CZ289245B6 - Deriváty benzazepin-, benzoxazepin- a benzothiazepin-N-octové kyseliny, způsob jejich výroby a léčivo, obsahující tyto sloučeniny - Google Patents

Abstract

NEP-inhibi n · inn deriv ty benzazepin-, benzoxazepin- a benzothiazepin-N-octov kyseliny vzorce I, kde R.sup.1.n. p°edstavuje C.sub.1-4.n.- alkoxy-C.sub.1-4.n.- alkylskupinu, jej C.sub.1-4.n.- alkoxyzbytek je substituov n C.sub.1-4.n.- alkoxyskupinou, fenyl- C.sub.1-4.n.- alkyl- nebo fenyloxy-C.sub.1-4.n.- alkylskupinu, kter pop° pad na fenylov m kruhu m e b²t substituov na C.sub.1-4.n.- alkylem, C.sub.1-4.n.- alkoxy nebo halogenem, nebo naftyl-C.sub.1-4.n.- alkylskupinu, A p°edstavuje CH.sub.2.n., O nebo S, R.sup.2 .n.znamen vod k nebo halogen, R.sup.3 .n.znamen vod k nebo halogen, R.sup.4 .n.znamen vod k nebo n kterou z biolabiln ester tvo° c ch skupin a R.sup.5 .n.znamen vod k nebo n kterou z biolabiln ester tvo° c ch skupin, a fyziologicky p°ijateln soli kyselin obecn ho vzorce I a l ivo s jejich obsahem.\

Description

Předložený vynález se týká nových derivátů benzazepin-, benzoxazepin- a benzothiazepin-Noctové kyseliny, které obsahují vd-poloze k atomu dusíku oxoskupinu a v poloze 3 jsou substituovány l-(karboxyalkyl)-cyklopentylkarbonylamino-zbytkem, a jejich solí a biolabilních esterů jakož i farmaceutických přípravků, obsahujících tyto sloučeniny a způsobu výroby těchto sloučenin.

Dosavadní stav techniky

V této souvislosti se odkazujeme na evropský patent EP-B 0 274 234, kde jsou shrnuty všeobecné principy biolabilních esterů a způsoby, které se používají při jejich výběru. Rovněž dokumenty EP 0 733 642 a US 5 677 297 se týkají obdobných výše uvedených derivátů a jejich způsobů přípravy i použití v medicíně.

Podstata vynálezu

Předložený vynález řeší úlohu nalézt benzazepin-, benzoxazepin- a benzothiazepinové sloučeniny s cennými farmakologickými vlastnostmi. Dále je úkolem vynálezu nalézt nové farmaceuticky účinné látky použitelné k léčbě srdeční insuficience.

Nyní bylo nalezeno, že podle vynálezu nové, v poloze 3 popřípadě esterifíkovaný l-(karboxyalkyl)-cyklopentylkarbonylamino-zbytek nesoucí deriváty kyseliny benzazepin-, benzoxazepina benzothiazepin-N-octové vykazují cenné na srdce působící farmakologické vlastnosti a vynikající účinnost potlačení neutrální endopeptidázy s vynikajícím profilem účinnosti, čímž redukují při srdeční insuficienci vznikající vysoký kardiální plnící tlak a tak mohou odlehčovat zátěž srdce a posilovat diurésu.

Předložený vynález se tak týká nových sloučenin obecného vzorce I

kde

R¹ představuje C_M- alkoxy-Ci^- alkylskupinu, jejíž Cm- alkoxyzbytek je substituován Cm alkoxyskupinou, fenyl-Ci-4- alkyl- nebo fenyloxy-Ci-4-alkylskupinu, která popřípadě na fenylovém kruhu může být substituována Cm- alkylem, C1-4- alkoxy nebo halogenem, nebo nafiyl-Ci-4- alkylskupinu,

- 1 CZ 289245 B6

A představuje CH₂,0 nebo S,

R² znamená vodík nebo halogen,

R³ znamená vodík nebo halogen,

R⁴ znamená vodík nebo některou z biolabilní ester tvořících skupin a

R⁵ znamená vodík nebo některou z biolabilní ester tvořících skupin, a fyziologicky přijatelných solí kyselin obecného vzorce I.

Pokud ve sloučeninách obecného vzorce I znamenají substituenty Cm- alkyl- nebo alkoxyskupiny nebo je obsahují, mohou tyto být přímé nebo rozvětvené a obsahovat zejména 1 až 4, výhodně 1 až 2 atomy uhlíku a výhodně představují methyl nebo methoxy. Pokud substituenty znamenají halogen nebo halogenové substituenty, přicházejí v úvahu zejména fluor, chlor nebo brom, výhodně fluor nebo chlor.

Ve sloučeninách obecného vzorce I může A představovat methylenovou skupinu, kyslík nebo síru a výhodně představuje methylen.

Sloučeniny obecného vzorce I mohou na fenylovém kruhu nést substituenty R² a R³. Výhodně oba substituenty R² a R³ nebo alespoň jeden z nich představuje vodík.

R¹ představuje výhodně aromatický kruh obsahující zbytek, například popřípadě substituovaný fenyl-Ci_4- alkyl- nebo fenyloxy-CM- alkylozbytek, ve kterém C_M- alkylenový řetězec může obsahovat 1 až 4, výhodně 1 až 2 atomy uhlíku. Zejména představuje R* popřípadě substituovanou fenylethylskupinu, která popřípadě může být substituována jednou nebo vícekrát halogenem, Ci_4- alkoxy nebo C_w- alkylem, nebo naftylethylskupinu. Pokud R¹ znamená C]_«- alkoxy substituovanou Cm- alkoxy-CM^- alkylskupinu, představuje tato výhodně Cm^- alkoxymethylskupinu, kde Cm- alkoxyzbytek obsahuje 1 až 4, výhodně 1 až 2 atomy uhlíku a je substituován Cm- alkoxy, zejména methoxy.

Sloučeniny obecného vzorce I představují popřípadě esterifikované deriváty dikarboxylové kyseliny. Podle formy aplikace jsou výhodné biolabilní monoestery, zejména sloučeniny, kde R⁴ znamená biolabilní ester tvořící skupinu a R⁵ znamená vodík, nebo dikarboxylové kyseliny, přičemž posledně uvedené jsou zejména vhodné pro i.v.-aplikaci.

Jako biolabilní ester tvořící skupiny R⁴ a R⁵ jsou vhodné Cm- alkylskupiny, popřípadě ve fenylovém kruhu Cm- alkylem nebo na dva sousedící atomy uhlíku navázaným Cm- alkylenovým řetězcem substituované fenyl- nebo fenyl-CM- alkylskupiny, v dioxolanovém kruhu popřípadě C_H- alkylem substituované dioxolanylmethylskupiny nebo popřípadě na oxymethylskupině Cm- alkylem substituované Cr-Ce-alkanoyloxymethylskupmy. Pokud biolabilní ester tvořící skupiny R⁴ nebo R⁵ znamenají Cm- alkyl, mohou tyto výhodně znamenat nerozvětvenou alkylskupinu s 1 až 4, výhodně 2 atomy uhlíku. Pokud biolabilní ester tvořící skupiny představují popřípadě substituovanou fenyl-Ci_3- alkylskupinu, může jejich alkylenový řetězec obsahovat 1 až 3, výhodně 1 atom uhlíku. Pokud je fenylový kruh substituován Cm- alkylenovým řetězcem, může tento obsahovat 3 až 4, zejména 3 atomy uhlíku. Jako fenyl obsahující substituenty R⁴ a/nebo R⁵ jsou zejména vhodné fenyl, benzyl nebo indanyl. Pokud R⁴ a/nebo R⁵ představují popřípadě substituovanou alkanoyloxymethylskupinu, může její alkanoyloxyskupina obsahovat 2 až 6, výhodně 3 až 5, atomů uhlíku a je výhodně rozvětvená a může popřípadě představovat pivaloyloxymethylový zbytek (= terc.butylkarbonyloxymethylový zbytek).

- 2 CZ 289245 B6

Podle vynálezu se nové sloučeniny obecného vzorce I a jejich soli získají tak, že se známým způsobem nechají reagovat kyseliny obecného vzorce Π

kde R¹ má výše uvedený význam a R^4a znamená kyselinu chránící skupinu obsahující 1 až uhlíků, nebo jejich reakce schopné deriváty s kyselinou, s aminy obecného vzorce ΠΙ

(ΠΙ), kde R² a R³ a A mají výše uvedený význam a R^5a znamená kyselinu chránící skupinu, na amidy obecného vzorce IV

kde R¹, R², R³, R^4a, R^5a a A mají výše uvedený význam a ve sloučeninách obecného vzorce IV se kyselinu chránící zbytky R^4a a R^5a, pokud tyto nepředstavují požadovanou, biolabilní ester tvořící skupinu, současně nebo v libovolném reakčním sledu postupně odštěpí a popřípadě se uvolněná kyselinová skupina esterifíkuje s alkoholem obecného vzorce V

R⁵-OH (V), nebo odpovídajícím reaktivním derivátem obecného vzorce Va

R⁵-X (Va), kde X znamená odštěpitelnou reaktivní skupinu a popřípadě se získané kyseliny obecného vzorce I převedou na své fyziologicky přijatelné soli nebo se solí kyselin obecného vzorce I převedou na volné kyseliny.

- 3 CZ 289245 B6

Jako fyziologicky přijatelné soli dikarboxylových kyselin nebo monoesterů obecného vzorce I přicházejí v úvahu soli alkalických kovů, kovů alkalických zemin nebo amoniové soli, například sodná nebo draselná sůl nebo soli s fyziologicky přijatelnými farmakologicky neutrálními aminy jako je například diethylamin nebo terc.butylamin.

Sloučeniny obecného vzorce I obsahují dva chirální uhlíkové atomy, a to uhlíkový atom, nesoucí amidový postranní řetězec, v poloze 3 kruhového zbytku a atom uhlíku nesoucí zbytek R¹ amidového postranního řetězce. Sloučeniny mohou být proto ve více opticky aktivních stereoizomemích formách nebo jako racemáty. Předložený vynález zahrnuje jak racemické směsi tak také izomemě čisté sloučeniny obecného vzorce I.

Reakce kyselin obecného vzorce Π s aminy obecného vzorce ΠΙ na amidy obecného vzorce IV mohou být provedeny metodami běžnými pro aminoacylaci pro tvorbu amidoseskupení. Jako acylační činidlo mohou být použity kyseliny obecného vzorce Π nebo jejich reakce schopné deriváty. Jako reakce schopné deriváty přicházejí v úvahu zejména anhydridy kyselin a halogenidy kyselin. Mohou tak být použity například chlorid kyseliny nebo bromid kyseliny obecného vzorce II nebo směsný ester kyselin obecného vzorce II s organickými sulfonovými kyselinami, například Cm alkansulfonovými kyselinami jako je např. kyselina methansulfonová nebo aromatické sulfonové kyseliny jako je např. benzensulfonová kyselina nebo Cm alkylem nebo halogenem substituované benzensulfonové kyseliny, např. toluensulfonové kyseliny nebo brombenzenové kyseliny. Acylace se může provést v rozpouštědle inertním za reakčních podmínek, výhodně při teplotách mezi -20 °C a teplotou místnosti. Jako rozpouštědlo jsou vhodné zejména halogenované uhlovodíky, jako je dichlormethan, nebo aromatické uhlovodíky, jako je benzen nebo toluen, nebo cyklický ether, jako je tetrahydrofuran nebo dioxan, nebo směsi těchto rozpouštědel.

Acylace může být výhodně provedena, zejména jestliže se jako acylační činidlo použije směsný anhydrid kyselin obecného vzorce II se sulfonovou kyselinou, za přítomnosti činidla, které váže kyselinu. Jako činidlo, které váže kyselinu jsou vhodné v reakční směsi rozpustné báze, zejména organické báze jako terč. Cm alkylaminy a pyridiny jako např. triethylamin, tripropylamin, pyridin, 4-dimethylaminopyridin, 4-diethylaminopyridin nebo 4-pyrrolidinopyridin. V přebytku použité organické báze mohou také současně sloužit jako rozpouštědlo.

Výhodně mohou být získány směsné anhydridy kyselin obecného vzorce II s organickými sulfonovými kyselinami in šitu reakcí kyselin obecného vzorce II shalogenidem kyseliny, zejména chloridem organických sulfonových kyselin a bez izolace přímo dále reagovat s aminosloučeninou obecného vzorce III.

Jestliže se jako acylační činidlo použijí samotné kyseliny obecného vzorce Π, může být reakce aminosloučenin obecného vzorce ΙΠ s kyselinami obecného vzorce II provedena výhodně také za přítomnosti kopulačního činidla známého z chemie peptidů pro tvorbu amidové vazby. Jako příklad kopulačních činidel, které vytvářejí amidovou vazbu s volnými kyselinami tak, že reagují s kyselinou in šitu za tvorby reakceschopného derivátu kyseliny je možno zejména uvést alkylkarbodiimidy, např. cykloalkylkarbodiimidy jako dicyklohexylkarbodiimid nebo l-ethyl-3-[3-(dimethylamino)-propyl]-karbodiimid, karboyldiimidazol a N- Cm alkyl-2halogenpyridiniové soli, zejména halogenidy nebo tosyláty, výhodně N-methyl-2chlorpyridiniumjodid (viz např. B. Mukaijama v Angewandte Chemie 21, str. 789-812). Reakce za přítomnosti kopulačního činidla se může výhodně provádět při teplotách od -30 °C do +50 °C za použití rozpouštědel jako jsou halogenované uhlovodíky a/nebo aromatických rozpouštědel, popřípadě za přítomnosti aminu, který váže kyselinu.

Z reakce sloučenin obecného vzorce II se sloučeninami obecného vzorce III získané sloučeniny obecného vzorce IV mohou být zbaveny chránících skupin R^4a a R^5a, pokud tyto nepředstavují

- 4 CZ 289245 B6 žádnou z biolabilní ester tvořících skupin ve sloučeninách obecného vzorce I, o sobě známým způsobem.

Jako chránící skupiny R^4a a R^5a mohou být použity o sobě pro ochranu kyselinové funkce známé chránící skupiny, které potom mohou opět být o sobě známými metodami odštěpeny. Vhodné kyselinu chránící skupiny jsou například známy zMcOmie, „Protective Groups in Organic Chemistry“, Plenům Press a Greene, „Protective Groups in Organic Synthesis“ Wiley Interscience Publication.

