CN101528227A

CN101528227A - 氮杂环丁酮衍生物及其使用方法

Info

Publication number: CN101528227A
Application number: CNA2007800391855A
Authority: CN
Inventors: R·G·亚斯兰安; 詹亭月; J·M·哈里斯; B·A·麦基崔克; B·R·纽斯塔特; A·帕拉尼; T·普利斯莱; E·M·史密斯; A·W·史丹佛; H·M·斐卡洛; 萧彤
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme Corp
Priority date: 2006-09-15
Filing date: 2007-09-13
Publication date: 2009-09-09
Also published as: CA2663503A1; EP2091534A1; MX2009002918A; WO2008033465A1; US20080076750A1; TW200829587A; AR062792A1; JP2010503678A

Abstract

本发明涉及治疗或预防脂质代谢障碍、疼痛、糖尿病、血管病症、脱髓鞘作用或非酒精性脂肪肝疾病的方法，该方法包括施用式(I)的化合物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，其中R¹和R²定义于本文表1－6中，并且R³为－苯基、－4－氯苯基、－2－吡啶基或－3－吡啶基。

Description

氮杂环丁酮衍生物及其使用方法

引用在先申请

本申请要求于2006年9月15日提交的美国临时专利申请No60/844,808的优先权，其通过引用以其全部内容并入本文。

发明领域

本发明涉及治疗或预防脂质代谢障碍、疼痛、糖尿病、血管病症、脱髓鞘作用或非酒精性脂肪肝疾病的方法，该方法包括施用下式的化合物：

(I)

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，其中

R¹和R²定义于本文表1-6中，并且

R³为-苯基、-4-氯苯基、-2-吡啶基或-3-吡啶基。

背景技术

慢性疼痛尤其是发炎及神经疼痛的治疗，为尚不符合医学需求的领域。神经痛是导致涉及痛觉敏化作用的神经元过度激化的神经伤害。T-电流(T-currents)存在于疼痛路径的神经元中。T-型钙通道阻断剂在临床前的神经疼痛模型中有效。瞬时受体电位V1(TRPV1)是一种非特异性的阳离子通道，其活化作用会导致疼痛尤其是发炎性疼痛，以及痛觉过敏(hyperalgesia)，并且在咳嗽和膀胱功能中发挥作用。

II型糖尿病(亦称为非胰岛素依赖性糖尿病)为进行性疾病，其特征为受损的葡萄糖代谢导致血糖量升高。罹患II型糖尿病的患者呈现受损的胰腺β-细胞功能，导致在对高血糖信号的响应中胰腺β-细胞无法分泌适量胰岛素，以及在其标靶组织对胰岛素作用具有抗性(胰岛素抗性)。

II型糖尿病现有治疗法着眼于反转胰岛素抗性(reverse insulinresistance)、控制肠内葡萄糖吸收、使肝脏葡萄糖产出正常化以及改善β-细胞葡萄糖感知和胰岛素分泌。磺酰脲类口服抗高血糖药可促进胰岛素从胰腺β-胰岛细胞的分泌，但因其作用与葡萄糖量无关，因此具有造成低血糖症的可能性。抗高血糖药包括：通过抑制糖质生成作用降低肝脏葡萄糖产生的胰岛素敏化剂；抑制复合碳水化合物分解因而延缓葡萄糖吸收并降低饭后葡萄糖和胰岛素峰值的α-糖苷酶抑制剂；以及改善胰岛素作用并降低胰岛素抗性的噻唑烷二酮。随着时间的流逝，约一半的II型糖尿病患者丧失其对此类药物质的反应。由于目前治疗上的缺点，因此高度需要II型糖尿病的新颖疗法。

GRP119为主要在胰腺β-胰岛细胞中表达的结构活性的G-蛋白质。通过激动剂使GRP119活化将以与葡萄糖依赖性方式增加胰岛素从胰腺β-胰岛细胞的释放。因此GRP119的激动剂提供了使II型糖尿病患者在对饭后血液葡萄糖量升高应答中使血液葡萄糖量正常化的潜能，但并不预期刺激饭前或禁食状态的胰岛素释放。

