MX2009002918A - Derivados azetidinona y sus metodos de uso. - Google Patents

Derivados azetidinona y sus metodos de uso.

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Tin-Yau Chan
Brian A Mckittrick
Bernard R Neustadt
Elizabeth M Smith
Joel M Harris
Andrew W Stamford
Tony Priestley
Anandan Palani
Robert G Aslanian
Henry M Vaccaro
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Abstract

La presente invención se refiere a métodos para tratar o prevenir un trastorno del metabolismo lipídico, dolor, diabetes, una afección vascular, desmielinización o enfermedad hepática grasa no alcoholica, que comprende administrar un compuesto que tiene la fórmula (I) (ver fórmula I) o una sal, solvato, éster, profármaco o estereoisómero de éste, farmacéuticamente aceptable, donde: R1 y R2 se definen en los cuadros 1-6 que se proveen aquí, y R3 es -fenilo, -4-clorofenilo, -2-piridilo, o -3-piridilo.

Description

DERIVADOS AZETIDINONA Y SUS METODOS DE USO REFERENCIA A SOLICITUDES DE PRIORIDAD Esta solicitud reclama el beneficio de prioridad de la Solicitud de Patente Norteamericana Provisional No 60/844,808, presentada el 15 de septiembre del 2006, que se incorpora aquí como referencia en su totalidad.
CAMPO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a métodos para tratar o prevenir un trastorno del metabolismo lipídico, dolor, diabetes, una afección vascular, desmielinización o enfermedad hepática grasa no alcohólica, que comprende administrar un compuesto que tiene la fórmula o una sal, solvato, éster, profármaco o estereoisómero de éste farmacéuticamente aceptable, donde: R1 y R2 se definen en los cuadros 1 -6 que se proveen aquí, y R3 es -fenilo, -4-clorofenilo, -2-piridilo, o -3-piridilo.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION El tratamiento del dolor crónico, particularmente dolor inflamatorio y neuropático, es un área de necesidad médica no satisfecha. El dolor neuropático es una lesión nerviosa resultante de la hiper-excitabilidad de las neuronas involucradas en la sensación de dolor. Las corrientes T están presentes en las neuronas de las vías del dolor. Los bloqueadores del canal de calcio de Tipo T son eficaces en modelos pre-clínicos de dolor neuropático. El potencial V1 receptor transitorio (TRPV1 ) es un canal catiónico no específico, la activación del cual puede conducir al dolor, en particular dolor inflamatorio, e hiperalgesia, y al mismo tiempo juega un rol en la función de la tos y la vejiga. La diabetes de Tipo II conocida también como diabetes miellitus no-insulino dependiente, es una enfermedad progresiva caracterizada por un deterioro del metabolismo de la glucosa, que da como resultado niveles elevados de glucosa en la sangre. Los pacientes con diabetes de Tipo II exhiben una función de células beta pancreáticas deteriorada, que da como resultado insuficiencia de las células beta pancreáticas para secretar una cantidad apropiada de insulina en respuesta a una señal hiperglicémica, y resistencia a la acción de la insulina en sus tejidos objetivo (resistencia a la insulina). Los tratamientos corrientes de diabetes de Tipo II apuntan a invertir la resistencia a la insulina, controlar la absorción de glucosa intestinal, normalizar la producción de glucosa hepática, y mejorar la sensibilidad de la glucosa de células beta y la secreción de insulina. La clase de sulfonil ureas de los agentes antihiperglicémicos orales promueva la secreción de insulina desde las células T de los beta-islotes pancreáticos, pero tiene el potencial de causar hipoglicemia debido a que su acción es independiente de los niveles de glucosa. Los agentes anti-hiperglicémicos incluyen: sensibilizadores de insulina que reducen la producción de glucosa hepática mediante la inhibición de gluconeogénesis; inhibidores de a-glucosidasa que inhiben la descomposición de carbohidratos complejos demorando de esta manera la absorción de glucosa y modulando la glucosa post-prandial y los picos de insulina; y tiazolidindionas que mejoran la acción de la insulina y reducen la resistencia a la insulina. A lo largo del tiempo, aproximadamente la mitad de los diabetes con pacientes de Tipo II pierden su respuesta a estos agentes. Debido a las imperfecciones de los tratamientos corrientes, son altamente deseables nuevos tratamientos para la diabetes de Tipo II. El GPR1 19 es un receptor acoplado a la proteína G constitutivamente activa expresada predominantemente en las células T de los beta-islotes pancreáticos. La activación de GPR1 19 mediante un agonista aumenta la liberación de insulina desde las células T de los beta-islotes pancreáticos en una manera que depende de la glucosa. Por lo tanto un agonista de GPR1 19 ofrece el potencial para normalizar los niveles de glucosa en la sangre en un paciente diabético de Tipo II en respuesta a la elevación de la glucosa post-prandial en la sangre, pero no se esperaría que estimulara la liberación de insulina en el estado pre-prandial o en ayunas. Niemann-Pick de tipo C1 (NPC1 L1 ) ha sido identificado como un mediador crítico de la absorción de colesterol. Se ha determinado que el inhibidor de absorción ezetimiba hace diana en NPC1 L1 . Se ha descrito el tratamiento de trastornos del metabolismo lipídico, diabetes, afecciones vasculares, desmielinización, y enfermedad hepática grasa no alcohólica con derivados azetidinona. Los derivados azetidinona que inhiben la absorción de colesterol en el intestino delgado son bien conocidos en la técnica y han sido descritos, por ejemplo, en US RE 37,721 ; US 5,631 ,356; US 5,767,1 15; US 5,846,966; US 5,698,548; US 5,633,246; US 5,656,624; US 5,624,920; US 5,688,787; US 5,756,470; Publicación de Patente Norteamericana No. 2002/0137689; WO 02/066464; WO 95/08522 y WO96/19450. Cada una de las publicaciones antes mencionadas se incorpora aquí como referencia. La técnica indica que estos compuestos son útiles para el tratamiento, por ejemplo, de enfermedad coronaria ateroesclerótica, ya sea mediante administración de estos compuestos solos o con un solo compuesto tal como un inhibidor de la biosíntesis del colesterol. La WO 2005/000217 describe terapias de combinación para el tratamiento de dislipidemia que comprenden la administración de una combinación de un agente anti-obesidad y un agente anti-dislipidémico. La WO 2004/1 10375 describe terapias de combinación para el tratamiento de diabetes que comprende la administración de una combinación de un agente anti-obesidad y un agente anti-diabético. La US 2004/0122033 describe terapias de combinación para el tratamiento de la obesidad que comprenden la administración de una combinación de un supresor de apetito y/o mejoradores del índice metabólico y/o inhibidores de la absorción de nutrientes. La US 2004/0229844 describe terapias de combinación para tratar ateroesclerosis que comprenden administración de una combinación de ácido nicotínico u otro agonista del receptor ácido nicotínico y un antagonista del receptor DP. Asimismo se conoce un método para tratar una enfermedad hepática grasa no alcohólica en un mamífero mediante la administración de una cantidad eficaz de una composición terapéutica que comprende por lo menos un agente que disminuye el colesterol y/o por lo menos un antagonista/agonista inverso del receptor H3.
BREVE DESCRIPCION DE LA INVENCION La presente invención está dirigida a métodos para el tratamiento o prevención de un trastorno del metabolismo lipídico, dolor, diabetes, una afección vascular, desmielinización o enfermedad hepática grasa no alcohólica (siendo cada una una "Afección"), que comprende administrar un compuesto que tiene la fórmula (I) o una sal, solvato, éster, profármaco o estereoisómero de éste farmacéuticamente aceptable, donde: R1 y R2 se definen en los cuadros 1 -6, que se proveen aquí, y R3 es -fenilo, -4-clorofenilo, -2-piridilo, o -3-piridilo. En un aspecto, la presente invención se refiere a métodos para tratar o prevenir una afección en un paciente, que comprende administrar a un paciente una cantidad eficaz de un compuesto que tiene la fórmula (IA): o una sal, solvato, éster, profármaco o esteroisómero del mismo farmacéuticamente aceptable, donde R1 y R2 se denotan usando una "X" tal como se establece en el cuadro 1 siguiente: CUADRO 1 1 2 3 4 5 6 8 9 1 0 1 1 7 1 2 1 X X X X X X X X X X X X 2 X X X X X X X X 3 X X X X X X X X 4 X X X X X X X X X X X 5 X X X X X X 6 X X X X X X X X X X X X 7 X X X X X X X X 8 X X X X X X X X X X X 9 X X X X X X 1 0 X X X X X X X X 1 1 X X X X X X X X 1 2 X X X X X X X X 1 3 X X X X X 1 4 X X X X X X X X 1 5 X X X X X X X X 1 6 X X X X X X X X 1 7 X X X X X X X 1 8 X X X X X X X X 1 9 X X X X X X X X 20 X X X X X X X X 21 X X X X X X X X 22 X X X X X X X X X X X X 23 X X X X X X X X 24 X X X X X X X X 25 X X X X X X X X 26 X X X X X X X X X X X X 27 X X X X X X X X 28 X X X X X X X X X X X X 29 X X X X X X X X 30 X X X X X X X X X 31 X X X X X X X X 32 X X X X X X X 33 X X X X X X X 34 X X X X X X X X 35 X X X X X X X X X X X X 36 X X X X X X X X 37 X X X X X X X X 38 X X X X X X X X X X X X 39 X X X X X X X X CUADRO 1 (cont.) CUADRO 1 (cont.) CUADRO 1 (cont.) CUADRO 1 (cont.) CUADRO 1 (cont.) CUADRO 1 (cont.) CUADRO 1 (cont.) CUADRO 1 (cont.) donde R1 es como se define posteriormente en el cuadro 5.
CUADRO 5 donde Z representa el enlace de R1 con el átomo de nitrógeno al cual está unido; R2 es tal como se define en el cuadro 6 siguiente CUADRO 6 y donde Z representa el enlace de R2 al átomo de nitrógeno al cual está unido. En otro aspecto, la presente invención se refiere a métodos para tratar o prevenir una afección en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de un compuesto que tiene la fórmula (IB): (IB) o una sal, solvato, éster, profármaco o estereoisómero de éste farmacéuticamente aceptable, donde R1 es tal como se ha definido en el cuadro 5 anterior, R2 se ha definido anteriormente en el cuadro 6, y la identidad de R1 y R2 en los compuestos de fórmula (IB) se designan usando una "X" tal como se indica en el cuadro 2 siguiente: CUADRO 2 CUADRO 2 (cont.) CUADRO 2 (cont.) CUADRO 2 (cont.) CUADRO 2 (cont.) CUADRO 2 (cont.) CUADRO 2 (cont.) CUADRO 2 (cont.) CUADRO 2 (cont.) En otro aspecto, la presente invención se refiere a métodos para tratar o prevenir una afección en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de un compuesto que tiene la fórmula (IC): (IC) o una sal, solvato, éster, profármaco o estereoisómero de éste farmacéuticamente aceptable, donde R1 es tal como se ha definido en el cuadro 5 anterior, R2 se ha definido en el cuadro 6 anterior y la identidad de R1 y R2 en los compuestos de la fórmula (IC) se designan usando una "X" tal como se indica en el cuadro 3 siguiente: CUADRO 3 CUADRO 3 (cont.) CUADRO 3 (cont.) CUADRO 3 (cont.) CUADRO 3 (cont.) 1 2 3 4 8 1 2 1 1 7 6 5 1 0 359 X X X X X X X X X 360 X X X X X X X 361 X X X X X X 362 X X X X X X X 363 X X X 364 X X X X X X X X X X X 365 X X X X X X X X X X X 366 X X X X X X X X X X X 367 X X X X X X X X X X X 368 X X X X X X X X X X X 369 X X X X X X X X X X X 370 X X X X X X X X X X X 371 X X X X X X X X X X X 372 X X X X X X X X X X X 373 X X X X X X X X X X X 374 X X X X X X X X X X X 375 X X X X X X X X X X X 376 X X X X X X X X X X X 377 X X X X X X X X 378 X X X X X X X X X X X 379 X X X X X X X X X X X 380 X X X X X X X X X X X 381 X X X X X X X X X X X 382 X X X X X X X X X X X 383 X X X X X X X X X X X 384 X X X X X X X X X X X 15 385 X X X X X X X X X X X 386 X X X X X X X X X X X 387 X X X X X X X X X X X 388 X X X X X X X X X X X 389 X X X X X X X X X X X 390 X X X X X X X X X X X 391 X X X X X X X X X X X 392 X X X X X X X X X X 393 X X X X X X X X 394 X X X X X X 395 X X X X X X X X X 20 396 X X X X X X X X 397 X X X X X X X X X 398 X X X X X X X X X 399 X X X X X X X X X X X 400 X X X X X X X X X X X 401 X X X X X X X X X 402 X X X X X X X X X X X CUADRO 3 (cont.) En otro aspecto, la presente invención se refiere a métodos para tratar o prevenir una afección en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de un compuesto que tiene la fórmula (ID): (ID) o una sal, solvato, éster, profármaco, o estereoisómero de éste farmacéuticamente aceptable, donde R1 es tal como se ha definido en el cuadro 5 anterior, R2 es tal como se ha definido en el cuadro 6 anterior y la identidad de R1 y R2 en los compuestos de la fórmula (ID) se designan usando una "X" tal como se indica en el cuadro 4 siguiente: CUADRO 4 CUADRO 4 (Cont.) CUADRO 4 (cont.) CUADRO 4 (cont.) CUADRO 4 (Cont) CUADRO 4 (Cont.) CUADRO 4 (cont.) CUADRO 4 (cont.) CUADRO 4 (cont.) Los compuestos útiles en esta invención se describen mediante las fórmulas (IA)-(ID) y se definen con una "X" en los cuadros 1 -4. Por lo tanto, los compuestos definidos en los cuadros 1 -4 tienen las definiciones R1 y R2 que se indican con una "X" en el rectángulo formado por la intersección de la columna R2 y la hilera R , y están dentro del alcance de la presente invención (es decir, son útiles en los métodos de esta invención). Los números de la columna que está más a la izquierda en los cuadros 1 -4 representan los grupos R2 definidos en el cuadro 6. Los números en la hilera superior de los cuadros 1 -4 representan los grupos R1 definidos en el cuadro 5. Los rectángulos vacíos en los cuadros 1 -4 definen compuestos que no están dentro del alcance de la presente invención. Los compuestos de las fórmulas (IA)-(ID) (los "derivados Azetidinona") son útiles para el tratamiento o prevención de una afección. La presente invención se refiere también a métodos para tratar o prevenir una afección en un paciente, que comprenden administrar al paciente una cantidad eficaz de un derivado Azetidinona. La presente invención se refiere también a métodos para el tratamiento o prevención de una afección en un paciente que comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de un derivado azetidinona y una cantidad eficaz de otro agente terapéutico. Se ha contemplado que las terapias de combinación de la presente invención pueden proveerse bajo la forma de un equipo que comprende en un solo paquete por lo menos un derivado Azetidinona en una composición farmacéutica, y por lo menos una composición farmacéutica separada que comprende por lo menos un agente terapéutico adicional.
DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Definiciones y Abreviaturas Tal como se usaron anteriormente, y a través de toda esta descripción, los términos siguientes, a menos que se indique lo contrario, se interpretarán con los significados siguientes: "Por lo menos uno" cuando se refiere a un derivado Azetidinona significa de 1 a 4 derivados Azetidinona diferentes. En una modalidad, el término "por lo menos "un" se usa para designar 1 derivado Azetidinona. De manera similar cuando se usa "por lo menos uno" con referencia a los agentes adicionales que se usan en las combinaciones, se contemplan de 1 a 4 agentes adicionales. En una modalidad, el término " por lo menos uno" se usa para designar un agente adicional. Un "paciente" es un mamífero humano o no humano. En una modalidad, un paciente es un ser humano. En otra modalidad, un paciente es un mamífero no humano que incluye pero que no está limitado a un mono, un perro, un babuino, rhesus, un ratón, una rata, un caballo, un gato o un conejo. En otra modalidad, un paciente es un animal de compañía, incluyendo pero sin limitarlo a un gato, conejo, caballo o hurón. En una modalidad, un paciente es un perro. En otra modalidad, un paciente es un gato. El término "sustituido" significa que uno o más hidrógenos en el átomo designado están reemplazados con una selección del grupo indicado, con la condición de no exceder la valencia normal del átomo designado bajo las circunstancias existentes, y que la sustitución dé como resultado un compuesto estable. Las combinaciones de sustituyentes y/o variables son únicamente permiscibles si dichas combinaciones dan como resultado compuestos estables. Mediante "compuesto estable" o "estructura estable" se indica un compuesto que es suficientemente sólido para sobrevivir a la aislación hasta un grado de pureza útil desde una mezcla de reacción y la formulación en un agente terapéutico eficaz. El término "opcionalmente sustituido" significa una sustitución opcional con los grupos radicales o porciones especificadas. El término "purificado", "forma purificada" o "en forma aislada y purificada" para un compuesto se refiere al estado físico de dicho compuesto después de haber sido aislado de un procedimiento de síntesis (por ejemplo, de una mezcla de reacción) o una fuente natural o combinación de éstas. Por lo tanto, el término "purificado" o "en forma purificada" o "en forma aislada y purificada" para un compeusto se refiere al estado físico de dicho compuesto después de haber sido obtenido por un procedimiento o procedimientos de purificación descritos aquí o bien conocidos por los expertos en la técnica (por ejemplo, cromatografía, recristalización y similares), con pureza suficiente para que sea caracterizable mediante técnicas analíticas convencionales descritas aquí o bien conocidas por los expertos en la técnica. Cabe observar también que cualquier carbono así como también heteroátomo con valencias no satisfechas en el texto, esquemas, ejemplos y cuadros que se dan aquí, se considera que tiene la cantidad de átomos de hidrógeno suficientes para satisfacer las valencias. Cuando un grupo funcional en un compuesto se denomina "protegido" significa que el grupo está en forma modificada para excluir reacciones secundarias indeseables en el sitio protegido, cuando el compuesto es sometido a a una reacción. Los grupos protectores apropiados serán reconocidos por los expertos en la técnica así como también por las referencias a los libros de texto convencionales, tales como por ejemplo T. W. Greene et al, Protective Groups in organic Synthesis (1991 ), Wiley, New York. Tal como se usa aquí, el término "composición" pretende abarcar un producto que comprende los ingredientes especificados en las cantidades especificadas así como también cualquier producto que resulte directa o indirectamente de la combinación de los ingredientes especificados en las cantidades especificadas. Los profármacos y solvatos de los derivados Azetidinona están también contemplados aquí. Una discusión de los profármacos se provee en T. Higuchi y V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems (1987) 14 of the A. C.S. Symposium Series, y in Bioreversible Carriers in Drug Design, (1987) Edward B. Roche, ed., American Pharmaceutical Association y Pergamon Press. El término "profármaco" significa un compuesto (por ejemplo, un precursor de un fármaco) que es transformado in vivo para proporcionar un derivado Azetidinona, una sal, solvato, éster o profármaco farmacéuticamente aceptable de éste. La transformación puede ocurrir por varios mecanismos (por ejemplo, por procedimientos metabolicos o químicos), tales como por ejemplo, a través de la hidrólisis en la sangre. Una discusión del uso de los profármacos ha sido provista en T. Higuchi y W. Stella, "Pro-drugs as Novel Delivery Systems," Vol. 14 del A.C.S. Symposium Series, y en Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association y Pergamon Press, 1987. Por ejemplo, si un derivado de Azetidinona o una sal, solvato, éster, profármaco o esteroisómero de éste farmacéuticamente aceptable, contiene un grupo funcional ácido carboxílico, un profármaco puede comprende un éster formado mediante el reemplazo del átomo de hidrógeno del grupo ácido con un grupo tal como por ejemplo, alquilo (d-Ce), alcanoiloximetilo (C2-C12), 1 -(alcanoiloxi)etilo que tiene de 4 a 9 átomos de carbono, 1 -metil-1 -(alcanoiloxi)-etilo que tiene de 5 a 10 átomos de carbono, alcoxicarboniloximetilo que tiene de 3 a 6 átomos de carbono, 1 -(alcoxicarboniloxi)etilo que tiene de 4 a 7 átomos de carbono, 1 -metil-1 -(alcoxicarboniloxi)etilo que tiene de 5 a 8 átomos de carbono, N-(alcoxicarbonil)-aminometilo que tiene de 3 a 9 átomos de carbono, 1 -(N-(alcoxicarbonil)amino)etilo que tiene de 4 a 10 átomos de carbono, 3-ftalidilo, 4-crotonolactonilo, gamma-butirolacton-4-ilo, di-N,N-alquilamino (CrC2)alqu¡lo (C2-C3) (tal como ß-dimetilamínoetilo), carbamoil-alquilo (C1 -C2), N,N-di alquilcarbamoilo (Ci-C2)alquilo (C1 -C2) y piperidino-, pirrolidino- o morfolino alquilo (C2-C3), y similares. De manera similar, si un derivado Azetidinona contiene un grupo funcional alcohol puede formarse un profármaco mediante el reemplazo del átomo de hidrógeno del grupo alcohol con un grupo tal como por ejemplo, alcanoiloximetilo (CrC6), 1 -(alcanoiloxi (CrC6)) etilo, 1 -metil-1 -(alcanoiloxi (CrC6))etilo, alcanoiloximetilo (CrC6), N-alcoxicarbonilaminometilo (Ci-C6), succinoilo, alcanoilo (CrC6), a-aminoalquinilo (CrC4), arilacilo y a-aminoacilo, o -aminoacilo-a-aminoacilo, donde cada grupo a-aminoacilo está seleccionado independientemente de los L-aminoácidos naturales P(0)(OH)2, -P(0)(Oalquuilo (CrC6))2 o glicosilo (el radical resultante de la remoción de un grupo hidroxilo de la forma hemiacetal de un carbohidrato), y similares. Si un derivado Azetidinona contiene un grupo funcional amina, puede formarse un profármaco mediante el reemplazo de un átomo de hidrógeno en el grupo amina con un grupo tal como por ejemplo, R-carbonilo, RO-carbonilo, NRR'-carbonilo donde R y R' son cada uno independientemente alquilo (CrC10), cicloalquilo (C3-C7), bencilo o R-carbonilo es un a-aminoacilo natural o a-aminoacilo natural, — C(OH)C(0)OY1 donde Y1 es H, alquilo (Cr C6) o bencilo, — C(OY2)Y3 donde Y2 es alquilo (C C4) e Y3 es alquilo (C C6), carboxialquilo (C-i-C6) aminoalquilo (CrC4) o mono-N — o di-N,N-alquilaminoalquilo (CrC6), — C(Y4)Y5 donde Y4 es H o metilo e Y5 es mono-N — o di-N,N-alquilamino (CrC6) morfolino, piperidin-1 -ilo o pirrolidin-1 -ilo, y similares. Los derivados Azetidinona pueden existir en formas no solvatadas así como también solvatadas con solventes farmacéuticamente aceptables tales como agua, etanol, y similares, y se pretende que la invención abarque tanto las formas solvatadas como las no solvatadas.