Pokud by měly být vyrobeny sloučeniny obecného vzorce I, kde R⁴ a R⁵ jsou shodné, výhodně se volí stejné chránící skupiny R^4a a R^5a ve výchozích sloučeninách obecného vzorce Π a III.

Pokud mají být vyrobeny sloučeniny obecného vzorce I kde R⁴ a R⁵ mají různý význam, výhodně se volí odlišné chránící skupiny R^4a a R^5a ve výchozích sloučeninách obecného vzorce II a III, které je možno za rozdílných podmínek selektivně opět odštěpit o sobě známým způsobem. Jako příklady tří za rozdílných podmínek odštěpitelných skupin je možno uvést:

1. Methyl- nebo ethylestery, které je možno snadno odštěpit za bazických podmínek, ale které jsou za kyselých podmínek nebo při hydrolýze podstatně stabilnější.

2. Terc.butylestery, které jsou snadno odštěpitelné kyselinami, ale jsou podstatně stabilnější za bazických podmínek nebo při hydrogenolýze a

3. Benzylestery, které je možno snadno odštěpit hydrogenolyticky nebo také za bazických podmínek, ale za kyselých podmínek jsou podstatně stabilnější.

V případě, že mají být vyrobeny dikarboxylové sloučeniny obecného vzorce I, kde R⁴ a R⁵ jsou oba vodík, použijí se jako chránící skupiny R^4a a R^5a výhodně kysele odštěpitelné chránící skupiny, například terc.butylskupina a reakcí sloučenin obecného vzorce Π se sloučeninami obecného vzorce III získaný terc.butylester sloučenin obecného vzorce IV se potom odštěpí zpracováním s kyselinou. Odštěpení se může např. provést zpracováním s kyselinou trifluoroctovou jako takovou nebo roztokem kyseliny trifluoroctové v halogenovaném uhlovodíku, například dichlormethanu, nebo zpracováním s plynným HC1 v organickém rozpouštědle inertním za reakčních podmínek, například v ethylacetátu. Reakce se může provádět při teplotách mezi -25 °C a teplotou místnosti.

Jestliže mají například být vyrobeny monokarboxylové sloučeniny obecného vzorce I, kde R⁴ znamená skupinu tvořící biolabilní ester a R⁵ je vodík, mohou být jako výchozí sloučeniny obecného vzorce Π použity sloučeniny, ve kterých R^4a představuje již požadovanou biolabilní ester tvořící skupinu, např. ethylskupinu a jako chránící skupina R^5a ve sloučeninách obecného vzorce III chránící skupiny, které se odštěpují za podmínek, za kterých R⁴-OCO-skupina se neodštěpuje. Jestliže R⁴-OCO-skupina je relativně vůči kyselině stabilní ethylesterová skupina, jsou vhodné jako chránící skupiny R^5a například kyselinou odštěpitelná terc.butylskupina nebo hydrogenolyticky odštěpitelná skupina jako je benzyl.

Jestliže R^4a ve sloučeninách obecného vzorce Π představuje ke kyselině citlivou, biolabilní ester tvořící skupinu, volí se jako chránící skupina R’^a ve sloučeninách obecného vzorce III výhodně hydrogenolyticky odštěpitelná skupina jako je benzyl a tato se reakcí sloučenin obecného vzorce II se sloučeninami obecného vzorce III hydrogenolyticky odštěpí na sloučeniny obecného vzorce IV. Hydrogenolýza se může provést katalytickou hydrogenací za přítomnosti katalyzátoru, výhodně Pd/C-katalyzátoru za reakčních podmínek v inertním organickém rozpouštědle, například v C_w alkoholu jako je ethanol nebo Ci_4 alkylesterů jako je Cm ethylacetát. Výhodně se katalytická hydrogenace provádí za tlaku vodíku 4 až 5 bar při teplotě místnosti.

Pro výrobu sloučenin obecného vzorce I, kde R⁴ znamená biolabilní ester tvořící skupinu a R⁵ vodík, mohou však být také voleny výchozí sloučeniny obecných vzorců II a ΠΙ s rozdílnými chránícími skupinami R^4a a R^5a s rozdílnou reaktivitou a ze sloučenin obecného vzorce IV, získaných reakcí sloučenin obecného vzorce II se sloučeninami obecného vzorce III, se nejprve odštěpí chránící skupina R^4a při zachování chránící skupiny R^Sa, potom se do reakčního produktu obecného vzorce IV'

(IV¹), kde R¹, R², R³, R^5a a A mají výše uvedené významy, zavede požadovaná biolabilní ester tvořící skupina R⁴ reakcí volné kyselinové skupiny sloučeniny obecného vzorce IV' se sloučeninou obecného vzorce V nebo Va a potom se ze získaných sloučenin obecného vzorce IV odštěpí chránící skupina R^5a.

Může tak být např. ze sloučenin obecného vzorce IV, kde R^4a znamená kyselinou odštěpitelnou chránící skupinu, zejména terc.butylskupinu a R^5a vůči kyselině stabilní chránící skupinu, např. benzyl, nejprve kysele odštěpena jen chránící skupina R^Sa. Získaná monokarboxylová kyselina obecného vzorce IV' pak může být metodami běžnými pro tvorbu esteru esterifikována s alkoholem obecného vzorce V nebo odpovídající sloučeninou obecného vzorce Va. Jako odštěpitelné reaktivní skupiny X ve sloučeninách obecného vzorce Va jsou vhodné halogeny, zejména chlor nebo brom, nebo organické zbytky sulfonových kyselin, například zbytek C_u alkansulfonové kyseliny nebo aromatických sulfonových kyselin nebo Ci^ alkylem nebo halogenem substituovaných benzensulfonových kyselin jako jsou kyseliny toluensulfonové. K esterifikaci mohou reagovat alkoholy obecného vzorce V například s kyselinou obecného vzorce IV' nebo reaktivním derivátem této kyseliny o sobě známým způsobem pro acylaci alkoholů. Reakce může být například provedena za podmínek uvedených pro reakci obecného vzorce II se sloučeninami obecného vzorce III.

Analogicky mohou volbou odpovídajících odlišných chránících skupin být také vyrobeny sloučeniny obecného vzorce I, kde R* znamená biolabilní ester tvořící skupinu a R⁴ znamená vodík, nebo R⁵ znamená skupinu odlišnou od skupiny, tvořící biolabilní ester.

Při uvedených reakcích se chirální centra ve výchozích sloučeninách obecného vzorce II a III nemění, takže je možno podle typu výchozích sloučenin získat izomemě čisté sloučeniny obecného vzorce I nebo izomemí směsi. Pro výrobu izomemě čistých a proto opticky jednotných sloučenin obecného vzorce I se výhodně nechají reagovat enantiomemě čisté sloučeniny obecného vzorce II s enantiomemě čistými sloučeninami obecného vzorce III. Jestliže reaguje enantiomemí sloučenina obecného vzorce Π s racemickou sloučeninou obecného vzorce ΠΙ nebo racemická sloučenina vzorce II s enantiomemí sloučeninou obecného vzorce III, získá se směs dvou diastereomerů, které mohou být, je-li to žádoucí, rozděleny o sobě známým způsobem. Reakce racemických sloučenin obecného vzorce II sracemickými sloučeninami obecného vzorce ΠΙ poskytne odpovídající směs 4 izomerů, které mohou popřípadě být o sobě známým způsobem rozděleny.

- 6 CZ 289245 B6

Výchozí sloučeniny obecného vzorce II mohou být získány o sobě známými metodami.

Například mohou sloučeniny obecného vzorce Ila (CHi)« ) ΟΧ»),

R^OOC-CH-CHj- C -COOH kde R^4a má výše uvedený význam a R^la má význam uvedený pro R¹ s výjimkou Cm alkoxy- C_M alkoxymethylového zbytku, být získány tak, že se derivát akrylové kyseliny obecného vzorce VI

R^,a R^4aOOC-Č=CH₂ (VI), kde R^4a a R^la má výše uvedený význam, nechá reagovat s kyselinou cyklopentankarboxylovou obecného vzorce VII.

(VII)

Reakce se může provádět za podmínek Michaelovy adice v za reakčních podmínek inertním organickém rozpouštědle reakcí kyseliny cyklopentankarboxylové se silnou, tvorby dianiontu kyseliny cyklopentankarboxylové schopnou bází a potom reakcí akrylesterového derivátu obecného vzorce VI. Jako rozpouštědlo je vhodný ether, zejména cyklický ether jako například tetrahydrofuran. Jako silné báze jsou vhodné nenukleofílní, organické amidy alkalických kovů jako např. lithiumdiizopropylamid. Výhodně se nechá reagovat kyselina cyklopropankarboxylová v tetrahydrofuranu se dvěma ekvivalenty lithiumdiizopropylamidu a reakční směs potom dále reaguje se sloučeninou obecného vzorce VI. Reakční teplota může být mezi -70 a 0 °C.

Sloučeniny obecného vzorce lib (CH,), r U

R^4aOOC-CH-CHj- C -COOH (lib), kde R^4a má výše uvedený význam a R^lb znamená Cj_4 alkoxy- C1-4 alkoxymethylový zbytek mohou být získány tak, že se ester kyseliny halogenkarboxylové obecného vzorce VIII

R^4aOOC-CH₂-CH₂-V (VIII), kde R^4a má výše uvedený význam a Y znamená halogen, nechá reagovat s kyselinou cyklopentankarboxylovou obecného vzorce VII a získaný reakční produkt obecného vzorce IX

(ix),

- 7 CZ 289245 B6 kde R^4a má výše uvedený význam, reaguje se sloučeninou obecného vzorce Xb

R^lb-X (Xb), kde R^lb a X mají výše uvedené významy. Reakce esteru halogenkyseliny obecného vzorce VIII s kyselinou cyklopentankarboxylovou obecného vzorce VII se může o sobě známým způsobem provádět v rozpouštědle inertním za reakčních podmínek za přítomnosti silné, tvorby dianiontu kyseliny cyklopropankarboxylové schopné báze. Například se může reakce provádět za podmínek uvedených pro reakci kyseliny cyklopentankarboxylové se sloučeninami obecného vzorce VI. Následující reakce kyselin obecného vzorce IX se sloučeninami obecného vzorce Xb se může provádět o sobě známým způsobem za podmínek vhodných pro α-alkylaci kyseliny karboxylové, v organickém rozpouštědle inertním za reakčních podmínek za přítomnosti silné báze. Výhodně se použijí sloučeniny obecného vzorce Xb, kde X znamená chlor nebo brom. Jako rozpouštědlo jsou vhodné ethery, zejména cyklické ethery jako tetrahydrofuran nebo dioxan. Jako silné báze mohou být použity hydridy nebo amidy alkalických kovů jako například lithiumdiizopropylamid.

Sloučeniny obecného vzorce II obsahují na zbytek R¹ nesoucím atomu uhlíku centrum chirality a při syntéze se získají ve formě svých racemátů. Opticky aktivní sloučeniny mohou být získány o sobě známým způsobem, např. chromatografickým dělením na chirálních dělicích materiálech nebo reakcí se vhodnými opticky aktivními bázemi, např. α-methylbenzylaminem nebo pseudoefedrinem a potom dělením na optické antipody frakční krystalizací získaných solí.

Deriváty esteru kyseliny obecného vzorce IV mohou být získány o sobě známým způsobem, ve kterém reaguje derivát esteru kyseliny (di- Cm alkyl-fosfono)-octové obecného vzorce XI

R⁴‘OOC-CH__OR⁷ | ^R⁸ (XI), kde R^4a a R^la mají výše uvedený význam a R⁷ a R⁸ znamenají každý Cm alkyl, výhodně methyl nebo ethyl, s formaldehydem, v rozpouštědle inertním za reakčních podmínek za bazických podmínek. Například mohou sloučeniny obecného vzorce XI reagovat s paraformaldehydem v etheru, výhodně cyklickém etheru jako je tetrahydrofuran, za přítomnosti báze, výhodně nenukleofilního alkoholátu alkalického kovu jako je terc.butylát draselný, při teplotách mezi -20 a+30 °C.

Sloučeniny obecného vzorce XI mohou být získány o sobě známým způsobem, ve kterém se nechá reagovat derivát kyseliny fosfonooctové obecného vzorce ΧΠ

OR’ <^ΧΙΙ>.

R^4<OOC-CH₂-pC_or8 o

kde R^4a, R⁷ a R⁸ mají výše uvedený význam, se sloučeninami obecného vzorce Xa

R^,a-X (Xa),

- 8 CZ 289245 B6 kde R^Ia a X mají výše uvedené významy. Reakce se může provádět za podmínek obvyklých pro alkylaci v polárním aprotickém organickém rozpouštědle inertním za reakčních podmínek za přítomnosti báze při teplotách mezi 0 a 80 °C. Výhodně se použijí sloučeniny obecného vzorce Xa, kde X znamená halogen, zejména brom nebo jod, nebo tosylát. Jako rozpouštědlo jsou vhodné amidy jako je dimethylformamid nebo také ether. Jako báze jsou vhodné nenukleofilní alkoholáty alkalických kovů jako například terc.butylát draselný.

Sloučeniny obecného vzorce VI mohou být také získány tak, že se derivát kyseliny malonové obecného vzorce XIII

R^la

I (xm),

R^4aOOC-CH-COOH kde R^4a a R^la mají výše uvedený význam, o sobě známým způsobem zpracuje s formaldehydem za bazických podmínek. Tak mohou deriváty kyseliny malonové obecného vzorce ΧΠΙ například reagovat s vodným roztokem formaldehydu za přítomnosti sekundárního organického aminu, zejména piperidinu, při teplotách mezi 0 a 30 °C, výhodně při teplotách ležících pod teplotou místnosti. Deriváty kyseliny malonové obecného vzorce ΧΙΠ mohou také reagovat sparaformaldehydem v pyridinu při teplotách mezi 40 až 60 °C.

Estery kyseliny malonové obecného vzorce XIII mohou být také získány tak, že se diester kyseliny malonové obecného vzorce XIV

R⁴OOC-CH2-CH2-COOR⁹ (XIV), kde R^4a má výše uvedený význam a R⁹ znamená C1-4 alkyl, zejména methyl, nebo benzyl, nechá reagovat se sloučeninami obecného vzorce Xa a získaný derivát diesteru kyseliny malonové obecného vzorce XV

R^la

I (XV),

R^4aOOC-CH-COOR⁹ kde R^la, R^4a a R⁹ mají výše uvedený význam, se částečnou hydrolýzou převede na odpovídající derivát monoesteru kyseliny malonové obecného vzorce XIII.

