CZ305324B6 - Imunogenní prostředek, způsob jeho přípravy, vakcína s jeho obsahem a léčivo obsahující pneumokokový polysacharidový antigen v kombinaci s proteinovým antigenem Streptococcus pneumoniae - Google Patents
Imunogenní prostředek, způsob jeho přípravy, vakcína s jeho obsahem a léčivo obsahující pneumokokový polysacharidový antigen v kombinaci s proteinovým antigenem Streptococcus pneumoniae Download PDFInfo
- Publication number
- CZ305324B6 CZ305324B6 CZ2003-756A CZ2003756A CZ305324B6 CZ 305324 B6 CZ305324 B6 CZ 305324B6 CZ 2003756 A CZ2003756 A CZ 2003756A CZ 305324 B6 CZ305324 B6 CZ 305324B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- protein
- polysaccharide
- antigen
- pneumococcal
- immunogenic composition
- Prior art date
Links
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 127
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 127
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 118
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 title claims abstract description 99
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 title claims abstract description 99
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 95
- 239000000427 antigen Substances 0.000 title claims abstract description 72
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 58
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 title claims abstract description 40
- 241000193998 Streptococcus pneumoniae Species 0.000 title claims abstract description 38
- 229940031000 streptococcus pneumoniae Drugs 0.000 title claims abstract description 37
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 25
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title abstract description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 6
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 47
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 206010033078 Otitis media Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 9
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 149
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 140
- 101710188053 Protein D Proteins 0.000 claims description 50
- 101710132893 Resolvase Proteins 0.000 claims description 50
- 102100037840 Dehydrogenase/reductase SDR family member 2, mitochondrial Human genes 0.000 claims description 48
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 claims description 12
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 claims description 7
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 6
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims description 5
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 claims description 5
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims description 5
- 239000000411 inducer Substances 0.000 claims description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 claims description 3
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 3
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 3
- 229960001005 tuberculin Drugs 0.000 claims description 3
- 108010071134 CRM197 (non-toxic variant of diphtheria toxin) Proteins 0.000 claims description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 137
- 230000004224 protection Effects 0.000 description 34
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 22
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 17
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 16
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 16
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 15
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 13
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 12
- 101100453077 Botryococcus braunii HDR gene Proteins 0.000 description 11
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 11
- 230000014207 opsonization Effects 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 10
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 10
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 10
- VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 4-Dimethylaminopyridine Chemical compound CN(C)C1=CC=NC=C1 VHYFNPMBLIVWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 8
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 8
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 8
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 208000035109 Pneumococcal Infections Diseases 0.000 description 7
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 7
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 7
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 7
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 7
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 7
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 7
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 108091016312 choline binding proteins Proteins 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 6
- 210000003622 mature neutrocyte Anatomy 0.000 description 6
- 229940035032 monophosphoryl lipid a Drugs 0.000 description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 6
- 239000006150 trypticase soy agar Substances 0.000 description 6
- 101710164918 Choline-binding protein Proteins 0.000 description 5
- 108010060123 Conjugate Vaccines Proteins 0.000 description 5
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 101710099976 Photosystem I P700 chlorophyll a apoprotein A1 Proteins 0.000 description 5
- 208000009362 Pneumococcal Pneumonia Diseases 0.000 description 5
- 206010035728 Pneumonia pneumococcal Diseases 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 5
- 229940031670 conjugate vaccine Drugs 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 5
- 208000022218 streptococcal pneumonia Diseases 0.000 description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 241000588655 Moraxella catarrhalis Species 0.000 description 4
- 238000011795 OF1 mouse Methods 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- 101150002054 galE gene Proteins 0.000 description 4
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000001320 lysogenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 229940031937 polysaccharide vaccine Drugs 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 4
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 4
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 4
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 4
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 4
- 229960000549 4-dimethylaminophenol Drugs 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100420868 Anuroctonus phaiodactylus phtx gene Proteins 0.000 description 3
- 108010077805 Bacterial Proteins Proteins 0.000 description 3
- 101710128560 Initiator protein NS1 Proteins 0.000 description 3
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 3
- 101710144127 Non-structural protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 3
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 3
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 108010021711 pertactin Proteins 0.000 description 3
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 3
- 229940124733 pneumococcal vaccine Drugs 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 235000019624 protein content Nutrition 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 3
- 229910017119 AlPO Inorganic materials 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 2
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 2
- 101000597577 Gluconacetobacter diazotrophicus (strain ATCC 49037 / DSM 5601 / CCUG 37298 / CIP 103539 / LMG 7603 / PAl5) Outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 2
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 2
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 2
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 2
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 2
- 229940124858 Streptococcus pneumoniae vaccine Drugs 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 229940037003 alum Drugs 0.000 description 2
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N d-alpha-tocopherol Natural products OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 210000003887 myelocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 2
- 230000003571 opsonizing effect Effects 0.000 description 2
- 230000000625 opsonophagocytic effect Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 210000001539 phagocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940031960 pneumococcal polysaccharide vaccine Drugs 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 229960001295 tocopherol Drugs 0.000 description 2
- 229930003799 tocopherol Natural products 0.000 description 2
- 235000010384 tocopherol Nutrition 0.000 description 2
- 239000011732 tocopherol Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000002627 tracheal intubation Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 2
- PMTMAFAPLCGXGK-JMTMCXQRSA-N (15Z)-12-oxophyto-10,15-dienoic acid Chemical compound CC\C=C/C[C@H]1[C@@H](CCCCCCCC(O)=O)C=CC1=O PMTMAFAPLCGXGK-JMTMCXQRSA-N 0.000 description 1
- NJNWCIAPVGRBHO-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxyethyl-dimethyl-[(oxo-$l^{5}-phosphanylidyne)methyl]azanium Chemical group OCC[N+](C)(C)C#P=O NJNWCIAPVGRBHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010068327 4-hydroxyphenylpyruvate dioxygenase Proteins 0.000 description 1
- OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[4-[(2r)-2-hydroxy-2-(4-methyl-1-oxo-3h-2-benzofuran-5-yl)ethyl]piperazin-1-yl]ethyl]-4-methyl-3h-2-benzofuran-1-one Chemical compound C1=C2C(=O)OCC2=C(C)C([C@@H](O)CN2CCN(CC2)C[C@H](O)C2=CC=C3C(=O)OCC3=C2C)=C1 OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 1
- 208000036762 Acute promyelocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000008190 Agammaglobulinemia Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 101100293180 Arabidopsis thaliana MYB28 gene Proteins 0.000 description 1
- 201000001178 Bacterial Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 101100170173 Caenorhabditis elegans del-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282461 Canis lupus Species 0.000 description 1
- 101100507655 Canis lupus familiaris HSPA1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 101150036540 Copb1 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000007064 DNA hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004533 Endonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101100402127 Escherichia coli (strain K12) moaA gene Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101100406392 Haemophilus influenzae (strain ATCC 51907 / DSM 11121 / KW20 / Rd) omp26 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 101710133291 Hemagglutinin-neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 206010020983 Hypogammaglobulinaemia Diseases 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 238000003231 Lowry assay Methods 0.000 description 1
- 238000009013 Lowry's assay Methods 0.000 description 1
- 208000032376 Lung infection Diseases 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100020366 Mus musculus Krtap14 gene Proteins 0.000 description 1
- 125000001429 N-terminal alpha-amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101100410801 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) pxr-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- PMTMAFAPLCGXGK-UHFFFAOYSA-N OPDA Natural products CCC=CCC1C(CCCCCCCC(O)=O)C=CC1=O PMTMAFAPLCGXGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 108700022034 Opsonin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 101100028078 Oryza sativa subsp. japonica OPR1 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 PRP polysaccharide Chemical class 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 101710183389 Pneumolysin Proteins 0.000 description 1
- 101710188306 Protein Y Proteins 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 241001454523 Quillaja saponaria Species 0.000 description 1
- 235000009001 Quillaja saponaria Nutrition 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010034634 Repressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000009661 Repressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 description 1
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 1
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical compound [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000029662 T-helper 1 type immune response Effects 0.000 description 1
- 108010031133 Transferrin-Binding Protein A Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710151579 Zinc metalloproteinase Proteins 0.000 description 1
- FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N [2-[3-[6-[3-[(5R,6aS,6bR,12aR)-10-[6-[2-[2-[4,5-dihydroxy-3-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]ethoxy]ethyl]-3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl]oxy-5-hydroxy-2,2,6a,6b,9,9,12a-heptamethyl-1,3,4,5,6,6a,7,8,8a,10,11,12,13,14b-tetradecahydropicene-4a-carbonyl]peroxypropyl]-5-[[5-[8-[3,5-dihydroxy-4-(3,4,5-trihydroxyoxan-2-yl)oxyoxan-2-yl]octoxy]-3,4-dihydroxy-6-methyloxan-2-yl]methoxy]-3,4-dihydroxyoxan-2-yl]propoxymethyl]-5-hydroxy-3-[(6S)-6-hydroxy-2,6-dimethylocta-2,7-dienoyl]oxy-6-methyloxan-4-yl] (2E,6S)-6-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-methylocta-2,7-dienoate Chemical compound C=C[C@@](C)(O)CCC=C(C)C(=O)OC1C(OC(=O)C(\CO)=C\CC[C@](C)(O)C=C)C(O)C(C)OC1COCCCC1C(O)C(O)C(OCC2C(C(O)C(OCCCCCCCCC3C(C(OC4C(C(O)C(O)CO4)O)C(O)CO3)O)C(C)O2)O)C(CCCOOC(=O)C23C(CC(C)(C)CC2)C=2[C@@]([C@]4(C)CCC5C(C)(C)C(OC6C(C(O)C(O)C(CCOCCC7C(C(O)C(O)CO7)OC7C(C(O)C(O)CO7)O)O6)O)CC[C@]5(C)C4CC=2)(C)C[C@H]3O)O1 FHICGHSMIPIAPL-HDYAAECPSA-N 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical class N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003497 anti-pneumococcal effect Effects 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000012993 chemical processing Methods 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M cyanate group Chemical group [O-]C#N XLJMAIOERFSOGZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000151 deposition Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000000249 desinfective effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012149 elution buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700039582 histidine triad Proteins 0.000 description 1
- 208000033447 immunodeficiency 67 Diseases 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000002480 immunoprotective effect Effects 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 208000022760 infectious otitis media Diseases 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000012067 mathematical method Methods 0.000 description 1
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 1
- 229940124731 meningococcal vaccine Drugs 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 210000001237 metamyelocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000000680 phagosome Anatomy 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229960001973 pneumococcal vaccines Drugs 0.000 description 1
- 229920002627 poly(phosphazenes) Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003672 processing method Methods 0.000 description 1
- 210000004765 promyelocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 208000007056 sickle cell anemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000010911 splenectomy Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N tributyl phosphate Chemical compound CCCCOP(=O)(OCCCC)OCCCC STCOOQWBFONSKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical class [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 1
- 210000003934 vacuole Anatomy 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
- A61K39/092—Streptococcus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/095—Neisseria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
- A61K39/13—Poliovirus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/29—Hepatitis virus
- A61K39/292—Serum hepatitis virus, hepatitis B virus, e.g. Australia antigen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
- A61P27/16—Otologicals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Imunogenní prostředek, který obsahuje alespoň jeden polysacharidový antigen Streptococcus pneumoniae a alespoň jeden proteinový antigen Streptococcus pneumoniae vybraný ze skupiny sestávající z PhtA, PhtD a PhtB, přičemž polysacharidový antigen je prezentován ve formě konjugátu polysacharid-proteinový nosič. Způsob jeho přípravy, který zahrnuje kroky: výběr jednoho nebo více pneumokokových polysacharidových antigenů; výběr jednoho nebo více pneumokokových proteinových antigenů ze skupiny sestávající z PhtA, PhtD a PhtB; a jejich smísení, kde polysacharidový antigen je ve formě konjugátu polysacharid-proteinový nosič. Vakcína s obsahem tohoto imunogenního prostředku. Použití pneumokokového polysacharidového antigenu v kombinaci s proteinovým antigenem Streptococcus pneumoniae a popřípadě Th-1 indukujícím adjuvantem pro výrobu léčiva pro prevenci nebo léčení zánětu plic u pacientů starších 55 let, nebo prevenci nebo léčení zánětu středního ucha u kojenců nebo batolat.
Description
Předkládaný vynález se týká imunogenního prostředku, způsobu jeho přípravy, vakcíny sjeho obsahem a léčiva obsahující pneumokokový polysacharidový antigen v kombinaci s proteinovým antigenem Streptococcus pneumoniae. Zejména se vynález týká vakcín obsahujících pneumokokový polysacharidový antigen, typicky pneumokokový polysacharidový konjugovaný antigen, formulovaný s proteinovým antigenem od Streptococcus pneumoniae a případně s Thl-indukujícím adjuvantem.
Dosavadní stav techniky
Streptococcus pneumoniae je Gram-pozitivní bakterie odpovědná za významnou morbiditu a mortalitu (zejména u mladých a starých jedinců), způsobující invazivní onemocnění jako je pneumonie, bakteremie a meningitida, a onemocnění asociovaná s kolonizací, jako je akutní otitis média. Výskyt pneumokokové pneumonie v US pro jedince starší 60 let je 3 až 8 na 100 000. Ve 20% případech tato infekce způsobuje bakteriemii a další manifestace, jako je meningitis, s mortalitou blížící se 30 %, i při antibiotické terapii.
Pneumococcus je enkapsulovaný chemicky vázaným polysacharidem, který určuje serotypovou specificitu. Existuje 90 známých serotypů pneumokoků a kapsula je pro pneumokoky základní determinantou virulence, protože kapsule nejen chrání vnitřní povrch bakterie před komplementem, ale je též slabě imunogenní. Polysacharidy jsou T-independentní antigeny a nemohou být zpracovány nebo prezentovány na MHC molekulách, aby mohly interagovat s T-lymfocyty. Nicméně, mohou stimulovat imunitní systém alternativním mechanismem, který zahrnuje zesítění povrchových receptorů na B-lymfocytech.
V několika experimentech bylo prokázáno, že ochrana proti invazivnímu pneumokokovému onemocnění nejsilněji koreluje s protilátkami specifickými pro kapsulu a že ochrana je specifická pro serotyp.
Vakcíny na bázi polysacharidového antigenu jsou dobře známé v oboru. Mezi čtyři vakcíny, které byly schváleny k použití, patří Vi polysacharid Salmonella typhi, PRP polysacharid Haemophilus influenzae, tetravalentní meningokoková vakcína složená ze serotypů A, C, W135 a Y, a 23valentní pneumokoková vakcína složená z polysacharidů odpovídajících serotypům 1, 2, 3, 4, 5, 5B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 1 IA, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 20, 20F, 23F a 33 (což tvoří alespoň 90 % izolátů pneumokoků z krve).
Poslední tři uvedené vakcíny indukují ochranu před bakteriemi způsobujícími respirační infekce, které mají závažnou morbiditu a mortalitu u kojenců, ale nebyly schváleny pro použití u dětí mladších dvou let, protože jsou v této věkové skupině neadekvátně imunogenní (Peltola et al., 1984, N. Engl. J. Med. 310: 1561 až 1566). Streptococcus pneumoniae je nejčastější příčinou invazivních bakteriálních onemocnění a otitis média u kojenců a mladších dětí. Obdobně, u starých jedinců dochází ke špatné odpovědi na pneumokokové vakcíny [Roghmann et al., (1987), J. Gerontol. 42:265 až 270], což je důvodem zvýšené incidence bakteriální pneumonie v této populaci [Verghese a Berk, (1983) Medicíně (Baltimore) 62:271 až 285].
Strategie, které byly navrženy pro překonání chybějící imunogenicity u dětí, spočívají v navázání polysacharidu na velké imunogenní proteiny, které napomáhají v indukci T-lymfocytů a které indukují imunologickou paměť k polysacharidovému antigenu, se kterým jsou konjugované.
-1 CZ 305324 B6
Vakcíny obsahující konjugovaný pneumokokový glykoprotein jsou v současnosti hodnoceny z hlediska bezpečnosti, imunogenicity a účinnosti v různých věkových skupinách.
23valentní nekonjugovaná pneumokoková vakcína vykazovala různou klinickou účinnost, od 0 do 81 % (Fedson et la. (1994) Arch Intem Med. 154: 2531 až 2535). Zdálo se, že účinnost souvisí s rizikovou skupinou, která je imunizována, jako jsou staří pacienti, pacienti s Hodginovou nemocí, po splenektomii, se srpkovitou anemií a agammaglobu-linemií (Fine et al. (1994) Arch Intem Med. 154:2666 až 2677), a také s manifestací onemocnění. 23valentní vakcína nevykazuje ochranu před pneumokokovou pneumonií (u některých rizikových jedinců, jako jsou staří lidé) a před otitis média.
Proto stále trvá potřeba vylepšené pneumokokové vakcíny, zejména takové, která by byla více účinná v prevenci nebo zmírnění pneumokokových onemocnění (zejména pneumonie) u starých jedinců a malých dětí.
Předkládaný vynález poskytuje takovou zlepšenou vakcínu.
Podstata vynálezu
Prvním aspektem předmětu vynálezu v hlavním provedení i) je imunogenní prostředek, který obsahuje alespoň jeden polysacha-ridový antigen Streptococcus pneumoniae a alespoň jeden proteinový antigen Streptococcus pneumoniae vybraný ze skupiny sestávající z PhtA, PhtD a PhtB, přičemž polysacharidový antigen je prezentován ve formě konjugátu polysacharid-proteinový nosič.
Přednostní provedení tohoto aspektu předmětu vynálezu zahrnují zejména ii) imunogenní prostředek podle provedení i), v němž je proteinový antigenem je PhtD;
iii) imunogenní prostředek podle provedení ii), který dále obsahuje Ply;
iv) imunogenní prostředek podle kteréhokoliv z provedení i) až iii), kde proteinový nosič je vybrán ze skupiny zahrnující: difterický toxoid; tetanický toxoid; CRM197; přílipkový haemokyanin, KLH; proteinový derivát tuberkulinu, PPD; a protein D z H. influenzae;
v) imunogenní prostředek podle kteréhokoliv z provedení i) až iv), kde vakcína obsahuje alespoň čtyři pneumokokové polysacharidové antigeny z různých serotypů;
ví) imunogenní prostředek podle kteréhokoliv z předchozích provedení, který dále obsahuje adjuvans;
vii) imunogenní prostředek podle provedení vi), kde adjuvans zahrnuje sůl hliníku;
viii) imunogenní prostředek podle provedení vi), kde adjuvans je přednostním induktorem TH1 reakce;
ix) imunogenní prostředek podle provedení viii), kde adjuvans zahrnuje alespoň jedno adjuvans z následující skupiny: 3D-MPL, saponinové imunostimulační činidlo nebo imunostimulační CpG oligonukleotid;
x) imunogenní prostředek podle provedení ix), kde adjuvans obsahuje nosič vybraný ze skupiny zahrnující: emulzi olej-ve-vodě, liposomy a sůl hliníku.