"Solvato" significa una asociación física de un compuesto de esta invención con una o más moléculas solventes. Esta asociación física involucra varios grados de unión iónica y covalente, que incluyen la unión de hidrógeno. En ciertos casos el solvato será capaz de aislamiento, por ejemplo, cuando se incorpora una o más moléculas de solvente en el retículo cristalino del sólido cristalino. "Solvato" abarca tanto los solvatos en fase de solución como los aislables. Ejemplos no limitativos de solvatos apropiados incluyen etanolatos, y similares. "Hidrato" es un solvente en el cual la molécula solvente es H20. Uno o más de los derivados Azetídinona pueden convertirse opcionalmente en un solvato. La preparación de los solvatos es generalmente conocida. Por lo tanto, por ejemplo, M. Caira et al, J. Pharmaceutícal Sci., 93(3), 601 -61 1 (2004) describe la preparación de los solvatos del fluconazol antifungal en acetato de etilo así como también en agua. Preparaciones similares de solvatos, hemisolvatos, hidratos y similares han sido descritas por E. C. van Tonder et al, AAPS PharmSciTech., 5(1 ), artículo 12 (2004); y A. L. Bingham et al, Chem. Commun., 603-604 (2001 ). Un procedimiento típico, no limitativo involucra disolver el compuesto de la invención en las cantidades deseadas del solvente deseado (orgánico o agua o mezlas de éstos) a una temperatura superior a la temperatura ambiente, y enfriar la solución a un régimen suficiente para formar cristales que son luego aislados mediante métodos convencionales. Las técnicas analíticas tales como por ejemplo espectroscopia I.R. muestran la presencia del solvente (o agua) en los cristales como un solvato (o hidrato).
"Cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz" describe una cantidad de compuesto o composición de la presente invención que es eficaz para inhibir las enfermedades antes mencionadas y por lo tanto para producir el efecto terapéutico, mejorador, inhibidor o preventivo deseado. Los derivados Azetidinona pueden formar sales que están también dentro del alcance de esta invención. La referencia a un derivado Azetidinona que se provee aquí, se interpreta que incluye referencia a sus sales, a menos que se indique lo contrario. El término "sal(es)", tal como se emplea aquí, denota sales ácidas formadas con ácidos inorgánicos y/u orgánicos, así como también sales básicas formadas con bases inorgánicas y/o orgánicas. Además, cuando un derivado Azetidinona contiene tanto una porción básica tal como pero sin limitarlo a una piridina o imidazol, como una porción ácida, tal como pero sin limitarlo a un ácido carboxílico, pueden formarse switteriones ("sales internas") y se incluyen dentro del término "sal(es)" tal como se usan aquí. Se prefieren sales farmacéuticamente aceptables (es decir, no tóxicas, fisiológicamente aceptables), aunque son también útiles otras sales. Las sales de los derivados Azetidinona pueden formarse por ejemplo, por reacción de un derivado Azetidinona con una cantidad de ácido o base tal como una cantidad equivalente, en un medio tal como aquel en el cual precipita la sal o en el medio acuoso seguido de liofilización. Ejemplos de sales de adición de base incluyen acetatos, ascorbatos, benzoatos, bencensulfonatos, bisulfatos, boratos, butiratos, citratos, alcanforatos, alcanorsulfonatos, fumaratos, clorhidratos, bromhidratos, yodidratos, lactatos, maleatos, metansulfonatos, naftalenosulfonatos, nitratos, oxalatos, fosfatos, propionatos, salicilatos, succinatos, sulfatos, tartratos, tiocianatos, toluenosulfonatos (conocidos también como tosilatos), y similares. Adicionalmente, los ácidos que se consideran generalmente apropiados para la formación de sales farmacéuticamente útiles a partir de compuestos farmacéuticos básicos, han sido discutidas por ejemplo por P. StahI et al, Camille G. (eds.) Handbook of Pharmaceutical Salts. Properties, Selection y Use. (2002) Zurich: Wiley-VCH; S. Berge et al, Journal of Pharmaceutical Sciences (1977) 66(1 ) 1 -19; P. Gould, International J. of Pharmaceutics (1986) 33 201 -217; Anderson et al, The Practice of Medicinal Chemistry (1996), Academic Press, New York; y in The Orange Book (Food & Drug Administration, Washington, D.C. en su sitio de la red). Estas descripciones se incorporan aquí como referencia. Ejemplos de sales básicas incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos tales como sales de sodio, litio y potasio, sales de metales alcalinotérrreos tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas (por ejemplo, aminas orgánicas tales como diciclohexilamina, t-butilamina y sales con amino ácidos tales como arginina, lisina y similares. Los grupos que contienen nitrógeno básico pueden ser cuaternizados con agentes tales como haluros de alquilo inferior (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo y butilo), sulfatos de dialquilo (por ejemplo sulfatos de dimetilo, dietilo y dibutilo), haluros de cadena larga (por ejemplo, cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo y estearilo, haluros de aralquilo (por ejemplo, bromuros de bencilo y metilo) y otros. Todas dichas sales ácidas y sales básicas son sales farmacéuticamente aceptables dentro del alcance de la invención y todas las sales básicas y acidas se consideran equivalentes a las formas libres de los compuestos correspondientes para el propósito de la invención. Esteres farmacéuticamente aceptables de los derivados Azetidinona incluyen los grupos siguientes: (1 ) ésteres de ácido carboxílico obtenidos por esterificación de los grupos hidroxi en los cuales la porción no carbonilo de la porción ácido carboxílico de la agrupación éster está seleccionada entre alquilo de cadena recta o ramificada (por ejemplo, acetilo, n-propilo, t-butilo, o n-butilo), alcoxialquilo (por ejemplo, metoximetilo) aralquilo (por ejemplo, bencilo), ariloxialquilo (por ejemplo, fenoximetilo), arilo (por ejemplo fenilo opcionalmente sustituido con por ejemplo, halógeno, alquilo Ci. 4, o alcoxi C-i -4 o amino); (2) ésteres de sulfonato, tales como alquil- o aralquiisulfonilo (por ejemplo, metanosulfonilo); (3) ésteres de amino ácidos (por ejemplo, L-valilo o L-isoleucilo); (4) ésteres de fosfonato y (5) ésteres de mono-, di- o trifosfato. Los ésteres de fosfato pueden ser adicionalmente esterificados, por ejemplo con un alcohol C1-20 o un derivado reactivo de éste o con un 2,3-di ac¡lo(C-6-24) glicerol. Los derivados Azetidinona, y las sales, solvatos, ésteres y profármacos de éstos farmacéuticamente aceptables pueden existir en su forma tautomérica (por ejemplo, en forma de una amida o iminoéter). Todas dichas formas tautoméricas están contempladas aquí como parte de la presente invención. Los derivados azetidinona pueden contener centros asimétricos o quirales, y por lo tanto existen en formas estereoisoméricas diferentes. Se pretende que todas las formas estereoisoméricas de los derivados Azetizetidinona así como también sus mezclas, incluyendo las mezclas racémicas, formen parte de la presente invención. Además, la presente invención abarca todos los isómeros geométricos y posicionales. Por ejemplo, si un derivado Azetidinona incorpora un enlace doble o un anillo fusionado, ambas formas, la cis y trans así como también las mezclas, están abarcadas dentro del alcance de la invención. Las mezclas diaestereoméricas pueden separarse en sus diaestereómeros individuales en base a sus diferencias físico químicas por métodos que son bien conocidos por los expertos en la técnica, tales como por ejemplo, cromatografía y/o cristalización fraccionada. Los enantiomeros pueden separarse mediante conversión de la mezcla enantiomérica en una mezcla diaestereomérica por reacción con un compuesto apropiado ópticamente activo (por ejemplo un auxiliar quiral tal como un alcohol quiral o un cloruro de ácido de Mosher), separación de los diaestereómeros y conversión (por ejemplo, hidrolizacion) de los diaestereómeros individuales a los enantiomeros puros correspondientes. Asimismo, algunos de los derivados Azetidinona pueden ser atropisomeros (por ejemplo, biarilos sustituidos), y se consideran parte de esta invención. También pueden separarse los enantiómeros mediante el uso de una columna HPLC quiral. Todos los esteroisómeros (por ejemplo isómeros geométricos, isómeros ópticos y similares) de los presentes compuestos (incluyendo los de las sales, solvatos, ésteres y profármacos de los compuestos así como también las sales, solvatos y ésteres de los profármacos), tal como aquellos que pueden existir debido a los carbonos asimétricos en varios sustituyentes, incluyendo las formas enantioméricas (las cuales pueden existir incluso en ausencia de carbonos asimétricos), las formas rotaméricas, atropisómeros y las formas diaestereoméricas, están contempladas dentro del alcance de esta invención así como también lo están los isómeros posicionales (tales como por ejemplo, 4-piridilo, y 3-piridilo). (Por ejemplo, si un derivado Azetidinona incorpora un enlace doble o un anillo fusionado, tanto la forma cis como la forma trans así como también las mezclas están abarcadas dentro del alcance de la invención. Asimismo, por ejemplo, todas las formas ceto-enol e imina-enamina de los compuestos están incluidas en la invención). Los estereoisomeros individuales de los derivados azetidinona por ejemplo, están sustancialmente libres de otros isómeros o pueden mezclarse por ejemplo, como racematos o con todos los otros, o con otros estereoisomeros seleccionados. Cuando están presentes uno o más centros quirales en el derivado azetidinona de la presente invención, cada centro quiral puede tener independientemente la configuración S o R tal como se define en las Recomendaciones IUPAC 1974 El uso de los términos "sal", "solvato", "éster", "profármaco" y similares, se aplica igualmente a la sal, solvato, éster y profármaco de los enantiómeros, ésteres, isómeros, rotámeros, tautómeros, isómeros posicionales, racematos o profármacos de los derivados Azetidinona. La presente invención abarca también derivados Azetidinona rotulados isotópicamente que son idénticos a los que se mencionan aquí, excepto por el hecho de que uno o más átomos son reemplazados con un átomo que tiene una masa atómica o un número de masa diferente de la masa atómica o número de masa que se encuentra usualmente en la naturaleza. Ejemplos de isótopos que pueden incorporarse a los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro tales como 2H, 3H, 3C, 4C, 15N, 1sO, 170, 31 P, 32P, 35S, 18F, y 36CI, respectivamente. Algunos derivados Azetidinona rotulados isotópicamente (por ejemplo, aquellos rotulados con 3H y 14C) son útiles en los ensayos de compuestos y/o de distribución de tejido de sustrato. Los isótopos tritiados (es decir, 3H) y de carbono 14 (es decir, 14C) son particularmente preferidos por su facilidad de preparación y detectabilidad. Además, la sustitución con isótopos más pesados tales como deuterio (es decir, 2H) puede proporcionar ciertas ventajas terapéuticas que dan como resultado una estabilidad metabolica superior (por ejemplo, los requisitos de aumento de la vida media in vivo o dosificación reducida) y por lo tanto pueden preferirse en algunas circunstancias. Los derivados Azetidinona rotulados isotópicamente, pueden prepararse en general siguiendo procedimientos análogos a los descritos en los esquemas y/o en los ejemplos que se dan a continuación sustituyendo un reactivo rotulado isotópicamente apropiado para un reactivo no rotulado isotópicamente. Las formas polimórficas de los derivados Azetidinona, y las sales, solvatos, ésteres y profármacos de éstos se incluyen en la presente invención. Los expertos en la técnica apreciarán que para algunos de los derivados Azetidinona, un isómero mostrará una actividad farmacológica superior a la de otros isómeros. Las abreviaturas siguientes se usan aquí y se definen tal como sigue: BOC (ter-butoxicarbonilo); BODIPY (difluoruro de boro de dipirrometeno); BSA (albúmina de suero bovino); DCE (dicloroetano); DMSO {d6-sulfóxido de dimetilo); Dioxano (1 ,4-dioxano); DMEM (Medio Eagle Modificado con Dulbecco); EDTA (ácido etilendiaminatetraacético); EGTA (ácido tetraacético de etilen glicol); Et (etilo); EtOAc (acetato de etilo); EtOH (etanol); Eter (éter dietílico); FBS (suero bovino fetal); HBSS (solución salina equilibrada de Hank); HEK (riñon embriónico humano); HEPES (4-(2-hidroxietil)-1 -ácido piperazinetansulfonico); HOBt (/V-hidroxibenzotriazol); IPA (alcohol isopropílico); LCEM (espectrometría de masa por cromatografía líquida); LDA (diisopropilamida de litio); LHMDS (hexametildisilazida de litio); MeCN (acetonitrilo); MeOH (metanol); MEM (medio esencial mínimo); MP-TsOH (ácido poliestiren sulfónico macroporoso); mesilo (metansulfonilo); SiO2 (gel de sílice); TFA (ácido trifluoracético); THF (tetrahidrofurano); TMS (trimetilsililo); tosilo (p-toluensulfonilo); triflilo (trifluormetansulfonilo).
Métodos para preparar los derivados Azetidinona Los métodos útiles para preparar los derivados Azetidinona de las fórmulas (IA)-(ID) se indican a continuación en los Esquemas 1 -5. El Esquema 1 ilustra un método para preparar los derivados Azetidinona de la fórmula (IA)-(ID), donde R1 y R2 son tal como se han definido anteriormente para los compuestos de las fórmulas (IA)-(ID) y R3 es: (a) fenilo para los compuestos de fórmula (IA); (b) 4-CI-fenilo para los compuestos de la fórmula (IB); (c) -3-piridilo para los compuestos de la fórmula (IC); y (d) -2-piridilo para los compuestos de fórmula (ID).
ESQUEMA 1 2 3 6 8 5 Un compuesto aldheído de fórmula 1 en un solvente tal como tolueno o isopropanol puede reaccionar con un compuesto amina de fórmula 2 para proveer un compuesto imina de fórmula 3. Un compuesto de fórmula 4 (donde X1 es un halógeno o un grupo alcoxi tal como OEt) se trata luego con una base tal como LDA o LHMDS a -78 °C, y se hace reaccionar el enolato resultante con un compuesto de fórmula 3 para proveer un compuesto espirocíclico de fórmula 5. El grupo N-protector (PG) de un compuesto de la fórmula 5 puede ser luego removido para proveer un compuesto piperidina de fórmula 6. Un compuesto de fórmula 6 puede reaccionar luego con un compuesto de fórmula 7 (el cual puede ser un ácido carboxílico, un haluro de alquilo o arilo, o un isocianato) en presencia de una base o agente de acoplamiento apropiados para proveer derivados Azetidinona de la invención denotados por la fórmula 8. El esquema 2 ilustra un método alternativo para preparar los derivados Azetidinona de fórmula (IA)-(ID), donde R1 y R2 son tal como se han definido anteriormente para los compuestos de las fórmulas (IA)-(ID) y R3 es: (a) fenilo para los compuestos de fórmula (IA); (b) 4-CI-fenilo para los compuestos de fórmula (IB); (c) -3-piridilo para los compuestos de fórmula (IC); y (d) -2-piridilo para los compuestos de fórmula (ID).
ESQUEMA 2 11 Un compuesto aldehido de fórmula 1 se hace reaccionar con hexametildisilazida de litio para proveer una ¡mina TMS-protegida de fórmula 9. Un compuesto de fórmula 10 (donde X1 es un halógeno o un grupo alcoxi tal como OEt) se trata luego con una base tal como LDA o LHMDS a -78 °C, y el enolato resultante puede reaccionar con un compuesto de fórmula 9 para proveer un compuesto espirocíclico de fórmula 1 1 . Un compuesto de fórmula 1 1 puede reaccionar luego con un compuesto de fórmula 12 (donden X3 es un grupo saliente bueno tal como Cl, Br, I, O-triflilo, O-tosilo o O-mesilo), en presencia de una base tal como NaH, para proveer un compuesto Intermediario de fórmula 5, el cual puede convertirse subsiguientemente a los derivados Azetidinona de la invención (8) usando los métodos que se indica anterioarmente en el Esquema 1 . El Esquema 3 ilustra un método general útil para preparar los derivados Azetidinona de las fórmulas (IA)-(ID), donde el grupo R2 forma una urea terciaria con el átomo de nitrógeno al cual está unido.
ESQUEMA 3 Se hace reaccionar un intermediario espirocíclico de fórmula 6 con un isocianato de fórmula 13 para proveer un derivado Azetidinona de fórmula 14, donde el grupo R2 forma una urea terciaria con el átomo de nitrógeno al cual está unido, Ra representa los sustituyentes urea enumerados en el cuadro 5, y Ri y R3 son tal como se han definido anteriormente aquí.
Un método general para la preparación de compuestos de urea terciaria de fórmula 14 A una solución de un compuesto Intermediario de fórmula 6 (0.025 mmol) en DCE/MeOH (25: 1 v/v, 1 mi) se agregó una solución 0.5 M de un compuesto isocianato de fórmula 13 (0.075 mmol) en DCE. La mezcla de reacción se dejó bajo agitación a temperatura ambiente durante 20 horas después de lo cual se agregaron dicloroetano (0.5 mi), resina de isocianato de poliestireno (0.057 g, 0.087 mmol) y resina de poliestiren trisamina (0.049 g, 0.207 mmol). La reacción resultante se dejó bajo agitación a temperatura ambiente durante 16 horas. El producto de reacción se filtró y la resina se lavó con acetonitrilo (0.5 mi). El solvente orgánico se evaporó bajo presión reducida para proveer un derivado Azetidinona de fórmula 14, donde el grupo R2 forma una urea terciaria con el átomo de nitrógeno al cual está unida. El Esquema 4 ilustra un método general útil para preparar los derivados Azetidinona de las fórmulas (IA)-(ID), donde el grupo R2 forma una amida con el átomo de nitrógeno al cual está unida.
ESQUEMA 4 Se hace reaccionar un intermediario espirocíclico de fórmula 6 con ácido carboxilico de fórmula 15 para proveer un derivado Azetidinona de fórmula 16, donde el grupo R2 forma una amida con el átomo de nitrógeno al cual está unida, Rb representa los sustituyentes amida enumerados en el cuadro 5, y donde Ri y R3 son tal como se han definido anteriormente aquí.
