli strain DSM 6601 | |
| US20050032093A1 (en) | Novel genes involved in the escherichia coli biofilm formation and uses thereof | |
| Kronish et al. | The effects of the ultraviolet-protecting plasmids pKM101 and R205 on DNA polymerase I activity in Escherichia coli K-12 | |
| Lu | Rapid screening of recombinant plasmids | |
| RU2203951C1 (ru) | Способ выявления fusobacterium necrophorum в гнездовой полимеразной цепной реакции | |
| Pattiram et al. | Identification of bacteria from soil of Cameron Highlands | |
| Tadesse et al. | Cloning Nanobody cDNA into pHEN6c Plasmid Vector | |
| WO2000008138A2 (en) | Ribosomal rna (rrn) operon altered bacteria and uses thereof | |
| Shirazi et al. | Detection of recA Gene in Lactobacilli Isolates in Meat and Dairy Products | |
| JP2002142771A (ja) | ヒト腸内フローラ検出用プローブ又はプライマー | |
| CN111424102A (zh) | 一种化妆品特定菌多重pcr快速检测试剂盒及其检测方法 | |
| Barcus et al. | Site-Directed Mutagenesis to Determine Structure Function Relationships in Streptococcus pneumoniae Penicillin-Binding Protein Genes | |
| Friar | Distant regulation of the Escherichia coli recombinase gene, fimB | |
| KR20160093994A (ko) | 유산균 및 병원균 구별용 ｒａｐｄ 프라이머 및 이의 용도 | |
| CZ20001874A3 (cs) | Sekvence DNA |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20170401 |