Druhým aspektem předmětu vynálezu (provedení vynálezu xi)) je imunogenní prostředek podle kteréhokoliv z předchozích provedení i) až x) pro použití jako léčivo.
Třetím aspektem předmětu vynálezu (provedení vynálezu xi i)) je vakcína, která obsahuje imunogenní prostředek podle provedení i) až x).
-2CZ 305324 B6
Čtvrtým aspektem předmětu vynálezu (provedení vynálezu xiii)) je použití pneumokokového polysacharidového antigenu v kombinaci s proteinovým antigenem Streptococcus pneumoniae vybraným ze skupiny sestávající z PhtA, PhtD a PhtB a popřípadě adjuvantem indukujícím TH1 reakci pro výrobu léčiva pro prevenci nebo léčení zánětu plic u pacientů starších 55 let, přičemž polysacharidový antigen je konjugován k proteinovému nosiči.
Pátým aspektem předmětu vynálezu (provedení vynálezu xiv)) je použití pneumokokového polysacharidového antigenu v kombinaci s proteinovým antigenem Streptococcus pneumoniae vybraným ze skupiny sestávající z PhtA, PhtD a PhtB a popřípadě adjuvantem indukujícím TH1 reakci pro výrobu léčiva pro prevenci nebo léčení zánětu středního ucha u kojenců nebo batolat, přičemž polysacharidový antigen je konjugován k proteinovému nosiči.
Šestým aspektem předmětu vynálezu (provedení vynálezu xv)) je způsob přípravy imunogenního prostředku podle kteréhokoliv z provedení i) až x), který zahrnuje kroky: výběr jednoho nebo více pneumokokových polysacharidových antigenů;
výběr jednoho nebo více pneumokokových proteinových antigenů ze skupiny sestávající z PhtA, PhtD a PhtB; a smísení uvedeného polysacharidového antigenu a proteinového antigenu s vhodným excipientem;
přičemž polysacharidový antigen je prezentován ve formě konjugátu polysacharid-proteinový nosič.
V dalším popisu je vynález příležitostně objasňován v širším kontextu, než odpovídá rozsahu, který je skutečně předmětem tohoto vynálezu. Výslovně se proto uvádí, že do rozsahu vynálezu spadají jen aspekty explicitně uvedené výše, a jen ty jsou také předmětem připojených patentových nároků. Následující popis má jen ilustrativní význam.
Dále je uveden význam zkratek používaných v podlohách:
MHC - hlavní histokompatibilitní komplex
PRP - polyribosylribitolfosfát
PMN - polymorfonukleámí leukocyty
OMPC - proteinový komplex vnější membrány
CDAP - l-kyan-4-dimethylaminopyridiniumtetrafluorborát
QS21 - Quillaja Saponaria 21
ELISA - enzymový imunosorbentní test
SEC-HPLC - vylučovací chromatografie- vysoce výkonná kapalinová chromatografie SDS - natriumdodecylsulfát pfluidizace - mikrofluidizace.
Předkládaný vynález poskytuje vakcinační prostředek, který obsahuje alespoň jeden polysacharidový antigen Streptococcus pneumoniae (výhodně konjugovaný na proteinový nosič) a proteinový antigen Streptococcus pneumoniae vybraný ze skupiny zahrnující: rodinu poly-histidinové triády (Pht; například PhtA, PhtB, PhtD nebo PhtE), Lyt rodinu (například LytA, LytB nebo LytC), SpsA, Spl28, Spl30, Spl25, SplOl a Spl33, nebo jejich zkrácené nebo imunologicky funkční ekvivalenty, volitelně s Thl adjuvans (nebo s adjuvans indukujícím především Thl imunitní reakci). Výhodně je obsažen jak pneumokokový protein, tak Thl adjuvans. Vynález také popisuje výhodné prostředky obsahující kombinaci výše uvedených pneumokokových proteinů podle předkládaného vynálezu mezi sebou a s dalšími pneumokokovými proteiny. Prostředky podle předkládaného vynálezu jsou zejména vhodné pro léčbu stařecké pneumoniae.
Pneumokokové polysacharidové vakcíny (konjugované či nikoliv) nemusí být schopné chránit před pneumonií u staré populace, ve které je incidence tohoto onemocnění velmi vysoká. Klíčo-3 CZ 305324 B6 vým obranným mechanismem proti pneumokokům je opsonofagocytosa (humánní B-lymfocyty/neutrofily zprostředkovaný děj způsobený produkcí protilátek proti pneumokokovému polysacharidu, při které je bakterie eventuálně fagocytována), některé složky opsonizačních mechanismů jsou však ve stáří narušeny, například produkce superoxidu PMN (polymorfonukleámími buňkami), produkce jiných reaktivních druhů kyslíku, mobilizace PMN, apoptosa PMN, deformabilita PMN. Ve stáří může být též narušena proti látková odpověď.
Oproti běžně akceptovanému dogmatu nemusí být normální hladiny protilátek proti polysacharidu kapsuly účinné v kompletní eliminaci bakterií, protože pneumokoky mohou pronikat do hostitelských buněk a tak mohou uniknout této složce imunitního systému.
Překvapivě předkladatelé vynálezu zjistili, že simultánní stimulací buněčné složky imunitního systému (například T-lymfocyty zprostředkované imunity) společně s humorální složkou imunitního systému (zprostředkovanou B-lymfocyty), je možno dosáhnou synergie (kooperace), která může zesílit eliminaci pneumokoků z hostitele. Toto je objev, který napomůže prevenci (nebo léčbě) pneumokokové infekce obecně, ale který je zejména důležitý pro prevenci (nebo léčbu) pneumonie u starších jedinců, u kterých vakcíny na bázi polysacharidů nevykazují účinnost.
Bez vazby na jakoukoliv konkrétní teorii vynálezci zjistili, že obě složky imunitního systému mohou působit synergně tehdy, když je pneumokokový polysacharid (výhodně konjugovaný na proteinový nosič) podán s pneumokokovým proteinem vybraným ze skupiny zahrnující: PhtA, PhtB, PhtD, PhtE, LytA, LytB, LytC, SpsA, Spl28, Spl30, Spl25, SplOl a Spl33 (což jsou proteiny, které mohou být zpracovány a prezentovány v kontextu MHC třídy II a I na povrchu infikovaných savčích buněk). Vynálezci také zjistili, že ačkoliv může jeden nebo více těchto pneumokokových proteinů spouštět buněčnou imunitu sám o sobě, napomáhá přítomnost Thl indukujícího adjuvans ve vakcíně této složce imunitního systému a překvapivě dále zesiluje synergii mezi oběma složkami imunitního systému.
Popis předkládaného vynálezu
Předkládaný vynález poskytuje vylepšenou vakcínu pro prevenci nebo zmírnění pneumokokové infekce u starších jedinců (a/nebo kojenců a batolat).
V předkládaném vynálezu je pacient považován za starého jedince, pokud je mu více než 55 let, obvykle více než 60 let, typicky více než 65 let.
V jednom provedení tedy vynález poskytuje vakcinační prostředek, vhodný pro použití u starých jedinců (a/nebo kojenců a batolat), který obsahuje alespoň jeden polysacharidový antigen Streptococcus pneumoniae a alespoň jeden proteinový antigen Streptococcus pneumoniae vybraný ze skupiny zahrnující: PhtA, PhtB, PhtD, PhtE, SpsA, LytB, LytC, LytA, Spl25, SplOl, Spl28, Spl30 a Spl33. Vakcína může volitelně obsahovat Thl adjuvans.
V jiném provedení vynález poskytuje vakcínu (vhodný pro prevenci pneumoniae u starých jedinců), která obsahuje alespoň jeden (2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 nebo 10) polysacharidový antigen Streptococcus pneumoniae a alespoň jeden proteinový antigen Streptococcus pneumoniae vybraný ze skupiny zahrnující: PhtA, PhtB, PhtD, PhtE, SpsA, LytB, LytC, LytA, Spl25, SplOl, Spl28, Spi 30 a Spi33, a výhodně Thl adjuvans.
Výše uvedená provedení vakcín výhodně obsahujících vzájemné kombinace pneumokokových proteinů podle předkládaného vynálezu a kombinace s jinými pneumokokovými proteiny spadají též do rozsahu předkládaného vynálezu.
Předpokládá se, že taková vakcína bude také použitelná pro léčbu pneumokokových infekcí (například otitis média) v jiných rizikových skupinách populace, jako jsou kojenci nebo batolata.
-4CZ 305324 B6
Polysacharidové antigeny Streptococcus pneumoniae podle předkládaného vynálezu
Typicky bude vakcína proti Streptococcus pneumoniae podle předkládaného vynálezu obsahovat polysacharidové antigeny (výhodně konjugované na proteinový nosič), kde polysacharidy jsou odvozeny od alespoň čtyř serotypů pneumokoka. Výhodně jsou těmito čtyřmi serotypy 6B, 14, 19F a 23F. Výhodněji je v přípravku obsaženo alespoň 7 serotypů, například ty polysacharidy, kteréjsou získány od serotypů 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F a 23F. Ještě výhodněji je v přípravku obsaženo alespoň 11 serotypů, například ty polysacharidy, kteréjsou získány od serotypů 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F a 23F (kteréjsou výhodně konjugovány na proteinový nosič). Ve výhodném provedení předkládaného vynálezu je obsaženo alespoň 13 polysacharidových antigenů (kteréjsou výhodně konjugovány na proteinový nosič), ačkoliv další polysacharidové antigeny, například 23valentní (jako jsou serotypy 1, 2, 3, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9N, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F a 33F) také spadají do rozsahu předkládaného vynálezu.
Pro vakcinaci ve stáří (například pro prevenci pneumoniae) je výhodné do 1 lvalentního antigenního prostředku zahrnout serotypy 8 a 12F (a nejlépe též 15 až 22), takže vznikne 15-valentní vakcína, zatímco pro vakcinaci kojenců nebo batolat (kde se jedná o otitis média) je výhodné zahrnout serotypy 6A a 19A, za zisku 13valentní vakcíny.
Ačkoliv mohou být polysacharidy popsané výše použity v úplné, nativní formě, mohou být použity též polysacharidy s redukovanou velikostí, které jsou stále ještě imunogenní (viz např. EP 497 524 a EP 497 525).
Pro prevenci nebo zmírnění pneumonie u starých jedinců (+55 let) a otitis média u kojenců (do 18 měsíců) a batolat (obvykle 18 měsíců až 5 let), je výhodným provedením vynálezu kombinování multivalentní polysacharid Streptococcus pneumoniae podle předkládaného vynálezu a protein Streptococcus pneumoniae vybraný ze skupiny zahrnující: PhtA, PhtB, PhtD, PhtE, SpsA, LytB, LytC, LytA, Spl25, SplOl, Spl28, Spl30 a Spl33, ajejich imunologicky funkční ekvivalenty. Kombinace pneumokokových proteinů může být také použita, jak je popsáno dále. Pneumokokové proteiny podle předkládaného vynálezu „Imunologicky funkční ekvivalent“ je definován v předkládaném jako peptid nebo protein obsahující alespoň jeden protektivní epitop z proteinu podle předkládaného vynálezu. Takové epitopy jsou obvykle vystaveny na povrchu, jsou vysoce konzervovány a mohou vyvolat baktericidní protilátkovou reakci u hostitele nebo mohou zabránit toxickým účinkům. Výhodně může být použit funkční ekvivalent obsahující alespoň 15 a výhodně 30 nebo více sousedících aminokyselin z proteinu podle předkládaného vynálezu. Nejvýhodněji jsou použity fragmenty, deleční varianty proteinu, jako například transmembránové deleční varianty (tj. použije se extracelulámí doména proteinu), fúze, chemicky nebo geneticky detoxifikované deriváty a podobně, za podmínky, že tyto ekvivalenty jsou schopné vyvolat v podstatě stejnou imunologickou reakci jako přirozený protein. Pozice potenciálních B-lymfocytových epitopů v proteinové sekvenci může být snadno určena pomocí identifikace peptidů, které jsou jak vystavené na povrchu, tak antigenní, kde toto určení lze provést za použití kombinace dvou metod: 2D-strukturální predikce a predikce antigenního indexu. Predikce 2D-struktury může být provedena za použití PSIPRED programu (od David Jones, Brunel Bioinformatics Group, Dept. Biological Sciences, Brunel University, Uxbridge UB8 3PH, UK). Antigenní index může být vypočítán způsobem podle Jamesova a Wolfa (CABIOS 4:181 až 186 [1988]).
Proteiny podle předkládaného vynálezu jsou následující proteiny, kteréjsou všechny exponovány na vnějším povrchu pneumokoka (a tak mohou být rozpoznávány imunitním systémem hostitele během alespoň části životního cyklu pneumokoka) nebo se jedná o proteiny, kteréjsou secemovány nebo uvolňovány pneumokokem.
-5CZ 305324 B6
Protein Streptococcus pneumoniae podle předkládaného vynálezu je vybrán ze skupiny zahrnující: proteiny z rodiny polyhistidinové triády (Pht), proteiny z Lyt rodiny, proteiny vážící cholin, proteiny mající LPXTG motiv (kde X je jakákoliv aminokyselina), proteiny mající motiv signální sekvence typu II LXXV (kde X je jakákoliv aminokyselina) a proteiny mající motiv signální sekvence typu I. Výhodnými příklady v těchto kategoriích (nebo motivech) jsou následující proteiny nebo jejich imunologicky funkční ekvivalenty.
Pht (Póly Histidinová Triáda) rodina obsahuje proteiny PhtA, PhtB, PhtD a PhtE. Rodina je charakterizována lipidační sekvencí, dvěma doménami separovanými regionem bohatým na prolin a několika histidinovými triádami, které se snad účastní na vazbě kovů nebo nukleostidů nebo na enzymatické aktivitě, (3-5) stočenými regiony, a konzervovaným N-koncem a heterogenním Ckoncem. Tato rodina je přítomná u všech testovaných kmenů pneumokoků. Homologní proteiny byly také zjištěny v jiných Streptokokách a Neisseriích. Mezi výhodné členy rodiny patří PhtA, PhtB a PhtD. Výhodněji obsahuje rodina PhtA nebo PhtD. Je třeba si uvědomit, že termíny PhtA, B, D a E označují proteiny mající sekvence popsané ve výše uvedených citacích, stejně jako jejich přirozené (a uměle vyrobené) varianty, které mají sekvenci z alespoň 90 % identickou jako uvedené proteiny. Výhodně je sekvence alespoň z 95 % identická a nejlépe je alespoň z 97 % identická.
S ohledem na PhtX proteiny je PhtA popsán ve WO 98/18 930, a je též označován jako Sp36. Jak bylo uvedeno výše, jedná se o protein z rodiny polyhistidinové triády a obsahuje typ II signálního motivu LXXC.
PhtD je popsán ve WO 00/37 105, a je též označován jako SpO36D. Jak bylo uvedeno výše, jedná se také o protein z rodiny polyhistidinové triády a obsahuje typ II signálního motivu LXXC.
PhtBje popsán ve WO 00/37 105, a je též označován jako SpO36B. Jiným členem PhtB rodiny je C3-degradující polypeptid, jak je popsán ve WO 00/17 370. Tento protein patří též do rodiny polyhistidinové triády a obsahuje typ II LXXC signálního motivu. Výhodný imunologicky funkční ekvivalent je protein Sp42 popsaný ve WO 98/18 930. Zkrácená forma PhtB (přibližně 79kD) je popsána ve WO 99/15 675 a je též považována za člena PhtX rodiny.
PhtE je popsán ve WO 00/30 299 a je označován jako BVH-3.
SpsA je vazebný protein pro cholin popsaný ve WO 98/39450.
Lyt rodina jsou proteiny asociované s membránou asociované s buněčnou lýzou. N-koncová doména obsahuje vazebnou doménu pro cholin, ale Lyt rodina nemá všechny vlastnosti uvedené u rodiny vazebných proteinů pro cholin (Cbp) rodiny a tak je pro předkládaný vynález Lyt rodina považována za rodinou odlišnou od Cbp rodiny. Na rozdíl od Cbp rodiny C—koncová doména obsahuje katalytickou doménu rodiny Lyt proteinu. Rodina zahrnuje LytA, B a C. S ohledem na Lyt X rodinu je LytA popsán v Ronda et al., Eur J Biochem, 164:621 až 624 (1987). LytB je popsán ve WO 98/18 930, a je též označován jako Sp91. Výhodným členem této rodiny je LytC.
Jiným výhodným provedením jsou Lyt zkrácené formy, kde „Lyt“ je definován výše a „zkrácené formy“ označují Lyt proteiny bez 50 % nebo více vazebného regionu pro cholin. Výhodně takové proteiny neobsahují celý vazebný region pro cholin.
Spi25 je příkladem povrchového proteinu pneumokoka s LPXTG motivem zakotveným v buněčné stěně (kde X je jakákoliv aminokyselina). Bylo zjištěno, že jakýkoliv protein s touto třídou pneumokokového povrchového proteinu s tímto motivem je užitečný v předkládaném vynálezu a proto se považuje za další protein podle předkládaného vynálezu. Spl25 sám je popsán ve WO 98/18 930, a je také znám jako ZmpB - zinková metaloproteinasa.
-6CZ 305324 B6
Spi01 je popsán ve WO 98/06 734 (kde má označení #y85993). Je charakterizován signální sekvencí typu I.
Spi33 je popsán ve WO 98/06 734 (kde má označení #y85992). Je také charakterizován signální sekvencí typu I.
Spl28 a Spl30 jsou popsány ve WO 00/76 540.
Proteiny použitelné v předkládaném vynálezu jsou výhodně vybrány ze skupiny zahrnující PhtD a PhtA, nebo kombinace těchto proteinů.
Výhodné kombinace jednoho nebo více pneumokokových proteinů podle předkládaného vynálezu s j inými pneumokokovými proteiny
Ve vakcíně podle předkládaného vynálezu může být každý z výše uvedených proteinů podle předkládaného vynálezu (výhodně buď PhtD, nebo PhtA nebo oba) kombinován s jedním nebo více pneumokokovými proteiny z následujícího seznamu: pneumolysin (též označovaný jako Pyl; výhodně detoxifikovaný chemickým zpracováním nebo mutací) (WO 96/05 859, WO 90/06 951, WO 99/03 884); PsaA a varianty s transmembránovou delecí (Berry & Paton, Infect Immun 1996 Dec;64(12):5255 až 62. PspA a varianty s transmembránovou delecí (US 5 804 193, WO 92/14 488 a WO 99/53 940), PspC a varianty s transmembránovou delecí (WO 97/09 994, WO 99/53 940), proteiny rodiny vazebných proteinů pro cholin (Cbp) (například CbpA a jeho varianty s transmembránovou delecí) WO 97/41 151, WO 99/51 266), glyceraldehyd-3-fosfát-dehydrogenasa (Infect. Immunol. 1996, 64/3544), Hsp70 (WO 96/40 928), PcpA (Sanchez-Beato et al., FEMS Microbiol. Lett. 1998, 164: 207 až 14), M-like protein (SB patentová přihláška EP 0 837 130) a adhesin 18627 (SB patentová přihláška EP 0 834 568). Předkládaný vynález také zahrnuje imunologicky funkční ekvivalenty nebo zkrácené formy těchto proteinů (jak byly definovány výše).
