CZ288891B6

CZ288891B6 - Farmaceutický prostředek s hypocholesterolemními účinky

Info

Publication number: CZ288891B6
Application number: CZ20001415A
Authority: CZ
Inventors: Stuart B. Rosenblum; Sundeep Dugar; Duane A. Burnett; John W. Clader; Brian A. Mckittrick
Original assignee: Schering Corporation
Priority date: 1993-09-21
Filing date: 2000-04-19
Publication date: 2001-09-12
Also published as: US5767115A; GEP20043149B; AU681445B2; NO2014023I1; KR960704842A; SK281067B6; DE122004000026I1; NO2017042I1; USRE42461E1; EP0720599A1; SK35596A3; CA2172149C; MY111314A; NO2005003I1; UA41948C2; CN1131416A; IL110956A0; DE69418613D1; BE2014C056I2; ATE180249T1

Abstract

Prost°edek ve spojen s farmaceuticky p°ijateln²m nosi em obsahuje jako · inn l tky a) inhibitor biosynt zy cholesterolu v kombinaci s b) hydroxysubstituovan²m azetidinonem obecn ho vzorce I, v n m vÜechny substituenty jsou jako v n roc ch. Prost°edek se pou v k l en a prevenci ateroskler zy nebo ke sni ov n hladin cholesterolu v plazm .\

Description

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutického prostředku s hypocholesterolemními účinky a jeho použití. Farmaceutický prostředek podle tohoto vynálezu je vhodný k léčení a prevenci aterosklerózy a ke snižování hladin cholesterolu v krevní plazmě.

Dosavadní stav techniky

Aterosklerotické koronární srdeční onemocnění představuje hlavní příčinu smrti a kardiovaskulárních úmrtí v západním světě. Mezi rizikové faktory aterosklerotického koronárního srdečního onemocnění patří hypertenze, diabetes mellitus, rodinná anamnéza, mužské pohlaví, cigaretový kouř a cholesterol v séru. Celkové množství cholesterolu přesahující 225 až 250 mg/dl souvisí s významným zvýšením rizika.

Estery cholesterolu jsou hlavní složkou aterosklerotických poškození a hlavní formou skladování cholesterolu v arteriálních stěnách buněk. Tvorba esterů cholesterolu je také klíčovým stupněm intestinální absorpce cholesterolu z jídla. Inhibice tvorby esterů cholesterolu a snížení hladiny cholesterolu v séru tedy pravděpodobně inhibuje postup tvorby aterosklerotických poškození, snižuje hromadění esterů cholesterolu v arteriálních stěnách a blokuje intestinální absorpci cholesterolu z jídla.

Je popsáno několik azetidinonů, které jsou užitečné pro snižování cholesterolu a/nebo inhibování tvorby cholesterol obsahujících poškození v savčích arteriálních stěnách. USA patent 4 983 597 popisuje N-suífonyl-2-azetidinony jako anticholesterolemní činidla. Ram a spol. v Indián J. Chem., Séct, B, 29B, 12 (1990), str. 1134-7, popisuje ethyl 4-(2-oxoazetidin-4-yl)fenoxyalkanoáty jako hypolipidemní činidla. Evropská patentová publikace 264 321 popisuje l-substituované-4-fenyl-3-(2-oxoalkyliden)-2-azetidinony jako inhibitory agregace krevních destiček. Evropský patent 199 630 a evropská patentová přihláška 337 549 popisují substituované azetidinony jako inhibitory elastázy. O inhibitorech elastázy je známo, že jsou užitečné při léčení zánětlivých stavů vedoucích k destrukci tkáně, které souvisejí s různými chorobnými stavy, např. aterosklerózou.

Spis WO 93/02048 publikovaný 4. února 1993, popisuje substituované β-laktamy užitečné jako hypocholesterolemní činidla.

Regulace celkové homeostázy cholesterolu u lidí a zvířat zahrnuje regulaci cholesterolu z jídla a modulaci biosyntézy cholesterolu, biosyntézy žlučových kyselin a katabolismu plazmových lipoproteinů obsahujících cholesterol. Játra jsou hlavním orgánem, který je zodpovědný za biosyntézu a katabolismus cholesterolu a z tohoto důvodu jsou hlavní determinantou hladin cholesterolu v plazmě. Játra jsou místem syntézy a sekrece lipoproteinů s velmi nízkou hustotou (VLDL), které jsou následně metabolizovány na lipoproteiny s nízkou hustotou (LDL) v oběhu. LDL jsou převládajícími lipoproteiny v plazmě nesoucími cholesterol. Zvýšení jejich koncentrace odpovídá zvýšené ateroskleróze.

Jestliže se absorpce cholesterolu ve střevech jakýmikoliv prostředky sníží, je do jater dodáváno méně cholesterolu. Důsledkem je snížení produkce hepatického lipoproteinů (VLDL) a zvýšení hepatické clearance cholesterolu v plazmě, většinou jako LDL. Čistým výsledkem inhibice absorpce intestinálního cholesterolu je snížení hladin cholesterolu v plazmě.

Ukázalo se, že inhibice biosyntézy cholesterolu inhibitory 3-hydroxy-3-methylglutarylkoenzym A (HMG CoA) reduktázy (EC 1.1.1.34) je účinným způsobem jak snižovat množství

-1 CZ 288891 B6 cholesterolu v plazmě [Witzum: Circulation, 80, 5 (1989), str. 1101-1114)] a jak snižovat aterosklerózu. Kombinační terapie inhibitorem HMg CoA reduktázy a činidly, která odstraňují žlučové kyseliny prokázala, zeje mnohem účinnější u lidských hyperlipidemických pacientů než jakékoliv činidlo při monoterapii [Illingworth: Drugs, 36 (Suppl. 3) (1988), str. 63-71],

K řešení uvedených problémů přispívá základní česká zveřejněná přihláška vynálezu PV 839-96 a tato přihláška vynálezu, jež je vyloučenou částí z uvedené základní přihlášky vynálezu.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je farmaceutický prostředek s hypocholesterolemními účinky, jehož podstata je v tom, že ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem obsahuje jako účinné látky

a) inhibito biosyntézy cholesterolu v kombinaci s

b) hydroxysubstituovaným azetidinonem obecného vzorce I

v němž

Ar¹ a Ar² značí jednotlivě Ce-ioaryl nebo R⁴-substituovaný C₆__I0aryl,

Ar³ je Ce-ioaryl nebo R^s-substituovaný C^ioaryl,

X, Y a Z jsou jednotlivě -CHr-, -CH(Ci_4alkyl)- nebo -C(di-Ci^alkyl)-,

R a R² značí jednotlivě -OR⁶, -OCOR⁶, -OCOOR⁹ nebo -CONR⁶R⁷,

R¹ a R³ jsou jednotlivě vodík, C,_4alkyl nebo C^ioaryl, q je 0 nebo 1, r je 0 nebo 1, m, n a p značí jednotlivě 0, 1,2, 3nebo 4, s tou podmínkou, že alespoň jeden z indexů q a r je 1 a součet m, n, p, q a r je 2, 3, 4, 5 nebo 6, a dále s tou podmínkou, že znamená-li p 0 a r znamená 1, je součet m, q a η 1,2,3,4 nebo 5.

