KR101264934B1

KR101264934B1 - 아미도메틸-치환1-(카르복시알킬)-시클로펜틸카보닐아미노-벤자제핀-ｎ-아세트산 유도체, 그것의 제조를 위한 공정 및 중간체 생성물및 이들 화합물을 포함하는 의약품

Info

Publication number: KR101264934B1
Application number: KR1020067005869A
Authority: KR
Inventors: 다그마 호엘트제; 이반 피셔; 디터 지글러; 미하엘 베스케; 카트린 미카엘리스; 야스민 카리미-네자드; 조세프 매싱어; 악셀 폴; 콘스탄제 회퍼; 흐리싼티 이코노미도우; 레호스와스 투르스키
Original assignee: 애보트 프러덕츠 게엠베하
Priority date: 2003-09-26
Filing date: 2006-03-24
Publication date: 2013-05-20
Also published as: RU2006113946A; NO20061821L; BRPI0414744A; JP4824562B2; TW200524874A; WO2005030795A1; IL174373A; CA2539895A1; SA04250283B1; RU2368601C2; MXPA06003226A; HK1096105A1; KR20060101460A; JP2007535482A; AU2004276002B2; AU2004276002A1; IL174373A0; AR045798A1; EP1670814A1; TWI332947B

Abstract

중성 엔도펩티다아제(NEP) 및/또는 인간 가용성 엔도펩티다아제(hSEP) 저해 활성을 가지는 일반식(I)(여기에서 치환체 R¹, R², R³ 및 R⁴는 발명의 상세한 설명에 나타낸 의미를 가진다)의 신규 화합물 및 이러한 화합물을 포함하는 의약품, 특히 심혈관 질병, 성기능 장애 및/또는 세포사멸과 연관되는 부작용을 치료 또는 예방하기에 적합한 의약품이 개시된다.

Description

아미도메틸-치환 1-(카르복시알킬)-시클로펜틸카보닐아미노-벤자제핀-Ｎ-아세트산 유도체, 그것의 제조를 위한 공정 및 중간체 생성물 및 이들 화합물을 포함하는 의약품{AMIDOMETHYL-SUBSTITUTED 1-(CARBOXYALKYL)-CYCLOPENTYLCARBONYLAMINO-BENZAZEPINE-N-ACETIC ACID DERIVATIVES, PROCESS AND INTERMEDIATE PRODUCTS FOR THEIR PREPARATION AND MEDICAMENTS CONTAINING THESE COMPOUNDS}

본 발명은, 예를 들어 심혈관 상태 또는 질병, 특히 심부전, 특히 충혈성 심장마비; 원인불명 고혈압, 신장 고혈압 및/또는 폐동맥 고혈압과 같은 고혈압의 2차 형태를 포함하는 고혈압의 예방 및/또는 치료용, 및/또는 성기능 장애의 예방 및/또는 치료용, 및/또는 세포사멸(apoptosis)과 관련되는 부작용의 예방 및/또는 치료용으로 유용한 신규 아미도메틸-치환 1-(카르복시알킬)-시클로펜틸카보닐아미노-벤자제핀-N-아세트산 유도체, 및 또한 이러한 화합물을 포함하는 의약품에 관한 것이다. 나아가, 본 발명은 신규 아미도메틸-치환 벤자제핀-N-아세트산 유도체의 제조 공정 및 이러한 공정의 중간체 생성물에 관한 것이다.

성기능장애(SD)는 남성과 여성 모두에 영향을 줄 수 있는 중요한 임상 문제이다. SD의 원인은 심리적인 것뿐만 아니라 신체적인 것일 수도 있다. SD의 신체적 관점은 전형적으로 고혈압 또는 당뇨와 연관되는 질병과 같은 혈관 질병에 의하여, 의약 처방에 의하여, 및/또는 우울증과 같은 정신병에 의하여 유발된다. 심리적 인자는 공포, 활동 불안 및 대인 갈등을 포함한다. SD는 성적 수행을 약화시키고, 자부심을 감소시키며, 개인적 고민을 포함한 대인관계를 방해한다.

세포사멸은 발생 과정, 항상성 유지, 및 생체 방어에 있어서 형태 발생 및 조직 발생에 밀접하게 관련되고, 개체의 생존을 유지하는데 중요한 역할을 하는 세포 자살이다. 유전자에 의하여 조절되는 세포사멸의 과정이 선천적으로 또는 생후에 방해될 경우, 세포사멸이 과도하게 유도되거나, 또는 억제되어 여러가지 기관에서 기능 이상을 야기하고, 결국 병에 걸리게 된다. 세포사멸 저해 활성을 나타내는 드러그는 세포사멸을 촉진하므로써 매개된다고 생각되는 질병의 예방 및 치료를 위한 제제로서 사용될 수 있다.

효소 중성 엔도펩티다아제(=NEP)에 대해 현저한 저해 활성을 가지는 심혈관 활성 벤자제핀-, 벤족사제핀- 및 벤조티아제핀-N-아세트산 유도체는 EP 0 733 642 A1(=US 5,677,297)의 명세서에 이미 공지되어 있다. 추가적으로, 여기에 설명된 화합물들은 또한 엔도테린-전환 효소(=ECE)를 저해하는 특성도 약간 가진다. EP 0 733 642 A1의 구조 범위에 속하는 화합물들의 추가의 유리한 약리학적 특성은 EP 0 830 863 A1(=US 5,783,53), WO 00/48601 A1(=US 6,482,820) 및 WO 01/03699 A1(=US-2003-0040512-A1)의 명세서에 공지되어 있다.

NEP 및 ECE에 대한 조합된 저해 효과를 가진 포스폰산 치환 벤자제피논-N-아아세트산 유도체는 EP 0 916 679 A1(=US 5,952,327)의 명세서에 개시되어 있다.

메탈로프로테아제 효소 NEP 및 IGS5를 저해하는 이로운 조합 작용, 특히 심혈관 활성 특성을 가지는 화합물을 포함하는 약학적 제제는 WO 02/094176 A2의 명세서에 공지되어 있다. 그러한 조합 제제용으로 적합한 화합물은 또한 EP 0 733 642 A1 및 EP 0 916 679 A1의 명세서 범위 내의 화합물이다. 본 명세서의 내용으로 이해되는 바와 같이, 효소 IGS5 및 심혈관 질병과 관련된 그것의 생리학적 역할은 WO 01/36610 A1의 명세서에 본질적으로 공지되어 있다. 상술한 효소 IGS5는 "인간 가용성 엔도펩티다아제"(=hSEP)로도 알려져 있다.

WO 99/55726 A1의 명세서로부터 ECE의 특정 티올 저해제가, 예를 들어 발기부전을 치료 또는 저해하는데 유용하다는 것이 알려져 있다.

EP 1 097 719 A1의 명세서는 여성 성기능장애(=FSD)의 치료용으로 NEP 저해제의 용도를 개시한다.

WO 02/06492 A1의 명세서는 가용성 분비 엔도펩티다아제(=SEP) 활성을 가지는 특이적 폴리펩타이드에 대한 항체 및 저해제를 개시한다.

특허출원 US 20030045449에서, 매트릭스-메탈로프로테아제 저해제는 신경퇴행성 질환의 치료에 유용하다는 것을 설명하고 있다. 이 발명과 관련된 문제는 첫째, 매트릭스-메탈로프로테아제 저해제는 광범위한 프로테아제 저해제들을 포함하고 있다는 점이고, 둘째, 상기 출원에 따르면, 메탈로프로테아제는 N-NOS 저해제를 포함하는 약학적 조성물로 사용되어야만 한다는 것이다.

특허공개 US 2002/0013307은 인식 기능장애의 진행을 치료 또는 완화하고, 치매를 치료 및/또는 예방하기 위한 바소펩티다아제 제해제의 사용을 교시하고 있 다.

M. Sumitomo 등(Clinical Cancer Research 10 (2004) 260~266 참조)은 안드로겐-독립적 전립선암의 NEP에 대한 화학적 감수성을 설명하고 있다.

본 발명의 목적은 심혈관 상태 또는 질병, 특히 심부전, 특히 충혈성의 심장마비; 원인불명 고혈압, 신장 고혈압 및/또는 폐동맥 고혈압과 같은 고혈압의 2차 형태를 포함하는 고혈압의 예방 및 치료용, 및/또는 성기능 장애의 예방 및/또는 치료용, 및/또는 세포사멸과 연관되는 부작용의 예방 및/또는 치료용으로 적합한, 효소 NEP, hSEP 및 ECE를 저해하는 조합된 작용능을 가지는 신규 활성 물질을 제공하는 것이다.

놀랍게도, 본 발명의 신규 아미도메틸-치환 1-(카르복시알킬)-시클로펜틸카보닐아미노-벤자제핀-N-아세트산 유도체에 관한 한 그룹은 효소 NEP 및 hSEP, 및 또는 어느 정도의 범위로 ECE를 저해하는 작용능에 의하여 구별되고, 그러므로 심혈관 상태 또는 질병, 특히 심부전, 특히 충혈성의 심장마비; 원인불명 고혈압, 신장 고혈압 및/또는 폐동맥 고혈압과 같은 고혈압의 2차 형태를 포함하는 고혈압의 예방 및 치료용, 및/또는 성기능 장애의 예방 및/또는 치료용, 및/또는 세포사멸과 연관되는 부작용의 예방 및/또는 치료용으로 적합하다는 사실이 밝혀졌다.

본 발명의 목적은 일반식 Ⅰ의 신규 아미도메틸-치환 1-(카르복시알킬)-시클로펜틸카보닐아미노-벤자제핀-N-아세트산 유도체 및 일반식Ⅰ의 산의 생리학적으로 허용가능한 염 및/또는 일반식Ⅰ의 화합물의 생리학적으로 허용가능한 산 부가염에 관한 것이다:

Ⅰ

여기에서

R¹은 수소 또는 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기,

R²는 수소, C₁ _~4-알킬, 또는 히드록시기가 C₂ _~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 C₁ _~4-히드록시알킬, 및

R³는 C₁ _~4-알킬; C₁ _~4-알콕시-C₁ _~4-알킬; 제2의 히드록시기로 선택적으로 치환되고, 히드록시기가 C₂ _~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 각각 에스테르화된 C₁ _~4-히드록시알킬; (C₀ _~4-알킬)₂아미노-C₁ _~6-알킬; C₃ _~7-시클로알킬; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬; 페닐기가 C₁ _~4-알킬, C₁ _~4-알콕시 및/또는 할로겐으로 1~2회 선택적으로 치환된 페닐-C₁ _~4-알킬; 나프틸-C₁ _~4-알킬; C₃ _~6-옥소알킬; 페닐기가 C₁ _~4-알킬, C₁ _~4-알콕시 및/또는 할로겐으로 1~2회 선택적으로 치환된 페닐카보닐메틸; 또는 2-옥소아제파닐, 또는

R² 및 R³는 메틸렌기가 카보닐, 질소, 산소 및/또는 황으로 1~2회 선택적으로 치환되고, C₂ _~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 히드록시로 1회 선택적으로 치환된 C₄ _~7-알킬렌; C₁ _~4-알킬; 히드록시기가 C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 C₁ _~4-히드록시알킬; 페닐 또는 벤질, 및

R⁴는 수소 또는 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기이다.

또한, 본 발명의 목적은 일반식 Ⅰ의 화합물을 포함하는 의약품에 관한 것이다. 더 나아가, 본 발명의 목적은 일반식 Ⅰ의 화합물의 제조를 위한 공정 및 이러한 공정의 중간체 생성물에 관한 것이다.

일반식 Ⅰ의 화합물 또는 본 명세서에서 설명되는 다른 화합물에 있어서, 치환체는 C₁ _~4-알킬이고, 이들은 각각 직쇄 또는 분지될 수 있다. 일반식 Ⅰ의 화합물 내의 치환체가 할로겐일 경우, 불소, 염소 또는 브롬이 적합하다. 바람직하게는 염소이다. 치환체가 C₂ _~4-알카노일을 포함할 경우, 이것은 직쇄 또는 분지될 수 있다. C₂ _~4-알카노일로서 아세틸이 바람직하다.

일반식 Ⅰ의 화합물에서, 히드록시기는 아미노산 잔기로 에스테르화되고, 이러한 아미노산 잔기는 천연 또는 인공, α- 또는 β-아미노산으로부터 유도될 수 있다. 사용될 수 있는 바람직한 아미노산으로는, 예를 들어 알라닌, 2-아미노헥사노익산(=노르류신), 2-아미노펜타노익산(=노르발린), 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 3,4-디히드록시페닐알라닌(=도파), 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 라이신, 메티오닌, 오르니틴(=2,5-디아미노발레릭산), 5-옥소-2-피롤리딘카본산(=피로글루탐산), 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 티로닌, 트립토판, 티로신 및 발린으로 구성되는 군으로부터 선택될 수 있다. 바람직한 아미노산 잔기는 알라닌, 아스파라긴, 글루타민, 글리신, 이소류신, 류신, 라이신, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린 및 발린으로부터 유도된다.

일반식 Ⅰ의 화합물은 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기로 선택적으로 에스테르화된 디카르복실산 유도체를 나타낸다. 일반적으로, 일반식 Ⅰ의 생체불안정성 에스테르는 자유 산(free acid)의 투여가능한 전구체(="프로드러그")를 나타낸다. 다음으로, 일반식 Ⅰ의 화합물의 모노에스테르 또는 디에스테르가 발생할 수 있다. 투여 형태에 따라, 생체불안정성 에스테르 또는 자유 산이 바람직하고, 특히 자유 산은 정맥 내(=i.v.) 투여용으로 적합하다.

생리학적 조건인 생체 내에서 분해되어, 일반식 Ⅰ의 화합물의 생체불안정성 유도체를 생성하는 기는, 생체불안정성 에스테르 R¹ 및 R⁴를 형성하는 기로서 적합하다. 이것의 바람직한 예는, C₁ _~4-알킬기, 특히 메틸, 에틸, n-프로필 및 이소프로필; C₁ _~4-알킬옥시-C₁ _~4-알킬옥시-C₁ _~4-알킬기, 특히 메톡시에톡시메틸; C₃ _~7-시클로알킬기, 특히 시클로헥실; C₃ _~7-시클로알킬-C₁ _~4-알킬기, 특히 시클로프로필메틸; N,N-디-(C₀ _~4-알킬)아미노-C₁ _~6-알킬기; 페닐고리에서 할로겐, C₁ _~4-알킬 또는 C₁ _~4-알콕시에 의하여 또는 두 개의 인접한 탄소원자에 결합된 C_1~4-알킬렌 사슬에 의하여 1회 또는 2회 선택적으로 치환된 페닐 또는 페닐-C_1~4-알킬기; 디옥소란 고리에서 C₁ _~4-알킬에 의하여 선택적으로 치환된 디옥소라닐메틸기; C₁ _~4-알킬에 의하여 옥시-C₁ _~4-알킬기에서 선택적으로 치환된 C₂ _~6-알카노일옥시-C_1~4-알킬기; 1-[[(C₁ _~4-알킬)카보닐]옥시]C₁ _~4-알킬 에스테르, 예를 들어 (RS)-1-[[(이소프로필)카보닐]옥시]에틸 또는 (RS)-1-[[(에틸)-카보닐]옥시]-2-메틸프로필(제조를 위하여, 예를 들어 F. W. Sum 등, Bioorg. Med. Chem. Lett. 9 (1999) 1921~1926 또는 Y. Yoshimura 등, The Journal of Antibiotics 39/9 (1986) 1329~1342 참조)과 같은 이중 에스테르; 1-[[(C₄ _~7-시클로알킬옥시)카보닐]옥시] C₁ _~4-알킬 에스테르, 바람직하게는, (RS)-1-[[(시클로헥실옥시)카보닐]옥시]에틸(=실레세틸; 제조를 위하여, 예를 들어 K. Kubo 등, J. Med. Chem. 36 (1993) 2343~2349 참조, 이하 "Kubo 등"으로 인용) 또는 디옥소란 고리 내에 이중결합을 선택적으로 함유한 2-옥소-1,3-디옥소란-4-일-C_1~4-알킬 에스테르, 바람직하게는 5-메틸-2-옥소-1,3-디옥소렌-4-일-메틸(=메독소밀, 제조를 위하여, 예를 들어 Kubo 등 참조) 또는 2-옥소-1,3-디옥소란-4-일-메틸(=(메틸)-에틸렌-카보네이트)와 같은 카보네이트 에스테르이다. 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기가 선택적으로 치환된 페닐-C₁ _~4-알킬기를 나타내는 경우, 이것은 1~3개; 바람직하게는 1개의 탄소원자를 가지는 알킬렌 사슬을 포함할 수 있고, 바람직하게는 선택적으로 치환된 벤질, 특히 2-클로로벤질 또는 4-클로로벤질을 나타낸다. 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기가 선택적으로 치환된 페닐기를 나타내는 경우, 그것의 페닐고리는 저급 알킬렌 사슬에 의하여 치환되고, 이것은 3~4개, 바람직하게는 3개의 탄소원자를 함유할 수 있고, 특히 인다닐이다. 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기가 선택적으로 치환된 C₂ _~6-알카노일옥시-C₁ _~4-알킬기를 나타내는 경우, C₂ _~6-알카노일기는 직쇄 또는 분지일 수 있다.

R¹은 바람직하게는, 수소, 에틸, 메톡시에톡시메틸, (RS)-1-[[(이소프로필)카보닐]옥시]에틸, (RS)-1-[[(에틸)카보닐]옥시]-2-메틸프로필, (RS)-1-[[(시클로헥실옥시)카보닐]옥시]에틸, 5-메틸-2-옥소-1,3-디옥소렌-4-일-메틸, 2-옥소-1,3-디옥소란-4-일-메틸 또는 (RS)-1-[[(에톡시)카보닐]옥시]에틸의 의미를 가진다.

R²는 바람직하게는, 수소, 메틸, 에틸, 2-히드록시에틸 또는 3-히드록시프로필의 의미를 가지며, 각각의 히드록시기는 선택적으로 C₂ _~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 에스테르화된다.

R³가 (C₀ _~4-알킬)₂아미노-C₁ _~6-알킬의 의미를 가지는 경우, 1 또는 2개의 C_0~4-알킬기는 독립적으로 각각 존재할 수 있다. 가장 바람직하게는, "(C₀ _~4-알킬)₂아미노-C_1~6-알킬"은 "(C₀)₂-알킬아미노-C₁ _~6-알킬", "(C₀)(C₁ _~4)-알킬아미노-C_1~6-알킬" 및 "(C₁ _~4)₂-알킬아미노-C₁ _~6-알킬"을 의미하는 것을 포함한다. "(C₀)₂-알킬아미노-C_1~6-알킬"은 C₁ _~6-알킬(렌)에 결합된 비치환된 일차(=-NH₂) 아미노기를 명명하는 것을 의미하고, "(C₀)(C₁ _~4)-알킬아미노-C₁ _~6-알킬"은 (C₁ _~4)-알킬에 의하여 단일치환되고, C₁ _~6-알킬(렌)에 결합된 이차 아미노기를 명명하는 것을 의미하며, "(C₁ _~4)₂-알킬아미노-C₁ _~6-알킬"은 (C₁ _~4)-알킬에 의하여 이중치환되고, C_1~6-알킬(렌)에 의하여 결합된 3차 아미노기를 명명하는 것을 의미한다. R³ 는 바람직하게 이소프로필, 메톡시에틸, 각각의 히드록시기가 선택적으로 C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 에스테르화된 2-히드록시에틸 또는 3-히드록시프로필, 3-아세틸옥시-n-프로필, 시클로프로필메틸, 2-메톡시벤질, 4-메톡시벤질, 4-메톡시페닐에틸, 2,4-디메톡시벤질, 1-나프틸메틸, 3-옥소-1,1-디메틸부틸, 페닐-2-옥소에틸, 2-(4-메톡시페닐)-2-옥소에틸, 3-(2-옥소아제파닐), (C_0~4-알킬)₂아미노-C_1~6-알킬, 특히 디메틸아미노-n-프로필, (메틸)-아미노에틸, 아미노-n-프로필, 아미노-n-부틸 또는 아미노-n-펜틸의 의미를 가진다.