Členové rodiny vazebných proteinů pro cholin byly původně identifikovány jako pneumokokové proteiny, které mohou být přečištěny cholinovou-afinitní chromatografií. Všechny vazebné proteiny pro cholin jsou nekovalentně navázány na fosforylcholinové skupiny kyseliny teichoové buněčné stěny a kyseliny lipoteichoové asociované s buněčnou membránou. Strukturálně obsahují několik regionů společných celé rodině, ačkoliv se celkový přesný charakter proteinů může lišit (v aminokyselinové sekvenci, délce atd.). Obecně vazebné proteiny pro cholin obsahují Nterminální region (N), konzervované repetitivní regiony (Rl a/nebo R2), a region bohatý na prolin (F) a konzervovaný vazebný region pro cholin (C), tvořený mnoha repetitivními úseky, který tvoří přibližně jednu polovinu proteinu. Termín „rodina vazebných proteinů pro cholin (Cbp)“ označuje skupinu zahrnující vazebné proteiny pro cholin, jak jsou definovány ve WO 97/41 151, PbcA, SpsA, PspC, CpbA, CbpD a CbpG. CbpA je popsán v WO 97/41 151. CbpD a CbpG jsou popsány ve WO 00/29 434. PspC je popsán v WO 97/09 994. PbcA je popsán ve WO 98/21 337. Výhodně jsou vazebné proteiny pro cholin vybrané ze skupiny zahrnující CbpA, PbcA, SpsA a PspC.
Když je použit Cpb protein, tak může být použita Cbp zkrácená forma, kde „Cbp“ je definován výše a „zkrácená forma“ označuje Cbp protein, kterému chybí 50 % nebo více vazebního regionu pro cholin (C). Výhodně takovým proteinům chybí celý vazebný region pro cholin. Výhodněji u takových zkrácených forem chybí (i) vazebný region pro cholin a (ii) a část N-koncové poloviny proteinu, za zachování alespoň jednoho repetitivního regionu (Rl nebo R2). Ještě výhodněji obsahuje zkrácená forma 2 repetitivní regiony (Rl a R2). Příklady takových výhodných provedení jsou NRlxR2 a RlxR2, jak jsou popsány ve WO 99/51 266 nebo WO 99/51 188, ale i další vazebné proteiny pro cholin bez podobného vazebného regionu spadají do rozsahu předkládaného vynálezu.
-7CZ 305324 B6
Chimérické proteiny (nebo fúze) Cbp zkrácená forma-Lyt zkrácená forma mohou být také použity ve vakcíně podle předkládaného vynálezu. Výhodně tyto formy obsahují NRlxR2 (nebo RlxR2) Cbp a C-koncovou část (C-term. tj. bez vazebných domén pro cholin) Lyt (např. LytCCterm nebo Sp91Cterm). Výhodněji je Cbp vybraný ze skupiny zahrnující CbpA, PbcA, SpsA a PspC. Ještě výhodněji se jedná o CbpA. Výhodně je LytX LytC (též označovaný jako Sp91).
Jiným provedením předkládaného vynálezu je PspA nebo PsaA zkrácená forma bez vazebné domény pro cholin (C) a exprimovaná jako fúzní protein s LytX. Výhodně je Lyt proteinem LytC.
Výhodné kombinace pneumokokových proteinů podle předkládaného vynálezu
Výhodně je kombinace proteinů podle předkládaného vynálezu vybrána ze 2 nebo více (3 nebo 4) různých kategorií, jako jsou proteiny mající motiv signální sekvence typu II LXXC (kde X je jakákoliv aminokyselina, např., z rodiny polyhistidinové triády (PhtX)), rodiny proteinů vážících cholin (CpbX), proteinů majících motiv signální sekvence typu I (např., Spi01), proteinů majících LPXTG motiv (kde X je jakákoliv aminokyselina, např., Spl28, Spl30), toxinů (např. Ply), atd. Výhodnými příklady v těchto kategoriích (nebo motivech) jsou proteiny uvedené výše nebo jejich imunologicky funkční ekvivalenty. Toxin + Pht, toxin + Cbp, Pht + Cpb a toxin + Pht + Cpb jsou výhodnými kombinacemi.
Mezi výhodné kombinace patří, například, PhtD + NRlxR2, Phtd + NRlxR2-Sp91 Cterm chimérické nebo fúzní proteiny, PhtD + Ply, PhtD + Spi28, PhtD + PsaA, PhtD + PspA, PhtA + NRlxR2, PhtA + NR 1 xR2-Sp91 Cterm chimérické nebo fúzní proteiny, PhtA + Ply, PhtA + Spi28, PhtA + PsaA, PhtA + PspA, NRlxR2 + LytC, NRlxR2 + PspA, NRlxR2 + PsaA, NRlxR2 + Spl28, RlxR2 + LytC, RlxR2 + PspA, RlxR2 + PsaA, RlxR2 + Spl28, RlxR2 + PhtD, RlxR2 + PhtA. Výhodně je NRlxR2 (nebo RlxR2) z CbpA nebo PspC. Výhodněji je z CbpA.
Zejména výhodná kombinace pneumokokových proteinů obsahuje Ply (nebo jeho zkrácenou formu nebo imunologicky funkční ekvivalent) + PthD (nebo jeho zkrácenou formu nebo imunologicky funkční ekvivalent) + NRlxR2 (nebo RlxR2). Výhodně je NRlxR2 (nebo RlxR2) z CbpA nebo PspC. Výhodněji je z CbpA.
Bez vazby na jakoukoliv konkrétní teorii se zjistilo, že přípravek obsahující pneumokokový protein (nebo jakoukoliv kombinaci popsanou výše) podle předkládaného vynálezu může indukovat T-lymfocyty zprostředkovanou imunitní reakci proti pneumokokového onemocnění - která je zejména žádoucí při obraně před pneumonií - kde tato reakce kooperuje s protilátkovou složkou imunitního systému s cílem inhibovat invazi pneumokoků a stimulovat opsonofagocytosu. Další výhoda související s použitím proteinového antigenů spočívá v prezentaci dalších antigenů pro proces opsonofagocytosy.
V dalším provedení tedy vynález poskytuje vakcínu proti Streptococcus pneumoniae tvořenou vakcínou obsahující konjugovaný pneumokokový polysacharid, který je tvořen polysacharidovými antigeny získanými z alespoň čtyř serotypů, lépe alespoň sedmi serotypů, nejlépe alespoň jedenácti serotypů, a alespoň jeden, ale lépe 2, 3 nebo 4 proteiny Streptococcus pneumoniae vybrané ze skupiny zahrnující: PhtA, PhtB, PhtD, PhtE, SpsA, LytB, LytC, LytA, Spl25, SplOl, Spl28, Spl30 a Spl33 (nebo kombinace pneumokokových proteinů popsané výše). Výhodně je jedním proteinem PhtA (nebo jeho imunologicky funkční ekvivalent). Nejlépe je jedním proteinem PhtD (nebo jeho imunologicky funkční ekvivalent).
Jak bylo uvedeno výše, problém spojený s polysacharidovým přístupem k vakcinací spočívá v tom, že polysacharidy sami o sobě jsou slabými imunogeny. Pro překonání tohoto problému mohou být polysacharidy konjugovány na proteinové nosiče, které jsou pomocnými stimulanty T-lymfocytů. Proto je výhodné, aby byly polysacharidy použité v předkládaném vynálezu navá-8CZ 305324 B6 zané na takové proteinové nosiče. Příklady takových nosičů, které jsou v současnosti běžně používané pro produkci polysacharidových imunogenů jsou difterický a tetanický toxoid (DT, DT CM197, jiné DT mutanty a TT, v příslušném pořadí), přílipkový haemokyanin (KLH), OMPC z N. meningitidis, a přečištěný proteinový derivát Tuberculinu (PPD).
Výhodným nosičem pro imunogenní prostředky na bázi pneumokokových polysacharidů (nebo pro vakcíny) je protein D zHaemophilus influenzae (EP 594 610-B), nebo jeho fragmenty. Fragmenty vhodné pro použití jsou fragmenty obsahující T-helper epitopy. Konkrétně, fragment proteinu D bude výhodně obsahovat N-koncovou 1/3 proteinu. Protein D je překvapivě použitelný jako nosič ve vakcínách, ve kterých jsou konjugovány různé pneumokokové polysacharidové antigeny. Pokud se stejný nosič používá pro každý polysacharid, tak je pravděpodobné, že dojde k epitopové supresi. Překvapivě předkladatelé vynálezu zjistili, že protein D je vhodný pro minimalizaci takové epitopové suprese v kombinovaných vakcínách. Jeden nebo více pneumokokových polysacharidů v kombinaci může být výhodně konjugován na protein D a výhodně jsou všechny antigeny konjugovány v takové kombinované vakcíně na protein D.
Dalším výhodným nosičem pro pneumokokový polysacharid je pneumokokový protein samotný (jak je definován v oddíle „pneumokokové proteiny podle předkládaného vynálezu“).
Polysacharid může být navázán na proteinový nosič jakoukoliv známou metodou (například Likhite, Patent US 4 372 945 a Armor et al., Patent US 4 474 757). Výhodně je provedena CDAP konjugace (WO 95/08 348).
Výhodně je poměr proteimpolysacharid (hmotnost:hmotnost) konjugátu 0,3:1 až 1:1, lépe 0,6:1 až 0,8:1 a nejlépe přibližně 0,7:1.
Vakcíny podle předkládaného vynálezu obsahují výhodně adjuvans. Mezi vhodná adjuvans patří soli hliníku, jako je gelový hydroxid hlinitý (kamenec) nebo fosforečnan hlinitý, ale mohou také obsahovat vápník, hořčík, železo nebo zinek, nebo obsahovat nerozpustnou suspenzí acylovaného tyrosinu, nebo acylovaných sacharidů, kationtově nebo aniontově derivatizovaných polysacharidů, nebo polyfosfazenů.
Je výhodné, aby vybrané adjuvans bylo přednostním induktorem odpovědi TH1 typu, aby se posílila buněčná složka imunitní reakce.
TH1 adjuvans podle předkládaného vynálezu
Vysoké koncentrace cytokinů Thl-typu upřednostňují indukci buněčné imunitní reakce na daný antigen, zatímco vysoké koncentrace cytokinů Th2-typu vedou přednostně k indukci protilátkové imunitní reakce na antigen.
Je důležité si uvědomit, že odlišení imunitní reakce Thl a Th2 typu není absolutní. Ve skutečnosti se u jedinců bude rozvíjet imunitní reakce, kteráje převažujícím způsobem typu Thl nebo Th2. Nicméně, často je výhodné rozdělovat rodiny cytokinů tak, jak je popsáno na myších CD4 + ve T-lymfocytámím klonech v Mosmann a Coffman (Mosmann, T. R. a Coffinan, R. L. (1989) Thl and TH2 cells: different pattems of lymphokine secretion lead to different functional properties. Annual Review of Immunology, 7, p 145 až 173). Tradičně jsou reakce Thl-typu asociované s produkcí IFN-γ a IL-2 cytokinů T-lymfocyty. Další cytokiny často přímo asociované s indukcí imunitní reakce Thl-typu nejsou produkovány T-lymfocyty, jako je IL—12. Naopak, reakce Th2-typu jsou asociované se sekrecí IL—4, IL-5, IL-6, IL—10. Vhodné adjuvantní systémy, které podporují hlavně reakce Thl typu, jsou: Monofosforyl lipid A nebo a jeho deriváty, zejména 3de-O-acylovaný monofosforyl lipid A (3D-MPL) (pro jeho přípravu viz GB 2 220 211 A); kombinace monofosforyl—lipidu A, výhodně 3—de—O—acylovaného monofosforyl—lipidu A, a soli hliníku (například fosforečnanu hlinitého nebo hydroxidu hlinitého) nebo emulze olej ve vodě. V takových kombinacích jsou antigen a 3D-MPL obsaženy ve stejné struktuře, což umožňuje
-9CZ 305324 B6 účinné dodání antigenních a imunostimulačních signálů. Studie prokázaly, že 3D-MPL je schopen dále zesilovat imunogenicitu antigenů adsorbovaného na kamenec [Thoelen et al. Vaccine (1998) 16:708-14; EP 689 454 Bl],
Posílený systém je například kombinace monofosforyl lipidu A a saponinového derivátu, zejména kombinace QS21 a 3D-MPL, jakje popsána ve WO 94/00 153, nebo méně reaktogenní prostředek, kde je QS21 utlumen cholesterolem a který je popsán ve WO 96/33 739.
Zejména účinný adjuvantní prostředek obsahující QS21, 3D-MPL a tokoferol v emulzi olej ve vodě je popsán ve WO 95/17 210, a tento prostředek je výhodným prostředkem.
Výhodně vakcína dále obsahuje saponin, výhodněji QS21. Prostředek může dále obsahovat emulsi olej ve vodě a tokoferol (WO 95/17 210).
Předkládaný vynález také poskytuje způsob pro přípravu vakcinačního prostředku, který zahrnuje smísení proteinu podle předkládaného vynálezu s farmaceuticky přijatelnou přísadou, jako je 3DMPL.
Nemethylované CpG obsahující oligonukleotidy (WO 96/02 555) jsou také přednostními induktory TH1 reakce ajsou použitelné v předkládaném vynálezu.
Zejména výhodný prostředek podle předkládaného vynálezu obsahuje jeden nebo více konjugovaných pneumokokových polysacharidů, jeden nebo více pneumokokových proteinů podle předkládaného vynálezu a Thl adjuvans. Bez vazby na jakoukoliv teorii může být indukce buněčné reakce pneumokokovým proteinem (jakje popsán výše) a kooperace mezi oběma složkami imunitního systému dosaženo při použití takových Thl adjuvans, což vede k zisku vakcíny účinné proti pneumokokovým onemocněním obecně, a zejména proti pneumokokové pneumonii u starých jedinců.
V dalším aspektu vynález poskytuje imunogen nebo vakcínu, jak je zde popsána, pro použití v medicíně.
Jedním provedením předkládaného vynálezu je způsob pro prevenci nebo zmírnění pneumonie u starých jedinců (+55 let), při kterém je podáno uvedenému starému pacientovi bezpečné a účinné množství vakcíny obsahující polysacharidový antigen Streptococcus pneumoniae a pneumokokový protein vybraný ze skupiny zahrnující: PhtA, PhtB, PhtD, PhtE, SpsA, LytB, LytC, LytA, Spl25, Spi 01, Spl28, Spi 30 a Spi33, a volitelně Thl adjuvans.
Jiným provedením předkládaného vynálezu je způsob pro prevenci nebo zmírnění pneumonie u otitis média u kojenců (do 18 měsíců) nebo batolat (obvykle 18 měsíců až 5 let), při kterém je podáno uvedenému kojenci nebo batoleti bezpečné a účinné množství vakcíny obsahující polysacharidový antigen Streptococcus pneumoniae a pneumokokový protein vybraný ze skupiny zahrnující: PhtA, PhtB, PhtD, PhtE, SpsA, LytB, LytC, LytA, Spl25, Spi01, Spl28, Spl30 a Spi33, a volitelně Thl adjuvans.
Výhodně je ve způsobech podle předkládaného vynálezu popsaných výše polysacharidový antigen přítomen jako konjugát polysacharidu a proteinu.
Příprava vakcín podle předkládaného vynálezu
Vakcinační prostředky podle předkládaného vynálezu mohou být použity pro chránění nebo léčbu savců (výhodně lidí) vnímavých k infekci, pomocí podání uvedené vakcíny systémovým nebo slizničním způsobem. Toto podání může být formou intramuskulámí, intraperitoneální, intradermální nebo podkožní; nebo prostřednictvím sliznice, jak je tomu u orálního/alimentámího podání a podání do respiračního, genitourinárního traktu. Intranasální podání vakcín pro léčbu
- 10CZ 305324 B6 pneumonie nebo otitis média je výhodné (protože může být zabráněno nasofaryngeálnímu přenášení pneumokoků, což zmírní infekci vjejím nejčastějším stadiu). Ačkoliv může být vakcína podle předkládaného vynálezu podána v jedné dávce, mohou být její složky podány také současně nebo v různou dobu (například, pokud je ve vakcíně obsažen polysacharid, může být podán samostatně ve stejnou dobu nebo 1 až 2 týdny po podání kombinace bakteriálních proteinů) za účelem optimální koordinace imunitní reakce. Kromě jediného způsobu podání mohou být použity dva různé způsoby podání. Například, virové antigeny mohou být podány ID (intradermálně), zatímco bakteriální proteiny mohou být podány IM (intramuskulámě) nebi IN (intranasálně). Pokud jsou přítomné polysacharidy, tak mohou být podány IM (nebo ID) a bakteriální proteiny mohou být podávány IN (nebo ID). Dále, vakcíny podle předkládaného vynálezu mohou být podány IM pro první dávku a IN pro dosycování dávky.
Množství konjugovaného antigenu v každé dávce vakcíny je vybráno jako množství, které indukuje imunoprotektivní reakci bez významnějších nežádoucích účinků typických u vakcín. Takové množství se velmi liší podle toho, jaký imunogen je použit a jak je prezentován. Každá dávka bude obecně obsahovat 0,1 až 100 pg polysacharidů, výhodně 0,1 až 50 pg je výhodná dávka.
Obsah proteinových antigenů ve vakcíně je obvykle v rozmezí 1 až 100 pg, výhodně 5 až 50 pg a nejlépe 5 až 25 pg.
Optimální množství složek pro každou konkrétní vakcínu může být zjištěno za použití standardních studií využívajících pozorování vhodných imunitních reakcí u jedinců. Po iniciální vakcinaci může být jedinci podána jedna nebo více dosycovacích imunizací, které jsou podány v adekvátní dobu.
Příprava vakcín je obecně popsána ve Vaccine Design („Thesubunit and adjuvans approach“ (ed. Powell M.F. & Newman M.J.) (1995) Plenům Press New York). Enkapsulace v liposomech je popsána ve Fullerton, Patent US 4 235 877.