R⁴ značí 1 až 5 substituentů nezávisle vybraných ze skupiny zahrnující Ci^alkyl, -OR⁶, -OCOR⁶, -OCOOR⁹, -O(CH2)1_sOR⁹, -O(CH2)!_₅OR⁶, -O-C0NR⁶R⁷, -nr⁶r⁷, -NR⁶COR⁷, -NR⁶COOR⁹, -NR⁶CONR⁷R⁸, -NR⁶SO2-Ci^alkyl, -NR⁶SO2-C₆_i₀aryl, -NR⁶SO2R⁹, -COOR⁶, -CONR⁶R⁷, -COR⁶, -SO2NR⁶R⁷, -S(O)0-2-C i^alky 1, -S(0)(w-C6-ioaryl, -S(0)o_2R⁹, -O(CH2)i_₁₀-COOR⁶R⁷, -(CMalkylen)COOR⁶, -CH=CH-COOR⁶, -CF3, -CN, -NO₂ a halogen,

R⁵ značí 1 až 5 substituentů nezávisle vybraných ze skupiny zahrnující -OR⁶, -OCOR⁶, -OCOOR⁹, -O(CH₂)i_₅OR⁶, -OCONR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, -NR⁶COR⁷, -NR⁶COOR⁹, -NR⁶CONR⁷R⁸,

-2CZ 288891 B6

-NR⁶SO2R⁹, -COOR⁶, -CONR⁶R⁷, -COR⁶, -SO2NR⁶R⁷, -S(0)o_2R⁹, -O(CH2)_i_₁₀COOR⁶, -0(CH2)]_joCONR⁶R⁷, 4C2-4alkylen)COOR⁶ a -CH=CH-COOR⁶,

R , R a R značí jednotlivě vodík, C^alkyl, C^aryl nebo C^i_Oarylem substituovaný Ci^alkyl,

R⁹ je C^alkyl, Cé-ioaryl nebo Ce-ioarylem substituovaný Ci^alkyl, přičemž Ce-ioaryl značí fenyl, naftyl, indenyl, tetrahydronaftyl nebo indanyl, a/nebo s jejich farmaceuticky použitelnými solemi.

Farmaceutický prostředek podle vynálezu jako inhibitor biosyntézy cholesterolu obsahuje inhibitor HMG CoA reduktázy, skupinově zvané statiny.

Jako inhibitor biosyntézy cholesterolu obsahuje farmaceutický prostředek podle tohoto vynálezu s výhodou statin vybraný ze skupiny zahrnující lovastatin, pravastatin, simvastatin a atorvastatin.

Předmětem vynálezu je dále použití farmaceutického prostředku podle vynálezu k léčení nebo prevenci aterosklerózy nebo ke snižování hladin cholesterolu v plazmě.

Předmětem sloučeniny a způsob jejich výroby jsou podrobněji popsány v základní zveřejněné přihlášce vynálezu PV 839-96, na níž byl udělen český patent.

Způsob výroby sloučenin obecného vzorce I zahrnuje tyto stupně:

(a) zpracování silnou bází laktonu obecného vzorce

kde R' a R², znamenají R a R² nebo vhodně chráněné hydroxyskupiny, Ar¹⁰ znamená Ar¹, vhodně chráněný hydroxysubstituovaný aryl nebo vhodně chráněný aminosubstituovaný aryl a zbývající proměnné jsou definovány výše, s tím, že když v laktonu obecného vzorce B n a r každý znamená nulu, pak p je 1 až 4.

(b) reakci produktu ze stupně (a) s iminem obecného vzorce

-3CZ 288891 B6 kde Ať²⁰ znamená Ar², vhodně chráněný hydroxysubstituovaný aryl nebo vhodně chráněný aminosubstituovaný aryl a Ar³⁰ znamená Ar³, vhodně chráněný hydroxysubstituovaný aryl nebo vhodně chráněný aminosubstituovaný aryl, (c) ochlazení reakce kyselinou, (d) případně odstranění chránících skupin z R', R²', Ar¹⁰, Ar²⁰ a Ar³⁰, pokud jsou přítomny a (e) případně funkcionalizaci substituentů na R, R², Ar¹, Ar² a Ar³.

Za použití laktonů uvedených výše se připraví sloučeniny obecného vzorce IA a IB následovně:

kde proměnné mají výše uvedený význam a

F r*

Ατ’-Χ„-Ο-Υ„-(0)

R’ R³

IB

kde proměnné mají výše uvedený význam.

Pojem „nižší alkyl“, tak jak se zde používá, znamená alkylovou skupinu s přímým nebo rozvětveným řetězcem s 1 až 6 atomy uhlíku.

Pojem „aryl“ znamená fenyl, naftyl, indenyl, tetrahydronaftyl nebo indanyl.

Pojem „halogen“ znamená atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu.

Sloučeniny obecného vzorce I mají alespoň jeden asymetrický atom uhlíku a tedy všechny izomery, včetně enantiomerů a diastereomerů jsou považovány za součást tohoto vynálezu. Tento vynález zahrnuje d a 1 izomery, jak v čisté formě tak ve formě směsi, včetně racemických směsí. Izomery se mohou připravovat konvenčními způsoby, buď zreagováním chirálních výchozích materiálů nebo oddělením izomerů sloučeniny obecného vzorce I. Izomery mohou zahrnovat také geometrické izomery, například jestliže je přítomna dvojná vazba. Všechny tyto geometrické izomery jsou součástí tohoto vynálezu.

-4CZ 288891 B6

Odborníci zjistí, že u některých sloučenin obecného vzorce I jeden izomer bude vykazovat větší farmakologickou aktivitu než jiný izomer.

Sloučeniny podle vynálezu s aminovou skupinou mohou tvořit farmaceuticky přijatelné soli s organickými a anorganickými kyselinami. Příklady vhodných kyselin pro tvorbu solí jsou kyselina chlorovodíková, sírová, fosforečná, octová, citrónová, šťavelová, malonová, salicylová, jablečná, fiímarová, jantarová, askorbová, maleinová, methansulfonová a další minerální a karboxylové kyseliny dobře známé odborníkům. Sůl se připravuje tak, že se volná báze uvede do kontaktu s dostatečným množstvím žádané kyseliny. Volná báze se regeneruje tak, že se sůl nechá zreagovat se zředěným vodným roztokem vhodné báze, jako je vodný hydrogenuhličitan sodný. Volná báze se poněkud liší od příslušné soli v některých fyzikálních vlastnostech, jako je rozpustnost v polárních rozpouštědlech. Jinak jsou však pro účely tohoto vynálezu soli ekvivalentní příslušným volným bázím.

Některé sloučeniny podle vynálezu jsou kyselé (například ty sloučeniny, které mají karboxylovou skupinu). Tyto sloučeniny tvoří farmaceuticky přijatelné soli s anorganickými a organickými bázemi. Příklady těchto solí jsou sodné, draselné, vápenaté, hlinité, zlatité a stříbrné soli. Patří sem také soli tvořené farmaceuticky přijatelnými aminy, jako je amoniak, alkylaminy, hydroxyalkylaminy, N-methylglukamin a podobně.

Inhibitory biosyntézy cholesterolu pro použití v kombinaci podle tohoto vynálezu zahrnují inhibitory HMG CoA reduktázy, jako je lovastatin, pravastatin, fluvastatin, simvastatin a atorvastatin.

Bylo zjištěno, že sloučeniny podle vynálezu snižují hladinu lipidů v séru, zejména pak hladinu cholesterolu v séru. Bylo zjištěno, že sloučeniny podle tohoto vynálezu inhibují intestinální absorpci cholesterolu a významně snižují tvorbu esterů cholesterolu v játrech u zvířecích modelů. Sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou tedy hypocholesterolemní činidla díky jejich schopnosti inhibovat intestinální absorpci a/nebo esterifikaci cholesterolu. Jsou tedy užitečné při léčení a prevenci aterosklerózy u savců, zejména u lidí.

In vivo aktivitu sloučenin obecného vzorce I lze stanovit následujícím způsobem.