Un método general para la preparación de compuestos amida de fórmula 16 A una mezcla de resina EDC de poliestireno (0.106 g, 0.146 mmol) y un compuesto de fórmula 6 (0.025 mmol) en MeCN/THF (3: 1 v/v, 1 mi) se agregó una solución 1 M de un ácido carboxilico de fórmula 15 (0.038 mmol) en DMF. A la mezcla resultante se agregó una solución de HOBt (0.5 M, 0.038 mmol) en MeCN/THF (3:1 v/v, 0.20 mi). La mezcla de reacción se dejó bajo agitación a temperatura ambiente durante 20 horas, después de este tiempo se agregaron acetonitrilo (0.5 mi), resina isocianato de poliestireno (0.049 g, 0.075 mmol) y resina de poliestiren trisamina (0.035 g, 0.148 mmol). La mezcla de reacción resultante se dejó bajo agitación a temperatura ambiente durante 64 horas y el producto de reacción se filtró y la resina se lavó con acetonitrilo (0.5 mi). El solvente orgánico se concentró al vacío para proveer un derivado Azetidinona de fórmula 16, donde el grupo F forma una amida con el átomo de nitrógeno al cual está unida. El Esquema 5 ilustra un método general útil para preparar los derivados Azetidinona de las fórmulas (IA)-(ID), donde el grupo R2 está unido al átomo de nitrógeno de piperidina de los derivados Azetidinona a través del ligador -CH2-.
ESQUEMA 5 Se hace reaccionar un intermediario espirocíclico de fórmula 6 con el aldehido de la fórmula 17 para proveer un derivado Azetidinona de fórmula 18, donde el grupo R2 está unido al átomo de nitrógeno de piperidina de los derivados Azetidinona a través de un ligador -CH2-, donde Rc representa los sustituyentes apropiados enumerados en el cuadro 5, y Ri y R3 son tal como se han definido anteriormente aquí.
Un método general para la preparación de compuestos N-aquilo de fórmula 18 A una solución de un compuesto de fórmula 6 (0.025 mmol) en DMF/THF (1 :1 v/v, 1 mi) se agregó una solución de aldehido 17 (0.075 mmol) en DCE, seguido de adidción de triacetoxiborohidruro de sodio (3 eq.). La mezcla de reacción se dejó bajo agitación a temperatura ambiente durante aproximadamente 20 horas. Se agregó MeOH (0.5 mi) al recipiente de reacción y se agitó durante 10 minutos o hasta que cesó la emanación de gas. Se agregó resina MP-TsOH (-100 mg) al recipiente de reacción y la mezcla resultante se agitó durante aproximadamente 2 horas. Luego se removió el solvente por filtración y la resina se lavó consecutivamente con DCE (3x), luego con metanol (3x), y se eluyeron los productos deseados de la resina mediante agitación con amoníaco 2N en metanol (1 .5-2 mL, durante 1 h) y filtración. El solvente orgánico se evaporó bajo presión reducida para proporcionar un derivado Azetidinona de fórmula 18, donde el grupo R2 está unido al átomo de nitrógeno de piperidina de los derivados de Azetidinona a través de un ligador -CH2-.
Usos de los derivados de Azetidinona Los derivados Azetidinona son útiles para tratar o prevenir una afección en un paciente. Por consiguiente, en una modalidad, la invención provee métodos para tratar una afección en un paciente, que comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de un derivado Azetidinona. En otra modalidad, los presentes métodos para tratar una afección en un paciente comprenden además administrar otro agente terapéutico. En una modalidad, otro agente terapéutico se selecciona entre: un agente útil para tratar el dolor, un agente anti-diabético, un agente bloqueador del canal de calcio de Tipo T, un antagonista de TRPV1 , un agonista de TRPV1 , un agonista de GPR1 19, un antagonista de NPC1 L1 , un inhibidor de HMG-CoA reductasa, un agonista de un receptor ácido nicotínico, un inhibidor de una proteína de transferencia de éster de colesterol, o un activador PPAR.
Dolor Los derivados Azetidinona son útiles para tratar el dolor. Las terapias para el dolor crónico corriente proveen únicamente un alivio parcial en pacientes que responden, y no son tolerados o son ineficaces en otros. El dolor crónico puede surgir como consecuencia de una inflamación tisular, infección viral (HIV, Herpes zoster) lesión tisular directa o trauma, como resultado de quimioterapia (por ejemplo, taxol, vincristina), lesiones del sistema nervioso central (por ejemplo, accidentes cerebrovasculares, MS) o como consecuencia de diabetes. Cuando el dolor crónico está asociado con lesiones tisulares somáticas o viscerales, los síntomas incluyen usualmente graves alteraciones sensoriales caracterizados por dolor espontáneo (descrito a menudo como dolor punzante, ardor, dolor del tipo de choque eléctrico o dolor pulsátil), hiperalgesia (respuesta exagerada a los estímulos dolorosos) y alodinia (percepción de estímulos no nocivos como dolorosos). Los síntomas que prevalecen en pacientes humanos incluyen hiperalgesia al frío, alodinia táctil y menos comúnmente, hiperalgesia al calor. Los síntomas pueden presentarse aislados o en combinación y a menudo existe una variación apreciable en la sintomatología asociada con diferentes enfermedades y típicamente entre pacientes que presentan la misma afección. En casos de lesiones/enfermedades tisulares somáticas o viscerales, estas percepciones sensoriales distorsionadas han sido relacionadas con una actividad inapropiada (hiperexitabilidad patológica) en los nervios periféricos que inervan el área afectada. La hiperexcitabilidad neuronal puede surgir como resultado de una función o actividad alterada del canal iónico. El dolor crónico es una verdadera enfermedad. Se cree que es el resultado, por lo menos en parte, de la plasticidad en sinapsis en centros de procesamiento nociceptores, un fenómeno definido como "sensibilización central", que consiste en una excitabilidad incrementada de las neuronas del asta posterior de la médula espinal. Se cree que el mantenimiento de la sensibilización central requiere actividad neuronal periférica sostenida (hiperexcitabilidad) en los nervios aferentes sensoriales y que dicha actividad puede generarse como resultado de focos ectópicos. Pueden encontrarse grandes corrientes de calcio de Tipo T en neuronas aferentes sensoriales de los ganglios de la raíz posterior (DRG). Los canales de calcio de tipo T han sido implicados como factor causal en el establecimiento de dicha hiperexcitabilidad anormal, debido a su conocida capacidad para funcionar como marcapasos neuronal. La evidencia farmacológica y de antinucleótido antisentido apoya un rol clave para los modelos pre-clínicos de los canales de calcio de tipo T DRG del dolor crónico. Los canales de calcio de tipo T, son canales regulados por voltaje que pueden abrirse con despolarizaciones relativamente pequeñas del potencial restante de células excitables. Hay tres genes distintos para las corrientes de calcio de Tipo T que codifican para Cav3.1 , Cav3.2 y Cav3.3. Los subtipos individuales tienen patrones únicos de distribución y se expresan en porciones periféricas y centrales de las vías del dolor. Los canales de calcio de tipo T se encuentran en las neuronas DRG de tamaño pequeño y tamaño mediano (Cav3.2) y en las regiones del SNC involucradas en los procesos de dolor incluyendo el asta dorsal de la médula espinal y el tálamo (Talley et al., J Neurosci, 1999, 19:1895-191 1 ). Las corrientes de calcio de tipo T han demostrado que cumplen una función en el estallido neuronal descargando a través de variaciones de calcio de umbral bajo transitorias de voltaje o corrientes que permiten un rápido estallido del potencial de acción neuronal (Suzuki y Rogwoski, Proc Nati Acad Sci USA, 1989, 86:7228-7232; White et al., Proc Nati Acad Sci USA, 1989, 86:6802-6806).
La inhibición de la función del canal de calcio de tipo T in vivo a través del uso de bloqueadores farmacológicos o bien modificaciones intermediadas por oligonucleótidos anti-sentido implican fuertemente a los canales de tipo T en los procesos de dolor normales y patológicos. Mibefradil y/o etosuximida son selectivos para el canal de calcio de tipo T y han demostrado que son eficaces en una variedad de modelos de dolor pre-clínico incluyendo: dolor térmico y mecánico agudo, de fase I y II del modelo formalina, modelo de ligación del nervio espinal de rata, hiperalgesia mecánica inducida por capsaicina, golpecito de cola de rata, quimioneuropatía inducida por paclitaxil y vincristina (Barton et al., Eur J Pharmacol, 2005, 521 :79-8; Dogrul et al., Pain, 2003, 105:159:168; Flatters y Bennett, Pain, 2004, 109:150-161 ; Todorovic et ai, Brain Res, 2002, 951 :336-340). El alivio del dolor en respuesta a etosuximida podría ser debido a cualquier acción central o periférica. Sin embargo la eficacia en respuesta a mibefradil puede atribuirse a efectos periféricos por dos razones. El mibefradil administrado sistémicamente primero no entra en el cerebro. Además, la administración intratecal de mibefradil es ineficaz (Dogrul et al., Pain, 2003, 105:159:168). Evidencia adicional que apoya la eficacia del bloqueo de los canales de tipo T periféricos surge de estudios con oligonucleótidos anti-sentido dirigidos contra un tipo de canal de tipo T, Cav3.2. Una inyección intratecal de oligonucleótidos específicos de hCaV3.2 disminuyó las corrientes de calcio de tipo T en las neuronas DRG y produjo efectos antinociceptores, anti-hiperalgésicos y anti-alodínicos. En estos estudios, la absorción del oligonucleótido y de la modificación intermediada por anti-sentido de las corrientes de tipo T ocurrió en neuronas DRG próximas al sitio de inyección pero no en la médula espinal (Bourinet er a/., EMBO J, 2005 24:315-324). Los derivados Azetidinona de esta invención son bloqueadores del canal de calcio de tipo T. Por consiguiente, los presentes compuestos son útiles en el tratamiento o prevención de afecciones que pueden ser tratadas o prevenidas mediante la administración de bloqueadores de canal de calcio de tipo T. Dichas condiciones incluyen pero no están limitadas al tratamiento o prevención del dolor neuropático. Los derivados Azetidinona de esta invención son antagonistas de TRPV1 y por lo tanto son útiles en el tratamiento o prevención de trastornos que pueden ser tratados o evitados mediante la administración del antagonista de TRPV1 . Las condiciones tratadas con antagonistas de TRPV1 incluyen dolor agudo, dolor crónico, dolor neuropático, dolor post-operativo, dolor artrítico post-reumatoide, dolor osteoartrítico, dolor de espalda, dolor visceral, dolor causado por cáncer, analgesia, neuralgia, dolor dental, dolor de cabeza, migraña, cefaléa en brotes, síndromes vasculares mixtos y no vasculares, dolor de cabeza por tensión, neuropatías, síndrome del túnel carpiano, neuropatía diabética, neuropatía relacionada con HIV, neuralgia post-herpética, fibromialgia, neuritis, ciática, lesiones nerviosas, isquemia, neurodegeneración, accidente cerebrovascular, dolor post-accidente cerebrovascular, esclerosis múltiple, enfermedades respiratorias, asma, tos, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, broncoconstricción, trastornos inflamatorios (tal como inflamación general, trastornos de inflamación ocular, trastornos de inflamación de vejiga, trastornos inflamatorio de la piel, trastornos inflamatorios crónicos), dolor inflamatorio e hiperalgesia y alodinia asociada, dolor neuropático e hiperalgesia y alodinia asociadas, esofagitis, acidez, metaplasia de Barrett, disfagia, trastornos de reflujo gastroesofágico, úlceras estomacales y duodenales, dispepsia funcional, síndrome de intestino irritable, enfermedad de inflamación intestinal, colitis, enfermedad de Crohn, hipersensiblidad pélvica, dolor pélvico, dolor menstrual, cólico renal, incontinencia urinaria, cistitis, quemaduras, picazón, psoriasis, prurito, emesis, causalgia, dolor mantenido simpáticamente, síndromes de desaferenciación, lesiones o disfunciones de tejidos epiteliales, alteraciones de motilidad visceral en regiones respiratorios, genitourinarias, gastrointestinales vasculares, heridas, vitíligo, diarrea, lesiones gástricas causadas por agentes necrotizantes y crecimiento del cabello. En una modalidad, los derivados Azetidinona de la presente invención se usan para tratar dolor inflamatorio o neuropático. Agentes adicionales que son útiles en los presentes métodos para tratar dolor inflamatorio incluyen corticoesteroides, agentes antiinflamatorios no esferoidales, inhibidores de COX-I y COX-II, agentes útiles para tratar enfermedades de inflamación intestinal y agentes útiles para tratar artritis reumatoidea. En una modalidad, los agentes adicionales para tratar dolor inflamatorio son esteroides y agentes analgésicos no opioides.
Dolor neuropático tal como se usa aquí, se refiere a un estado anormal de sensación de dolor en el cual se continua la reducción del umbral del dolor y similares, debido a anormalidades funcionales que acompañan el daño o degeneración de un nervio, plexo o tejido blando perineural, causado por heridas (por ejemplo, laceraciones, contusiones, lesiones por avulsión nerviosa, amputación de un miembro), compresión (síndrome del túnel carpiano, neuralgia trigeminal, actividad tumoral), infección, cáncer, isquemia y similares, trastornos metabólicos tales como diabetes mellitus y similares. El dolor neuroático incluye el dolor causado por un daño nervioso central y periférico. Incluye también dolor causado por mononeuropatía o polineuropatía. En algunas modalidades, el dolor neuropático es inducido por diabetes. Otros ejemplos de dolor neuropático que pueden tratarse o evitarse usando los derivados de azetidinona incluyen pero no están limitados a alodinia (una sensación de dolor inducida por estímulos mecánicos o térmicos que no provoca normalmente dolor) hiperalgesia (una respuesta excesiva a un estímulo que normalmente es doloroso), hiperestesia (una respuesta excesiva a un estímulo de contacto), polineuropatía diabética, neuropatía por compresión, dolor de cáncer, dolor central, dolor de parto, dolor de infarto de miocardio, dolor de post-accidente cerebrovascular, dolor pancreático, dolor por cólicos, dolor muscular, dolor post-operativo, dolor post-apopléjico, dolor asociado con enfermedad de Parkinson, dolor asociado con cuidado intensivo, dolor asociado con la enfermedad periodontal (incluyendo gingivitis y periodontitis), dolor menstrual, dolor por migraña, dolores de cabeza persistentes (por ejemplo, cefalea en brotes o dolor de cabeza por tensión crónica), estados de dolor persistente (por ejemplo, fibromialgia o dolor miofascial), neuralgia trigeminal, neuralgia post-herpética, bursitis, dolor asociado con SIDA, dolor asociado con esclerosis múltiple, dolor debido a trauma y/o degeneración espinal, ardor, dolor remitido, memoria del dolor realzado, y mecanismos neuronales involucrados en el control del dolor. Dolor inflamatorio que puede surgir como resultado de lesiones del tejido blando incluyendo el que involucra la musculatura (miositis) y visceras (colitis y enfermedad de inflamación intestinal, pancreatitis, cistitis, ileitis, enfermedad de Crohn), nervios (neuritis, radiculopatías, radioculogangionitis), trastornos artríticos (por ejemplo, enfermedad reumatoide y trastornos relacionados tal como espondilitis anquilosante), enfermedad de las articulaciones (incluyendo osteoartritis). En modalidades específicas, los derivados Azetidinona de la presente invención son útiles para tratar o prevenir alodinia o hiperalgesia. Otros agentes adicionales en los presentes métodos para tratar dolor neuropático incluyen analgésicos no opioides (conocidos también como antiinflamatorios no esteroidales) tales como ácido acetilsalicílico, trisalicilato de colina magnesio, acetaminofeno, ibuprofeno, fenoprofeno, diflusinal, y naproxen; analgésicos opioides tales como morfina, hidromorfona, metadona, levorfanol, fentanil, oxicodona, y oximorfona; esferoides tales como prednisolona, fluticasona, triamcinolona, beclometasona, mometasona, budisamida, betametasona, dexametasona, prednisona, flunisolida y cortisona; inhibidores de COX-I tales como aspirina y piroxicam; inhibidores de COX-II tales como rofecoxib, celecoxib, valdecoxib y etoricoxib; agentes útiles para tratar enfermedad intestinal inflamatoria tal como IL-10, esteroides, y azulfidina; agentes útiles para tratar artritis reumatoidea tales como metotrexato, azatioprina, ciclofosfamida, esteroides y micofenolato mofetil; agentes antimigraña, antieméticos, bloqueadores ß-adrenérgicos; anticonvulsivos; antidepresivos, otros bloqueadores del canal Ca2+-; bloqueadores del canal de sodio; agentes anti-cáncer; agentes para el tratamiento o prevención de Ul; agentes para tratar la hipertensión, agentes para tratar o prevenir angina de pecho, agentes para tratar fibrilación auricular; agentes para tratar insomnio; agentes para tratar insuficiencia renal; agentes para tratar la enfermedad de Alzheimer; agentes para tratar y prevenir IBS; agentes para tratar enfermedad de Parkinson y parkinsonismo; agentes para tratar ansiedad; agentes para tratar epilepsia; agentes para tratar accidentes cerebrovasculares; agentes para tratar psicosis; agentes para tratar corea de Huntington; agentes para tratar ALS; agentes para tratar vómito; agentes para tratar disquinesia; y agentes para tratar depresión. En una modalidad, los otros agentes para tratar dolor neuropático son analgésicos opioides y no opioides. En otra modalidad, los otros agentes para el tratamiento del dolor neuropático se seleccionan entre ácido acetilsalicílico, trisalicilato de colina magnesio, acetaminofen, ibuprofeno, fenoprofeno, diflusinal, naproxeno, morfina, hidromorfona, metadona, levorfanol, fentanil, oxicodona, y oximorfona.
Trastornos del metabolismo lipídico Los derivados Azetidinona son útiles para tratar trastornos del metabolismo lipídico. Los derivados Azetidinona de esta invención son antagonistas de NPC1 L1 . En una modalidad, los derivados Azetidinona son por consiguiente útiles para tratar trastornos del metabolismo lipídico, en particular para inhibir la absorción de colesterol. Se comprenderá que cuando se administran los derivados Azetidinona para inhibir la absorción de colesterol en un paciente, la inhibición puede ser parcial o completa. Por consiguiente, en una modalidad, la absorción de colesterol en un paciente es parcialmente inhibida. En otra modalidad, la absorción de colesterol en un paciente es completamente inhibida. Los métodos para tratar trastornos del metabolismo lipídico incluyen tratamiento de hiperlipidemia, hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia, sitosterolemia y síntomas arterioescleróticos; inhibición de la absorción de colesterol del intestino; reducción de las concentraciones de colesterol LDL en el plasma o suero de la sangre; reducción de las concentraciones de colesterol y éster de colesterol en el plasma o suero de la sangre; reducción de las concentraciones de proteína C-reactiva en el plasma o suero de la sangre (CRP); reducción de las concentraciones de triglicéridos en el plasma o suero de la sangre; reducción de las concentraciones de apolipoproteina B en el plasma o suero de la sangre; aumento de las concentraciones de colesterol (HDL) de lipoproteína de alta densidad en el plasma o suero de la sangre; aumento de la excreción fecal de colesterol; tratamiento de una afección clínica para la cual está indicado un inhibidor de absorción de colesterol; reducción de la incidencia de eventos relacionados con enfermedades cardiovasculares; reducción de la concentración de por lo menos un esterol o 5a-estanol no colesterolémico en el plasma o tejidos; tratamiento o prevención de inflamación vascular; prevención, tratamiento o mejoramiento de los síntomas de la enfermedad de Alzheimer; regulación de la producción o el nivel de por lo menos un péptido amiloide ß en la corriente sanguínea y/o cerebro de un paciente; regulación de la cantidad de la isoforma 4 de ApoE en la corriente sanguínea y/o cerebro; prevención y/o tratamiento de la obesidad; y prevención o disminución de la incidencia de xantomas. Agentes adicionales útiles en los presentes métodos para tratar un trastorno del metabolismo lipídico incluyen inhibidores de la absorción de colesterol (por ejemplo, antagonistas de NPC1 L1 tales como ezetimibe); inhibidores de la biosíntesis de colesterol; inhibidores de la proteína de transferencia de éster de colesterol (CETP), tal como torcetrapib; secuestrantes de ácido biliar; ácido nicotínico o un derivado de éste; agonistas del receptor ácido nicotínico, tales como niacina o niaspan; agonistas o activadores del receptor proliferador-activador de peroxisoma (PPAR); inhibidores de acilcoenzima A:colesterol aciltransferasa (ACAT); inhibidores del transporte de ácido biliar ileal ("IBAT") (o inhibidores del transporte de ácido biliar co-dependiente de sodio apical ("ASBT"); medicaciones para el control de la obesidad; agentes hipoglicémicos, antioxidantes; inhibidores de acilCoA: O-aciltransferasa de colesterol ("ACAT"); inhibidores de la proteína de transferencia de éster de colesterilo ("CETP"); probucol o derivados de éste, activadores del receptor ("LDL") de lipoproteína de baja densidad; ácidos grasos omega 3 ("3-PUFA"); fibras naturales solubles en agua; esteróles vegetales, estañóles vegetales y/o ésteres de ácidos grasos o estañóles de plantas; y agentes antihipertensivos. Ejemplos no limitativos de inhibidores de la biosíntesis de colesterol apropiados que con útiles en los presentes métodos incluyen inhibidores competitivos de HMG-CoA reductasa, inhibidores de escualeno sintasa, inhibidores de escualeno epoxidasa y mezclas de éstos. Ejemplos no limitativos de inhibidores de HMG-CoA reductasa apropiados útiles en los presentes métodos incluyen estatinas tales como lovastatina, pravastatina, fluvastatina, simvastatina, atorvastatina, cerivastatina, CI-981 , resuvastatina, rivastatina y pitavastatina, rosuvastatina; inhibidores de HMG-CoA reductasa, por ejemplo, L-659,699 ((E,E)-1 1 -[3'R-ácido (hidroxi-metil)-4'-oxo-2'R-oxetanil]-3,5,7R-trimetil-2,4-undecadienoico); inhibidores de la síntesis de escualeno, por ejemplo, escualestatina 1 ; e inhibidores de escualeno epoxidasa, por ejemplo, NB-598 ((E)-N-etil-N-clorhidrato de (6,6-dimetil-2-hepten-4-inil)-3-[(3,3'-bitiofen-5-il)metoxi]bencen-metanamina) y otros inhibidores de la biosíntesis de esterol tales como DMP-565. En una modalidad, los inhbidores de HMG-CoA reductasa incluyen lovastatina, pravastatina y simvastatina. En otra modalidad, el inhibidor de HMG-CoA reductasa es simvastatina.