Ačkoliv mohou být vakcíny podle předkládaného vynálezu podány jakýmkoliv způsobem, je podání popsaných vakcín do kůže (ID) jedním z provedení předkládaného vynálezu. Lidská kůže je tvořena vnější „rohovitou“ pokožkou, která se nazývá stratům comeum, pod kterou leží epidermis. Pod epidermis je vrstva označovaná jako dermis a pod touto vrstvou je podkožní tkáň. Výzkumníci prokázali, že injekce vakcíny do kůže, konkrétně do dermis, stimuluje imunitní reakci, která může být také asociována s mnoha dalšími výhodami. Intradermální vakcinace vakcínami podle předkládaného vynálezu tvoří výhodný rys předkládaného vynálezu.
Běžná technika intradermální vakcinace, „mantoux technika“ obsahuje kroky desinfekce kůže, a potom napnutí kůže jednou rukou zavedení tenké jehly (26 až 31 gauge) v úhlu 10 až 15°. Jakmile se hrana jehly zavede, tak se tělo jehly sníží a posunuje se dále, což se projeví zvedáním kůže při mírném tlaku. Potom se velmi pomalu injikuje kapalina, která tvoří puchýř na kůži a potom se jehla vyjme.
Nověji byly popsány prostředky, které jsou specificky určené pro podání kapaliny do nebo skrz kůži, jako jsou například prostředky popsané ve WO 99/34 850 a EP 1 092 444, a také tryskové injekční prostředky popsané například ve WO 01/13 977; US 5 480 381, US 5 599 302,
US 5 334 144, US 5 993 412, US 5 649 912, US 5 569 189, US 5 704 911, US 5 383 851,
US 5 893 397, US 5 466 220, US 5 339 163, US 5 312 335, US 503 627, US 5 064 413,
US 5 520 639, US 4 596 556, US 4 790 824, US 4 941 880, US 4 940 460, WO 97/37 705 a WO
97/13 537. Mezi alternativní metody intradermálního podání vakcíny patří použití běžných injekčních stříkaček a jehel, nebo použití zařízení pro balistické podání solidních vakcín (WO 99/27 961), nebo použití transdermálních náplastí (WO 97/48 440; WO 98/28 037); nebo aplikace na povrch kůže (transdermální nebo transkutánní podání) (WO 98/20 734; WO 98/28 037).
- 11 CZ 305324 B6
Když jsou vakcíny podle předkládaného vynálezu podávány do kůže, nebo přesněji do dermis, tak jsou vakcíny připraveny v malém objemu kapaliny, konkrétně v objemu mezi přibližně 0,05 a 0,2 ml.
Obsah antigenů v kožních nebo intradermálních vakcínách podle předkládaného vynálezu může být podobný jako v běžných intramuskulárních vakcínách. Nicméně, charakteristikou kožních nebo intradermálních vakcín je to, že mohou být tvořeny „nízkou dávkou“. Proto jsou proteinové antigeny v „nízkodávkových“ vakcínách výhodně přítomny v dávce pouze 0,1 až 10 pg, výhodně 0,1 až 5 pg na dávku; a pokud je přítomen polysacharid konjugovaný s antigenem, tak je polysacharid přítomen v dávce 0,01 až 1 pg, výhodně 0,01 až 0,5 pg polysacharidu na dávku.
Termín „intradermální podání“, jak je zde použit, označuje podání vakcíny do regionu dermis v kůži. Nicméně, vakcína nemůže být lokalizována výlučně v dermis. Dermis je vrstva kůže lokalizovaná mezi přibližně 1,0 a přibližně 2,0 mm od povrchu lidské kůže, ale existují určité variace mezi jedinci a různými částmi těla. Obecně se předpokládá, že bude dosaženo dermis, pokud se pronikne 1,5 mm pod povrch kůže. Dermis je umístěna mezi stratům corneum a epidermis na povrchu a podkožní vrstvou směrem dolů. Podle způsobu podání může být vakcína nakonec lokalizována primárně nebo pouze v dermis, nebo může být nakonec umístěna v epidermis a dermis.
Předkládaný vynález také zahrnuje kombinované vakcíny, které poskytují ochranu před různými patogeny. Mnoho pediatrických vakcín se v současnosti podává ve formě kombinovaných vakcín, aby se redukoval počet injekcí, které dítě musí dostat. Tak mohou být pediatrické vakcíny obsahující antigeny z jiných patogenů formulovány s vakcínami podle předkládaného vynálezu. Například mohou být vakcíny podle předkládaného vynálezu formulovány s (nebo podávány samostatně, ale ve stejnou dobu) dobře známou „trivalentní“ kombinovanou vakcínou obsahující Diththerický toxoid (DT), tetanický toxoid (TT), pertussovou složku [typicky detoxifikovaný Pertssický toxoid (Pl) a filamentosní haemugglutinin (FHA) volitelně s pertactinem (PRN) a/nebo agglitomome, 1+2], například s prodávanou vakcínou INFANRIXDTPa™ (SmithKline Beacham Biologicals), která obsahuje DT, TT, PT, FHA a PRN antigeny, nebo s pertusovou složkou tvořenou celými buňkami, jako je například vakcína prodávaná SmithKline Beecham Biologicals s.a. jako Tritanrix™. Kombinovaná vakcína může také obsahovat další antigen, jako je povrchový antigen viru hepatitidy B (HBsAg), antigeny Polio viru (například inaktivovaný trivalentní polio virus - IPV), proteiny vnější membrány Moraxella catarrhalis, non-typické proteiny Haemophilus influenzae, proteiny vnější membrány N. meningitidis B.
Příklady výhodných proteinových antigenů Moraxella catarrhalis, které mohou být obsaženy v kombinované vakcíně (zejména pro prevenci otitis media) jsou: OMP [WO 97/41 731 (Antex) & WO 96/34 960 (PMC)]; OPM21; LbpA a/nebo LbpB [WO98/55 606 (PMC)]; TpA a/nebo TphB [WO 97/13 785 & WO 97/32 980 (PMC)]; CopB Welminen Me, et al. (1983) Infect. Immun. 61:2003-2010]; UspAl a/nebo UspA2 [WO 93/03 761 (University of Texas)]; OmpCD; HasR (PCT/EP99/03824); PilQ (PCT/EP99/03283); LipolO (GB 9 918 208.1); lipoll (GB 9 918 302.|2); lipol8 (GB 9 918 038.2); P6 (PCT/EP99/03038); D15 (PCT/EP99/03822); OmplAl (PCT/EP99/06781); Hly3 (PCT/EP99/03257); a OmpE. Příklady netypických antigenů Haemophilus influenzae, které mohou být obsaženy v kombinované vakcíně (zejména pro prevenci otitis media) jsou: Fibrinový protein [(US 5 766 608 - Ohio State Research Foundation)] a fúze obsahující peptidy odvozené od tohoto proteinu (například LB1 (f) fúzní peptidy; US 5 843 464 (OSU) nebo WO 99/64 067]; OMP26 [WO 97/01 638 (Cortesc)]; P6 [HP 281673 (State University of New York)]; TbpA a/nebo ThpB; Hia; Hsf; Hin47; Hif; Hmwl; Hmw2; Hmw3; Hmw4; Hap; D15 (WO 94/12 641); protein D (EP 594 610); P2; a P5 (WO 94/26 304).
Dalšími zahrnutými kombinacemi jsou proteiny S. Pneumoniae podle předkládaného vynálezu v kombinaci s virovými antigeny, například od chřipkového viru (atenuované, rozdělené nebo jednotkové) [např. povrchové glykoproteiny neuraminidasa (NA) a haemaglutinin (HA). Viz např., Chaloupka I. et al, Eur. Journal Clin. Microbiol. Infect. Dis. 1996, 15: 121 až 127], RSV
- 12CZ 305324 B6 (např. F a G antigeny nebo F/G fúze, viz např. Schmidt A. C. et al, J Virol, May 2001, p, 4594 až 4603), PIV3 (např. HN a F proteiny, viz Schmidt et al., výše), Varicella (např., atenuované, glykoproteiny I-V, atd.), a jakékoliv (nebo všechny) složky MMR (spalničky, zarděnky, příušnice).
Výhodná pediatrická kombinovaná vakcína podle předkládaného vynálezu pro léčbu nebo prevenci otitis média obsahuje: jeden nebo více polysacharidových antigenů Streptococcus pneumoniae (výhodně konjugovaných na protein D) a jeden nebo více pneumokokových proteinů vybraných ze skupiny zahrnující: PhtA, PhtB, PhtD, PhtE, SpsA, LytB, LytC, LytA, Spl25, SplOÍ, Spl28, Spl30 a Spi 33 (a jejich funkční ekvivalenty), a jeden nebo více povrchových antigenů od Moraxella catarrhalis a/nebo netypizovaného Haemophilus Influenzae. Protein D může být výhodně použit jako proteinový nosič pro pneumokokové polysacharidy pro překonání potíží se supresí epitopů (jak byly popsány výše) a proto, že je sám imunogenem schopným produkovat B-lymfocyty zprostředkovanou ochranu proti netypizovatelnému H. influenzae (ntHi). Antigeny Moraxella catarrhalis a netypizovaného Haemophilus influenzae mohou být obsaženy ve vakcíně v podjednotkové formě, nebo mohou být přidány jako antigeny přítomné na povrchu vnější membrány vesikul vyrobených z bakterií.
Výhodně jsou antigenní prostředky (a vakcíny), které obsahují polysacharidy popsané výše, lyofilizovány do doby použití, kdy jsou rekonstituovány za použití ředidla. Výhodněji jsou lyofilizovány za přítomností 3D-MPL a jsou rekonstituovány za použití salinického roztoku. Alternativně mohou být protein a polysacharid skladovány samostatně ve vakcinačním kitu (kde jsou jedna nebo obě složky lyofilizovány) a tyto složky jsou rekonstituovány a smíseny před použitím, nebo jsou podány pacientovi samostatně. Thl adjuvans (výhodně 3D-MPL) může být přítomno v obou složkách.
Lyofilizace vakcín je dobře známá v oboru. Obvykle se kapalná vakcína suší vymražením za přítomnosti činidla zabraňujících tvorbě sraženin, jak je například sacharid, např. sacharosa nebo laktosa (která je přítomná v počáteční koncentraci 10 až 200 mg/ml). Lyofilizace má obvykle několik kroků, například začíná cyklus při -69 °C, postupně se teplota upraví na -24 °C během 3 hodin, potom se tato teplota udržuje po dobu 18 hodin, potom se postupně upraví na -16 °C a během 1 hodin, potom se tato teplota udržuje po dobu 6 hodin, a potom se během 3 hodin upraví na +34 °C a nakonec se tato teplota udržuje po dobu 9 hodin.
Lyofilizace přípravku vede k zisku stabilnějšího přípravku (například je bráněno rozkladu polysacharidových antigenů. Tento proces je také překvapivě odpovědný za vyšší titry protilátek proti pneumokokovým polysacharidům. Toto bylo zjištěno zejména pro PS 6B konjugáty. Dalším aspektem vynálezu je tedy lyofilizovaný antigenní prostředek obsahující PS 6B konjugát a 3DMPL adjuvans (výhodně bez adjuvans na bázi hliníku) a pneumokokový protein vybraný ze skupiny zahrnující: PhtA, PhtB, PhtD, PhtE, SpsA, LytB, LytC, LytA, Spl25, Spi01, Spl28, Spl30 a Spi33.
Příklady uskutečnění vynálezu
Tyto příklady ilustrují, ale nijak neomezují předkládaný vynález.
Příklad 1. Kapsulámí polysacharid Streptococcus pneumoniae lvalentní testovaná vakcína obsahovala kapsulámí polysacharidy serotypů 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F a 23F, které byly připraveny způsobem popsaným v EP 72 513. Každý polysacharid byl aktivován a derivatizován za použití CDAP chemických činidel (WO95/08 348) a byl konjugován na proteinový nosič. Všechny polysacharidy byly konjugovány vjejich nativní formě, s výjimkou serotypů 3 (který byl zmenšen za účelem snížení viskozity).
- 13 CZ 305324 B6
Proteinový nosič:
Vybraným proteinovým nosičem je rekombinantní protein D (PD) z netypizovatelného H. influenzae, který byl exprimovaný v E. coli.
Exprese proteinu D
Protein D Haemophilus influenzae
Genetické konstrukty pro expresi proteinu D
Výchozí materiály
DNA kóduj ící protein D
Protein D je vysoce konzervovaný mezi H. influenzae všech serotypů a netypizovatelnými kmeny. Vektor pHIC348 obsahující DNA sekvenci kódující celý gen pro protein D byl získán od Dr. A. Forsgrena, Department of Medical Microbiology, University of Lund, Malmo General Hospital, Malmo, Sweden. DNA sekvence proteinu D byla publikována v Janson et al. (1991), Infect. Immunol. 59: 119 až 125.
Expresní vektor pMGl
Expresní vektor pMGl je derivátem pBR.322 (Gross et al., 1985), do kterého byly zavedeny kontrolní elementy pro transkripci a translaci cizorodých insertovaných genů z bakteriofágu lambda (Schtzman et al., 1983). Kromě toho byl gen pro resistenci na ampicilin zaměněn za gen pro resistenci na kanamycin.
Kmen AR58 E. coli
Kmen AR58 E. coli byl připraven transdukcí N99 Pl fágem předem kultivovaným na SA500 derivátu (galE::TN10, lambdaKil cI857 ΔΗ1). H99 a SA500 jsou kmeny K12 E. coli získané z laboratoře Dr. Martina Rosenberga v National Institute of Health.
Exprese vektoru pMG 1
Pro redukci proteinu D se DNA kódující protein klonovala do expresního vektoru pMGl. Tento plasmid využívá signály z DNA fágu lambda pro řízení transkripce a translace insertovaných cizích genů. Vektor obsahuje promotor PL, operátor OL a dvě užitná místa (NutL a NutR) pro odstranění efektů transkripční polarity, když je poskytnut N protein (Gross et al., 1985). Vektory obsahující PL promotor se vložily do E. coli lysogenní hostitelské buňky pro stabilizování plasmidové DNA. Lysogenní hostitelské kmeny obsahují replikace-defektní DNA fágu lambda integrovanou do genomu (Shatzman et al., 1983). Chromosomální DNA fágu lambda řídí syntézu cl represorového proteinu, který se váže na OL represor vektoru a brání vazbě RNA polymerasy na PL promotor a tak transkripci insertovaného genu. cl gen expresního kmene AR58 obsahuje teplotně-sensitivní mutant, takže transkripce řízená PL může být regulována teplotním posunem, tj. zvýšení kultivační teploty inaktivuje represor a je iniciována syntéza cizího proteinu. Tento systém umožňuje řízenou syntézu cizích proteinů, zejména těch, které mohou být toxické pro buňky (Shimataka and Rosenberg, 1981).
AR58 lysogenní kmen E. coli použitý pro produkci proteinu D jako nosiče je derivátem standardního NIH E.coli K12 kmenu N99 (F su galK2, lacZ thr ). Obsahuje defektní lysogenní fág lambda (galE::TN10, lambdaKiFcI857 ΔΗ1). Kil fenotyp brání vypnutí syntézy makromolekul u hostitele. 0857 mutace způsobuje teplotně-sensitivní lézi v cl represoru. ΔΗ1 delece odstraňuje pravý operon fágu lambda a lokusy bio, uvr3 a chlA hostitele. Kmen AR58 byl připraven
- 14CZ 305324 B6 transdukcí N99 Pl fágem předem kultivovaným na SA500 derivátu (galE::TN10, lambdaKil“ c!857 ΔΗ1). Vložení defektního lysogenu do N99 se selektuje pomocí tetracyklinu díky přítomnosti TN10 transposonu kódujícího resistenci na tetracyklin v sousedství galE genu.
Konstrukce vektoru pMGMDPPrD
Vektor pMGl, který obsahuje gen kódující nestrukturální protein SI viru chřipky (pMGNSI) se použil pro konstrukci pMGMDPPrD. Gen proteinu D se amplikoval PCR z vektoru pHIC348 (Janson et al., 1991) s PCR primery obsahujícími Ncol a Xbal restrikční místa na 5' a 3' koncích, v příslušném pořadí. Ncol/Xbal fragment se potom vložil do pMGNSI mezi Ncol a Xbal, za vzniku fúzního proteinu obsahujícího N-koncových 81 aminokyselin proteinu NS1 a potom PD protein. Tento vektor se označil jako pMGNSI PrD.
Podle konstruktu popsaného výše se připravil konečný konstrukt pro expresi proteinu D. BamHI/BamHI fragment se odstranil z pMGNSIPrD. Tato hydrolýza DNA odstranila NS1 kódující region, kromě prvních tří N-koncových zbytků. Po religování vektoru se získal gen kódující fúzní protein s následující N-terminální aminokyselinovou sekvencí:
-------MDP SSHSSNMANT—
NS1 Protein D
Protein D neobsahoval vedoucí peptid nebo N-terminální cystein, na který se normálně váží lipidové řetězce. Protein není proto ani vylučován do periplasmy, ani lipidován a zůstává v cytoplasmě v solubilní formě.
Konečný konstrukt pMG-MDPPrD se vložil do AR58 hostitelského kmene pomocí teplotního šoku při 37 °C. Bakterie obsahující plasmid se selektovaly za přítomnosti kanamycinu. Přítomnost DNA insertu kódujícího protein D se prokázala trávením izolované plasmidové DNA vybranými endonukleasami. Rekombinantní kmen E. coli se označil jako ECD4.
Exprese proteinu D byla pod kontrolou lambda PL promotoru/OL operátoru. Hostitelský kmen AR58 obsahuje teplotně sensitivní cl gen v genomu, který blokuje expresi z lambda Pl při nízké teplotě vazbou na OL. Když je teplota zvýšena, cl se uvolní z OL a protein D se exprimuje. Na konci fermentace jsou buňky koncentrovány a zmraženy.
Extrakce ze získaných buněk a přečištění proteinu D se provedlo následujícím způsobem. Zmrazená buněčná peleta se rozmrazila a resuspendovala se v roztoku pro rozrušení buněk (citrátový pufr pH 6,0) na konečné OD650 = 60. Tato suspenze se zpracovala dvakrát ve vysokotlakém homogenizačním zařízení při P = 1000 barů (100 MPa). Homogenizát buněčné kultury se pročistil odstředěním a buněčná drť se odstranila filtrací. V první stupni přečištění se přefiltrovaný lyzát aplikoval do kationtové iontoměničové chromatografické kolony (SP Sepharose Fast Flow). PD se váže na gelovou matrici prostřednictvím iontových interakcí a eluuje se postupným zvyšováním iontové síly elučního pufru.
Ve druhém stupni přečištění se nečistoty zachycují na aniontoměničové matrici (Q Sepharose Fast Flow). PD se naváže na gel a může být odebírán z výtokové frakce.