Křečkům, která se rozdělí do skupin po šesti, se sedm dnů podává regulovaná cholesterolová dieta (Purina Chow č. 5001 obsahující 0,5% cholesterolu). Sleduje se spotřeba jídla, aby se zjistilo množství cholesterolu v jídle pro srovnání s testovanými sloučeninami. Zvířatům se podává testovaná sloučenina jednou denně od počátku podávání diety. Dávkování se provádí orální trubicí, přičemž dávka obsahuje 0,2 ml čistého kukuřičného oleje (kontrolní skupina) nebo roztoku (nebo suspenze) testované sloučeniny v kukuřičném oleji. Všechna umírající zvířata nebo zvířata ve špatném stavu se utratí. Po sedmi dnech se zvířatům dá intramuskulámí narkóza injekcí ketaminu a usmrtí se dekapitací. Pro analýzu lipidů v plazmě se krev odebere do uzavřených zkumavek obsahujících EDTA, pro analýzu lipidů vtkáni se odeberou játra. Postup analýzy lipidů je popsán (Schnitzer-Polokoff, R. a spol., Comp. Biochem. Phisiol., 99A, 4(1991), str. 665-670) a data jsou uvedena jako procenta snížení lipidů ve srovnání s kontrolou.

Sloučeniny obecného vzorce I se podávají jakoukoliv konvenční dávkovou formou, jako je tobolka, tableta, prášek, sáček, suspenze nebo roztok. Formulace a farmaceutické prostředky se připravují za použití konvenčních farmaceuticky přijatelných excipientů a přísad a konvenčních způsobů. Mezi farmaceuticky přijatelné excipienty a přísady patří netoxická slučitelná plnidla, vazebná činidla, dezintegrační činidla, pufiy, ochranná činidla, antioxidační činidla, mazadla, ochucovací činidla, zahušťovadla, barvicí činidla, emulgační činidla apod.

Při kombinovaném použití podle vynálezu, kdy se hydroxysubstituovaný azetidinon podává v kombinaci s inhibitorem biosyntézy cholesterolu, činí typická denní dávka inhibitoru biosyntézy cholesterolu 0,1 až 80mg/kg tělesné hmotnosti za den, v jedné nebo několika

-5CZ 288891 B6 dávkách, obvykle podávané jednou nebo dvakrát denně. Například pro inhibitory HMG CoA reduktázy obsahuje jedna dávka 10 až 40 mg na dávku, která se podává 1 až 2 krát denně, takže celková denní dávka činí 10 až 80 mg na den a pro ostatní inhibitory biosyntézy cholesterolu obsahuje jedna dávka 1 až 1000 g na dávku, která se podává 1 až 2 krát denně, takže celková 5 denní dávka činí 1 mg až 2000 mg na den. Přesná dávka kterékoliv složky kombinace však závisí na ošetřujícím lékaři, na aktivitě podávané sloučeniny a na věku, hmotnosti, stavu a reakci pacienta.

Jestliže se složky kombinace podávají odděleně, počet dávek pro každou složku podávaných io denně nemusí být nezbytně stejný, například jestliže jedna složka vykazuje větší dobu účinku, pak může být podávaná s menší frekvencí.

Jelikož se tento vynálezu týká snižování hladin cholesterolu v plazmě působením kombinace aktivních složek, kde uvedené aktivní složky se mohou podávat odděleně, vynález se také týká 15 kombinace oddělených farmaceutických prostředků ve formě sestavy. Tj. sestava je tvořena dvěma oddělenými jednotkami, které se kombinují: inhibitor biosyntézy cholesterolu a inhibitor absorpce cholesterolu typu hydroxysubstituovaného azetidinonu. Sestava je obzvlášť vhodná v případech, kdy jednotlivé složky musí být podávány v různých dávkových formách (například orálně nebo paranterálně) nebo když jsou podávány v různých intervalech dávkování.

Dále budou uvedeny příklady pro přípravu sloučenin obecného vzorce I. Uvedená stereochemie je relativní, pokud není uvedeno jinak. Termíny cis a trans se týkají relativní orientace azetidinonových poloh 3- a 4-, pokud není uvedeno jinak. Termín „J“ se týká protonové NMR interakční konstanty v hertzech (Hz) mezi 3- a 4-substituovanými protony azetidinonu. Všechna 25 NMR data jsou, pokud není uvedeno jinak, v CDCI3 roztoku.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Připraví se čerstvý roztok lithiumdiisopropylamidu (LDA) rozpuštěním diisopropylaminu (1,19 g, 11,8 mmol) vbezvodém THF (20 ml) při teplotě -78 °C pod argonem. Přidá se n-butyllithium (4,9 ml, 11,8 mmol, 2,4 M v hexanech) a míchá se 0,5 hodiny při teplotě -78 °C. K. tomuto chladnému roztoku se přidá 4-fenylbutyrolakton (1,75 g, 10,8 mmol) v THF (4 ml) během 0,25 hodiny a reakce se udržuje na teplotě pod -65 °C. Dále se míchá po dobu 40 0,25 hodiny při teplotě -78 °C a přidá se 4-methoxybenzylidenanisidin (2,33 g, 11,00 mmol) v THF (8 ml) během 1 hodiny při teplotě -78 °C. Reakční směs se pomalu zahřeje během 1 hodiny na teplotu -50 °C. Reakční směs se potom ochladí na nízkou teplotu pomocí 1 N HC1 (12 ml). Reakční směs se rozdělí mezi ether a 1 N HC1, etherová vrstva se promyje vodou, etherové extrakty se spojí, suší přes MgSO₄ a koncentrují se ve vakuu. Krystalizací surového zbytku (3 g) ze směsi EtOAc a etheru se získá 1,54 g sloučeniny A. Opětnou koncentrací filtrátu

-6CZ 288891 B6 a chromatografíí na silikagelu 60, za použití směsi EtOAc a hexanu v poměru 4 : 1 jako elučního činidla se získá další sloučenina A (0,385 g) a rovněž sloučenina B (0,420 g).

Sloučenina A: Teplota tání 218 až 220 °C, IČ 1730 cm·', Cl (NtH) 374, J = 5,9 Hz.

Sloučenina B: Teplota tání 74 až 76 °C, IČ 1730 cm’¹, Cl (M‘H) 374, J = 2,3 Hz.

Za použití podobného způsobu a vhodných výchozích látek se získá sloučenina IC:

& Ooh m ⁰ 0

Cl (M⁺H) 464, J= 2,3 Hz

Příklad 2

K roztoku sloučeniny A z příkladu 1 (0,5 g, 1,3 mmol) vbezvodém pyridinu (2,7 ml) se přidá anhydrid kyseliny octové (0,63 ml, 6,7 mmol). Směs se míchá 16 hodin, zředí se CH₂C1₂apromyje se 3x IN HC1, lx NaCl (nasycený roztok) a lx vodou. Organická vrstva se koncentruje do sucha a zbytek se krystalizuje z EtOAc a získá se sloučenina uvedená v názvu (0,46 g), teploty tání 167 až 169 °C, IČ 1745 cm’¹, El (Nf) 415, J = 5,9 Hz.