R² 및 R³가 함께 C₄ _~7-알킬렌인 경우, 그것의 메틸렌기는 선택적으로 각각 모르폴린, 피페리딘, 4-케토피페리딘, 4-히드록시피페리딘으로 선택적으로 대체되거나 선택적으로 치환되고, 히드록시기에서 C₂ _~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 에스테르화되며, 피페라진 또는 피롤리딘이 바람직하다.

R⁴는 바람직하게는 수소, C₁ _~4-알킬, p-메톡시벤질, N,N-디-(C₀ _~4-알킬)아미노-C_1~6-알킬, (RS)-1-[[(이소프로필)카보닐]옥시]에틸, (RS)-1-[[(에틸)카보닐]옥시]-2-메틸프로필, (RS)-1-[[(시클로헥실옥시)카보닐]옥시]에틸, 5-메틸-2-옥소-1,3-디옥소렌-4-일-메틸, 2-옥소-1,3-디옥소란-4-일-메틸 또는 (RS)-1-[[(에톡시)카보닐]옥시]에틸의 의미를 가진다.

일반식Ⅰ의 특히 바람직한 화합물은,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[이소프로필(메틸)아미노]-4-옥소부탄산(32),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(디메틸아미노)-4-옥소부탄산(54),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(디에틸아미노)-4-옥소부탄산(55),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(2-히드록시에틸)(메틸)아미노]-4-옥소부탄산(43),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(3-히드록시프로필)(메틸)아미노]-4-옥소부탄산(56),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(4-히드록시피페리딘-1-일)-4-옥소부탄산(57),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소-4-[4-(L-발릴옥시)피페리딘-1-일]부탄산(68),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-몰포린-4-일-4-옥소부탄산(66),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소-4-(4-옥소피페리딘-1-일)부탄산(45),

4-[비스(2-히드록시에틸)아미노]-2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산(58),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-{에틸[3-(에틸아미노)프로필]아미노}-4-옥소부탄산(52),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)-시클로펜틸]메틸}-4-[[2-(디메틸아미노)에틸](메틸)아미노]-4-옥소부탄산(59),

4-[(3-아미노프로필)(에틸)아미노]-2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산(67),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-{메틸[2-(메틸아미노)에틸]아미노}-4-옥소부탄산(68),

4-[(4-아미노부틸)(메틸)아미노]-2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산(75),

4-[(4-아미노부틸)(에틸)아미노]-2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산(76),

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-{메틸[3-(메틸아미노)프로필]아미노}-4-옥소부탄산(77) 및

4-[(5-아미노펜틸)(메틸)아미노]-2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산(78),

그들의 생체불안정성 에스테르 및 이러한 일반식 Ⅰ의 화합물의 산의 생리학적으로 허용가능한 염 및/또는 이러한 일반식 Ⅰ의 화합물의 생리학적으로 허용가능한 산 부가염으로 구성되는 군으로부터 선택된다.

본 발명에 따르면, 일반식 Ⅰ의 신규 화합물 및 그들의 염은 일반식 Ⅱ의 화합물을 일반식 Ⅲ의 화합물과 반응시키므로써 얻어진다:

Ⅱ

여기에서

R¹⁰¹ 및 R⁴⁰¹는 각각 독립적으로, 각각 산보호기이다;

Ⅲ

여기에서

R² 및 R³는 상기한 바와 같고, R² 및/또는 R³가 자유 히드록시기를 함유하는 경우, 원한다면, 이들은 일반식 Ⅳ의 화합물 또는 적절한 보호기에 의하여 보호되는 아미노산 유도체와 반응된다;

C₁ _~3-C(O)-X

Ⅳ

여기에서

X는 이탈기를 나타낸다;

R¹⁰¹ 및/또는 R⁴⁰¹이 생체불안정성 에스테르를 형성하는 원하는 기를 나타내지 않는 경우, 및/또는 R² 및/또는 R³가 어떠한 아미노산 잔기 내에 보호기를 포함하는 경우, 이들은 어떠한 원하는 순서로 동시에 또는 개별적으로 결과 화합물에서 연속적으로 제거되고, 만약 원한다면, 각각의 경우에 유리되는 산 작용기들은 생체불안정성 에스테르기로 전환되고,

만약 원한다면, 결과의 일반식Ⅰ의 산은 생리학적으로 허용가능한 염으로 전환되거나, 일반식Ⅰ의 산의 염은 자유 산으로 전환되고/또는 일반식Ⅰ의 염기는 그들의 산 부가염으로 전환되거나, 산 부가염은 일반식Ⅰ의 자유 염기로 전환된다.

일반식Ⅰ의 산의 적절한 생리학적으로 허용가능한 염은, 각각의 경우에 그들의 알칼리 금속염, 알칼리 토금속염 또는 암모늄염, 예를 들어 그들의 나트륨염, 칼륨염 또는 칼슘염, 생리학적으로 허용가능하고, 약리학적으로 중성인 그들의 유기염, 예를 들어 암모니아, 디에틸아민, 3차 부틸아민, N-메틸글루카민, 콜린과 같은 아민, 또는 예를 들어 아르기닌과 같은 아미노산과의 유기염이다. 일반식Ⅰ의 화합물에서, 치환체 R² 및/또는 R³가 염기성기, 특히 질소를 포함하는 경우, 일반식Ⅰ의 화합물은 또한 산 부가염의 형태로 생성될 수 있다. 일반식Ⅰ의 화합물의 생리학적으로 허용가능한 산 부가염은, 통상적인 그들의 무기산염, 예를 들어 황산, 인산 또는 할로겐화수소산, 바람직하게는 할로겐화수소산의 염, 또는 유기산염, 예를 들어 말레산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산과 같은 저급 지방족 모노카르복실산, 디카르복실산 또는 트리카르복실산의 염, 또는 술폰산염, 예를 들어 메탄술폰산과 같은 알칸술폰산의 염이다.

카르복실산 작용기들을 보호하기 위한 통상적인 보호기는, 공지의 방법에 의하여 다시 제거될 수 있는 산보호기 R¹⁰¹ 및 R⁴⁰¹로서 선택될 수 있다. 카르복실산에 대한 적절한 보호기는, 예를 들어 McOmie, "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press (이하, "McOmie"로 인용) 및 Greene, Wuts, "Protective Groups in Organic Synthesis", Wiley Interscience Publication (이하, "Greene"으로 인용)의 각각 가장 최근의 판에 공지되어 있다. 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기는 또한 산-보호기로서 사용될 수 있다. 이러한 경우에 있어서, 일반식 Ⅱ의 화합물과 일반식 Ⅲ의 화합물을 반응시켜 얻어진 화합물은 본 발명에 따른 일반식 Ⅰ의 에스테르로서 이미 나타내었다. 적절한 산-보호기 R¹⁰¹ 및 R⁴⁰¹는, 특히 각각 독립적으로 선택적으로 제거되거나 선택적으로 도입될 수 있는 기이다. 다른 조건하에서 제거될 수 있고, 또한 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기를 나타내는 산-보호기의 예는, 염기성 조건하에서 비교적 쉽게 제거될 수 있는 에틸과 같은 비-분지된 저급 알킬기, 트리플루오로아세트산과 같은 산에 의하여 쉽게 제거될 수 있는 3차 부틸과 같은 분지된 저급 알킬기, 수소화분해 또는 염기성 조건하에서 쉽게 제거될 수 있는 벤질과 같은 페닐 고리 내에서 선택적으로 치환된 페닐메틸기, 산화 조건하에서, 예를 들어 2,3-디클로로-5,6-디시아노-1,4-벤조퀴논(=DDQ) 또는 세릭암모늄니트레이트의 작용하에서 비교적 쉽게 제거되는 p-메톡시벤질과 같은 저급 알콕시에 의한 페닐 고리 내에서 1회 이상 치환된 페닐메틸기, 또는 불소 이온에 의하여 쉽게 제거될 수 있는 공지의 실리콘-함유 보호기이다. 당업자라면 원하는 치환 형태를 얻기 위하여 적절한 보호기를 선택하는 것이 용이할 것이다.

일반식 Ⅰ의 화합물은, 벤자제핀 골격(=C_b ^*)의 위치 3에서 아미드 곁사슬을 가지는 탄소 원자 및 라디칼 "-COOR¹"(=C_a ^*)를 가지는 탄소 원자인 두 개의 키랄 탄소 원자를 포함한다. 그러므로, 상기 화합물은 총 4종의 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 입체이성질체 및 거울상이성질체의 혼합물과 일반식 Ⅰ의 이성질적으로 순수한 화합물을 모두 포함한다. 일반식 Ⅰ의 이성질적으로 순수한 화합물이 바람직하다. 벤자제핀 골격의 위치 3에 아미드 곁사슬을 가지는 탄소 원자가 "S" 배열인 일반식 Ⅰ의 화합물이 특히 바람직하다. 라디칼 "-COOR¹"을 가지는 키랄 탄소 원자 "^*C_a"에 관하여, 본 발명에 따른 일반식 Ⅰ의 화합물의 바람직한 배열은, 본 명세서에서 배열 명칭 "rel1"(실시예 참조)으로 잠정적으로 지정된다. 키랄 중심 "^*C_a"에서 바람직한 배열 "rel1"이 "S" 배열과 같을 것이라는 것은 알려진 배열을 갖는 적절한 화합물에 대한 유사한 관찰에 의하여 유추될 수 있다.

일반식 Ⅱ의 산과 일반식 Ⅲ의 아민의 반응은 아미노아실화에 의한 아미드기의 형성을 위한 종래의 방법에 따라 수행될 수 있다. 일반식 Ⅱ의 카르복실산 또는 그들의 반응성 유도체는 아실화제로서 사용될 수 있다. 특히 혼합된 산무수물과 산할라이드는 적절한 반응성 유도체이다. 그러므로, 예를 들어 일반식 Ⅱ의 산의 산클로라이드 또는 산브로마이드, 또는 유기 술폰산, 예를 들어 메탄술폰산 또는 트리플루오로메탄술폰산과 같은 할로겐에 의하여 선택적으로 치환된 저급-알칸술폰산, 또는 벤젠술폰산과 같은 방향족 술폰산, 또는 저급 알킬 또는 할로겐에 의하여 치환된 벤젠술폰산, 예를 들어 톨루엔술폰산 또는 브로모벤젠술폰산과 일반식 Ⅱ의 산과의 혼합된 에스테르가 사용될 수 있다. 아실화는 -20℃ 내지 실온(=RT)의 반응 조건하에서 불활성인 유기용매 내에서 일어날 수 있다. 적절한 용매는 디클로로메탄과 같은 할로겐화된 탄화수소 또는 벤젠 또는 톨루엔과 같은 방향족 탄화수소 또는 테트라히드로푸란(=THF) 또는 디옥산과 같은 고리 에스테르 또는 이러한 용매의 혼합물이다.

아실화는, 특히 만약 술폰산과 일반식 Ⅱ의 산과의 혼합된 무수물이 아실화제로 사용된다면, 산-결합제의 존재에서 수행될 수 있다. 적절한 산-결합제는, 예를 들어 3차 질소 염기, 예를 들어 트리에틸아민, 트리프로필아민, N-메틸모르폴린, 피리딘, 4-디메틸아미노피리딘, 4-디에틸아미노피리딘 또는 4-피롤리디노피리딘과 같은 3차 저급 알킬아민 및 피리딘과 같은 반응 혼합액에 가용성인 유기 염기이다. 과량으로 사용된 유기 염기는 또한 동시에 용매로서 사용될 수 있다.

만약 일반식 Ⅱ의 산 자체가 아실화제로 사용된다면, 일반식 Ⅲ의 아미노 화합물과 일반식 Ⅱ의 카르복실산의 반응은, 예를 들어 펩티드 화학분야에서 아미드 형성에 적합한 것으로 알려진 커플링제의 존재하에서 신속하게 수행될 수 있다. 반응성 산 유도체를 형성하는 동안 산과 반응하여 자유 산과 아미드 형성을 촉진하는 커플링제의 예는, 특히 에틸 클로로포르메이트, 알킬카르보디이미드, 예를 들어 디시클로헥실카르보이미드 또는 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드(=EDC)와 같은 시클로알킬카르보디이미드, 카보닐디이미다졸 및 N-저급 알킬-2-할로피리디늄염, 특히 할라이드 또는 톨루엔술포네이트이다. 커플링제의 존재하에서의 반응은 할로겐화된 탄화수소 및/또는 방향족 용매와 같은 용매 내에서, 선택적으로 상기 설명된 산-결합 아민의 존재하에서 -30~50℃의 온도에서 신속하게 수행될 수 있다.

일반식 Ⅱ의 화합물과 일반식 Ⅲ의 화합물의 반응에 의하여 얻어진 화합물에 있어서, R² 및/또는 R³는 자유 히드록시기를 포함하고, 이들은, 만약 원하면, 공지의 방법으로 일반식 Ⅳ의 화합물과 반응될 수 있다. 일반식 Ⅳ의 화합물에 있어서, 이탈기 X는, 예를 들어 할로겐을 나타내고, 바람직하게는 염소이다.

일반식 Ⅱ의 화합물과 일반식 Ⅲ의 화합물의 반응에 의하여 얻어진 화합물에 있어서, R² 및/또는 R³는 자유 히드록시기를 포함하고, 이들은, 만약 원하면, 공지의 방법으로 적절한 보호기에 의하여 보호된 아미노산 유도체와 반응될 수 있다. 보호기를 도입하거나, 보호기를 선택적으로 제거하는 방법과 함께 아미노산에 대한 적절한 보호기는, 예를 들어 McOmie 또는 Greene으로부터 공지이다. 적절하게 보호된 아미노산 유도체는 상업적으로 구입가능하거나, 공지의 방법으로 제조될 수 있다.

만약 보호기 R¹⁰¹ 및 R⁴⁰¹이 생체불안정성 에스테르를 형성하는 어떠한 원하는 기를 나타내지 않는다면, 보호기 R¹⁰¹ 및 R⁴⁰¹, 및/또는 R² 및 R³내에 존재하는 어떠한 아미노산 부분에 존재할 수 있는 보호기는 공지의 방법에 의하여 제거될 수 있고, 만약 원한다면 일반식 Ⅱ의 화합물과 일반식 Ⅲ의 화합물의 반응에 의하여 얻어지는 화합물로부터 선택적으로 제거될 수 있다.

일반식 Ⅰ의 화합물은 반응 혼합물로부터 분리될 수 있고, 만약 필요하다면, 공지의 방법, 예를 들어 고성능액체크로마토그래피(=HPLC)에 의하여 정제될 수 있다.

일반식 Ⅱ의 출발 화합물은 신규 활성 물질의 제조, 예를 들어 일반식 Ⅰ의 화합물의 제조를 위한 중간 생성물로서 적합하다. 일반식 Ⅱ의 화합물은 일반식 Ⅴ의 화합물,

Ⅴ

(여기에서

R⁵는 산-보호기이고, R¹⁰¹은 상기와 같은 의미를 가진다.)

과 일반식 Ⅵ의 화합물,

Ⅵ

(여기에서

R⁴⁰¹은 상기의 의미를 가진다.)

을 반응시켜 제조될 수 있으며, 순차적으로 산보호기 R⁵는 다시 공지의 방법으로 제거된다. 상기 반응은, 예를 들어 일반식 Ⅱ의 화합물과 일반식 Ⅲ의 화합물의 반응을 위하여 상기 제시된 방법에 상응하는 아미노아실화로 알려진 방법으로 수행될 수 있다. 원하지 않는 2차 반응을 피하기 위하여, 알칼리성 매질에서는 작동하지 않는 방법에 의하여 산-보호기 R⁵를 제거하는 것이 유리할 수 있고, 따라서 상응하는 적절한 산-보호기 R⁵를 선택하는 것이 유리할 수 있다.

일반식 Ⅲ의 아민은 본질적으로 공지이거나, 공지된 화합물로부터 공지된 방법으로 제조될 수 있다.

일반식 Ⅳ의 반응성 산 유도체는 본질적으로 공지이거나, 공지된 화합물로부터 공지된 방법으로 제조될 수 있다. 이들은 직쇄 또는 분지된 C_1~4-카르복실산 유도체이다.

일반식 Ⅴ의 화합물은 일반식 Ⅶ

Ⅶ

(여기에서

R¹⁰¹ 및 R⁵는 상기의 의미를 가진다.)

의 아크릴 에스테르 유도체와 시클로펜탄카르복실산의 반응에 의하여 제조될 수 있다. 상기 반응은, 반응 조건하에서 불활성인 유기 용매 내에서 미카엘(Michael) 응축법의 조건하에서 공지된 방법으로, 시클로펜탄카르복실산과 시클로펜탄카르복실산의 2가 음이온을 형성할 수 있는 강 염기를 반응시키고, 이어서 일반식 Ⅶ의 아크릴 에스테르 유도체와 반응시키므로써 수행될 수 있다. 바람직한 용매는 에테르이고, 더욱 바람직하게는, THF와 같은 고리에테르이다. 적절한 강 염기는 리튬 디이소프로필아미드 또는 n-부틸리튬과 같은 비-친핵성 유기 알칼리 금속 아미드 또는 알칼리 금속 저급 알킬이다. 바람직하게는, 시클로펜탄카르복실산은 THF 내에서 2당량의 n-부틸리튬과 반응하고, 반응물은 다음으로 일반식 Ⅶ의 화합물과 더 반응한다. 반응 온도는 -80~0℃일 수 있다.

일반식 Ⅵ의 화합물은, 예를 들어 EP 0 733 642 A1의 명세서로부터 공지이고, 거기에 설명된 방법 또는 그와 유사한 방법에 따라 그들의 라세미체의 형태 또는 이성질적으로 순수한 형태로 제조될 수 있다.

일반식 Ⅶ의 화합물은 일반식 Ⅷ의 화합물

Ⅷ

(여기에서

R⁵는 산-보호기를 나타낸다.)

을 원하는 알코올을 사용하여 공지의 방법으로 에스테르화하여 제조될 수 있다.

일반식 Ⅷ의 화합물은, 예를 들어 이타콘산 무수물 기를 개환하는 공지된 조건하에서 이타콘산 무수물을 상응하는 치환된 알코올과 같은 산-보호기 R⁵를 형성할 수 있는 시약과 반응시켜 얻어질 수 있다.

상기 설명된 반응에 있어서, 일반식 Ⅴ 및 일반식 Ⅵ의 출발 화합물 내의 키랄 중심은 변화되지 않으므로, 출발 화합물의 형태에 따라 최종적으로 일반식 Ⅰ의 이성질적으로 순수한 화합물 또는 이성질체 혼합물이 얻어질 수 있다. 입체이성질적으로 균일한 일반식 Ⅰ의 화합물을 제조하기 위하여, 바람직하게는 입체이성질적으로 균일한 일반식 Ⅴ의 화합물을 입체이성질적으로 균일한 일반식 Ⅵ의 화합물과 반응시킨다. 만약 거울상이성질적으로 순수한 일반식 Ⅴ의 화합물이 일반식 Ⅵ의 라세미 화합물과 반응하거나, 일반식 Ⅴ의 라세미 화합물이 거울상이성질적으로 순수한 일반식 Ⅵ의 화합물과 반응한다면, 각 경우에 있어서 2종의 부분입체이성질체의 혼합물이 얻어지고, 만약 원한다면 공지의 방법으로 일반식 Ⅱ의 화합물의 단계에서 또는 일반식 Ⅰ의 화합물의 단계에서 분리될 수 있다. 일반식 Ⅴ의 라세미 화합물과 일반식 Ⅵ의 라세미 화합물의 반응은 상응하는 4종의 이성질체를 얻으며, 만약 원한다면 공지된 방법, 예를 들어 가능한 키랄 분리 물질상에서 HPLC 분리에 의하여 분리될 수 있다.

일반식 Ⅴ의 화합물은 라디칼 "-COOR¹⁰¹"을 가지는 탄소 원자에서 키랄 중심을 가지고, 일반식 Ⅶ의 아크릴 에스테르 유도체로부터 합성하여 그들의 라세미체의 형태로 얻어진다. 광학적 활성 화합물은 원칙적으로 공지된 방식, 예를 들어 키랄 분리 물질상의 크로마토그래피 분리에 의하거나, 적절한 광학적 활성 염기, 예를 들어 α-메틸벤질아민, 신코니딘(cinchonidine) 또는 슈도에페드린과의 반응에 의해 라세미 혼합물로부터 얻어질 수 있으며, 순차적으로, 얻어진 염의 분획결정화(fractional crystallisation)에 의해 그들의 광학적 경상체(antipode)로 분리할 수 있다.