Los secuestradores de ácido biliar adhieren los ácidos biliares en el intestino, interrumpiendo la circulación heterohepática de los ácidos biliares y causando un aumento en la excreción fecal de esteroides. Ejemplos no limitativos de secuestrantes de ácido biliar que son útiles en los presentes métodos incluyen colestiramina (un copolímero de estireno-divinilbenceno que contiene grupos catiónicos de amonio cuaternario capaces de adherir los ácidos biliares tales como colestiramina QUESTRAN® o QUESTRAN LIGHT® que se encuentran disponibles en Bristol-Myers Squibb), colestipol (un copolímero de dietineltriamina y 1 -cloro-2,3-epoxipropano, tal como tabletas de COLESTID® que se encuentran disponibles en Pharmacia), clorhidrato de colesevelam (tal como tabletas WelChol® (poli(clorhidrato de alilamina) entrecruzado con epiclorohidrina y alquilado con 1 -bromodecano y (bromuro de 6-bromohexil)-trimetilamonio) que se encuentran disponbiles en Sankyo), derivados solubles en agua tales como 3,3-ioeno, N-(cicloalquil) alquilaminas y poliglusam, poliestirenos cuaternizados insolubles, saponinas y mezclas de éstas. Los secuestrantes inorgánicos de coleserol apropiados incluyen salicilato de bismuto además de arcilla de montmorilonita, hidróxido de aluminio y antiácidos de carbonato de calcio. Los activadores o agonistas de PPAR actúan como agonistas para los receptores activados por proliferador de peroxisoma. Se han identificado tres subtipos de PPAR y han sido designados como receptor alfa activado proliferador de peroxisoma (PPARa), receptor gamma activado por proliferador de peroxisoma (PPARY) y receptor delta activado por proliferador de peroxisoma (PPARó). Cabe observar que PPARó está también mencionado en la literatura como PPAR3 y como NUC1 , y cada uno de sus nombres se refiere al mismo receptor. El término "activador de PPAR" tal como se usa aquí, se refiere a activadores de cualquier subtipo receptor de PPAR. El PPARa regula el metabolismo de los lípidos. El PPARa es activado por fibrados y una cantidad de ácidos grasos de cadena media y larga, y está involucrada en la estimulación de la ß-oxidación de ácidos grasos. Los subtipos receptores de PPARy están involucrados en la activación del programa de diferenciación de adipocitos y no están involucrados en la estimulación de la proliferación de peroxisoma en el hígado. El PPAR5 ha sido calificado como útil para aumentar los niveles de lipoproteína de alta densidad (HDL) en los seres humanos. Ver por ejemplo, WO 97/28149. Los compuestos activadores PPARa son útiles para entre otras cosas, disminuir los triglicéridos, disminuir moderadamente los niveles de LDL y aumentar los niveles de HDL. Ejemplos útiles de activadores de PPARa incluyen fibrados. Ejemplos no limitativos de derivados de ácido fíbrico apropiados ("fibrados") que son útiles en los presentes métodos incluyen clofibrato; gemfibrozil; ciprofibrato; bezafibrato; clinofibrato; binifibrato; lifibrol; fenofibrato y mezclas de éstos. Estos compuestos pueden usarse en una variedad de formas incluyendo pero sin limitarlo a la forma ácida, forma salina, racematos, enantiómeros, zwitteriones y tautómeros. Ejemplos no limitativos de activadores PPARa adicionales útiles en los presentes métodos incluyen compuestos de fluorofenilo apropiados tal como se describió en la Patente Norteamericana No. 6,028,109 que se incorpora aquí como referencia; ciertos compuestos fenilpropiónicos sustituidos descritos en la WO 00/75103 se incorporan aquí como referencia; compuestos activadores de PPARa descritos en la WO 98/43081 se incorporan aquí como referencia. Otros ejemplos de activadores PPARy apropiados útiles en los presentes métodos incluyen derivados de glitazonas o tiazolidindionas, tal como, troglitazona; rosiglitazona y pioglitazona. Otras tiazolidindionas útiles incluyen ciglitazona, englitazona, darglitazona y BRL 49653 descritos en la WO 98/05331 que se incorpora aquí como referencia; compuestos activadores PPARy descritos en la WO 00/76488 que se incorpora aquí como referencia; compuestos activadores PPARy descritos en la Patente Norteamericana No. 5,994,554 que se incorpora aquí como referencia; acetilfenoles descritos en la Patente Norteamericana No. 5,859,051 que se incorpora aquí como referencia; compuestos quinolin fenilo descritos en la WO 99/20275 que se incorpora aquí como referencia; compuestos arilo descritos en la WO 99/38845 que se incorpora aquí como referencia; compuestos fenilo 1 ,4-disubstituidos descritos en la WO 00/63161 ; compuestos arilo descritos en la WO 01/00579 que se incorpora aquí como referencia; compuestos de ácido benzoico descritos en las WO 01/12612 & WO 01/12187 que se incorporan aquí como referencia; y compuestos de ácido 4-hidroxi-fenilalcónicos sustituidos descritos en la WO 97/31907 que se incorpora aquí como referencia. Los compuestos PPAR5 son útiles entre otras cosas para disminuir los niveles de triglicéridos o para elevar los niveles de HDL Ejemplos no limitativos de activadores PPAR5 útiles en los presentes métodos incluyen derivados tiazol y oxazol apropiados tales como C.A.S. No. Registro 317318-32-4, descritos en la WO 01/00603 que se incorporan aquí como referencia); ácidos flúor, cloro o tio fenoxi fenilacéticos tal como los descritos en la WO 97/28149 que se incorporan aquí como referencia; análogos de ácidos grasos ??-ß-oxidables descritos en la Patente Norteamericana N°. 5,093,365 que se incorpora aquí como referencia; y compuestos PPAR5 descritos en la WO 99/04815 que se incorpora aquí como referencia. Además, los compuestos que tienen funcionalidad múltiple para activar varias combinaciones de PPARa, PPARy y PPAR6 son también útiles en los presentes métodos. Ejemplos no limitativos incluyen compuestos arilo sustituidos descritos en la Patente Norteramericana No. 6,248,781 ; WO 00/23416; WO 00/23415; WO 00/23425; WO 00/23445; WO 00/23451 ; y WO 00/63153; todas las cuales se incorporan aquí como referencia, y han sido descritas como compuestos activadores PPARa y/o PPARy útiles. Otros ejemplos no limitativos de compuestos activadores PPARa y/o PPARy útiles incluyen los compuestos activadores descritos en la WO 97/25042 que se incorpora aquí como referencia; compuestos activadores descritos en la WO 00/63190 que se incorporan aquí como referencia; compuestos activadores descritos en la WO 01/21 181 que se incorporan aquí como referencia; compuestos biaril-oxa(tia)zol descritos en la WO 01/16120 que se incorpora aquí como referencia; compuestos descritos en las WO 00/63196 y WO 00/63209 que se incorporan aquí como referencia; compuestos 5-aril-2,4-tiazolidinadionas sustituidas descritas en la Patente Norteamericana No. 6,008,237 que se incorpora aquí como referencia; compuestos de ariltiazolidinadiona y ariloxazolidindiona descritos en las WO 00/78312 y WO 00/78313G que se incorporan aquí como referencia; compuestos GW2331 o (2-(4-[difluorfenil]-1 heptilureido)etil]fenoxi)-2-metilbutírico descritos en la WO 98/05331 que se incorporan aquí como referencia; compuestos arilo tal como los descritos en la Patente Norteamericana No. 6,166,049 que se incorpora aquí como referencia; compuestos oxazol descritos en la WO 01/17994 que se incorpora aquí como referencia y compuestos ditiolano descritos en las WO 01/25225 y WO 01/25226 que se incorporan aquí como referencia. Otros compuestos activadores PPAR que son útiles en los presentes métodos incluyen compuestos benziltiazolidin-2,4-diona sustituidos tal como los descritos en las WO 01/14349, WO 01/14350 y WO/01/04351 que se incorporan aquí como referencia; compuestos mercaptocarboxílicos descritos en la WO 00/50392 que se incorpora aquí como referencia; los compuestos ascofuranona descritos en la WO 00/53563 que se incorpora aquí como referencia; compuestos carboxílicos descritos en la WO 99/46232 que se incorpora aquí como referencia; compuestos descritos en la WO 99/12534 que se incorpora aquí como referencia; compuestos benceno descritos en la WO 99/15520 que se incorpora aquí como referencia; compuestos de o-anisamida descritos en la WO 01/21578 que se incorpora aquí como referencia; y compuestos activadores PPAR descritos en la WO 01/40192 que se incorpora aquí como referencia. Los derivados probucol útiles en los presentes métodos incluyen AGI-1067 y otros descritos en las Patentes Norteamericanas Nos. 6,121 ,319 y 6,147,250, que pueden reducir los niveles de LDL y HDL, tales como agentes disminuidores de colesterol. Los inhibidores IBAT pueden inhibir el transporte de ácido biliar para reducir los niveles de colesterol LDL. Ejemplos no limitativos de inhibidores IBAT apropiados en los presentes métodos incluyen benzotiepinas tales como compuestos terapéuticos que comprenden una estructura de 1 ,1 -dióxido de 2,3,4,5-tetrahidro-1 -benzotiepina tal como los descritos en la Solicitud de Patente PCT WO 00/38727 que se incorpora aquí como referencia. Tal como se usa aquí, "agonista del receptor ácido nicotínico" significa cualquier compuesto que actuará como agonista para el receptor ácido nicotínico. Los agonistas del receptor ácido nicotínico útiles en los presentes métodos incluyen aquellos que tienen una estructura de piridin -3-carboxilato o una estructura de pirazin-2-carboxilato, que incluyen formas ácidas, sales, ésteres, zwitteriones y tautómeros, cuando están disponibles. Ejemplos de agonistas del receptor ácido nicotínico que son útiles en los presentes métodos incluyen niceritrol, nicofuranosa y acipimox. Los agonistas de ácido nicotínico y NAR Inhiben la producción hepática de VLDL y su metabolito LDL y aumentan los niveles de HDL y apo A-1 . Un ejemplo, de un producto de ácido nicotínico apropiado es NIASPAN® (tabletas de niacina de liberación prolongada) que se encuentran disponibles en Kos Pharmaceuticals, Inc. (Cranbury, NJ). Los presentes métodos para tratar un trastorno del metabolismo lipídico pueden comprende además, la administración de uno o más inhibidores ACAT como agentes disminuidores de lípidos. Los inhibidores de ACAT reducen los nniveles de LDL y VLDL. ACAT es una enzima responsable de la esterificacion del exceso de colesterol intracelular y puede reducir la síntesis de VLDL, que es un producto de la esterificacion de colesterol, y la hiperproducción de lipoproteínas que contienen apo B-100. Ejemplos no limitativos de inhibidores ACAT útiles, que resultan útiles ne los presentes métodos incluyen avasimiba, HL-004, lecimibida y CL-277082 (/V-(2,4-difluorfenil)-A/-[[4-(2,2-dimetilpropil)fenil]-metil]-/V-heptilurea). Ver P. Chang et al., "Current, New y Future Treatments in Dyslipidaemia and Atherosclerosis", Drugs 2000 Jul; 60(1 ); 55-93, que se incorporan aquí como referencia. Los presentes métodos para tratar un trastorno del metabolismo lipidico pueden comprender además administrar uno o más inhibidores de Proteína de Transferencia de Ester de Colesterilo ("CETP") co-administrados o en combinación con uno o más derivados Azetidinona. El CETP es responsable del intercambio o transferencia del éster de colesterilo portador de HDL y triglicéridos en VLDL. Ejemplos no limitativos de inhibidores de CETP apropiados útiles en los presentes métodos han sido descritos en la Solicitud de Patente PCT No. WO 00/38721 y en la Patente Norteamericana No. 61 ,47,090, que se incorporan aquí como referencia. Los inhibidores de hidrolasa de éster de colesterilo pancreático (pCEH) tales como WAY-121898 pueden ser también co-administrados con o en combinación con el o los derivados de ácido fíbrico y los inhibidores de absorción de esterol discutidos anteriormente. En otra modalidad los presentes métodos para tratar un trastorno del metabolismo lipídico pueden comprender además administrar uno o más activadores del receptor lipoproteína de baja densidad (LDL), como agentes disminuidores de lípidos. Ejemplos no limitativos de activadores del receptor LDL apropiados útiles en los presentes métodos incluyen HOE-402, un derivado de imidazolidinil-pirimidina que estimula directamente la actividad del receptor LDL. Ver M. Huettinger et al., "Hypolipidemic activity of HOE-402 is Mediated by Stimulation of the LDL Receptor Pathway", Arterioscler. Thromb. 1993; 13:1005-12. En una modalidad, los presentes métodos para tratar un trastorno del metabolismo lipídico pueden comprender además administrar aceite de pescado que contiene ácidos grasos omega 3 (3-PUFA), que pueden reducir los niveles de VLDL y triglicéridos, como un agente que disminuye los lípidos.
En otra modalidad, los presentes métodos para tratar un trastorno del metabolismo lipídico pueden comprender además administrar fibras naturales solubles en agua tales como tragatona, guar, avena y pectina que pueden reducir los niveles de colesterol. En una modalidad más, los presentes métodos para tratar un trastorno del metabolismo lipídico pueden comprender además, administrar esteróles vegetales, estañóles vegetales y/o ésteres de ácidos grasos de estañóles vegetales tales como éster de sitostanol usado en BENECOL® margarina, que pueden reducir los niveles de colesterol.
Desmielinización Los derivados Azetidinona son útiles para tratar la desmielinización. La desmielinización en el sistema nervioso central (cerebro y médula espinal) ocurre en varias enfermedades primarias desmielinizantes tales como esclerosis múltiple, encefalomielitis aguda diseminada, adrenoleucodistrofia, adrenomieloneuropatía, atrofia óptica hereditaria de Leber y mielopatía asociada con HTLV.
Diabetes Los derivados Azetidinona son útiles para tratar diabetes miellitus. La diabetes miellitus denominada comúnmente diabetes, se refiere a un proceso de enfermedad derivado de factores causantes múltiples y caracterizado por niveles elevados de glucosa en el plasma, denominados hiperglicemia. El desarrollo prematuro de ateroesclerosis y el régimen incrementado de enfermedades cardiovasculares y periféricas vasculares, son características de pacientes con diabetes. Existen dos formas principales de diabetes: La diabetes de Tipo I (denominada también diabetes insulino-dependiente o IDDM) y diabetes de Tipo II (denominada también diabetes no insulino dependiente o NIDDM). En una modalidad los derivados Azetidiona son útiles para tratar la diabetes de Tipo II. La diabetes de Tipo I es el resultado de una deficiencia absoluta de insulina, la hormona que regula la utilización de glucosa. Esta deficiencia de insulina se caracteriza usualmente por la destrucción de las células ß en el páncreas, lo cual conduce usualmente a una deficiencia absoluta de insulina. La diabetes de Tipo I tiene dos formas: Diabetes Mellitus intermediada por inmunidad, que es el resultado de una destrucción de autoinmunidad intermediada por células, de las células ß del páncreas; y la diabetes mellitus idiopática, que se refiere a formas de la enfermedad que no tienen etiologías conocidas. La diabetes de Tipo II es una enfermedad caracterizada por resistencia a la insulina acompañada de una deficiencia de insulina relativa más que absoluta. La diabetes de Tipo II puede estar en un intervalo que va desde resistencia predominante a la insulina con deficiencia relativa de insulina hasta deficiencia predominante de insulina con cierta resistencia a la insulina. Resistencia a la insulina es la capacidad disminuida de la insulina para ejercer su acción biológica a través de un amplio intervalo de concentraciones. En los individuos resistentes a la insulina, el cuerpo secreta cantidades anormalmente elevadas de insulina para compensar su defecto. Cuando están presentes cantidades inadecuadas de insulina para compensar la resistencia a la insulina y controlar adecuadamente la glucosa, se desarrolla un estado de tolerancia a la glucosa deteriorada. La secreción de insulina puede declinar adicionalmente con el tiempo. La diabetes de Tipo II puede ser debida a una resistencia a los efectos reguladores estimuladores de insulina sobre el metabolismo de glucosa y lípidos en los tejidos principales sensibles a la insulina tales como tejido muscular hepático y adiposo. Esta resistencia a la respuesta de insulina da como resultado insulina insuficiente para la activación de la absorción de glucosa, oxidación y almacenamiento en los músculos e inadecuada represión de insulina en la lipolisis en el tejido adiposo y de la producción de glucosa y secreción en el hígado. En la diabetes de Tipo II los niveles de ácido graso libre son a menudo elevados en los pacientes obesos y en algunos no obesos, y se incrementa la oxidación de lípidos. Los derivados Azetidinona de esta invención son agonistas GPR1 19. En una modalidad, los derivados Azetidinona son por lo tanto útiles para tratar diabetes. En particular, la diabetes de Tipo II puede ser tratada por administración de un derivado Azetidinona solo o en combinación con uno o más agentes adicionales para tratar la diabetes. Ejemplos de otros agentes útiles en los presentes métodos para tratar la diabetes de Tipo II incluyen sulfonilureas, sensibilizadores de insulina (tales como agonistas PPAR, inhibidores de DPPIV, inhibidores de PTP-1 B y activadores de glucoquinasa), inhibidores de a-glucosidasa, secretagogos de insulina, compuestos que disminuyen el caudal de glucosa hepática, e insulina. Ejemplos no limitativos de los fármacos de sulfonil urea incluyen glipizida, tolbutamida, gliburida, glimepirida, clorpropamida, acetohexamida, gliamilida, gliclazida, glibenclamida y tolazamida. Los sensibilizadores de insulina incluyen agonistas PPAR-? descritos en forma detallada anteriormente, preferiblemente troglitazona, rosiglitazona, pioglitazona y englitazona; biguanidinas tales como metformina y fenformina; inhibidores de DPPIV tales como esitagliptina, saxagliptina, denagliptina y vildagliptina; inhibidores de PTP- B; y activadores de glucoquinasa. Los inhibidores de a-glucosidasa que pueden ser útiles para tratar la diabetes de Tipo II incluyen miglitol, acarbosa, y voglibosa. Los fármacos que disminuyen los niveles de glucosa hepática incluyen Glucofage y Glucofage XR. Los secretagogos de insulina incluyen fármacos de sulfonil urea y que no son de sulfonil urea tales como GLP-1 , exendina, GIP, secretina, glipizida, clorpropamida, nateglinida, meglitinida, glibenclamida, repaglinida y glimepirida. Insulina incluye todas las formulaciones de insulina incluyendo formas de insulina de acción prolongada y de acción reducida. Los derivados azetidinona de la invención pueden administrarse en combinación con agentes anti-obesidad para el tratamiento de diabetes. Ejemplos de agentes antiobesidad útiles en los presentes métodos incluyen antagonistas de CB1 o agonistas inversos tales como rimonabant, antagonistas del neuropéptido Y, agonistas MCR4, antagonistas del receptor MCH, antagonistas del receptor histamnina H3 o agonistas inversos, leptina, supresores de apetito tales como sibutramina, e inhibidores de lipasa tales como xenical. Para tratar la diabetes, los compuestos de la invención pueden administrarse también en combinación con agentes anti-hipertensivos por ejemplo, ß-bloqueadores y bloqueadores del canal de calcio (por ejemplo, diltiazem, verapamil, nifedipina, amlopidina, y mibefradil), inhibidores de ACE (por ejemplo, captopril, lisinopril, enalapril, spirapril, ceranopril, zefenopril, fosinopril, cilazopril, y quinapril), antagonistas del receptor AT-1 (por ejemplo, losarían, irbesartan, y valsarían), inhibidores de renina y antagonistas del receptor endotelina (por ejemplo, sitaxsentan). Ciertos fármacos de meglitinida disminuyen los niveles de glucosa en la sangre mediante la estimulación de la liberación de insulina desde el páncreas. Esta acción depende del funcionamiento de las células ß en los islotes pancreáticos. La liberación de insulina depende de la glucosa y disminuye con bajas concentraciones de glucosa. Los fármacos meglitinida cierran los canales de potasio dependientes de ATP en la membrana de la célula ß mediante la unión en los sitios caracterizables. Este bloqueo del canal de potasio despolariza la célula ß, lo cual conduce a una apertura de los canales de calcio. El reflujo de calcio incrementado resultante induce la secreción de insulina. Ejemplos no limitativos de fármacos de meglitinida apropiados útiles en los presentes métodos incluyen repaglinida y nateglinida. Ejemplos no limitativos de agentes anti-diabéticos apropiados que sensibilizan el cuerpo para la insulina que está ya presente incluyen ciertas biguanidas y ciertas glitazonas o tiazolidindionas. Ciertas biguanidas apropiadas dismuyen el azúcar de la sangre al disminuir la producción de glucosa hepática, dismimuyen la producción intestinal de glucosa y mejoran la sensibilidad a la insulina (incrementado la absorción y utilización de la glucosa periférica). Un ejemplo no limitativo de una biguanida apropiada es metformina. Ejemplos no limitativos de metformina incluyen clorhidrato de metformina clorhidrato de metformina (clorhidrato de diamida N,N-dimetilimidodicarbonimídico tales como GLUCOPHAGE® Tabletas de Bristol-Myers Squibb); clorhidrato de metformina con gliburida, tal como GLUCOVANCE™ Tabletas de Bristol-Myers Squibb); buformina. Ejemplos no limitativos de agentes antidiabéticos que disminuyen o bloquean la descomposición de almidones y ciertos azúcares y que son apropiados para ser usdos en las composiciones de la presente invención incluyen inhibidores de alfa-glucosidasa y ciertos péptidos para aumentar la secreción de insulina. Los inhibidores de alfa-glucosidasa ayudan al cuerpo a disminuir el azúcar de la sangre mediante la prolongación de la digestión de los carbohidratos ingeridos, lo cual da como resultado un aumento menor de concentración de glucosa en la sangre después de las comidas. Ejemplos no limitativos de inhibidores de alfa-glucosidasa apropiados incluyen acarbosa; miglitol; camiglibosa; ciertas poliaminas descritas en la WO 01/47528 (que se incorpora aquí como referencia); voglibosa. Ejemplos no limitativos de péptidos apropiados para aumentar la producción de insulina incluyen amlintida (CAS Reg. No. 122384-88-7 de Amylin; pramlintida, exendina, ciertos compuestos que tienen actividad agonística del péptido-1 de tipo glucagón (GLP-1 ) descritos en la WO 00/07617 (que se incorpora aquí como referencia). Ejemplos no limitativos de agentes antidiabéticos adicionales incluyen insulina oralmente administrable. Ejemplos no limitativos de insulina o composiciones que contienen insulina apropiados oralmente administrables incluyen AL-401 de Autolmmune, y ciertas composiciones descritas en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,579,730; 4,849,405; 4,963,526; 5,642,868; 5,763,396; 5,824,638; 5,843,866; 6,153,632; 6,191 ,105; y la Publicación Internacional No. WO 85/05029 (cada una de las cuales se incorpora aquí como referencia).