V obou stupních chromatografie na koloně se odběr frakcí sleduje pomocí OD. Výplach z aniontoměničové chromatografické kolony obsahující přečištěný protein D se zahustí ultrafiltrací.
Ultrafiltrát obsahující protein D se nakonec nechá projít membránou vel. 0,2 pm.
- 15CZ 305324 B6
Chemická činidla
Aktivační a kondenzační chemická činidla
Aktivační a kondenzační podmínky jsou specifické pro každý polysacharid. Tyto podmínky jsou uvedeny v tabulce 1. Nativní polysacharid (s výjimkou PS3) se rozpustil v NaCl 2M nebo ve vodě pro injekce. Optimální koncentrace polysacharidu se hodnotila pro všechny serotypy.
Ze zásobního roztoku o koncentraci 100 mg/ml v acetonitrilu se CDAP (CDAP/PS poměr 0,75 mg/mg PS) přidal k roztoku polysacharidu. O 1,5 minuty později se přidal 0,2 M triethylamin, pro specifické aktivační pH. Aktivace polysacharidu se provedla při tomto pH během 2 minut při 25 °C. Protein D (jehož množství závisí na počátečním poměru PS/PD) se přidal k aktivovanému polysacharidu a kondenzační reakce se provedla při specifickém pH během 1 hodiny. Reakce se potom utlumila glycinem během 30 minut při 25 °C a přes noc při 4 °C.
Konjugáty se přečistily gelovou filtrací za použití Sephacryl 500 HR gelové filtrační kolony uvedené do rovnováhy 0,2 M NaCl.
Určil se obsah karbohydrátu a proteinu v eluovaných frakcích. Konjugáty se kombinovaly a sterilně se přefiltrovaly na 0,22 pm sterilizační membráně. Určily se poměry PS/protein v konjugovaných přípravcích.
Charakterizace
Každý konjugát se charakterizoval a splňoval specifikace popsané v tabulce 2. Obsah polysacharidu (pg/ml) se měřil Resorcinolovým testem a obsah proteinu (pg/ml) se měřil Lowryho testem. Konečný poměr PS/PD (hmotn./hmotn.) se určil podle poměru koncentrací.
Residuální obsah DMAP (ng/pg PS):
Aktivace polysacharidu CDAP vkládá kyanatanovou skupinu do polysacharidu a uvolňuje DMAP (4-dimethyIaminopyridin). Zbytkový obsah DMAP se určil specifickým testem vyvíjeným v SB.
Obsah volného polysacharidu (%):
Obsah volného polysacharidu v konjugátu při 4 °C nebo skladovaném po dobu 7 dnů při 37 °C se určil na supematantu získaném po inkubaci s α-PD protilátkami a nasyceným síranem amonným, po které se provedlo odstředění.
aPS/a-PS ELISA se použila pro kvantifikaci volného polysacharidu v supematantu. Nepřítomnost konjugátu se také kontrolovala α-PS/a-PS ELISA. Redukce množství volného polysacharidu vedla k zisku lepší konjugované vakcíny.
Antigenicita
Antigenicita stejných konjugátů se analyzovala v sandwichovém ELISA, ve kterém zachycovací protilátkou byla α-PS a detekční protilátkou byla a-PD.
Obsah volného proteinu (%):
Koncentrace „volného“ zbytkového proteinu D se určila za použití metody se zpracováním vzorku pomocí SDS. Konjugát se zahříval po dobu 10 minut při 100 °C za přítomnosti SDS 0,1% a injikoval se do SEC-HPLC gelové filtrační kolony (TSK 3000 - PWXL). Protože je protein D
- 16CZ 305324 B6 dimer, existuje riziko nadhodnocení koncentrace „volného“ proteinu D v důsledku disociace struktury působením SDS.
Molekulová velikost (Kav):
Molekulová velikost se určila na SEC-HPLC gelové filtrační koloně (TSK 3000 - PWXL).
Stabilita:
io Stabilita se měřila na HPLC gelové filtrační koloně (TSK 3000 - PWXL). Pro konjugáty přechovávané při 4 °C a skladované po dobu 7 dnů při 37 °C.
Charakterizace 11 valentního přípravku je uvedena v tabulce 2.
Proteinové konjugáty mohou být adsorbovány na fosforečnan hlinitý a mohou být uskladněny za vzniku konečné vakcíny.
Závěr:
Byly připraveny imunogenní konjugáty, které jsou složkami slibné vakcíny. Optimalizované CDAP podmínky pro nejlepší kvalitu konečného konjugovaného pneumokokového polysacharidu byly zajištěny pro každou z 11 valencí.
Tabulka 1: Specifické aktivační/kondenzační/utlumovací podmínky pro konjugáty PS Streptococcus pneumoniae-protein D
| Serotyp | 1 | 3 (pfluid) | 4 | 5 | 6B | 7F |
| Konc. PS (mg/ml) | 2,0 | 3,0 | 2,0 | 7,5 | 5,4 | 3,0 |
| Rozpouštění PS | NaCl 2M | NaCl 2M | H2O | h2o | NaCl 2M | NaCl 2M |
| Koncentrace PD (mg/ml) | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 |
| Iniciální poměr PS/PD (hmot./hmot.) | 1/1 | 1/1 | 1/1 | 1/1 | 1/1 | 1/1 |
| Koncentrace CDAP (mg/mg PS) | 0,75 | 0,75 | 0,75 | 0,75 | 0,75 | 0,75 |
| PHa=pHc=pHq | 9,0/9,0/9,0 | 9,0/9,0/9,0 | 9,0/9,0/9,0 | 9,0/9,0/9,0 | 9,5/9,5/9,0 | 9,0/9,0/9,0 |
- 17CZ 305324 B6
| Serotyp | 9V | 14 | 18C | 19F | 23F |
| Konc. PS (mg/ml) | 2,5 | 2,5 | 2,0 | 4,0 | 3,3 |
| Rozpouštění PS | NaCl 2M | NaCl 2M | H2O | NaCl 2M | NaCl 2M |
| Koncentrace PD (mg/ml) | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 | 5,0 |
| Iniciálrií poměr PS/PD (hmot./hmot.) | 1/0,75 | 1/0,75 | 1/1 | 1/0,5 | 1/1 |
| Koncentrace CDAP (mg/mg PS) | 0,75 | 0,75 | 0,75 | 0,75 | 0,75 |
| PHa=pHc=pHq | 8,5/8,5/9,0 | 9,0/9,0/9,0 | 9,0/9,0/9,0 | 10/9,5/9,0 | 9,0/9,0/9,0 |
- 18CZ 305324 B6
Tabulka 2: Specifikace 11-valentní pneumokokové PS-PD vakcíny (první čísla kódu šarže a
-P o
U <u co
Ή fO β
o ε
rC
C
N
| D23PDJ212 | Tt r~; © 1—4 | 0 | CN 1-4 | 0,9 | 0,12 | bez posunu | |||||||
| X | |||||||||||||
| CN | 3 | 0 | |||||||||||
| O | OJ | ||||||||||||
| CN | & | ||||||||||||
| Q cu | CN X | cn | t/3 O cu | 9PD | Τζ | CM | posun | ||||||
| x Q | © | 0 | CN | 0,3 | θ' | N 4> X | Dl | 0 | © 1......t | θ'' | ©” | ||
| in | 5 | ΓΜ | β | ||||||||||
| m | (Zl | CM | |||||||||||
| CM | 0 | bez post | |||||||||||
| H-j Q ΡΠ | X 00 | cu X | 8PD | CM X | © | ||||||||
| Q | o r—< | CN | CM | CM | o | o3 »—1 CA | Q | © t—H | CM | 0,2 | ♦—4 o | ||
| 00 | 3 | 02 | β | ||||||||||
| CM | g | CM | 3 | ||||||||||
| CN | l·—, | M 0 CU | |||||||||||
| 1—j Q CU | ,86 | CM | co 0 CU | 4PD | 00 uo | c- | |||||||
| Q | O r-H | t- | CN r—«i | 0 | © | bez | 5 | © | <1 | m | 0,3 | 1—4 O | N O X) |
| X | CM | ||||||||||||
| cn | S3 | CM | 3 | ||||||||||
| CM | g | CM | |||||||||||
| >— | »— | w 0 cu | |||||||||||
| Q CU | O o | CZ3 O CU | PD | O | |||||||||
| cn | cn | CN | N <U X | ||||||||||
| o Q | t < | <1 | 0,6 | T—4 θ' | N (U X> | O Q | © | <1 | cn θ' | 0,6 | r—4 © | ||
| t-- | in | ||||||||||||
| CM | 3 | CM | 3 | ||||||||||
| CM | g | CM | c | ||||||||||
| >—> | 3 | ·—» | cn O CU | ||||||||||
| Q cu | Ό | 00 | pos | PD | 00 vn | ||||||||
| T*-< | bez | bez | |||||||||||
| o Q | O t—< | 1—< | 00 | 0,2 | co | DO | 0 | T-M | 00 | 1 ( ©” | 1—4 θ' | ||
| N= 0' 0 | CZ) | x=> | CO | ||||||||||
| CU | © 0 | cu | |||||||||||
| T*“4 | 00 | 1—4 | 00 | ||||||||||
| V | X | V | =L | ||||||||||
| z—X | 'ob | x© | ob | ||||||||||
| in | β | ŽN | un | β | |||||||||
| o J3 | β 2 | »—< v ζ~“ν X© | 10 © v | w O | β X | V (e? | •Z) ©' V | ||||||
| 4-( cú | ©\ | z~X | ^5 | 3 | r z | z—X | |||||||
| 0 s r®. | X5 O Cd <z> | a a • r—< ¢) | tzi cu 00 =L | ctí to | O | X «$ CZJ >> | § | (Z) CU 00 i | CQ X-Z 4—» CA | ||||
| fi • w | O cu | O P cu | “m c | 0 X » »— | β | o CU | 0 »1 cu | ob β | 0 X | ||||
| <υ 4-» | 0 | 0 | 3 | <υ | O | 0 | cu | 3 | |||||
| O | 45 | X! | cu | > | o | X | X | > | |||||
| g | .cu 00 | Jž o | X _β O | 'C0 > O | .CU (Z! | N> 0 | j| 0 | 'C0 O | |||||
| CS | cu | > | > | Q | 3 | 03 4-» | CU | > | > | Q | 3 | 5 | |
| 4-1 oj | 4-« ><U | Í3 | Í3 | Í3 | <υ | » r4 | >0 | ig | i3 | Í3 | X <u | ||
| ε | <Zi | CO | <ZJ | ——H | -G | ε | co | t/i | cz> | -O | |||
| £ | o | 40 | X | X | O | 03 | X | X | X | 0 | OS | ||
| cu | O | 0 | 0 | (Z) | (U | 0 | 0 | 0 |
- 19CZ 305324 B6
Příklad 2: Příznivý dopad přidání jednoho nebo více pneumokokových proteinů podle předkládaného vynálezu +/- 3D-MPL na protektivní účinnost PD-konjugované 1 lvalentní polysacharidové vakcíny proti pneumokokové kolonizaci plic u myší.
Imunologické odečty
ELISA stanovení sérových IgG specifických pro pneumokokový protein
Maxisorp Nunc imunoplotny se potáhly během 2 hodin při 37 °C 100 pg/jamku 2pg/ml proteinem naředěným v PBS. Plotny se promyly 3krát NaCl 0,9% Tween-20 0,05% pufrem. Potom se přidala sériová 2-násobná ředění (v PBS/Tween 20, 0,05%, 100 μΐ na jamku) anti-proteinového referenčního séra jako standard (od 670 ng/ml IgG) a vzorky séra (od ředění 1/10) se inkubovaly po dobu 30 minut při 20 °C za třepání. Po promytí, jak bylo popsáno výše, se kozí protilátka proti myším IgG konjugovaná s peroxidasou (Jackson) naředěná 5000x v PBS/Tween 20 0,05% inkubovala (100 pg/jamku) po dobu 20 °C za třepání. Po promytí se plotny inkubovaly po dobu 15 minut při teplotě místnosti se 100 μΐ/jamku detekčního pufru (OPDA 0,4 mg/ml a H2O 0,05 % vlOOmM citrátového pufru, pH 4,5). Detekce se ukončila přidáním IN HC1 v dávce 50 pg/jamku. Optické density se odečítaly při 490 a 620 nm za použití Emax čtečky ploten (Molecular Devices). Titr protilátky se vypočetl pomocí 4 parametrické matematické metody za použití SofitmaxPro softwaru.
Test opsonofagocytosy
Cílem tohoto testu je reprodukovatelné měření opsonizační kapacity testovaných vzorků séra proti Streptococcus pneumoniae serotypů 1, 3, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F nebo 23F, za použití způsobu upraveného z publikované standardizované metody CDC (Steiner et al., Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology 4: 415: 1997).
Tento test napodobuje in vitro podmínky, kteréjsou in vivo primárním mechanismem eliminující invadující Streptococcus pneumoniae, po které následuje fagocytosa a potom usmrcení mikroorganismů. „Fagocytosa“ je proces, při kterém buňky pohltí materiál a uzavřou ho ve vakuole (fagosomu) v cytoplasmě. Pneumokoky jsou usmrceny tehdy, když jsou fagocytovány zdravými savčími fagocyty. „Opsonizace“ je proces, který usnadňuje fagocytosu deponováním opsoninů, například protilátek a komplementu, na antigen.
V literatuře je popsáno mnoho opsonofagocytámích testů. Standardizované metoda CDC byla testována v mnoha laboratořích (Steiner et al., ICAAC, Sept. 16 až 20, 2000, Toronto). Tento test byl potom upraven v SB, protože poskytuje základ pro srovnání pro jiné laboratoře, používá činidla a kontroly, která jsou obecně dostupná, a vyjadřuje výsledky jako titr (ředění) séra, které usnadňují zabíjení 50 % životaschopných pneumokoků, což je jednotka, která je běžně používaná pro tento typ testu. Kromě toho bylo prokázáno, že tento upravený test může generovat výsledky, které dobře korespondují s 4 dalšími laboratořemi (Steiner et al., ICAAC, Sept. 16 až 20, 2000, Toronto).
Fagocytující buňkou použitou v tomto testu je buněčná linie HL60, která pochází od jedinců s promyelocytámí leukémií a která byla imortalizována Collinsem et al. V roce 1977 (Nátuře 270: 347 až 9). Tato buněčná linie se skládá z nediferencovaných hematopoetických buněk, které jsou tvořeny z 85 % blasty a promyelocyty, z 6 myelocyty a z 9 % diferencovanými buňkami. Polární sloučeniny mohou indukovat diferenciaci buněk do alespoň dvou různých linií. N,Ndimethylformamid indukuje diferenciaci granulocytů, což vede ke vzniku buněk podobných polymorfonukleámím buňkám (44 % myelocytů a metamyelocytů a 53 % segmentovaných a tyčkových PMN).
-20CZ 305324 B6
Ve verzi 2 tohoto testu se testované sérum inaktivuje teplem a připraví se 2násobná sériová ředění od % v 96 jamkových mikroplotnách v HBSS médiu obsahujícím 0,3% BSA. Konečný objem naředěného séra v každé jamce je 25 μΐ.
Čtyři objemy HL60 buněk v koncentraci 107 buněk/ml (5 nebo 6 dnů po diferenciaci dimethylformamidem), 2 objemy bakterií Streptococcus pneumoniae (ve vhodném ředění) a 1 objem komplementu od králičích mláďat se smísí bezprostředně před použitím, a 25 μΐ směsi se přidají do každé jamky 96 jamkové mikroplotny obsahující naředěné sérum. Pro serotypy 1 a 6B se množství komplementu zvýší na konečnou koncentraci 12,5 %, čímž se získá verze 3 testu.
Po dvou hodinách inkubace při 37 °C za třepání se plotna umístí na led pro ukončení opsonofagocytámí reakce.
Hodnocení se provede určením jednotek tvořících kolonie (CFU) v každé jamce pomocí inkubace přes noc při 37 °C. „Opsonizační titr“ (OT) se definuje jako převrácená hodnota ředění séra, které je schopné redukovat alespoň o 50 % počet bakterií Streptococcus pneumoniae vjamkách (tj. 50 % usmrcování). % usmrcování se vypočte podle následujícího vzorce:
% usmrcování = (průměr CFU v kontrolních jamkách - CFU vzorku) / průměr CFU v kontrolních jamkách x 100
Pneumokoková intranasální infekce OF1 myší týdnů staré samice OF1 myší se intranasálně infikovaly v anestezii 5105 CFU na myši adaptované Streptococcus pneumoniae serotypů 2, 4 nebo 6B. Plíce se odebraly za 6 hodin po infikování a homogenizovaly se (Ultramax, 24000 rpm, 4 °C) v Todd Hewith Broth (THB, Gibco) médiu. Sériová lOnásobná ředění plicních homogenizátů se umístila při teplotě 37 °C do Petriho misek obsahujících THB agar doplněný kvasinkovým extraktem. Infekce plic pneumokoky se určila jako počet CFU/myš a vyjádřila se jako logaritmicky vážený průměr. Detekční limit byl 2,14 log CFU/myš.
Příklad 2A: Efekt 3D-MPL adjuvans na imunitní reakci proti proteinu
V tomto příkladu jsme hodnotily vliv 3D-MPL adjuvans na imunitní reakci proti proteinu podle předkládaného vynálezu.
Skupiny 10 samic Balb/c myší stáří 6 týdnů se intramuskulámě imunizovaly, ve dny 0, 14 a 21, 1 pg proteinu obsaženým v A: A1PO4 100 pg; nebo Β: A1PO4 100 pg + 5 pg 3D-MPL (3-de-Oacylovaný monofosforyl lipid A, od Ribi Immunochem). IgG se měřil ELISA po podání třetího séra.
Pro libovolný antigen byla nej lepší imunitní reakce indukována u zvířat vakcinovaných přípravky obsahujícími 3D-MPL.
Příklad 2B: Příznivý vliv přidání proteinu podle předkládaného vynálezu +/- 3D-MPL adjuvans na protektivní účinnost PD-konjugované llvalentní polysacharidové vakcíny na kolonizaci plic pneumokoky u OF1 myší, které byly intranasálně infikovány serotypem 2, 4 nebo 6B.
V tomto příkladu jsme hodnotili proíylaktickou účinnost vakcíny obsahující 1 lvalentní konjugát polysacharid-protein D, protein podle předkládaného vynálezu a A1PO4 + 3D-MPL adjuvans, ve srovnání s klasickým přípravkem obsahujícím A1PO4 adsorbovaný llvalentní konjugát protein D-polysacharid.