일반식 Ⅰ의 화합물 및 그들의 약리학적으로 허용가능한 염은 유리한 약리학적 특성에 의하여 구별된다. 특히, 상기 물질들은 효소 NEP를 저해한다. NEP는 내생의 나트륨이뇨펩타이드, 예를 들어 심방나트륨이뇨펩타이드(=ANP)를 파괴하는 효소이다. NEP 활성에 대한 그들의 저해적 작용에 기인하여, 상기 물질들은 NEP에 의하여 파괴될 수 있는 나트륨이뇨펩타이드, 특히 ANP의 생물학적 활성 및 유용한 유지를 향상시키고, 따라서 그러한 호르몬의 작용에 의하여 호전될 수 있는 병적 상태, 특히 심혈관 질병, 특히 심부전, 특히 충혈성 심장마비의 치료를 위하여 적합하다.

충혈성 심장마비에 있어서, 반사작용(reflex)에 의하여 증가되는 말초 혈관 저항성은 심장의 질병으로 유발된 감소된 박출율에 기인하여 발생한다. 이것은 심근이 증가된 후부하에 대하여 박동을 시작하여야 한다는 것을 의미한다. 이것은 심장에 증가된 긴장의 악순환을 초래하여 더 악화된다. 말초 혈관 저항성의 증가는, 특히 혈관에 작용하는 펩타이드 엔도테린(=ET-1)에 의하여 중개된다. 엔도테린은 최근에 알려진 가장 강력한 내생의 혈관 수축 물질이고, 전구체인 거대 엔도테린(=Big-ET-1)으로부터 얻어진다. 현재 공지된 바에 따르면, 다양한 효소가 Big-ET-1을 ET-1, 특히 효소 ECE 및 hSEP으로 전환시키는데 함께 관여한다(이것에 대하여는, 예를 들어 WO 02/094176 참조).

충혈성 심장마비에 있어서, 감소된 심박출량 및 말초 혈관의 저항성의 증가의 결과로서, 혈액의 후방압력 현상이 폐순환 및 심장 자체에서 발생한다. 이러한 상황에 있어서, 결과적으로, 심장 근육의 증가된 벽 긴장(wall tension)이 심방귀(auricle) 및 심실(chamber)의 지역에서 발생한다. 이러한 상황에서, 심장은 내분비 조직으로 작용하여, 혈류내로 특히, ANP를 분비한다. ANP는, 그것의 뚜렷한 혈관확장 및 나트륨이뇨/이뇨 활성에 기인하여, 말초 혈관 저항의 감소 및 순환하는 혈액량의 감소를 야기한다. 그 결과, 전부하(preload)와 후부하가 현저히 감소한다. 이것은 내생의 심장 보호 메카니즘을 구성한다. 이러한 긍정적인 내생적 메카니즘은 ANP가 플라즈마에서 매우 짧은 반감기를 가진다는 점에 있어서 한계를 가진다. 그 이유는 호르몬은 NEP에 의하여 매우 빠르게 파괴되기 때문이다.

본 발명에 따른 화합물은 ECE 활성을 저해하고, hSEP 활성을 추가적으로 저해하여 엔도테린의 생산을 감소시키고, 말초 혈관 저항의 증가를 억제하여, 결과적으로 심근 긴장을 해소한다. 더욱이, 지금까지의 결과로 보아, 본 발명에 따른 물질은 NEP 활성을 저해하므로써 더 높은 ANP 레벨 및 ANP의 작용의 연장된 지속을 야기한다. 이것은 심장보호 작용의 내생적 ANP-매개 메카니즘의 강화를 유도하고, 일반식 Ⅰ의 물질에 이뇨/나트륨이뇨 ANP-유도 활성의 강화에 대한 더 우수한 효과를 부여한다.

NEP는 ANP의 파괴에 관여할 뿐만 아니라, 엔도테린의 파괴에도 관여한다. 순수 NEP 저해는 ANP 레벨의 원하는 증가에 더하여 또한 엔도테린 레벨의 바람직하지 않은 증가를 이끈다는 것이 이를 뒷받침한다. 이러한 이유 때문에, NEP, hSEP 및 일정 부분의 ECE 저해의 혼합된 프로파일이 특히 바람직한 것으로 간주되는데, 그것은 (NEP 차단에 의한) 나트륨이뇨/이뇨 ANP의 파괴를 막고, 동시에 (hSEP 및 ECE 저해에 의하여) 엔도테린의 형성을 저해하기 때문이다. 결과적으로, 긍정적인 영향은 순수 NEP 저해제의 역효과(소위, 엔도테린 레벨의 바람직하지 않은 증가)를 견뎌내게 할 수 있다.

NEP, hSEP 및 더 적은 정도로 또한 ECE의 저해제로서 일반식 Ⅰ의 화합물의 조합된 작용 프로파일은 본 발명에 따른 화합물이, 거대 포유동물, 바람직하게는 인간에서 심혈관 상태 또는 질병, 특히 급성 심장마비 및 만성 심장마비 및 특히, 충혈성 심장마비를 포함하는 심부전뿐만 아니라; 원인불명 고혈압, 신장 고혈압 및/또는 폐동맥 고혈압과 같은 고혈압의 2차 형태를 포함하는 고혈압; 심장마비, 협심증, 심장부정맥, 심근경색, 수술중 심근경색, 예후가 나쁜 심근경색, 심장 비대, 울혈성 심근병, 폐쇄 심근 비대, 비폐쇄 심근 비대, 원인불명 심근병, 심근염, 심장막염 및/또는 심장내막염과 같은 상태 또는 질병과 유사한 병리학적 상태의 예방 및/또는 치료에 특히 적합한 것으로 나타난다. 또한 일반식 Ⅰ의 화합물은 거대 포유동물, 특히 인간에서 의약품, 특히 세포분열 억제제, 바람직하게는 세포분열억제 항생제 또는 케미칼의 심장 독성 투여량에 의하여 유도되는 심장, 특히 심근의 손상; 해열성 복통, 뇌경색, 말초 혈관병, 자발성 지주막 출혈, 만성폐쇄폐병(COPD), 천식, 신장병(신장 기능상실), 동맥경화 및 직장암 또는 전립선암의 경우의 통증을 예방 또는 치료하는데 유용하게 사용될 수 있다.

정맥 내 투여 후, 혈압조절 작용, 특히 저혈압 작용에 대한 일반식 Ⅰ의 화합물의 효과는 매우 우수하다.

약리학적 실험 방법의 설명

인용된 실시예 번호는 아래에 설명된 제조예에 관련된다.

1. 물질의 NEP 저해 작용의 시험관내( In - vitro ) 조사

본 발명에 따른 물질의 NEP에 대한 저해 작용을 조사하기 위하여, NEP의 효소 작용의 결과로서 나타나는 폴리펩타이드 Mca-Asp-Ile-Ala-Trp-Phe-Dpa-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val-Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-COOH의 가수분해에 대한 물질의 저해 작용이 시험관내에서 표준 시험으로 조사되었다. 이 시험에서, 결정된 물질의 저해 작용의 측정은 그들의 IC₅₀ 값이었다. 효소 저해 작용을 가지는 시험 물질의 IC₅₀ 값은 NEP의 효소 활성의 50%가 차단되는 시험 물질의 농도이다.

시험 완충액: 100mM Tris pH 7.0, 250mM NaCl

효소 : 가용성, 인간 재조합 NEP

Prof. Crine, University of Montreal, Canada

저장 용액: 20mM Tris pH 7.0 중의 100μg/ml

작업 용액: 저장 용액을 시험 완충액으로 2μg/ml로 희석

기질 : Mca^*-Asp-Ile-Ala-Trp-Phe-Dpa^**-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val-

Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-COOH; 형광-퀀칭 Big-ET-1 유사체,

즉 형광 신호, 특히 NEP 및 ECE-1을 통하여 검출가능한

메탈로프로테아제의 기질.

MCA 형광물질의 형광은 "퀀쳐(quencher)" Dpa의 존재로

초기에 퀀칭된다.

^*Mca=(7-메톡시코우마린-4-일)

^**Dpa=(3-[2,4-디니트로페닐]-L-2,3-디아미노프로피오닐)

Polypeptide Laboratories, Wolfenbuttel, Germany

저장 용액 : 시험 완충액중의 100μM

시험 물질 : 모든 물질은 DMSO(10mM)에 용해되고, 시험 완충액으로

시험 농도로 희석된다.

70μl 시험 완충액, 10μl 효소 작업 용액 및 10μl 시험 물질 용액이 에펜도르프 용기에서 혼합되고, 37℃에서 15분(=min)동안 프리-인큐베이트된다. 다음으로 10μl 기질 저장 용액이 첨가되고, 시험 배치가 37℃에서 60분 동안 인큐베이트된다. 다음으로 효소 반응은 95℃에서 5분 동안 가열하여 종료된다. 원심분리(Heraeus Biofuge B, 3분) 후, 액체 상등액이 다음의 설명에 따라 HPLC로 조사되었다.

기질이 역상 HPLC(CC 8/4 Nucleosil 100/5 C18 프리-컬럼을 가진 CC 125/4 Nucleosil 300/5 C18 RP 컬럼, Macherey-Nagel, Duren, Germany)에 의하여 절단 생성물로부터 분리되었다. 이를 위하여, 시험 혼합물 60μl가 HPLC 샘플 주입점으로 주입되었고, 다음으로 컬럼은 다음의 농도구배로 1ml/min의 유속으로 용출되었다.

이동상 A: 100% H₂O + 0.5M H₃PO₄ pH 2.0

이동상 B: 100% 아세토니트릴 + 0.5M H₃PO₄

0~2분: 20% B 8~10분: 60~90% B

2~6분: 20~60% B 10~13분: 90% B

6~8분: 60% B 13~15분: 90~20% B

모든 펩타이드는 214nm의 흡광도 및 328nm의 여기 파장 및 393nm의 방출 파장의 형광으로 검출되었다.

펩타이드의 효소적 절단에 의해, 형광물질(=Mca) 및 퀀쳐는 결국 다양한 펩타이드 단편들로 되어, 퀀쳐의 효과를 감소시킨다. 이로 인해 형광이 증가되는 결과가 된다. 비-퀀칭된 Mca 형광 물질을 가진 펩타이드의 HPLC 피크의 증가하는 형광 신호(표면 A에 상응)는 추가의 계산을 위하여 사용된다. 이 신호는 일반식 Ⅰ의 시험 물질의 존재(=A_저해) 및 부존재(=A_대조군) 샘플들에 대하여 비교되며, "% 저해" 값은 다음 식에 따른 각각의 피크 영역에 기초하여 계산되었다:

% 저해 = 100*(1-A_저해/A_대조군)

모든 샘플은 두 번 측정되었으며, 그로부터 평균값을 계산하였다. 표준 저해제(10nM 티오르판) 및 용매 대조군(0.1% DMSO)이 각 시험에서 대조군으로서 동일하게 측정되었다.

이러한 시험 모델에서, 아래 표 1에 열거된 일반식 Ⅰ의 화합물은 다음에 주어진 IC₅₀ 값을 가졌다:

표 1: 시험관내에서 시험 물질의 NEP-저해 작용

표 1

실시예 번호	IC₅₀(NEP)
3	17.9
10	37
16	20.0
17	<1
19	18.2
20	12.9
21	16.9
23	10.6
24	11.1
25	15.5
27	7.8
31	4.0
32	13.8
43	3.2
59	12
63	9
76	10.0

2. 물질의 hSEP -저해 작용의 시험관내 조사

본 발명에 따른 물질의 hSEP에 대한 저해 작용을 조사하기 위하여, hSEP의 효소 작용의 결과로서 나타나는 폴리펩타이드 Mca-Asp-Ile-Ala-Trp-Phe-Dpa-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val-Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-COOH의 가수분해에 대한 물질의 저해 작용이 시험관내에서 표준 시험으로 조사되었다. 이 시험에서, 결정된 물질의 저해 작용의 측정은 그들의 IC₅₀ 값이었다. 효소 저해 작용을 가지는 시험 물질의 IC₅₀ 값은 hSEP의 효소 활성의 50%가 차단되는 시험 물질의 농도이다.

시험 완충액: 100mM Tris pH 7.0, 250mM NaCl

효소 : His6-태그 hSEP 엑토도메인

Innogenetics, Ghent, Belgium

저장 용액: 20mM HEPES pH 7.2, 5% 글리세롤,

0.005% Tween20, 100mM NaCl 내에 53mg/ml, 순도 >99%

작업 용액: 저장 용액을 시험 완충액으로 10mg/ml로 희석

기질 : Mca-Asp-Ile-Ala-Trp-Phe-Dpa-Thr-Pro-Glu-His-Val-Val-

Pro-Tyr-Gly-Leu-Gly-COOH; 형광-퀀칭 Big-ET-1 유사체.

저장 용액: 시험 완충액중의 100μM

Polypeptide Laboratories, Wolfenbuttel, Germany

시험 농도로 희석된다.

HPLC 과정에서 표준 저해제로 작용하는 NEP 10nM 포스포라미돈에 대한 시험 물질의 시험관내 저해 작용을 결정하기 위한 시험과 HPLC 과정은 상기 방식과 유사하게 수행되었다.

이러한 시험 모델에서, 아래 표 2에 열거된 일반식 Ⅰ의 화합물은 다음에 주어진 IC₅₀ 값을 가진다:

표 2: 시험관내에서 시험 물질의 hSEP-저해 작용

표 2

실시예 번호	IC₅₀(hSEP)
2	21.4
3	7.8
10	25.3
16	15.0
17	24.0
19	9.5
20	36.3
23	17.3
24	27.0
25	3.4
27	26.8
28	11.9
31	12.3
43	2.9
56	2.5
59	4.0
76	4.0

3. 쥐에서 Big - ET - 1으로부터 ET -1의 형성에 대한 물질의 저해 작용의 시험관내 조사

Big-ET-1으로부터 ET-1의 형성에 대한 본 발명에 따른 물질의 저해 작용을 조사하기 위하여, ECE 및 hSEP과 같은 관련된 효소의 효소적 작용의 결과로서 발생하는 Big-ET-1의 ET-1으로의 가수분해에 대한 시험 물질의 저해 작용이 시험관내에서 표준 시험으로 조사되었다. ET-1은 내생의 강력한 혈관수축 물질이다. ET-1 레벨의 증가는 혈압의 증가를 야기한다. Big-ET-1의 주입에 따라, 혈압은 Big-ET-1의 효소-촉매 절단에 의해 ET-1이 생성되는 정도만큼 증가한다. 물질의 효소-저해 작용의 측정으로서, Big-ET-1의 주입에 의하여 유도된 혈압의 증가에 대한 그들의 저해 작용이 결정되었다.

쥐(Sprague-Dawley, CRLD=Charles River)가 1mg/kg Rompun/Ketavet 1:1으로 마취되었다. 혈압을 측정하기 위하여, 압력 변환기(Statham)를 경동맥으로 삽입하였다. 하나의 경정맥에 물질의 투여를 위하여 캐뉼러를 꼿고, 다른 경정맥에 Big-ET-1의 투여를 위하여 캐뉼러를 꼿았다. 20분의 휴식 기간 후, 쥐에 10μmol/kg 농도의 일반식 Ⅰ에 상응하는 시험 물질 또는 비히클(vihicle)을 투여하였다. 5분 후, 0.5nmol/kg Big-ET-1을 1분 간격으로 주입하였다. 수축기(=SAP) 및 이완기(=DAP) 혈압 및 심장 박동이 물질 투여 전 또는 Big-ET 투여 전 및 Big-ET 투여 후 30분 경과 후 매 5분 마다 공지의 방법으로 압력 변환기를 사용하여 각각 측정되었다. Big-ET 유도 최대 혈압 증가 및 심장 박동의 최대 감소가 Big-ET 작용의 최대 진행(전형적으로 5분 후)의 순간에 측정된 값과 Big-ET 주입 전에 측정된 값 사이의 차 이로서 측정된 값으로부터 계산되었다. 더 나아가, Big-ET-1의 영향력하에서 혈압 곡선의 적분이 30분 동안 결정되었다(AUC=곡선 밑 면적). AUC 값은 Big-ET 작용의 전체 범위 및 기간에 관한 정보 또는 그것에 의한 물질의 감소에 관한 정보를 제공한다: 그러므로 AUC 값은, 최대 Big-ET 작용에 더하여, 예를 들어 물질이, 예를 들어 최대 Big-ET 작용에 영향이 없거나, 약하게 영향을 주지만, 이 작용의 감소를 상당히 촉진하는 상황에서 상기 물질의 효과에 대한 추가적인 정보를 제공한다.

비히클의 투여와 비교되는 시험 물질의 정맥 내 투여 후 수축기 혈압(SAP)상의 최대 Big-ET-1의 저해 퍼센트는 다음 표 3에 나타내었다:

표 3: 시험 물질의 항고혈압 특성의 인-비보(in-vivo) 조사

표 3

실시예 번호	SAP 대 대조군의 최대 Big-ET 효과의 물질-관련 저해 %
2	-35
3	-94
4	-95
8	-113
14	-59(3μmol)
16	-45
17	-46
20	-67
21	-43
23	-40
24	-54
26	-53
29	-49
32	-52
34	-78
35	-63
38	-48(3μmol)
44	-75
59	-98
67	-109
68	-108
75	-52(3μmol)
76	-93

또한 일반식 Ⅰ의 화합물은 어느 정도로 ECE-저해 특성을 가진다. 일반식 Ⅰ 의 ECE-저해 특성은 시험관내에서 표준 시험으로 검증될 수 있다.

일반식 Ⅰ의 화합물은 NEP 및 hSEP를 저해할 수 있는 이중 작용 화합물이고, 또한 SD의 예방 및/또는 치료에 적합하다.

임상에서, SD 질환은 여성 성기능 장애(FSD) 질환 및 남성 성기능 장애(MSD) 질환으로 나누어진다(Melman, A. 및 Gingell, J. C.(1999). The epidemiology and pathophysiology of erectile dysfunction. J Urology 161: 5~11 참조, 이하 "Melman 등 1999"로서 인용). NEP 및 hSEP을 저해할 수 있는 본 발명의 이중 작용 화합물, 특히 일반식 Ⅰ의 화합물은 특히 MSD(예를 들어 남성 발기력 장애-MED)의 예방 및/또는 치료에 유용하다. 이 점에 있어서, 일반식 Ⅰ의 화합물의 또 다른 이점은 그들의 작용 프로파일에서 어떤 ECE 저해 역할이다.

MSD는 일반적으로 남성 발기력 장애(=MED)로도 알려진 발기력 장애와 연관된다(Benet, A. E. 등 (1994), Male erectile dysfunction assessment and treatment options. C07Sp. TheY. 20: 669~673 참조, 이하 "Benet 등 1994"로 인용). MED는 "...만족할만한 성행위를 위한 음경의 발기의 유도 및/또는 유지의 불능(NIH Consensus Development Panel on Impotence(1993). NIH Consensus Conference Impotence. JA. M. A. 270:83)..."으로서 정의된다. 모든 정도(최소, 중간 또는 완전한 발기 부전)의 발기력 장애의 빈도는 40~70세의 남성에서 52%정도이며, 70세 이상에서는 더 높게 나타난다(Melman 등 1999). 이러한 상태는 환자 및 그의 파트너의 삶의 질에 커다란 악영향을 주며, 종종 증가된 근심 및 긴장을 나타내어 우울증 및 열등감을 이끈다. 20년 전에는, MED는 정신 질환으로 간주되어졌지만(Benet 등 1994), 현재는 대부분의 환자에서 유기적 원인으로 알려진다. 결과적으로, 정상적인 음경 발기의 메카니즘 및 MED의 병원생리학을 규명하는 많은 진보가 있어왔다.

본 발명의 NEP 및 hSEP를 저해할 수 있는 이중 작용 화합물, 특히 일반식 Ⅰ의 화합물이 FSD의 치료에 사용되는 경우, 바람직하게는 여성 성적흥분 장애(=FSAD)의 치료가 바람직하다.