Příklad 3

Připraví se čerstvý roztok lithiumisopropylcyklohexylamidu (LICA) přidáním n-butyllithia (2,84 ml 1,6 M roztoku) k roztoku isopropylcyklohexylaminu (0,75 ml) vTHF (100 ml) při teplotě -78 °C. Rozpustí se N-fenyl-4-(4—methoxyfenyl)-2-azetidinon (1,0 g) vTHF (8 ml) a pomalu se přidává k roztoku LICA při teplotě -78 °C. Po 20ti minutovém míchání se přidá aldehyd 3-fenylopropanové kyseliny (0,54 g) a reakční směs se míchá při teplotě -78 °C po dobu 4 hodin. Reakční směs se ochladí 10% K.HSO4 a produkt se extrahuje EtOAc. Organická vrstva se oddělí, promyje vodou a nasyceným roztokem NaCl. Extrakt se koncentruje a zbytek se čistí

-7CZ 288891 B6 na silikagelu 60 za použití směsi EtOAc a hexanu v poměru 15:85 jako elučního činidla a získá se 1,5 g produktu jako směs diastereomerů. Diastereomery se rozdělí HPLC na silikagelu a získají se diastereomery 3A, 3B a 3C.

3A		OH	_OMe £	1H v CDC1₃: 7,32-7,18 (m, 11H); 7,08-6,99 (m, 1H); 6,89 (d, J=9 Hz, 2H); 4,80 (d, J=2,4 Ηζ,ΙΗ); 4,10-4,00 (m, 1H), 3,79 (s, 3H); 3,20-3,16 (m, 1H); 2,90-2,67 (m, 2H); 2,15-1,85 (m,3H)
			„OMe	1H vCDC1₃: 7,35-7,10 (m, 11H); 7,08-6,99 (m, 1H);
		OH	0	6,89 (d, J=9 Hz, 2H); 5,09 (d, J=2,4 Hz, 1H); 4,26-4,14
		SxA.		(m, 1H); 3,79 (s, 3H); 3,21-3,14 (m, 1H); 2,89-2,57 (m,
(				2H); 2,10-1,85 (m, 3H)
			•N
3B		o	0
			„OMe	1H v CDCl₃: 7,30-7,00 (m, 10H); 6,99 (d, J=8 Hz, 2H);
		OH	0	6,83 (d, J=9 Hz, 2H); 5,12 (d, J=5,5 Hz, 1H); 3,82 (s,
				3H); 3,75-3,63 (m, 1H); 3,52 (dd, J=9,5 Hz, 1H); 2,71-
	u			2,57 (m, 1H); 2,49-2,33 (m, 1H); 1,68-1,50 (m, 1H);
		o^z	V)	1,47-1,31 (m, 1H)
3C

Diastereomery 3A, 3B a 3C se dále oddělí podle následujících reakčních schémat:

chiralcel OD HPLC 3A 8:92 IPA: Hex

chiralcel OD HPLC _3B 8:92 IPA: Hex

-8CZ 288891 B6

_o_ chiralcel OD HPLC

3C -----------10S0IPA:Hex

(Následující CD spektrální data [0] jsou všechna získána v CH₃OH.)

3D) [0]227nM = +2,0x10⁴ cm²/dM. [0]24inM = -4,6x10⁴ cm²/dM.

Elementární analýza vypočtena pro C2sH2₅NO₃.0,25 H₂O: C 76,6; H 6,56; N 3,57; nalezena: C 76,66; H 6,49; N 3,64.

3E) [0]₂27nM = -1,95x10⁴ cm²/dM, [0]₂4inM = +4,45x10⁴ cm²/dM.

Elementární analýza vypočtena pro C₂sH25NO₃.0,5 H₂O: C 75,73; H 6,61; N 3,53; nalezena: C 75,66; H 6,41; N 3,60.

3F) [0]₂26nM = +l,97xl0⁴ cm²/dM, [0]₂₄onM = -5,22xl0⁴ cm²/dM.

Elementární analýza vypočtena pro C2sH25NO₃: C 77,48; N 6,51; N 3,62;

nalezena: C 77,44; H 6,53; N 3,70.

3G) [0]₂26nM = -l,78xl0⁴ cm²/dM, [0]₂4inM = +4,78xl0⁴ cm²/dM. (CIMS 388⁺H).

3H) [0]₂₂6nM = +2,24xl0⁴ cm²/dM, [0]24inM = -5,4x10⁴ cm²/dM.

[a]_D ²⁵ = -54,4° (2,5 mg/ml CH₃OH).

Elementární analýza vypočtena pro C2sH₂5NO₃: C 77,48; N 6,51; N 3,6;. nalezena: C 77,11; H 6,50; N 3,72.

31) [0]226nM = -2,05xl0⁴ cm²/dM, [0]₂4inM = +5,2+10⁴ cm²/dM. (CIMS 388¾).

3J)

K. roztoku sloučeniny 3H (132 mg) se přidá DEAD (0,11 ml), P-fenyl₃ (0,18 g) a HCO2H (39 ml) v THF (5 ml). Reakční směs se míchá při teplotě místnosti přes noc a potom se rozdělí mezi Et₂O a H2O. Organická vrstva se promyje solankou, suší (MgSO₄) a koncentruje se do sucha. Zbytek 35 se zpracuje mžikovou chromatografií za použití směsi EtOAc a hexanu v poměru 1:4a získá se mravenčan. Ten se rozpustí v CH₃OH a přidají se 4 kapky koncentrované HC1. Po 4 hodinách se směs koncentruje ve vakuu a zbytek se zpracuje mžikovou chromatografií za použití směsi EtOAc a hexanu v poměru 1:3a získá se sloučenina 3 J.

-9CZ 288891 B6 [θ]₂24ηΜ = +2,54x10³ cm²/dM, [0]₂₃₉nM = +5,70x10⁴ cm²/dM.

[a]_D ²⁵ =-157,6° (2,5 mg/ml CH₃OH).

3K)

Za použití postupu popsaném u 3J se zpracuje sloučenina 31 a získá se sloučenina 3K.

[θ]222ηΜ⁼ -3,4xl0³ cm²/dM, [0]₂40nM = -5,6xl0⁴ cm²/dM.

[a]_D ²⁵ = +167,2° (2,5 mg/ml CH₃OH).

Za použití postupu popsaném výše pro přípravu sloučeniny 3A a 3B se zpracuje N-fenyl-4-(4methoxyfenyl)-2-azetidinon použitím LIČ A a potom 2-naftylaldehydem a získají se diastereomery 3L a 3M:

Příklad 4

-10CZ 288891 B6

Způsob 1:

Stupeň 1: K refluxujícímu roztoku 4-methoxybenzylidenanisidinu (10,0 g), 41,5 mmol) a tributylaminu (20,8 ml, 87 mmol) v toluenu (100 ml) se po kapkách během 2 hodin přidá 5-bromvaleroylchlorid (8,5 g, 43 mmol) v toluenu. Reakční směs se míchá při teplotě 80 °C po dobu 12 hodin, ochladí se na teplotu místnosti, promyje 3x 1 N HC1, lx vodou a organická vrstva se suší přes MgSC>4. Čištěním na silikagelu, za použití směsi ethylacetátu a hexanu v poměru 4:1 jako elučního činidla se získá 5,1 g (3R,4S)-l,4-bis-(4-methoxyfenyl)-3-(3-brompropyl)-2azetidinonu (relativní konfigurace), teploty tání 70-73 °C, El (M⁺) 404, J = 2,3 Hz.

Stupeň 2: K roztoku produktu z 1. stupně (5,1 g, 12,6 mmol) v (CH₃)₂SO (20 ml) se přidá (CH₃)₃N(O) (2,39 g, 31,9 mmol). Směs se zahřívá na teplotu 60 °C po dobu 3 hodin, ochladí se na teplotu místnosti, zředí EtOAc a 3x promyje vodou. Spojené vodné frakce se extrahují EtOAc. Spojené organické frakce se koncentrují. Spojené organické frakce se čistí chromatografií na silikagelu za použití směsi EtOAc a hexanu v poměru 1:1 jako elučního činidla a získá se 1,4 g (3R,4S)-l,4-bis-(4-methoxyfenyl)-2-oxo-3-azetidinpropanolu (relativní konfigurace), jako olej, El (M⁺) 339, J = 2,3 Hz.