Afecciones vasculares Los derivados Azetidinona son útiles para tratar una afección vascular. Afecciones vasculares incluyen ateroesclerosis, hiperlipidemia (que incluye pero que no está limitada a sitoesterolemia), hipertensión, inflamación vascular, angina, arritmias cardíacas y accidentes cerebrovasculares así como también trastornos vasculares en sujetos tales como mujeres post-menopáusicas y mujeres que necesitan terapia de reemplazo hormonal. Los fármacos que se conocen como "modificadores de la sangre" son útiles en combinación con derivados azetidinona para tratar los trastornos vasculares. "Modificadores de la sangre" tal como se usa aquí se refiere a aquellos agentes capaces de alterar la cantidad de plaquetas para un volumen determinado de sangre, inhibir la función de plaquetas, incluyendo pero sin limitarlo a adhesión de plaquetas, agregación o factor de liberación o para reducir el recuento de plaquetas en pacientes con niveles anormalmente elevados en ciertos tumores malignos hematológicos hasta niveles que se aproximan a los niveles normales capaces de impactar negativamente sobre la formación de los coágulos sanguíneos, y disminuir la viscosidad de la sangre. Los modificadores de la sangre que son útiles en la presente invención incluyen pero no están limitados a anti-coagulantes, agentes antitrombóticos, antagonistas del receptor fibrinógeno, inhibidores de plaquetas, inhibidores de la agregación de plaquetas, inhibidor de coagulación asociado con lipoproteína, agentes hemorreológicos, inhibidores del factor Vlla, inhibidores del Factor Xa, y combinaciones de éstos, y excluyen los inhibidores de reductasa HMG CoA. Para tratar trastornos vasculares en sujetos tales como mujeres post-menopáusicas y mujeres que necesitan terapia de reemplazo hormonal, puede administrarse un derivado Azetidinona en combinación con terapia de reemplazo hormonal incluyendo la administración de andrógenos, estrógenos, progestinas o sus sales y derivados farmacéuticamente aceptables. "Agentes anticuoagulantes" son agentes que inhiben la vía de coagulación impactando negativamente sobre la producción, deposición, disociación y/o activación de factores que son esenciales en la formación de un coagulo sanguíneo. Agentes anticoagulantes útiles incluyen pero no están limitados a argatroban; bivalirudina; dalteparina de sodio (heparina); desirudina; dicumarol; liapolato sodio; mesilato de nafamostato; sulfonato de dimetano; tinzaparina de sodio; warfarina de sodio. Agentes "Anti-trombóticos" son agentes que evitan la formación de un trombo en la sangre. Un trombo es una agregación de factores sanguíneos, principalmente plaquetas y fibrinas con compresión de elementos celulares, que causan frecuentemente obstrucción vascular en el punto de su formación. Ejemplos apropiados de agentes antitrombóticos incluyen pero no están limitados a clorhidrato de anagrelida; tinzaparina de sodio tal como se describió anteriormente; cilostazol; dalteparina de sodio (tal como se describió anteriormente); danaparoid de sodio; abciximab es el fragmento (Fab del anticuerpo 7E3 monoclonal murino-humano quimérico, que se une al receptor glicoproteína (GP) llb/llla ((alfa) nb (beta)3) de las plaquetas humanas e inhibe la agregación de plaquetas. Abciximab se adhiere también al receptor vitronectina ((alfa) v (beta)3) que se encuentra en las plaquetas y en la pared endotelial de los vasos y células del músculo liso; Bivalirudina tal como la descrita anteriormente; Cilostazol tal como se describió anteriormente; sulfato de efegatran; clorhidrato de dazoxibeno; danaparoide sodio (un heparinoide de bajo peso molecular, una mezcla de las sales de sodio de sulfato de heparan (aproximadamente 84%), sulfato de dermatan (aproximadamente 12%), y sulfato de condroitina (aproximadamente 4%). Se deriva de la mucosa intestinal de cerdo); clorhidrato de lotrafiban; ifetroban de sodio; lamifiban; fluretofen; enoxaparina de sodio; napsagatran; acetato de roxifiban; sibrafiban; zolimomab aritox; trifenagrel. "Antagonistas del receptor fibrinógeno" son aquellos agentes que inhiben la vía común de la agregación de plaquetas. Antagonistas apropiados del receptor fibrinógeno incluyen pero no están limitados a acetato de toroxifiban tal como el descrito anteriormente; clorhidrato de lotrafiban tal como el descrito anteriormente, sibrafiban tal como el descrito anteriormente, anticuerpo monoclonal 7E3 (fragmento Fab del anticuerpo 7E3 monoclonal murino-humano quimérico que se adhiere al receptor glicoproteína (GP) llb/llla ((alfa)nb (beta)3) de plaquetas humanas e inhibe la agregación de plaquetas); orbofiban; xemilofiban; fradafiban; tirofiban. "Inhibidores de plaquetas" son aquellos agentes que deterioran la capacidad de las plaquetas maduras para llevar a cabo sus funciones fisiológicas normales (es decir, su función normal). Las plaquetas están normalmente involucradas en una variedad de procesos fisiologcos tales como adhesión, por ejemplo, a entidades celulares y no celulares, agregación, por ejemplo, con el propósito de formar un coágulo sanguíneo, y liberación de factores tales como los factores de crecimiento (por ejemplo, el factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGF)) y componentes granulares de plaquetas. Inhibidores de plaquetas apropiados incluyen pero no están limitados a bisulfato de clopidogrel; indometacina; mefenamato; clorhidrato de ticlopidina; epoprostenol de sodio; aspirina, ácido benzoico; epoprostenol; naproxeno; buprofeno; droxicam; diclofenac; sulfinilpirazona; piroxicam; dipiridamol; lexipafant; apafant Morfolina. El término "inhibidores de agregación de plaquetas" tal como se usa aquí, se refiere a aquellos compuestos que reducen o interrumpen la capacidad de las plaquetas para asociarse físicamente entre sí o con otros componentes celulares y no celulares, anulando de este modo la capacidad de una plaqueta para formar un trombo. Los inhibidores de agregación de plaquetas apropiados incluyen pero no están limitados a beraprost; acadesina; beraprost de sodio; ciprosteno de calcio; itazigrel; lifarizina; oxagrelato. El término "agente hemorreológico" tal como se usa aquí, describe aquellos compuestos que mejoran las propiedades de fluidez de la sangre al disminuir su viscosidad. Un agente hemorreológico apropiado de la presente invención es pentoxifilina. La pentoxifilina y sus metabolitos (que pueden ser útiles en la presente invención) mejoran las propiedades de fluidez de la sangre al disminuir su viscosidad. En pacientes con enfermedad arterial periférica crónica, esto incrementa la fluidez de la sangre en la microcirculación afectada y mejora la oxigenación de los tejidos. El modo preciso de acción de la pentoxifilina y la secuencia de eventos que conduce a la mejora clínica no han sido todavía definidos. La administración de pentoxifilina ha demostrado que produce efectos hemorreológicos relacionados con la dosis, disminuye la viscosidad de la sangre y mejora la flexibilidad eritrocitica. Las propiedades de los leucocitos de importancia hemorreológicas han sido modificadas en animales y en estudios humanos in vitro. La pentoxifilina ha demostrado que aumenta la deformabilidad de los leucocitos y que inhibe la adhesión y activación de neutrófilos. Se ha demostrado que los niveles de oxígeno en los tejidos aumentan significativamente con dosis terapéuticas de pentoxifilina en pacientes con enfermedad arterial periférica. El inhibidor de coagulación asociado con lipoproteína (LACI) es una glicoproteína de suero con un peso molecular de 38,000 Kd útil como modificador de la sangre en la presente invención. También se conoce como inhibidor del factor tisular debido a que es un inhibidor natural de la coagulación inducida por tromboplastina (factor tisular) (las Patentes Norteamericanas Nos. 5,1 1 0,730 y 5, 106,833 describen el factor tisular y se incorporan aquí como referencia en su totalidad). LACI es un inhibidor de proteasa y tiene 3 dominios Kunitz, dos de los cuales se sabe que interactúan con los factores VII y Xa respectivamente, mientras que la función del tercer dominio es desconocida. Muchas de las características estructurales de LACI pueden deducirse debido a su homología con otras proteasas bien estudiadas. La LACI no es una enzima de manera que probablemente inhibe su proteasa objetivo de manera estequiométrica; es decir, uno de los dominios de LACI inhibe una molécula de proteasa (ver Patente Norteamericana No. 6,063,74 que se incorpora aquí como referencia). El término "inhibidores del Factor Vlla" tal como se usa aquí se refiere a aquellos agentes que impiden que el Factor Vlla activado actúe para contribuir a la formación de un coágulo de fibrina. Los inhibidores del Factor VI la apropiados incluyen pero no están limitados a 4H-31 -benzoxazin-4-onas, 4H-3,1 -benzoxazin-4-tionas, quinazolin-4-tionas, benzotiazin-4-onas descritas en la Patente Norteamericana 6,180,625, análogos peptídicos derivados de ácido imidazolil-borónico tal como se describió en la Patente Norteamericana No. 5,639,739, péptidos derivados de TFPI descritos en la Patente Norteamericana No. 6,180,625. Inhibidores del Factor Vlla adicionales apropiados incluyen pero no están limitados a trifluoracetato de {1 -[3-(aminoiminometil)-benzil]-2-oxo-pirrolidin-3-(S)-il}amida de ácido naftalen 2-sulfónico, {1 -[3-(aminometil)-benzil]-5-oxo-pirrolidin-3-il}-amida de ácido dibenzofuran-2-sulfónico, trifluoracetato de {1 -[3-(aminoiminometil)-benzil]-2-oxo-pirrolidin-3-(S)-il}-amida de ácido toluen-4-sulfónico, trifluoracetato de {1 -[3-(aminoiminometil)-benzil]-2-oxo-pirrolin-3-(S)-il}-amida de ácido 3,4-dihidro-1 H-isoquinolin-2-sulfónico o combinación de éstos. El término "inhibidores del Factor Xa" tal como se usa aquí, se refiere a aquellos agentes que impiden que el Factor X activado actúe para contribuir a la formación de un coágulo de fibrina. Los agentes apropiados para ser usados en la presente invención como inhibidores del Factor Xa incluyen pero no están limitados a pirazolinas disustituidas, triazolinas disustituídas tal como las descritas en la Patente Norteamericana No. 6, 191 ,159, inhibidor de coagulación asociado con lipoproteína (LACI) (tal como se describió anteriormente), heparinas de bajo peso molecular tal como las que se describen a continuación, heparinoides descritos a continuación, bencimidazolinas, benzoxazolinonas, bensopiperazinonas, ¡ndanonas, tal como se describen en la Patente Norteamericana No. 6,207,697, derivados de ácido (amidinoaril)propanoicos dibásicos tal como se describen en J. Med. Chem. 37:1200-1207 (1994); derivados bis-arlisulfonilaminobenzamida tal como se describen en la Patente Norteamericana No. 5,612,378; amidinofenil-pirrolidinas, amidinofenil-pirrolinas, amidinofenil-isoxazolidinas tal como se describen en la Patente Norteamericana No. 6,057,342; amidinoindoles, amidinoazoles tal como se describen en la Patente Norteamericana No. 6,043,257; inhibidores peptídicos del Factor Xa tal como se describen a continuación; n-[(aminoiminometil)fenil]propilamidas sustituidas n-[(aminometil)fenil]propilamidas sustituidas tal como se describen en la Patente Norteamericana No. 6,080,767; o combinaciones de éstas. Los inhibidores del factor Xa peptídico tales como el derivado de sanguijuela, antiestatina de proteína 1 19-amino ácido y la proteína TAP derivada de garrapata de la familia Argasidae (péptido anticoagulante de garrapata), aceleran la lisis del coágulo y previenen la re-oclusión cuando se administran como agregados para trombolisis (Mellott et al., Circulation Research 70:1 152-1 160 (1992); Sitko et ai, Circulation 85:805-815 (1992)). La Patente Norteamericana No. 5,385,885 concedida el 31 de Enero de 1995 describe la actividad inhibidora de proliferación de las células del músculo liso tanto del péptido anticoagulante de garrapata como de antistatina. El péptido ecotina es otro inhibidor del factor Xa de adhesión íntima, reversible, selectiva, que exhibe actividad anticoagulante de proteína (Seymour et ai, Biochemistry 33:3949-3959 (1994); Solicitud Publicada PCT WO 94/20535, 09/14/1994). Ixodidae, argasina y ancilostomatina son otros inhibidores del factor Xa peptídico representativos aislados de animales que se alimentan de sangre (Markwardt, Thrombosis y Hemostasis 72: 477-479 ( 994). Estos ejemplos no limitativos de inhibidores del Factor Xa peptídico que pueden usarse en la presente invención se enumeran a continuación con el número de registro CAS. Estos incluyen el inhibidor de proteinasa antistatina, número de registro CAS 1 101 19-38-5; péptido anticoagulante de garrapata (inhibidor de proteinasa, TAP) Número de Registro CAS 129737-17-3; ecotina, (inhibidor de proteinasa, ecotina) Número de Registro CAS 87928-05; argasina, Número de Registro CAS 53092-89-0; ancilostomatina, Número de Registro CAS 1 101 1 -09-9; Ixodidae (tal como se describió en, 1994). El término "heparinas de bajo peso molecular" tal como se usa aquí, se refiere a agentes derivados de heparinas que reducen la incidencia de sangrado cuando se comparan con la heparina convencional. Las heparinas son dicosaminoglicanos cuyos pesos moleculares PM están en un intervalo desde 2000-10000. Pueden producirse a partir de mucosa intestinal porcina y excepto por el nadroparan, son todas sales de sodio. Un heparinoide apropiado de la presente invención incluye pero no está limitado a enoxapa na, nardroparina, dalteparina, certroparina, parnaparina, reviparina, tinzaparina y combinaciones de éstos. El término "Heparinoide" tal como se usa aquí se refiere a una forma modificada de heparina que reduce la incidencia de sangrado cuando se compara con la heparina convencional. Un heparinoide apropiado de la presente invención incluye pero no está limitado a Danaparoid CAS Número de Registro 308068-55-5, (por ejemplo, Inyección Orgaran de Organon) Ejemplos de estrógenos útiles y combinaciones de estrógenos incluyen: (a) una mezcla que comprende las siguientes sustancias estrogénicas sintéticas: sulfato de estrona de sodio, sulfato de equilina de sodio, sulfato de 17 a -dihidroequilina de sodio, sulfato de 17 a -estradiol de sodio, sulfato de 17 ß -dihidroequilina de sodio, sulfato de 17 a -dihidroequilenina de sodio, sulfato de 17 ß -dihidroequilenina de sodio, sulfato de equilenina de sodio y sulfato de 7 ß-estradiol de sodio; (b) etinil estradiol; (c) combinaciones de estrógeno esterificado tales como sulfato de estrona de sodio y sulfato de equilina de sodio; (d) estropipato; y (e) estrógenos conjugados (17 a-dihidroequilina, 17 a-estradiol, y 17 ß-dihidroequilina); obtenibles en Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals, Filadelfia, PA, bajo la denominación comercial PREMARIN. Las progestinas y estrógenos pueden administrarse también en una variedad de dosis generalmente desde aproximadamente 0.05 hasta aproximadamente 2.0 mg de progestina y aproximadamente 0.001 mg hasta aproximadamente 2 mg de estrógeno. En una modalidad, la dosis es desde aproximadamente 0.1 mg hasta aproximadamente 1 mg de progestina y aproximadamente 0.01 mg hasta aproximadamente 0.5 mg de estrógeno. Ejemplos de combinaciones de progestina y estrógeno que pueden variar en la dosis y régimen incluyen: (a) la combinación de estradiol y noretindrona, que se encuentra disponible en Pharmacia & Upjohn, Peapack, NJ, bajo la denominación ACTIVELLA; (b) la combinación de levonorgestrel y etinil estradial; obtenible por ejemplo en Wyeth-Ayerst bajo la denominación ALESSE; (c) la combinación de diacetato de etinodiol y etinil estradiol; obtenible en G.D. Searle & Co., Chicago, IL, bajo la denominación DEMULEN; (d) la combinación de desogestrel y etinil estradiol; obtenible en Organon bajo las denominaciones DESOGEN y MIRCETTE; (e) la combinación de noretindrona y etinil estradiol; obtenible en Parke-Davis, Morris Plains, NJ, bajo las denominaciones comerciales ESTROSTEP y Femhrt; (f) la combinación de norgestrel y etinil estradiol; obtenible en Wyeth-Ayerst bajo la denominación comercial OVRAL y LO/OVRAL; (g) la combinación de noretindrona, etinil estradiol, y mestranol, obtenible en Watson bajo las denominaciones comerciales BREVICON y NORINIL; (h) la combinación de 17 ß-estradiol y norgestimato micronizado, obtenible en Ortho-McNeil bajo la denominación comercial ORTHO- PREFEST; (i) la combinación de norgestimato y etinil estradiol; obtenible en Ortho-McNeil bajo las denominaciones comerciales ORTHO CYCLEN y ORTHO TRI-CYCLEN; y (j) la combinación de estrógenos conjugados (sulfato de estrona de sodio y sulfato de equilina de sodio) y acetato de medroxiprogesterona obtenible en Wyeth-Ayerst bajo las denominaciones PREMPHASE y PREMPRO. En general, una dosis de progestinas puede variar desde aproximadamente 0.05 mg hasta aproximadamente 10 mg o hasta aproximadamente 200 mg si se administra progesterona micronizada. Ejemplos de progestinas incluyen noretindrona; norgestrel; progesterona micronizada; y acetato de medroxiprogesterona. Ejemplos no limitativos de moduladores del receptor estrógeno o anti-estrógenos apropiados incluyen clorhidrato de raloxifen, citrato de tamoxifeno y citrato de toremifeno.