尼曼-皮克C1-样(Niemann Pick C1-like)(NPC1L1)已被确认为胆固醇吸收的关键调节剂。已确定胆固醇吸收抑制剂依泽替米贝(ezetimibe)可靶向NPC1L1。

已揭示用氮杂环丁酮衍生物治疗脂质代谢障碍、糖尿病、血管病症、脱髓鞘作用和非酒精性脂肪肝疾病。抑制小肠中胆固醇吸收的氮杂环丁酮衍生物是本领域技术人员公知的，并且描述于例如US RE 37,721；US5,631,356；US 5,767,115；US 5,846,966；US 5,698,548；US 5,633,246；US 5,656,624；US 5,624,920；US 5,688,787；US 5,756,470；US公开号2002/0137689；WO 02/066464；WO 95/08522和WO96/19450中。前述公开各自并入本文供参考。现有技术显示此类化合物可通过单独施用此类化合物或者与第二化合物如胆固醇生物合成抑制剂一起施用而用于治疗例如冠状动脉粥样硬化疾病。

WO 2005/000217描述治疗血脂异常的组合疗法，其包括组合施用抗肥胖剂和抗血脂异常剂。WO 2004/110375描述治疗糖尿病的组合疗法，其包括组合施用抗肥胖剂和抗糖尿病剂。US 2004/0122033描述治疗肥胖的组合疗法，其包括组合施用食欲抑制剂和/或代谢速率促进剂和/或营养吸收抑制剂。US 2004/0229844描述治疗动脉粥状硬化的组合疗法，其包括组合施用烟酸或另一烟酸受体激动剂和DP受体拮抗剂。还已知一种通过施用有效量的治疗组合物以治疗哺乳动物非酒精性脂肪肝疾病的方法，所述治疗组合物包括至少一种胆固醇降低剂和/或至少一种H3受体拮抗剂/逆激动剂。

发明内容

本发明涉及一种治疗或预防脂质代谢障碍、疼痛、糖尿病、血管病症、脱髓鞘作用或非酒精性脂肪肝疾病(各称为″病症″)的方法，该方法包括施用下式的化合物：

(I)

R¹和R²定义于本文表1-6中，并且

R³为-苯基、-4-氯苯基、-2-吡啶基或-3-吡啶基。

在一方面，本发明涉及治疗或预防患者病症的方法，其包括给患者施用有效量的下式(IA)的化合物：

(IA)

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，

其中R¹和R²是如下表1所述使用″X″表示的：

表1

表1(续)

表1(续)

表1(续)

表1(续)

表1(续)

表1(续)

表1(续)

其中R¹定义于表5中：

表5

其中Z代表从R¹至其所连接的氮原子间的键；

R²定义于下表6中：

表6

表6(续)

表6(续)

表6(续)

表6(续)

表6(续)

表6(续)

表6(续)

表6(续)

表6(续)

表6(续)

表6(续)

并且其中Z代表从R²至其所连接的氮原子间的键。

在另一方面，本发明涉及治疗或预防患者病症的方法，其包括给患者施用有效量的下式(IB)的化合物：

(IB)

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，

其中R¹定义于上述表5中，R²定义于上述表6中，并且式(IB)的化合物中的R¹和R²的意义是使用下表2中所列的”X”表示的：

表2

表2(续)

表2(续)

表2(续)

表2(续)

表2(续)

表2(续)

表2(续)

在另一方面，本发明涉及治疗或预防患者病症的方法，其包括给患者施用有效量的下式(IC)的化合物：

(IC)

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，

其中R¹定义于上述表5中，R²定义于上述表6中，并且式(IC)的化合物中的R¹和R²的意义是使用下表3中所列的”X”表示的：

表3

表3(续)

表3(续)

表3(续)

表3(续)

表3(续)

在一方面，本发明涉及治疗或预防患者病症的方法，其包括给患者施用有效量的下式(ID)的化合物：

(ID)