-21 CZ 305324 B6
Skupina 12 samic OF1 myší stáří 4 týdny se imunizovaly podkožně ve dny 0 a 14 přípravkem obsahujícím A: 50 pg A1PO4; B: 0,1 pg PS/serotyp PD-konjugovaná 1-valentní polysacharidová vakcína + 50 pg A1PO4; nebo C: 0,1 pg PS/seroptyp PD-konjugovaná 1-valentní polysacharidová vakcína + 10 pg proteinu podle předkládaného vynálezu + 50 pg A1PO4 + 5 pg 3D-MPL (od Ribi Immunochem). Infekce byla provedena v den 21 Jak bylo popsáno výše.
Jak bylo v tomto testu prokázáno, je významné ochrany dosaženo při použití 11-valentní polysacharidové konjugované vakcíny doplněné proteinem podle předkládaného vynálezu a obsahující A1PO4 + 3D—MPL adjuvans. Naopak, žádná signifikantní ochrana nebyla pozorována u zvířat imunizovaných 11-valentním polysacharidovým konjugátem/AlPO4 přípravkem. Tento výsledek ukazuje, že přidání proteinu podle předkládaného vynálezu a 3DMPL adjuvans zesiluje účinnost 1 lvalentní polysacharidové konjugované vakcíny proti pneumonii.
Příklad 2C: Imunologická korelace ochrany zjištěné v příkladu 2B
Pro určení imunologických korelátů ochrany dosažené v příkladu 2B 1 lvalentní polysacharidovou konjugovanou vakcínou doplněnou proteinem podle předkládaného vynálezu a 3D-MPL se měřily serologické protilátkové reakce na polysacharid 2, 4 nebo 6B a protein podle předkládaného vynálezu před infikováním.
Titry protilátek se potom srovnávaly s počtem kolonií bakterií v plících příslušných zvířat určeným 6 hodin po infekci. R2 se vypočetl za použití Log/Log lineární regrese.
Vypočtený R2 může ukázat absenci korelace mezi protilátkovou imunitní reakcí a ochranou před oběma antigeny. Titry anti-6B (nebo 2 nebo 4) protilátek se statisticky významně nelišily ve skupinách imunizovaných 1 lvalentní konjugovanou vakcínou nebo stejnou vakcínou doplněnou proteinem podle předkládaného vynálezu a 3D-MPL. Proto není zlepšení ochrany pozorované pro přípravek C způsobeno pouze vyšší protilátkovou reakcí na polysacharid 6B (nebo 2 nebo 4).
Dohromady tyto výsledky naznačují, že ochrana není způsobena pouze protilátkovou imunitní reakcí, ale také buněčnou imunitní reakcí indukovanou proteinovým antigenem (výhodně za přítomnosti 3D-MPL). Toto dále podporuje přidání proteinového antigenu a účinného adjuvans k pneumokokové polysacharidové vakcíně, tak, aby bylo dosaženo spolupráce obou složek imunitní reakce pro dosažení optimální ochrany.
Příklad 3: Kooperace obou složek imunitního systému u myší aktivně imunizovaných proteinem podle předkládaného vynálezu a pasivně imunizovaných protilátkami proti pneumokokovému PS
Příklad 3: Určení koncentrace pasivně podávaných protilátek proti 6B-polysacharidu (anti-PS) chránících proti pneumonii
Způsob:
Vakcinační skupiny: Čtyři skupiny po 16 myších byly pasivně imunizovány (i.p.) v den -1 100 μΐ neředěného krysího anti-polysacharidového séra, kdy každá skupina byla imunizovaná způsobem popsaným dále (celkem 64 myší).
-22 CZ 305324 B6
| Skupina | Specificita | Koncentrace Ig v antiséru |
| G1 | a-PS-6B | 5 pg/ml |
| G2 | a-PS-6B | 2 μg/ml |
| G3 | a-PS-6B | 0,75 pg/ml |
| G4 | Kontrola | 0 gg/ml |
Zvířata: 64 samců CD-I myší od Charles River, Canada, o hmotnosti přibližně 35 g (stáří přibližně 10 týdnů).
Anestezie: Myši byly anestezovány isofluoranem (3%) plus 02 (1 1/min).
Organismus: Streptococcus pneumoniae NI387 (serotyp 6) byl získán z ploten obsahujících tryptikasový sójový agar (TSA) doplněný 5% koňskou krví, které byly suspendovány v 6 ml PBS. io Bezprostředně před infikováním se 1 ml bakteriální suspenze naředil na 9 ml za použití roztaveného živného agaru (BBL) a ponechal se při 41 °C. Myším se aplikovalo přibližně 6,01ogl0 cfu/myš v objemu 50 μΐ.
Infekce: V den 0 se myši anestezovaly způsobem popsaným výše a infikovaly se Streptococcus 15 pneumoniae N1387 (50 μΐ chladné bakteriální suspenze) pomocí intrabronchiální instilace cestou nechirurgické intratracheální intubace. Tento způsob byl popsán ve Woodnut and Berry (Antimicrob. Ag. Chemotherap. 43: 29 (1999)).
Vzorky: V den 3 po infekci se 8 myší/skupinu utratilo nadměrnou dávkou CO2 a odebraly se 20 plíce, které se homogenizovaly v 1 ml PBS. V PBS se připravila 10-násobná sériová ředění, za účelem spočítání počtu životaschopných bakterií. Vzorky se naočkovaly (20 μΐ) trojmo na TSA plotny doplněné 5% koňskou krví a inkubovaly se přes noc při 37 °C před tím, než se vyhodnocovaly. Další skupina myší se usmrtila v den 7 a vzorky se připravily stejným způsobem.
Výsledky:
| Konc.· IgG (μ^/ιηΐ) | Počet bakterií (loglO cfu/plíce) v den po | |
| v krysím séru | infekci | |
| 3 | 8 | |
| 5 | 6,7 ± 0,7 (1/7) | 7,2 ± 0,7 (5/8) |
| 2 | 6,5 ± 0,7 (1/7) | 6,9 ± 1,8 (4/7) |
| 0,75 | 7,7 ± 0,5 (5/8) | 4,8 ± 1,4 (2/8) |
| 0 | 6,7 ± 1,5 (3/6) | 6,3 ± 1,5 (3/9) |
Čísla v závorkách jsou počty zvířat, která skonala před odběrem vzorku.
Závěr: Obecně, nebyl pozorován statisticky významný rozdíl v počtu bakterií izolovaných z jakékoliv léčené skupiny. Toto naznačuje, že nebylo dosaženo žádné měřitelné ochrany při použití protilátky proti polysacharidu k koncentraci do 5 pg/ml, včetně.
-23 CZ 305324 B6
Tento výsledek je podobný výsledku dosaženému v některých lidských klinických studiích, to znamená výsledku, že protilátka proti polysacharidů je nedostatečná pro ochranu před pneumokokovou pneumonií v některých populacích.
Příklad 3B: Stanovení ochrany před pneumonií dosažené aktivním podáním proteinu podle předkládaného vynálezu s nebo bez adjuvans, a synergie se sub-optimální anti-PS protilátkou Způsob:
Zvířata: 128 samců CD-I myší od Charles River, Canada, o hmotnosti přibližně 20 g v 6 týdnech a 38 g v 10 týdnech (stáří přibližně 10 týdnů v době imunizace, 10 týdnů v době infekce).
Imunizace: 6 skupin po 16 myších se imunizovalo podkožní injekcí v dny -22 a -14 100 μΐ vakcíny, jak je podrobně popsána dále (celkem 128 myší). 3D-MPL se získal od Ribi/Corixa.
V den -1 se konkrétní skupiny (viz následující tabulka 1) pasivně imunizovaly (i.p. 100 μΐ) myší protilátkou proti polysacharidů v koncentraci 4,26 pg/ml (4 ml 5 pg/ml + 1,3 ml 2 pg/ml).
| Skupina | Inj ikovaný obj em aktivní složky | Vakcína podaná ve dny -22, -14 (dávka v pg) | Inj ikovaný obj em pasivní složky | Pasivní IgG (den - 1) |
| 1-1 | 100 μΐ s.c. | Protein/AlP04 (10/50) | Ne | |
| 1-2 | 100 pl s.c. | Protein/MPL/AlP04 (10/5/50) | Ne | |
| 1-3 | 100 μΐ s.c. | Protein/AlP04 (10/50) | 100 pl i.p. | a-PS |
| 1-4 | 100 pl s.c. | Protein/MPL/AlP04 (10/5/50) | 100 pl i.p. | a-PS |
| 1-5 | 100 pl s.c. | Protein/AlP04 (10/50) | 100 μΐ i.p. | a-PS |
| 1-6 | 100 μΐ s.c. | Protein/AlP04 (10/50) | Ne |
Infekce: V den 0 se myši anestezovaly isofluranem (3%) plus 02 (1 1/min). Bakteriální inokulum se získalo odběrem kultivovaných Streptococcus pneumoniae NI387 (serotyp 6) z ploten obsahujících tryptikasový sójový agar (TSA) doplněný 5% koňskou krví, které byly suspendovány v 6 ml PBS. 10-násobné ředění (1 ml + 9 ml) se připravilo v roztaveném živném agaru (41 °C). Myši se infikovaly pomocí intrabronchiální instilace cestou nechirurgické intratracheální intubace a dávka byla přibližně 6,0 loglO cfu/myš v objemu 50 pl. Tento způsob byl popsán ve Woodnut and Berry (Antimicrob. Ag. Chemotherap. 43: 29 (1999)).
Vzorky: 72 hodin po infekci se 8 myší/skupinu utratilo nadměrnou dávkou CO2 a odebraly se plíce, které se homogenizovaly v 1 ml PBS. V PBS se připravila lOnásobná sériová ředění, za úče-24CZ 305324 B6 lem spočítání počtu životaschopných bakterií. Vzorky se naočkovaly (20 μΐ) trojmo na TSA plotny doplněné 5% koňskou krví a inkubovaly se přes noc při 37 °C před tím, než se vyhodnocovaly. Další skupina myší se usmrtila v den 7 a vzorky se připravily stejným způsobem.
Analýza dat: Získaným výsledkem pro srovnání léčby je počet bakterií v plících v den 3 a 7 po infekci. Výsledky mohou být vyjádřeny jako skupinové průměry se standardními odchylkami. Statistická analýza může být provedena za použití Student-t testu, ve kterém je hodnota p < 0,05 považována za statisticky významnou.
Jak bylo uvedeno výše, protilátka proti polysacharidu samotná (skupina 1-5) neposkytuje ochranu před růstem pneumokoků v plících. Pneumokokový protein s AIPO4 adjuvans (skupina 1-1) také neposkytuje ochranu, ale účinkuje lépe než protein kombinovaný s 3D-MPL (skupina 1-2).
Nej významnější ochrana byla pozorována ve skupinách s polysacharidovým i proteinem, zejména ve skupině, které byly podány všechny tři složky, protein, 3D-MPL a pasivně podaná protilátka proti polysacharidu (skupina 1—4). Tento závěr je podporován též stupněm mortality. Skupiny 1-3 a zejména 1-4 mají méně úmrtí ve srovnání s dalšími skupinami.
Závěr:
Protože byl pokus proveden s pasivně imunizovanými zvířaty, nemůže být synergní efekt aktivní imunizace proteinem (+/- MPL) způsoben zvýšením koncentrace protilátek proti polysacharidovému antigenů.
Významná ochrana před pneumokokovou pneumonii byla pozorována ve skupinách imunizovaných proteinem i pasivně podanou protilátkou proti polysacharidu, zejména tehdy, pokud byl přítomen též 3D-MPL, což ukazuje na synergii této kombinace.
Pokud je imunizace proti polysacharidu provedena aktivně (výhodně konjugovaným polysacharidem), tak je tento efekt ještě výraznější, v důsledku efektu paměti B-lymfocytů, a konstantní hladiny anti-PS protilátky během pokusu budou přispívat ke kooperaci imunitní reakce.
Příklad 4: Způsob pro stanovení synergie korelováním ochrany
Základním mechanismem ochrany, které lidský organismus využívá pro eliminaci infekčního pneumokoka, je protilátkami zprostředkovaná opsonofagocytosa (Bruyn et al., Clin. Infect. Dis. 14: 251 (1992)). Ačkoliv bylo vyvinuto několik ELISA metod pro měření koncentrace protilátek ke kapsulámímu polysacharidu jako korelátu ochrany, je zřejmé, že test opsonofagocytosy in vitro je lepším korelátem ochrany (Musher et al., J. Infect. Dis. 182: 158 (2000)).
Pneumokokové proteiny podle předkládaného vynálezu poskytují ochranu před pneumokokovou infekcí mechanismy, které jsou odlišné od protilátkami zprostředkované opsonofagocytosy.
V příkladu 2 aktivní imunizace konjugátem a proteinem vykazovala synergní účinky, které nemohly být vysvětleny rozdíly v koncentraci protilátek, protože koncentrace byly stejné v obou skupinách. Proto musí mít residuální ochrana, která byla pozorována, příčinu v synergním účinku, Obdobně, protože je protilátka přidávána pasivně, může být stejného výsledku dosaženo v příkladu 3.
V mnoha případech jsou pneumokokové proteiny podle předkládaného vynálezu asociované s povrchem a předpokládá se, že budou mít nějakou opsonizační aktivitu sami o sobě. V tomto případě je možné odlišit mechanismus ochrany kvantitativním měřením opsonizační kapacity anti-pneumokokového proteinu, což může být použito pro hodnocení relativního příspěvku opsonizační aktivity k dalším synergním mechanismům ochrany.
-25CZ 305324 B6
V myším modelu kolonizace plic může být relativní ochrana každou vakcínou hodnocena podle eliminace bakterií z plic. Alternativně může být účinnost vakcíny hodnocena z průběhu onemocnění, jak se obvykle určuje pro vakcíny.
% ochrany = (CFU/kontrolní plíce - CFU(vakcinovaná plíce)/ (CFU/kontrolní plíce) % účinnosti = (kontroly - vakcinováníj/kontroly
Pro stanovení podílu ochrany nebo účinnosti, který je v důsledku synergního účinku, je třeba určit, jakou účinnost lze očekávat podle opsonizačních titrů.
Ve výše uvedeném příkladu 3 je % ochrany dosažené kombinací způsobeno synergií mezi složkami protein/protilátka, protože ani protein, ani protilátka proti polysacharidu samotné nedosahují takové ochrany.
Je možné zhodnotit velikost příspěvek synergního účinku k ochraně podle relativní opsonizační aktivity. Když je opsonizační aktivita dosažená protilátkou proti kapsulámímu polysacharidu X, a opsonizační aktivita dosažená protilátkou proti pneumokokovému proteinu Y, tak je celková opsonizační aktivita X + Y a relativní podíl opsonizační aktivity proteinu je Y/X + Y. Toto se srovná s relativní protektivní účinností vakcíny, kde anti-polysacharidová část vakcíny poskytuje protektivní účinnost A% a protektivní účinnost vakcíny obsahující polysacharid plus protein je B%. Další účinnost, která nenáleží opsonizační aktivitě, se potom označí jako residuální protektivní aktivita (synergní) = B%-A%-B%*(Y/X+Y).
Tento příklad není omezen na hodnocení účinků synergie. Pokud budou identifikovány další koreláty ochrany, tak mohou být použity pro hodnocení synergního účinku.
Všechny publikace, včetně patentů a patentových přihlášek, citované v předkládaném vynálezu, jsou zde uvedeny ve své úplnosti jako odkazy.
Claims (15)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Imunogenní prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jeden polysacharidový antigen Streptococcus pneumoniae a alespoň jeden proteinový antigen Streptococcus pneumoniae vybraný ze skupiny sestávající z PhtA, PhtD a PhtB, přičemž polysacharidový antigen je prezentován ve formě konjugátu polysacharid—proteinový nosič.
- 2. Imunogenní prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že proteinovým antigenem je PhtD.
- 3. Imunogenní prostředek podle nároku 2, vyznačující se tím, že dále obsahuje Ply.
- 4. Imunogenní prostředek podle kteréhokoliv z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že proteinový nosič je vybrán ze skupiny zahrnující: difterický toxoid; tetanický toxoid; CRM197; přílipkový haemokyanin, KLH; proteinový derivát tuberkulinu, PPD; a protein D z H. influenzae.
- 5. Imunogenní prostředek podle kteréhokoliv z nároků laž4, vyznačující se tím, že vakcína obsahuje alespoň čtyři pneumokokové polysacharidové antigeny z různých serotypů.-26CZ 305324 B6
- 6. Imunogenní prostředek podle kteréhokoliv z předchozích nároků, vyznačující se tím, že dále obsahuje adjuvans.
- 7. Imunogenní prostředek podle nároku 6, vyznačující se tím, že adjuvans zahrnuje sůl hliníku.
- 8. Imunogenní prostředek podle nároku 6, vyznačující se tím, že adjuvans je přednostním induktorem ΤΗ 1 reakce.
- 9. Imunogenní prostředek podle nároku 8, vyznačující se tím, že adjuvans zahrnuje alespoň jedno adjuvans z následující skupiny: 3D-MPL, saponinové imunostimulační činidlo nebo imunostimulační CpG oligonukleotid.
- 10. Imunogenní prostředek podle nároku 9, vyznačující se tím, že adjuvans obsahuje nosič vybraný ze skupiny zahrnující: emulzi olej-ve-vodě, liposomy a sůl hliníku.
- 11. Imunogenní prostředek podle kteréhokoliv z předchozích nároků pro použití jako léčivo.
- 12. Vakcína, vyznačující se tím, že obsahuje imunogenní prostředek podle nároků 1 až 10.
- 13. Použití pneumokokového polysacharidového antigenů v kombinaci s proteinovým antigenem Streptococcus pneumoniae vybraným ze skupiny sestávající z PhtA, PhtD a PhtB a popřípadě adjuvantem indukujícím TH1 reakci pro výrobu léčiva pro prevenci nebo léčení zánětu plic u pacientů starších 55 let, přičemž polysacharidový antigen je konjugován k proteinovému nosiči.
- 14. Použití pneumokokového polysacharidového antigenů v kombinaci s proteinovým antigenem Streptococcus pneumoniae vybraným ze skupiny sestávající z PhtA, PhtD a PhtB a popřípadě adjuvantem indukujícím TH1 reakci pro výrobu léčiva pro prevenci nebo léčení zánětu středního ucha u kojenců nebo batolat, přičemž polysacharidový antigen je konjugován k proteinovému nosiči.