Zavedení zbytku R^,a do diesteru kyseliny malonové obecného vzorce XTV se může provést o sobě známým způsobem reakcí esteru obecného vzorce XTV se sloučeninou obecného vzorce Xa v polárním aprotickém rozpouštědle, výhodně dimethylformamidu, za přítomnosti báze, například nenukleofilního alkoholátu alkalického kovu jako je terc.butylát draselný při teplotách mezi 0 °C a 80 °C. Reakce může například být provedena za podmínek uvedených pro reakci sloučenin obecného vzorce XI se sloučeninami obecného vzorce Xa.

Získaný substituovaný diester kyseliny malonové obecného vzorce XV se může převést odštěpením zbytku R⁹ o sobě známým způsobem na odpovídající monoester kyseliny malonové obecného vzorce XIII. Pokud chránící skupina R^4a a zbytek R⁹ představují rozdílné zbytky s rozdílnými reaktivitami, volí se pro odštěpení zbytku R⁹ výhodně takové podmínky, za nichž zbytek R^4a není napaden. Pokud R⁹ znamená benzyl, může být odštěpení provedeno o sobě známým hydrogenolytickým způsobem. alkylester R⁹ se odštěpuje hydrolyticky, podle typu alkylového zbytku za kyselých nebo alkalických podmínek o sobě známým způsobem. Výhodně představuje R⁹ ethyl, který může být odštěpen alkalickou hydrolýzou. Za tím účelem se zpracuje alkylester obecného vzorce XV v C1-4 alkoholu nebo směsi alkoholu s vodou s hydroxidem alkalického kovu, například hydroxidem draselným. Pokud jsou zbytky R^4a a R⁹ identické, sníží se množství hydroxidu alkalického kovu tak, že dochází jen k částečné hydrolýze.

- 9 CZ 289245 B6

Sloučeniny obecného vzorce III mohou být získány o sobě známým způsobem, kdy se sloučeniny obecného vzorce XVI

(XVI), kde R², R³ a A mají výše uvedený význam a R¹⁰R^HN-skupina představuje aminoskupinu chráněnou chránící skupinou aminoskupiny, nechají reagovat se sloučeninami obecného vzorce XVII

X-CHr-COOR⁵* (XVII), kde R^5a a X mají výše uvedený význam a v získaném reakčním produktu obecného vzorce XVIII

(XVIII), kde R², R³, R^5a, A a R’⁰RⁿN-skupina mají výše uvedený význam se z R¹⁰RⁿN-skupiny uvolní volná aminoskupina. Reakce sloučenin obecného vzorce XVI se sloučeninami obecného vzorce XVII může být provedena o sobě známými metodami alkylace amidů. Výhodně se používají sloučeniny obecného vzorce XVII, kde X představuje halogen, výhodně brom nebo jod. Reakce může být prováděna v některém z polárních aprotických rozpouštědel, například v dimethylformamidu nebo v cyklických etherech jako je tetrahydrofuran, za přítomnosti báze. Jako báze jsou vhodné nenukleofilní báze jako například terc.butylát draselný. Popřípadě může být reakce také provedena za přítomnosti hydroxidu alkalického kovu, např. hydroxidu draselného, ve dvoj fázovém systému za přítomnosti katalyzátoru fázového přenosu, například tetra- Ci_4 alkylamoniumhalogenidu jako je tetrabutylamoniumbromid.

Potom se může v získaných sloučeninách obecného vzorce XVIII aminoskupina uvolnit odštěpením chránící skupiny o sobě známým způsobem. K ochraně aminoskupiny mohou být použity o sobě známé snadno opět odštěpitelné chránící skupiny, například chránící skupiny známé z chemie peptidů. Vhodné chránící skupiny jsou např. známé z McOmie „Protective groups in organic chemistry“ Plenům Press 1971. Jako chránící skupiny jsou například vhodné ftalimidskupina nebo terc.butoxykarbonylskupina nebo také benzyloxykarbonylskupina. V závislosti na významu R^5a musí být voleny takové chránící skupiny, které jsou pak odštěpitelné za podmínek, za kterých skupina R^Sa není napadána. Jako chránící skupiny odštěpitelné v bazickém mediu jsou vhodné například ftalimidskupiny, které mohou být odštěpitelné zpracováním s ethanolaminem nebo hydrazinem při zvýšených teplotách, například teplotách

-10CZ 289245 B6 mezi 70 a 90 °C. Ftalimidová skupina je vhodná například jako chránící skupina pro sloučeniny, kde A je síra. Jako kysele odštěpitelná chránící skupina je vhodná například terc.butoxykarbonylskupina, která může opět být odštěpena zpracováním s kyselinou, například s kyselinou trifluoroctovou nebo plynným chlorovodíkem v ethylacetátu. Terč, butyloxyskupina je vhodná např. jako chránící skupina pro sloučeniny, kde A je kyslík. Jako hydrogenolyticky odštěpitelná chránící skupina je vhodná například benzyloxykarbonylová skupina, která může být odštěpena hydrogenací s vodíkem za přítomnosti katalyzátoru palladium/uhlí.

Sloučeniny obecného vzorce IU obsahují na aminoskupinu nesoucím atomu uhlíku centrum chirality. Pokud se vychází z opticky čistých sloučenin obecného vzorce XVI, získají se opticky čisté sloučeniny obecného vzorce III. Toto se týká zejména takových sloučenin, kde A znamená kyslík nebo síru. Pokud se vychází zracemických sloučenin obecného vzorce XVI, získají se racemické sloučeniny obecného vzorce III. Toto je případ obecně u sloučenin, kde A znamená methylskupinu. Racemické směsi sloučenin obecného vzorce III mohou být rozděleny na své optické izomery, například chromatografickým dělením na chirálních dělicích materiálech nebo reakcí se vhodnými opticky aktivními kyselinami, například kyselinou vinnou a potom rozděleny na optické antipody frakční krystalizaci získaných solí. Pro zvýšení výtěžku požadovaného optického izomeru může při reakci se vhodnými opticky aktivními kyselinami snebo po následujícím vylučování soli izomeru s opticky aktivními kyselinami v reakční směsi být provedena re-racemizace v roztoku zbývajících izomerů přídavkem výhodně aromatických aldehydů jako je například benzaldehyd. Přitom se racemizace na centru chirality vyvolá tvorbou iminu s aldehydem.

Sloučeniny obecného vzorce XVI mohou být získány o sobě známým způsobem. Například mohou sloučeniny obecného vzorce XVIa

kde R², R³ a R¹⁰R’'-skupina mají výše uvedený význam, být získány tak, že se ve sloučeninách obecného vzorce XIX

(XIX), kde R² a R³ a Y mají výše uvedený význam, nahradí halogen Y R^l0RⁿN-skupinou o sobě známým způsobem. Například může sloučenina obecného vzorce XIX reagovat se solí alkalického kovu amidu vzorce R¹⁰RⁿNH, výhodně ftalimidem draselným. Reakce může být

-11CZ 289245 B6 prováděna vaprotickém organickém rozpouštědle inertním za reakčních podmínek, výhodně v dimethylformamidu, při teplotách mezi 40 a 80 °C.

Sloučeniny obecného vzorce XIX mohou být získány o sobě známým způsobem Beckmannovým přesmykem oximových sloučenin obecného vzorce XX

(XX), kde R², R³ a Y mají výše uvedený význam, kde se sloučeniny obecného vzorce XX zpracují za podmínek Beckmannova přesmyku s kyselinou. Výhodně se sloučeniny obecného vzorce XX přesmyknou zpracováním s kyselinou polyfosforečnou při teplotách mezi 60 a 90 °C na sloučeniny obecného vzorce XIX.

Oximy obecného vzorce XX mohou být získány z cyklických ketonů obecného vzorce XXI

(xxi), kde R² a R³ mají výše uvedený význam, kdy se ketony obecného vzorce XXI nejprve pro zavedení zbytku Y zpracují s halogenem a získané halogenované ketony se pak nechají reagovat s hydroxylaminem. Výhodně může být α-halogenizace ketonu a následná tvorba oximu prováděna způsobem v jedné nádobě, kdy se keton obecného vzorce XXI nejprve zpracuje v inertním organickém rozpouštědle, například Cm alkoholu jako je methanol, s halogenem a potom se do reakční směsi zavede hydroxylamin. Výhodně se použije hydroxylamin ve formě solí hydroxylaminu, například chloridu a k reakční směsi se přidá malé množství vody. Způsob může být prováděn při teplotách mezi 0 a 40 °C, výhodně při teplotě místnosti.

Sloučeniny obecného vzorce XVIb

(XVb),

-12CZ 289245 B6 kde R², R³ a R¹⁰RⁿN-skupina mají výše uvedený význam a A^a představuje kyslík nebo síru, mohou být připraveny o sobě známým způsobem cyklizací aromatických aminokyselinových sloučenin obecného vzorce ΧΧΠ

(XXII), kde R², R³, A^a a R¹⁰RⁿN-skupina mají výše uvedený význam. Cyklizace sloučenin obecného vzorce XXII probíhá za odštěpování vody a může být provedena metodami známými pro tvorbu laktamů. Cyklizace tak může být provedena například za přítomnosti kyselou skupinu aktivujícího, z chemie peptidů pro tvorbu amidu známého kopulačního činidla, například karbodiimidu, v polárním organickém rozpouštědle inertním za reakčních podmínek, například v dimethylformamidu. Reakce může například být provedena za podmínek uvedených pro reakci sloučenin obecného vzorce II se sloučeninami obecného vzorce III. Jako kyselou skupinu aktivující činidlo může být například použit diethylfosfonokyanid a reakce se může provádět za přítomnosti organické báze, například tri- C_w alkylaminu jako je triethylamin.

Sloučeniny obecného vzorce XXII mohou být známým způsobem získány redukcí odpovídajících nitrosloučenin obecného vzorce XXIII

(XXIII), kde R², R³, A^a a R¹⁰RⁿN-skupina mají výše uvedený význam. Redukce nitroskupiny se může provádět metodami známými pro redukci nitrobenzensloučenin na anilinosloučeniny například katalytickou hydrogenací za přítomnosti katalyzátoru palladium/uhlí. Redukce se může provádět také za použití jiných reakčních činidel, která in šitu poskytují vodík, například kovového železa/kyseliny chlorovodíkové nebo kovového zinku/kyseliny chlorovodíkové.

Sloučeniny obecného vzorce XXIII mohou být o sobě známým způsobem získány reakcí ofluomitrobenzenových sloučenin obecného vzorce XXIV kde R² a R³ mají výše uvedený význam, s kyselinami obecného vzorce XXV

(XXIV),

-13CZ 289245 B6

NR^R¹¹

I (XXV),

HO-C-CH-CHz-A-H

II o

kde A^a a R¹⁰RⁿN-skupina mají výše uvedený význam. Sloučeniny obecného vzorce XXV představují serin- popř. cysteinderiváty, jejichž aminoskupina je chráněna. Reakce se provádí v organickém rozpouštědle inertním za reakčních podmínek za přítomnosti báze. Reakce fluomitrobenzenu se silně nukleofilním cysteinderivátem může být provedena v Cm alkoholu nebo směsi alkohol/voda za přítomnosti slabé báze jako je hydrogenuhličitan sodný. K reakci se slabším nukleofilním serinderivátem se výhodně používá silná báze, například hydrid alkalického kovu, v polárním organickém rozpouštědle jako je dimethylformamid.

Popřípadě se může po tvorbě sloučenin obecného vzorce XXIII původně ve sloučeninách obecného vzorce XXV přítomná amino-chránicí skupina vyměnit o sobě známým způsobem za jinou chránící skupinu aminoskupiny, která se svoji reaktivitou lépe liší od zbytku R^Sa a tak je vhodnější pro další zpracování sloučenin obecného vzorce XXIII.

Sloučeniny obecného vzorce I a jejich farmakologicky přijatelné soli vykazují zajímavé farmakologické vlastnosti. Zvláště vykazují substance inhibiční působení na neutrální endopeptidázu (= NEP). NEP je enzym, který působí odbourávání endogenních natriuretických peptidů, např. atriálního natriuretického peptidu (= ANP). Svým potlačováním NEP-aktivity umožňují substance zlepšit biologickou aktivitu a dobu životnosti NEP štěpených natriuretických peptidů, zejména ANP, a jsou proto vhodné pro ošetření působením těchto hormonů příznivě ovlivnitelných chorobných stavů, zejména srdeční insuficience.

Při srdeční insuficienci dochází chorobou redukovaným kardiálním výstupem k reflexně zvýšenému perifernímu odporu a tím k návratu krve do plicního oběhu a samotného srdce. Následkem toho vzniká vyšší plnicí tlak srdce, který způsobuje roztažení stěn komor v srdečních předsíních a srdečních komorách. Za těchto podmínek funguje srdce jako endokrinní orgán, tj. je s to ANP, který vykazuje vynikající vasodilatační a diureticky/natriuretickou aktivitu, secemovat do krevního řečiště. ANP působí redukčně na zvýšený srdeční plnící tlak. Tento se projevuje diurézou/natriurézou (snížení obíhajícího objemu krve) a redukcí periferního odporu (pokles před a po zatížení). Vliv ANP na odlehčení srdce je ale jen krátkodobý, protože hormon je rychle rozštěpen působením NEP.

Na základě své NEP-potlačující účinnosti umožňují sloučeniny podle vynálezu zlepšit kardioprotektivní mechanismus účinnosti ANP a vykazují zejména vysokou účinnost pokud jde o zesílení diuretických/natriuretických aktivit.

Sloučeniny podle předloženého vynálezu vykazují vynikající profil účinnosti s dobrou snášitelností a přitom vykazují dalekosáhlou NEP-inhibiční účinnost a navíc ještě vykazují nízký inhibiční vliv na endothelin konvertující enzym (=ECE). Při vysokých stadiích srdeční nedostatečnosti dochází reflexně k vysokým krevním hladinám angiotensinu Π, endothelinu a katecholaminu a tím k dalšími zvýšení periferního odporu a srdečního plnicího tlaku, čímž srdeční sval hypertrofuje a dilatuje. ECE-inhibiční přídavné vlastnosti zde mohou posilovat redukující vliv substancí podle vynálezu na periferní odpor. NEP- a ECE-inhibiční a diurézu/natriurézu posilující vlastnosti substancí byly prokázány ve farmakologických standardních metodách in vitro a in vivo.

