UA73072C2 - Plasmids of bacteria - Google Patents

Description

Опис винаходу

Винахід відноситься до плазмід бактерій. 2 Плазміди це маленькі, особливі хромосоми, частіше всього круглі та окремі реплікаційні ДНК-молекули, які знаходяться у всіх бактеріях і так само в деяких еукаріотах, і так само в мітохондріях. Розміри плазмід варьїруються від біля 1,5 до ЗООКБ.

Плазміди бактерій як правило кругові, ковалентно замкнені і надміцні. Часто вони є носіями генів резистентності до антибіотиків або важких металів, генів для метаболізації нетипових субстратів або генів для 70 ряду видів специфічних характеристик, які метаболізуть властивості або чинники вірулентності. Деякі плазміди можуть переноситись з однієї клітини до іншої. Тоді патогенність бактерій на сьогоднішній погляд також частково обумовлюються через властивості плазмід, виправдовуючи величезний інтерес до вивчення властивостей плазмідних ДНК.

До сім'ї бактерій групи ЕзсПпегіспіа, належать 14 основних і б подальших видів і як відомо, їх різні 72 властивості можуть розвиватися. Типові приклади - ЕвзсПегіспіа, бЗаІтопеїМа і КіерзієеПйа. ЕзсПегіспіа сої (Е.соїї) є класичним об'єктом генетики бактерій. Першою властивістю і характеристикою різних чинників вірулентності з Е.соїї, дають можливість пояснити те, що штами цього виду різні. Патогенність тварин представлена від невірулентності до найвищої вірулентності. Таким чином як і для групи ЕзспПегіспіа так і для штаму Е.соїї готовий ряд з чинників вірулентності був описаний і частково добре охарактеризований.

Для патогенності штаму Е.соїї сірчаної групи Об: К5 стає чинником вірулентності, як наприклад гемолізини і Р-фібринадгезіни, які не виступають у визначенні апатогенної заміщеної цієї сірчаної групи.

Вірулентні гени в ентеробактеріях, як правило знаходяться у великих плазмідах (са.боОкр). Але є і ентеробактерії з маленькими, так званими, криптичними плазмідами, функції яких до сьогоднішнього дня ще не чітко визначені. с 29 Відомо, що як і у випадку з Е.соїї, вірулентні чинники, що найменше, частково присутні і в генах плазмід, Ге) тому виникає потреба в подальших дослідженнях по виявленню і характеризації плазмід в ентеробактеріях, і особливо, в кишкових паличках, наприклад, для того щоб сприяти кращій діагностиці і терапії при інфекційних хворобах, пов'язаних з ентеробактеріями. Плазміди, так звані, бактерії носії або синтезована ДНК, можуть бути використані в мікробіологічній аналітиці або діагностиці, в медичній терапії або профілактиці, а так само в сч фізіологічних нормах живлення. Крім того, плазміди, і особливо Е.соїї, відомі експресивні вектори в геній - технології, викликають інтерес у вивченні властивостей такого роду плазмід. З цього приводу були проведені молекулярно-генетичні дослідження зі штамами Е.сої О5М 6601. Одержаний штам послідовності ДНК був о підданий за допомогою цифрової програми секвентному аналізу ДНК, і були проведені порівняння отриманих со послідовностей ДНК з іншими бактеріями. 3о Штам О5М 6601 має дві маленькі плазміди з величиною 3177 і 5552бБр, які були позначені як РМОТ1 і рМОТО. в

ДНК маленької плазміди рРМОТІ1 була склонована після залишкового розпаду з ензимом НіпаїїЇ, як лінійний фрагмент на вектор рисСт18, була встановлена послідовність ДНК. Це видно на Фіг.1. Так отримана послідовність

ДНК була піддана гомологічному порівнянню з ген-ЕМВІ -дифровими даними; порівняні дані представлені на «

Фіг.2. З 50 Для цього порівняння було визначено зріз НіпаїїЇ як позиція 1. З позиції 200 по 800Бр. ДНК-плазмідій, с рРМИТІ1 відомих гомологенів показує редуплікаційне місцерозташування інших ентеробактеріальних плазмід,

Із» особливо плазмід МТР1, МТРІ16, і СІОО 13. В області від позиції 950бр до плазмід МТР16, починається великий гомолог, який був заздалегідь ізольований від ЗаІтопеїІа (Урпітигішт. Цей гомолог охоплює торА-ген, який є мобілізаційним для плазміди МТР16.

Виходячи з цього були знайдені, від позиції 1790 до 1920Бр, відомі гомологи генів рагА і сег, які мають і значення для стабілізації безперервної передачі і розподілу плазмідних молекул при розподілі клітки. Для оз інших ДНК-регіонів відомі гомологи не були ідентифіковані.

Виходячи з цього була описана послідовність ДНК плазміди РМИТІ в секвенті амінокислотною послідовністю ші і проаналізована на наявність кодів. Було досліджено 6 можливих кодів, що читаються. -і 20 Вдалося знайти 5 відкритих кодів, що читаються з величиною амінокислот 143, 62, 56, 49 і 48. Графічне зображення аналізу на Фіг.3 (За) ДНК великої плазміди рМиТ2 після лінійного аналізу з органічним ензимом із ЗРрИї, а також субклонування на вектор руисСт18, було остаточно секвестировано. Послідовність ДНК показана на

Фіг.4. Так отримана послідовність ДНК була досліджена за допомогою цифрових даних ген-ЕМВІ. на гомологи по відношенню до широко відомих послідовностей ДНК. Результат графічно зображений на Фіг.5. ДНК- плазміди 52 рмМиТта показують відомі гомологи по відношенню до інших Со! Е1- плазмід Е.соїї в позиції 890 до 166ОБр. Інший

ГФ) відомий гомолог плазміди Со! ЕІ знаходиться в районі 3800-4950Бр. Йдеться про гомологи мобілізованого регіону плазмід Со! Е1. У районі позиції 3770-4980 були знайдені гомологи плазмід Пастарелля гаемолітик о штаму АїЇ. На цій плазміді знаходяться гени, які закодовані для антибактеріальної стійкості протеїнів.