Stupeň 3: K roztoku produktu z 2. stupně (0,734 g, 2,2 mmol) v THF (4 ml) se při teplotě 0 °C během 0,25 hodiny přidá fenylmagnesiumbromid (2,4 ml, 2,4 mmol, 1,0 M v THF). Po 1 hodině, během níž se teplota udržuje na 0 °C se přidá voda (5 ml), vrstvy se oddělí, organická vrstva se promyje lx 1 N HC1, suší se přes MgSOí a koncentruje se na olejovitý zbytek. Ten se čistí chromatografií na silikagelu, za použití směsi EtOAc a hexanu v poměru 2 : 1 jako elučního činidla a získá se 0,372 g sloučeniny uvedené v názvu (směs diastereomerů) ve formě oleje. Cl (M⁺H)418.

Separace diastereomerů: Diastereomemí směs z 3. stupně se chromatografuje na koloně Chiralcel OD (Chiral Technologies Corp., PA), za použití směsi hexanu a ethanolu v poměru 9: 1 jako elučního činidla a získají se enantiomemě čisté (>98%) diastereomery jak jsou uvedeny dále:

OH 0 4A	ΰ' ^No	Olej, [a]o²² = +8,3°, konc. = 3 mg/ml v MeOH; Cl (M⁺H) 418, J = 2,1 Hz.
OH		Olej, [a]_D ²² = +33,1°, konc. = 3 mg/ml v MeOH;
	CI(M⁺H)418, J = 2,1 Hz.
o	^No_o„
4B
OH V		Olej, [a]o²² - -8,0°, konc. = 3 mg/ml v MeOH; Cl (M⁺H) 418, J = 2,1 Hz.
íTtí
o	CL·
4C	0

-11CZ 288891 B6

r o°'

Olej. [a]_D ²² = 29,5°, konc. = 3 mg/ml v MeOH; CI(M⁺H)418, J = 2,1 Hz

Způsob 2:

Stupeň 1: K roztoku l,4-(S)-bis(4-methoxyfenyl)-3-(3-(R)-fenylpropyl)-2-azetidinonu (5,04 g, 0,013 mol) v CC1₄ (20 ml) se během 1 hodiny při teplotě 80 °C přidá ve třech stejných částech NBS (2,76 g, 0,0155 mol) a benzoylperoxid (0,24 g, 1,0 mmol). Reakce se sleduje TLC (4 : 1 hexan: EtOAc). Reakční směs se ochladí na 22 °C, přidá se NaHSO₄, vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje 3x vodou. Organická vrstva se koncentruje a získá se surový produkt.

Cl (M⁺H) 480, *H v CDCI₃ δ FenylCH(OH) = 5,05 ppm.

Stupeň 2: Surový produkt z 1. stupně se rozpustí vCH₂C1₂ (30 ml) se přidá se 40% n-BuNOC(O)CF₃ ve vodě (30 ml). Dvoufázová reakce se refluxuje 24 hodin, potom se reakční směs ochladí, vrstvy se oddělí a organická vrstva se promyje 6x vodou. Organická vrstva se koncentruje do sucha a zbytek se ihned rozpustí v ethanolu nasyceném NH₃ (10 ml). Po 1 hodině se reakční směs částečně vyčistí chromatografií na silikagelu. Dalším čištěním vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií (HPLC) se získá směs sloučenin 4A a 4B v poměru 1:1. Směs se může dále čistit na koloně Chiracel OD a získají se oddělené sloučeniny 4A a 4B, jak bylo uvedeno výše.

Za použití postupu popsaném v příkladu 4, způsobu 2 se při použití 4(S)-(4-acetoxyfenyl)-3(R)(3-fenylpropyl)-l-(4-methoxyfenyl)-2-azetidinonu jako výchozí látky připraví následující sloučeniny:

OH ⁰ o 4E	t.t. 87-90 °C HRMS vypočteno C₂₅H₂5NO₄ = 403,1797, nalez. 403,1785; *H v CDC1₃ δ Fenyl-CH(OH) = 4,82 ppm.
OH ⁰ o 4F	HRMS vypočteno C₂₅H_2JNO₄ = 403,1797, nalez. 403,1787; *H v CDC1₃ δ Fenyl-CH(OH) = 4,78 ppm.

-12CZ 288891 B6

Příklad 5

K roztoku produktu získaném ve 2. stupni, příkladu 4 (0,230 g, 0,68 mmol) v THF (2 ml) se přidá činidlo získané ze zpracování 4-methoxymethoxyfenylbromidu (0,159 g, 0,736 mmol) v THF (4 ml) při teplotě -78 °C sek.butyllithiem (0,6 ml, 0,78 mol, 1,3 M v hexanech) a potom CeCl₃(0,186 g, 0,75 mmol). Po 4 hodinách se produkt extrahuje a čistí chromatografícky způsobem popsaným ve 3. stupni příkladu 4 a získá se 0,05 g sloučeniny uvedené v názvu (směs diastereomerů) ve formě oleje. Cl (M⁺H) 478.

Stupeň 1: K roztoku (S)-4-fenyl-2-oxazolidinonu (41 g, 0,25 mol) v CH2CI2 (200 ml) se přidá 4-dimethylaminopyridin (2,5 g, 0,02 mol) a triethylamin (84,7 ml, 0,61 mol) a reakční směs se ochladí na 0 °C. K reakční směsi se po kapkách během 1 hodiny přidá methyl-4-(chlorformyl)butyrát (50 g, 0,3 mol) jako roztok v CH2CI2 (375 ml) a reakční směs se ohřeje na 22 °C. Po 17 hodinách se přidá H2SO4 (2 N, 100 ml), vrstvy se rozdělí a organická vrstva se postupně promyje 10% roztokem NaOH, nasyceným roztokem NaCl a vodou. Sušením organické vrstvy přes MgSO₄ a její koncentrací se získá polokrystalický produkt.

Stupeň 2: K roztoku TiCl₄ (18,2 ml, 0,165 mol) VCH2CI2 (600 ml) se při teplotě 0°C přidá isopropoxid titanu (16,5 ml, 0,055 mol). Po 15 minutách se přidá produkt z 1. stupně (49,0 g, 0,17 mol) ve formě roztoku VCH2CI2 (100 ml). Po 5 minutách se přidá diisopropylethylamin (DIPEA) (65,2 ml, 0,37 mol) a reakční směs se míchá při teplotě 0 °C po dobu 1 hodiny. Reakční směs se ochladí na teplotu -20 °C a přidá se 4-benzyloxybenzyliden(4-fluor)anilin (114,3 g, 0,37 mol) ve formě pevné látky. Reakční směs se intenzivně míchá 4 hodiny při teplotě -20 °C, po kapkách se během 15 minut přidá kyselina octová ve formě roztoku v CH2CI2 a reakční směs se nechá ohřát na teplotu 0 °C a přidá se H2SO₄ (2 N). Reakční směs se míchá další hodinu, vrstvy se oddělí, promyjí vodou, znovu oddělí a organická vrstva se vysuší. Krystalizací surového produktu ze směsi ethanolu a vody se získá čistý meziprodukt.

Stupeň 3: K roztoku produktu z 2. stupně (8,9 g, 14,9 mmol) v toluenu (100 ml) se při teplotě 50 °C přidá N,O-bis(trimethyIsilyl)acetamid (BSA) (7,50 ml, 30,3 mmol). Po 0,5 hodině se přidá pevný TBAF (0,39 g, 1,5 mmol) a reakční směs se míchá při teplotě 50 °C další 3 hodiny.