或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体，

其中R¹定义于上述表5中，R²定义于上述表6中，并且式(ID)的化合物中的R¹和R²的意义是使用下表4中所列的”X”表示的：

表4

表4(续)

表4(续)

表4(续)

表4(续)

表4(续)

表4(续)

本发明所用的化合物是以式(IA)-(ID)描述的，并且是以表1-4中的″X″定义的。因此，表1-4中定义的化合物具有由R²栏和R¹行的交叉形成的方格中的”X”所示的R¹和R²的定义；并且属本发明的范围内(亦即可用于本发明的方法中)。表1-4最左栏的数目代表表6中定义的R²基。表1-4中最上一行的数目代表表5中定义的R¹基。表1-4的空白方格定义不属于本发明范围的化合物。

式(IA)-(ID)的化合物(″氮杂环丁酮衍生物″)可用于治疗或预防病症。

本发明还涉及治疗或预防患者病症的方法，其包括给患者施用有效量的氮杂环丁酮衍生物。

本发明进一步涉及一种治疗或预防患者病症的方法，其包括给患者施用有效量的氮杂环丁酮衍生物和有效量的另一治疗剂。

进一步的意图是，本发明的组合疗法可以提供为一种药盒，该药盒在单包装中包括至少一种在医药组合物中的氮杂环丁酮衍生物，以及包含至少一种额外治疗剂的至少一种分开的医药组合物。

发明详述

定义和缩写

如上述及该公开全文中所用的，下列术语除非另有说明，否则应理解具有下列有含义：

″至少一种″在表示氮杂环丁酮衍生物时，意指1至4种不同的氮杂环丁酮衍生物。在一个实施方案中，术语″至少一种″用于指定1种氮杂环丁酮衍生物。同样的，当″至少一种″与组合中所用的额外药物连用时，意指1至4种额外的药物。在一个实施方案中，术语″至少一种″用于指定1种额外药物。

″患者″为人类或非人类哺乳动物。在一个实施方案中，患者为人类。在另一个实施方案中，患者为非人类哺乳动物，包括(但不限于)猴、狗、狒狒、恒河猴、小鼠、大鼠、马、猫或兔。在另一个实施方案中，患者为宠物动物包括(但不限于)狗、猫、兔、马或雪貂。在一个实施方案中，患者为狗。在另一个实施方案中，患者为猫。

术语″取代的″意指指定原子上的一个或多个氢被选自所示的基团置换，但条件为在既存环境下不超过指定原子的正常化学价，并且取代产生稳定化合物。取代基和/或可变基团的组合仅在该组合产生稳定化合物下方可行。″稳定化合物″或″稳定结构″意指足够稳固，以从反应混合物中可分离成可用纯度，并且调配成有效治疗剂的化合物。

术语″任选取代的″意指以特定基团、残基或部分任选取代。

用于化合物的术语″纯化的″、″呈纯化的形式″或″呈分离和纯化的形式″是指该化合物从合成过程(例如从反应混合物)或天然来源或其组合中分离后的物理状态。因此，用于化合物的术语″纯化的″、″呈纯化的形式″或″呈分离和纯化的形式″是指该化合物从本文所述或本领域技术人员公知的纯化过程或多个过程(例如色谱、重结晶等)获得后的物理状态，其纯度足以以本文所述或本领域公知的标准分析技术表征。

还应了解全文、反应图、实例和表中具有未满足的化学价的任何碳以及杂原子均假设其具有足够数目的氢原子以满足其化学价。

当化合物中的官能基称为″保护的″时，此意指该基为经改质的形式，以防止化合物进行反应时在保护的位置处发生不期望的副反应。适宜的保护基为本领域技术人员所理解，并且可参考标准参考书例如T.W.Greene et al.，Protective Groups in organic Synthesis(1991)，Wiley，NewYork。