FSD는 여성이 성적 표현으로 만족을 느끼는데 있어서 어려움 또는 불능으로서 정의된다. FSD는 몇 종류의 여성 성기능 장애에 대한 일반적인 용어이다(Leiblum, S. R. (1998). Definition and classification of female sexual disorders. Int. J. Impotence Res., 10, S104~S106; Berman, J. R., Berman, L. & Goldstein, I. (1999). Female sexual dysfunction: Incidence, pathophysiology, evaluations and treatment options. Urology, 54, 385~391). 여성은 성욕의 결핍, 흥분 또는 오르가즘을 느끼는데의 어려움, 성행위 시의 통증 또는 이러한 문제의 조합을 가질 수 있다. 몇몇 형태의 질병, 약물 치료, 상해 또는 정신적 문제는 FSD를 일으킬 수 있다. 진행에 있어서 치료는 특정 형태의 FSD, 주로 성욕 및 흥분 질환을 치료하는 것이 목표이다. FSD의 카테고리는 정상적인 여성의 성적 반응의 단계들, 즉 성욕, 흥분 및 오르가즘을 그들과 대비하므로써 잘 정의된다(Leiblum, S. R. (1998). Definition and classification of female sexual disorders. Int. J. Impotence Res., 10, S104~S106).

성욕과 리비도(libido)는 성적 표현을 하게 한다. 그것의 징후는 종종 직장 의 관심있는 동료에 대한 성적인 생각 또는 다른 성적 자극에 노출되었을 때를 포함한다.

흥분은 성적 자극에 대한 혈관 반응이며, 중요한 요소로 생식기 충혈 및 증가된 질의 윤활, 질의 확장 및 증가된 성감각/민감성을 포함한다.

오르가즘은 흥분시 절정이 되는 성적 긴장의 방출이다. 그러므로, FSD는 여성이 이러한 어떠한 단계, 대개 성욕, 흥분 또는 오르가즘의 부적절하거나 불만족한 반응을 가지는 경우 발생한다.

FSD 카테고리는 저활성 성욕 질환, 성적 흥분 질환, 오르가즘 질환 및 성적 통증 질환을 포함한다.

본 발명의 화합물은 (여성의 성적 흥분 질환에 있어서) 성적 자극에 대한 생식기의 반응을 증가시키며, 그렇게 하는데 있어서, 그들은 또한 성행위와 연관된 통증, 고통 및 불편을 개선할 수 있고, 다른 여성의 성적 질환을 치료할 수 있다. 그러므로, 본 발명의 하나의 특정 관점에 있어서, 성욕 질환, 성적 흥분 질환, 오르가즘 질환 및 성적 통증 질환의 치료 또는 예방, 더욱 바람직하게는 성적 흥분 질환, 오르가즘 질환, 및 성적 통증 질환의 치료 또는 예방, 가장 바람직하게는 성적 흥분 질환의 치료 또는 예방을 위한 의약품의 제조에 있어서 본 발명의 화합물의 사용이 제공된다. 저활성 성욕 질환은 만약 여성이 성욕이 없거나, 거의 없고, 성적 생각 또는 망상이 없거나, 거의 없는 경우 존재한다. 이러한 형태의 FSD는 자연적 폐경 또는 외과적 폐경에 의한 낮은 테스토스테론 레벨에 의하여 유발될 수 있다. 다른 원인은 병환, 약물 치료, 피곤, 우울 및 근심을 포함한다.

FSAD는 성적 자극에 대한 부적절한 생식기의 반응에 의하여 특징지워진다. 생식기는 정상적인 성적 흥분을 나타내는 충혈을 수행하지 않는다. 질벽은 거의 윤활이 없어, 성행위는 통증을 나타낸다. 오르가즘이 방해될 수 있다. 흥분 질환은 폐경기 또는 출산 후 및 수유기에 감소된 에스트로겐에 의하여 유발될 수 있을 뿐만 아니라, 당뇨 및 동맥경화와 같은 혈관 요소와 관련된 질병에 의하여 유발될 수 있다. 다른 원인은 이뇨제, 항히스타민제, 항우울제, 예를 들어 선택적 세로토닌 재흡수 저해제(=SSRIs) 또는 항고혈압제 치료로부터 초래된다.

성적 통증 질환(성교 통증 및 질 경련을 포함한다)은 침입으로 유발되는 통증으로 특징지워지고, 윤활, 자궁내막증, 골반 염증 질환, 염증장병 또는 요도관 문제를 감소시키는 약물 치료에 의하여 원인이 될 수 있다. FSD라는 용어는 몇 가지 형태를 포괄하고, 몇 가지는 측정하기가 불가능하며, FSD를 치료하는데 대한 관심은 비교적 최근에 있어온 이유로 FSD의 빈도를 측정하는 것은 어렵다.

많은 여성의 성적인 문제는 여성의 노화 과정 또는 당뇨 및 고혈압과 같은 만성 질환과 직접적으로 관련된다. FSD는 성적 반응 사이클의 개별 단계들에서 여러 증상들을 나타내는 몇 가지 서브타입으로 구성되므로, 단일 치료는 존재하지 않는다.

최근 FSD의 치료는 원칙적으로 정신병적 또는 관계 이슈(relationship issue)에 초점이 맞추어진다. FSD의 치료는 보다 임상적인 것으로 점차 발전하고 있으며, 기초 과학 연구는 이러한 의학적 문제에 집중된다. 여성의 성적인 불만은, 특히 전체적인 여성의 성적 불만에 기여하는 혈관 장애(예를 들어, FSAD)의 요소를 가질 수 있는 개인들에 대하여, 병원생리학에 있어서 정신병적인 것이 전부는 아니다. 현재 FSD를 치료하기 위하여 허가된 드러그는 존재하지 않는다. 경험적인 드러그 치료는 (일반적으로 또는 호르몬 대체 치료로서) 에스트로겐 투여, 안드로겐 EH는 부스피론 또는 트라조돈과 같은 기분-대체 드러그를 포함한다. 이러한 치료 선택은 낮은 효능 또는 기대되지 않는 부작용에 기인하여 자주 불만족스럽다. FSD를 약리학적으로 치료하는 것에 대한 비교적 최근의 관심으로 인하여, 치료는 다음과 같이 구성된다: 정신병적인 상담, 처방전이 필요 없는 성적 윤활제, 및 다른 질병에 대하여 승인된 드러그를 포함하는 조사 후보군. 이러한 의약품은 MED에서 효과가 있는 것으로 입증된 테스토스테론 또는 에스트로겐 및 테스토스테론의 조합인 호르몬제 및 최근의 혈관 드러그로 구성된다. 이러한 제제가 FSD를 치료하는데 효과가 있다는 주장은 아직 없다.

미국 정신병 협회의 진단 및 통계 매뉴얼(DSM)에서는 FSAD를 "...성행위의 종결까지 성적 흥분의 적절한 윤활-팽창 반응의 달성 또는 유지의 영구적 또는 재발성 불능. 장애는 뚜렷한 근심 또는 대인관계의 어려움을 야기,,,"로서 정의한다. 흥분 반응은 골반 내의 혈관충혈, 질의 윤활 및 바깥 생식기의 확장 및 팽창으로 이루어진다. 상기 장애는 현저한 근심 및/또는 대인관계의 어려움을 야기한다. 커플에서의 성기능 장애를 조사하는 연구는 76%까지의 여성이 성기능 장애의 불만을 가지는 것으로 보고하였고, 미국에서는 30~50%의 여성이 FSD를 겪는 것으로 보고하였다(Berman, J. R., L. A., Werbin, T. J. 등 (1999). Female sexual dysfunction: Anatomy, Physiology, evaluation and treatment options, Curr Opin Urology, 9, 563~568). FSAD는 폐경기 전, 중 및 후 (호르몬 대체 치료(HRT)) 여성에 영향을 주는 매우 빈번한 성적 장애이다. 그것은 우울증, 심혈관 질병, 당뇨 및 생식기 질병과 같은 부수적인 질병과 연관된다. FSAD의 일차적 결과는 충혈/팽창의 결핍, 윤활의 결핍 및 성적 만족감의 결핍이다. FSAD의 이차적 결과는 성욕의 감퇴, 성행위 동안의 통증 및 오르가즘에 도달하는데 있어서의 어려움이다. FSAD의 증상을 가진 적어도 일부의 환자는 혈관의 기본 문제가 있음(Goldstein 등, Int. J. Impot. Res., 10, S84~S90, 1998)이 이러한 관점을 지지하는 동물 데이터(Park 등, Int. J. Impot. Res, 9, 27~37, 1997)와 함께 최근에 가설로 제기되었다.

SEP의 저해제는 골반 신경-자극 및 혈관작용성 장 펩타이드(=VIP)-유도에 의해 질 및 음핵의 혈액 흐름의 증가를 향상시키는 것으로 알려져 있다. 또한 SEP 저해제는 VIP 및 분리된 질벽의 신경-매개된 이완을 향상시키는 것으로 알려져 있다. 그러므로, 본 발명은 정상적인 성적 흥분 반응-즉, 질로 이끄는 증가된 생식기 혈액 흐름을 재생하기 위한 수단을 제공하는데 도움을 준다는 점에서 이점이 있다. 이것은 플라즈마 삼출액을 통한 증가된 질의 윤활, 증가된 질의 유연성 및 증가된 생식기의 민감성으로 나타난다. 그러므로, 본 발명은 정상적인 성적 흥분 반응을 재생하거나 강화하기 위한 수단을 제공한다. 여기에서 여성의 생식기는 다음을 의미한다. "생식 기관은 내부 및 외부군으로 구성된다. 내부 기관은 골반 내에 위치하며, 난소, 난관, 자궁 및 질로 구성된다. 외부 기관은 비뇨생식기 격막의 외부이고, 골반 아크의 하부이다. 그들은 치구, 대음순 및 소음순, 음핵, 전정, 전정질팽대 및 큰어귀샘을 포함한다." (Gray's Anatomy, C. D. Clemente, 13th American Edition). R. J. Levin은 "...남성과 여성의 생식기는 일반적인 조직 원기(anlagen)로부터 배아학적으로 발생하기 때문에, 남성 및 여성의 생식기 구조는 서로 동질성이라고 논의된다. 그러므로 음핵은 음경과 상동이고, 음순은 음낭과 상동이다..."라고 교시한다(Levan, R. J. (1991), Exp. Clin. Efzdocrinol., 98, 6169).

MSD, 특히 MED에 관하여, 음경의 발기는 음경해면체 평활근 및 음경의 혈관의 수축과 이완의 균형에 의존한 혈액동력학적 상황이다(Lerner, S. E. 등 (1993). A review of erectile dysfunction: new insights and more questions. J. Urology 149: 1246~1255). 음경해면체 평활근은 또한 본 명세서에서 음경 평활근 또는 복수형으로 음경해면체들로서 언급된다. 음경해면체 평활근의 이완은 음경해면체의 육주(trabecular) 공간 속으로 증가된 혈액 흐름을 이끌어, 음경해면체가 주위의 막에 대하여 팽창하고, 배출 정맥을 압축하는 원인이 된다. 이것은 발기가 되는 해면체 내의 혈압의 급격히 증가 과정이다(Naylor, A. M. (1998). Endogenous neurotransmitters mediating penile erection. Br. J. Urology 81: 424~431) 참조, 이하, "Naylor, 1998"로서 언급). 발기 과정 동안 발생하는 변화는 복잡하고, 말초 및 중추신경계, 및 내분비계와 관련된 고도로 조화된 조절을 요구한다(Naylor, 1998). 음경 평활근 수축은 후시냅스 α-아드레날린 수용체의 활성을 통하여 교감신경의 노르아드레날린성 신경자극전달에 의하여 조절된다. MED는 음경해면체의 내생적 평활근 긴장의 증가와 연관될 수 있다. 그러나, 음경 평활근 이완은 부분적으로 비-아드레날린성, 비-콜린성(=NANC) 신경전달에 의하여 매개될 수 있 다. 음경에는 산화질소(=NO)와는 다른 칼시토닌 유전자 관련 펩타이드(=CGRP) 및 VIP와 같은 수 많은 다른 NANC 신경전달물질이 발견된다. 이러한 이완을 매개하는데 관여하는 주된 이완 인자는 NO인데, 이것은 산화질소합성효소(=NOS)에 의하여 L-아르기닌으로부터 합성된다(예를 들어, Taub, H. C. 등 (1993). Relationship between contraction and relaxation in human and rabbit corpus cavernosum. Urology 42: 698~704 참조). 음경 평활근 긴장의 감소는 NO가 음경해면체의 이완을 유도하도록 할 수 있다고 생각된다. 남성에서 성적 흥분 동안, NO는 뉴런 및 내피로부터 방출되고, 평활근 세포 및 내피에 위치하는 가용성 구아닐레이트 사이클라아제(sGC)에 결합하여 활성화시키고, 세포내 사이클릭 구아노신 3',5'-모노포스페이트(cGMP) 레벨의 증가를 이끈다. cGMP의 이러한 증가는 단백질 인산화효소 G 활성화와 관련되는 것으로 생각되는 알려지지 않은 메카니즘(Ca²⁺ 펌프 및 Ca² ⁺-활성화 K⁺-채널의 활성화에 기인하는 것으로 여겨짐)을 통하여 세포 내 칼슘 농도([Ca² ⁺] 이온)의 감소로 인하여 음경해면체의 이완을 유도한다.

최근에, c-타입 나트륨이뇨촉진 펩타이드(=CNP)가 또한 인간 음경해면체 조직에서 발현되는 막-결합 구아닐릴 사이클라아제 B(=GC-B)에 작용하여 MED에 중요한 역할을 한다는 것이 알려졌다. GC-B의 자극은 세포 내 cGMP의 증가, 및 이로인한 평활근 이완을 이끈다. PDE5-저해제, 예를 들어 실데나필은 cGMP의 파괴를 저해하므로써 음경해면체 조직에서의 세포 내 cGMP를 증가시킨다. PDE5-저해제는 cGMP 형성의 촉진제의 부재, 예를 들어 NO의 부재에서 불활성화된다. 이러한 발견은 음 경해면체에서의 cGMP 형성의 기본(비자극 상태) 속도는 매우 낮아, PDE5-저해제에 의한 cGMP 파괴의 저해는 구아닐릴 사이클라아제의 부수적인 자극 없이는 발기 반응에 충분하지 않다는 것을 시사한다. CNP 농도의 증가는 cGMP 형성의 증가에 의하여 세포 내 cGMP 농도의 증가를 이끈다. 결과적으로, 음경해면체의 CNP 농도의 증가는 PDE5를 저해하는 것과 유사한 효과를 가질 것이라고 추측된다. 그들의 다른 작용 메카니즘(즉, cGMP 형성의 증가 대 cGMP 파괴의 저해)때문에 PDE5의 저해 또는 CNP의 파괴의 접근법은 각각 부가적인 것으로 간주되므로, 이러한 두 작용 메카니즘의 조합이 PDE5 저해제 단독 투여에 대해 반응이 없는 환자에 있어서 특히 효과적일 것이라는 합리적인 가설이 제안된다.

VIP 양성 신경 섬유는 음경해면체의 육주 그물세공조직에서 발견되었으며, 음경 발기에서 VIP 방출의 역할을 한다. VIP의 효과는 cAMP의 증가를 통하여 매개되어지는 것으로 생각되며, cGMP-증가제의 효과에 보충적인 것이다. ED를 가진 환자에 있어서, (α-아드레날린 수용체 길항제인 펜톨아민과 조합한) VIP의 해면체 내로의 주입은 67%의 반응율(성행위에 충분한 발기)을 나타내는 안전하고 효과적인 치료임이 밝혀졌다.

엔도펩티다아제 NEP 및 hSEP 양자는 CNP와 VIP를 파괴하여 해면체 평활근에서 CNP와 VIP의 효과를 제한한다. CNP 및 VIP 파괴의 저해는 이러한 혈관이완 인자의 증가된 이용성을 유도하여 음경해면체로의 혈액 흐름을 증가시켜 향상된 발기 작용으로 나타난다. 이는 NEP-저해제의 적용 후 해면체 내의 압력 및 여성의 생식기의 혈액 흐름의 뚜렷한 증가를 보여주는 토끼의 실험 데이터로부터 뒷받침될 수 있다(WO 02/079143 참조). 더 나아가, 내생적 NEP-저해제인 시알오르핀의 프로-펩타이드를 코드하는 유전자(SMR1)가 신경성 발기 장애의 쥐 모델에서 뚜렷하게 감소(>80배)된다는 사실이 발견되었는데(User H. M., Zelner D. J., McKenna K. E., McVary K. T. (2003). Microarray analysis and description of SMR1 gene in rat penis in a post-radical prostatectomy model of erectile dysfunction. J. Urol.; 170(1): 298~301 참조), 이것은 이 질병에서 NEP 활성이 증가되어 발기 장애의 진행을 일으킬 수 있다는 것을 제시한다.

약학적 시험 방법의 상세한 설명

인용된 실시예번호는 아래에 설명된 제조예들에 관련된다.

본 발명에 따라 사용된 화합물에 의한 CNP 및 VIP의 효소적 파괴에 대한 억제는 하기의 프로토콜에 따라 시험관내 효소 분석법으로 측정되었다:

효소: a) hSEP(sol hu)(his)6; 또는: His6-tagged hSEP 엑토도메인(ectodomain)

저장용액: 20 mM HEPES중의 53㎍/ml, pH 7.2, 5% 글리세롤, 0.005%

Tween20, 100mM NaCl, 순도＞99%

작업용액: 분석 완충용액으로 5㎍/ml로 희석된 저장용액

공급자: Innogenetics, Ghent, Belgium. 단백질의 제조 및 정제는 WO 02/094176에 기술된 바와 같이 수행되었다.

b) NEP(돼지 신장 피질로 제조됨)

저장용액: 20mM bis 트리스중의 120㎍/ml, 순도＞95%

작업용액: 분석 완충용액으로 5㎍/ml로 희석된 저장용액

공급자: Dr. Philippe Crine, Univ. of Montreal, Canada

기질: a) VIP

b) CNP(32-53)

저장용액: 분석 완충용액중의 100μM

공급자: Bachem, Weil am Rhein, Germany

분석 완충용액: 100mM 트리스 pH 7.0, 250mM NaCl

모든 시험 화합물은 10mM DMSO에 용해되었고, 분석 완충용액으로 더 희석되었다.

활성 분석 과정

80㎕의 분석 완충용액, 10㎕의 효소 작업용액(NEP 또는 hSEP) 및 10㎕의 펩타이드 저장용액(VIP 또는 CNP)을 에펜돌프 바이알내에서 혼합하였고, 37℃에서 120분간 배양하였다. 그 후에, 효소 반응은 5분 동안 95℃로 가열하여 종결되었다. 원심분리(Heraeus Biofuge B, 3분) 후에, 상징액을 HPLC에 적용하였다.

억제 분석 과정

70㎕의 분석 완충용액, 10㎕의 효소 작업용액(NEP 또는 hSEP) 및 10㎕ 시험 화합물액을 에펜돌프 바이알내에서 혼합하였고, 37℃에서 120분간 예비 배양하였다. 그런 다음, 10㎕ 펩타이드 저장용액(VIP 또는 CNP)을 첨가하였고, 반응 혼합물을, 효소 가수분해반응을 시키기 위해, 60분 동안 37℃로 배양하였다. 그 후에, 효소 반응은 5분 동안 95℃로 가열하여 종결되었다. 원심분리(Heraeus Biofuge B, 3분) 후에, 상징액을 HPLC에 적용하였다.

분해 생성물로부터 남아있는 기질을 분리하기 위하여, CC 125/4 Nucleosil 300/5 C₁₈ RP 컬럼과 CC 8/4 Nucleosil 100/5 C18 프리컬럼(Macherey-Nagel, Duren, Germany)이 설치된 역상 HPLC 기술을 사용하였다. 60㎕의 반응 샘플을 HPLC에 주입하였고, 컬럼은 1ml/min의 유동 속도로 하기의 농도경사로 용출되었다.

용액 A: 100% H₂O+0.5M H₃PO₄ pH 2.0

용액 B: 100% 아세토니트릴+0.5M H₃PO₄

0~2분: 5% B 8~10분: 90% B

2~7분: 5~50% B 10~12분: 90~5% B

7~8분: 50~90% B

모든 펩타이드들은 214nm(UV 분광학기) 파장에서 흡수에 의해 확인되었다.

가수분해의 퍼센트(%)는, 하기의 식에 따라, 효소없이(블랭크) 같은 농도의 펩타이드를 포함하는 샘플에 대하여 효소를 포함하는 샘플 Y에 대한 분해되지 않은 펩타이드의 피크 영역을 기초로 하여 계산하였다.