- 15. Způsob přípravy imunogenního prostředku podle kteréhokoliv z nároků 1 až 10, vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:výběr jednoho nebo více pneumokokových polysacharidových antigenů;výběr jednoho nebo více pneumokokových proteinových antigenů ze skupiny sestávající z PhtA, PhtD a PhtB; a smísení uvedeného polysacharidového antigenů a proteinového antigenů s vhodným excipientem;přičemž polysacharidový antigen je prezentován ve formě konjugátu polysacharid-proteinový nosič.Konec dokumentu
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB0022742.1A GB0022742D0 (en) | 2000-09-15 | 2000-09-15 | Vaccine |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ2003756A3 CZ2003756A3 (cs) | 2003-10-15 |
| CZ305324B6 true CZ305324B6 (cs) | 2015-08-05 |
Family
ID=9899575
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2003-757A CZ305343B6 (cs) | 2000-09-15 | 2001-09-12 | Imunogenní prostředek, vakcína s jeho obsahem, její použití a způsob její výroby |
| CZ2003-756A CZ305324B6 (cs) | 2000-09-15 | 2001-09-12 | Imunogenní prostředek, způsob jeho přípravy, vakcína s jeho obsahem a léčivo obsahující pneumokokový polysacharidový antigen v kombinaci s proteinovým antigenem Streptococcus pneumoniae |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ2003-757A CZ305343B6 (cs) | 2000-09-15 | 2001-09-12 | Imunogenní prostředek, vakcína s jeho obsahem, její použití a způsob její výroby |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (5) | US20040081662A1 (cs) |
| EP (6) | EP2305297A1 (cs) |
| JP (3) | JP4903975B2 (cs) |
| KR (5) | KR20100091241A (cs) |
| CN (3) | CN1253205C (cs) |
| AT (1) | ATE516815T1 (cs) |
| AU (4) | AU2002220548B2 (cs) |
| BR (2) | BR0113822A (cs) |
| CA (2) | CA2421998C (cs) |
| CY (1) | CY1111915T1 (cs) |
| CZ (2) | CZ305343B6 (cs) |
| DK (1) | DK1317279T3 (cs) |
| ES (4) | ES2659400T3 (cs) |
| GB (1) | GB0022742D0 (cs) |
| HU (2) | HUP0301043A3 (cs) |
| IL (4) | IL154608A0 (cs) |
| MX (2) | MXPA03002264A (cs) |
| NO (2) | NO336186B1 (cs) |
| NZ (2) | NZ524287A (cs) |
| PL (2) | PL209247B1 (cs) |
| PT (1) | PT1317279E (cs) |
| SI (1) | SI1317279T1 (cs) |
| WO (2) | WO2002022167A2 (cs) |
| ZA (2) | ZA200301526B (cs) |
Families Citing this family (75)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7078042B2 (en) * | 1995-09-15 | 2006-07-18 | Uab Research Foundation | Pneumococcal surface protein C (PspC), epitopic regions and strain selection thereof, and uses therefor |
| US6800744B1 (en) | 1997-07-02 | 2004-10-05 | Genome Therapeutics Corporation | Nucleic acid and amino acid sequences relating to Streptococcus pneumoniae for diagnostics and therapeutics |
| US7129339B1 (en) | 1997-07-02 | 2006-10-31 | Sanofi Pasteur Limited | Nucleic acid and amino acid sequences relating to Streptococcus pneumoniae for diagnostics and therapeutics |
| US20010016200A1 (en) | 1998-04-23 | 2001-08-23 | Briles David E. | Pneumococcal surface protein C (PspC), epitopic regions and strain selection thereof, and uses therefor |
| US7128918B1 (en) * | 1998-12-23 | 2006-10-31 | Id Biomedical Corporation | Streptococcus antigens |
| MY125202A (en) * | 1999-03-19 | 2006-07-31 | Smithkline Beecham Biologicals S A | Vaccine |
| US7074415B2 (en) * | 2000-06-20 | 2006-07-11 | Id Biomedical Corporation | Streptococcus antigens |
| GB0115176D0 (en) | 2001-06-20 | 2001-08-15 | Chiron Spa | Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines |
| AU2002351623A1 (en) | 2001-12-20 | 2003-07-09 | Shire Biochem Inc. | Streptococcus antigens |
| IL164242A0 (en) * | 2002-04-02 | 2005-12-18 | Univ Ben Gurion | Protein-based streptococcus pneumoniae vaccines |
| US8691243B2 (en) | 2002-04-02 | 2014-04-08 | Ben-Gurion University Of The Negev Research And Development Authority | Protein-based Streptococcus pneumoniae vaccine |
| PT1549338E (pt) | 2002-10-11 | 2011-02-23 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Vacinas polipeptídicas para protecção alargada contra linhagens meningocócicas hipervirulentas |
| GB0227346D0 (en) | 2002-11-22 | 2002-12-31 | Chiron Spa | 741 |
| US8229903B2 (en) * | 2002-12-19 | 2012-07-24 | International Business Machines Corporation | Suggesting data interpretations and patterns for updating policy documents |
| CA3042073C (en) | 2003-01-30 | 2022-09-13 | Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. | Injectable vaccines against multiple meningococcal serogroups |
| WO2004081515A2 (en) | 2003-03-13 | 2004-09-23 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Purification process for bacterial cytolysin |
| EP1477802A1 (en) * | 2003-05-16 | 2004-11-17 | Erasmus Universiteit Rotterdam | Method for selecting and producing vaccine components and vaccines based thereon |
| DE602004032481D1 (de) | 2003-10-02 | 2011-06-09 | Novartis Vaccines & Diagnostic | Kombinationsimpfstoffe gegen Meningitis |
| GB0323103D0 (en) | 2003-10-02 | 2003-11-05 | Chiron Srl | De-acetylated saccharides |
| BRPI0516770A (pt) * | 2004-09-21 | 2008-09-23 | Sanofi Pasteur Inc | vacina e conjugados de proteìna - derivados de polissacarìdeo de meningocócico multivalente |
| CN102716480B (zh) * | 2005-04-08 | 2023-03-21 | 惠氏有限责任公司 | 多价肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物组合物 |
| AU2011253684B8 (en) * | 2005-04-08 | 2013-07-11 | Wyeth Llc | Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition |
| GB0522765D0 (en) | 2005-11-08 | 2005-12-14 | Chiron Srl | Combination vaccine manufacture |
| GB0524066D0 (en) | 2005-11-25 | 2006-01-04 | Chiron Srl | 741 ii |
| TWI457133B (zh) | 2005-12-13 | 2014-10-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 新穎組合物 |
| TW201350129A (zh) | 2005-12-22 | 2013-12-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 包含莢膜醣結合物之肺炎鏈球菌免疫原組合物、包含其之疫苗及套組及其用途 |
| DK1976974T3 (da) * | 2005-12-28 | 2014-09-15 | Uab Research Foundation | Pneumokok-serotyper. |
| US8808707B1 (en) | 2006-05-08 | 2014-08-19 | Wyeth Llc | Pneumococcal dosing regimen |
| KR101523108B1 (ko) * | 2006-08-17 | 2015-05-26 | 더 유에이비 리서치 파운데이션 | 면역원성 ｐｃｐａ 폴리펩티드 및 이의 용도 |
| PL2148697T3 (pl) * | 2007-05-24 | 2013-02-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Liofilizowana kompozycja WT-1 zawierająca CpG |
| EP2687228B1 (en) | 2007-06-26 | 2017-07-19 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine comprising streptococcus pneumoniae capsular polysaccharide conjugates |
| GB0713880D0 (en) | 2007-07-17 | 2007-08-29 | Novartis Ag | Conjugate purification |
| US20160228500A9 (en) * | 2007-07-23 | 2016-08-11 | Martina Ochs | Immunogenic Polypeptides and Monoclonal Antibodies |
| US8337846B2 (en) * | 2007-07-23 | 2012-12-25 | Sanofi Pasteur Limited | Immunogenic polypeptides and monoclonal antibodies |
| GB0714963D0 (en) | 2007-08-01 | 2007-09-12 | Novartis Ag | Compositions comprising antigens |
| US20100278819A1 (en) * | 2007-09-14 | 2010-11-04 | Katholieke Universiteit Leuven | Streptococcus pneumoniae vaccines |
| MX2010008514A (es) * | 2008-02-01 | 2010-09-30 | Sanofi Pasteur Ltd | Analisis para diagnosticar neumonia estreptococica. |
| PT2268618E (pt) | 2008-03-03 | 2015-10-12 | Novartis Ag | Compostos e composições moduladores da actividade tlr |
| CA2756533A1 (en) | 2009-03-24 | 2010-09-30 | Novartis Ag | Combinations of meningococcal factor h binding protein and pneumococcal saccharide conjugates |
| CN102762226A (zh) | 2009-06-10 | 2012-10-31 | 诺华有限公司 | 含苯并萘啶的疫苗 |
| CA2772916C (en) | 2009-09-02 | 2019-01-15 | Novartis Ag | Immunogenic compositions including tlr activity modulators |
| TWI445708B (zh) | 2009-09-02 | 2014-07-21 | Irm Llc | 作為ｔｌｒ活性調節劑之化合物及組合物 |
| US20120237536A1 (en) | 2009-09-10 | 2012-09-20 | Novartis | Combination vaccines against respiratory tract diseases |
| CN101690810B (zh) * | 2009-10-21 | 2011-08-17 | 辽宁益康生物股份有限公司 | 一种鸡新城疫、传染性支气管炎、减蛋综合征、禽流感四联灭活疫苗佐剂及其制备方法 |
| WO2011057148A1 (en) | 2009-11-05 | 2011-05-12 | Irm Llc | Compounds and compositions as tlr-7 activity modulators |
| BR112012014624A8 (pt) | 2009-12-15 | 2017-12-26 | Novartis Ag | suspensão homogênea de compostos de imunopotenciação e usos dos destes |
| US9649372B2 (en) | 2009-12-22 | 2017-05-16 | Sanofi Pasteur Limited | Immunogenic compositions and related methods |
| CN102802664B (zh) * | 2009-12-22 | 2017-04-05 | 赛诺菲巴斯德有限公司 | 免疫原性组合物 |
| GB201003922D0 (en) | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Conjugation process |
| GB201003920D0 (en) * | 2010-03-09 | 2010-04-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Method of treatment |
| JP5848748B2 (ja) | 2010-03-23 | 2016-01-27 | アイアールエム・リミテッド・ライアビリティ・カンパニーＩｒｍ，Ｌｌｃ | 感染症、炎症、呼吸器疾患などの処置に使用するｔｌｒ２アゴニストとしての化合物（システインベースのリポペプチド）および組成物 |
| WO2012072769A1 (en) | 2010-12-01 | 2012-06-07 | Novartis Ag | Pneumococcal rrgb epitopes and clade combinations |
| JP6046632B2 (ja) * | 2010-12-03 | 2016-12-21 | サノフィ パストゥール リミテッドＳａｎｏｆｉ Ｐａｓｔｅｕｒ Ｌｉｍｉｔｅｄ | 肺炎球菌に対する免疫用組成物 |
| TW201309327A (zh) * | 2011-05-17 | 2013-03-01 | Glaxosmithkline Biolog Sa | 疫苗 |
| CN104519910B (zh) | 2012-03-07 | 2017-05-03 | 诺华股份有限公司 | 肺炎链球菌抗原的含佐剂制剂 |
| JP2014000016A (ja) * | 2012-06-15 | 2014-01-09 | National Agriculture & Food Research Organization | 豚丹毒菌の新規な抗原タンパク質、その遺伝子、及び組換えベクターとその利用 |
| RU2510281C2 (ru) * | 2012-06-22 | 2014-03-27 | Общество с ограниченной ответственностью "Эпитоп" (ООО "Эпитоп") | ВАКЦИНА ПРОТИВ ПНЕВМОНИИ, ВЫЗЫВАЕМОЙ Streptococcus pneumoniae, НА ОСНОВЕ ГИБРИДНОГО БЕЛКА |
| GB201218660D0 (en) | 2012-10-17 | 2012-11-28 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| MX365842B (es) * | 2012-10-17 | 2019-06-17 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Composicion inmunogenica que comprende 1 o mas conjugados de sacaridos capsulares de streptococcus pneumoniae y un componente proteico que comprende proteinas e y/o pila de haemophilus influenzae. |
| US9562129B2 (en) | 2013-01-01 | 2017-02-07 | Agfa Graphics Nv | (Ethylene, vinyl acetal) copolymers and their use in lithographic printing plate precursors |
| TR201807340T4 (tr) | 2013-02-01 | 2018-06-21 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Çan benzeri reseptör agonistleri içeren immünolojik kompozisyonların intradermal yoldan verilmesi. |
| US11160855B2 (en) | 2014-01-21 | 2021-11-02 | Pfizer Inc. | Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens and uses thereof |
| WO2015183676A1 (en) * | 2014-05-29 | 2015-12-03 | Kapre Subhash V | Synthetic peptides as carriers for conjugation with polysaccharides |
| US9815886B2 (en) | 2014-10-28 | 2017-11-14 | Adma Biologics, Inc. | Compositions and methods for the treatment of immunodeficiency |
| BR112018068758A2 (pt) | 2016-03-16 | 2019-01-22 | Agfa Nv | método e aparelho para processar uma chapa de impressão litográfica |
| WO2018124959A2 (en) * | 2016-12-28 | 2018-07-05 | Henriques Normark Birgitta | Microparticles from streptococcus pneumoniae as vaccine antigens |
| US10259865B2 (en) | 2017-03-15 | 2019-04-16 | Adma Biologics, Inc. | Anti-pneumococcal hyperimmune globulin for the treatment and prevention of pneumococcal infection |
| US10729763B2 (en) | 2017-06-10 | 2020-08-04 | Inventprise, Llc | Mixtures of polysaccharide-protein pegylated compounds |
| JP7132954B2 (ja) | 2017-06-10 | 2022-09-07 | インベントプライズ リミテッド ライアビリティ カンパニー | 改善された免疫原性及び結合活性を提供する２価又は多価コンジュゲート多糖を含む多価コンジュゲートワクチン |
| BR112020016314A2 (pt) | 2018-02-12 | 2020-12-15 | Inimmune Corporation | Compostos ou um sais farmaceuticamente aceitáveis, composição farmacêutica, kit, e, métodos para elicitar, intensificar ou modificar uma resposta imunológica, para tratar, prevenir ou reduzir a suscetibilidade a câncer, para tratar, prevenir ou reduzir a suscetibilidade a uma doença infecciosa, para tratar, prevenir ou reduzir a suscetibilidade a uma alergia, para tratar, prevenir ou reduzir a suscetibilidade a uma afecção autoimune, para tratar, prevenir ou reduzir a suscetibilidade em um sujeito à infecção bacteriana, viral, priônica, autoimunidade, câncer ou alergia, para tratar, prevenir ou reduzir a suscetibilidade à autoimunidade, alergia, reperfusão de isquemia ou sepse, para tratar, prevenir ou reduzir a gravidade de ataques epiléticos e para tratar, prevenir ou reduzir a suscetibilidade a doenças oculares como degeneração macular, hipertensão ocular e infecção ocular |
| KR20210137144A (ko) * | 2019-03-13 | 2021-11-17 | 세인트 쥬드 칠드런즈 리써치 호스피탈, 인코포레이티드 | 스트렙토코커스 뉴모니아에의 전염을 감소시키기 위한 백신 조성물 및 방법 |
| EP3778253A1 (en) | 2019-08-13 | 2021-02-17 | Agfa Nv | Method for processing a lithographic printing plate |
| CA3191005A1 (en) | 2020-08-10 | 2022-02-17 | Inventprise, Inc. | Multivalent pneumococcal glycoconjugate vaccines containing emerging serotype 24f |
| EP4240843A1 (en) | 2020-11-04 | 2023-09-13 | Eligo Bioscience | Cutibacterium acnes recombinant phages, method of production and uses thereof |
| WO2024239063A1 (en) * | 2023-05-22 | 2024-11-28 | Gpn Vaccines Pty Ltd | Modified streptococcal immunogen and uses thereof |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990006951A1 (en) * | 1988-12-16 | 1990-06-28 | De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezondheid En Cultuur | Pneumolysin mutants and pneumococcal vaccines made therefrom |
| WO1998018930A2 (en) * | 1996-10-31 | 1998-05-07 | Human Genome Sciences, Inc. | Streptococcus pneumoniae antigens and vaccines |
| WO1999003884A2 (en) * | 1997-07-21 | 1999-01-28 | North American Vaccine, Inc. | Modified immunogenic pneumolysin, compositions and their use as vaccines |
| CZ301445B6 (cs) * | 1999-03-19 | 2010-03-03 | Smithkline Beecham Biologicals S. A. | Imunogenní prostredek, obsahující alespon jeden polysacharidový a alespon jeden proteinový antigen mikroorganizmu Streptococcus pneumoniae a adjuvans |
Family Cites Families (90)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4235877A (en) | 1979-06-27 | 1980-11-25 | Merck & Co., Inc. | Liposome particle containing viral or bacterial antigenic subunit |
| US4372945A (en) | 1979-11-13 | 1983-02-08 | Likhite Vilas V | Antigen compounds |
| IL61904A (en) | 1981-01-13 | 1985-07-31 | Yeda Res & Dev | Synthetic vaccine against influenza virus infections comprising a synthetic peptide and process for producing same |
| BE889979A (fr) | 1981-08-14 | 1982-02-15 | Smith Kline Rit | Procede de preparation de polysaccharides bacteriens capsulaires antigeniques purifies, produits obtenus et leur utilisation |
| US5360897A (en) * | 1981-08-31 | 1994-11-01 | The University Of Rochester | Immunogenic conjugates of streptococcus pneumonial capsular polymer and toxin or in toxiad |
| US4761283A (en) * | 1983-07-05 | 1988-08-02 | The University Of Rochester | Immunogenic conjugates |
| US4882317A (en) * | 1984-05-10 | 1989-11-21 | Merck & Co., Inc. | Covalently-modified bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers and methods of preparing such polysaccharides and conjugataes and of confirming covalency |
| US4596556A (en) | 1985-03-25 | 1986-06-24 | Bioject, Inc. | Hypodermic injection apparatus |
| US4709017A (en) | 1985-06-07 | 1987-11-24 | President And Fellows Of Harvard College | Modified toxic vaccines |
| US5173294A (en) | 1986-11-18 | 1992-12-22 | Research Foundation Of State University Of New York | Dna probe for the identification of haemophilus influenzae |
| US4790824A (en) | 1987-06-19 | 1988-12-13 | Bioject, Inc. | Non-invasive hypodermic injection device |
| US4941880A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-17 | Bioject, Inc. | Pre-filled ampule and non-invasive hypodermic injection device assembly |
| US4940460A (en) | 1987-06-19 | 1990-07-10 | Bioject, Inc. | Patient-fillable and non-invasive hypodermic injection device assembly |
| US5339163A (en) | 1988-03-16 | 1994-08-16 | Canon Kabushiki Kaisha | Automatic exposure control device using plural image plane detection areas |
| US4912094B1 (en) | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
| US5006914A (en) * | 1988-12-02 | 1991-04-09 | Advanced Technology Materials, Inc. | Single crystal semiconductor substrate articles and semiconductor devices comprising same |
| US5312335A (en) | 1989-11-09 | 1994-05-17 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
| US5064413A (en) | 1989-11-09 | 1991-11-12 | Bioject, Inc. | Needleless hypodermic injection device |
| SE466259B (sv) | 1990-05-31 | 1992-01-20 | Arne Forsgren | Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal |
| CA2059692C (en) | 1991-01-28 | 2004-11-16 | Peter J. Kniskern | Pneumoccoccal polysaccharide conjugate vaccine |
| CA2059693C (en) | 1991-01-28 | 2003-08-19 | Peter J. Kniskern | Polysaccharide antigens from streptococcus pneumoniae |
| ATE168132T1 (de) | 1991-02-15 | 1998-07-15 | Uab Research Foundation | Strukturgen von pneumokokken-protein |
| US6592876B1 (en) | 1993-04-20 | 2003-07-15 | Uab Research Foundation | Pneumococcal genes, portions thereof, expression products therefrom, and uses of such genes, portions and products |
| US5980909A (en) * | 1991-02-15 | 1999-11-09 | Uab Research Foundation | Epitopic regions of pneumococcal surface protein A |
| US5476929A (en) | 1991-02-15 | 1995-12-19 | Uab Research Foundation | Structural gene of pneumococcal protein |
| US5552146A (en) | 1991-08-15 | 1996-09-03 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions relating to useful antigens of Moraxella catarrhalis |
| GB9118204D0 (en) | 1991-08-23 | 1991-10-09 | Weston Terence E | Needle-less injector |
| US5371197A (en) * | 1991-09-24 | 1994-12-06 | Merck & Co., Inc. | Protein-dimeric polysaccharide conjugate vaccine |
| JP3428646B2 (ja) | 1992-06-18 | 2003-07-22 | プレジデント アンド フェローズ オブ ハーバードカレッジ | ジフテリア毒素ワクチン |
| ATE156710T1 (de) | 1992-06-25 | 1997-08-15 | Smithkline Beecham Biolog | Adjuvantien enthaltende impfstoffzusammensetzung |
| US5383851A (en) | 1992-07-24 | 1995-01-24 | Bioject Inc. | Needleless hypodermic injection device |
| DK0618813T3 (da) * | 1992-09-16 | 2002-03-11 | Univ Tennessee Res Corp | Antigen for M-hybridprotein og bærer for gruppe A streptococcal vaccine |
| US5569189A (en) | 1992-09-28 | 1996-10-29 | Equidyne Systems, Inc. | hypodermic jet injector |
| US5334144A (en) | 1992-10-30 | 1994-08-02 | Becton, Dickinson And Company | Single use disposable needleless injector |
| GB9224584D0 (en) | 1992-11-23 | 1993-01-13 | Connaught Lab | Use of outer membrane protein d15 and its peptides as vaccine against haempohilus influenzae diseases |
| ES2109685T5 (es) | 1993-03-23 | 2005-09-01 | Smithkline Beecham Biologicals S.A. | Composiciones para vacunas que contienen monofosforil-lipido a 3-o-desacilado. |
| JP3429313B2 (ja) | 1993-05-18 | 2003-07-22 | オハイオ・ステイト・リサーチ・ファウンデーション | 中耳炎ワクチン |
| JP3828145B2 (ja) | 1993-09-22 | 2006-10-04 | ヘンリー エム．ジャクソン ファウンデイション フォー ザ アドバンスメント オブ ミリタリー メディスン | 免疫原性構成物の製造のための新規シアン化試薬を使った可溶性炭水化物の活性化方法 |
| GB9326253D0 (en) | 1993-12-23 | 1994-02-23 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccines |
| WO1995024176A1 (en) | 1994-03-07 | 1995-09-14 | Bioject, Inc. | Ampule filling device |
| US5466220A (en) | 1994-03-08 | 1995-11-14 | Bioject, Inc. | Drug vial mixing and transfer device |
| US5866135A (en) * | 1994-04-21 | 1999-02-02 | North American Vaccine, Inc. | Group A streptococcal polysaccharide immunogenic compositions and methods |
| US5917017A (en) | 1994-06-08 | 1999-06-29 | President And Fellows Of Harvard College | Diphtheria toxin vaccines bearing a mutated R domain |
| DE69535036T3 (de) | 1994-07-15 | 2011-07-07 | The University of Iowa Research Foundation, IA | Immunomodulatorische oligonukleotide |
| US5565204A (en) | 1994-08-24 | 1996-10-15 | American Cyanamid Company | Pneumococcal polysaccharide-recombinant pneumolysin conjugate vaccines for immunization against pneumococcal infections |
| US5599302A (en) | 1995-01-09 | 1997-02-04 | Medi-Ject Corporation | Medical injection system and method, gas spring thereof and launching device using gas spring |
| UA56132C2 (uk) | 1995-04-25 | 2003-05-15 | Смітклайн Бічем Байолоджікалс С.А. | Композиція вакцини (варіанти), спосіб стабілізації qs21 відносно гідролізу (варіанти), спосіб приготування композиції вакцини |
| US6440425B1 (en) | 1995-05-01 | 2002-08-27 | Aventis Pasteur Limited | High molecular weight major outer membrane protein of moraxella |
| US5730723A (en) | 1995-10-10 | 1998-03-24 | Visionary Medical Products Corporation, Inc. | Gas pressured needle-less injection device and method |
| US5843464A (en) | 1995-06-02 | 1998-12-01 | The Ohio State University | Synthetic chimeric fimbrin peptides |
| HUP0600442A3 (en) | 1995-06-07 | 2007-03-28 | Biochem Vaccines Inc | Streptococcal heat shock proteins members of the hsp70 family |
| GB9513074D0 (en) | 1995-06-27 | 1995-08-30 | Cortecs Ltd | Novel anigen |
| US6290970B1 (en) | 1995-10-11 | 2001-09-18 | Aventis Pasteur Limited | Transferrin receptor protein of Moraxella |
| US5893397A (en) | 1996-01-12 | 1999-04-13 | Bioject Inc. | Medication vial/syringe liquid-transfer apparatus |
| US6090576A (en) | 1996-03-08 | 2000-07-18 | Connaught Laboratories Limited | DNA encoding a transferrin receptor of Moraxella |
| GB9607549D0 (en) | 1996-04-11 | 1996-06-12 | Weston Medical Ltd | Spring-powered dispensing device |
| AU732520B2 (en) * | 1996-05-01 | 2001-04-26 | Rockefeller University, The | Choline binding proteins for anti-pneumococcal vaccines |
| US6245335B1 (en) * | 1996-05-01 | 2001-06-12 | The Rockefeller University | Choline binding proteins for anti-pneumococcal vaccines |
| US5744417A (en) | 1996-05-02 | 1998-04-28 | Lyondell Petrochemical Company | Supported catalyst |
| US7341727B1 (en) | 1996-05-03 | 2008-03-11 | Emergent Product Development Gaithersburg Inc. | M. catarrhalis outer membrane protein-106 polypeptide, methods of eliciting an immune response comprising same |
| DE69719761T2 (de) | 1996-06-18 | 2003-12-18 | Alza Corp., Palo Alto | Vorrichtung zur verbesserung der transdermalen verabreichung von medikamenten oder der abnahme von körperflüssigkeiten |
| JP2000514308A (ja) | 1996-08-16 | 2000-10-31 | スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション | 新規原核生物ポリヌクレオチド、ポリペプチドおよびそれらの使用 |
| US5882871A (en) | 1996-09-24 | 1999-03-16 | Smithkline Beecham Corporation | Saliva binding protein |
| US5882896A (en) | 1996-09-24 | 1999-03-16 | Smithkline Beecham Corporation | M protein |
| AU5355398A (en) | 1996-11-12 | 1998-06-03 | Regents Of The University Of Minnesota | C3 binding protein of (streptococcus pneumoniae) |
| US5980898A (en) | 1996-11-14 | 1999-11-09 | The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command | Adjuvant for transcutaneous immunization |
| ES2195190T3 (es) | 1996-12-20 | 2003-12-01 | Alza Corp | Dispositivo y metodo para mejorar el flujo de agente transdermico. |
| DE19708537A1 (de) | 1997-03-03 | 1998-09-10 | Biotechnolog Forschung Gmbh | Neues Oberflächenprotein (SpsA-Protein) von Streptococcus pneumoniae etc. |
| FR2763244B1 (fr) * | 1997-05-14 | 2003-08-01 | Pasteur Merieux Serums Vacc | Composition vaccinale multivalente a porteur mixte |
| US5993412A (en) | 1997-05-19 | 1999-11-30 | Bioject, Inc. | Injection apparatus |
| BR9809914A (pt) | 1997-06-03 | 2001-09-18 | Connaught Lab | Genes de moracella receptores de lactoferrina |
| US6224880B1 (en) * | 1997-09-24 | 2001-05-01 | Merck & Co., Inc. | Immunization against Streptococcus pneumoniae using conjugated and unconjugated pneumoccocal polysaccharide vaccines |
| EP1017828A1 (en) | 1997-09-24 | 2000-07-12 | Regents Of The University Of Minnesota | HUMAN COMPLEMENT C3-DEGRADING PROTEINASE FROM $i(STREPTOCOCCUS PNEUMONIAE) |
| EP0916726A1 (en) * | 1997-11-13 | 1999-05-19 | Rijksuniversiteit te Groningen | Attaching substances to micro-organisms |
| CA2312900A1 (en) | 1997-12-02 | 1999-06-10 | Powderject Vaccines, Inc. | Transdermal delivery of particulate vaccine compositions |
| IT1298087B1 (it) | 1998-01-08 | 1999-12-20 | Fiderm S R L | Dispositivo per il controllo della profondita' di penetrazione di un ago, in particolare applicabile ad una siringa per iniezioni |
| US6709658B1 (en) * | 1998-02-12 | 2004-03-23 | Wyeth Holdings Corporation | Pneumococcal vaccines formulated with interleukin-12 |
| HUP0102617A3 (en) | 1998-04-07 | 2006-04-28 | Medimmune Inc Gaithersburg | Derivatives of pneumococcal choline binding proteins for vaccines |
| PL193132B1 (pl) | 1998-04-07 | 2007-01-31 | Medimmune | Wyizolowane polipeptydy, kompozycje farmaceutyczne, zastosowanie kompozycji farmaceutycznych, szczepionki obejmujące polipeptyd, wyizolowane cząsteczki kwasu nukleinowego, wektory, układy gospodarz-wektor, komórka, która nie jest komórką ludzką, sposoby wytwarzania polipeptydu, szczepionka obejmująca cząsteczkę izolowanego kwasu nukleinowego, zastosowania szczepionek |
| CA2328399A1 (en) | 1998-04-23 | 1999-10-28 | University Of Alabama At Birmingham | Pneumococcal surface protein c(pspc), epitopic regions and strain selection thereof, and uses therefor |
| GB9812613D0 (en) | 1998-06-11 | 1998-08-12 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
| AU6060899A (en) | 1998-09-24 | 2000-04-10 | American Cyanamid Company | Human complement c3-degrading polypeptide from (streptococcus pneumoniae) |
| GB2359228A (en) | 1998-11-17 | 2001-08-15 | Schlumberger Technology Corp | Transmitting information over a communication link |
| WO2000029434A2 (en) | 1998-11-19 | 2000-05-25 | St. Jude Children's Research Hospital | PNEUMOCOCCAL CHOLINE BINDING PROTEINS, CbpG AND CbpD, DIAGNOSTIC AND THERAPEUTIC USES THEREOF |
| ES2322306T3 (es) * | 1998-12-21 | 2009-06-18 | Medimmune, Inc. | Proteinas de streptpcpccus pneumoniae y fragmentos inmunogenicos para vacunas. |
| EP1034792A1 (en) * | 1999-03-11 | 2000-09-13 | Pasteur Merieux Serums Et Vaccins | Intranasal delivery of pneumococcal polysaccharide vaccines |
| EP1185297B1 (en) | 1999-06-10 | 2006-05-10 | MedImmune, Inc. | Streptococcus pneumoniae proteins and vaccines |
| CA2379327A1 (en) * | 1999-06-10 | 2000-12-21 | Uab Research Foundation | Pneumococcal surface protein combination vaccine |
| US6319224B1 (en) | 1999-08-20 | 2001-11-20 | Bioject Medical Technologies Inc. | Intradermal injection system for injecting DNA-based injectables into humans |
| US6494865B1 (en) | 1999-10-14 | 2002-12-17 | Becton Dickinson And Company | Intradermal delivery device including a needle assembly |
-
2000
- 2000-09-15 GB GBGB0022742.1A patent/GB0022742D0/en not_active Ceased
-
2001
- 2001-09-12 KR KR1020107014638A patent/KR20100091241A/ko not_active Ceased
- 2001-09-12 SI SI200131001T patent/SI1317279T1/sl unknown
- 2001-09-12 BR BR0113822-7A patent/BR0113822A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 WO PCT/EP2001/010568 patent/WO2002022167A2/en active Search and Examination
- 2001-09-12 CA CA2421998A patent/CA2421998C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 US US10/380,563 patent/US20040081662A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-12 AU AU2002220548A patent/AU2002220548B2/en not_active Ceased
- 2001-09-12 ES ES10178332.2T patent/ES2659400T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 PT PT01984626T patent/PT1317279E/pt unknown
- 2001-09-12 CA CA2422002A patent/CA2422002C/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 EP EP10179133A patent/EP2305297A1/en not_active Ceased
- 2001-09-12 KR KR1020087020661A patent/KR100991916B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 PL PL361395A patent/PL209247B1/pl unknown
- 2001-09-12 NZ NZ524287A patent/NZ524287A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 KR KR10-2003-7003732A patent/KR20030031188A/ko not_active Ceased
- 2001-09-12 JP JP2002526416A patent/JP4903975B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 MX MXPA03002264A patent/MXPA03002264A/es active IP Right Grant
- 2001-09-12 CZ CZ2003-757A patent/CZ305343B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 US US10/380,575 patent/US20060051361A1/en not_active Abandoned
- 2001-09-12 IL IL15460801A patent/IL154608A0/xx unknown
- 2001-09-12 WO PCT/EP2001/010570 patent/WO2002022168A2/en active Application Filing
- 2001-09-12 EP EP01984626A patent/EP1317279B1/en not_active Revoked
- 2001-09-12 HU HU0301043A patent/HUP0301043A3/hu not_active Application Discontinuation
- 2001-09-12 JP JP2002526417A patent/JP4880184B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 EP EP10178332.2A patent/EP2314313B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 AU AU2054802A patent/AU2054802A/xx active Pending
- 2001-09-12 CN CNB018157483A patent/CN1253205C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 KR KR1020037003731A patent/KR100805991B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 AT AT01984626T patent/ATE516815T1/de active
- 2001-09-12 MX MXPA03002265A patent/MXPA03002265A/es active IP Right Grant
- 2001-09-12 EP EP10179135A patent/EP2305298A1/en not_active Withdrawn
- 2001-09-12 BR BR0113821-9A patent/BR0113821A/pt not_active Application Discontinuation
- 2001-09-12 PL PL361401A patent/PL210198B1/pl unknown
- 2001-09-12 ES ES09173889.8T patent/ES2551097T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 HU HU0301092A patent/HUP0301092A3/hu unknown
- 2001-09-12 CN CN2009101285337A patent/CN101502648B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 KR KR1020117026231A patent/KR101268790B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2001-09-12 AU AU2002238193A patent/AU2002238193B2/en not_active Ceased
- 2001-09-12 DK DK01984626.0T patent/DK1317279T3/da active
- 2001-09-12 ES ES01984627.8T patent/ES2545876T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 AU AU3819302A patent/AU3819302A/xx active Pending
- 2001-09-12 IL IL15460701A patent/IL154607A0/xx unknown
- 2001-09-12 CZ CZ2003-756A patent/CZ305324B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 NZ NZ524286A patent/NZ524286A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-09-12 EP EP09173889.8A patent/EP2140878B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 ES ES01984626T patent/ES2368902T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 EP EP01984627.8A patent/EP1317280B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-12 CN CNB018157467A patent/CN100486642C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2003
- 2003-02-24 IL IL154607A patent/IL154607A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-02-24 IL IL154608A patent/IL154608A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-02-25 ZA ZA200301526A patent/ZA200301526B/en unknown
- 2003-02-25 ZA ZA200301524A patent/ZA200301524B/en unknown
- 2003-03-14 NO NO20031183A patent/NO336186B1/no not_active IP Right Cessation
- 2003-03-14 NO NO20031184A patent/NO337730B1/no not_active IP Right Cessation
-
2007
- 2007-05-07 US US11/745,006 patent/US20080081050A1/en not_active Abandoned
-
2010
- 2010-08-13 US US12/855,734 patent/US20110008419A1/en not_active Abandoned
-
2011
- 2011-09-12 JP JP2011198277A patent/JP2012006969A/ja active Pending
- 2011-10-06 CY CY20111100958T patent/CY1111915T1/el unknown
-
2013
- 2013-12-10 US US14/101,995 patent/US20140099339A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1990006951A1 (en) * | 1988-12-16 | 1990-06-28 | De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezondheid En Cultuur | Pneumolysin mutants and pneumococcal vaccines made therefrom |
| WO1998018930A2 (en) * | 1996-10-31 | 1998-05-07 | Human Genome Sciences, Inc. | Streptococcus pneumoniae antigens and vaccines |
| WO1999003884A2 (en) * | 1997-07-21 | 1999-01-28 | North American Vaccine, Inc. | Modified immunogenic pneumolysin, compositions and their use as vaccines |
| CZ301445B6 (cs) * | 1999-03-19 | 2010-03-03 | Smithkline Beecham Biologicals S. A. | Imunogenní prostredek, obsahující alespon jeden polysacharidový a alespon jeden proteinový antigen mikroorganizmu Streptococcus pneumoniae a adjuvans |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Infection and Immunity, 1999 * |
| Vaccine 18, 2000 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ305324B6 (cs) | Imunogenní prostředek, způsob jeho přípravy, vakcína s jeho obsahem a léčivo obsahující pneumokokový polysacharidový antigen v kombinaci s proteinovým antigenem Streptococcus pneumoniae | |
| AU2002220548A1 (en) | Vaccine against streptococcus penumoniae | |
| AU2002238193A1 (en) | Vaccine against streptococcus pneumoniae | |
| KR20080081063A (ko) | 백신 | |
| MXPA01009452A (es) | Vacuna. | |
| HK1057698B (en) | Vaccine against streptococcus pneumoniae | |
| MXPA01009459A (es) | Vacuna | |
| MXPA01009455A (en) | Vaccine | |
| HK1136785A (en) | Vaccine against streptococcus pneumoniae |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20150912 |