-14CZ 289245 B6

Popis farmakologických výzkumných metod:

1. Stanovení minimální toxické dávky

Samečci myší o hmotnosti 20 až 25 g se ošetří p.o. maximálními dávkami 300 mg/kg testované substance. Zvířata se sledují 3 hodiny pečlivě na symptomy toxicity. V časovém prostoru 72 hodin po aplikaci se registrují navíc všechny symptomy a případy uhynutí. Jsou-li zaznamenány úhyn nebo silné toxické symptomy, ošetří se další myší sníženými dávkami až již nejsou pozorovány žádné toxické symptomy. Nejnižší dávka, která způsobí uhynutí nebo silné toxické symptomy, je uvedena v následující tabulce A jako minimální toxická dávka. V tabulce A uváděná čísla příkladů odpovídají dále uvedeným příkladům přípravy.

Tabulka A

Testovaní	minimální toxická dávka
sloučenina př. č.	mg/kg myš p.o.
6	>300
24	>300
27	>300
37	>300

2. In vitro stanovení NEP-potlačujícího účinku substancí a stanovení afinity molekuly substance k molekule enzymu

Pro průkaz potlačování účinnosti substancí podle vynálezu na neutrální endopeptidázu (= NEP) se ve standardním testu in vitro zkouší inhibiční vliv substancí na enzymatickou aktivitu NEP vyvolaného odbourávání methionin-enkefalinu (= Met-enkefalin). Stanoví se přitom jako měřítko pro inhibiční účinnost substancí jejich Ki-hodnota (= inhibiční konstanta). Ki-hodnota enzym inhibující účinné zkoušené substance je disociační konstanta komplexu enzym-testovaná substance popř. komplexu (enzym-substrát)-testovaná substance a má rozměr koncentrace.

Provedení testu

Pro provedení testu byly vždy vyrobeny 100μ1 vzorky různých inkubačních roztoků, obsahujících 10 ng čištěného NEP (E.C.3.4.24.11) a vždy různých množství testované substance a substrátu (Met-enkefalin) a 50 m Tris-pufru (Tris(hydroxymethyl)aminomethan/HCl, pH 7,4).

Pro testovanou substanci se vždy vyrobí 24 různých inkubačních roztoků se 3 testovanými koncentracemi vždy v kombinaci s obsahem Met-enkefalinu 2,5,7,10,12,15,40 a 100 μΜ.

V každém testu se také vždy současně zpracují zdvojené kontrolní inkubační roztoky, pro kontrolu enzymu, které neobsahují žádné testované substance a pro kontrolu substrátu, které neobsahují ani enzym ani testovanou substanci.

Inkubační roztoky se inkubují 45 minut při 37 °C v třepačce na vodní lázni. Pak se po 15 minutách nastartuje enzymová reakce přídavkem substrátu (Met-enkefalin) a na konci inkubační doby se zastaví zahříváním na 5 minut na 95 °C. Potom se zastavený inkubační roztok 3 minuty odstřeďuje při 1200 x g a v supematantu se stanoví koncentrace nezreagované substrátu a enzymatickou reakcí vytvořené hydrolýzní produkty. Pro provedení se vzorky supematantu rozdělí pomocí HPLC (= vysokotlaková kapalinová chromatografie) na hydrofobizovaném silikagelu a produkty enzymatické reakce a nezreagovaného substrátu se stanoví fotometricky při vlnové délce 205 nm. Pro dělení pomocí HPLC se použije dělicí sloupec (4,6 x 250 mm), obsahující jako dělicí materiál s reverzní fází Encapharm® 100RP18, 5 μ. Průtok rozpouštědla činil 1,4 ml/min, sloupec byl zahřát na 40 °C. Elučním činidlem A je 5 mM H₃PO₄, pH 2,5 a elučním činidlem B je acetonitril + 1 % 5 mM H₃PO₄, pH 2,5.

-15CZ 289245 B6

Z koncentrací hydrolýzních produktů a nezreagovaného substrátu v různých vzorcích se pro každou testovanou substanci vypočte Ki-hodnota známým způsobem. V následující tabulce B jsou uvedeny hodnoty Ki nalezené pro testované substance. V tabulce B uvedená čísla příkladů 5 odpovídají dále uvedeným příkladům přípravy.

Tabulka B

Testovaná substance příklad č.	Ki-hodnota vnM/1
6	0,67
8	0,40
11	2,55
13	0,76
22	2,15
24	1,00
26	1,22
29	1,08

3. In vitro zkouška ECE-potlačujícího účinku substancí

Pro průkaz potlačujícího účinku substancí podle vynálezu na endothelin konvertující enzym (= ECE) se zkouší ve standardním testu in vitro inhibující účinek substancí na enzymatickou aktivitou ECE způsobené odbourávání Big-endothelinu I (bigET-1). Jako měřítko pro inhibiční 15 účinnost substancí se stanoví jejich IC₅<r-hodnota. IC₅₍r-hodnota enzym inhibující účinné zkoušené substance je koncentrace testované substance, která inhibuje z 50 % enzymatickou aktivitu ECE.

Výroba ECE obsahující membránové frakce buněk endothelu

Buňky vaječníků čínského křečka (= Chinese hamster ovarian cells, dále zkráceno jako CHObuňky) v nichž byl exprimován lidský ECE rekombinant (viz Schmidt a spol., Federation of European Biochemical Societie Letters 356 (1994), 238 až 243) se lyžují a buněčné membrány se oddělí odstředěním při 10000 x g po 10 min. 3-násobnou resuspendizací a opakovaným 25 odstředěním se buněčné membrány promyjí. ECE obsahující buněčné membrány se resuspendují ve 100 mM Tris/HCl-pufni (= Tris(hydroxymethyl)aminomethan/HCl, pH 7,0, obsahující 250 mM NaCl) a až do enzymové zkoušky se uchovávají zmrazené při -70 °C.

Provedení testu

Pro provedení testu se vyrobí 100gl vzorky různých inkubačních roztoků, obsahujících 5 gg proteinu ECE obsahujícího preparátu z membrán buněk endothelu a vždy odlišná množství testované substance a 24 gM substrátu (syntetický peptid: Hr-Asp-Ile-Ala-Trp-Phe-Asn-ThrPro-Glu-His-Val-Val-Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-COOH) a 100 mM tris-pufřu (= Tris(hydroxy35 methyl)aminomethan/HCl, pH 7,0, obsahujícího 250 mM chloridu sodného. Dále obsahuje každý inkubační roztok 100 gM thiorphanu a 10 gM Captoprilu a 1 mM fenylsulfonylfluoridu, 100 gM Pepstatinu A (= inhibitor proteázy) a 100 gM Amastatinu (= inhibitor proteázy).

Pro každou testovanou substanci se vyrobí vždy 6 různých inkubačních roztoků se 3 různými 40 koncentracemi testované substance vždy jako dvojité stanovení.

Při každém testu se současně také zpracovává kontrola, která neobsahuje žádný enzym.

-16CZ 289245 B6

Inkubační roztoky se 15 min předinkubovávají při 37 °C předtím, než se přidá substrát. Enzymová reakce se nastartuje přídavkem substrátu; trvá 60 min při 37 °C a ukončí se zahřátím inkubačních roztoků na 5 min na 95 °C. Enzymatickou reakcí ze substrátu vytvořené hydrolýzní produkty fyN-Asp-Ile-Ala-Trp-COOH a

HzN-Phe-Asn-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val-Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-COOH se stanoví za pomoci vysokotlakové kapalinové chromatografie (HPLC). HPLC-stanovení se provede jako v případě již popsaného in vitro stanovení NEP-potlačující účinnosti.

Z koncentrací hydrolyzních produktů naměřených v různých vzorcích se pro každou testovanou substanci vypočte známým způsobem IC50. Následující tabulka C uvádí IC50 hodnoty nalezené pro testované substance.

Tabulka C

Testovaná substance př.č.	ICJ0 v μΜ
39	0,52
8	1,29
38	2,20

4. In vivo stanovení vlivu substancí na diurézu/natriurézu v objemově zatížených krysách

In vivo aktivita se zkouší na objemově zatížených krysách. V tomto experimentu se vyvolá infuzí izotonického roztoku chloridu sodného vysoký kardiální plnicí tlak, následkem čehož dojde k uvolnění ANP a tím k diuréze/natriuréze.

Provedení testu:

Pokusy se provádějí na samečcích krys Wistar s tělesnou hmotností 200-400 g. Pod neuroleptickou analgezí (Fentanyl; Hypnorm®, výrobce fa Janssen) se napojí katétr do pravé femorální vény pro pozadí infuze a objemové zatížení izotonickým roztokem chloridu sodného. Po otevření dutiny břišní se zavede katétr do ledviny a spojí se s močovodem, takže je možné měření objemu moči, natriuréza a kaliuréza.

Dutina břišní se opět uzavře a zvířata dostávají trvalou infuzi chloridu sodného (0,5 ml/100 g tělesné hmotnosti) po celou dobu pokusu po 2 hodiny. Po periodě ekvilibrace 30 minut se v předběžné fázi shromažďují před podáním testované substance třikrát vždy po 10 minutách vzorky moči. Tyto předběžné hodnoty (= ,,predrug“-hodnota) se stanoví pro přezkoušení toho, že u testovaných zvířat probíhá kontinuální tok moče.

Potom se podají roztoky, obsahující testované substance intravenózně (bolus-injekce do femorální vény) nebo orálně (pomocí polykací sondy) skupinám vždy 10 krys. U obou forem aplikace se kontrolní skupině zvířat podávají roztoky placeba, které nemají žádnou účinnost. 5 minut po i.v. aplikaci popř. 120 minut po orálním podání substancí se krysy i.v. zatíží zvýšeným objemem roztoku chloridu sodného (2 ml/100 g tělesné hmotnosti ve 2 minutách) a moč se shromažďuje po 60 min. Stanoví se množství moče shromážděné v tomto časovém úseku a měří se v ní obsažené množství sodíku a draslíku. Z vyloučených množství moče se odečte zvýšení vylučování dosažené za objemového zatížení proti předběžným hodnotám.

V následující tabulce D jsou uvedena zvýšení vylučování moče v % dosažená za objemového zatížení po podání testované substance vztažená na zvýšení vylučování moče za objemového zatížení po podání placeba. Dále jsou také udávána za objemového zatížení po podání testované substance vylučovaná množství sodíku a draslíku v % za objemového zatížení po podání placeba vylučovaných množství sodíku a draslíku.

-17CZ 289245 B6

Tabulka D

Test.	forma	zvýšení vyl. moče za obj. zatížení	Na- a K-vylučování za obj.
př. č	pod.	po podání test, subst. v % vztaže-	zatížení, vyluč.	množství po
	mg/kg	no na zvýšení vyluč, moče za	podání test, subst. v % vyl.
		obj. zatížení po podání placeba	množství po podání placeba
			Na	K
8	0,1 i.v.	123,5 %	160,9 %	80,8 %
8	1,0 i.v.	153,7%	230,4%	121,8%
4	15 p.o.	196,5%	n*	n*
4	51 p.o.	271 %	n*	n*

n* = nestanoveno

Uvedené výsledky ukazují, že sloučeniny obecného vzorce I vykazují vysokou afinitu kNEP a potlačováním tohoto ANP-odbourávajícího enzymu přispívají ke zvýšení ANP-hladin v krvi a tím zvyšují dávkově závislé ANP vyvolávané diureticko/natriuretické účinky aniž by docházelo k podstatné ztrátě draslíku.

Na základě této popsané účinnosti jsou sloučeniny obecného vzorce I vhodné jako léčivo pro větší savce, zejména lidi, pro léčbu srdeční insufícience a k podpoře diurézy/natriurézy, zejména u pacientů, trpících srdeční insuficiencí. Dikarboxylové sloučeniny obecného vzorce I a jejich soli se přitom používají výhodně jako parenterálně, zejména i.v., aplikovatelné formy léčiv a mono- nebo diester vzorce I výhodně v orálně aplikovatelných formách léčiv. Používané dávky mohou být různé a mění se podle typu ošetřovaného stavu, použité substance a formy podání. Například budou parenterální formulace obecně obsahovat méně účinné látky než orální preparáty. Obecně jsou však vhodné pro aplikaci u větších savců, zejména lidí, lékové formy s obsahem účinné látky 1 až 200 mg na jednotkovou dávku.

Jako léčivo mohou být sloučeniny obecného vzorce I zpracovány s obvyklými farmaceutickými pomocnými látkami do galenických přípravků jako jsou např. tablety, kapsle, čípky nebo roztoky. Tyto galenické přípravky mohou být vyrobeny o sobě známými metodami za použití běžných pevných nebo kapalných nosičů jako např. mléčného cukru, škrobů nebo talku nebo kapalných parafínů a/nebo za použití běžných farmaceutických pomocných látek, například činidel, umožňujících rozpad tablet, rozpouštědel nebo konzervačních činidel.

Následující příklady myjí vynález blíže objasnit, ale v žádném případě jej neomezují.

Struktury nových sloučenin byly stanoveny spektrometrickou analýzou, zejména analýzou NMR-, hmotových, IR-/nebo UV-spekter a popřípadě ověřeny stanovením optické otáčivosti.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1 terč. Butylester kyseliny 3-{l-[2'-(ethoxykarbonyl)-4'-fenylbutyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové

A) K roztoku 160,1 g diethylesteru kyseliny malonové v jednom litru dimethylformamidu se po částech přidá 123,4 g terc.butylátu draselného při teplotě 15 °C. Reakční směs se míchá 30 minut, potom se přikape při teplotách místnosti roztok 207,7 g fenylethylbromidu ve 200 ml dimethylformamidu. Potom se reakční směs ohřívá jednu hodinu na 60 °C a opět se nechá vychladnout. Dimethylformamid se odpaří za sníženého tlaku, zbytek se vyjme do směsi methyl

-18CZ 289245 B6 terc.butyletheru a vody. Organická fáze se oddělí, promyje se vodou a suší nad síranem sodným a odpaří se. Jako olejovitý zbytek zbylý surový produkt se přečistí destilací za sníženého tlaku. Získá se 202,5 g ethylesteru kyseliny 2-ethoxykarbonyl-4-fenyl-butanové, t.v.i ₅ = 148 až 153 °C.