本文所用的术语″组合物″将涵盖包括特定量的特定成分的产物，以及由特定量的特定成分的组合直接或间接形成的任何产物。

氮杂环丁酮衍生物的前药和溶剂合物也是本文所考虑的。前药的讨论提供于T.Higuchi and V.Stella，Pro-drugs as Novel Delivery Systems(1987)14 of the A.C.S.Symposium Series，以及Bioreversible Carriers inDrug Design，(1987)Edward B.Roche，ed.，American PharmaceuticalAssociation and Pergamon Press中。术语″前药″意指在体内转化以获得氮杂环丁酮衍生物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯或前药的化合物(例如药物前体)。该转化可通过各种机制(例如代谢或化学过程)发生，例如通过在血液中水解。使用前药的讨论提供于T.Higuchi and W.Stella，″Pro-drugs as Novel Delivery Systems，″Vol.14 of the A.C.S.SymposiumSeries，以及Bioreversible Carriers in Drug Design，ed.Edward B.Roche，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987。

例如，如果氮杂环丁酮衍生物或其药学可接受的盐、溶剂合物、酯、前药或立体异构体含有羧酸官能基，则前药可包括通过以例如下列的基团置换酸基的氢原子形成酯：(C₁-C₈)烷基、(C₂-C₁₂)烷酰基氧基甲基、具有4至9个碳原子的1-(烷酰基氧基)乙基、具有5至10个碳原子的1-甲基-1-(烷酰基氧基)-乙基、具有3至6个碳原子的烷氧基羰基氧基甲基、具有4至7个碳原子的1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有5至8个碳原子的1-甲基-1-(烷氧基羰基氧基)乙基、具有3至9个碳原子的N-(烷氧基羰基)-氨基甲基、具有4至10个碳原子的1-(N-(烷氧基羰基)氨基)乙基、3-酞酰基、4-巴豆内酯基(crotonolactonyl)、γ-丁内酯-4-基、二-N，N-(C₁-C₂)烷基氨基(C₂-C₃)烷基(如β-二甲氨基乙基)、胺甲酰基-(C₁-C₂)烷基、N，N-二(C₁-C₂)烷基胺甲酰基-(C₁-C₂)烷基和哌啶基-或吗啉基(C₂-C₃)烷基等。

同样的，若氮杂环丁酮衍生物含有醇官能基，则可通过以例如下列的基团置换醇基的氢原子形成前药：(C₁-C₆)烷酰基氧基甲基、1-((C₁-C₆)烷酰基氧基)乙基、1-甲基-1-((C₁-C₆)烷酰基氧基)乙基、(C₁-C₆)烷氧基羰基氧基甲基、N-(C₁-C₆)烷氧基羰基氨基甲基、丁二酰基、(C₁-C₆)烷酰基、α-氨基(C₁-C₄)烷基、芳基酰基和α-氨基酰基，或α-氨基酰基-α-氨基酰基，其中各α-氨基酰基独立地选自天然的L-氨基酸、P(O)(OH)₂、-P(O)(O(C₁-C₆)烷基)₂或糖基(从碳水化合物的半乙缩醛形式移除羟基所得的残基)等。

若氮杂环丁酮衍生物含有胺官能基，则可通过以例如下列的基团置换胺基中的氢原子形成前药：R-羰基、RO-羰基、NRR′-羰基(其中R和R′各自独立地为(C₁-C₁₀)烷基、(C₃-C₇)环烷基、苄基，或R-羰基为天然α-氨基酰基)、-C(OH)C(O)OY¹(其中Y¹为H、(C₁-C₆)烷基或苄基)、-C(OY²)Y³(其中Y²为(C₁-C₄)烷基且Y³为(C₁-C₆)烷基、羧基(C₁-C₆)烷基、氨基(C₁-C₄)烷基或单-N-或二-N，N-(C₁-C₆)烷基氨基烷基)、-C(Y⁴)Y⁵(其中Y⁴为H或甲基且Y⁵为单-N-或二-N，N-(C₁-C₆)烷基氨基吗啉、哌啶-1-基或吡咯烷-1-基)等。