Гомологи знаходяться і поза генною областю, так що йдеться про можливість послідовностей, які є важливими бо для мобілізації плазмід. Були індентифіційовані два регіони, де відомі гомологи вказують на інші ентеробактеріальні плазміди. Тут йдеться мова про природне поновлення і мобілізаційне оновлення, які є важливими для цих плазмід. Для РМОТ2 інших ДНК-відрізків не було визначено відомих гомологів.

Послідовність ДНК плазміди рМиТ2 була трансквитірована на амінокислотну послідовність, і проаналізована на наявність відкритого коду, що читається. Дані графічно зображені на Фіг.3. Було знайдено 5 відкритих кодів 62 з амінокислотними послідовностями в 327, 318, 264, 76 і 63. Вони не були знайдені досі в невідомих плазмідах рМИТІ і рми, ні в їх комбінаціях, ні в штамі Е.соїї або в інших інтеробактеріях.

Наявність плазмід, мабуть стосується метаболічних, медичних і інших властивостей штаму ОЗМ6601.

Дослідження плазмід сприяє точному визначенню і аналізу ентеробактерій і особливо в групі - ЕзсПегіпіа.

Виходячи з цього ці плазміди пропонуються, як безпечні експресивні вектори для генної технології.

Приклад 1.

Плазміда-ізолятор.

Ізоляція плазмід-ДНК керуючись способом (Вігпроїт А.С. і Ооїу 9. (1979) Мисі. Асідз Кезв. 7:1513-1523 А).

Зті ІВ - середовища прищеплюють бактеріям і через ніч при температурі 372С струшують. Цю культуру 7/0 Чентрифугують в склянці Еппендорфа, залишок середовища видаляють піпеткою. Клітинний осадок ресуспендують в 100ц1 розчину | (50тМ глюкози; 10тМ ЕОТА, рНВ; 25тМ Ттів-НСІ, рН8). Після 5 хвилин інкубації при кімнатній температурі додають туди 200цЦ1 розчину І! (0Ж,2М маон; 195 505) розмішують і ставлять на 5 хвилин в морозилку. Потім вливають ще 1501 розчину І (ЗМ Ма-ацетат, рН4,8), струшують недовго до випадання хромосомних ДНК (у вигляді пластівців) і поміщують ще на 5 хвилин в морозильник. Хромосомні ДНК, 75 що випали і клітинні залишки пропускають через центрифугу і верхню частину з плазмідами ДНК переливають в нову склянку. Для очищення плазмід ДНК додають 50 ці фенолу і 150ц01 хлороформ-ізоамілакоголю (241), і після короткого струшування 2 хвилини центрифугують. Рідку частину піпеткою переносять в нову склянку.

ДНК-плазмід виділяють з двома дозами холодного етанолу і 10 хвилин пропускають через центрифугу.

Центрифугат обробляють 7095 етанолом і висушують. ДНК- плазміди ресуспендують в 20мл дистильованої НО і зберігають при 2026.

Приклад 2.

ДНЕК-секвентизація по методу ІЗаподег Р., МісКіеп 5. і Соцівоп (1977) Ргос. Май. Асад. Зеі ОБА 74: 54305467.

Для денатурації змішують 8ц1 (1,5Ббі5 2ц49) плазміди ДНК з 2ц1 і 2М Масон недовго центрифугують і 10 хвилин інкубують. ДНК, що випала з'єднують з Зци1ї ЗМ Ма-ацетат, рН4,8, а також 7ц1 дистильованої НО і б0ц1 с холодного чистого етанолу і залишають на 15 хвилин при температурі 702С. ДНК, що випала, 10 хвилин, (3 центрифугують, промивають 7095 етанолом і просушують.

Для реакції аніліровання денатуріроване ДНК суспендують в 10 1 дистильованої НоО і змішують з 2д1 анілірованного буфера. Осад інкубують 20 хвилин при температурі 372С. Вміст охолоджують 10 хвилин при сч 20 кімнатній температурі і після відразу ж використовують або заморожують при температурі - 20 С. Для реакції-маркірування використовують З ці маркера (ІГабеїйпа), Тр Іо-РУ|ЗАТР ії 2мло Т7-полімерази - (Т7-полімераза розбавлена 1:5 з інзимнорозбавленим буфером) і потім після недовгого змішування 5 хвилин о інкубують при кімнатній температурі. Для реакції готують секвентний склад ( на одну склянку 2,5 ці "5, А»,