B) K roztoku 23,6 g získaného diesterového produktu ve 285 ml ethanolu se přidá roztok 6,17 g hydroxidu draselného v 76 ml vody za chlazení ledem. Reakční směs se několik hodin míchá. Potom se odpaří ethanol za sníženého tlaku a zbytek se vyjme do směsi methyl-terc.butyletheru a vody. Organická fáze se oddělí a odloží a vodná fáze se za chlazení ledem okyselí zředěnou vodnou kyselinou chlorovodíkovou a potom se extrahuje vícekrát do methyl-terc.butyletheru a vody. Spojené methyl-terc.butyletherové fáze se promyjí vodou, suší nad síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Získá se 20,2 g surového olejovitého ethylesteru kyseliny 2-karboxy4-fenylbutanové, který se bez dalšího čištění dále zpracovává.

C) Ke 20,2 g uvedeného získaného produktu se za chlazení ledem přidá postupně 11 ml 35% vodného roztoku formaldehydu a 9,23 ml piperidinu. Reakční směs se míchá více hodin při teplotě místnosti, potom se zředí methyl-terc.butyletherem, promyje vodným roztokem hydrogensíranu draselného a vodou, suší se nad síranem sodným a odpaří. Zbytek se suší za sníženého tlaku. Získá se 14,8 g ethylesteru kyseliny a-(2-fenylethyl)-akiylové.

D) Pod atmosférou dusíku se rozpustí 25,2 ml diizopropylaminu ve 150 ml absolutního tetrahydrofuranu a ochladí se na -35 °C. K roztoku se přikape 100 ml 1,6-normálního roztoku butyllithia v n-hexanu. Potom se reakční směs 30 minut míchá při 0 °C a pak se přikape roztok 8,1 ml kyseliny cyklopentankarboxylové ve 20 ml absolutního tetrahydrofuranu. Reakční směs se 2 hodiny míchá při 0 °C. Potom se přikape roztok 16,8 g pod c) získaného akrylesteru ve 20 ml absolutního tetrahydrofuranu, reakční směs se nechá stát 2 hodiny při 0 °C a pak více hodin při -15 °C. Pro zpracování se reakční směs okyselí 10% vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se n-hexanem. Organická fáze se extrahuje sedmkrát polonasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a jednou vodou, suší se nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Jako zbytek získaný surový produkt se přečistí rychlou chromatografií na silikagelu za použití n-hexanu/ethylacetátu (8:2). Získá se 19,6 g čisté kyseliny l-[2'(ethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karboxylové s teplotou tání 68 až 69 °C.

Ε) K roztoku 100 g α-tetralonu v 820 ml methanolu se za chlazení ledem pomalu přikape

108.3 g bromu. Potom se reakční směs 30 minut míchá při teplotě místnosti a pak se přidá

122.4 g hydroxylamin-hydrochloridu a pak 110 ml vody. Směs se míchá 3 dny při teplotě místnosti. Potom se přidá dalších 493 ml vody a po jedné hodině se vyloučí bílá sraženina. Reakční směs se míchá další 3 hodiny a pak se ochladí na 5 °C. Sraženina se odsaje, promyje se vodou a suší se při 40 °C za sníženého tlaku. Získá se 136,7 g 2-brom-3,4-dihydronaftalenl(2H)-on-oximu s teplotou tání 130 až 132 °C.

F) 79,5 g získaného oximu se po částech přidá ke 452 g na 80 °C ohřáté kyseliny fosforečné a reakční směs se 18 hodin míchá při 80 °C. Potom se opatrně zředí 710 ml vody a směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti. Vzniklá sraženina se odsaje, promyje se vodou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, ještě jednou vodou a potom se promyje methylterc.butyletherem a suší se nad hydroxidem draselným při teplotě 60 °C. Získá se 66,6 g 3-brom4,5-dihydro-lH-l-benzazepin-2(3H)-onu s teplotou tání 168 až 170 °C.

G) 80 g získaného produktu se suspenduje ve 140 ml dimethylformamidu. Suspenze se smísí s roztokem 72,6 g ftalimidu draselného ve 205 ml dimethylformamidu a potom se 16 hodin míchá při 60 °C. Pro zpracování se ochladí na teplotu místnosti a přikape se pomalu 800 ml vody a směs se 2 hodiny míchá za chlazení ledem. Vzniklá krystalová kaše se odsaje, a nejprve se promyje směsí voda/dimethylformamid a pak methyl-terc.butyletherem a pak se 2 dny suší za sníženého tlaku. Získá se 73,3 g 4,5-dihydro-3-ftalimido-lH-l-benzazepin-2(3H)-onu s teplotou tání 185 až 195 °C.

-19CZ 289245 B6

Η) K suspenzi 27 g získaného produktu v 90 ml dimethylformamidu se za chlazení ledem přidá roztok 12,3 g terc.butylátu draselného ve 40 ml dimethylformamidu. Po 30 minutovém míchání za chlazení ledem se po částech při teplotě 0 až 5 °C přikape 20,7 g terc.butylesteru kyseliny bromoctové. Míchá se jednu hodinu při 0 °C. Potom se reakční směs ohřeje na 40 °C a přikape se 164 ml vody během 3 hodin a ještě jednu hodinu se míchá při 30 °C. Potom se oddekantuje vodný roztok od vytvořené sraženiny a zbylá pevná látka se krystaluje z methyl-terc.butyletheru, promyje se vodou a methyl-terc.butyletherem a suší při 60 °C za sníženého tlaku. Získá se 26,3 g terc.butylesteru kyseliny 2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-3-ftalimido-lH-l-benzazepin-l-octové o teplotě tání 194 až 197 °C.

I) 7 g uvedeného esteru se během 5 minut přidá ke 13,8 ml na 80 °C ohřátého ethanolaminu. Po 5 minutách se vytvoří čirý roztok, který se ochladí na teplotu místnosti a zředí 105 ml toluenu. Roztok se vytřepe se 140 ml 5% vodného roztoku chloridu sodného, organická fáze se oddělí, suší se nad síranem sodným a odpaří. Zbytek se krystaluje z methyl-terc.butyletheru. Získá se 4,0 g terc.butylesteru kyseliny 3-amino-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové o teplotě tání 117 až 118 °C.

J) 2,9 g uvedeného aminu a 3,2 g pod I) získané kyseliny se rozpustí ve 100 ml dichlormethanu. K reakční směsi se přidá 2,2 ml N-methylmorfolinu, 1,27 g hydroxybenzotriazolu a 3,81 g hydrochloridu N-ethyl-N-(3-dimethylaminopropyl)-karbodiimidu za chlazení ledem. Potom se reakční směs míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Pro zpracování se reakční směs zředí dichlormethanem a postupně se promyje vodou, vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, vodným roztokem hydrogenuhíičitanu sodného a znovu vodou. Organická fáze se pak suší nad síranem sodným a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Takto získaný surový produkt se přečistí pomocí sloupcové chromatografie na silikagelu za mírně zvýšeného tlaku (= rychlá chromatografie) za použití n-hexanu/ethylacetátu, přičemž se podíl ethylacetátu v elučním činidle během eluce zvyšuje z 1:9 na 3:7. Získá se 5,4 g čisté titulní sloučeniny jako olejovitého produktu.

IR-spektrum (jako film): 3400 cm'¹, 1725 cm^-1,1600 cm^-1.

Příklad 2

Kyselina 3-{l-[2'-(ethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-2,3,4,5tetrahydro-2-oxo-l H-l-benzazepin-l-octová g terč, butylesteru kyseliny 3-{ l-[2'-(ethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-lkarbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové (příprava viz příklad 1) se rozpustí v 16 ml kyseliny trifluoroctové. Roztok se 3 hodiny míchá při teplotě místnosti. Po zpracování se odpaří kyselina trifluoroctová za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí v dichlormethanu a roztok se promyje do neutrality vodou. Potom se organická fáze suší nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Zbytek se vícekrát rozmíchá s n-hexanem a vždy opět odpaří dosucha. Získá se 3,4 g titulní sloučeniny jako pevné pěny s teplotou tání 81 až 104 °C.

Příklad 3 terč. Butylester kyseliny (3S,2'R)-3-{l-[2'-(ethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-lkarbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové

A) 30,5 g kyseliny l-[2'-(ethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karboxylové (příprava viz příklad ID) a 11,6 g L-(-)-a-methylbenzylaminu se rozpustí v ethanolu za zahřívání.

-20CZ 289245 B6

Reakční směs se chladí 12 hodin v chladničce, potom se vyloučené krystaly odsají a vícekrát (až do konstantní optické otáčivosti) krystaluje z ethanolu a potom se za sníženého tlaku suší. Získá se 17,7 g α-methylbenzylamoniové soli uvedené kyseliny o teplotě tání 118 až 121 °C a optické otáčivosti [a]²⁰o = +5,6° (c = 0,5 v methanolu).

Pro uvolnění kyseliny se tato sůl vyjme do směsi voda/dichlormethan a směs se okyselí vodným roztokem hydrogenuhličitanu draselného. Organická fáze se oddělí a vodná fáze se ještě třikrát extrahuje dichlormethanem. Spojené organické extrakty se promyjí vodou, suší nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Zbytek se suší. Získá se 11,2 g čisté kyseliny (2R')-1[2'-(ethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karboxylové o optické otáčivosti [a]²°o = +7,4° (c = 0,651 v methanolu).

Β) K na 65 °C ohřátému roztoku 24,5 g racemického terc.butylesteru kyseliny 3-amino-2,3,4,5tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové (příprava viz příklad II) se přidá roztok 12,65 g L-(+)-vinné kyseliny v 54 ml na 65 °C ohřátého ethanolu. Reakční směs se míchá jednu hodinu při teplotě místnosti. Potom se přikape roztok 1,72 ml benzaldehydu v 1,3 ml ethanolu. Získaná suspenze se 14 hodin při 80 °C vaří pod refluxem a pak se ochladí na teplotu místnosti. Vzniklá krystalická sraženina se odsaje, vyjme se do 80 ml ethanolu a znovu se vaří 8 hodin pod refluxem. Potom se ochladí na teplotu místnosti a krystaly se odsají a za sníženého tlaku suší při 50 °C. Získá se 23,6 g soli kyseliny vinné o teplotě tání 195 až 196 °C a optické otáčivosti [α]²°ο = -152° (c = 0,5 v methanolu).

Pro uvolnění báze se ochladí 23,6 g vinné soli ve směsi ze 250 ml vody a 108 ml dichlormethanu za míchání na 0 °C a přídavkem vodného roztoku amoniaku se upraví na pH 9,6. Organická fáze se oddělí, vodná fáze se ještě jednou extrahuje 30 ml dichlormethanu a organická fáze se spojí, suší nad síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Zbytek se krystaluje zmethylterc.butyletheru a za sníženého tlaku se suší. Získá se 12,2 g terc.butylesteru kyseliny (3S)—3— amino-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové o teplotě tání 113 až 115 °C a optické otáčivosti [a]²⁰ _D = -276,2° (c = 0,5 v methanolu).

C) 5,4 g kyseliny vyrobené pod A) se rozpustí v 60 ml suchého dichlormethanu a ochladí se na 20 °C. Potom se pomalu přikape roztok 1,31 ml chloridu kyseliny methansulfonové v 5 ml suchého dichlormethanu. Po 15minutovém míchání se přikape roztok 4,8 g pod B) získaného aminu a 2,33 ml triethylaminu v 60 ml dichlormethanu. Potom se reakční směs míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Pro zpracování se reakční směs vloží do vody, organická fáze se oddělí a promyje se vodným roztokem hydrogensíranu draselného a pak vodou, suší se nad síranem sodným, filtruje a odpaří se za sníženého tlaku. Zbylý surový produkt se přečistí rychlou chromatografií na 500 g silikagelu za použití n-hexanu/ethylacetátu (1:3). Po sušení za sníženého tlaku se získá 9,5 g čisté titulní sloučeniny jako oleje o optické otáčivosti [α]²% =-115,2° (c = 0,463 v methanolu).

Příklad 4

Kyselina (3S,2'R)-3-{ l-[2'-(ethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octová

9,4 g terč, butylesteru kyseliny (3S,2'R)-3-{l-[2'-(ethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové (výroba viz příklad 3) se za chlazení ledem rozpustí v 15 ml dichlormethanu. Roztok se smísí se 31 ml kyseliny trifluoroctové a reakční směs se asi 12 hodin uchovává při 4 °C v chladničce. Pro zpracování se dichlormethan a kyselina trifluoroctová odpaří za sníženého tlaku. Získaný surový produkt se vyjme do ethylacetátu, promyje se vodou, zředěným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a znovu se promyje vodou. Organická fáze se oddělí, suší se nad síranem

-21CZ 289245 B6 sodným a za sníženého tlaku se odpaří. Zbytek se přečistí rychlou chromatografií na silikagelu, jako eluční činidlo se nejprve použije dichlormethan a potom dichlormethan/methanol (95:5). Získaný produkt se 2 dny suší při 80 °C za sníženého tlaku. Získá se 7,3 g čisté titulní sloučeniny jako pevné pěny o teplotě tání 71 až 74 °C, optické otáčivosti [α]²°ο = -131,0^ο a (c = 0,5 v methanolu).

Příklad 5 terč. Butylester kyseliny 3-{ l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cykIopentan-lkarbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové

A) 118 g terc.butylesteru kyseliny dimethylfosfonooctové se pod atmosférou dusíku rozmíchá v 875 ml sušeného dimethylformamidu. K roztoku se přidá 58,9 g terc.butylátu draselného za chlazení ledem. Potom se reakční směs krátce zahřeje na 60 °C a pak se nechá vychladnout na teplotu místnosti. K reakční směsi se přikape roztok 104,9 g fenylethylbromidu ve 110 ml dimethylformamidu. Potom se reakční směs zahřívá 2 hodiny na 60 °C. Pro zpracování se dimethylformamid odpaří za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v methyl-terc.butyletheru. Roztok se okyselí vodným roztokem hydrogensíranu draselného. Potom se organická fáze oddělí, promyje se vodou, suší se nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Získaný surový produkt se přečistí rychlou chromatografií na 3 kg silikagelu za použití dichlormethanu/methylterc.butyletheru (4:1) jako elučního činidla. Získá se 105,1 g čistého terc.butylesteru kyseliny 2(dimethylfosfono)-4-fenyl-n-máselné jako olejovitého produktu.

B) 105,1 g tohoto získaného produktu se pod atmosférou dusíku rozpustí v 705 ml suchého tetrahydrofuranu. K roztoku se přidá 28,4 g paraformaldehydu. Potom se pomalu přikape roztok 32,5 g terc.butylátu draselného ve 100 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se potom 1 hodinu míchá. Pro zpracování se reakční směs okyselí studeným vodným roztokem hydrogensíranu draselného a zředí se methyl-terc.butyletherem. Potom se organická fáze oddělí, promyje se vodou, suší nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Získaný surový produkt se přečistí rychlou chromatografií na 700 g silikagelu za použití n-hexanu/ethylacetátu (9:1). Získá se 47,0 g a-(fenethyl)-akrylové kyseliny jako bezbarvého oleje.