Enfermedad Hepática grasa no alcohólica Los derivados Azetidinona son útiles para tratar esteatosis hepática no alcohólica (NAFLD). La NAFLD describe un espectro de enfermedades hepáticas que van desde hígado graso simple (esteatosis) hasta la esteatohepatitis no alcohólica (NASH) con fibrosis progresiva e insuficiencia hepática. La hiperglicemia con o sin evidencia de hiperlipidemia está asociada comúnmente con NAFLD. La enfermedad exhibe las características histológicas de enfermedades hepáticas inducidas por alcohol en pacientes que no consumen cantidades significativas de alcohol. Todas las etapas de NAFLD tienen en común la acumulación de grasa en las células hepáticas. Farrell y Larter in Hepatology, 243:S99-S1 12 (2006) describe NASH como "la pieza clave" entre la esteatosis hepática y la cirrosis en el espectro de NAFLD. Ver también, Palekar, et al., Liver Int., 26(2):151 -6 (2006). En NASH, la acumulación de grasa asociada con grados variables de inflamación y fibrosis. Las condiciones que están más comúnmente asociadas con NAFLD son obesidad, diabetes de tipo II y síndrome metabólico. La Publicación Norteamericana No. 2004/29805 describe un método para prevenir o tratar NAFLD mediante la administración de un agente que antagoniza el receptor con el polipéptido insulino trópico glucosa dependiente. Los tratamientos para NASH incluyen dieta y ejercicio y/o administración de probucol, clofribrato, gemfibrozil, betaina, vitaminas E y/o C, metformina, toglitaxona, rosiglitazona o plogitazona y vitamin E. M. Charlton, Clinical Gastroenterology y Hepatology, 2(12), 1048-56 (2004); P. Portincaso et al., Clinical Biochemistry, 38, 203-17 (2005). La Publicación Norteamericana No. 2004/105870A1 describe un tratamiento para NASH que comprende administrar una formulación que comprende un suplemento de lecitina dietética, complejo de vitamina B o un antioxidante. Las Publicaciones Norteamericanas Nos. 2005/0032823A1 y 2004/0102466A1 describen derivados pirimidina que son inhibidores de COX-2 selectivos, útiles en el tratamiento de NASH. Otros compuestos para el tratamiento de la enfermedad hepática grasa han sido descritos en la Publicación Norteamericana No. 2005/00041 15A1 . La prevención o mejoramiento del desarollo de cirrosis y de carcinoma hepatocelular en una mamífero mediante la administración de una cantidad eficaz de una combinación terapéutica que comprende por lo menos un derivado acetilinona o un inhibidor de HMG-CoA reductasa y/o por lo menos un antagonista/agonista inverso de H3 para dicho mamífero. La Solicitud Norteamericana Provisional 60/752710, presentada el 20 de Diciembre del 2005, y la Solicitud Norteamericana Provisional 60/77048, presentada el 29 de Marzo del 2006, describen el uso de inhibidores de absorción de colesterol, solos o en combinación con antagonistas/agonistas inversos del receptor H3 para tratamiento de NAFLD o NASH. Los presentes métodos para tratar NAFLD, incluyen terapia de combinación que comprende la administración de un derivado azetidinona y por lo menos un agonista inverso/antagonista del receptor H3. Los agonistas inversos/antagonistas del receptor H3 son bien conocidos en la técnica. Los sitios del receptor H3 se encuentran en los nervios simpáticos, donde modulan la neurotransmisión simpática y atenúan una variedad de respuestas del órgano final bajo el control del sistema nervioso simpático. Específicamente, la activación del receptor H3 con histamina atenúan el flujo de norepinefrina a los vasos de resistencia y capacitancia, causando vasodilatación. Los antagonista/agonistas inversos del receptor H3 son conocidos para el tratamiento de: alergia, respuestas de las vías respiratorias inducidas por alérgica (por ejemplo, las vías respiratorias superiores), congestión (por ejemplo, congestión nasal), hipotensión, enfermedad cardiovascular, enfermedades del tracto Gl, hiper e hipo-motilidad y secreción ácida del tracto gastrointestinal, obesidad, trastornos del sueño (por ejemplo, hipersomnia, somnolencia, y narcolepsia), alteraciones del sistema nervioso central, trastorno de hiperactividad por déficit de atención (ADHD), hipo e hiperactividad del sistema nervioso central (por ejemplo, agitación y depresión) y/o otros trastornos del SNC (tales como Alzheimer, esquizofrenia y migraña) en un paciente tal como un mamífero. Estos compuestos son particularmente útiles para tratar alergia, respuestas de las vías respiratorias inducidas por alérgica y/o congestión. Los antagonistas/agonistas inversos del receptor H3 útiles en las terapias de combinación de la presente invención incluyen pero no están limitados a las del tipo de imidazol tal como las descritas en las Publicaciones Internacionales Nos. WO 95/14007 y WO 99/24405; antagonistas receptores H3 que no son de imidazol, descritos en la Patente Norteamericana 6,720,328; derivados indol descritos en la Publicación Norteamericana No. 2004/0019099; derivados bencimidazol descritos en la Publicación Norteamericana No. 2004/0048843A1 y la Publicación Norteamericana No. US 2004/0097483A1 ; y compuestos piperidina descritos en la Patente Norteamericana 6,849,621 . Las patentes y solicitudes enumeradas anteriormente relacionadas con los antagonistas/agonistas inversos de H3 se incorporan aquí como referencia.
Composiciones y Administración La presente invención provee composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de un derivado Azetidinona y un portador farmacéuticamente aceptable. Para preparar composiciones farmacéuticas a partir de los compuestos descritos para ser usados en los métodos de esta invención, los portadores inertes, farmacéuticamente aceptables pueden ser sólidos o líquidos. Las preparaciones de forma sólida incluyen polvos, tabletas, gránulos dispersables, cápsulas, sellos y supositorios. Los polvos y tabletas pueden estar constituidos desde aproximadamente 5 hasta aproximadamente 70 por ciento de ingrediente activo. Los portadores sólidos apropiados son conocidos en la técnica, por ejemplo, carbonato de magnesio, estearato de magnesio, talco, azúcar, lactosa. Las tabletas, polvos, sellos, y cápsulas pueden usarse como formas de dosificación sólida apropiadas para administración oral. Para preparar supositorios, se funde primero una cera de bajo punto de fusión en forma de una mezcla de glicéridos de ácido graso o manteca de cacao, y el ingrediente activo se dispesa homogéneamente en la misma mediante agitación. La mezla homogénea fundida se vierte luego en moldes de un tamaño conveniente, se deja enfriar y por consiguiente se solidifica. Las preparaciones de forma líquida incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Como ejemplo, pueden mencionarse agua o soluciones de agua-propilenglicol para inyección parenteral. Las preparaciones de forma líquida pueden incluir también soluciones para administración intranasal. Las preparaciones en aerosol apropiadas para inhalación pueden incluir soluciones y sólidos en forma de polvos, los cuales pueden combinarse con un portador farmacéuticamente aceptable tal como gas comprimido inerte. Asimismo se incluyen preparaciones en forma sólida que están destinadas a ser convertidas poco tiempo antes de su uso a las preparaciones de forma sólida para administración oral o parenteral. Dichas formas liquidas incluyen soluciones, suspensiones y emulsiones. Los derivados azetidinona de la presente invención pueden ser también liberables por vía transdérmica. Las composiciones transdérmicas pueden tener la forma de cremas, lociones, aerosoles y/o emulsiones y pueden incluirse en un parche transdérmico del tipo de matriz o reservorio tales como los que son convencionales en la técnica para este propósito. En una modalidad, los derivados Azetidinona se administran por vía oral. En otra modalidad los derivados Azetidinona se administran intravenosamente. En una modalidad, una preparación farmacéutica que comprende uno o más derivados Azetidinona en una forma de dosificación unitaria. En dicha forma, la preparación se subdivide en dosis unitarias que contienen las cantidades apropiadas del componente activo, por ejemplo, una cantidad eficaz para obtener el propósito deseado. La cantidad de derivado Azetidinona en una dosis unitaria de preparación puede variar o puede ajustarse desde aproximadamente 0.1 mg hasta aproximadamente 1000 mg. En una modalidad, la cantidad es desde aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 300 mg, de acuerdo con la aplicación particular. La dosis real empleada puede variar dependiendo de los requisitos del paciente y de la gravedad de la afección que se está tratando. La determinación de la dosis adecuada para una situación particular está dentro de la experiencia en la técnica. En general el tratamiento se inicia con dosis más pequeñas que son inferiores a la dosis óptima del compuesto. A continuación, se aumenta la dosis en pequeños incrementos hasta que se alcanza el efecto óptimo bajo las circunstancias determinadas. Por razones de conveniencia, la dosis diaria total puede dividirse y administrarse en porciones durante el día si se desea. La cantidad y frecuencia de administración de los derivados azetidinona se regulará de acuerdo con la opinión del médico de cabecera considerando factores tales como la edad, la afección y el peso del paciente así como también la gravedad de los síntomas que se están tratando. Un régimen de dosificación recomendado típico para los derivados azetidinona para administración oral es de aproximadamente 10 mg/día hasta aproximadamente 2000 mg/día. En una modalidad, la dosis es desde aproximadamente 10 mg/día hasta aproximadamente 1000 mg/día en dos a cuatro dosis divididas para proveer alivio de las enfermedades o afecciones que se enumeraron anteriormente. Las dosis y el régimen de dosificación de los otros agentes que se usan en las terapias de combinación de la presente invención para el tratamiento o prevención de una afección pueden determinarse mediante el médico clínico teniendo en cuenta las dosis aprobadas y el régimen de dosificación del inserto del paquete, y teniendo en cuenta la edad, el sexo y el estado del paciente y la gravedad de la enfermedad. Cuando se administran en combinación, el o los derivados Azetidinona y los otros agentes para tratar las enfermedades o afecciones enumeradas anteriormente pueden administrarse simultáneamente o consecutivamente. Esto es particularmente útil cuando los componentes de la combinación se administran preferiblemente en programas de dosificación diferente, por ejemplo, un componente se administra una vez por día y otro cada seis horas, o cuando las composiciones farmacéuticas preferidas son diferentes, por ejemplo, una es preferiblemente una tableta y otra es una cápsula. Por lo tanto es ventajoso un equipo que comprenda formas de dosificación separada. Los intervalos de dosificación no limitativos para otros agentes terapéuticos útiles en la presente invención se indicarán a continuación. La dosis exacta, sin embargo, es determinada por el médico de cabecera y depende de factores tales como la potencia del compuesto administrado, la edad, el peso, la afección y la respuesta del paciente. En general, la dosis diaria total de inhibidores de biosíntesis de colesterol puede estar en un intervalo desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 160 mg por día. En una modalidad, la dosis es desde aproximadamente 0.2 hasta aproximadamente 80 mg/día, administrada en una sola dosis o en 2-3 dosis divididas. En general, una dosis diaria total de activador o activadores del o los receptores activados por proliferador de peroxisoma puede estar comprendida dentro de un intervalo desde aproximadamente 50 hasta aproximadamente 3000 mg por día. En una modalidad, la dosis diaria es de aproximadamente 50 hasta aproximadamente 2000 mg por día, administrada en una sola dosis o en 2-4 dosis divididas. En general, una dosis diaria total de inhibidor o inhibidores de IBAT puede estar en un intervalo desde aproximadamente 0.01 hasta aproximadamente 1000 mg/día. En una modalidad, la dosis es desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 50 mg/día, administrada en una sola dosis o en 2-4 dosis divididas. En general, una dosis diaria total de ácido nicotínico puede estar en un intervalo desde aproximadamente 500 hasta aproximadamente 10,000 mg/día. En una modalidad, la dosificación es desde aproximadamente 1000 hasta aproximadamente 8000 mg/día. En otra modalidad la dosis es desde aproximadamente 3000 hasta aproximadamente 6000 mg/día, administrada en una sola dosis o en dosis divididas. Generalmente, la dosis diaria total de un agonista de NAR puede estar en un intervalo desde aproximadamente 1 hasta aparoximadamente 100 mg/día. En general, una dosis diaria total de inhibidor o inhibidores de ACAT puede estar en un intervalo desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 1000 mg/día, administrado en una sola dosis o en 2-4 dosis divididas. En general, una dosificación diaria total de inhibidor o inhibidores de CETP pueden estar en un intervalo desde aproximadamente 0.01 hasta aproximadamente 1000 mg/día, y preferiblemente aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 20 mg/kg/día, administrado en una sola dosis o en 2 o más dosis divididas En general, una dosis diaria total de probucol o un derivado de éste puede estar en un intervalo desde aproximadamente 10 hasta aproximadamente 2000 mg/día. En una modalidad, la dosis es desde aproximadamente 500 hasta aproximadamente 1500 mg/día, administrados en una sola dosis o en 2-4 dosis divididas. En general, una dosis diaria total de inhibidor o activadores del receptor LDL puede estar en un intervalo desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 1000 mg/día, administrado en una sola dosis o en 2-4 dosis dividida. En general, una dosis diaria total de aceite de pescado o de ácidos grasos de omega 3 puede estar en un intervalo desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 30 gramos por día, administrados en una sola dosis o en 2-4 dosis divididas. En general, una dosis diaria total de fibras naturales solubles en agua pueden estar en un intervalo desde aproximadamente 0.1 hasta aproximadamente 10 gramos por día, administrados en una sola dosis o en 2-4 dosis divididas. En general, una dosificación diaria total de esteróles vegetales, estañóles vegetales y/o ésteres de ácido graso de estañóles vegetales puede estar en un intervalo desde aproximadamente 0.5 hasta aproximadamente 20 gramos por día, administrados en una sola dosis o en 2-4 dosis divididas. En general, la dosificación diaria total de agentes antidiabéticos puede estar en un intervalo desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 3000 mg por día. En una modalidad, la dosis diaria total está en un intervalo desde aproximaamente 50 hasta aproximadamente 2000 mg por día, administrado en una sola dosis o en 2-4 dosis divididas. En general, una dosis total de medicaciones o agentes modificadores de la sangre puede estar en un intervalo desde 1 a 3,000 mg/día, convenientemente desde aproximadamente 1 a 1 ,000 mg/día y más convenientemente desde aproximadamente 1 a 200 mg/día en una sola dosis o en 2-4 dosis divididas. Los tratamientos pueden administrarse en una cantidad terapéuticamente eficaz de modificador de la sangre para tratar la afección especificada, por ejemplo, en una dosis diaria comprendida preferiblemente dentro de un intervalo desde aproximadamente 1 hasta aproximadamente 1 ,000 mg/día y más preferiblemente 5 hasta aproximadamente 200 mg por día, administrados en una sola dosis única o en 2-4 dosis divididas. La dosis exacta, sin embargo, es determinada por el médico de cabecera y depende de factores tales como la potencia del compuesto administrado, la edad, el peso, el estado y la respuesta del paciente. La dosis de andrógeno y estrógeno para ser usada en las combinaciones con derivados Azetidinona varía, y típicamente es desde aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 4 mg de andrógeno y desde aproximadamente 1 mg hasta aproximadamente 3 mg de estrógeno. Entre los ejemplos se incluyen pero no están limitados a combinaciones de andrógeno y estrógeno tales como la combinación de estrógenos esterificados (sulfato de estrona de sodio y sulfato de equilina de sodio) y metil testosterona. Los estrógenos y combinaciones de estrógeno pueden variar en dosis desde aproximadamente 0.01 mg hasta 8 mg. En una modalidad, la dosis es de aproximadamente 0.3 mg hasta aproximadamente 3.0 mg.
EJEMPLOS Métodos Generales Todos los solventes y reactivos se usaron tal cual se recibieron.
Se obtuvieron espectros de RMN protónica usando un instrumento Varían XL-400 (400 MHz) y se informaron como partes por millón (ppm) campo bajo desde Me4Si. El análisis de LCEM se llevó a cabo usando un espectrómetro de masa Applied Biosystems API-100 equipado con un Shimadzu SCL-10A LC columna: Altech platino C18, 3 um, 33 mm X 7 mm ID; gradiente de flujo: 0 min, 10% CH3CN; 5 min, 95% CH3CN; 7 min, 95% CH3CN; 7.5 min, 10% CH3CN; 9 min, interrupción. La cromatografía en columna evaporativa se llevó usando gel de sílice Selecto Scientiic flash, de malla 32-63. La TLC analítica y prepativa se llevaron a cabo usando placas GF de gel de sílice Analtech. La HPLC quiral se efectuó usando un sistema Varían PrepStar equipado con una columna Chiralpak OD (Chiral Technologies).
EJEMPLO 1 Preparación de compuesto intermediario IA-1 La síntesis del compuesto IA-1 , que es un intermediario útil para preparar el derivado Azetidinona de fórmula (IA), se describe a continuación: IA-1 Se enfrió una primera solución de LiHMDS (2.8 mol) en THF (1 .0 I) a -30 OC, y a la mezcla resultante se agregó benzaldehído (300 g, 2.8 mol) mediante adición por goteo con agitación. En un frasco separado, se enfrió una segunda solución de LDA (2.8 mol en THF) a -78 °C y se agregó por goteo una solución de BOC-etilisonipecotato (687g, 2.8 mol) en THF (500 mi). La primera solución se agregó luego por goteo a la segunda solución con agitación a un régimen tal que la temperatura de reacción se mantuvo por debajo de 0°C a través de todo el procedimiento de adición. La reacción resultante se dejo luego bajo agitación durante aproximadamente 3 horas a 0°C, después de lo cual la reacción se apagó cuidadosamente usando agua (11). La solución resultante se extrajo con acetato de etilo (5 I) y se transfirió a un embudo separador. Se recogió la capa orgánica, se secó usando sulfato de magnesio y se concentró al vacío para proporcionar el producto crudo que se recristalizó a partir de 1 .5 I de hexano: acetato de etilo (2:1 ) lo cual proporcionó el compuesto IA-1 en forma de un sólido (67%). 1 H RMN (300MHz, DMSO) d 7.4 (d, 2H), 7.3 (br, 3H), 4.6 (s, 1 H), 3.5 (br, 2H), 3.2 (br, 1 H), 3.0 (br, 1 H), 1 .9 (br, 2H), 1 .3 (s, 9H), 1 .2 (br, 1 H), 1 .0 (br, 1 H) EJEMPLO 2 Preparación del compuesto Intermediario IB-1 La síntesis del compuesto IB-1 , que es un intermediario útil para la preparación de los derivados Azetidinona de fórmula (IB), se describe a continuación: IB-1 Usando el método que se indica en el Ejemplo 1, y sustituyendo 4-benzaldehído por clorobenzaldehído, se preparó el compuesto IB-1. 1H RMN (300MHz, CDCI3) d 7.4 (d, 2H), 7.2 (t, 3H), 4.5 (s, 1H), 3.8 (br, 1H), 3.6 (t, 1H), 3.3 (br, 2H), 2.1 (br, 1H), 1.9 (br, 1H), 1.4 (s, 9H), 1.2 (br, 1H).
EJEMPLO 3 Preparación del compuesto intermediario IC-1 La síntesis del compuesto IC-1, que es un intermediario útil para la preparación de los derivados Azetidinona de fórmula (IC), se describe a continuación: IC-1 Usando el método indicado en el Ejemplo 1, y sustituyendo piridin-3-carboxaldehído por benzaldehído, se preparó el compuesto IC-1: 1H RMN (300MHz, CDCI3) d 8.2 (d, 2H), 7.3 (d, 1H), 7.0 (m, 1H), 4.2 (s, 1H), 3.3 (br,1H), 3.2 (t, 1H), 3.1 (br, 1H), 3.0 (br, 1H), 1.9 (d, 1H),1.6 (t, 1H), 1.1 (s, 10H), 0.8 (m, 1H).