Т- 1 с- тіх "впоїг") підігрівають заздалегідь при 372С. Після закінчення реакції-маркірування добавляють по мірі о потреби 4ц1 до чотирьох секвентних складів і розмішують недовго піпеткою. Термінаційна реакція 5 хвилин - інкубується при температурі 37 С. Для закінчення термореакції додають 5 ці розчину. Склад поміщують в інкубатор з температурою 9592С на 2 хвилини і потім ставлять в морозилку. Кожні 2мл реакції накладають на секвент |25,2г мочевини, 22ті НоО дистильованої води, би! ТОХТВЕ, 1001 поліакриламіда (40905), 2ті « аммоніумперсульфата (1бта/ті), 6001 ТЕМЕОІ в ряд с АТ, С. Електрофорез відбувається при 40Ват і 1500Вольт 4,5 години. З с ;» -І (95) («в) - 50

Ко)

Ф) іме) 60 б5

Ніч

МІСТ ТТАОСАИЙСТТОПЧВАТАССАТОАСССААТОААОСТАССТСААААСТТТОААТОАТОСА пра а а о ом рр о

ОСООСАСОСТАЛАТОСАЛАТСТТОСАСАТТСАТТСАСТСТСОТСОТААТСТСАСТАТТИТАА істот тля т сяють яти тя нини 120

АЛАСОВОАЛАААААССАСССТИССАССТООСТТТТТОИЧАЛОСТТАСТТААТОСТООСАСАТТСТ

Ір при пра аа п аа а пра а п а а а п а ТІ

СТААЛСООТОСТААСАОСТСТ ТОТОССАСАСАТОТСЛОСАААТАСТОТОСТТТСАСТОТАОС пуринн н п а п п р т

СТАТ ТАОПЙССОССАСТТСААСААСТСТООСТТАСАТСТСТОСОСАСАТССТОСТТАССАС

170 хз вин пи п а пла а ТТ

ТООССОТТОССАСТООСОТТАДСТООТОТСТАССОСНКИТТИСАСТСААСАСОАТАСТТАЄ

Збісятяттняинитянияинтнив і ктнтячя жи вичатитттт и фени ниття тв яти: 360

СОПСАТАМОТСОИССАОСТСОЙИСТИААСИЦКНИКТ ТООТОСАСАСМЮОСАССТТОСАОСС

Збікзакзиюіауютичажатклтужиуєттитяття миття тт т тт ЗД

ААСОСАССТАСАСССААССТОАСАТАОСТААСАССОТОАСОСТАТАСАААССОССАСОСТТ

715 ДО; сяяти тт тя ж няття життя тт міння житя ж ЯК

СССОВАХСАСАААОСОСОСАСАСОТАТССОСТЛАССООСАННИТОССААСАСОСАСАССОСАЄ

ДКісстсттстти котитися життя фриттт птн ви ттттс тт жтиттттнттт я ау

ПСОАОООАОСТТССЗаИйпйООАААСОССТОСТАТСТТТАТАТАСТОСТОТСОСЄСТТТСОССАС

СТСТОАСТТСАСССТОСАТТ ТТ ОТОСАТОСТСОТСАСОССООСОССАОССТАТОСАЛААМ г нини пи па п п пр т

ССТОССПСОСАСАССССТТСТТСТОСОАКСТТТЕТСТТТТСТСАСАТОТТСТТТССТ я нин на па па а пра р ТИ

ТТТАТСССССОПСАТ СТО ТКАТААСССТАТТАССОССТТТОДОТСАОСТИАСАССОСТОЮ мин а а а пот

ССОВСАСТСИААСАСОСЗАССОТАССОАОТОАСТО АОС ЛИ АЛОССЗААСАСАСААТТТА см

ТЕзрілллалянте тилом татко жлтксс стат вт нтинтиті ктлинятят в ЩО ;

ТОТОАСАТТТТСТОСТТАСОСТОСТСТАТИОССОСТТСТОСАТОСТОТОСАТОСОС1ТАТА

ВД. сс іти тт житт тити іти тт тт житт тт виття 900

ТеООБОТААСАТТТТОСОСТТСАААСОСТОТСТОТАТОСТОТТСТОСАОТТСТТСТОССА

ЗОфсснтттттти п ттттт тт життя фтттти тити життя ниття 9

СТТООТОСАЙТТТСТСАСАСАТОПСОСОССТОИ СИТО ООСАТТОАОТИСОТССАСТТТТТ Ге

Фбісснтантит вавитинияют тя няяноко Ки истячиия кат нити житт ннтняя я 102

СОСВАОСАСЮТСАСОСТСТОАС "ТАТОААТСССОССАТОТТОЛОТАСООССТТОСТОЯСТ ї- 021 вісти висох фахізуух юка масова нта жезл кктня У

ОСТТАТТСАТСТТТТООТТТТОТОСОТТСТОТСТОТСАТСТОСОТІСТОТОАТТАТАТОСЇ

ІОЖ1 сс ттт жттт сс житт вісі т ж с о 5 «ЮР о со о чу, 1. - ;» п

І 50 60 б5

1141 ссстятя тижня тт житт житт яти ження 1300

САТССАТСААТСОСТОСТТРТСОССТТСООСТАААТСАСТСТОСТОААААВАСАССАСОС

1201 сятттссттжиттт тяж жент ин житт житя 1860

САСАЙСТАТААСТТССООСАААТТСОСАО. САТСААТСАССТСТТТОАСотТостсАоссТ 1363 сясятстяя життя житя жттят нят життя житя 3330

ТАСССООТААСАССОТОССТТОТТСОСОСТОАСОАТСАОСОСССАСААСОТААТССАСАО

1321 сяттнинтлжетт тт жинт тяж життя жттятттн 1380

САССАСТСССОССАССООСАССАСВАССАТОААТССТТААССАТСАССАТаТТастТосСАЄ. 1381 сясттттит життя жити нти житя ниття жк 440