C) Kna -50 °C ochlazenému roztoku 50,2 ml diizopropylaminu ve 450 ml absolutního tetrahydrofuranu se přikape 200 ml 1,6 molámího roztoku butyllithia v n-hexanu a reakční směs se udržuje dalších 30 minut při 0 °C. Potom se při této teplotě přikape roztok 16,2 ml kyseliny cyklopentankarboxylové ve 40 ml absolutního tetrahydrofiiranu. Reakční směs se míchá další z hodiny při 0 °C. Potom se ke směsi pomalu přidá roztok 38 g pod B) získaného produktu v 50 ml absolutního tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá další 2 hodiny při 0 °C a pak se ještě několik hodin nechá stát při -15 °C. Pro zpracování se reakční směs za chlazení ledem okyselí nasyceným vodným roztokem hydrogensíranu draselného a třikrát se extrahuje n-hexanem. Spojené organické fáze se sedmkrát promyjí polonasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom vodou, pak se suší nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Získaný olejovitý produkt se krystaluje z ledově studeného n-hexanu. Získá se 41,9 g čisté krystalické kyseliny l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karboxylové o teplotě tání 75 až 77 °C.

D) 3,3 g tohoto získaného produktu, 2,7 g terc.butylesteru kyseliny 3-amino-2,3,4,5-tetrahydro2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové (výroba viz příklad II), 1,53 ml N-methylmorfolinu a 1,18 g hydroxybenzotriazolu se rozpustí v 93 ml absolutního dichlormethanu pod atmosférou dusíku. K tomuto roztoku se za chlazení ledem přidá 3,52 g hydrochloridu N-ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)-karbodiimidu. Pak se reakční směs míchá 2 hodiny za chlazení ledem. Pro zpracování se reakční směs postupně promyje vodou, vodným roztokem hydrogensíranu draselného, vodou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a opět vodou. Organická fáze se suší nad síranem sodným a za sníženého tlaku se odpaří. Zbylý surový produkt se přečistí

-22CZ 289245 B6 rychlou chromatografií na 200 g silikagelu za použití n-hexanu/ethylacetátu (7:3) jako elučního činidla a krystaluje se z methyl-terc.butyletheru. Získá se 4,2 g čisté titulní sloučeniny o teplotě tání 110 až 114 °C.

Příklad 6

Kyselina 3-{l-[2'-karboxy-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octová

4,1 g terč, butylester kyseliny 3-{l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-lkarbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové (výroba viz příklad 5) se rozpustí ve 13 ml kyseliny trifluoroctové při teplotě 4 °C za nepřístupu vlhkosti. Získaný roztok se míchá 3 hodiny při této teplotě. Pro zpracování se reakční směs odpaří za sníženého tlaku. K úplnému odstranění kyseliny trifluoroctové se zbytek vícekrát smísí s dichlormethanem a opět se odpaří. Získaný zbytek se pak rozpustí v dichlormethanu, roztok se promyje vodou, suší se nad síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Surový produkt získaný jako zbytek se krystaluje z dichlormethanu. Získá se 2,7 g čisté titulní sloučeniny o teplotě tání 178 až 183 °C.

Příklad 7 terč. Butylester kyseliny (3S,2'R)-{l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentanl-karbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové

A) 68 g kyseliny l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karboxylové (výroba viz 5C) a 23,5 ml L-(-)-a-methylbenzylaminu se rozpustí ve 200 ml ethanolu za zahřívání. Reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 3A). Získá se 32,2 g amethylbenzylamoniové soli uvedené kyseliny o teplotě tání 118 až 119°C, optické otáčivosti [cc]²°d ~ +9,2° (c = 0,5 v methanolu). Pro uvolnění kyseliny se tato sůl dále zpracuje jak je popsáno v příkladu 3A). Získá se 23 g kyseliny (2'R)-l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-4'-fenylbutylj-cyklopentankarboxylové o teplotě tání 68 až 70 °C, optické otáčivosti [a]²⁰ _D = +15,4° (c = 0,5 v methanolu).

B) 60,1 g výše získané kyseliny se nechá reagovat s 50,3 g terc.butylesteru kyseliny (3S)—3— amino-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové (výroba viz příklad 3B) metodou popsanou v příkladu 3C) a získaná reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 3C). Získá se 94,3 g titulní sloučeniny jako pěny o optické otáčivosti [α]²°ο = -110,2° (c = 0,5 v methanolu). IR spektrum (jako KBr-tableta): 3420 cm^-1,1743 cm’, 1725 cm¹,1670 cm¹.

Příklad 8

Kyselina (3 S,2'R)-[ 1 -[2'-karboxy-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino]-2,3,4,5tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octová g terč, butylesteru kyseliny (3S,2'R)-{l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové (výroba viz příklad 7) se hydrolyzuje kyselinou trifluoroctovou metodou popsanou v příkladu 6 a reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 6. Získá se 63,5 g titulní sloučeniny jako pevné pěny o teplotě tání 97 až 122 °C, optické otáčivosti [α]²°ο = -136,2° (c = 0,5 v methanolu).

-23CZ 289245 B6

Příklad 9

Benzylester kyseliny (3S,2'S)-{ l-[2'-(terc.butoxykarbonyl}-3'-(2-methoxyethoxy)-propyl]cyklopentan-l-karbonylamino}-3,4-dihydro-4-oxo-l,5-benzoxazepin-5(2H)-octové

A) K roztoku 100 g kyseliny 3-brompropionové ve 200 ml diethyletheru se přidá Ί ml kyseliny sírové a reakční směs se ochladí na -20 °C. Potom se přidá 123 ml zkapalněného izobutenu. Reakční směs se několik hodin míchá při teplotě místnosti v tlakové nádobě. Potom se reakční směs pro zpracování přidá ke zředěnému, ledově studenému vodnému roztoku hydroxidu sodného. Etherová fáze se oddělí a vodná fáze se ještě jednou extrahuje etherem. Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Získaný surový produkt se destiluje za sníženého tlaku. Získá se 100 g terc.butylesteru kyseliny 3-brompropionové, t.v. 75 až 77 °C.

B) 50,4 ml diizopropylaminu se rozpustí ve 300 ml absolutního tetrahydrofuranu pod atmosférou dusíku a roztok se ochladí na -70 °C. K roztoku se při této teplotě přikape pomalu 200 ml 1,6molámího roztoku butyllithia v n-hexanu. Reakční směs se nechá ohřát na 0 °C, míchá 30 min při této teplotě a opět se ochladí na -20 °C. Při této teplotě se přikape roztok 16,2 ml kyseliny cyklopentankarboxylové ve 30 ml absolutního tetrahydrofuranu. Potom se reakční směs míchá 2 hodiny při teplotě místnosti. Potom se směs ochladí na -10 °C a pomalu se přikape na -10 °C ochlazený roztok 35 g terc.butylesteru kyseliny 3-brompropionové ve 100 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se několik hodin míchá při teplotě místnosti. Pro zpracování se okyselí zředěným vodným roztokem kyseliny chlorovodíkové a zředí 375 ml diethyletheru. Organická fáze se oddělí a vodná fáze se ještě třikrát extrahuje vždy 100 ml diethyletheru. Spojené organické extrakty se promyjí vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Zbytek se rozpustí ve 300 ml diethyletheru. Roztok se šestkrát vytřepe svodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom čtyřikrát s 10% vodným roztokem uhličitanu sodného. Spojené roztoky uhličitanu sodného se za chlazení ledem okyselí a třikrát se extrahují vždy 150 ml etheru. Tyto extrakty se spojí s etherickým roztokem a získaný roztok se promyje svodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Získaný surový produkt se rekrystaluje z ledově studeného n-hexanu. Získá se 7,7 g čisté kyseliny l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-ethyl]-l-cyklopentankarboxylové o teplotě tání 78 až 81 °C.

C) 30 ml diizopropylaminu se rozpustí ve 100 ml tetrahydrofuranu pod atmosférou dusíku a roztok se ochladí na -70 °C. K roztoku se přikape 132 ml 1,6-molámího roztoku butyllithia v nhexanu a reakční směs se míchá dalších 30 minut při 0 °C a pak se znovu ochladí na -70 °C. Potom se k reakční směsi postupně přikape roztok 24,2 g výše pod B) vyrobeného produktu ve 100 ml absolutního tetrahydrofuranu a pak roztok 14,2 ml methoxyethoxymethylchloridu ve 20 ml absolutního tetrahydrofuranu. Reakční směs se ještě 16 hodin míchá při teplotě místnosti. Pro zpracování se reakční směs vloží do směsi led/voda, okyselí se vodným roztokem hydrogensíranu draselného a třikrát extrahuje vždy 300 ml ethylacetátu. Organické fáze se spojí, suší se nad síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku. Zbylý surový produkt se přečistí rychlou chromatografií na 500 g silikagelu za použití dichlormethanu/etheru (8:2) jako elučního činidla. Získá se 26,5 g čisté kyseliny l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-3'-(2-methoxyethoxy)-propyl]cyklopentan-l-karboxylové jako oleje.

D) 36,7 g uvedené získané racemické kyseliny se rozpustí ve 184 ml n-hexanu a roztok se smísí s

18,4 g (+)-pseudoefedrinu. Vyloučená sraženina se krátkým povařením pod refluxem opět uvede do roztoku. Potom se roztok ochladí a několik hodin se nechá stát v chladničce. Vytvořená krystalická sraženina se odsaje, promyje se studeným n-hexanem a ještě čtyřikrát se rekiystaluje z n-hexanu. Získá se 16,2 g pseudoefedrinové soli o teplotě tání 89 až 91 °C, optické otáčivosti [cc]²⁰d = +36,5° (c = 1 v methanolu).

-24CZ 289245 B6

Pro uvolnění kyseliny se 16 g této soli suspenduje v n-hexanu a reakční směs se okyselí ledově studeným vodným roztokem hydrogensíranu draselného. Organická fáze se oddělí a vodná fáze se ještě dvakrát extrahuje n-hexanem. Spojené organické fáze se promyjí vodným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Zbytek se suší za sníženého tlaku při 50 °. Získá se 9,9 g (2'S)-l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-3'-(2-methoxyethoxy)-propyl]-cyklopentan-l-karboxylové jako oleje o optické otáčivosti [a]²⁰ _D = +2,9° (c = 1 v methanolu).

E) 17,2 g hydridu sodného (80%) se rozpustí ve 400 ml suchého dimethylformamidu pod atmosférou dusíku za vyloučení vlhkosti. K tomuto roztoku se při 0 °C pomalu přikape roztok 50 g L-BOC-serinu (= N-(terc.butoxykarbonyl)serin) v 50 ml suchého dimethylformamidu. Reakční směs se pomalu nechá ohřát na 15 °C, potom se přikape roztok 37,4 g o-nitrofenolu v 50 ml dimethylformamidu a reakční směs se míchá několik hodin při teplotě místnosti. Pro zpracování se reakční směs nalije na ledově studený vodný roztok hydrogensíranu draselného. Potom se extrahuje několikrát ethylacetátem a spojené organické fáze se smísí svodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného. Vodná fáze se oddělí, promyje se etherem a potom se okyselí roztokem hydrogensíranu sodného a extrahuje ethylacetátem. Ethylacetátový extrakt se promyje vodou, suší se nad síranem sodným a za sníženého tlaku se odpaří. Získá se 54,2 g surové kyseliny (2S)-3-(2-nitrofenoxy)-2-(terc.butoxykarbonylamino)-propionové, která se bez dalšího čištění dále zpracovává.

F) 54,2 g výše získané kyseliny se rozpustí v 600 ml methanolu. Roztok se smísí s 1,8 g palladiového katalyzátoru (5 % Pd/uhlí). Potom se 1 hodinu hydrogenuje při tlaku vodíku 5 bar. Pak se katalyzátor odfiltruje a zfiltrovaný roztok se odežene za sníženého tlaku. Získaný surový produkt se krystaluje ze směsi methyl-terc.butylether/n-hexan za chlazení ledem. Získá se 30,1 g kyseliny (2S)-3-(2-aminofenoxy)-2-(terc.butoxykarbonylamino)-propionové s teplotou tání 87 až 91 °C, optické otáčivosti [a]²°o = +55,9° (c = 1 v methanolu).

G) 13,3 g výše získané kyseliny se rozpustí v 71 ml suchého dimethylformamidu za vyloučení vlhkosti. K roztoku se za chlazení ledem přidá roztok 7,8 ml diethylfosfonokyanidu v 6 ml dimethylformamidu. Po 10 minutách se přikape 5,7 ml triethylaminu a reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Potom se reakční směs pro zpracování nalije na ledovou vodu a několikrát se extrahuje methyl-terc.butyletherem. Spojené organické fáze se suší a za sníženého tlaku se odpaří. Jako zbytek zbylý surový produkt se krystaluje z ethanolu. Získá se 1,3 g (3S)—3— (terc.butoxykarbonylamino)-2,3-dihydro-l,5-benzoxazepin-4(5H)-onu o optické otáčivosti [a]²⁰ _D = -194° (c = 1 v methanolu).

H) 16 g výše získaného produktu se rozpustí ve 313 ml tetrahydrofuranu za nepřístupu vlhkosti. K roztoku se postupně přikape roztok 7,1 g terc.butylátu draselného ve 30 ml tetrahydrofuranu a roztok 10,9 ml benzylesteru kyseliny bromoctové v 10 ml tetrahydrofuranu. Reakční směs se míchá 1 hodinu při teplotě místnosti. Potom se pro zpracování zředí methyl-terc.butyletherem, promyje se vodou, organická fáze se suší nad síranem sodným a za sníženého tlaku se odpaří. Získaný surový produkt se přečistí rychlou chromatografií na 500 g silikagelu za použití nhexanu/ethylacetátu (3:2) jako elučního činidla. Získá se 20,5 g čistého benzylesteru kyseliny (3S)-3-(terc.butoxykarbonylamino)-4-oxo-3,4-dihydro-l,5-benzoxazepin-5(2H)-octové jako oleje o optické otáčivosti [a]²°o = -152° (c = 0,68 v methanolu).