-13CZ 288891 B6

Reakční směs se ochladí na teplotu 22 °C, přidá se CH₃OH (10 ml), promyje HC1 (1 N), NaHCO₃(1 N) a nasyceným roztokem NaCI a organická vrstva se suší přes MgSO4.

Stupeň 4: K roztoku produktu z 3. stupně (0,94 g, 2,2 mmol) vCH₃OH (3 ml) se přidá voda (1 ml) a LiOH.H₂O (102 mg, 2,4 mmol). Reakční směs se míchá při teplotě 22 °C po dobu 1 hodiny a přidá se další LiOH.H₂O (54 mg, 1,3 mmol). Po celkem 2 hodinách se přidá HC1 (1 N) a EtOAc, vrstvy se oddělí a organická vrstva se suší a koncentruje ve vakuu. K roztoku výsledného produktu (0,91 g, 2,2 mmol) v CH₂C1₂ se při teplotě 22 °C přidá C1COCOC1 (0,29 ml, 3,3 mmol) a reakční směs se míchá 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu.

Stupeň 5: K míchané suspenzi 4-fluorfenylzincchloridu (4,4 mmol), připraveném z 4-fluorfenylmagnesiumbromidu (1 M v THF, 4,4 ml, 4,4 mmol) a ZnCl₂ (0,6 g, 4,4 mmol) se přidá při teplotě 4°C tetrakis(trifenylfbsfm)palladium (0,25 g, 0,21 mmol) a produkt ze 4. stupně (0,94 g, 2,2 mmol) ve formě roztoku v THF (2 ml). Reakční směs se míchá 1 hodinu při teplotě 0 °C a potom 0,5 hodiny při teplotě 22 °C. Přidá se HC1 (IN, 5 ml) a extrahuje se EtOAc. Organická vrstva se koncentruje, olej se čistí chromatografií na silikagelu a získá se l-(4-fluorfenyl)-4(S)(4-hydroxyfenyl)-3(R)-(3-oxo-3-fenylpropyl)-2-azetidinon:

HRMS vypočteno pro C₂₄Hi9F₂NO₃: 408,1429; nalezeno 408,1411.

Stupeň 6: K produktu z 5. stupně (0,95 g, 1,91 mmol) v THF (3 ml) se přidá (R)-tetrahydro-lmethyl-3,3-difenyl-lH,3H-pyrrolo-[l,2-c][l,3,2]oxazaborol (120 mg, 0,43 mmol) a směs se ochladí na teplotu -20 °C. Po 5 minutách se během 0,5 hodiny přidá po kapkách komplex borohydrid-dimethylsulfid (2 M v THF, 0,85 ml, 1,7 mmol). Po celkem 1,5 hodině se přidá CH₃OH a potom HC1 (1 N) a reakční směs se extrahuje EtOAc, přičemž se získá l-(4fluorfenyl)-3-(R)-[3(S)-(4-fluorfenyl)-3-hydroxypropyl]-4(S)-[4-(fenylmethoxy)fenyl]-2azetidinon (sloučenina 6A-1) ve formě oleje.

'H v CDC1₃ δ H3 = 4,68, J = 2,3 Hz, Cl (M⁺H) 500.

Za použití (S)-tetrahydro-l-methyl-3,3-difenyl-lH,3H-pyrrolo[l,2-c][l,3,2]oxaazaborolu se získá odpovídající 3(R)-hydroxypropylazetidinon (sloučenina 6B-1).

’H v CDCIj δ H3 = 4,69, J = 2,3 Hz, Cl (M⁺H) 500.

K roztoku sloučeniny 6A-1 (0,4 g, 0,8 mmol) vethanolu (2 ml) se přidá 10% Pd/C (0,03 g) a směs se míchá pod tlakem 4,218 kg/cm² plynného H₂ po dobu 16 hodin. Reakční směs se koncentruje a získá se sloučenina 6A.

Teplota tání 164 až 166 °C, Cl (M⁺H) 410.

[a]_D ²⁵ = -28,1° (c 3, CH₃OH).

Elementární analýza vypočteno pro C₂4H₂iF₂NO₃: C 70,41; H 5,17; N 4,32; nalezeno: C 70,25; H 5,19; N 3,54.

Podobně se zpracuje sloučenina 6B-1 a získá se sloučenina 6B.

Teplota tání 129,5 až 132,5 °C, Cl (M⁺H) 410.

Elementární analýza vypočteno pro C₂4H₂iF₂NO₃: C 70,41; H 5,17; N 4,32; nalezeno: C 70,30; H 5,14; N 3,52.

-14CZ 288891 B6

Příklad 6' (alternativní): K. roztoku produktu z 5. stupně (0,14 g, 0,3 mmol) v ethanolu (2 ml) se přidá 10% Pd/C (0,03 g) a reakční směs se míchá pod tlakem 4,218 kg/cm² plynného H₂ po dobu 16 hodin. Reakční směs se filtruje a koncentruje a získá se směs sloučeniny 6A a 6B v poměru 1:1.

Za použití vhodných výchozích látek se a podle postupu 1-6 se připraví následující sloučeniny:

OH ec °	CI(M⁺H) 446; HRMS vypočteno C27H27NO5 = 445,1904, nalez. 445,1890
O^O 6D	Cl (M⁺H) 446; HRMS vypočteno C₂₅H₂5NO₄ = 445,1904, nalez. 445,19111

Příklad 7

K roztoku sloučeniny 7a (1,0 g, 2,1 mmol v dioxanu (10 ml) se přidá SeO₂ (1,33 g, 11,98 mmol) a voda (0,25 ml, 14 mmol) a směs se zahřeje na teplotu 100 °C. Po 1 hodině se reakční směs ochladí na teplotu místnosti a extrakcí se izoluje surový produkt jako diastereomemí směs (1 : 2) alkoholů 7b-A a 7b-B. Tato směs se čistí HPLC na koloně Dynamax silica, kde se rozdělí diastereomery 7b-A a 7b-B.

Diastereomer 7b-A (R): olej, J₃₄ = 2,3 Hz, δ CH(OH) = 4,86 (t),

-15CZ 288891 B6

HRMS C32H29NO4 vypočteno: 491,2097, nalezeno: 491,2074.

Diastereomer 7b-B (R): olej, J34 = 2,3 Hz, δ CH(OH) = 5,06 (t),

HRMS C32H29NO4 vypočteno. 491,2097; nalezeno: 491,2117.

Stupeň 2: K roztoku diastereomeru A z 1. stupně (58 mg, 0,12 mmol) v EtOAc (2 ml) se přidá 10% Pd/C (20 mg) a směs se míchá při teplotě 22 °C pod plynným H₂ (0,984 kg/cm²) po dobu 12 hodin. Filtrací a koncentrací se získá sloučenina uvedená v názvu jako polotuhá látka.

Teplota tání 90 až 92 °C, J₃₄ = 2,3 Hz, δ CH(OH) = 4,1 (m),

HRMS C25H25NO4 vypočteno: 403,1783; nalezeno: 403,1792.

Příklad 8

K roztoku produktu z příkladu 4A (90 mg, 0,2 mmol) v CH₂C1₂ se přidá acetylchlorid (80 mg, 1,0 mmol) a pyridin (8 mg, 0,1 mmol) a směs se míchá při teplotě místnosti 1 hodinu. Přidá se voda, vrstvy se oddělí a izoluje se odpovídající acetoxysloučenina 8A. Podobným způsobem se zpracují produkty z příkladů 4B, 6B a 6A a získají se následující sloučeniny 8B, 8C a 8D:

8A: l,4(S)-bis-(4-methoxyfenyl)-3(R)-(3R)-acetoxy-3-fenylpropyl)-2-azetidinon. Cl (M⁺H) 460, HRMS C28H29NO5; vypočteno: 459,2044; nalezeno 459,2045.