EJEMPLO 4 Preparación del compuesto intermediario ID-1 La síntesis del compuesto ID- , que es un intermediario útil para la preparación de derivados Azetidinona de fórmula (ID), se describe a continuación: ID-1 Usando el método descrito en el Ejemplo 1, y sustituyendo benzaldehído con piridin-2-carboxaldehido, se preparó el compuesto ID-1. 1H RMN (300MHz, CDCI3) d 8.7 (d, 1H), 7.8 (t, 1H), 7.4 (d, 1H), 7.2 (m, 1H), 6.2 (s,1H), 4.5 (s, 1H), 3.8 (br, 1H), 3.6 (m, 1H), 3.2 (br, 2H), 2.1 (br, 1H), 1.9 (m, 1H), 1.5 (m, 1H), 1.4 (s, 9H), 1.1 (m, 1H).
EJEMPLO 5 Preparación del compuesto IA-2 IA-2 A una solución agitada del compuesto IA-1 (94 mmol, preparado en el Ejemplo 1) en dioxano (200 mi), se agregó bromobenceno (24 g, 104 mmol), N,N-dimetiletilendiamina (1.1 mL, 9.4 mmol), Cul (3.6 g, 18 mmol) y carbonato de potasio (26 g, 188 mmol). La reacción resultante se calentó a reflujo y se dejó bajo agitación a reflujo durante aproximadamente 15 horas. La mezcla de reacción se dejó luego enfriar a temperatura ambiente, y se filtró. El filtrado se diluyó con acetato de etilo (11), se lavó con salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y concentró al vacío para proporcionar un producto crudo que se lavó con acetato de etilo para proporcionar el compuesto IA-2 (92%).
EJEMPLO 6 Preparación del compuesto IA-3 IA-3 A una solución del compuesto IA-2 (58 mmol, preparado en el Ejemplo 5) en DCM (125 mi) a temperatura ambiente, se agregó ácido trifluoracético (23 mL, 290 mmol) por goteo. La reacción se dejó agitar durante 5 horas y luego se concentró al vacío para proveer un residuo crudo. El residuo crudo se trituró con éter dietílico para proveer un sólido, el cual se lavó con éter, para proporcionar el compuesto IA-3 en forma de una sal de trifluoracetato (90%) 1 H RMN (300MHz, DMSO) d 7.3 (m, 7H), 7.1 (d, 2H), 7.0 (t, 1 H), 5.2 (s, 1 H), 3.2 (br, 2H), 3.0 (m, 1 H), 2.6 (br, 1 H), 2.2 (m, 2H), 1 .6 (br,1 H), 1 .2 (m, 1 H).
EJEMPLO 7 Preparación del compuesto IB-2 Una solución agitada del compuesto IB-1 (160 mmol, preparado en el Ejemplo 2) en DMF (200 mi) se enfrió a 0 °C y se agregó a la solución enfriada NaH (9.07 g, 207 mmol), seguido de 2-bromopropano (19.4 mL, 207 mmol). La temperatura de reacción se incrementó luego hasta 50 °C y la reacción se dejó bajo agitación a esta temperatura durante 5 horas. La mezcla de reacción se enfrió luego a temperatura ambiente, la reacción se apagó usando agua helada, y la mezcla resultante se extrajo usando acetato de etilo. La capa orgánica se recogió, se lavó con salmuera, se secó sobre MgS04, se filtró y se concentró al vacío para proveer el residuo crudo que se recristalizó a partir de hexano:acetato de etilo (2:1 ) para proporcionar el compuesto IB-2 en forma de un sólido (60%).
EJEMPLO 8 Preparación del compuesto IB-3 IB-3 Usando el método que se indica en el Ejemplo 6, y sustituyendo el IA-2 por el compuesto IB-2, se preparó el compuesto IB-3 en forma de su sal de triíluoracetato (90%). 1 H RMN (DMSO) d 8.6 (br, 1 H), 8.4 (br,1 H), 7.5 (m, 4H), 4.7 (s, 1 H), 3.5 (m, 1 H), 3.3 (br, 2H), 2.9 (br, 1 H), 2.7 (br, 1 H), 2.1 (br, 2H), 1 .6 (br, 1 H), 1 .3 (d, 3H),1 .2 (m, 1 H), 1 .0 (d, 3H). Usando los mismos métodos descritos anteriormente en los Ejemplos 1 -8 y empleando los reactivos apropiados necesarios dependiendo de los grupos RT y R2 deseados, se prepararon los compuestos intermediarios que se indican en el cuadro 7 siguiente. Cabe observar que cuando es arilo o heteroarilo, el método de síntesis preferido es el que se describe anteriormente en el Ejemplo 5 y cuando Ri es alquilo o alquilo sustituido el método de síntesis preferido es el que se describe anteriormente en el Ejemplo 7.
CUADRO 7 Los compuestos que se muestran en el cuadro 7 pueden tratarse con TFA de acuerdo con el método descrito en el Ejemplo 6 para remover el grupo protector BOC y proveer varios compuestos intermediarios de fórmula 6 descritos anteriormente en los Esquemas 1 , 3, 4 y 5.
EJEMPLO 9 Evaluación de los efectos funcionales de los derivados azetidinona sobre los canales iónicos La evaluación funcional de los canales del ión regulados por voltaje, puede usarse para determinar la potencia y/o la eficacia de concentración única de los derivados Azetidinona. Pueden usarse dos metodologías diferentes para medir las corrientes iónicas: lonWorks HT (Molecular Devices, Sunnivale, CA) una plataforma de rastreo de fijación de voltaje de caudal moderado que utiliza placas para compuesto de 96 pozos, y fijación de voltaje de célula entera convencional para determinaciones de menor caudal, mayor fidelidad.
Líneas de Células Las células HEK son tranfectadas transitoriamente y luego seleccionadas para una expresión heteróloga estable de proteínas de interés de canales diferentes. Las líneas de células del canal de calcio expresaron una corriente de potasio en reposo, K¡r2.1 , humano, y la subunidad a- formadora de poros de canales de calcio regulados por voltaje. En el caso de células Cav2.1 la subunidad auxiliar p2a, está también expresada. Las líneas de canales de calcio que se usan para generar los datos expresarán cualquiera de Cav3.2 humano, Cav3.2 de rata o Cav2.1 humano. El canal de sodio del corazón humano, hNav1 .5, está expresado establemente en las células CHO. Las líneas celulares pueden cultivarse a 37 °C en incubadores humedificados, equilibrados con 95% aire/5% de CO2. Las células de CHO pueden cultivarse en un medio Ham's F-12. Las células HEK pueden cultivarse en DMEM. Todos los medios están suplementados con 1 0% de suero bovino fetal inactivado por calor, penicilina, estreptomicina y antibióticos apropiadamente seleccionados (zeocin, geneticina y/o higromicina). El pasaje de las células se efectuó al 80% de confluencia o menos.
Clasificación lonWorks para hCaV3.2 El regulador de pH extracelular para experimentos empleando este instrumento contenía lo siguiente (mM) (NaCI 125, HEPES 10, KCI 5.4, CaCI2 1 .8, MgCI2 1 .8, 0.2 BaCI2 pH 7.35). El lonWorks usa anfotericina para obtener acceso eléctrico al interior de la célula. La solución interna contenía (concentraciones mM): 130 K-gluconato, 20 KCI, 5 HEPES-KOH (pH 7.25), 2 CaC12, 1 MgCI2. Se agregó anfotericina a 5 mg en 65 mi cuando estaba presente (en 650 pl de DMSO). Todas las soluciones internas y externas para este experimento contenían 1 % de DMSO. Las células se tripsinizaron agudamente desde un matraz T-75 y se resuspendieron un regulador de pH extracelular a una densidad de 2X105 células/mL. Se llevaron a cabo experimentos a temperatura ambiente. El potencial de transmembrana se mantuvo a -100 mV durante 5 segundos antes de llevar a cabo el protocolo de voltaje. Durante este tiempo se midieron las fugas de corriente durante una etapa hasta -1 10 mV (200 milisegundos). Las corrientes de calcio de tipo T fueron activadas con una etapa de 250 milisegundos hasta -20 mV. Esta estapa de despolarización se repitió por un total de 10 pulsos con un intervalo de interpulso de 1 segundo. Los datos fueron excluidos si no se cumplía con los siguientes criterios de aceptación: resistencia total para el barrido de pre-compuesto > 65 ?O, corriente de pre-compuesto > 250 pA, resistencia total de post compuesto > 50 ?O. Las corrientes de tipo T se midieron como la corriente pico hacia el interior menos la corriente al final de la etapa de 250 mseg hasta -20 mV. Después de establecer la configuración del registro, se efectuó una medición de la amplitud de corriente del pre-compuesto. El compuesto se agregó en forma de una solución 3X que contenía 1 % de DMSO. Después de la incubación con el compuesto durante 0 minutos se midieron nuevamente las corrientes. La amplitud de corriente después de la adición del compuesto se dividió por la corriente de pre-compuesto para el pulso 10 para determinar la fracción de corriente remanente después de la adición del compuesto. Para cada compuesto se midieron las relaciones de concentración-efecto de 8 puntos con diluciones seriadas de ½log. Estos datos fueron luego transferidos al GraphPad Prism (v 4) y se usó análisis de regresión no lineal para la estimación de la CI50 para cada compuesto de ensayo. Usando este método se obtuvieron los compuestos siguientes para los derivados Azetidinona ilustrativos: Fijación de parche de célula entera convencional Se depositaron células sobre un cubreobjeto circular de diámetro de 9 mm en el medio de crecimiento apropiado y se colocaron en una incubadora a 37°C hasta el momento de uso. Se llevaron a cabo estudios de fijación de parche de célula entera a temperatura ambiente usando métodos convencionales. Se usó software PCLAMP (v8 o 9) conjuntamente con un cuadro A/D D/A compatible, una computadora personal Pentium III y puede usarse cualquiera de un amplificador Multiclamp 700 o un AxoPatch 1 D para generar protocolos de fijación de voltaje, adquirir datos y medir corrientes. En el momento del estudio, una pieza de cubreobjetos con células adheridas es transferida a una cámara registradora sobre la platina de un microscopio invertido, y se establece la fijación de voltaje de la configuración de la célula entera. La cámara registradora es perfusionada por gravedad con una solución extracelular a un régimen de flujo de aproximadamente 3 mlJmin. Los electrodos de fijación deberían tener resistencias de 2-3 ?O cuando se llena de solución con pipeta. La solución extracelular usada es una solución salina de pH regulado con HEPES (NaCI (149 mM), HEPES-NaOH (10 mM, pH 7.4), glucosa (10 mM), CsCI (5 mM), MgC (2 mM), CaC (5 mM). La solución de la pipeta contenía: CsCI (1 15 mM), HEPES-CsOH (10 mM, pH 7.3), MgATP (4 mM), EGTA (10 mM); osmolaridad a 310 mM con sucrosa. Todas las soluciones contienen 0.1 % de DMSO. El potencial de mantenimiento es de -100 mV para todos los protocolos. El intervalo de interpulsos es de 15 segundos. El transcurso de tiempo de la corriente hCav3.2 o rCav3.2 se examina con un pulso de ensayo de 200 milisegundos a -35 mV. Las corrientes Cav3.2 se midieron como la corriente pico 10-30 milisegundos después que el voltaje escaló hasta -35 mV. Se usó la sustracción de fuga P/N 4. El filtro de paso inferior del amplificador se fijó a 10 kHz y los datos se muestrearon a 10 kHz. Los datos se filtraron fuera de línea con filtro Gaussiano con un corte de -3 dB de 280 Hz. El protocolo de voltaje para las corrientes hCaV2.1 debería diferir únicamente en términos de voltaje para el potencial de ensayo de despolarización. Para hCav2.1 , las corrientes se activaron con una etapa de 200 milisegundos hasta 0 mV. Las corrientes hCav2.1 se midieron desde los vestigios sustraídos por fuga como la corriente promedio etnre 190 y 200 milisegundos después de la etapa a 0 mV. El protocolo de voltaje para las corrientes de sodio incluye un pulso de hiperpolarizacion de 150 milisegundos hasta -140 mV para optimizar la disponibilidad del canal seguido de un pulso de ensayo de 20 milisegundos hasta -20 mV. Se midieron las corrientes de sodio a partir de los vestigios sustraídos por fuga como la corriente interior transitoria pico. Todos los efectos del fármaco se midieron después de lograr un efecto de estado fijo. Las relaciones de concentración-efecto se derivaron exponiendo cada célula a únicamente una concentración única del artículo de ensayo. Para el análisis de regresión no lineal, la amplitud de la corriente de post-compuesto se normalizó hasta la amplitud de corriente de pre-compuesto para cada célula. Si una corriente determinada es inhibida con >50% a una concentración de 10 µ? o menos, los datos para las concentraciones múltiples del compuesto y el vehículo correspondiente y las células de control de tiempo entran dentro de GraphPad Prism (v 4) para el análisis de regresión no lineal con el fin de determinar la Cl50.
EJEMPLO 10 Ensayo de clasificación de TRPV1 Materiales 1 ) Línea celular: HEK293-TetOFF-TRPV1 2) Medios: MEM (Invitrogen) 3) 10% Tet-FBS (Clontech #8630-1 ) 4) Fungizona (Gibco #15290-018 (100X)) 5) Penn/Strep (Gibco #15140-122 (10??)) 6) Geneticina (Gibco #10131 -027 (10??)) 7) Higromicina (Clontech # 8057-1 ) 8) Doxiciclina (Clontech # 8634-1 ) 9) Tripsina/EDTA (Gibco # 25200-056) 10) Placas de célula de cultivo de 100 mm (Falcon #3003) 1 1 ) Placas de poli-D-lisina de 96 pozos (Fisher #08-774-256) 12) Solución Salina Equilibrada de Hank (HBSS) (GIBCO #14025-092) 13) Regulador de pH HEPES (GIBCO #15630-080) 14) 30% de BSA (Research Organics #1334A) 15) Probenecid (Sigma P-8761 ) 16) Fluo-4, AM (50 µ?) (Sondas Moleculares F-23917) 17) Pluronic F-127 20% (Sondas Moleculares P-3000). 18) capsazepina (Sigma C-191 ) 19) capsaicina (Sigma M-2028) 20) Placas de compuesto (NUNC #442587) 21 ) puntos de pipetas negras de FLIPR de 96 pozos (Robbins Scientific 1043-24-0) 22) Reactivos adicionales obtenibles de Fisher: metanol, DMSO, NaOH Preparación del Reactivo 1 ) Células: HEK293-TetOFF-TRPV1 1 Medio de cultivo: MEM 10% Tet-FBS Fungizona Penn/Strep Geneticina Agregar fresco al cultivo: 25 µ?/?t?? final de higromicina y 2.5 µg/ml final de doxiciclina (de una carga de 1000X en PBS) - Las células deben ser alimentadas y/o divididas cada 2-3 días (para mantener la represión transcripcional con Doxiciclina). - Deben dividirse no más de 1 :5 (confluencia 50-75%) para mantener el crecimiento y la viabilidad. - Se cultivan en placas de cultivo de tejidos regulares (por ejemplo, Falcon 3003 - 100 mm) - Células SpIiT a través de Tripsina/EDTA: incubar con tripsina a temperatura ambiente no más de 5 minutos (las células HEK293 tienen tendencia a confundirse si están hipertripsinizadas). - Dos días antes del ensayo las células fueron divididas en placas de 96 pozos en medios para células en ausencia de doxiciclina a una concentración de 40,000 células/pozo en un volumen de 200 µ?_. 2) Se preparó regulador de pH FLIPR fresco: 500 mi de Solución Salina Balanceada de Hank (HBSS) 10 mi de regulador de pH HEPES 1 M pH 7.2 16.6 mi de BSA 30% Se agregan 5 mi de Solución Probenecid, preparada de la manera siguiente: 710 mg de probenecid (Sigma P-8761 ) se solubilizaron en 5 mi de NaOH 1 N, se agregaron 5 mi del regulador de pH anterior hasta un volumen final de 10 mi (de los cuales 5 mi vuelven al regulador de pH FLIPR) 3) Preparación del Colorante: Fluo-4, AM (50 µQ) se reconstituyó en 22 µ? de DMSO. Se agregaron 22 µ? de Pluronic F- 27 20%. Se combinaron 42 µ? de mezcla colorante con 1 1 mi de regulador de pH FLIPR /placa de 96 pozos. 4) Preparación del Antagonista Competitivo: capsazepina (5 mg) en 1 .3 mi de MeOH = 10 mM de solución (Cl50 ~ 500 nM). 5) Preparación de Agonista: Se preparó una solución de carga de 0.1 M de capsaicina en MeOH (50 mg + 1 .6 mi MeOH). Se almacenaron alícuotas de 50 µ? a -80 °C. Para el ensayo: a) Se diluyó la carga agregando 0.8 µ? en 1 mi de MeOH (final = 80 µ?). b) Se agregaron 50 µ? de carga diluida a 20 mi de regulador de pH FLIPR (final = 0.2 µ?) c) Se agregó solución agonista a 150 µ? /pozo en la placa de 96 pozos. d) La concentración final de agonista en la célula será de 50 nM.
(~EC80) 6) Preparación de la placa de compuesto a) La placa de compuesto se llenó con 150 µ?_/???? de regulador de pH FLIPR b) Se agregaron 3 µ? de mezclas de compuesto (1 mg/ml) a cada pozo (representa una solución 3X y DMSO final = 0.67%) Procedimiento de ensayo 1 ) Se extrajeron los medios de las células cultivadas en placas de 96 pozos. 2) 100 µ? de regulador de pH FLIPR que contenía Fluo-4 es introducido con pipeta dentro de cada pozo. 3) Las placas se incubaron durante 30-60 min a 37 °C en una incubadora de C02 al 5%. 4) Luego se lavaron tres veces las placas con 100 µ? de FLIPR. 5) Se dejaron 100 µ? de FLIPR de cada pozo y la placa se incubó a 37°C durante por lo menos 20 minutos. 6) La señal de placa rotulada con colorante es determinada inicialmente usando láser a 0.300 W con un tiempo de exposición de 0.4 seg. El láser se ajustó hacia arriba para una señal promedio > 10,000/pozo y menos de 10% de variabilidad. 7) Las condiciones de adición de compuesto son las siguientes: Desarrollo de FLIPR (parámetros de secuencia dual): Secuencia 1 : Primer intervalo 1 seg/60 recuentos Segundo intervalo 6 seg/50 recuentos Adición de fluido = 50 µ?_ Altura de la pipeta = 1 10 µ?_ Velocidad de suministro = 30 L seg Secuencia 2: Segundo intervalo 1 seg/60 recuentos Segundo intervalo 6 seg/40 recuentos Adición de fluido = 50 µ?_ Altura de la pipeta = 140 µ?_ Velocidad de la administración = 50 µ-Vseg Análisis de los datos Los datos de ambas adiciones se informan como Max-Min para cada pozo. Usando este método, se obtuvieron los datos siguientes para los derivados Azetidinona ilustrativos descritos.
NT = No analizado EJEMPLO 11 Efectos de derivados Azetidinona sobre el dolor Las acciones de los derivados Azetidinona para el tratamiento o prevención del dolor pueden verificarse usando varios modelos animales que incluyen pero no están limtiados a los que se describen a continuación.
Ensayo de Formalina Los ratones se sujetan suavemente y se les inyecta subcutáneamente 30 µ? de solución de formalina (1.5% en salina) en la superficie plantar de la pata derecha del ratón usando una microjeringa con un aguja de calibre 27. Después de la inyección de formalina se coloca inmediatamente el ratón en la cámara de observación de Plexiglás (30 x 20 x 20 cm) y se observa la respuesta nocireceptora del animal a la inyección de formalina por un período de 60 minutos. La duración de lamedura y retroceso de la pata inyectada se registra y cuantifica cada 5 minutos por un período de observación total. El registro de la base precoz (primera fase) se inicia inmediatamente y dura 5 minutos. La fase posterior (segunda fase) comienza aproximadamente a los 10-15 minutos después de la inyección de formalina.
Ligación del nervio espinal L5 y L6 del nervio ciántico (modelo de dolor neuorpático) La neuropatía periférica se produjo ligando los nervios espinales L5 y L6 del nervio ciático derecho, basado en el método descrito previamente por Kim y Chung (1992). Resumiendo, las ratas fueron anestesiadas con hidrato doral (400 mg/kg, i.p.), colocadas en posición postrada, y con los músculos paraespinales derechos separados de los procedimientos espinales en los niveles L4-S2. El procedimiento transversal L5 es removido cuidadosamente con una pequeña pinza incisiva para identificar los nervios espinales L4-L5. Los nervios espinales L5 y L6 derechos se aislaron y se ligaron estrechamente con un hilo de seda 7/0. Se confirmó una hemostasis completa y se suturó la herida.