가수분해 %=100×(블랭크-Y)

억제% 계산의 기초는 오직 펩타이드만을 포함하는 샘플(블랭크) 또는 억제제 없이 펩타이드와 효소를 포함하는 샘플(대조)과 억제제를 포함하는 샘플X에 대하여 분해되지 않는 펩타이드(VIP 또는 CNP)를 비교했을 때의 피크 영역이며, 하기의 식에 따라 계산된다.

억제 %=100×(X-대조)/(블랭크-대조)

모든 샘플을 두개로 만들어서 실행하였고, 평균값을 사용하였다. 용매 대조 (0.1% DMSO)를 각각의 분석 실행에 첨가하였다.

CNP 및 VIP는 시험관내에서 NEP 및 hSEP에 의해 분해되었다. 상기 두 펩타이드는 하기의 표 4에서 나타내진 것처럼 NEP보다 hSEP에 의해 더 빠르게 파괴되었다:

표 4 : NEP 또는 hSEP에 의한 VIP 및 CNP의 파괴율

	CNP의 파괴 hSEP NEP	VIP의 파괴 hSEP NEP
2시간 동안 분해	46% 39%	36% 28%

본 발명에 따른 시험 혼합물은 NEP 및 SEP 모두에 의한 CNP 및 VIP의 분해를 방지할 수 있다. 이 시험 모델에서, 하기의 표 5에 나타낸 일반식Ⅰ의 시험 물질들은 하기에 나타낸 IC₅₀ 값을 가졌다:

표 5 : 시험 화합물들에 의한 CNP 및 VIP의 분해 방지

파괴 억제에 사용된 물질 (실시예 번호)	CNP의 파괴 hSEP NEP IC₅₀(nM) IC₅₀(nM)	VIP의 파괴 hSEP NEP IC₅₀(nM) IC₅₀(nM)
4	1.0 10.1	3.1 3.1

또한, 일반식Ⅰ의 화합물은 세포사멸에 관련된 부작용 상태의 예방 및/또는 치료에 적합하다.

상기 상태는, 예를들면, 허혈성 뇌졸증, 뇌허혈, 외상 뇌손상, 급성파종 뇌척수염, 근육위축가쪽경화증(ALS), 망막색소변성, 가벼운 인지손상, 알츠하이머병, 피크병, 노인치매, 진행성 핵상마비, 겉질밑치매, 윌슨병, 다발경색증, 폐쇄동맥 치매, AIDS 관련 치매, 소뇌 퇴행, 척수소뇌 퇴행 증후군, 프리드리히 조화운동불 능, 조화운동불능 모세혈관확장, 간질 관련 뇌손상, 척수손상, 하지불안증후군, 헌팅턴병 및 파킨슨병, 선조체흑질변성, 뇌혈관염, 사립체 뇌-근육병증, 신경세포 세로이드 지질갈색소증, 척수 근육 위축, 중추신경계 관련된 리소솜 저장병, 백색질형성장애증, 우레아 사이클 결손증, 간 뇌병증, 신장 뇌병증, 대사 뇌병증, 포르피린증, 박테리아 또는 바이러스 수막염 및 수막뇌염, 프리온 질병, 신경독성 화합물에 의한 중독, 급성특발다발신경염, 만성 염증 신경병증, 다발근육염, 피부근육염, 방사선-유발 뇌손상과 같은 신경퇴행장애; 과민 창자질환 및 염증 창자질환, 크론병 및 궤양대장염, 복강질환, 헬리코박터 유문 위염 및 그 밖의 전염성 위염, 괴사 소장결장염, 거짓막 소장결장염, 방사선-유발 소장결장염, 림프구 위염, 이식대숙주병, 급성 및 만성 췌장염과 같은 소화기 질환; 알코올성 간염, 바이러스 간염, 대사 간염, 자가면역 간염, 방사선-유발 간염, 간경화증, 용혈요독증후군, 사구체신염, 루프스신장염, 전격성 간염과 같은 바이러스 질환과 같은 간질환; 외상 및 골관절염과 같은 관절 질환; 특발성 염증 근육병증, 만성 호중구감소, 혈전 혈소판감소자색반, 류마티스성 관절염, 특발성 혈소판감소자색반, 자가면역 장염 증후군, 항인지질 항체 증후군, 심근염, 다발경화증 및 그것의 진단 아종 재발성 다발경화증, 이차 진행 다발경화증, 일차 진행 다발경화증, 진행성 재발성 다발경화증, 급성다발경화증, 양성 재발성 다발경화증 또는 무증후성 다발경화증, 시각신경척수염(드빅 증후군), 림프구성 골염, 그레이브병, 애디슨병, 부갑상선기능저하증, 타입 1 당뇨병, 전신홍반루푸스, 천포창 사마귀, 수포성 유사물집증, 거선성 관절염, 자궁내막증, 자가면역 고환염, 자가면역 발기부전, 사르코이드증, 베게너육아종증, 자가면역 난청, 쉐그렌병, 자가면역 포도막망막염, 간질성방광염, 구드패스츄어 증후군 및 섬유근육통과 같은 면역-억제 또는 면역결핍, 특히 자가면역 질환; 재생불량 빈혈과 같은 골수형성장애; 물집증 사마귀, 피부근육염, 아토피 피부염, 헤노흐-쉔라인 자반증, 여드름, 전신경화증, 지루 각화증, 피부 비만세포증, 만성 증식 피부염, 이상각화증, 피부경화증, 간질 육아종 피부염, 건선, 피부의 박테리아 감염, 피부사상균증, 나병, 피부 리슈만편모충증, 백반증, 독성 표피 괴사용해, 스티븐 존슨 증후군, 피지샘종, 탈모증, 피부의 광손상, 경화성 태선, 급성피부 상처, 색소 실조증, 피부의 열상, 발진성 고름물집증, 태선 피부병, 피부 알레르기 혈관염, 세포독성 피부염을 포함하는 피부병 질환; 청각 외상 유도 청각 섬모 세포 괴사 및 청력 상실, 아미노글리코사이드 유도 청각 섬모 세포 괴사 및 청력 상실, 내이독성 드러그 유도 청력 상실, 외림프누공, 진주종, 달팽이관 또는 전정 허혈, 메니엘씨병, 방사선-유발 청력 상실, 박테리아 또는 바이러스 감염에 의한 청력상실 및 특발성 청력 상실과 같은 내이의 질환; 이식: 이식대숙주병, 심장-, 폐-, 신장-, 피부-, 각막-, 골수- 또는 간-이식의 급성 및 만성 거부반응과 같은 이식에 의한 부작용; 상처 치료 및 조직 거부반응.

세포사멸과 관련된 상기 부작용 상태의 예방 및 치료를 위한 일반식Ⅰ의 아미도메틸-치환 1-(카르복시알킬)-시클로펜틸카보닐아미노-벤자제핀-N-아세트산 유도체의 유용성은 항-세포사멸 활성을 보여주는 적합한 동물 모델에서 증명되어질 수 있다.

약제학적 시험 방법의 상세한 설명

인용된 실시예번호는 하기에 기술된 제조예들에 관한 것이다.

1. 외상 뇌의 손상: 지연된 세포사멸적 자연사

타박상 장치. 길이가 40cm이며, 스테인레스 스틸 튜브로 구성된 타박상 장치에, 튜브내에서의 공기 압축을 방지하기 위해서, 1cm 간격으로 구멍을 뚫었다. 230~270g의 성체 위스타 쥐들에 클로랄 하이드레이트를 복강내에 400mg/kg으로 투여하여 마취시키고, 대뇌반구 상에 두개골을 절개하여, 경질막의 표면상에 둔 족판상으로 하중을 가하는 장치를 두개골의 표면에 수직으로 놓고, 뇌 타박상을 입히기 위해 20g의 무게로 생성된 380g × cm의 힘을 선정하였다. 경질막에 기계적인 구멍이 형성되는 것을 피하기 위해 뇌표면에 최대 2.5mm의 함몰부위를 형성하였다. 족판 중앙을 정위적으로 브레그마(bregma)에 대해 1.5mm 후부 및 2.5mm 측면에 놓았다. 완충액내에 4% 파라포름알데히드를 포함하는 용액으로 뇌상을 입힌 3일 후에 쥐에게 관류 고정을 실시하였다.

뇌실내 주입. 5~15㎕의 해밀턴 실린지로 뇌실내(=i.c.v)에 화합물을 투여하였다. 하기의 정위 좌표들을 사용하여 외상을 입힌후에, 투여를 5분, 15분~8시간에 걸쳐 수행하였다: 브레그마에 대하여 AP=-0.5mm, L=-2mm 및 V=-5.5이다.(Swanson, L. W. (1992) Brain Maps: 쥐의 뇌구조, 엘스바이어, 암스텔담).

해마내의 형태 분석. 해마 CA3 하부필드에서의 손상을 10.21mm~11.21mm의 범위에 걸친 5개의 다른 로스트로코달(rostrocaudal) 레벨(Swanson, L.W. (1992) 브레인 맵들(maps): 쥐의 뇌구조, 엘스바이어, 암스테르담)에서, 외상 3일 후에 그것의 정중측면축을 따라 입체적으로 측정하였다. 해마내의 신경의 손실을 양적으로 계산하기 위하여, 입체적 디섹터(disector 기술(Cruz-Orive, L. M. & Weibel, E. R. (1990) Am. J. Physiol. 258, L148-L156)을 방추 신경들의 수적인 밀도를(Nv)를 측정하기 위하여 사용하였다. 균일한 카운팅 프레임(0.05mm × 0.05mm; 디섹터 높이 0.01mm) 및 고-구경 대물렌즈(×40)를 샘플링을 위해 사용했다. 정상 신경들은 Nissl 물질을 포함하는 세포질에 의해 둘러싸인 분명한 원핵형질 및 뚜렷한 핵소체를 가진 전형적인 핵들의 존재에 의해 확인되었다. CA2 및 CA3 하부필드 사이의 경계는 큰 방추 세포들의 느슨한(looser) 배열이 하부필드 CA3의 조밀하게 채워진 방추세포로 전이되는 지점인 것으로 여겨진다. 톱니모양의 과립 세포층의 측면 끝과 연결되는 임의의 선이 하부필드 CA3 및 CA4 사이의 접합점이라 생각된다.

이 시험 모델에서, 실시예 3의 물질은 투여량-의존적 신경 보호 효과를 나타내었다. 외상 8시간 후까지 실시예 3의 시험 물질을 i.c.v.로 투여했을 때 신경 보호 효과는 여전히 분명했다.

성체 위스타 쥐의 외상 15분 후에 i.c.v.로 투여했을 때의 실시예 3의 시험 물질의 신경 보호 효과의 투여량 반응성을 측정하였다. 상기 방법에 개시된 바와 같이, CA3 해마의 하부필드에서 신경의 밀도를 측정하였다. 비히클(vehicle) 처리된 쥐의 비-외상 좌측 부위 및 비히클 처리된 쥐 및 실시예 3의 시험 물질로 처리된 쥐의 우측 외상 부위에서의 6곳의 정위 레벨에서 CA3 신경세포 밀도±표준 오차(=SEM)를 측정하였고, 그 결과는 하기 표 6에 나타내었다.

다음의 모든 표에서 숫자("n")는 그룹당 쥐의 수를 나타낸다.

표 6: CA3 해마의 신경세포 밀도, 세포×10³/mm³

비히클 주입에 의해 CA3 해마내의 신경세포 밀도가 대조값의 35%까지 감소된 반면, 실시예 3의 시험 물질의 3, 10, 또는 30㎍의 주입은 해마 신경세포 손실을 부분적으로 예방했으며, 10㎍의 투여량이 가장 효과적이었다. 변수분석("ANOVA")은, 실시예 3의 시험 물질의 세개의 테스트된 투여량 모두에서 CA3 해마내에서의 신경세포 손실에 대한 치료의 상당한 보호 효과가 있다는 것을 밝혀냈다(P<0.001; n=그룹당 10). 또한, ANOVA는, 10㎍ 투여량이 3㎍ 또는 30㎍ 투여량보다 현저히 더 나은 신경보호를 제공한다는 것을 밝혀냈다.

성체 위스타 쥐에게 외상을 준 2, 4, 또는 8시간 이후에 i.c.v.로 투여하였을 때, 실시예 3의 시험 물질의 시간에 따른 신경보호 효과를 측정하였다. 상기 방법에 개시된 바와 같이, CA3 해마 하부필드에서 신경세포 밀도를 측정하였다. 비히클 또는 실시예3의 시험 화합물로 처리된 쥐의 외상입은 우측의 6곳의 정위 레벨에서 CA3 신경세포 밀도±SEM을 측정하였고, 그 결과를 하기의 표 7에 나타내었다.

표 7

비히클의 주입은 CA3 해마내에서 신경세포 밀도가 대조값의 35%까지 감소하는 결과를 나타내었다. 실시예 3의 시험 물질 10㎍의 내실뇌 주입은 해마 신경세포 손실을 부분적으로 예방했다. ANOVA는, 세개의 모든 시점(2시간, 4시간에서, P＜0.001, 8시간의 경우 P＜0.01)에서 CA3 해마에서의 신경세포 손실에 관한 실시예 3의 시험 물질의 중요한 처리 효과가 있다는 것을 나타냈다.

2. 아드리아마이신 독성: 항-세포사멸 활성의 측정

200~250g의 위스타 쥐를 클로랄하이드레이트 400mg/kg으로 마취시키고, 알젯 오스모틱 미니펌프(2ML1)를 피하(=s.c.)에 이식했다. 적절한 농도의 본 발명의 화합물을 포함하는 비히클 또는 용액으로 펌프를 채우고, 이식하기에 앞서 초회항원자극을 행하였다(primed). 이 후, 동물들은 1, 2, 및 3일 동안 하루에 3회 5mg/kg의 동일 1일 투여량으로 복강내에 투여받았다. 아드리아마이신의 첫번째 주입 5일 후에 쥐를 안락사시켰고, 포스페이트 완충액중의 4% 파라포름알데하이드를 포함하는 용액으로 경심관류시킨 후, 심장, 간, 및 신장을 제거하여 파라핀에 묻었다.

TUNEL 염색: 말단 디옥시누클레오타이드 전이효소-매개된 dUTP nickend- label(TUNEL)에 근거한 조직학 분석을 위해, 장기(organs)를 5일 동안 4℃에서 후-고정(post-fixed)시키고, 파라핀에 묻었다. 제조자의 지시에 따라 ApopTag Peroxidase 키트(S 7100, Oncor Appligene, 하이델베르그, 독일)를 사용하여 TUNEL 염색을 10㎛ 두께의 파라핀 단편들 상에서 수행하였다. 간단하게, 단백질분해효소 K로 전처리하고, 내생의 퍼옥시디아제를 퀀칭(quenching)한 후에, 단편들을 평형 완충액내에서 배양시킨 후, (유리(free) 3'-OH DNA 말단에 dUTP 누클레오타이드로 표지된 딕옥시제닌이 도입된) 강화 TdT 효소를 처리하였다(1시간, 37℃). 단편들을 스톱/워쉬(stop/wash) 완충액내에서 배양시킨 다음, 항-딕옥시제닌-퍼옥시다아제 콘쥬게이트로 처리한 후, DAB 기질(Sigma, Deisenhofen, Germany)로 처리하고, 메틸그린으로 가볍게 대비염색하였다.

이 시험 모델에서, 실시예 4의 시험 물질은 심장, 간 및 허파의 세가지 장기에서 TUNEL 양성 세포들의 밀도를 현저하게 감소시켰다는 점에서, 상기 물질은 심장, 간 및 허파내에서의 아드리아마이신 독성에 대항하여 중요한 보호작용을 하였다. 가장 효과적인 투여량은 하루에 100mg/kg였다.

위스타 쥐에게 누적 투여량으로 15mg/kg의 아드리아마이신을 복강내 투여했다. 실시예 4의 시험 물질을 1일당 20, 50 또는 100mg/kg의 투여량으로 피하투여로 5일에 걸쳐 알제 오스모틱 미니펌프로 투여했다. 아드리아마이신의 첫번째 주입 5일 후에, 시험동물들을 안락사시키고, 심장을 관류하였고, 심장, 신장 및 간에 TUNEL 염색을 진행하였다. 상기 방법에 개시된 바와 같이, TUNEL 양성 세포들의 밀도를 측정하였다. 각 장기(심장, 간, 신장)의 결과는 대조군 및 다른 시험군들(실 시예 4의 시험 화합물을 1일당 20, 50, 100mg/kg 투여군)에 대하여 TUNEL 양성 세포들의 평균밀도±SEM을 측정하였고, 이를 하기 표 8에 나타내었다.

표 8: TUNEL 양성 세포들/mm³×10²

실시예 4의 시험 물질은 3가지 장기 모두에서 아드리아마이신의 세포독성의 효과를 투여량-의존적으로 감소시켰다. 스튜던트 시험의 평균값으로 시험군들간의 비교가 수행되어졌다(^**P＜0.01, ^***P＜0.001, 비히클 처리된 쥐와 비교됨).

또한, 본 발명은 유효량의 일반식Ⅰ의 화합물을 필요한 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 포유류 및 인간에게서 심혈관 장애 또는 질환의 치료 또는 예방 및/또는 세포사멸과 관련되는 부작용 상태의 치료 방법을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명은, NEP 및 hSEP를 억제할 수 있는 이중 활성 화합물, 특히 본 발명에 따른 일반식Ⅰ의 화합물의 유효량을 필요한 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 포유류 및 인간에게서 성기능장애를 치료 또는 예방하는 방법을 제공하는 것이다.

일반식Ⅰ의 화합물은 통상의 약제학적 조성물의 형태로 투여될 수 있다. 사 용될 투여량은 개인적으로 다양할 수 있고, 치료될 상태 및 사용되는 물질의 타입에 따라 당연히 다양화될 것이다. 그러나, 일반적으로, 1회 투여 당 0.2~500mg의 활성 물질 함량, 특히 10~200mg의 활성 물질 함량을 포함하는 의약용 형태가 인간 및 거대 포유류에게 투여하기에 적합하다. 또한, 본 발명의 약제는, 0.001~10mg/kg/hr의 범위의 투여량으로 정맥내 주입에 의해 투여될 수 있다. 상기 투여량은 평균적인 경우의 예시이다. 상기 화합물은, 본 발명에 따라, 고체 또는 액체의 약제학적 조성물내에 통상의 약제학적 보조제 및/또는 부형제와 함께 포함될 수 있다. 고체의 약제학적 조성물의 예들은, 정제, 코팅된 정제, 캡슐, 분말 또는 과립과 같은 경구투여할 수 있는 조성물들 또는 선택적으로 좌약들이다. 이러한 약제학적 조성물들은 통상의 약제학적 무기 및/또는 유기 부형제, 예를 들면, 탈쿰, 락토오즈 또는 전분, 및 통상의 약제학적 보조제, 예를 들면, 윤활제 또는 정제 붕해제를 포함할 수 있다. 활성 물질들의 현탁액 또는 유화액과 같은 액체의 약제학적 조성물들은 물, 오일 및/또는 폴리에틸렌글리콜 등과 같은 현탁제와 같은 통상의 희석제를 포함할 수 있다. 다른 보조제로는 보존제, 미각 교정제 등과 같은 것을 부가적으로 첨가할 수 있다.

상기 활성 물질들은 공지의 방법으로 약제학적 보조제 및/또는 부형제와 혼합되어 제제화될 수 있다. 고체 약물 형태의 제조를 위해, 활성 물질들은, 예를 들면, 통상의 방법으로 보조제 및/또는 부형제와 혼합될 수 있고, 습식 또는 건식 과립화될 수 있다. 과립들 또는 분말은 통상의 방법으로 캡슐에 직접 부어지거나, 정제 중앙내로 압축되어 질 수 있다. 원한다면, 이들은 공지의 방법으로 코팅될 수 있다.

다음의 실시예들을 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하지만, 이들에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것은 아니다.

질량 스펙트럼을 하기의 방법을 사용하여 측정하였다.

HPLC-MS: LC200 펌프(PE)에 결합된 API100 Quadrupol 질량 분광계

(PE Applied Biosystems). 일렉트로스프레이 이오니제이션,

양성 모드. 스캔 범위 m/z 100~1000. 소프트웨어 매스

크롬 1.2. Xterra^? 컬럼(4.6mm×50mm, 2.5㎛).