САСЕТСООСААСАТОЄТОСТСААТОСТАТТОАОСАССОСТААСААССАСАСССОТТСТТО єї ссслттятяжеття тт життя життя ж нжинттнн-- 1500

СООСООТАВОССАТОСТОАТТСАЛОТААССОССТАТТТОАТТОЛОСТТАТТАССЗАТССС

1501 стежити тя життя життя житт тт житт --- 1560

ССТОАССТСАССТААСААССТООООТСТАСОСТалостТАССОВАССАСОССССАОСТОТ 1561 петтттятяжттятттт життя житт тяж ттжелтнянтяня 1620

АСОСОАТТСОССТААСССААССОСТСОТААССАСТОЧОССАААТОСТТАСОСТСАСЬОСЯ

1621 -ссттттттжтяттт життя житт тиж тож 1680

ТТСАДСТАСССОСТСАТОСТССОСТТОССТОАСТСТСАТІТТСАТОТСТІТоСТОСОСТТ

ЗБВі сессттттижетятттт тижня няня жили нят жинтнттт нижня 1740

ТТССАТОАСААТССОСТОАОАААСТТТСОСАСССАААСТОСОЛАТТТТСОСАОТасАТОС ф741 сститятитжиттт няття тяж тяжіли тяж 1800

ААПОССТТТСООСОбОСООССАССССССТОАААСАСТСАСАСАССОСАССТОВААОЛУ ВО 1804 ----ссся свити ж тт життя 860

ЗАСОСТОТОТОТАСТУЄСТТАСТАСАОСАТСТАТСОТАСАТССАССТСОСАТСАСОСАСА

861 стесттття житт жити життя яти жеттят тт риттттн я 1920

ААСАЛАЛАДССССОСАЛАДОСАСОССТСТТАТСТОАТАТАОСТТОТТТТОТСТСАСАССО

1921 слкннеттижннняяннт житт життя життя життя 1980

САССОСААОАСОААТССОААСТОСТАСТОСТАСТАСТАТТООАТОСТОСТОАСОАТАТТТ ф98) стститттяжеттттт тиж житт життя --ж 2040 7 ТОСОСТТТОАСОСАЛООСТТАДАТААТСААТОССТСТААТСААССАТСТОААТАССССТТ Га 2041 стяжки я 2100

СОСАТАССАТАСССАТАЛАССТАТСТТОСТОСТТАТООСТТОССАТОСАААТОСТАССАТ Ге) 2103 стяжки жиниянт нт життя 2160

САССТТТТТТАТАСТТТААААСАССТОСТАААХАТОСАТТТТСАТСТАОЛАСАСТСТТАХА

2161 --стоттяежелитлият нини тяж уналиклнсветлтокаинт, 2220

САТОТТСАТТІОТТАТТСТТТОТАСССТТТОСТІТОТТТООСТТОСАССАТАСОССТТАЄ д22ї стлтттттжтнияяя життя життя життя ж 3280 сі

СТАОСТТОСОАСАЛАЛАССАТОСОСАТСАТСАСТАТСТТТАТТТАСТОССТОААТАААТТ

ФВ яетяттттт житт житт яння жнянттянт жи ня тятяз--н---ж 2340 у 7 Й ода

СОСОАТОСООССАСТСТТОСАДАСТССАССАСТОААСОАТСАСОТТААСТАСТОТСТТААА даді я житт тт вжиття фанти в го Гео)

ЗБ ООССАСТОДАСТТАССТТТТТоТСОТТТТОТАТААААААСААТАСОСТАООСАСТОСТОТ у

ЕЕ Піна пит пп нн поп вв пон по КК

ССАОССААСАСАСАААССОССАОСТТТОСАТТТАТТСТТААСОСАСТААСТСАТТОАТТТ

Фабі-сстлттттжитттяя життя вн житя няню ОБО «

ТОСТААОСОСССААВАТАТТТАААСТАТАТАТТАТАТОТАТАТТСАТАТОААТАССОТОАС ни ни и п і п в т ш-в

АСТОВСОССАТТАТТОТОСААССАДААААСАСТАСТСТОАДАДССАОЗААААСАТТТТТТ с рев в в в в в вв ТИ ч » ССТОССТОЛАТТАСАТАСОСАСТТАОССАТАТОААААСССААСААСОТСАТОАТОТТОТТ й Фбаі-сттянтт виття вини ястжиннт няття житя 5 ьо ЗТ

АРАЗАТАТТОАОСТТТТТООСОТАТОСТТОТСТСТОТТОАТТТССАСАССОАДТОАСААС рупінани нан нн нин ол нн ни -І ТСТОТТАСААТОССАТСТООТСТААСТСООСАОСАСАСААСАССАТОООСАССОСАССАВ рони по и пи и в и в в в В В (95) ОСОСОСААЛАТССАСААТТОДАТАТТОТСТСАТТСТСТОАСАССТТСАДССТТТАТТАСА рута нн пи пон пон нини нн вн о САТССАСАТАТТСТОСАААААСАСТОСАТААААТОВАТОАТТТСАТТОАОСАТТТТОААА рн в в р в п в в в

ААТАСААТСТСТТТОООСАТОСТТТААААССАТАТССАОСТТООАСТОССАААСТАТСОС

Кз Фрази ян ванни три тнттсс в витт нт 3000

САТССТОСАААСТОССТОАТСАТТАССААААСАДАСААОСТАТТСАСААОТАТОСТАСАО

80012 ит тт вин життя тт житт тятиви Зоо

СТААСАААТТАТСОСАТОСТСАТТТАСОССАТССОСТТТТТАААСАТАСОТТТСАТОССА

556 3061-----сс жест житя жит жи явно

ААТАСААООТТТОТОАСТОВОТТАТТСАТТТОСАВОВОСТОАСАСССААССАТАТАА

ГФ) др ин ння рт т жити УТ ее ші... 0 Зображення вуклеотідної послідовності біля 3 КЬ великої плазміди РМОТІ де штама О5М 6601.