氮杂环丁酮衍生物可以非溶剂化以及与药学可接受的溶剂如水、乙醇等的溶剂化形式存在，并且本发明欲意包含溶剂化和非溶剂化形式两者。″溶剂合物″意指本发明化合物与一个或多个溶剂分子的物理缔合。该物理缔合包含各种程度的离子和共价结合，包含氢键结合。在某些例中，当例如一个或多个溶剂分子并入结晶固体的晶格中时溶剂合物将可分离。″溶剂合物″包括溶液-相和可分离溶剂合物两者。适宜溶剂合物的非限制性实例包括乙醇合物、甲醇合物等。″水合物″为其中溶剂分子为H₂O的溶剂合物。

一种或多种氮杂环丁酮衍生物可任选转化成溶剂合物。溶剂合物的制备通常为已知。因此例如M.Caira et al.，J.Pharmaceutical Sci.，93(3)，601-611(2004)描述在乙酸乙酯中以及从水中制备抗真菌氟康唑的溶剂合物。类似地，溶剂合物、半溶剂合物、水合物等的制备描述于E.C.vanTonder et al.，AAPS PharmSciTech.，5(1)，article 12(2004)；以及A.L.Bingham et al.，Chem.Commun.，603-604(2001)。典型的、非限制过程包括含在高于环境温度下将本发明的化合物溶于所需量的所需溶剂(有机溶剂或水或其混合物)中，并且使溶液在足以形成结晶的速率下冷却，接着以标准方法分离。分析技术例如I.R.光谱显示在作为溶剂合物(或水合物)的结晶中存在溶剂(或水)。

″有效量″或″治疗有效量″意指描述可有效抑制上述疾病且因此产生所需治疗、减缓、抑制或预防性作用的本发明化合物或组合物的量。

氮杂环丁酮衍生物可形成盐类，其也属本发明范围。本文中涉及氮杂环丁酮衍生物应理解包含涉及其盐，除非另有说明。本文所用的术语″盐(类)″代表与无机和/或有机酸形成的酸式盐，以及与无机和/或有机碱形成的碱式盐。另外，当氮杂环丁酮衍生物同时含有碱性部分如(但不限于)吡啶或咪唑、以及酸性部分如(但不限于)羧酸时，则可形成两性离子(″内盐″)，并且包含于本文所用的术语″盐(类)″中。优选为药学可接受的(亦即，无毒、生理上可接受)盐，但也可使用其它盐。氮杂环丁酮衍生物的盐可通过例如使氮杂环丁酮衍生物与某量的酸或碱如当量的量，在介质如使盐沉淀的介质中，或在水性介质中反应，再经冻干形成。

酸加成盐的实例包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲烷磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、丁二酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫代氰酸盐、甲苯磺酸盐(亦称为甲苯磺酸盐(tosylates))等。另外，例如P.Stahl et al.，Camille G.(eds.)Handbook ofPharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002)Zurich：Wiley-VCH；S.Berge et al.，Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of Pharmaceutics(1986)33 201-217；Anderson et al.，The Practice of Medicinal Chemistry(1996)，AcademicPress，New York；以及The Orange Book(Food&Drug Administration，Washington，D.C.在其网站上)讨论酸，该酸通常视为适用于从碱性医药化合物形成医药可用的盐。这些公开并入本文中供参考。

示例性的碱式盐包括铵盐，碱金属盐如钠、锂和钾盐，碱土金属盐如钙和镁盐，与有机碱(例如，有机胺)的盐如二环己基胺盐、叔丁基胺，以及与氨基酸如精氨酸、赖氨酸等的盐。碱性含氮基团可以用例如下列的试剂季铵化：低级烷基卤化物(例如甲基、乙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)、硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、二乙酯和二丁酯)、长链卤化物(例如癸基、月桂基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物)、芳烷基卤化物(例如，苄基溴和苯乙基溴)及其它。