8B: l,4(S)-bis-(4-methoxyfenyl)-3(R)-(3S)-acetoxy-3-fenylpropyl)-2-azetidinon. Cl (M⁺H) 460, HRMS C28H29NO5; vypočteno: 459,20,44; nalezeno: 459,2048.

8C: 4(S)-(4-acetyloxyfenyl)-3((R)-3(R)-acetyloxy-3-(4-fluorfenyl)propyl)-l-(4-fluorfenyl)2-azetidinon. FAB MS 493,4, HRMS C28H25F2NO5; vypočteno: 493,1695; nalezeno: 493,1701.

8D: 4(S)-(4-acetyloxyfenyl)-3((R)-3(S)-acetyloxy-3-(4-fluorfenyl)propyl)-l-(4-fluorfenyl)2-azetidinon. FAB MS 493,4, HRMS C28H25F2NO5; vypočteno: 493,1695; nalezeno: 493,1694.

Za použití vhodných výchozích látek podle postupu uvedeného v příkladu 6 se připraví l-(4chlorfenyl)-3(R)(hydroxy-3-(4-chlorfenyl)propyl)-4(S)-(4-hydroxyfenyl)-2-azetidinon. Za použití postupu uvedeném v příkladu 8 se připraví následující diacetáty 8E a 8F:

	O	0Ύ	Cl (M⁺H) 527; *H CDCI3 δ H3' = 4,65
o-O 8E		-r
^Γ o¹	A
	O	0°T°	Cl (Μ*Ή) 527; Ή CDCI3 δ H3' = 4,67
α-θ 8F
cr	Cl

-16CZ 288891 B6

Příklad 9

Stupeň 1: Pyridiniumchlorchroman (2,4 g, 11 mmol) a CH₃CO₂Na (20 mg) se přidá k roztoku l-fenyl-3-(3-fenyl-l-hydroxypropyl)-4-(4-methoxyfenyl)-2-azetidinonu (2,35 g, 6,1 mmol) v CH₂C1₂. Směs se míchá při teplotě místnosti 16 hodin, přidá se silikagel (40 g) a koncentruje se do sucha. Mžikovou chromatografií zbytku za použití směsi EtOAc a hexanu v poměru 1 : 4 se získá olej (1,98 g, výtěžek 85 %).

Ή NMR 2,85-2,95 (m, 3H), 3,15 (m, 1H), 3,80 (s, 3H), 4,10 (d, 1H, J 2,6), 5,42 (1H, d, J 2,6), 6,85 (dd, 2H, J 2,8), 7,05 (m, 1H), 7,2-7,35 (m, 11H).

Stupeň 2: K roztoku produktu z 1. stupně (1,78 g, 4,62 mmol) v THF se při teplotě -10 °C přidá NaH (115 mg, 4,8 mmol). Po 15 minutách se přidá NBS (865 mg, 4,85 mmol) a směs se míchá 20 minut. Potom se přidá 1 N HC1 a směs se rozdělí mezi EtOAc a solanku. Organická vrstva se oddělí, suší přes MgSO₄ a koncentrací se získá olej. Mžikovou chromatografií oleje za použití směsi EtOAc a hexanu v poměru 1 : 10 se odebírá prvně sloučenina 9a jako pěnová pevná látka (830 mg, výtěžek 39 %, FAB MS 466/464, M⁺H) a potom sloučenina 9b jako bezbarvá pevná látka (1,1 g, výtěžek 51 %, FAB MS 466/464, M⁺H).

Stupeň 3a: K roztoku 9a (0,68 g, 1,46 mmol) v THF (5 ml) se při teplotě -50 °C přidá Mg(0COCF₃)2.CF₃CO₂H (7,3 ml 1 M roztoku v Et₂O). Reakční směs se míchá 5 minut a potom se přidá t-Bu-NH₂-BH₃ (254 mg, 2,92 mmol). Po 15 minutách se teplota reakční směsi nechá během 20 minut vystoupit na 0 °C, přidá se 1 N HC1 a koncentruje se ve vakuu. Zbytek se rozdělí mezi EtOAc a solanku. Organická vrstva se koncentruje a vzniklý olej se rozpustí ve směsi CH₂C1₂: CH₃OH (1 : 1) a přidá se ethanolamin (2 mmol). Po 15 minutách se reakční směs koncentruje a zbytek se rozdělí směsí EtOAc : 1 N HC1. Organická vrstva se promyje solankou a suší přes MgSO₄ a získá se olej. Tento olej se čistí mžikovou chromatografií za použití směsi EtOAc a hexanu v poměru 1 : 4 získá se sloučenina 9a-l jako bezbarvá pevná látka, jako směs diastereomerů v poměru 4 : 1, v množství 0,52 g, výtěžek 76 %, SIMS 468/466 (M⁺H).

Stupeň 3b: Za použití sloučeniny 9b jako výchozí látky a za použití postupu podobnému ve stupni 3a s rozpouštědlem CH₂C1₂ se získá sloučenina 9b—1 v 80% výtěžku jako směs diastereomerů v poměru 13:1 (SIMS 468/466 M⁺H).

Stupeň 4a: Roztok 9a-l (0,27 g, 0,58 mmol) a AIBN (18 mg) v toluenu (40 ml) se po kapkách přidá při teplotě 80 °C během 40 minut k roztoku (TMS)₃SiH (1,0 ml) v toluenu. Po 1 H se přidá další AIBN (5 mg) a reakce pokračuje při teplotě 80 °C další 1,5 hodiny. Reakční směs se ochladí a koncentruje, zbytek se rozpustí v CH₃CN a 3x se promyje hexanem. Vrstva s CH₃CN se koncentruje a získá se sloučenina uvedená v názvu jako racemická směs (0,25 g). Tento olej se čistí HPLC za použití kolony Chiralcel OD a získá se sloučenina 3H (hlavní produkt) a 3J (vedlejší produkt).

Stupeň 4b: Za použití postupu uvedeném ve stupni 4a a za použití sloučeniny 9b-l jako výchozí látky se získá olej. Tento olej se čistí mžikovou chromatografií za použití směsi EtOAc a hexanu v poměru 1 : 3 se získá racemická sloučenina uvedená v názvu (výtěžek 70 %). Tento olej se čistí

-17CZ 288891 B6

HPLC za použití kolony Chiralcel OD a získá se sloučenina 3J (hlavní produkt) a 3H (vedlejší produkt).

Příklad 10

Stupeň 1: Za použití postupu uvedeném v příkladu 3, s použitím l-(4-fluorfenyl-4-(4terc.butyldimethylsilyloxyfenyl)-2-azetidinonu se získá l-(4-fluorfenyl-3-(3-fenyl-l-hydroxypropyl)-4(4-terc.butyldimethylsilyloxyfenyl)-2-azetidinon.

Stupeň 2: Roztok cis-azetidinonu z 1. stupně (0,25 g) v CH₃CN (21 ml) se zpracuje 48% vodnou HF (2,5 ml). Po 18 hodinách se reakční směs zředí studenou H₂O a extrahuje se Et₂O. Vrstva Et₂O se promyje 2x H₂O, zředěným roztokem NaHCO₃ a solankou, suší se přesMgSO₄a koncentruje. Krystalizací zbytku ze směsi EtOAc a hexanu v poměru 1 : 2 se získá sloučenina uvedená v názvu jako bezbarvé jehličky (123 mg, výtěžek 64 %), teplota tání 168 až 171 °C.