용매 시스템: 물(10mM 암모늄아세테이트, pH 5) 및 아세토니트릴, 10분

동안에 아세토니트릴 5~95%의 선형 기울기.

실시예 1:

에틸 2-{[(3S)-1-({[1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라 히드로 -1 H -1- 벤자제핀 -3-일]아미노} 카보닐 ) 시클로펜틸 ] 메틸 }-4-( 이소프로필아미노 )-4- 옥소부티레이트

A) 91.9ml의 벤질 알콜을 99.07g의 무수이타콘산에 첨가한 후, 혼합물을 65 ℃에서 8시간 동안 교반하였다. 냉각시켜 생성된 결정들을 35ml의 n-헥산:디에틸에테르=2:1(v/v)의 혼합물과 함께 슬러리로 제조하고, 용매를 여과하여 제거하였다. 결과의 조(crude) 생성물을 따뜻한 조건에서, 150ml의 디에틸에테르에 용해시키고, 다시 80ml의 n-헥산을 첨가하여 결정화시켰다. 회수된 알칼리 모액을 상기 방법에 따라 환원시키고, 재결정화시킨 후에, 얻어진 결정들을 최종적으로 주(main) 중량에 첨가하였다. 120g의 2-[(2-벤질옥시)-2-옥소에틸]아크릴산을 얻었으며, 더 이상의 정제없이 다음 반응에 직접 사용하였다. ¹H-NMR (CDCl₃): 7.35, m, [5]; 6.47, s, [1]; 5.83, s, [1]; 5.15, s, [2]; 3.40, s, [2] ppm.

B) 상기에서 얻은 2-[(2-벤질옥시)-2-옥소에틸]아크릴산을 메틸-터셔리-부틸에테르(=MTBE) 100ml에 현탁시키고, 피리딘 0.5ml를 여기에 첨가하였다. 여기에, 티오닐클로라이드 47ml를 적가하고, 결과의 혼합물을 환류 냉각하에 1.5시간 동안 가열하여 끓였다. 실온으로 냉각한 후에, 감압하에서 대략적으로 건조시키기 위하여 증발시켰다. 결과의 잔류물을 디클로로메탄 50ml에 용해시키고, 0~5℃에서 디클로로메탄 150ml내에 에탄올 16ml 및 트리에틸아민 36.5ml를 포함하는 용액에 적가하였다. 첨가가 끝난 후, 약 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 그런 다음, 연속하여 1회당 250ml의 물로 2회, 100ml의 희석 중탄산나트륨 수용액으로 1회, 마지막으로 포화 식염 수용액으로 1회 세척하였다. 유기층을 소듐설페이트 상에서 건조시킨 후에, 감압하에서 가능한한 증발시켰다. 결과 잔류물을 0.015mbar 및 150℃에서 증류시켜, 2-메틸렌숙신산-4-벤질에스테르-1-에틸에스테르 56.3g을 얻었으며, 다음 반 응을 위해 정제 또는 특성측정없이 직접 사용되었다.

C) 질소 분위기하에서, 디이소프로필아민 118ml를 3리터의 건조 테트라히드로퓨란(=THF)에 용해시키고, 용액을 0℃로 냉각시켰다. n-헥산중의 2.5M의 n-부틸리튬 용액 340ml를 상기 용액에 첨가하고, 첨가가 끝난 후, 45분 동안 0℃에서 계속해서 교반하였다. 그런 다음, 0~5℃에서, 100ml의 건조 THF중의 45g의 시클로펜타카르복실산의 용액을 결과의 혼합물에 적가하고, 그런 다음, 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. -80℃로 냉각시키고, 100ml의 THF중의 상기에서 얻은 72.6g(여러 배치에서 얻은 전체량)의 2-메틸렌숙신산-4-벤질에스테르-1-에틸에스테르 용액을 적가하였다. -75℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 2N 수성 염산 1.5리터를 첨가하였다. 해동시켜, 상분리가 된 후에, 수층은 에틸아세테이트(=EA)로 두번 추출하였고, 유기층은 모아서, 소듐설페이트 상에서 건조시켰다. 용매를 감압하에서 증발시키고, 휘발성 물질은 0.02mbar 및 140℃에서 증류시켜 분리제거하였다. 증류후에 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토크래피에 적용하여, 1-[4-(벤질옥시)-2-(에톡시카보닐)-4-옥소부틸]시클로펜탄카르복실산 22.8g을 얻었다; ¹H-NMR (CDCl₃): 7.33, m, [5]; 5.10, s, [2]; 4.04, m, [2]; 2.88, m, [1]; 2.80-2.48,AB-Q., [2]; 2.2-2.1, m, [2]; 1.7-1.4, m, [6]; 1.20, tr, [3].

D) 상기에서 얻은 49.5g(여러 배치에서 얻은 전체량)의 1-[4-(벤질옥시)-2-(에톡시카보닐)-4-옥소부틸]시클로펜탄카르복실산을 디클로로메탄 435ml에 용해시켰다. 얻어진 용액에 터셔리-부틸-[(3S)-3-아미노-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로)-1H- 벤자제핀-1-일]아세테이트(제조를 위해 EP 0 733 642 A1 참조) 39.5g, 히드록시벤조트리아졸 18.3g, 몰포린 60ml를 첨가하였다. 그런 다음, 결과의 혼합물의 일부에 EDC x HCl을 첨가하고, 실온에서 하루동안 교반하였다. 그런 다음, 용매를 감압에서 증발시켰고, 잔류물을 750ml의 EA에 투입했다. 유기층을 연속하여 1회당 100ml의 2N 수성 염산으로 2회, 1회당 100ml의 물로 2회, 및 100ml의 포화 식염 수용액으로 1회 세척한 후, 소듐설페이트 상에서 건조시켰다. 감압에서 용매를 증발시켰고, 잔류물은 오일 펌브 진공(5×10^-2mbar)에서 건조시켰다. 노란색 오일로서, 2-{[(3S)-1-({[1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}숙신산-4-벤질-에스테르-1-에틸-에스테르 87.9g을 얻었으며, 계속되는 반응을 위하여 더 이상의 정제 또는 특성측정없이 사용하였다.

E) 상기에서 얻은 87.9g의 2-{[(3S)-1-({[1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}숙신산-4-벤질에스테르-1-에틸에스테르를 600ml의 에틸아세테이트(=EA)에 용해시키고, 활성탄소상의 팔라듐 20g을 여기에 첨가하였다. 1bar의 수소 압력하에서 2시간 동안 수소화반응시킨 다음, 반응 혼합물을 셀라이트로 여과하였다. 이후, 필터 케익을 1.5리터의 EA로 세척하고, 회수된 유기층을 감압하에서 완전히 증발시켰다. 잔류물에 500ml의 EA/시클로헥산(1:1, v/v)을 투입한 후, 1회당 200ml의 반포화 Na₂CO₃ 용액으로 2회 추출하였다. 수층을 진한 KHSO₄ 용액으로 산성화시키고, 1회당 200ml의 EA로 3회 추출하였다. 소듐설페이트상에서 건조시킨 후에, 감압하에서 증발시켰다. 오일 펌프 진공내에서 잔류물을 건조하여, 흰색 폼(foam)으로서, 3-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-메톡시-4-옥소부티르산을 71g 얻었다. ¹H-NMR (CDCl₃): 7.31-7.17, m, [3]; 7.11,d, [0.5]; 7.08,d, [0.5]; 6.81,d, [0.5]; 6.73, d, [0.5].

원한다면, 이 공정에서 얻은 중간체를, 예비 고성능액체크로마토그래피(=HPLC)에 의해 그것의 부분입체이성질적으로 순수한 성분들로 분리할 수 있다. 상기에서 얻은 70g의 중간체를 하기의 방법을 사용하여 분리하였다.

컬럼: LC80-1, 23.4×8cm; 정지상: 740g 키랄팩AD, 20μ; 이동상: 헵탄/이소프로판올(85:15); UV 검출; 주기 시간: 45분;

분석: 정지상: 키랄팩AD, 20μ; 이동상: 헵탄/이소프로판올(9:1); 유동 속도: 2ml/min; 주기 시간: 15분.

11.6분의 체류 시간(retention time)에서, 첫번째 입체이성질체인 (3"rel1")-3-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-에톡시-4-옥소부티르산 30g을 얻었고, 이는 -COOR¹ 기를 갖는 키랄 중심 "^*C_a"와 관련하여 "rel1" 의 표시로 지정하였다: ¹H-NMR(CDCl₃): 7.31-7.18, m, [3]; 7.09, d, [1]; 6.74, d, [1]; 4.53, 4.48, 4.37, 4.32, AB-Q., [2]; 4.48, m, [1]; 4.11, m, [1].

6.5분의 체류 시간에서, 두번째 입체이성질체인 (3"rel2")-3-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]에틸}-4-에톡시-4-옥소부티르산 33g을 얻었고, 이는 "-COOR¹" 기를 갖는 키랄 중심 "^*C_a"와 관련하여 "rel2"의 표시로 지정하였다: ¹H-NMR (CDCl₃): 7.31-7.17, m, [3]; 7.11, d, [2]; 6.81, d, [1]; 4.60, 4.56, 4.35, 4.31, AB-Q. [2]; 4.48, m, [1]; 4.10, m, [1]; [α]_D = -136°(메탄올중의 1%).

F) 상기에서 얻은 3-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-에톡시-4-옥소부티르산 4g을 15ml의 디클로로메탄에 용해시켰다. 이 용액을 0℃로 냉각시킨 후에, 여기에 1.12ml의 트리에틸아민 및 0.77ml의 에틸클로로포르메이트를 연속적으로 천천히 적가하고, 상기 혼합물을 0℃에서 30분간 교반하였다. 그런 다음, 여기에 0.94ml의 이소프로필아민을 첨가한 다음, 0℃에서 3시간 동안 더 교반하였다. 감압하에서 상기 용매를 대부분 증발시키고, 잔류물을 100ml의 EA에 투입하였다. 유기층을 1회당 50ml의 포화 KHSO₄ 수용액 및 50ml의 포화 식염 수용액으로 한번씩 연속적으로 세척한 후에, 소듐설페이트 상에서 건조하고, 감압하에서 용매를 대부분 증발시켰다. 오일 펌프 진공내에서 잔류물을 건조하여, 노란색 오일로서 상기 표제 화합물 4.29g을 얻었다; MS: [M＋H]^＋: 586; m/z: 530; 484; 425.

실시예 2

2-{[(3S)-1-({[1-( 카르복시메틸 )-2-옥소-2,3,4,5- 테트라히드로 -1 H -1- 벤자제핀 -3-일]아미노} 카보닐 ) 시클로펜틸 ] 메틸 }-4-( 이소프로필아미노 )-4- 옥소부티르산

상기 1E에서 얻어진 9.97g의 에틸 2-{[(3S)-1-({[1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(이소프로필아미노)-4-옥소부티레이트를 물/에탄올 혼합물(1:1 v/v) 200ml내에 용해시키고, 여기에 6.64g의 고체 NaOH를 교반하면서 첨가하였다. 하룻밤동안 교반한 다음, 용매를 감압하에서 거의 완전히 증발시키고, 잔여물을 100ml의 EA에 투입하였다. 수층을 포화 KHSO₄ 수용액으로 중화시키고, EA로 3회 추출하였다. 회수된 유기층을 100ml의 포화 식염 수용액으로 세척하고, 소듐설페이트상에서 건조하였다. 감압하에서 용매를 증발시키고, 오일 펌프 진공에서 잔류물을 건조하여 표제 화합물을 5.59g 얻었다.

실시예 3

(2"rel1")-2-{[(3S)-1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(이소프로필아미노)-4-옥소 부티르산

상기 실시예 2에서 얻어진 400mg의 부분입체이성질체 혼합물을 하기의 공정에 따라 HPLC로 분리하였다:

컬럼: LC80-1, 25×8cm; 정지상: 키랄팩AD, 20μ; 이동상: 헵탄/이소프로판올 85:15(v/v) + 0.1% v/v 트리플루오로아세트산 (= TFA); UV 검출; 유동 속도: 1 ml/min.; 주기 시간: 15분;

분석: 컬럼: DAICEL 키랄팩AD; 길이: 250mm; 직경: 4.6mm; 이동상: n-헵탄 800ml, 2-프로판올 200ml, TFA 2ml; 유동 속도: 0.8ml/min.; 분석 시간: 30분.

이러한 조건으로, 13.5분의 체류 시간에서, 첫번째 입체이성질체(표제 화합물)를 EE로부터 침전된 흰색 고체로서 130mg 얻었고, 이는 "-COOR¹" 기를 갖는 키랄 중심 "^*C_a"과 관련하여 "rel1"의 표시로 지정하였다; ¹H-NMR (메탄올): 7.37-7.2, m, [4]; 4.76, 4.71, 4.43, 4.38, AB-Q.; 4.4, m, [1]; 3.90, m, [1]; 3.40, m, [1]; 2.22-2.60, m, [2]; 2.48-2.0, m, [12]; 1.10, d, [6]; [α]_D = -90°(메탄올중의 0.5%); Mp.:145℃.

이러한 조건으로, 16.2분의 체류 시간에서 두번째 입체이성질체를 얻었고, 이는 "-COOR¹" 기를 갖는 키랄 중심 "^*C_a"과 관련하여 "rel2"의 표시로 지정하였다.

실시예 4

{(3S)-3-[({1-[(2" rel1 ")-2- 에톡시카보닐 )-4-( 이소프로필아미노 )-4- 옥소부틸 ] 시클로펜틸 } 카보닐 )아미노]-2-옥소-2,3,4,5- 테트라히드로 -1 H -1- 벤자제핀 -1-일}아세트산

4.29g의 에틸(2"rel1")-2-{[(3S)-1-({[1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(이소프로필아미노)-4-옥소-부티레이트(1E 단계의 중간 생성물로 사용된, HPLC 분리로 얻어진 (3"rel1")-3-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-에톡시-4-옥소부티르산을 사용한 것을 제외하고는 실시예 1과 유사하게 제조됨)를 30ml의 디클로로메탄에 용해시키고, TFA 17ml를 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤동안 놓아두고 나서, 용매 및 과량의 TFA를 감압하에서 증발시켰다. 잔류물을 100ml의 EA에 투입하고, 유기층을 pH가 중성이 될때까지 물로 세척하였다. 유기층을 소듐설페이트 상에서 건조시킨 다음, 용매를 감압하에서 거의 완전히 증발시켰다. 1회당 톨루엔 30ml 를 잔류물에 2회 첨가하고, 혼합물을 다시 감압하에서 증발시켰다. 오일 펌프 진공에서 잔류물을 건조하여, 흰색 폼으로서 표제 화합물 2.8g을 얻었다; ¹H-NMR (CDCl₃): 7.33, m, [4]; 6.82, d, [1]; 5.86, d, [1]; 4.64, m, [1]; 4.54, 4.50, 4.46, 4.42, AB-Q.; 3.20, m, [1]; 1.23, [3]; 1.09, [6]; [α]_D: -155°(메탄올중의 1%).

실시예 5

에틸(2"rel1")-2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(3-히드록시프로필)아미노]-4-옥소부티레이트

4.2g의 (3"rel1")-3-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-에톡시-4-옥소부티르산(실시예 1E에 따른 부분입체이성질체 혼합물의 제조 및 계속되는 HPLC에 의한 부분입체이성질체의 분리)을 디클로로메탄 30ml에 용해시켰다. 3-아미노-1-프로판올 1.17ml, 디메틸아미노피리딘 235mg, 및 EDC 1.61g을 교반하면서 상기 용액에 첨가하였다. 1시간 후에, 혼합물을 감압하에서 대부분 증발시켰고, 잔류 물을 100ml의 EA에 투입하고, 유기층을 1회당 30ml의 희석 KHSO₄ 수용액으로 2회 진탕하면서 추출하였다. 유기층을 1회당 30ml의 포화 식염 수용액으로 2회 이상 세척하고, 소듐설페이트 상에서 건조시킨 다음, 용매를 감압하에서 대부분 증발시켰다. 오일 펌프 진공에서 잔류물을 건조시켰고, 흰색 폼 수지로서 표제 화합물 4g을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 602; m/z: 546, 500, 425; ¹H-NMR (CDCl₃): 7.32-7.18, m, [3]; 7.12, d, [2]; 6.63, d, [1]; 6.49, tr, [1]; 4.57, 4.63, 4.34, 4.30, AB-Q. [2]; 4.51, m, [1]; 4.11, m, [2]; 3.57, tr, [2].

실시예 6

에틸(2"rel1")-4-{[3-(아세틸옥시)프로필]아미노}-2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부티레이트

상기 실시예 5에서 얻어진 1g의 에틸(2"rel1")-2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노]}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(3-히드록시프로필)-아미노-4-옥소부티레이트를 디클로로메탄 20ml에 용해시키고, 여기에 340㎕의 아세틸클로라이드를 첨가하였다. 90분 후, 용매를 감압하에서 대부분 증발시키고, 잔류물을 20ml의 EA에 투입하고, 10ml의 희석 중탄산나트륨 수용액으로 세척하였다. 그런 다음, 마그네슘설페이트 상에서 건조시키고, 감압하에서 용매를 대부분 증발시키고, 잔류물을 실리카겔 크로마토크래피에 적용시켰다(이동상:EA/n-헥산=7:3 v/v). 오일 펌프 진공에서 생성물 분획들(fractions)을 건조하여, 무색의 오일로서 표제 화합물 920g을 얻었다; MS: [M+H]: 644; m/z: 588, 542, 482, 425.

실시예 7

{(3"rel1")-3-[({1-[(2S)-4-{[3-(아세틸옥시)프로필]아미노}-2-(에톡시카보닐)-4-옥소부틸]시클로펜틸}카보닐)아미노]-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-1-일}아세트산

상기 실시예 6에서 얻어진 929mg의 에틸(2"rel1")-4-{[3-(아세틸옥시)프로필]아미노}-2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부티레이트를 디클로로메탄 10ml에 용해시키고, 여기에 TFA 2.2ml를 첨가하였다. 혼합물을 하룻밤동안 놓아두고, 그런 다음, 감압하에서 용매를 대부분 증발시키고, 잔류물을 30ml의 EA에 투입하였다. pH가 중성이 될때까지 유기층을 물로 세척하고, 다시 감 압하에서 대부분 증발시키고, 잔류물을 1회당 10ml의 톨루엔으로 2회 증발시켰다. 흰색 폼 수지로서 표제 화합물 750mg을 얻었다; MS: [M+H]: 588; m/z: 542, 482, 425; ¹H-NMR (CDCl₃): 7.33-7.14, m, [4]; 6.67, d, [1]; 6.59, tr, [1]; 4.69, 4.64, 4.35, 4.30, AB-Q., [2]; 4.63, m, [1]; 4.17, m, [1]; 4.09, q, [2]; 3.33, m, [1]; 3.15, m, [2].

실시예 8

((3S)-3-{[(1-{(2"rel1")-2-에톡시카보닐)-4-[(3-히드록시프로필)아미노]-4-옥소부틸]시클로펜틸}카보닐)아미노]-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-1-일} 아세트산

580mg의 에틸(2"rel1")-2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노]}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(3-히드록시프로필)아미노-4-옥소부티레이트(제조를 위해 실시예 5 참조)를 상기 실시예 4에 기술한 방법에 따라 TFA와 반응시켰다. 컬럼 크로마토그래피(정지상: 실리카겔; 이동상: EA:메탄올=9:1(v/v))에 의해 결과의 조 생성물을 정제한 후에, 무색 수지로서 표제 화합물 240mg을 얻었다. ¹H-NMR (CDCl₃): 7.34-7.15, m, [4]; 6.76, tr, [1]; 6.61, d, [1]; 4.75, 4.71, 4.20, 4.16, AB-Q., [2]; 4.57, m, [1]; 4.09, q, [2]; MS: [M+H]⁺: 546; [α]_D = -112.5°(메탄올중의 1%).