所有此类酸式盐和碱式盐希望为本发明范围内的药学可接受的盐，并且所有酸式盐和碱式盐就本发明的目的而言均视为等同于相关化合物的游离形式。

氮杂环丁酮衍生物的药学可接受的酯包含下列群组：(1)通过羟基的酯化获得的羧酸酯，其中酯基的羧酸部分的非羰基部分选自直链或分支烷基(例如，乙酰基、正丙基、叔丁基或正丁基)、烷氧基烷基(例如，甲氧基甲基)、芳烷基(例如，苄基)、芳基氧基烷基(例如，苯氧基甲基)、芳基(例如，任选被例如卤素、C_1-4烷基或C_1-4烷氧基或氨基取代的苯基)；(2)磺酸酯如烷基-或芳烷基磺酰基(例如，甲烷磺酸基)；(3)氨基酸酯(例如，L-缬氨基或L-异亮氨基)；(4)膦酸酯及(5)单-、二-或三磷酸酯。该磷酸酯可通过例如C_1-20醇或其反应性衍生物，或通过2，3-二(C_6-24)酰基甘油进一步酯化。

氮杂环丁酮衍生物及其药学可接受的盐、溶剂合物、酯和前药可以其互变异构体形式(例如酰胺或亚氨基醚)存在。所有这些互变异构体形式在本文中均视为本发明的一部分。

氮杂环丁酮衍生物可含有不对称或手性中心，并且因此以不同的立体异构体形式存在。氮杂环丁酮衍生物的所有立体异构体形式以及其混合物(包含消旋混合物)将形成本发明的一部分。另外，本发明涵盖所有几何和位置异构体。例如，若氮杂环丁酮衍生物并入双键或稠合环，则顺式-和反式-形式以及其混合物均涵盖于本发明的范围中。

非对映异构体混合物可通过本领域技术人员公知的方法，例如通过色谱和/或分级结晶，基于其物理化学差异而分离成其个别的非对映异构体。对映异构体的分离可通过使对映异构体混合物与适宜光学活性化合物(例如手性助剂如手性醇或Mosher′s酰氯)反应转化成非对映异构体混合物，使非对映异构体分离并且使个别非对映异构体转化(例如水解)成对应的纯对映异构体。而且，有些氮杂环丁酮衍生物可为阻转异构体(例如取代的联芳基)且视为本发明的一部分。对映异构体也可使用手性HPLC柱分离。

本化合物(包含化合物的盐、溶剂合物、酯和前药，以及前药的盐、溶剂合物和酯)的所有立体异构体(例如，几何异构体、光学异构体等)，例如可能由于各取代基上的不对称碳而存在，包含对映异构体形式(即使在没有不对称碳下也可能存在)、旋转体形式、阻转异构体和非对映异构体形式均欲属本发明的范围，例如位置异构体(举例而言如4-吡啶基和3-吡啶基)也这样。(例如，若氮杂环丁酮衍生物并入双键或稠合环，则顺式-和反式-形式二者以及混合物均涵盖于本发明的范围中。而且，例如，化合物的所有酮-烯醇以及亚胺-烯胺形式均包含于本发明中)。

例如，氮杂环丁酮衍生物的个别立体异构体基本上不含其它异构体，或可为例如欲混合为消旋体或与所有其它立体异构体或其它选择的立体异构体混合。若本发明的氮杂环丁酮衍生物中存在有一个或多个手性中心，则各手性中心可独立地具有S或R构型，如IUPAC 1974Recommendations所定义。使用的术语″盐″、″溶剂合物″、″酯″、″前药″等将等同于用于氮杂环丁酮衍生物的对映异构体、立体异构体、旋转体、互变异构体、位置异构体、消旋体或前药的盐、溶剂合物、酯和前药。

本发明还涵盖同位素标记的氮杂环丁酮衍生物，其与本文所述相同但事实上一个或多个原子经原子量或质量数与自然界常见的原子量或质量数不同的原子代替。可并入本发明化合物中的同位素实例包括氢、碳、氮、氧、磷、氟及氯的同位素，分别例如²H、³H、¹³C、¹⁴C、¹⁵N、¹⁸O、¹⁷O、³¹P、³²P、³⁵S、¹⁸F和³⁶Cl。