літ? р ї село ! Гомологи реолікаціоних си сові |регионів плазмід рРМТРІ й | РІМТРІЄ и СІООЕІЗ (ВЗ 2 2 ж« 6 - -- --- - - -- -- - - - -- кар -- рМиТтІ

Пас й Томологи плазмід РМТРІЄ

Шь. | (огітТ и тобА)

Гомологи пар А-ген. СоїБІ- | нина 70 плазмід І оон фіг? Кирта плазмід РМИТІ. Чорні потовщення символізують попередньо знайдсні секвситні гомологи в ДНК-секвентих плазмід та інших снтеробактерій.

Позиція елевантних позиціоних міст.

Ре т яз ак «6 . 143 вро 3-22 тт зів --ш-е- . . о. . - ' . . . . Й 1,006 2.ссо 3.000 3 зін 75 14 зи еоріде т сш дроті юр тоове 1090 3.000 4.ово 5.000 , й Й

Ффег 3: Місцезнаходження для плазмід РМОТ! (а) та РМОТ2 (в)знайдених растеров. Кількість відкритих растеров, які читаються.

Зрпї

АТСТСТАСАССОАССТОСАСОСАТОСТСААСОССТОАСААСССТО СОТ ТТОБССАд істин являти ження нн вт нн 80 Ге стесТасСОАайтТААССТОСАДСАТаСОСТОТААсСТТОосСстТАССтТоТостТассСАСОСТТ вісти тин житт житя виття 100 - оСТОСТоТТОТТОоОТАСТОССТСТОТААОСТСТСТААТОСОСТСАВААОСТОСТОСТоСА ав іріяняя тя життя яти ж вт 180

ТТТССОТСАТОДАТСТСТТСАСОСТОАТАСАТААААССОСССАСААТОСАТТоТОТООСО » 181 сс житя жання нт вн о

ТСТОАТСАОСТТАТТТОССОСТОТАСТТСАТОАССТОАССАТСТТОАСССТТСТТОТАСТ спини пивна кино пон нн питний піно КОН

СОтсбАТСТТСТТСОСССССТОСОВАДОВАТСАОСТААТАСАСОСТСТТОТТСТТОвААТ кн нн в п п в « сетОААТТАТССАТАСОССвОоСТосостотоовстотттААсТостосАссАТеТоаестст шщ

Зві------т тити вини от - дО

ОСТООСТОАТТТООТТСТООСОТТООАССАСОАТАОТОССОАСАТАССАДОСТАСТОСАА в! з» доставити життя житт вн рт - - 5 ЙВО п

ТОДАТАТСОСАДАСАССАТОССАСТТААТОССАСОСТОТАСАОССАТОТСАТТОСОСАСТА дді стяжки тт життя БО

І АССОСТСТАТСТСТТТТАССТООСТОТССТТСТСТТСТТОбАТАССССТСТОТАТСТТСС

Інн нн нн ин м в и т - СТОАССТТААТТТСААВОССТСОСТОАТАСОТТТоТоСТОоСТТоТОобалатоссттсосо

Оле ется ження ння невинні тянння життя сти життя нкння яння 6600

АсестосттосоотТАототтоОосттОосСтостТТовАТТТОоСсТСТебААСТОССОСОСТАА п І 50 ббіссеннятиженнитяяня життя явити життя жиннтн ТО

АТТТААААТСТООСТОСАТАСАОСАСТОСТТТТААОСОААТАТТОвСОССАССТОССОСАТ

І а Тис витяжних вн фс яжнтя вин тннн- -ю Т8О

САССААТАСТОЗАТАСТОСАТТТОСТТТОССОТАСОАСССАСААТССООСАТОСОТААОСТ твірна нятня няння рю риття жи 5 ьо ВО

СОСБАДАТСАССССТТТАСОАТССОТААТТТСТОССТОСТСААТСААОСТЗАТТАВСССТІ

З пня пен пн пн пн нн в в в В ьо

ТООТААТОоосттоСОоСстТОоСсСстТОостТоТТТОоТТОоСбАВОСААОСТСАТТАСАООООСТТААТО ка ви ми у оо о вт

СТСОБСОАТТАОСАСООТСАТТСОВСТСОСОТААСССААсСссоТсАТТООТЗАСОСТТТ во аб1-----сяи вияв я житя т ис ж 10