실시예 9

2-{[1-({[(3S)-1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(3-히드록시프로필)아미노]-4-옥소부티르산

6.43g의 에틸(2S)-2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(3-히드록시프로필)아미노]-4-옥소-부티레이트(제조를 위해 실시예 5 참조)를 물:에탄올=1:1(v/v)의 혼합물 140ml에 용해시키고, 여기에 4.28g의 고체 NaOH를 교반하면서 첨가하였다. 15시간 후에, 용매를 감압하에서 증발시키고, 잔류물을 100ml의 EA에 투입하고, 50ml의 KHSO₄ 수용액으로 1회 세척하였다. 수층을 1회당 30ml의 EA로 2회 추출하였다. 회수된 유기층을 1회당 30ml의 식염 수용액으로 2회 세척하고, 소듐설페이트 상에서 건조하였다. 용매를 건조하여 표제 화합물 5.41g을 얻었다.

실시예 10

(2"rel1")-2-{[1-({[(3S)-1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(3-히드록시프로필)아미노]-4-옥소부티르산

상기 실시예 9에서 얻어진 800mg의 이성질체 혼합물을 하기의 공정에 따라 예비 HPLC로 분리하였다:

정지상: Nucleosil 100-10; 컬럼: 250mm 길이, 20mm 직경; 유동 속도: 8　ml/min.; 이동상: n-헵탄(800ml), 2-프로판올(200ml), TFA(1ml).

분석: 정지상: EC 250/4 Nucleosil 100-10; 컬럼 250ml 길이, 4mm 직경, 유동 속도: 1.5ml/min.; 이동상: n-헵탄(800ml), 2-프로판올(200ml), TFA(1ml).

이러한 조건으로, 7.89분의 체류 시간에서, 200mg의 첫번째 입체이성질체(=표제 화합물)를 얻었고, 이는 "-COOR¹" 기를 갖는 키랄 중심 "^*C_a"와 관련하여 "rel1"의 표시로 지정하였다; ¹H-NMR (CD₃OD): 7.38, m, [4]; 4.78, 4.73, 4.43, 4.38, AB-Q., [2]; 4.41, m, [1]; 3.93, m, [1]; 3.56, tr [2]; 3.40, m, [1]; 3.31, m, [1]; 3.22, m, [2]; 2.78, m, [1]; 2.65, m, [1].

이러한 조건으로, 4.47분의 체류 시간에서 두번째 입체이성질체를 얻었고, 이는 "-COOR¹" 기를 갖는 키랄 중심 "^*C_a"와 관련하여 "rel2"의 표시로 지정하였다.

실시예 11

2-{[1-({[(3S)-1-(2- 에톡시 -2- 옥소에틸 )-2-옥소-2,3,4,5- 테트라히드로 -1 H -1- 벤자제핀 -3-일]아미노} 카보닐 ) 시클로펜틸 ] 메틸 }-4-[(3-히드록시프로필)아미노]-4- 옥소부티르산

상기 실시예 9에 따라 얻어진 800mg의 2-{[1-({[(3S)-1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(3-히드록시프로필)아미노]-4-옥소부티르산(이성질체 혼합물)을 15ml의 디메틸포름아마이드(=DMF)에 용해시켰다. 302.5mg의 Cs₂CO₃ 및 169mg의 에틸브로마이드를 실온에서 교반하면서 상기 용액에 첨가하였다. 하룻밤동안 교반한 후에, 42ml의 물 및 2ml의 디클로로메탄으로 희석시키고, 수층을 디클로로메탄으로 추출하였다. 감압하에서 용매를 대부분 증발시키고, 잔류물을 크로마토그래피에 적용하였다(정지상: 실리카겔, 이동상: EA(100%)에서 EE:MEOH=7:3(v/v)로 바뀜). 오일 펌프 진공(5×10^-2mbar)에서 생성물 분획들을 건조시키고, 폼 수지로서 표제 혼합물 241g을 얻 었다; MS: [M+H]⁺: 546; m/z: 453, 425, 379; 1H-NMR (CDCl₃): 7.34-7.1, m, [4]; 4.82, 4.77, 4.34, 4.29, AB-Q-. [2]; 3.62, m, [2]; 3.37, m, [3].

실시예 12

2-{[1-({[(3S)-1-(2- 터셔리 - 부톡시 -2- 옥소에틸 )-2-옥소-2,3,4,5- 테트라히드로 -1H-1- 벤자제핀 -3-일]아미노} 카보닐 ) 시클로펜틸 ] 메틸 }-4-( 이소프로필아미노 )-4-옥소부티르산

2.6g의 에틸2-{[(3S)-1-({[1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(이소프로필아미노)-4-옥소부티레이트(제조를 위해 실시예 1 참조)를 52ml의 에탄올에 용해시켰다. 52ml의 물중의 710mg의 고체 NaOH용액을 상기 용액에 첨가하였다. 30분 후에, 희석된 KHSO₄ 수용액으로 대략 pH 2가 되게 산화시키고, 수층을 1회당 50ml의 EA로 3회 추출하였다. 회수된 유기층을 마그네슘설페이트 상에서 건조시키고, 감압하에서 용매를 대부분 증발시키고, 잔류물을 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(이동상: EA:시클로헥산=2:1)에 적용하였다. 오일 펌프 진공(5×10^-2mbar)에서 생성물 분 획들을 건조시키고, 흰색 폼 수지로서 표제 화합물 2.2g을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 558; m/z: 502, 425, 397, 323.

실시예 13

4-클로로벤질-2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(이소프로필아미노)-4-옥소부티레이트

상기에서 얻은 300mg의 2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(이소프로필아미노)-4-옥소부티르산을 디클로로메탄 5ml에 용해시켰다. 여기에 4-디메틸아미노피리딘(=DMAP) 33mg, 4-클로로벤질알콜 85mg, 및 EDC x HCl 124mg을 첨가한 다음, 하룻밤동안 교반하였다. 혼합물을 디클로로메탄 5ml로 희석시키고, 연속하여 유기층을 2ml의 희석 KHSO₄ 수용액 및 2ml의 포화 식염 수용액으로 각각 한번씩 세척하였다. 유기층을 마그네슘설페이트 상에서 건조시키고, 감압하에서 용매를 건조시키기 위하여 대부분 증발시켰으며, 잔류물을 실리카겔 상에서 크로마토그래피(이동상: EA:시클로헥산=3:2 v/v)에 적용하였다. 오일 펌프 진공(5×10^-2mbar) 에서 생성물 분획들을 건조시키고, 흰색 폼으로서 표제 화합물 320g을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 682/684; m/z: 626/628, 576, 484, 425.

실시예 14

{(3S)-3-[({1-[2-{[(4-클로로벤질)옥시]카보닐}-4-(이소프로필아미노)-4-옥소부틸]시클로펜틸}카보닐)아미노]-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-1-일}아세트산

상기에서 얻은 318g의 4-클로로벤질-2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(이소프로필아미노)-4-옥소부티레이트를 디클로로메탄 11ml에 용해시키고, 여기에 1.08ml의 TFA를 첨가시킨 후, 혼합물을 하룻밤동안 교반하였다. 그런 다음, 감압하에서 용매를 대부분 증발시키고, 잔류물을 10ml의 EA에 투입하고, 유기층을 pH-중성이 될때까지 물로 세척하였다. 그런 다음, 감압하에서 용매를 다시 증발시키고, 잔류물을 톨루엔 5ml로 증발시켰다. 흰색 폼 수지로서 표제 화합물 305mg을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 626/628; m/z: 657, 484, 425.

실시예 15

(2-메톡시에톡시)메틸-2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥 소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(이소프로필아미노)-4-옥소부티르산

300mg의 2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(이소프로필아미노)-4-옥소부티르산(제조를 위해 실시예 12 참조)을 디클로로메탄 5ml에 용해시켰다. DMAP 33mg, 메톡시에톡시메틸클로라이드 74㎕, 트리에틸아민 90㎕를 상기 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 하룻밤동안 교반한 다음, 디클로로메탄 5ml로 희석시키고, 유기층을 연속으로 3ml의 희석 KHSO₄ 수용액 및 포화 식염 수용액으로 각각 한번씩 세척하였다. 유기층을 마그네슘설페이트 상에서 건조시키고, 감압하에서 용매를 대부분 증발시키고, 잔류물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 적용시켰다(이동상: EA:시클로헥산=2:1 v/v). 생성물 분획들을 오일 펌프 진공에서 건조시켜, 표제 화합물 191g을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 646; m/z: 590, 540, 484, 425.

실시예 44

에틸(2"rel1")-2-{[1-({[(3S)-1-(2-에톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(3-히드록시프로 필)아미노]-4-옥소부티레이트

140mg의 {(3S)-3-[({1-[(2"rel1")-2-에톡시카보닐)-4-(이소프로필아미노)-4-옥소부틸]시클로펜틸}카보닐)아미노]-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-1-일}아세트산(제조를 위해 실시예 4 참조)을 에탄올 3ml에 용해시키고, 여기에 진한 황산 5방울을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 교반하였다. 그런 다음, 감압하에서 용매를 대부분 제거하고, 잔류물을 5ml의 EA에 투입하였다. 유기층을 1회당 2ml의 NaHSO₄ 수용액으로 2회 세척하였다. 소듐설페이트 상에서 건조 후에, 용매를 감압하에서 증류제거하고, 잔류물을 실리카겔상에서 크로마토그래피에 적용시켰다. 흰색 폼으로서 표제 화합물 46mg을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 574; m/z: 528, 323; ¹H-NMR (CDCl₃): 7.33-7.11, m, [4]; 6.69, m, [1]; 6.44, m, [1]; 4.79, 4.75, 4.34, 4.30, AB-Q-. [2]; 4.48, m, [1].

또한, 표 9에 나타낸 일반식Ⅰ의 화합물은 실시예에 개시된 공정 또는 이것과 유사한 공정에 따라 제조될 수 있다.

표 9: 일반식Ⅰ의 추가 화합물

표 9, 계속; rac=라세믹; Bn=벤질

실시예 69

터셔리-부틸 2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(4-히드록시피페리딘-1-일)-4-옥소부타노에이트

A) 실시예 1B)에 개시된 공정에 따라, 100g의 2-[(2-벤질옥시)-2-옥소에틸]아크릴산(제조를 위하여 실시예 1A 참조)을 티오닐클로라이드 47ml, 터셔리-부탄올 43ml 및 피리딘 110ml와 반응시켜 2-메틸렌숙신산-4-벤질에스테르-1-터셔리-부틸에스테르를 69.8g 얻었다; [M+H]⁺: 277.

B) 실시예 1C에서 개시된 공정에 따라, 상기에서 얻은 29.6g의 2-메틸렌숙신산-4-벤질에스테르-1-터셔리-부틸에스테르를 디이소프로필아민 41.4ml, n-헥산중의 1.6M n-부틸리튬 용액 200ml, 및 시클로펜탄카르복실산 12ml와 반응시켜 1-[4-(벤질옥시)-2-(터셔리-부톡시카보닐)-4-옥소부틸]시클로펜탄카르복실산을 24.5g 얻었다.

C) 실시예 1D)에 개시된 공정에 따라, 상기에서 얻은 15.8g의 1-[4-(벤질옥시)-2-(터셔리-부톡시카보닐)-4-옥소부틸]시클로펜탄카르복실산을 11.75g의 터셔리-부틸-[(3S)-3-아미노-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로)-1H-벤자제핀-1-일]아세테이트(제조 를 위해 EP 0 733 642 A1 참조)와 반응시켜서 2-{[(3S)-1-({[1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}숙신산-4-벤질에스테르-1-터셔리-부틸-에스테르를 21g 얻었다

D) 실시예 1E)에 개시된 공정에 따라, 상기에서 얻은 21g의 2-{[(3S)-1-({[1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}숙신산-4-벤질에스테르-1-터셔리-부틸-에스테르를 활성탄소상의 팔라듐 6g으로 처리하고, 1.3bar의 수소 압력으로 12시간 동안 수화반응하여 4-터셔리-부톡시-3-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산을 10g 얻었다; MS: [M+H]⁺: 573; m/z: 517, 461; ¹H-NMR (CDCl₃): 7.31-7.17, m, [3]; 7.10, m, [1]; 6.80, d, [0.5]; 6.72, d, [0.5]; 4.60-4.30, m, [3]; 3.30, m, [0.5]; 3.17, m, [0.5].

E) 상기에서 얻은 1.11g의 4-터셔리-부톡시-3-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산을 7.8ml의 디클로로메탄에 용해시키고, 트리에틸아민 300㎕를 첨가하였다. 차가운 수조에서 0℃로 냉각시킨 후에, 222㎕의 에틸클로로포르메이트를 상기 용액에 적가하였다. 상기 혼합물을 30분간 교반시킨 다음 216mg의 4-히드록시피페리딘을 첨가하고, 하룻밤동안 교반하였다. 상기 혼합물을 EA로 희석시키고, KHSO₄ 수용액과 염수로 세척하였다. 마그네슘설페이트 상에서 유 기층을 건조하고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(이동상: EA:시클로헥산=1:1(v/v)에서 순수 EA로, 그리고 다시 EA:메탄올=4:1(v/v)로 바뀜)에 적용하여 흰색 폼으로서 표제 화합물 550mg을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 656; m/z: 425, 397, 323.

실시예 70

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소-4-[4-(L-발릴옥시)피페리딘-1-일]부탄산

A) 상기 실시예 67에서 얻어진 548mg의 터셔리-부틸 2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(4-히드록시피페리딘-1-일)-4-옥소부타노에이트를 디클로로메탄 3ml에 용해시켰다. 그런 다음, DMAP 51mg, BOC-L-발린 182mg 및 EDC 176mg을 첨가하였다. 3시간 동안 교반후에 혼합물을 EA로 희석하고, 계속해서 KHSO₄ 수용액과 염수로 세척하였다. 마그네슘설페이트 상에서 유기층을 건조시키고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(이동상: EA:시클로헥산=1:1(v/v)에서 순수 EA로 바뀜)에 적용하여 1-(4-터셔리-부톡시-3-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥 소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부타노일)피페리딘-4-일-N-(터셔리-부톡시카보닐)-L-발리네이트를 551mg 얻었다; MS: [M+H]⁺: 855; m/z: 699, 643, 625, 425, 397, 323, 235.

B) 상기에서 얻은 551mg의 1-(4-터셔리-부톡시-3-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부타노일)피페리딘-4-일-N-(터셔리-부톡시카보닐)-L-발리네이트를 디클로로메탄 14ml에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 1.49ml를 상기 용액에 첨가하였다. 하룻밤동안 교반후에, 과량의 산을 감압하에서 증발시켰다. EA를 잔류물에 첨가하였고, 유기층을 pH 4가 될때까지 포화 중탄산나트륨 수용액으로 세척하였다. 그런 다음, 수층을 EA로 3회 추출하였고, 회수된 유기층을 마그네슘설페이트 상에서 건조하였다. 감압하에서 용매를 증발시키고 나서, 오일 펌프 진공에서 잔류물을 건조시켜, 흰색 폼으로서 표제 화합물 310mg을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 643; m/z: 425, 397, 323.

실시예 71

터셔리-부틸 2-{[1-({[(3S)-1-(2-에톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[이소프로필(메틸) 아미노]-4-옥소부타노에이트

A) 실시예 1D)에 개시된 공정에 따라, 20g의 1-[4-(벤질옥시)-2-(터셔리-부톡시카보닐)-4-옥소부틸]시클로펜탄카르복실산(제조를 위해 실시예 69B 참조)을 13.4g의 에틸-[(3S)-3-아미노-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로)-1H-벤자제핀-1-일]아세테이트(EP 0 733 642 A1에 기재된 방법과 유사하게 제조)와 반응시켜서 4-벤질-1-터셔리-부틸-2-{[1-({[(3S)-1-(2-에톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}숙시네이트를 28.6g 얻었다.

B) 실시예 1E)에 개시된 공정에 따라, 상기에서 얻은 28.6g의 4-벤질-1-터셔리-부틸-2-{[1-({[(3S)-1-(2-에톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}숙시네이트를 활성 탄소상의 팔라듐 5g으로 처리하고, 4.5시간 동안 2.3bar의 수소 압력하에서 수화반응시켜서, 4-터셔리-부톡시-3-{[1-({[(3S)-1-(2-에톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부타논산을 16g 얻 었다; [M＋H]^＋: 545; m/z: 489.

C) 실시예 1F)에 개시된 공정에 따라, 상기에서 얻은 3g의 4-터셔리-부톡시-3-{[1-({[(3S)-1-(2-에톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산을 859㎕의 메틸이소프로필아민과 반응시켜서 흰색 폼으로서 표제 화합물 1.6g을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 600; m/z: 544.

실시예 72

2-{[1-({[(3S)-1-(2-에톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[이소프로필(메틸)아미노]-4-옥소부탄산

실시예 69에서 얻어진 507mg의 터셔리-부틸 2-{[1-({[(3S)-1-(2-에톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[이소프로필(메틸)아미노]-4-옥소-부타노에이트를 디클로로메탄 18ml에 용해시키고, 트리플루오로아세트산 1.95ml를 상기 용액에 첨가하였다. 하룻밤동안 교반후에 용매 및 과량의 산을 감압하에서 증발시켰다. EA를 잔류물에 첨가하고, 수층이 pH 5가 될때까지 유기층을 포화 중탄산나트륨 수용액으로 세척하였다. 그런 다음, 유기층을 마그네슘설페이트 상에서 건조시켰다. 마그네슘설페이트 상에서 유기층을 건조시키고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(이동상: EA:시클로헥산=1:1 (v/v)에서 순수 EA로 바뀜)에 적용시켜 흰색 폼으로서 표제 화합물 430mg을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 544.

실시예 73

1-[(에톡시카보닐)옥시]에틸 2-{[1-({[(3S)-1-(2-에톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[이소프로필(메틸)아미노]-4-옥소부타노에이트

107mg의 2-{[1-({[(3S)-1-(2-에톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[이소프로필(메틸)아미노]-4-옥소부탄산(제조를 위해 실시예 72 참조)을 DMF 1ml에 용해시켰다. 그런 다음, 트리에틸아민 83㎕, 고체 K₂CO₃ 20mg, 및 클로로에틸에틸카보네이트 85㎕를 첨가하였다. 하룻밤동안 교반후에, 혼합물을 EA로 희석시키고, 연속해서 KHSO₄ 수용액과 염수로 세척하였다. 마그네슘설페이트 상에서 유기층을 건조시키고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피에 적용하여 흰색 폼으로서 표제 화합물 41mg을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 660; m/z: 526, 449, 310, 253.

실시예 74

1-[(에톡시카보닐)옥시]에틸 2-{[1-({[(3S)-1-(2-{1-[(에톡시카보닐)옥시]에톡시}-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[이소프로필(메틸)아미노]-4-옥소부타노에이트

500mg의 에틸 2-{[1-({[(3S)-1-(2-터셔리-부톡시-2-옥소에틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[이소프로필(메틸)아미노]-4-옥소-부타노에이트(실시예 2와 유사한 합성, 실시예 32 참조)를 DMF 10ml에 용해시켰다. 그런 다음, 클로로에틸에틸카보네이트 312㎕, 고체 Cs₂CO₃ 758mg, 및 고체 요오드칼륨 80mg을 첨가하였다. 60℃에서 5시간 동안 교반한 후, 혼합물을 EA로 희석시킨 다음, 물로 2회 세척하였다. 마그네슘설페이트 상에서 유기층을 건조시키고, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(이동상: 시클로헥산에서 EA:시클로헥산=1:1(v/v)로 바뀜)에 적용하여 흰색 오일로서 표제 화합물 360mg 을 얻었다; MS: [M+H]⁺: 748; m/z: 614, 480.

실시예 I:

{(3S)-3-[({1-[(2"rel1")-2-에톡시카보닐)-4-(이소프로필아미노)-4-옥소부틸]시클로펜틸}카보닐)아미노]-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-1-일}아세트산을 포함하는 캡슐들:

캡슐 한개당 다음의 조성물을 갖는 캡슐을 제조하였다:

{(3S)-3-[({1-[(2"rel1")-2-에톡시카보닐)-4-(이소프로필-아미노)-

4-옥소부틸]시클로펜틸}카보닐)아미노]-2-옥소-2,3,4,5-

테트라히드로-1H-1-벤자제핀-1-일}-아세트산 20mg

옥수수전분 60mg

락토오즈 300mg

EA q.s.