某些同位素标记的氮杂环丁酮衍生物(例如用³H和¹⁴C标记的那些)可用于化合物和/或底物组织分布分析中。氚化(亦即³H和碳-14(亦即，¹⁴C)同位素因其易于制备和可检测性而为特别优选。另外，以较重同位素如氘(亦即²H)取代可获得来自较大代谢稳定性(例如，增加体内半衰期或降低剂量需求)的某些治疗上的优点并且因此在某些环境下为优选。同位素标记的氮杂环丁酮衍生物通常可依照下文的反应图和/或实施例中所揭示类似的程序，通过以适宜同位素标记的试剂取代非同位素标示的试剂而制备。

氮杂环丁酮衍生物及其盐、溶剂合物、酯和前药的多晶态形式均包含于本发明中。

本领域技术人员应了解对于某些氮杂环丁酮衍生物而言，其一种异构体会呈现出大于其它异构体的药理活性。

本文中使用下列简写，并且定义于下：BOC(叔丁氧基羰基)；BODIPY(二吡咯甲叉二氟化硼(Dipyrromethene boron difluoride))；BSA(牛血清蛋白)；DCE(二氯乙烷)；DMSO(d₆-二甲基亚砜)；二噁烷(1，4-二噁烷)；DMEM(达尔伯克氏改良伊格尔氏培养基(Dulbecco′s ModifiedEagle Medium))；EDTA(乙二胺四乙酸)；EGTA(乙二醇四乙酸)；Et(乙基)；EtOAc(乙酸乙酯)；EtOH(乙醇)；醚(二乙醚)；FBS(胎牛血清)；HBSS(汉克氏(Hank′s)平衡的盐溶液)；HEK(人类胚胎肾细胞)；HEPES(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)；HOBt(N-羟基苯并三唑)；IPA(异丙醇)；LCMS(液相色谱质谱仪)；LDA(二异丙基酰胺锂)；LHMDS(六甲基二硅胺烷锂)；MeCN(乙腈)；MeOH(甲醇)；MEM(最小必须培养基)；MP-TsOH(微孔聚苯乙烯磺酸)；甲磺酰基(甲烷磺酰基)；SiO₂(硅胶)；TFA(三氟乙酸)；THF(四氢呋喃)；TMS(三甲基硅烷基)；甲苯磺酰基(对-甲苯磺酰基)；三氟甲磺酰基(三氟甲烷磺酰基)。

制备氮杂环丁酮衍生物的方法

下列反应图1-5中描述了用于制备式(IA)-(ID)的氮杂环丁酮衍生物的方法。

反应图1说明制备式(IA)-(ID)的氮杂环丁酮衍生物的方法，其中R¹和R²如上述式(IA)-(ID)化合物的定义，并且R³为：(a)对式(IA)的化合物而言为苯基；(b)对式(IB)的化合物而言为4-Cl-苯基；(c)对式(IC)的化合物而言为-3-吡啶基；并且对式(ID)的化合物而言为-2-吡啶基。

反应图1

在溶剂如甲苯或异丙醇中，式1的醛化合物可与式2的胺化合物反应，获得式3的亚胺化合物。接着在-78℃下以碱如LDA或LHMDS处理式4的化合物(其中X¹为卤素或烷氧基如OEt)，并且使所得烯醇化物(enolate)与式3的化合物反应，获得式5的螺环化合物。接着移除式5化合物的N-保护基(PG)，获得式6的哌啶化合物。接着使式6的化合物在适宜碱或偶合剂存在下与式7的化合物(其可为羧酸、烷基或芳基卤，或异氰酸酯)反应，获得以式8表示的本发明氮杂环丁酮衍生物。

反应图2说明制备式(IA)-(ID)的氮杂环丁酮衍生物的另一种方法，其中R₁和R₂如上述式(IA)-(ID)化合物的定义，并且R₃为：(a)对式(IA)的化合物而言为苯基；(b)对式(IB)的化合物而言为4-Cl-苯基；(c)对式(IC)的化合物而言为-3-吡啶基；并且对式(ID)的化合物而言为-2-吡啶基。