СССАТОССТТААСАСвАСОбСООТСАОССОбАТСАДАСТИАОСТТОТАСОоСОоТТТТОовОоС ' ебіп. 4 бо

021 сс вистелити жити виття виття 1080

ТСТОСААТТССАТОТТОООСАТААСАААДАТТСААТТСААСАСОСССТТТОТОСТОАТОТТ пен нин ни в п о ЕТ

ЗАДОССАВАВОСАСОСАТАСТООТСТТТАТСТАОАССОСТСАТСААТОТСТОСТоОСАТТ

УТ а а т

САТССАТСААТСССТОСТТТТСОССТТОБОСТАААТСАСТСТОСТОАДАААСАСАОСАСОС

1201 вин ж тки 1

САСАБОТАТААСТТООООСАААТТСОСАС САТСААТСАССТоТТТоАСотостоАсооТ кін нн а а

ТАССССОТААСАСССТоОСТТОТТСОСОСТСАСОАТСАСОБСССАСААСОТААТОСАСАС ку нн п В В а

ОАССАСТОССОССАСОООСАССАСОАССАТОААТОСТТААСОАТСАСОАТОТТОаСТОСАЮ 138ресссття вия житя няння життя життям 1440

САСІТСОСОСАДСАТОП ОСТСААТОСТАТТОАОСАССОСТААСААССАСАСоСсоТТеТТо 1дйреттят нти житя житт фі ттняннжиняя тяж 41500

СОБСООСТААСССАТОСТОАТТСААСТААСОСОСТАТТТОАТТОАОСТТАТТАСССАТОСС

1501 сс життя ни вості ст нон висонятяна життя БО

ОСТОАССТОАССТААСААоСсТоСОоСТоТАСОоСТадосттАСоСсАССАССсеССвАЄСТОТ поп и и нет

АСОСОАТТСОССТААСССААСООСТоОТААССАСТСООССАААТОСТТАСОЗТСАСАССВ

Ібргссссят свити ниття життя життя 1680

ТТСААБТАОсСоОсСтТОоАТОоСТоСОоСсттооОТОАОТотОАТТТТОАтСтотттооТОоСОСстт іввтос ляти фянст т нта тт вит 1740

ТТССАТОАСААТССОСТОАОАААСТТТООСАСССАДАСТОСОААТТТТСОСАСТОСАТОС нини и и п в а

АдасостттовоовобсоосоАосСоСссСтТОАААСАВТСАСАОАСОбСАССТОВААСАВСС с

ІВ стиля вия винними ження янтя винт яння 1850

ОАСОСТОТОТОТАСТОСТТАСТАСАОСАТСТАТООТАСАТООАСТСОСАТСАСОСАСА

1861 сс ження житя вия факт життя 1820

ААСАДАДАСССССОСАТАОСАСООСТОТТАТСТОАТАТАСОСТТОТТТТОоТоТСАСАСОО пан нн ни п а п а

САВСООААСАОСААТОСОААСТастАСТОСТАСТАСТАТТОСАТОСТасСтТОАСОАТАТТТ 1881 няння жи жиятя яння житя яння 9040

ТОССОСТТТСАСССАДАСОСТТАДАТААТСААТОССТОТААТСААСОАТСТСААТАСОССТТ.

Ф041-- ст вестник

СОСАТАССАТАСОВАТТААСОТАТСТТОСТООТТАТООСТТОСОАТОСАААТООТАОСАТ доїти житт ження виття фанти тв няня 2160 го

САССПТТТТТАТАСТТТААААСАССТОСТАААТАТССАТТТТСАТСТАСААСАСТОТТАА дві-три нти нянні З Г ;» п

САТОТТСАТТТОТТАТТОТТТОТАССОТТТОСТТТОТТТООСТТОСАОСАТАСОССТТАЄ

202з сс кт вжи няяняня жності яти житя 2280

СТАВСТТССОАСАДАДАССАТОСОСАТСАТОАСТАТСТТТАТТТАСТОССТОААТАААТТ рен нн и и п В п в п в ЕК

ТОСТТААСТСААСАААТСССТТААААССАСТССАСАТАТТСТТААСАДААТСАСТООСАС хни нн и ин п п в в вв ЕЕ

САТТТТТТАТССАТОСТТТАТАСССААДААААСОСТСОААААСАТТТТООТССТАСАТАА рин нн нн и п в в в о в Тс

АТАСССТАТСОССАССАААДАСААСАСАТОССТТАССАТСААТАСАААТСАТАТСТТОАТ

Ф461-------и ян вин виття жнив С Б 706 СТАСТСОАСАТАСТТСТТТТТТОСТАДАСССАТАААААТТАТТТТТСТТТСТТОАТААСТ руни и ни в и п в п т

ТТТОААСТОСАТАТТОСТТСТТОТАТАТОСТТАТАСААТТОТОСТСАТТАТТСТТАСТСА рег кв о о о о пет

АААСОДАДАТСАТТОДСТСААСТТТТОАТАТТАСАТССАСАСТОТСАДААТСААСААТТО два жити житт виття житя тяж тя ТЮ

СБАТАТТТТСАТТОССАТСАССАССАДАСССАССАТСАААСАСААТОССАСТСАСАДАСТ

2701 сс вия явити тя тин житя 280

ТСАТТТОСТСАТТАТСАТАСТОСТСАОСАТСАТТТАААААТОАААТОСТСТТОСТОСОСТ нин ни п а і В

САСТТАСТОТАТТААСАТСТОАТАСТАТСАСТААСССОАТТТТСТАААТСАСАТАТАСТТТ

201 сти вияви жи киян ж --- ОВО

ТСТТТАТСАСАТТАТСААТААТОСАСТОТТТТАССТОАСТОТСАТТТТТААСОАТОССАА

2ВВ1 се вт живи тяктжтя сс - ж В8АО

ТТТТАТАССТААААСАСТОСТТАССАСССОСТТТАССТТТАТТТТТАААОТТАААСТААО дарств ян жиннятт ян житя життя риття т ОО З0О00