활성 물질, 옥수수전분 및 락토오즈를 EA를 사용하여 균일한 반죽 혼합물로 만들었다. 페이스트를 분쇄하고, 결과의 과립을 적당한 트레이에 놓고, 용매를 제거하기 위해서 45℃에서 건조시켰다. 건조된 과립을 분쇄기에 통과시키고, 다음의 보조제들과 함께 믹서에서 혼합하였다:

탈쿰 5mg

마그네슘스테아레이트 5mg

옥수수전분 9mg

을 400mg 캡슐내에 부었다(=캡슐 사이즈 0)

Claims

일반식Ⅰ의 화합물 또는 일반식Ⅰ의 산의 생리학적으로 허용가능한 염 또는 일반식Ⅰ의 화합물의 생리학적으로 허용가능한 산 부가염:

I

여기에서

R¹은 수소, 또는 C_1~4-알킬기; C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬기; C_3~7-시클로알킬기; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬기; N,N-디-(C_0~4-알킬)아미노-C_1~6-알킬기; 페닐고리에서 할로겐, C_1~4-알킬 또는 C_1~4-알콕시에 의하여 또는 두 개의 인접한 탄소원자에 결합된 C_1~4-알킬렌 사슬에 의하여 1회 또는 2회 선택적으로 치환된 페닐 또는 페닐-C_1~4-알킬기; 디옥소란 고리에서 C_1~4-알킬에 의하여 선택적으로 치환된 디옥소라닐메틸기; C_1~4-알킬에 의하여 옥시-C_1~4-알킬기에서 선택적으로 치환된 C_2~6-알카노일옥시-C_1~4-알킬기; 1-[[(C_1~4-알킬)카보닐]옥시]C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 이중 에스테르; 및 1-[[(C_4~7-시클로알킬옥시)카보닐]옥시] C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 카보네이트 에스테르로 이루어지는 군으로부터 선택되는 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기,

R²는 수소, C_1~4-알킬, 또는 히드록시기가 C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 C_1~4-히드록시알킬, 및

R³는 C_1~4-알킬; C_1~4-알콕시-C_1~4-알킬; 제2 히드록시기로 선택적으로 치환되고, 히드록시기들은 각각 C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 C_1~4-히드록시알킬; (C_0~4-알킬)₂아미노-C_1~6-알킬; C_3~7-시클로알킬; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬; 페닐기가 C_1~4-알킬, C_1~4-알콕시 또는 할로겐으로 1~2회 선택적으로 치환된 페닐-C_1~4-알킬 중의 적어도 하나; 나프틸-C_1~4-알킬; C_3~6-옥소알킬; 페닐기가 C_1~4-알킬, C_1~4-알콕시 또는 할로겐으로 1~2회 선택적으로 치환된 페닐카보닐메틸 중의 적어도 하나; 또는 2-옥소아제파닐, 또는

R² 및 R³는 메틸렌기가 카보닐, 질소, 산소 또는 황 중의 적어도 하나로 1~2회 선택적으로 치환 또는 C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 히드록시로 1회 선택적으로 치환된 C_4~7-알킬렌 중의 적어도 하나; C_1~4-알킬; 히드록시기가 C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 C_1~4-히드록시알킬; 페닐 또는 벤질, 및

R⁴는 수소, 또는 C_1~4-알킬기; C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬기; C_3~7-시클로알킬기; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬기; N,N-디-(C_0~4-알킬)아미노-C_1~6-알킬기; 페닐고리에서 할로겐, C_1~4-알킬 또는 C_1~4-알콕시에 의하여 또는 두 개의 인접한 탄소원자에 결합된 C_1~4-알킬렌 사슬에 의하여 1회 또는 2회 선택적으로 치환된 페닐 또는 페닐-C_1~4-알킬기; 디옥소란 고리에서 C_1~4-알킬에 의하여 선택적으로 치환된 디옥소라닐메틸기; C_1~4-알킬에 의하여 옥시-C_1~4-알킬기에서 선택적으로 치환된 C_2~6-알카노일옥시-C_1~4-알킬기; 1-[[(C_1~4-알킬)카보닐]옥시]C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 이중 에스테르; 및 1-[[(C_4~7-시클로알킬옥시)카보닐]옥시] C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 카보네이트 에스테르로 이루어지는 군으로부터 선택되는 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기이다.
제1항에 있어서,

R¹이 수소, 또는 C_1~4-알킬기; C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬기; C_3~7-시클로알킬기; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬기; N,N-디-(C_0~4-알킬)아미노-C_1~6-알킬기; 페닐고리에서 할로겐, C_1~4-알킬 또는 C_1~4-알콕시에 의하여 또는 두 개의 인접한 탄소원자에 결합된 C_1~4-알킬렌 사슬에 의하여 1회 또는 2회 선택적으로 치환된 페닐 또는 페닐-C_1~4-알킬기; 디옥소란 고리에서 C_1~4-알킬에 의하여 선택적으로 치환된 디옥소라닐메틸기; C_1~4-알킬에 의하여 옥시-C_1~4-알킬기에서 선택적으로 치환된 C_2~6-알카노일옥시-C_1~4-알킬기; 1-[[(C_1~4-알킬)카보닐]옥시]C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 이중 에스테르; 및 1-[[(C_4~7-시클로알킬옥시)카보닐]옥시] C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 카보네이트 에스테르로 이루어지는 군으로부터 선택되는 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기,

R²가 수소, C_1~4-알킬 또는 히드록시기가 C_2~4-알카노일로 선택적으로 치환된 C_1~4-히드록시알킬, 및

R³가 C_1~4-알킬; C_1~4-알콕시-C_1~4-알킬; 제2 히드록시기로 선택적으로 치환되고, 히드록시기들은 C_2~4-알카노일로 선택적으로 치환된 C_1~4-히드록시알킬; C_1~4-알킬아미노-C_1~4-알킬; C_3~7-시클로알킬; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬; 페닐기가 C_1~4-알킬, C_1~4-알콕시 또는 할로겐 중의 적어도 하나로 1~2회 선택적으로 치환된 페닐-C_1~4-알킬; 나프틸-C_1~4-알킬; C_3~6-옥소알킬; 페닐기가 C_1~4-알킬, C_1~4-알콕시 또는 할로겐 중의 적어도 하나로 1~2회 선택적으로 치환된 페닐카보닐메틸; 또는 2-옥소아제파닐, 또는

R² 및 R³는 메틸렌기가 카보닐, 질소, 산소 또는 황 중의 적어도 하나로 1~2회 선택적으로 치환되고, C_1~4-알킬로 1회 선택적으로 치환된 C_4~7-알킬렌; 히드록시기가 C_2~4-알카노일로 선택적으로 치환된 C_1~4-히드록시알킬; 산소; 페닐 또는 벤질, 및

R⁴가 수소, 또는 C_1~4-알킬기; C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬기; C_3~7-시클로알킬기; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬기; N,N-디-(C_0~4-알킬)아미노-C_1~6-알킬기; 페닐고리에서 할로겐, C_1~4-알킬 또는 C_1~4-알콕시에 의하여 또는 두 개의 인접한 탄소원자에 결합된 C_1~4-알킬렌 사슬에 의하여 1회 또는 2회 선택적으로 치환된 페닐 또는 페닐-C_1~4-알킬기; 디옥소란 고리에서 C_1~4-알킬에 의하여 선택적으로 치환된 디옥소라닐메틸기; C_1~4-알킬에 의하여 옥시-C_1~4-알킬기에서 선택적으로 치환된 C_2~6-알카노일옥시-C_1~4-알킬기; 1-[[(C_1~4-알킬)카보닐]옥시]C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 이중 에스테르; 및 1-[[(C_4~7-시클로알킬옥시)카보닐]옥시] C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 카보네이트 에스테르로 이루어지는 군으로부터 선택되는 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기인 일반식Ⅰ의 화합물 또는 일반식Ⅰ의 산의 생리학적으로 허용가능한 염 또는 일반식Ⅰ의 화합물의 생리학적으로 허용가능한 산 부가염.
제1항에 있어서, R¹이 수소, 에틸, 메톡시에톡시메틸, (RS)-1-[[(이소프로필)카보닐]옥시]에틸, (RS)-1-[[(에틸)카보닐]옥시]-2-메틸프로필, (RS)-1-[[(시클로헥실옥시)카보닐]-옥시]-에틸, 5-메틸-2-옥소-1,3-디옥소렌-4-일-메틸, 2-옥소-1,3-디옥소란-4-일-메틸 또는 (RS)-1-[[(에톡시)카보닐]옥시]-에틸인 일반식Ⅰ의 화합물.
제1항에 있어서, R²가 수소, 메틸, 에틸, 2-히드록시에틸 또는 3-히드록시프로필이고, 각각의 히드록시기는 C₂ _~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 일반식Ⅰ의 화합물.
제1항에 있어서, R³가 이소프로필; 메톡시에틸; 각각의 히드록시기가 C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 2-히드록시에틸 또는 3-히드록시프로필; 3-아세틸옥시-n-프로필; 시클로프로필메틸; 2-메톡시벤질, 4-메톡시벤질, 4-메톡시페닐에틸, 2,4-디메톡시벤질; 1-나프틸메틸; 3-옥소-1,1-디메틸부틸; 페닐-2-옥소에틸, 2-(4-메톡시페닐)-2-옥소-에틸, 3-(2-옥소아제파닐), 디메틸아미노-n-프로필, (메틸)아미노에틸, 아미노-n-프로필, 아미노-n-부틸 또는 아미노-n-펜틸인 일반식Ⅰ의 화합물.
제1항에 있어서, R² 및 R³가 함께 모르폴린, 피페리딘, 4-케토피페리딘, 히드록시기에서 C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 4-히드록시피페리딘, 피페라진 또는 피롤리딘인 일반식Ⅰ의 화합물.
제1항에 있어서, R⁴가 수소, C₁ _~4-알킬, p-메톡시벤질, N,N-디-(C_0~4-알킬)아미노-C₁ _~6-알킬, (RS)-1-[[(이소프로필)카보닐]옥시]에틸, (RS)-1-[[(에틸)카보닐]옥시]-2-메틸프로필, (RS)-1-[[(시클로헥실옥시)카보닐]옥시]에틸, 5-메틸-2-옥소-1,3-디옥소렌-4-일-메틸, 2-옥소-1,3-디옥소란-4-일-메틸 또는 (RS)-1-[[(에톡시)카보닐]옥시]에틸인 일반식Ⅰ의 화합물.
제1항에 있어서,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[이소프로필(메틸)아미노]-4-옥소부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(디메틸아미노)-4-옥소부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(디에틸아미노)-4-옥소부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(2-히드록시에틸)(메틸)아미노]-4-옥소부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[(3-히드록시프로필)(메틸)아미노]-4-옥소부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-(4-히드록시피페리딘-1-일)-4-옥소부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소-4-[4-(L-발릴옥시)피페리딘-1-일]부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-모르폴린-4-일-4-옥소부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소-4-(4-옥소피페리딘-1-일)부탄산,

4-[비스(2-히드록시에틸)아미노]-2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-{에틸[3-(에틸아미노)프로필]아미노}-4-옥소부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-[[2-(디메틸아미노)에틸](메틸)아미노]-4-옥소부탄산,

4-[(3-아미노프로필)(에틸)아미노]-2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-{메틸[2-(메틸아미노)에틸]아미노}-4-옥소부탄산,

4-[(4-아미노부틸)(메틸)아미노]-2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산,

4-[(4-아미노부틸)(에틸)아미노]-2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산,

2-{[1-({[1-(카르복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-{메틸[3-(메틸아미노)프로필]아미노}-4-옥소부탄산 및

4-[(5-아미노펜틸)(메틸)아미노]-2-{[1-({[1-(카복시메틸)-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-1-벤자제핀-3-일]아미노}카보닐)시클로펜틸]메틸}-4-옥소부탄산 및

C_1~4-알킬기; C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬기; C_3~7-시클로알킬기; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬기; N,N-디-(C_0~4-알킬)아미노-C_1~6-알킬기; 페닐고리에서 할로겐, C_1~4-알킬 또는 C_1~4-알콕시에 의하여 또는 두 개의 인접한 탄소원자에 결합된 C_1~4-알킬렌 사슬에 의하여 1회 또는 2회 선택적으로 치환된 페닐 또는 페닐-C_1~4-알킬기; 디옥소란 고리에서 C_1~4-알킬에 의하여 선택적으로 치환된 디옥소라닐메틸기; C_1~4-알킬에 의하여 옥시-C_1~4-알킬기에서 선택적으로 치환된 C_2~6-알카노일옥시-C_1~4-알킬기; 1-[[(C_1~4-알킬)카보닐]옥시]C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 이중 에스테르; 및 1-[[(C_4~7-시클로알킬옥시)카보닐]옥시] C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 카보네이트 에스테르로 이루어지는 군으로부터 선택되는 기로 형성되는, 그들의 생체불안정성 에스테르 및 이들 일반식Ⅰ의 화합물의 산의 생리학적으로 허용가능한 염 및 이들 일반식Ⅰ의 화합물의 생리학적으로 허용가능한 산 부가염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 일반식Ⅰ의 화합물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 벤자제핀 골격의 3위치에서 아미 드 곁사슬을 가지는 키랄 탄소 원자가 "S" 배열인 일반식Ⅰ의 화합물.
삭제
유효 성분으로서 제1항에 따른 일반식Ⅰ의 화합물을 포함하는, 충혈성 심장마비; 원인불명 고혈압, 신장 고혈압 및 폐동맥 고혈압과 같은 고혈압의 2차 형태를 포함하는 고혈압으로 구성되는 군으로부터 선택되는 심혈관 장애 또는 질병의 예방 또는 치료용 의약.
제1항에 따른 일반식Ⅰ의 화합물을 포함하는, 발기부전, 사정 장애 및 욕구 장애로 구성되는 군으로부터 선택되는, 여성 및 남성 성기능 장애 예방 또는 치료용 의약.
제12항에 있어서, 상기 성기능장애는 남성 성기능 장애인 것을 특징으로 하는 의약.
제12항에 있어서, 상기 성기능장애는 발기부전인 것을 특징으로 하는 의약.
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일반식Ⅰ의 화합물,

I

(여기에서

R¹은 수소, 또는 C_1~4-알킬기; C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬기; C_3~7-시클로알킬기; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬기; N,N-디-(C_0~4-알킬)아미노-C_1~6-알킬기; 페닐고리에서 할로겐, C_1~4-알킬 또는 C_1~4-알콕시에 의하여 또는 두 개의 인접한 탄소원자에 결합된 C_1~4-알킬렌 사슬에 의하여 1회 또는 2회 선택적으로 치환된 페닐 또는 페닐-C_1~4-알킬기; 디옥소란 고리에서 C_1~4-알킬에 의하여 선택적으로 치환된 디옥소라닐메틸기; C_1~4-알킬에 의하여 옥시-C_1~4-알킬기에서 선택적으로 치환된 C_2~6-알카노일옥시-C_1~4-알킬기; 1-[[(C_1~4-알킬)카보닐]옥시]C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 이중 에스테르; 및 1-[[(C_4~7-시클로알킬옥시)카보닐]옥시] C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 카보네이트 에스테르로 이루어지는 군으로부터 선택되는 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기,

R²는 수소, C_1~4-알킬, 또는 히드록시기가 C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 C_1~4-히드록시알킬, 및

R³는 C_1~4-알킬; C_1~4-알콕시-C_1~4-알킬; 제2 히드록시기로 선택적으로 치환되고, 히드록시기들이 C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 각각 에스테르화된 C_1~4-히드록시알킬; (C_0~4-알킬)₂아미노-C_1~6-알킬; C_3~7-시클로알킬; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬; 페닐기가 C_1~4-알킬, C_1~4-알콕시 또는 할로겐 중의 적어도 하나로 1~2회 선택적으로 치환된 페닐-C_1~4-알킬; 나프틸-C_1~4-알킬; C_3~6-옥소알킬; 페닐기가 C_1~4-알킬, C_1~4-알콕시 또는 할로겐 중의 적어도 하나로 1~2회 선택적으로 치환된 페닐카보닐메틸; 또는 2-옥소아제파닐, 또는

R² 및 R³는 메틸렌기가 카보닐, 질소, 산소 또는 황 중의 적어도 하나로 1~2회 선택적으로 치환되고, C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 히드록시로 1회 선택적으로 치환된 C_4~7-알킬렌; C_1~4-알킬; 히드록시기가 C_2~4-알카노일 또는 아미노산 잔기로 선택적으로 에스테르화된 C_1~4-히드록시알킬; 페닐 또는 벤질, 및

R⁴는 수소, 또는 C_1~4-알킬기; C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬기; C_3~7-시클로알킬기; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬기; N,N-디-(C_0~4-알킬)아미노-C_1~6-알킬기; 페닐고리에서 할로겐, C_1~4-알킬 또는 C_1~4-알콕시에 의하여 또는 두 개의 인접한 탄소원자에 결합된 C_1~4-알킬렌 사슬에 의하여 1회 또는 2회 선택적으로 치환된 페닐 또는 페닐-C_1~4-알킬기; 디옥소란 고리에서 C_1~4-알킬에 의하여 선택적으로 치환된 디옥소라닐메틸기; C_1~4-알킬에 의하여 옥시-C_1~4-알킬기에서 선택적으로 치환된 C_2~6-알카노일옥시-C_1~4-알킬기; 1-[[(C_1~4-알킬)카보닐]옥시]C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 이중 에스테르; 및 1-[[(C_4~7-시클로알킬옥시)카보닐]옥시] C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 카보네이트 에스테르로 이루어지는 군으로부터 선택되는 생체불안정성 에스테르를 형성하는 기이다.)

또는 일반식Ⅰ의 산의 생리학적으로 허용가능한 염 또는 일반식Ⅰ의 화합물의 생리학적으로 허용가능한 산 부가염의 제조 방법으로서,

일반식 Ⅱ의 화합물을

Ⅱ

(여기에서, R¹⁰¹및 R⁴⁰¹는 각각 독립적으로 산보호기이다.)

일반식 Ⅲ의 화합물과 반응시키고,

Ⅲ

(여기에서, R² 및 R³는 상기한 바와 같다.)

R² 및 R³중의 적어도 하나가 자유 히드록시기를 함유하는 경우에, 원한다면, 이들을 일반식 Ⅳ의 화합물 또는 적절한 보호기에 의하여 보호된 아미노산 유도체와 반응시키고,

C_1~3-C(O)-X

Ⅳ

(여기에서, X는 이탈기를 나타낸다.)

R¹⁰¹ 또는 R⁴⁰¹중의 적어도 하나가 생체불안정성 에스테르를 형성하는 원하는 기를 나타내지 않는 경우 또는 R² 또는 R³중의 적어도 하나가 어느 존재하는 아미노산 잔기 내에 보호기를 포함하는 경우에, 이들은 어떠한 원하는 순서로 동시에 또는 개별적으로 결과 화합물에서 연속적으로 제거되고, 원한다면, 각각의 경우에 유리되는 산 작용기들은, C_1~4-알킬기; C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬옥시-C_1~4-알킬기; C_3~7-시클로알킬기; C_3~7-시클로알킬-C_1~4-알킬기; N,N-디-(C_0~4-알킬)아미노-C_1~6-알킬기; 페닐고리에서 할로겐, C_1~4-알킬 또는 C_1~4-알콕시에 의하여 또는 두 개의 인접한 탄소원자에 결합된 C_1~4-알킬렌 사슬에 의하여 1회 또는 2회 선택적으로 치환된 페닐 또는 페닐-C_1~4-알킬기; 디옥소란 고리에서 C_1~4-알킬에 의하여 선택적으로 치환된 디옥소라닐메틸기; C_1~4-알킬에 의하여 옥시-C_1~4-알킬기에서 선택적으로 치환된 C_2~6-알카노일옥시-C_1~4-알킬기; 1-[[(C_1~4-알킬)카보닐]옥시]C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 이중 에스테르; 및 1-[[(C_4~7-시클로알킬옥시)카보닐]옥시] C_1~4-알킬 에스테르를 포함하는 카보네이트 에스테르로 이루어지는 군으로부터 선택되는 생체불안정성 에스테르기로 전환되고,

원한다면, 일반식Ⅰ의 결과적인 산은 생리학적으로 허용가능한 염으로 전환되거나, 일반식Ⅰ의 산의 염은 자유 산으로 전환되고, 또는 일반식Ⅰ의 염기는 그들의 산 부가염으로 전환되거나, 또는 산 부가염은 일반식Ⅰ의 자유 염기로 전환되는 것을 특징으로 하는 제조 방법.
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