Constricción crónica (CCI) del nervio ciático (modelo de dolor neuropático) Se llevó a cabo cirugía de acuerdo con el método descrito por Bennett & Xie (1987). Las ratas fueron anestesiadas con hidrato doral (400 mg/kg, i.p.) y el nervio ciático común se expuso a nivel de la mitad del muslo. Proximalmente, aproximadamente a 1 cm desde la trifurcación nerviosa, se ataron alrededor del nervio, cuatro ligadoras sueltas (cera 4/0) espaciadas a 1 mm. La ligadura demora, pero no detiene la circulación a través de la vasculatura neural superficial. Se lleva a cabo el mismo procedimiento excepto por la colocación de la ligadura (cirugía demorada) en un segundo grupo de animales.
Carragenina (modelo de dolor por inflamación) La pata derecha trasera de cada animal se inyectó a nivel subplantar con 0.1 mi de carragenina (aguja de 25 GA). Los pre-ensayos se determinaron antes de la administración de la carragenina o fármaco. En el protocolo de POST-TRATAMIENTO, las ratas se ensayaron tres horas después de que el tratamiento con carragenina estableció la presencia de hiperalgesia luego en momentos diferentes después de la administración del fármaco. En el protocolo de PRE-TRATAMIENTO, una hora después de la administración del fármaco las ratas se trataron con carragenina y se sometieron a pruebas a partir de 3 horas más tarde.
Modelo artrítico inducido por coadyuvante de Freund (modelo de dolor por inflamación) Los animales recibieron una inyección subplantar única de 00 mi de una dosis de 500 mg de Mycobacterium tuberculosis muerta por calor y secada (H37 Ra, Difco Laboratories, Detroit, MI, USA) en una mezcla de aceite parafinado y un agente emulsionante, monooleato de mannida (coadyuvante completo de Freund). Los animales de control se inyectaron con 0.1 mi de aceite mineral (coadyuvante incompleto de Freund).
Medición de alodinia táctil (ensayo de conductismo) Los ensayos de conductismo fueron llevados a cabo por un observador, a ciegas, en el tratamiento, durante el ciclo de luz para evitar la fluctuación de! ciclo circadiano. Se evaluó la sensibilidad táctil usando una serie de filamentos Semmes-Weinstein (Stoelting, IL) von Frey, calibrados, con una fuerza de flexión comprendida entre desde 0.25 a 15 g. Las ratas se colocaron en una caja de plástico transparente dotada de un piso de malla metálica y se los habituó a este ambiente antes de la iniciación del experimento. Se aplicaron los filamentos de von Frey en forma perpendicular con respecto a la superficie media plantar de las patas traseras ipsilaterales y se determinó la alodinia mecánica incrementando y disminuyendo consecutivamente la resistencia al estímulo (paradigma de "arriba-abajo" de la presentación del filamento). Los datos fueron analizados con un ensayo no paramétrico. (Chaplan et al. 1994). La lamedura de la pata o la agitación vigorosa después de la estimulación se considera respuestas dolorosas.
Hiperalgesia térmica (ensayo de comportamiento) La hiperalgesia térmica al calor radial se verificó mediendo la latencia de retirada como índice de la nocirecepcion térmica (Hargreaves et al., 1998). El ensayo plantar (Basile, Comerio, Italia) se eligió debido a su sensibilidad a la hiperalgesia. Resumiendo, el ensayo consiste en una fuente infrarroja móvil colocada por debajo de un plano de vidrio sobre el cual se coloca la rata. Tres cajas perspex individuales permiten ensayar simultáneamente tres ratas. La fuente infrarroja se colocó directamente por debajo de la superficie plantal de la pata posterior y la latencia de retiro de pata (PWL) se define como el tiempo que tarda la rata en sacar su pata posterior de la fuente de calor. Se tomaron tres veces las PWL para ambas patas posteriores de cada rata y el valor medio para cada pata representó el umbral de dolor térmico de la rata. La fuente de calor radiante se ajustó para proporcionar como resultado latencias de línea de base de 1 0-12 segundos. El instrumento de corte se fijó a 21 segundos para evitar lesiones en el tejido.
Soportar el peso (ensayo de comportamiento) Se empleó un probador de incapacitancia para la determinación de la distribución de peso en la pata trasera. Las ratas se colocaron en una cámara de plexiglass angular colocada de manera que cada pata trasera reposara sobre una placa de fuerza separada. El ensayo de soporte de peso representa una medición directa de la afección patológica de las ratas artríticas sin aplicar ninguna fuerza o estímulo, y por lo tanto este ensayo mide un comportamiento de dolor espontáneo de los animales.
EJEMPL0 12 Ensayo de adhesión NPC1 L1 Células HEK-293 que expresan NPC1 L1 humano se depositaron en placas negras/transparentes de 384 pozos (BD Biosciences, Bedford A) para experimentos de adhesión al día siguiente. Se aspiraron los medios de cultivo de célula (DMEM, 10% de suero de ternero fetal, 1 mg/ml de geneticina, 100 Unidades/ml de penicilina). Los medios de crecimiento de células (20 mi) que contenían 250 nM de ezetimmiba glucuronidada rotulada con BODIPY se agregaron a cada pozo. Los medios de crecimiento de células (20 mi) que contenían la concentración indicada de compuesto se agregaron luego a los pozos. Se usó ezetimiba glucuronidada no rotulada (100 mM) para determinar la adhesión no específica. La reacción de adhesión se dejó proseguir durante 4 horas a 37°C. Subsiguientemente se aspiraron los medios de cultivo de células y las células se lavaron una vez con PBS. El ezetimibe glucuronidado rotulado fluorescente remanente unido a las células se cuantificó usando un lector de placa FlexStation (Molecular Devices, Sunnivale CA) para medir la intensidad de fluorescencia. Los valores Ki se determinaron a partir de curvas de adhesión de competición (n=4 para cada punto) usando software Prism y Base de Actividad. Usando este método, se obtuvieron los datos siguientes para los derivados Azetidinona ilustrativos descritos: NT = No analizado EJEMPLO 13 Ensayo de clasificación de GPR119 Preparación del reactivo Regulador de pH de estimulación: 100 mi HBSS (GIBCO # 14025-092) + 100 mg BSA (MP Biomedicals faction V, #103703) = 0.1 % + 500 µ? 1 M HEPES (Cellgro #25-060-CI) = 5 mM + 75 µ? RO-20 (Sigma B8279; 20mM de carga en DMSO almacenado en alícuotas a -20 °C) = 15 µ? (preparado fresco diariamente) B84 (N-[4-(metilsulfonil)ffenil]-5-nitro-6-[4-(feniltio)-1 -piperidinil]-4-pirimidinamina, ver WO 2004/065380): Se preparó una solución de carga de 10 mM del compuesto de ensayo en DMSO, se formaron alícuotas y se almacenaron a -20 °C. Para los totales - diluido - 1 :33.3 en DMSO y luego 1 .50 en Regulador de pH de estimulación = 6 µ? en 2% DMSO (3 µ? B84 y 1 % DMSO final). Para la curva de la respuesta a la dosis - 3 µ? de carga + 7 µ? de DMSO + 490 µ? Stim Regulador de pH = 60 µ? en 2% de DMSO (= 30 µ? B84 y 1 % DMSO final) (preparado fresco diariamente).
Línea celular Clon 3 humano: Células HEK 293 transfectadas establemente con SP9215(GPR1 19)/pcDNA3.1 humano y también estables para pCRELuc, Stratagene. Las células se mantuvieron en DMEM que contenía 10% de FBS (Invitrogen #02-4006Dk, lot #1272302, inactivado por calor), 1 x de MEM, 1 x Pen/Strep, 0.1 mg/ml Higromicina B, y 0.5 mg/ml G418. Las células se dividieron 1 :8 dos veces por día. Equipo cAMP: Equipo LANCE™ cAMP 384, Perkin Elmer #AD0263 Diluciones del compuesto 1 . Agregar DMSO a frasco que contienen compuestos para obtener una solución de 1 mg/ml. 2. Diluir los compuestos hasta 60 µ? en un regulador de pH de estimulación. Preparar diluciones de ½ log en reguladores de pH de estimulación que contiene 2% de DMSO usando el robot epMotion. Curva de respuesta a la dosis de 10 puntos 1 nM a 30 µ?. 3. Los compuestos se ensayaron por cuadruplicado, 2 diluciones separadas para cada uno, conjuntos 1 y 1 a.
Procedimiento de Ensayo 1 . La tarde anterior al ensayo, se reemplazo el medio en el frasco de 3 células de clon humano, con Optimem. (Gibco # 1 1058-021 ) NOTA: las células deben estar en cultivo 6-8 días. 2. La mañana siguiente, las células se extrajeron suavemente del frasco usando HBSS (temperatura ambiente). 3. Se granularon las células (1300 rpm, 7 min, temperatura ambiente) y se resuspendieron en Regulador de pH de estimulación a 2.5x10e6/ml (=5-8,000 células/6 µ?). Se agregó una dilución de 1 :100 del anticuerpo Alexa Fluor 647-anti cAMP (provisto en el equipo) directamente a la suspensión de células. 4. En placas blancas de 384 pozos (Matrix) se agregaron 6 µ? de compuestos 2 x B84, o reguladores de pH Stim para nsb. Todos ellos contenían 2% de DMSO (= 1 % DMSO final). 5. Se agregaron 6 µ? de la suspensión de células a los pozos. Se incubaron durante 30 minutos a temperatura ambiente. 6. Para la curva estándar se agregaron 6 µ? de cAMP de solución std diluida en Stim Regulador de pH + 2% de DMSO de acuerdo con las instrucciones del equipo (1000-3nM). Se agregaron 6 µ? de 1 :100 de dilución anti-cAMP en Stim Regulador de pH a los pozos std. 7. Preparar mezcla de detección de acuerdo con las instrucciones del equipo e incubar durante 15 minutos a temperatura ambiente. 8. Agregar 12 µ? de mezcla de detección a todos los pozos. Mezclar suavemente golpeando e incubando 2-3 horas a temperautra ambiente. 9. Leer en el Envision bajo el protocolo "Lance/Delphia cA P" 10. Los valores (nM) para cada muestra se determinaron por extrapolación a partir de la curva estándar. El porcentaje de control, Plegamiento y y CE50 (Control = 3µ? B84) se determinaron para cada compuesto, promediando los grupos 1 y 1 a. Usando este método se obtuvieron los datos siguientes para los derivados Azetidinona ilustrativos descritos: EJEMPLO 14 Efectos In vivo de los derivados Azetidinona sobre la inhibición de absorción de colesterol Se administraron las dosis a ratas macho por alimentación oral forzada con 0.25 mi de aceite de maíz o compuesto de ensayo en aceite de maíz; 30 minutos después de recibir la dosis, cada rata recibió 0.25 mi de aceite de maíz por vía oral con 2 µ?'? uC-Colesterol, 1 .0 mg de colesterol frío. 2 horas más tarde las ratas fueron anestesiadas con 100 mg/kg IP de Inactina, y se recogió una meustra de sangre de 10 mi de la aorta abdominal. El intestino delgado fue luego removido, dividido en 3 secciones, se enjuagó cada sección con 15 mi de solución salina fría, y los enjuagues se reunieron. Luego se extrajo el hígado, se pesó y se extrajeron 3 alícuotas de -350 mg. Se agregaron 5ml de 1 N NaOH a cada pieza intestinal, 1 mi para cada alícuota de hígado para disolverse a 40 °C durante la noche. Alícuotas de 2 x 1 mi de los digestos SI y de los digestos del hígado fueron neutralizados con 0.25 mi 4N HCI y se contaron. Se contaron alícuotas de 2 x 1 mi de plasma y enjuagues intestinales.
EJEMPLO 15 Evaluación hipotética in vivo de la desmielinización Se administró un derivado Azetidinona a roedores que habían sido inducidos a desarrollar encefalomielitis autoinmunitaria experimental ("EAE"), un modelo de esclerosis múltiple humana y la enfermedad desmielinizante. Los roedores útiles incluyen ratones C57BL/6 (obtenidos en Jackson Laboratory o Charles River Laboratories) inmunizados con la proteína oligodendrocito de mielina (MOG) péptido 35-55, ratones SJLAJ (obtenidos en Jackson Laboratory o Charles River Laboratories) inmunizados con péptidos de proteína proteolipida (PLP), o ratas Lewis, BN o DA (obtenidas en Charles River Laboratories o Harían Laboratories) inmunizadas con homogenizado de médula espinal de conejillo de Indias o proteína básica de mielina (MBP). Todas las inmunizaciones se llevaron a cabo emulsionando el péptido inducido en coadyuvante incompleto de Freund o coadyuvante completo de Freund, con o sin la administración de la toxina pertusis (tal como se describió en Current Protocols in Immunology, Unit 15, John Wiley & Sons, Inc. NI, or Tran et al, Eur. J. Immunol. 30:1410, 2002 or H. Butzkeuven et al, Nat. Med. 8:613, 2002). Otros roedores que son útiles en este ensayo incluyen los ratones transgénicos de receptor de célula T anti- MBP T- tal como en Grewal et al Immunity 14:291 , 2001 ), que desarrollan en forma natural la enfermedad EAE; roedores transferidos adoptivamente con líneas de células MBP específicas de PLP o específicas de MOG (tal como las descritas en Current Protocols in Immunology, Unit 15, John Wiley & Sons, Inc. NI); o SJL/J o ratones C57BL/6 que pueden ser inducidos a desarrollar una profunda enfermedad de desmielinización por inoculación intracerebral con el virus de encefalomielitis murina de Theiler (tal como se describió en Pope et al, J. Immunol. 156:4050, 1994) o por inyección intraperitoneal del virus Simliki Forest (tal como se describió en Soilu-Hanninen et al, J. Virol. 68:6291 , 1994). La presente invención no está limitada en su alcance por las modalidades específicas descritas en los ejemplos que se consideran ilustrativos de unos pocos aspectos de la invención y cualquiera de las modalidades que son funcionalmente equivalentes están dentro del alcance de esta invención. En realidad, varias modificaciones de la invención además de las que se muestran y describen aquí resultarán aparentes para los expertos en la técnica y entran dentro del alcance de las reivindicaciones anexas. Se han citado una variedad de referencias, cuyas descripciones completas han sido incorporadas aquí en su totalidad.

Claims (1)

  1. NOVEDAD DE LA INVENCION REIVINDICACIONES 1 .- El uso de un compuesto que tiene la fórmula: (IA) o una sal, solvato, éster, profármaco o estereoisómero de éste farmacéuticamente aceptable, donde R1 y R2 se designan usando una "X" tal como se indica a continuación: 1 2 3 4 5 6 8 9 10 11 7 12 340 X X X X X 341 X X X X X 342 X X X X X 343 X X X X X 344 X X X X X 5 345 X X X X X 346 X X X X 347 X X X X X 348 X X X X X 349 X X X X X 350 X X X X X 351 X X X X X 352 X X X X X 353 X X X X X 354 X X X X X 10 355 X X X X X 356 X X X X 361 X X X X 362 X X X X 357 X X X X X 358 X X X X X 359 X X X X X 363 X X X 364 X X X X X X X X X X X X 365 X X X X X X X X X X X X 15 366 X X X X X X X X X X X X 367 X X X X X X X X X X X X 368 X X X X X X X X X X X X 369 X X X X X X X X X X X X 370 X X X X X X X X X X X X 371 X X X X X X X X X X X X 372 X X X X X X X X X X X X 373 X X X X X X X X X X X X 374 X X X X X X X X X X X X 375 X X X X X X X X X X X 20 376 X X X X X X X X X X X X 377 X X X X X X X X X X X 378 X X X X X X X X X X X X 379 X X X X X X X X X X X X R1 se define de la manera siguiente: donde Z representa el enlace de R1 con el átomo de nitrógeno al cual está unido; R2 se define como sigue: i85 i87 i88 i93 i94 i95 y donde Z representa el enlace de R2 con el átomo de nitrógeno al cual está unido, para fabricación de un medicamento para tratar un trastorno del metabolismo lipídico, dolor, diabetes, una afección vascular, desmielinización o enfermedad hepática grasa no alcohólica en un paciente. 2.- El uso de un compuesto que tiene la fórmula: (IB) o una sal, solvato, éster, profármaco o estereoisómero de éste, farmacéuticamente aceptable, y donde R1 y R2 se designan usando una "X" tal como se indica a continuación: y donde R1 y R2 son tal como se definen en la reivindicación 1 , para la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno del metabolismo lipídico, dolor, diabetes, una afección vascular, desmielinizacion o enfermedad hepática grasa no alcohólica en un paciente. 3.- El uso de un compuesto que tiene la fórmula: (IC) o una sal, solvato, éster, profármaco o estereoisómero de éster farmacéuticamente aceptable, donde R y R2 se designan usando una "X" tal como se indica a continuación: y donde R1 y R2 son tal como se han definido en la reivindicación 1 , para la fabricación de un medicamento para tratar un trastorno del metabolismo lipídico, dolor, diabetes, una afección vascular, desmielinización o enfermedad hepática grasa no alcohólica en un paciente. 4.- El uso de un compuesto que tiene la fórmula: (ID) o una sal, solvato, éster, profármaco o estereoisómero de éste farmacéuticamente aceptable, donde R1 y R2 se designan usando una "X" tal como se indica a continuación: y donde R1 y R2 son tal como se han definido en la reivindicación 1 , para fabricar un medicamento para tratar un trastorno del metabolismo lipídico, dolor, diabetes, una afección vascular, desmielinización o enfermedad hepática grasa no alcohólica en un paciente. 5.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde el tratamiento es para un trastorno del metabolismo lipídico. 6. - El uso como se reclama en la reivindicación 2, en donde el tratamiento es para un trastorno del metabolismo lipídico. 7. - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el tratamiento es para un trastorno del metabolismo lipídico. 8.- El uso como se reclama en la reivindicación 4, en donde el tratamiento es para un trastorno del metabolismo lipídico. 9. - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde el tratamiento es para el dolor. 10. - El uso como se reclama en la reivindicación 2, en donde el tratamiento es para el dolor. 1 1 . - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el tratamiento es para el dolor. 12. - El uso como se reclama en la reivindicación 4, en donde el tratamiento es para el dolor. 13.- El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde el tratamiento es para diabetes. 14. - El uso como se reclama en la reivindicación 2, en donde el tratamiento es para diabetes. 15. - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el tratamiento es para diabetes. 16. - El uso como se reclama en la reivindicación 4, en donde el tratamiento es para diabetes. 17. - El uso como se reclama en la reivindicación 5, en donde el trastorno del metabolismo lipídico es hipercolesterolemia. 18. - El uso como se reclama en la reivindicación 6, en donde el trastorno del metabolismo lipídico es hipercolesterolemia. 19. - El uso como se reclama en la reivindicación 7, en donde el trastorno del metabolismo lipídico es hipercolesterolemia. 20. - El uso como se reclama en la reivindicación 8, en donde el trastorno del metabolismo lipídico es hipercolesterolemia. 21 . - El uso como se reclama en la reivindicación 1 , en donde el medicamento también es administrable con otro agente terapéutico, seleccionado de un agente útil para el tratamiento del dolor, un agente antidiabético, un agente bloqueador del canal de calcio de Tipo T, un antagonista de TRPV1 , un agonista de TRPV1 , un agonista de GPR1 9, un antagonista de NPC1 L1 , un inhibidor de HMG-CoA reductasa, un agonista receptor de ácido nicotínico, un inhibidor de una proteína de transferencia de éster de colesterol, o un activador PPAR. 22. - El uso como se reclama en la reivindicación 2, en donde el medicamento también es administrable con otro agente terapéutico, seleccionado de un agente útil para el tratamiento del dolor, un agente antidiabético, un agente bloqueador del canal de calcio de Tipo T, un antagonista de TRPV1 , un agonista de TRPV1 , un agonista de GPR1 19, un antagonista de NPC1 L1 , un inhibidor de HMG-CoA reductasa, un agonista receptor de ácido nicotínico, un inhibidor de una proteína de transferencia de éster de colesterol, o un activador PPAR. 23. - El uso como se reclama en la reivindicación 3, en donde el medicamento también es administrable con otro agente terapéutico, seleccionado de un agente útil para el tratamiento del dolor, un agente antidiabético, un agente bloqueador del canal de calcio de Tipo T, un antagonista de TRPV1 , un agonista de TRPV1 , un agonista de GPR1 19, un antagonista de NPC1 L1 , un inhibidor de HMG-CoA reductasa, un agonista receptor de ácido nicotínico, un inhibidor de una proteína de transferencia de éster de colesterol, o un activador PPAR. 24. - El uso como se reclama en la reivindicación 4, en donde el medicamento también es administrable con otro agente terapéutico, seleccionado de un agente útil para el tratamiento del dolor, un agente antidiabético, un agente bloqueador del canal de calcio de Tipo T, un antagonista de TRPV1 , un agonista de TRPV1 , un agonista de GPR1 19, un antagonista de NPC1 L1 , un inhibidor de HMG-CoA reductasa, un agonista receptor de ácido nicotínico, un inhibidor de una proteína de transferencia de éster de colesterol, o un activador PPAR.
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