ТОТОСААТОТААСАТСОТТААТАТСАСААТСААААТОСТТАТАСАСТТСТААААЄСТСТТ

ЗОдір я виянсят жинутя фвититит нт фитнятинт я фисн тних ОБО сі

СТОСТТТТСТТСАТТАТОСТССАААССАТСААЗАТСТІДАВОСАТССТСАСТСАТСАТО

Збвіссесстяссяст тини виття житт тя ння життя 3120 Го)

АТТОСТСТАТСАТТТТТПОСВОСААСОТТАААТАатТСАТСАТСАТТТАТАастТСтТОАТАА

ЕП; Пенн мн нн пн п нн ШЕ

ААТСАТТТТСТТТТАТТАААТСТТТАСАТААААСТАТСАААСТСАСССТСТТОСОТТТТТ

Коен в п в п в Ге!

ІбСТТССАТТАОСТАССАСАСТОТААСТААТСТТАТАСОСАСАДАСАТТАААТААТОАС

Зріст анти нти тт внот тт фін зи з 3300 у

ААТСТТООСТТОСАСТОААТТСТТТТТОТТТТОАТОТОСААААААСО САСОАТААТСАДА

3301 --сст стін жетя тяж нят виття жн-н- -- - -ко 3380 (ав)

АСАДАСАДААААТ ТААСТАТАТТТСАТОСТТТОСТТАААТСАСТАДАСАССААСОССАТТ со

Забіли фони ти фитт тя виття ЗД

АТОТАССТТСАТТ"АААААСАААСАТАСТСАССОСАТТОТТТТТТАСАТОАААСОАССТТТ ч-

Здгі-ссстн тт жи тя няття я няття життя жит тин ЗВО

ААСТТТСТТОАСАСООСАССОСАСТОТААОТТТТТСАДААСССАТОВАТАССАДАТОТАТ

Зав: ссссссяжвияявинятжняттжтяяяя житя я БА

СТАТАЛОААСААСТТААЛАТСААВОССССОСАСАТСАСТОВССТОВАТАСАСАААВТСТТ . « кни в нн в в ТІ

ААТСТОСТАТТТОААТАСТОСАСТАСОСАТТСАААТТТТССАТССОСВССАСААСАССАА с Збрі сяяли життя життя життя нт життя жк 3660 . - САСАТОССССТТАТСТАВААСАСАССАТАССТТАТСААТАССАСААЛАДТАТАТТСТТАТО й дбві тятиви жітті 3720

ОСТАТаАААТАВАААСААСАТТСАТААСАСАТАСАТТСТААТТТТСАТТТТТОТААААТТ уж п п пи Ви т -І ТОСТОТАССАССТТСАТСТАСТТАТТОССТАААСАААТССАТТСТОСАТСТСТААСТТТОО

Зтв| сттлититі життя жи нти потоп и ототожнити ЗВО г) БССТТССАССАССАСАССТТІ1ТТТТТССАССТТСАЄССТОААТТТСАСААСТАТОТОТТТ

Звді сяттсяттяжтти сля ннжаяя ня стяжки неюжнтт ння иженксяя--ею 3909

І ав | СІТТААСАТАСТСТТСААДОССААССТСТСТААОСТТСТТАСТТОТССАСТТАСССАСАС 301 сс жия ян жи ння життя вия тини ження 3960 -І 20 ТТТТАССААТТСССАТСАСТТССТТСТОСТСТАААССТОСОСАСААСТОСАССТТСТАСС тини на а и а п а п тяг

Із СТУТАБСОСОТТСААТОСАСОСТТОТАБССАТТООТСАТАСТОСОПОСССАОСІТТООСОСА долі ся снтя женні тро тт риття ти тт фиттннняся 408О

ТАССОСОСТААССССАСТТОССОСТТТТАТОСААСАСССТОСАСТТАССОССТАААСССЯТ

ДОВі ясні тя вин житя тн ятя ут я 4140

АСТОСООСАОСАТТТСОСОСТСАТТОЯСТОСОССААОСТССАССТААТССОСТААССАСТ дІд1 ся виття жали пт жинт тт тини життя 4200

САЛАСОСТАТАСАССТСТасстоссАСАСОСТОАТСТС-ССАСТОСАССТОСТЕСОСАТТСТ

ГФ) 4201 --стттт вн виття 406

ТОСАДАТТАССССТСААТАССССОСАТСТОСОСССААТТТТТТАСССАССССАТТСТОСА ко дові сстт няня жияя вжи тт тнтт тн вятняння 4320 тоссооссЗОСссСтТАТТТАДСОСССОСАССТООАССАТСССОСОСОБТАССТАССОСССТАТ

Ааоірросттняя тижня жнят нн 4380 60 ССААСОСАТАСААСАССТОАССАТОТСССТІСТОССОСТІТТТСАТОСТоАОТоТоооСЬ

ДВІ столи життя житя життя жттинн-- ж 4440

САІЗОТОСССССАСАТСООСССААТСААТСОСОССТОСООСТСЕСТОСАССТСАВАССААА дадф|р стяжки тт житт жити життя 4500

ОССАСТАСАТООССТОВООСТОАТТАВАСТОСАТОТАТТТТОССАССАСАССАСОСТСТТ в5 4501. ссстттттт життя житя тижня книжн 4560