I) 20 g získaného produktu se rozpustí ve 137 ml dichlormethanu. Roztok se smísí se 77 ml kyseliny trifluoroctové a 1 hodinu se míchá. Potom se za sníženého tlaku odpaří, zbytek se rozpustí v dichlormethanu a smísí s vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného do alkalické reakce. Organická fáze se oddělí, promyje se vodou, suší nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Získá se 15,7 g čistého benzylesteru kyseliny (3S)-amino-4-oxo-3,4-dihydrol,5-benzoxazepin-(2H)-octové o optické otáčivosti [cc]²°d = -187,5° (c = 0,536 v methanolu).

-25CZ 289245 B6

J) 15,7 g výše získaného produktu se rozpustí ve 48 ml suchého dichlormethanu a roztok se při teplotě místnosti postupně smísí s 1,6 g kyseliny vyrobené pod d), 0,79 ml N-methylmorfolinu a 1,83 g hydrochloridu N-ethyl-N'-(3-dimethylaminopropyl)-karbodiimidu. Reakční směs se míchá ještě jednu hodinu při teplotě místnosti. Potom se pro zpracování postupně reakční směs promyje vodou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu draselného, vodou, vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a znovu vodou, suší se nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Jako zbytek získaný surový produkt se přečistí rychlou chromatografíí na silikagelu za použití n-hexanu/ethylácetátu (7:3) jako elučního činidla. Získá se 1,8 g titulní sloučeniny jako oleje o optické otáčivosti [a]²⁰ _D = -96,3° (c = 0,326 v methanolu).

Příklad 10

Benzylester kyseliny (3S,2'S)-{ l-[2'-karboxy-3'-(2-methoxyethoxy)-propyl]-cyklopentan-lkarbonylamino}-4-oxo-3,4-dihydro-l,5-benzoxazepin-5(2H)-octové

1,6 g benzylesteru kyseliny (3S,2'S)-[l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-3'-(2-methoxyethoxypropyl]-cyklopentan-l-karbonylamino]-4-oxo-3,4-dihydro-l,5-benzoxazepin-5(2H)-octové (výroba viz příklad 9) se rozpustí za chlazení ledem v 5 ml kyseliny trifluoroctové. Roztok se několik hodin nechá stát při teplotě 4 °C. Potom se zpracování odpaří za sníženého tlaku a zbytek, kterým je surový produkt se přečistí rychlou chromatografíí na silikagelu za použití dichlormethanu/methyl-terc.butyletheru/methanolu (85:15:5). Po sušení se získá 1,0 g titulní sloučeniny jako oleje o optické otáčivosti [α]²°ο = -117,2° (c = 0,42 v methanolu).

Příklad 11

Kyselina (3 S,2' S)-{ 1 -[2'-karboxy-3 '-(2-methoxyethoxy)-propyl]-cyklopentan-l -karbony 1amino}-4-oxo-3,4-dihydro-l,5-benzoxazepin-5(2H)-octová

0,95 g benzylesteru kyseliny (3S,2'S)-{l-[2'-karboxy-3'-(2-methoxyethoxy)-propyl]cyklopentan-l-karbonylamino}-4-oxo-3,4-dihydro-l,5-benzoxazepin-5(2H)-octové (výroba viz příklad 10) se rozpustí v 50 ml ethanolu. K roztoku se přidá 0,2 g palladiového katalyzátoru (Pd/uhlí 5%). Potom se hydrogenuje 2 hodiny při tlaku vodíku 5 bar. Katalyzátor se odfiltruje, zfíltrovaný roztok se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se suší. Získá se 0,7 g titulní sloučeniny jako pěnovitého produktu o optické otáčivosti [a]²⁰ _D = -142,6° (c = 0,5 v methanolu).

Příklad 12 terc.Butylester kyseliny (3R)-3-{ l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-4'-(4-fluorfenoxy)-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-4-oxo-3,4-dihydro-l,5-benzoxazepin-5(2H)-octové

A) 20,5 g terc.butylesteru kyseliny dimethylfosfonooctové se nechá reagovat se 25 g 4fluorfenoxyethylbromidu metodou popsanou v příkladu 5A). Reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 5A). Získá se 20,4 g terc.butylesteru kyseliny 4-{4-fluorfenoxy)-2(dimethylfosfono)-n-máselné.

B) 20,4 g tohoto získaného produktu se nechá reagovat se 4,8 g paraformaldehydu metodou popsanou v příkladu 5B). Reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 5B). Jako surový produkt se získá 15,3 g olejovitého terc.butylesteru kyseliny a-[2-(4-fluorfenoxy)-ethyl)akrylové. Tento se bez dalšího chromatografíckého čištění použije v následujícím stupni.

-26CZ 289245 B6

C) 15,3 g takto získaného produktu se nechá reagovat s 5,1 ml kyseliny cyklopentankarboxylové metodou popsanou v příkladu 5C). Reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 5C). Získá se 6,0 g kyseliny l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-4'-(4-fluorfenoxy)butyl]-cyklopentan-lkarboxylové o teplotě tání 58 až 63 °C a dalších 7,6 g olejovitého, ještě lehce znečištěného produktu.

D) K roztoku 100 ml l-fluor-2-nitrobenzenu v 1800 ml ethanolu se přidá roztok 122,4 g Nacetyl-L-cysteinu a 181,9 g hydrogenuhličitanu sodného v 550 ml vody. Reakční směs se 3 hodiny vaří pod zpětným chladičem, potom se ochladí na teplotu místnosti a sraženina se odfiltruje. Filtrát se odpaří na přibližně 700 ml a zbytek se vyjme do 1,8 1 vody. Vodná fáze se extrahuje diethyletherem a potom se přídavkem koncentrovaného, vodného roztoku kyseliny chlorovodíkové upraví pH na hodnotu 1. Vyloučí se žlutá pevná látka, která se odsaje. Získá se 253,6 g surového R-(2-nitrofenyl)-N-acetyl-L-cysteinu, který se bez dalšího čištění dále použije.

E) 253,6 g tohoto získaného produktu se smísí s 825 ml 18-molámí kyseliny sírové a 3,3 1 vody. Reakční směs se zahřívá 40 minut pod refluxem a potom se ochladí na 0 °C. Přidá se 1925 ml koncentrovaného vodného roztoku amoniaku. Vyloučená pevná látka se odsaje a rekrystaluje z vody. Získá se 143 g R-(2-nitrofenyl)-L-cysteinu.

F) 100 g takto získaného produktu a 62,2 g uhličitanu draselného se rozpustí v 7 1 vody. Potom se po částech přidá během 3 hodin 120 g karbethoxyftalimidu a reakční směs se míchá dalších 5 hodin a několik hodin se nechá stát. Potom se vyloučená pevná látka odsaje a filtrát se upraví na hodnotu pH 2 až 3 koncentrovaným roztokem kyseliny chlorovodíkové. Vyloučená sraženina se odsaje a potom se rozmíchá s asi 1 1 ethanolu za mírného zahřívání (asi 40 °C). Po ochlazení se pevná látka odsaje a suší na vzduchu. Získá se 100 g kyseliny (2R)-3-(2-nitrofenylthio)-2ftalimidopropionové, která se bez dalšího čištění dále zpracovává.

G) 100 g takto získaného produktu se rozmíchá v 1,5 1 methanolu. Přidá se 0,8 g palladia/uhlí (5%) jako katalyzátoru a reakční směs se 5 hodin hydrogenuje. Potom se katalyzátor oddělí a rozpouštědlo se odpaří za sníženého tlaku. Získá se 71,6 g surové kyseliny (2R)-3-(2aminofenylthio)-2-ftalimidopropionové jako hnědožlutého oleje, který se dále zpracovává bez dalšího čištění.

H) 71,6 g takto získaného produktu se rozpustí v dimethylformamidu. K roztoku se přidá 38,0 g hydrochloridu l-[3-(dimethylamino)-propyl]-3-ethylkarbodiimidu a reakční směs se 3 hodiny míchá při teplotě místnosti. Potom se reakční směs zředí 1,5 1 ethylacetátu a několikrát se extrahuje vždy 1,5 1 1-normálního vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická fáze se pak dvakrát promyje vždy 200 ml vody, suší se nad síranem hořečnatým a odpaří dosucha za sníženého tlaku. Zbytek se přečistí pomocí rychlé sloupcové chromatografie za použití ethylacetátu/cyklohexanu (1:1) jako elučního činidla. Získá se 46,3 g (3R)-2,3-dihydro-3ftalimido-1,5-benzothiazepin—4(5H)-onu.

I) K roztoku 46,3 g tohoto získaného produktu ve 300 ml tetrahydrofuranu se přidá 10,6 g práškovaného hydroxidu draselného a 4,8 g tetrabutylamoniumbromidu. Reakční směs se ochladí na 0 °C a pak se pomalu přikape 23,2 ml terc.butylesteru kyseliny bromoctové. Reakční směs se míchá další 2 hodiny při teplotě místnosti. Potom se odfiltruje a filtrát se odpaří dosucha za sníženého tlaku. Zbytek se vyjme do diethyletheru a etherová fáze se promyje vodou a 1 molámím roztokem hydroxidu draselného, suší se nad síranem hořečnatým a pak odpaří za sníženého tlaku. Zbylý olejovitý surový produkt se smísí s ethylacetátem a diethyletherem. Vytvořená sraženina se odsaje. Získá se 34 g (3R)-5-(terc.butoxykarbonylmethyl)-2,3-dihydro3-ftalimido-l,5-benzothiazepin-4(5H)-onu jako pevné látky. Po odpaření matečného louhu za sníženého tlaku se získá ještě jednou 25 g lehce znečištěného olejovitého produktu.

Optická otáčivost [a]²⁰ _D = -146° (c = 0,8 v dichlormethanu)

-27CZ 289245 B6

J) 2 g tohoto získaného produktu se smísí se 7,5 ml ethanolaminu a směs se 10 minut míchá při 0 °C. Potom se odstraní zdroj tepla a míchá se ještě dalších 30 minut. Pak se reakční směs smíchá se 70 ml 5% vodného roztoku chloridu sodného a získaná směs se extrahuje toluenem. Organická fáze se oddělí, suší se nad síranem sodným a za sníženého tlaku se odpaří dosucha. Získá se 1,46 g surového, ještě toluen obsahující terc.butylesteru kyseliny (3R)-3-amino-4-oxo-3,4dihydro-l,5-benzothiazepin-5(2H)-octové jako pevné látky, obsahující toluen.

K) Ke 100 ml suchého dichlormethanu se přidá 1,45 g tohoto získaného produktu, 1,75 g derivátu kyseliny cyklopentankarboxylové získaného pod C), 0,70 g hydroxybenzotriazolu a 1,50 ml nmethylmorfolinu. Potom se reakční směs ochladí na 0°C a přidá se 1,76 g hydrochloridu 1ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-karbodiimidu a reakční směs se míchá při teplotě místnosti dalších 5 hodin. Reakční směs se smísí s 1-molámím roztokem hydrogensíranu draselného, organická fáze se oddělí a promyje nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu draselného a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpaří za sníženého tlaku dosucha. Získaný surový produkt se přečistí rychlou sloupcovou chromatografií za použití nhexanu/ethylacetátu (4:1) jako elučního činidla. Získá se 1,9 g titulní sloučeniny jako oleje.

IR spektrum (jako film): 3366 cm^-1, 3059 cm^-1, 2969 cm^-1, 2874 cm*¹, 1727 cm^-1, 1657 cm*¹, 1505 cm^-1.

Příklad 13

Kyselina (3R)—3—{1—[2 '-karboxy-4'-(4-fluorfenoxy)-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}4-oxo-3,4-dihydro-l,5-benzoxazepin-5(2H)-octová

1,9 g terc.butylesteru kyseliny (3R)-3-{l-[2'-(terc,butoxykarbonyl)-4'-(4-fluorfenoxy)-butyl]cyklopentan-l-karbonylamino}-4-oxo-3,4-dihydro-l,5-benzoxazepin-5(2H)-octové (výroba viz příklad 12) se hydrolyzuje metodou popsanou v příkladu 6 kyselinou trifluoroctovou. Reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 6. Získá se 0,56 g titulní sloučeniny jako amorfní pevné látky o teplotě tání 90 až 94 °C.

Příklad 14 terc.Butyl ester kyseliny (3R)-3-{l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-5'-(3,4-dimethoxyfenyl)pentyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-4-oxo-3,4-dihydro-l,5-benzoxazepin-5(2H)-octové

A) 6,7 g trifenylfosfinu se rozpustí ve 200 ml acetonitrilu. Po ochlazení roztoku na 0 °C se přikape 1,3 ml bromu. Potom se odstraní chladicí lázeň a přikape se roztok 5 g 3-(3,4dimethoxyfenyl)-l-propanolu v 80 ml acetonitrilu. Reakční směs se pak zahřívá pod refluxem a pomocí odlučovače vody se několikrát během 6 hodin odebere vždy 10 ml destilátu a odebrané množství se doplní čerstvým acetonitrilem. Roztok se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se vyjme do diethyletheru a zfiltruje. Filtrát se odpaří za sníženého tlaku a přečistí rychlou chromatografií za použití cyklohexanu/methyl-terc.butyletheru (7:2). Získá se 5,5 g 3-(3,4dimethoxyfenyl-l-brom-propanu jako bezbarvého oleje.

B) 5,5 g získaného produktu se nechá reagovat se 3,8 ml terc.butylesteru kyseliny dimethylfosfonooctové metodou popsanou v příkladu 5A). Reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 5A). Získá se 6,1 g terc.butylesteru kyseliny 4-(3,4-dimethoxyfenyl)-2-(dimethylfosfono)-valerové jako bezbarvého oleje.

C) 6 g takto získaného produktu se nechá reagovat s paraformaldehydem metodou popsanou v příkladu 5B). Reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 5B). Získaný surový produkt se přečistí rychlou sloupcovou chromatografií za použití methyl-terc.butyletheru/cyklohexanu

-28CZ 289245 B6 (1:3) jako elučního činidla. Získá se 3,4 g olejovitého terc.butylesteru kyseliny 1—[3-(3,4dimethoxyfenyl)-propyl]-akiylové.

D) 3,4 g tohoto získaného produktu se nechá reagovat s 1,3 ml kyseliny cyklopropan karboxylové metodou popsanou v příkladu 5C). Reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 5C). Surový produkt se přečistí rychlou sloupcovou chromatografií za použití ethylacetátu/cyklohexanu (1:3) jako elučního činidla. Získá se 2,5 g olejovité kyseliny l-[2(terc.butoxykarbonyl)-5-(3,4-dimethoxyfenyl)-pentyl]-cyklopentankarboxylové.