Elementární analýza vypočtena pro C₂₄H₂₂O₃FN: C 73,64; H 5,66; N 3,58; nalezena C 73,32; H 5,65; N 3,68.

Příklady následujících prostředků představují některé dávkové formy podle vynálezu. V každém z nich pojem „účinná sloučenina“ znamená sloučeninu obecného vzorce I.

Příklad A

Tablety

č.	složka	mg/tabletu	mg/tabletu
1	účinná sloučenina	100	500
2	laktóza USP	122	113
3	kukuřičný škrob pro potraviny jako 10% (hmot.) pasta ve vyčištěné vodě	30	40
4	kukuřičný škrob pro potraviny	45	40
5	stearát hořečnatý	3	7
Celkem	300	700

Postup přípravy

Složky č. 1 a 2 se míchají ve vhodném mixéru 10 až 15 minut. Tato směs se granuluje se složkou č. 3. Pokud je to nutné, vlhké granule se rozemelou přes hrubé síto (např. 0,63 cm). Vysušené granule se prosejí, pokud je to nutné a smíchají se složkou 4. Směs se míchá 10 až 15 minut. Přidá se složka č. 5 a směs se míchá 1 až 3 minuty. Směs se vlisuje do vhodného tvaru a odváží se na vhodném tabletovacím stroji.

-18CZ 288891 B6

Příklad B

Tobolky

č.	složka	mg/tabletu	mg/tabletu
1	účinná sloučenina	100	500
2	laktóza USP	106	123
3	kukuřičný škrob pro potraviny	40	70
4	stearát hořečnatý (NF)	4	7
Celkem	250	700

Způsob přípravy

Složky č. 1, 2 a 3 se míchají ve vhodném mísiči 10 až 15 minut. Přidá se složka 4 a směs se míchá 1 až 3 minuty. Směs se vhodným strojem pro plnění tobolek naplní do vhodných 10 dvoudílných tobolek z tvrdé želatiny.

Shora popsanými testovacími postupy byla pro sloučeniny příkladů získána následující in vivo data. Data jsou uvedena jako procenta změny (tj. procenta snížení esterů cholesterolu) proti kontrole, tj. negativní čísla znamenají pozitivní účinek spočívající ve snížení množství lipidů.

Př. č.	% Redukce	Dávka mg/kg
Cholest. v séru	Estery cholest.
IA	-23	0	50
1B	-15	-39	50
1C	14	0	50
2	0	0	50
3A	-31	-69	50
3C	-60	-92	50
3D	-17	-61	10
3E	0	0	10
3F	-29	-ΊΊ	10
3G	-16	-38	10
3H	-41	-86	10
31	0	-22	10
3J	0	0	3
3K	0	0	10
3L	-15	-21	10
3M	0	-22	10
4A	0	-54	5
4B	-37	-89	8
4C	-12,5	0	3
4D	9	0	7
4E	0	-46	3
4F	-29	-95	3
5	0	-64	10
6A	-59	-95	1
6A-1	-43	-93	1
6B	-40	-92	3
6C	0	-18	3
6D	^6	-95	10
8A	0	-44	3
8B	-50	-95	3

-19CZ 288891 B6

Pokračovaní

Př.č.	% Redukce	Dávka mg/kg
Cholest. v séru	Estery cholest.
8C	-14	-37	1
8D	—49	-98	1
8E	-22	-66	3
8F	-43	-94	1
10	-26	-ΊΊ	3

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims

1. Farmaceutický prostředek shypocholesterolemními účinky, vyznačující se tím, že ve spojení s farmaceuticky přijatelným nosičem obsahuje jako účinné látky

a) inhibitor biosyntézy cholesterolu v kombinaci s

b) hydroxysubstituovaným azetidinonem obecného vzorce I v němž

Ar¹ a Ar² značí jednotlivě C^ioaryl nebo R⁴-substituovaný Ce-ioaryl,

Ar³ je Ce-ioaryl nebo R⁵-substituovaný C^ioaryl,

X, Y a Z jsou jednotlivě -CHr-, -CH(Ci^alkyl)- nebo -C(di-Ci_4alkyl)-,

R a R² značí jednotlivě -OR⁶, -OCOR⁶, -OCOOR⁹ nebo -CONR⁶R⁷,

R¹ a R³ jsou jednotlivě vodík, C i^alky 1 nebo Cí-ioaryl, q je 0 nebo 1, r je 0 nebo 1, m, n a p značí jednotlivě 0, 1, 2, 3 nebo 4, s tou podmínkou, že alespoň jeden z indexů q a r je 1 a součet m, n, p, q a r je 2, 3, 4, 5 nebo 6, a dále stou podmínkou, že znamená-li p 0 a r znamená 1, je součet m, q a η 1,2,3,4 nebo 5,

R⁴ značí 1 až 5 substituentů nezávisle vybraných ze skupiny zahrnující Ci^alkyl, -OR⁶, -OCOR⁶, -OCOOR⁹, -O(CH2)i-5OR⁹, -O(CH2)!_₅OR⁶, -OCONR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, -NR⁶COR⁷, -NR⁶COOR⁹, -NR⁶CONR⁷R⁸, -NR⁶SO2-C]_4alkyl, NR⁶SO2-C₆_i₀aryl, -NR⁶SO2R⁹, -COOR⁶, -CONR⁶R⁷, -COR⁶, -SO2NR⁶R⁷, -S(0)o_2-C_Malkyl, -SíOjo-rCwoaiyl, -S(0)o-₂R⁹,

-O(CH₂)i-i₀-COOR⁶, -O(CH2)w0CONR⁶R⁷, -fC2_₄aIkylen)COOR⁶, -CH=CH-COOR⁶, -CF₃, -CN, —NO₂ a halogen,

R⁵ značí 1 až 5 substituentů nezávisle vybraných ze skupiny zahrnující -OR⁶, -OCOR⁶, -OCOOR⁹, -O(CH₂)i_₅OR⁶, -OCONR⁶R⁷, -NR⁶R⁷, -NR⁶COR⁷, -NR⁶COOR⁹, -NR⁶CONR⁷R⁸, -NR⁶SO2R⁹, -COOR⁶, -CONR⁶R⁷, -COR⁶, -SO2NR⁶R⁷, -S(0)o_₂R⁹, -O(CH2K10COOR⁶, -0(CH2)₁_ioCONR⁶R⁷, -(C_Malkylen)COOR⁶ a -CH=CH=COOR⁶,

R⁶, R⁷ a R⁸ značí jednotlivě vodík, alkyl, C^₁₀aryl nebo C^i_Oarylem substituovaný Ci_4alkyl,

R⁹ je C^alkyl, Cň-ioaryl nebo Ce-ioarylem substituovaný C^alkyl, přičemž C^ioaryl značí fenyl, naftyl, indenyl, tetrahydronaftyl nebo indanyl, a/nebo s jejich farmaceuticky použitelnými solemi.

2. Farmaceutický prostředek podle nároku 1, vyznačující se tím, že jako inhibitor biosyntézy cholesterolu obsahuje inhibitor HMG CoA reduktázy, skupinově zvané statiny.

3. Farmaceutický prostředek podle nároku 2, vyznačující se tím, že jako inhibitor biosyntézy cholesterolu obsahuje statin vybraný ze skupiny zahrnující lovastatin, pravastatin, simvastatin a atorvastatin.

4. Farmaceutický prostředek podle nároků 1 až 3 pro léčení nebo prevenci aterosklerózy nebo ke snižování hladin cholesterolu v plazmě.