ТАССПССААТОССДАСАССАААСТОТАААТСАТСССАЗААСТАСОССТТСТОООСТААСО дб) тт життя жит Я20

ССТОСТІАААЛААССОСТТААДоССТОАТТАТОСААБОСТОССАСССТТАТССССОООСТОТ

Екшн а в а п п в п

ТОУГТЕТОСАСОСТОСАТОСТОСТААТАВССТТУСТКАСОГТТОССАССТА СОР ОААТЬТСА

468, нн нн и и В В ЕТ

ТСТОСОСТССССАААСТАСАССАТСАТТТООбООСТТТОТТТТТТСТОССАСТААСТТАЄ дтафросссстянт життя життя нт няння 4800

ВІСТСААСААСОСТТТТТСТСАТСССССАСААТСССТТАТТОСТОСТТСТТСТоОСАССо

ФВОр яння вини жжитяятяжтяки нти життя виття 4860

СТТТАСОСТСАТАСТАСТЕСТТОТАСАТАСАСТТЗТСАСТАСАТСААСАССТСАСАТСАТ

710 АВбр яння я я я я т я т т т т т ьо 653

ООССАССАТТААТАТТСОСАТСВЗАТСАССАССТОААААСССОСТСТТАТОССОСАСТОСА

4991 сс тт виття кити тт житя - тю 980

АААБСТОООССТААСОССОСТоССАССТТСТОСОССАВАСАСТОСААТАТОСТООССССАААС.

ДОдДі сятястяяя ження ж ванн жи няння рин - ян 5040

СОСАССТТТбССОТІССАБСАСОТТТТОСТОСАССОАССАТОАТОССОАТТТСАТСОСТАТ

БОДІ сс и вияви ння няня нт житя 5100

СУТТСБОБАТСОТСТОСААДААСССАСАСоСОЗСОСОТВАДООТОТСАСТОСАТОАОСТАТ 501 ясяияятяженяяяяття тя жив ви я ль 5І16О

ААССТТОААТТТОАТСССОЗАОСССТЗААСАВІІСААТІВООСААОСТОСОСАТОАТОТО

Вібфрятяннянинжияняняняжннняяжи жи ж и Я 5 020

СОТСТОСАСТТСААСАВААААСТОСАССАОСТТСТАСААСАССССОСОСАТСОСАТААААА

Здд1Їр тяж жи няння житя життя ЕВО тТОСОССТОСОАСАОСТОСАТСАСТОСТАСААААТСВАССТОСОТОСАТОСОСТТАТОССТТ 528) сянтянттткиттття тт вия стики жна 5340

ООТСТАТСАССТТОСССАТСАААССАТТАССОТАТІССТОСТОССОСТООСТАДОСОС

5341 ссятяняяяжитя яти жиня няня киян няня життя яви 5400

САССОТТСТОССОСТТАССАТОСОССССБАТАААСОСТТАТАААСТСАТОСССсТоАССоС 5аб1 ДДТ ня 5450 с

САСААТАССОСТОТТСОТОСОСТТОССТААТТОСТОСААЗСООСОСАСТОТТОСТОТТТАА Ге)

Баб| осяяння кт жати вн яню 5520 соІТСтТоОАСТТОСтТССОССААСоСсСоСтТоАСТТ 5521 стяжки - 5552

Філ: Зображення нуклеотідної послідовності біля 5 КЬ великої плазміди. РМИТО

Євгаттез О5М 6601 с

Гомологи реплікаціоних т різних о СоїБ1- че т 0 плазмід ук БТ пи шо Щ о

Й рМИТ2 Хв -- Й Гео) нн у

Гомологи для | вен хнй мобілізаціоних регіонів Сеоїг1. плазмід ни «

Й сг, 5: Реплікаційна карта плазмід РМОТІ. Чорні потовщення символізують - попередньо знайдені секвентні ДНК-секвентні гомологи плазмід в ДНК-секвентах с та інших єнтеробактерій. Позиція релевантних позиціоних міст. . а

Claims (1)

1. Формула винаходу

   1. Плазміда, яка містить послідовність ДНК, представлену на Фіг.1. ОО 2. Плазміда за п.1, яка відрізняється тим, що її використовують в мікробіологічних дослідженнях та/або в іп о мікго діагностиці.

   З. Плазміда за п.1, яка відрізняється тим, що її використовують як вектор експресії. -І 20 4. Плазміда, яка містить послідовність ДНК, представлену на Фіг.4.

   з 5. Плазміда за п.4, яка відрізняється тим, що її використовують в мікробіологічних дослідженнях та/або в іп мікго діагностиці.

   6. Плазміда за п.4, яка відрізняється тим, що її використовують як вектор експресії.

   7. Молекула ДНК, яка має нуклеотидну послідовність, представлену на Фіг.1.

   8. Молекула ДНК за п.7, яка відрізняється тим, що її використовують в мікробіологічних дослідженнях ГФ) та/або в іп міїго діагностиці. юю 9. Молекула ДНК за п.7, яка відрізняється тим, що її використовують як вектор експресії.

   10. Молекула ДНК, яка має нуклеотидну послідовність, представлену на Фіг. 4.

   11. Молекула ДНК за п.10, яка відрізняється тим, що її використовують в мікробіологічних дослідженнях 60 та/або в іп міїго діагностиці.

   12. Молекула ДНК за п.10, яка відрізняється тим, що її використовують як вектор експресії. Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2005, М 6, 15.06.2005. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і бо науки України.