E) 2,5 g takto získaného produktu se rozpustí v 50 ml acetonitrilu. Při teplotě 0°C se za nepřístupu vlhkosti postupně k roztoku přidá 4,2 ml diizopropylethylaminu, 1,7 g 2-chlor-lmethylpyridiniumjodidu a 2,5 g terc.butylesteru (3R)-3-amino-4-oxo-3,4-dihydro-l,5benzodiazepin-5(2H)-octové kyseliny (výroba viz příklad 12J). Reakční směs se ještě 30 minut míchá při 0 °C a 2 hodiny při teplotě místnosti. Reakční směs se odpaří za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v dichlormethanu. Roztok se vytřepe nejprve se zředěným roztokem kyseliny chlorovodíkové a pak s vodou. Organická fáze se oddělí a vodná fáze se ještě dvakrát extrahuje dichlormethanem. Potom se spojené organické fáze suší nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Získá se titulní sloučenina (3 g) jako olej.

Chromatografie na tenké vrstvě silikagelu: Rf-hodnota = 0,4 (eluens cyklohexan/ethylacetát 1:1)

Příklad 15

Kyselina (3R)-3-{l-[2'-karboxy-5'-(3,4-dimethoxyfenyl)-pentyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-4-oxo-3,4-dihydro-l ,5-benzoxazepin-5(2H)-octová

3g terc.butylesteru kyseliny (3R)-3-{l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-5'-(3,4-dimethoxyfenyl)pentyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-4-oxo-3,4~dihydro-l,5-benzoxazepin-5(2H)-octové (výroba viz příklad 14) se rozpustí ve 20 ml dichlormethanu. K roztoku se přidají 3 ml kyseliny trifluoroctové a reakční směs se míchá 2 dny při teplotě místnosti. Reakční směs se odpaří za sníženého tlaku. Pro úplné odstranění kyseliny trifluoroctové se zbytek několikrát smísí se 2 ml toluenu a opět odpaří. Takto získaný surový produkt se přečistí rychlou chromatografií na silikagelu, jako eluční činidlo se použije nejprve dichlormethan/ethylacetát 1:1a potom čistý ethylacetát. Po odpaření eluátu za sníženého tlaku se získá 1,26 g titulní sloučeniny jako amorfní pevné látky.

IR spektrum jako KBr tableta: 3365 cm^-1,2942 cm^-1,1726 cm^-1,1652 cm’¹.

Příklad 16

Benzylester kyseliny 3-{ l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-lbenzazepin-l-octové

A) 10,5 g terc.butylesteru kyseliny 3-amino-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-loctové (výroba viz příklad II), 8,25 g hydrátu kyseliny p-toluensulfonové a 20,1 ml benzylalkoholu se vloží do 174 ml toluenu. Reakční směs se 4 hodiny vaří na vodním odlučovači, přičemž původně vyloučená sraženina pomalu přechází do roztoku. Potom se za sníženého tlaku odtáhne toluen a zbytek se míchá s methyl-terc.butyletherem a pak se odfiltruje. Takto získaný pevný zbytek se rozpustí v dichlormethanu a roztok se přídavkem vodného roztoku uhličitanu sodného za chlazení ledem zalkalizuje. Potom se oddělí dichlormethanová fáze, promyje se vodou, suší nad síranem sodným a odpaří. Získaný surový produkt se pro přečištění rekrystaluje z methyl-terc.butyletheru. Získá se 8,2 g benzylesteru kyseliny 3-amino-2,3,4,5-tetrahydro-2oxo-lH-l-benzazepin-l-octové o teplotě tání 105 až 107 °C.

-29CZ 289245 B6

B) 12,8 g takto získaného surového produktu se nechá reagovat se 13,7 g kyseliny l—[2'— (terc.butoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karboxylové (výroba viz příklad 5C)) podle metody popsané v příkladu 3C). Reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 3C). Získá se 19,3 g titulní sloučeniny o teplotě tání 118 až 123 °C.

Příklad 17

Benzylester kyseliny 3-{ l-(2'-karboxy-4'-fenyl)-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-

2.3.4.5- tetrahydro-2-oxo-l-benzazepin-l-octové g benzylesteru kyseliny 3-{l-[2'-(terc.butoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-lkarbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové (výroba viz příklad 16) se nechá reagovat metodou popsanou v příkladu 6 s 56 ml kyseliny trifluoroctové. Reakční směs se zpracuje jak je popsáno v příkladu 6 a získaný surový produkt se kiystaluje z methylterc.butyletheru. Získá se 13,1 g titulní sloučeniny o teplotě tání 86 až 90 °C.

Příklad 18

Benzylester kyseliny 3-{ l-[2'-(terc.butylkarbonyloxymethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové g benzylesteru kyseliny 3-[l-(2'-karboxy-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-

2.3.4.5- tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové (výroba viz příklad 17) se za nepřístupu vlhkosti rozpustí ve 20 ml suchého dichlormethanu. K roztoku se přidá 0,46 ml triethylaminu a 0,1 g dimethylaminopyridinu. Potom se za chlazení ledem přikape roztok 0,5 g methylesteru kyseliny pivalové ve 3 ml suchého dichlormethanu. Reakční směs se pak míchá 2 dny při teplotě místnosti. Reakční směs se nalije do vody, organická fáze se oddělí, promyje se vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a pak vodou, suší se nad síranem sodným a odpaří se za sníženého tlaku. Surový produkt získaný jako zbytek se přečistí rychlou chromatografií na 150 g silikagelu za použití směs n-hexanu/ethylacetátu o složení nejprve 7:3 a pak 1:1. Získá se 1,1 g čistého benzylesteru kyseliny 3-{ l-(2'-(pivaloyloxymethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové jako pevné pěny o teplotě tání 71 až 78 °C.

Příklad 19

Kyselina 3-{l-[2'-(pivaloyloxymethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-l H-l-benzazepin-l-octová

1,0 g benzylesteru kyseliny 3-[l-(2'-(pivaloyloxymethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentan-l-karbonylámino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octové (výroba viz příklad 18) se rozpustí ve 100 ml ethanolu. Roztok se smísí s 0,5 g palladia na uhlí jako katalyzátoru (5%). Potom se hydrogenuje 3 hodiny při tlaku vodíku 3 bar. Katalyzátor se odfiltruje a zfiltrovaný roztok se odpaří. Zbytek se suší při 80 °C za sníženého tlaku. Získá se 0,7 g titulní sloučeniny jako sklovitého produktu.

IR spektrum (jako KBr-tableta): 3410 cm^-1,1750 cm“¹,1660 cm“¹.

Způsoby popsanými v předcházejících příkladech mohou být vyrobeny sloučeniny vzorce I uvedené v následující tabulce 1.

-30CZ 289245 B6

Tabulka 1

Př. č.	R	R2	RJ	R4	Rs
20	Phe—¢1¾-CH2-	H	H	H	ch2
21	CH3-O-(CH2)2-O-CH2-	H	H	H	ch2
22	CH3-O-(CH2)2-C)-CH2-	H	H	H	ch2
23	Phe-CHz-CHz-	H	H	H	ch2
24	Nap-CHr-CHz-	H	H	H	ch2
25	Phe-O-(CH2)3	H	H	H	ch2
26	4-F-phe-O-CH2-CH2-	H	H	H	ch2
27	phe-CH2	H	H	H	ch2
28	phe-CHr-CH2-	H	H	H	0
29	phe—CHy—	H	H	H	ch2
30	4—CH2—phe—CH2—	H	H	H	ch2
31	4-F-phe-O-CH2-CH2-	H	H	H	s
32	4—CH3O—phe—(CH2)3-	H	H	H	s
33	phe—CH2—CH^	H	H	(CH3)3C	ch2
34	phe-CH2-CH2-	H	H	ind	ch2
35	phe-CH2-CH2-	H	H	diox	ch2
36	phe—CH2—C H;j—	H	H	phe	ch2
37	phe-CHr-CHr-	H	H	H	ch2
38	nap-CH2-	H	H	H	ch2
39	nap-CHr-CH^	H	H	H	ch2
40	nap-CHy-CHr-	H	H	c6h5	ch2

-31CZ 289245 B6

Tabulka 1 - pokračování

Př. č.	Stérické uspořádání	poznámky: tt=teplota tání °C IR spektrum v KBr pruhy v cm-1
C-postr.	C-kruh
20	rac	rac	kys.,sch, tt: 79-95
21	rac	rac	kys, olej
22	S-k	S-k	IR 3400,2950,1730,1660 kys, sch, tt 60-65
23	rac	S-k	kys, sch. tt od 113
24	rac	rac	kys, olej
25	rac	rac	IR: 2949,1726,1632,1195 kys, olej,
26	rac	rac	IR: 2951,1726,1634,1241 kys, tt 136-138
27	rac	rac	kys, tt. 216-217
28	R-k	S-K	kys., olej
29	rac	S-k	IR: 3400,2940,1720,1645 kys, tt. 116-117
30	rac	rac	kys, tt. 223-225
31	rac	R-k	kys, tt. 98-102
32	rac	R-k	kys, olej,
33	rac	rac	IR 3366,2943, 1725, 1653 kys, tt. 195-196
34	rac	rac	kys. tt. 146-149
35	rac	rac	kys, olej
36	rac	rac	kys. tt. 108-111
37	R-k	S-k	Na, tt.>270
38	rac	rac	kys, tt. 165-170
39	R-K	S-k	kys, sch
40	R-k	S-k	IR 3402, 2949,1723, 1633

phe=fenyl, nap=a-naftyl, ind=5-indanyl, diox=(2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-yl)-methyl, Cpostr.=centrum chirality na postranním řetězci, C-kruh= centrum chirality v kruhovém zbytku, rac = racemický, R-k=R-konfigurován, S-k=S-konfígurován, sch=pěnovitá pryskyřice, ol=olejovitý, kys=volná kyselina, Na=dvojsodná sůl

Příklad I

Tablety, obsahující kyselinu (3S,2'R)-3-{l-[2'-(ethoxykarbonyl)-4'-fenyl-butyl]-cyklopentanl-karbonylamino}-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octovou

Vyrobí se tablety s následujícím složením na tabletu: kyselina (3S,2'R)-3-{ l-[2'-(ethoxykarbonyl)-4'-fenyl butyl]-cyklopentan-l-karbonylamino}-2,3,4,5 tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octová20 mg kukuřičný škrob60 mg mléčný cukr 135mg želatina (jako 10% roztok)6 mg

-32CZ 289245 B6

Účinná látka, kukuřičný škrob a mléčný cukr se zahustí 10% roztokem želatiny. Pasta se rozmělní a vzniklý granulát se nanese na vhodný plech a suší při 45 °C. Usušený granulát se zavede do rozmělňovacího zařízení a smísí v mixéru s dalšími pomocnými látkami:

talek stearát hořečnatý kukuřičný škrob mg mg mg a pak se lisuje na tablety o hmotnosti 240 mg.

Příklad Π

Injekční roztok, obsahující kyselinu (3S,2'R)-3-[l-(2'-karboxy-4'-fenyl-butyl)-cyklopentanl-karbonylamino]-2,3,4,5-tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octovou

Připraví se injekční roztok s následujícím složením na 5 ml:

(3S,2'R)-3-[l-(2'-karboxy—4'-fenyl-butyl) cyklopentan-l-karbonylamino]-2,3,4,5 tetrahydro-2-oxo-lH-l-benzazepin-l-octová kyselina Na₂HPO₄.7H₂O

NaH₂PO₄.2H₂O

NaCl přečištěná voda mg

43,24 mg

7,72 mg

30,0 mg 4948,0 mg

Pevné látky se rozpustí ve vodě, roztok se sterilizuje a naplní do ampulí vždy po 5 ml.

Claims (8)

1. Deriváty benzazepin-, benzoxazepin- a benzothiazepin-N-octové kyseliny obecného vzorce I kde

R¹ představuje Ci^-alkoxy-Ci^-alkylskupinu, jejíž Ci_4-alkoxyzbytek je substituován Ci^-alkoxyskupinou, fenyl-Ci_₄-alkyl- nebo fenyloxy-Ci^- alkylskupinu, která popřípadě na fenylovém kruhu je substituována C_b^- alkylem, C_M- alkoxy nebo halogenem, nebo naftyl-Ci^- alkylskupinu,

-33CZ 289245 B6

A představuje CH₂, O nebo S,

R² znamená vodík nebo halogen,

R³ znamená vodík nebo halogen,

R⁴ znamená vodík nebo některou ze skupin tvořících biolabilní ester a

R⁵ znamená vodík nebo některou ze skupin tvořících biolabilní ester, a fyziologicky přijatelné soli kyselin obecného vzorce I.

2. Deriváty benzazepin-, benzoxazepin- a benzothiazepin-N-octové kyseliny podle nároku 1, kde R⁴ a/nebo R^s znamená skupinu tvořící biolabilní ester.

3. Deriváty benzazepin-, benzoxazepin- a benzothiazepin-N-octové kyseliny podle některého z předchozích nároků, kde skupina tvořící biolabilní ester představuje Cm -alkylskupinu, popřípadě na fenylovém kruhu Ci_4- alkylem nebo na dva sousedící atomy uhlíku navázaným Ci_ 4- alkylenovým řetězcem substituované fenyl- nebo fenyl-C]_4 alkylskupiny, zejména fenyl, benzyl nebo indoly, v dioxolanovém kruhu popřípadě Cm- alkylem substituovanou dioxolanylmethylskupinu, zejména (2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-yl)methyl, nebo popřípadě na oxymethylskupině C_M- alkylem substituovanou C₂-C₆-alkanoyloxymethylskupinu.

4. Deriváty benzazepin-, benzoxazepin- a benzothiazepin-N-octové kyseliny podle některého z předchozích nároků, kde R⁴ znamená skupinu tvořící biolabilní ester a R⁵ je vodík.

5. Deriváty benzazepin-, benzoxazepin- a benzothiazepin-N-octové kyseliny podle některého z předchozích nároků, kde A je CH₂.

6. Deriváty benzazepin-, benzoxazepin- a benzothiazepin-N-octové kyseliny podle některého z předchozích nároků, kde R¹ znamená naftylethylskupinu a R² je vodík.

7. Léčivo, vyznačující se tím, že obsahuje v jednotkové dávce farmakologicky účinné množství sloučeniny podle nároku 1 a běžnou farmaceutickou pomocnou a/nebo nosičovou látku.

8. Způsob výroby derivátů benzazepin-, benzoxazepin- a benzothiazepin-N-octové kyseliny obecného vzorce I