反应图2

使式1的醛化合物与六甲基二硅烷胺锂(lithiumhexamethyldisilazide)反应，获得式9的被TMS-保护的亚胺。接着在-78℃下以碱如LDA或LHMDS处理式10的化合物(其中X¹为卤素或烷氧基如OEt)，并且所得烯醇化物与式9的化合物反应，获得式11的螺环化合物。接着可使式11的化合物在碱如NaH存在下与式12的化合物(其中X³为良好离去基团，如Cl、Br、I、O-三氟甲烷磺酰基、O-甲苯磺酰基或O-甲烷磺酰基)反应，获得式5的中间体化合物，该化合物随后可使用反应图1中所述的方法转化成本发明的氮杂环丁酮衍生物(8)。

反应图3说明用于制备其中R²基团与其所连接的氮原子形成叔脲的式(IA)-(ID)氮杂环丁酮衍生物的通用方法。

反应图3

使式6的螺环中间体与式13的异氰酸酯反应，获得式14的氮杂环丁酮衍生物，其中R₂基团与其所连接的氮原子形成叔脲，R^a代表表5中所列的脲取代基，并且R₁和R₃如上述本文的定义。

制备式14的叔脲化合物的通用方法

向式6中间体化合物(0.025mmol)在DCE/MeOH(25∶1 v/v，1mL)中的溶液中添加0.5M的式13异氰酸酯化合物(0.075mmol)的DCE溶液。使反应混合物在室温下搅拌20小时，随后添加二氯乙烷(0.5mL)、聚苯乙烯异氰酸酯树脂(0.057g，0.087mmol)和聚苯乙烯三胺树脂(0.049g，0.207mmol)。使所得反应在室温下搅拌16小时。过滤反应产物，再以乙腈(0.5mL)洗涤树脂。减压蒸发有机溶剂，获得其中R²基团与其所连接的氮原子形成叔脲的式14氮杂环丁酮衍生物。

反应图4说明用于制备其中R²基团与其所连接的氮原子形成酰胺的式(IA)-(ID)氮杂环丁酮衍生物的通用方法。

反应图4

使式6的螺环中间体与式15的羧酸反应，获得式16的氮杂环丁酮衍生物，其中R²基团与其所连接的氮原子形成酰胺，R^b代表表5中所列的酰胺取代基，并且其中R¹和R³如本文上述的定义。

制备式16的酰胺化合物的通用方法

向聚苯乙烯EDC树脂(0.106g，0.146mmol)和式6化合物(0.025mmol)在MeCN/THF(3∶1 v/v，1mL)中的混合物中添加1M的式15羧酸(0.038mmol)的DMF溶液。向所得混合物中添加HOBT(0.5M，0.038mmol)在MeCN/THF(3∶1 v/v，0.20mL)中溶液。使反应混合物在室温下搅拌20小时，随后添加乙腈(0.5mL)、聚苯乙烯异氰酸酯树脂(0.049g，0.075mmol)和聚苯乙烯三胺树脂(0.035g，0.148mmol)。使所得混合物在室温下搅拌64小时，再且过滤反应产物，并以乙腈(0.5mL)洗涤树脂。真空浓缩有机溶剂，获得其中R²基团与其所结合的氮原子形成酰胺的式16的氮杂环丁酮衍生物。

反应图5说明用于制备其中R₂基团通过-CH₂-键连接基团与氮杂环丁酮衍生物的哌啶氮原子结合的式(IA)-(ID)氮杂环丁酮衍生物的通用方法。

反应图5

使式6的螺环中间体与式17的醛反应，获得式18的氮杂环丁酮衍生物，其中R₂基团是通过-CH₂-键连接基团与氮杂环丁酮衍生物的哌啶氮原子结合，其中R^c代表表5中所列的适宜取代基，并且R₁和R₃如本文上述的定义。

制备式18的N-烷基化合物的通用方法

向式6化合物(0.025mmol)在DMF/THF(1∶1v/v，1mL)中的溶液中添加醛17(0.075mmol)在DCE中的溶液，接着添加三乙酰氧基硼氢化钠(3当量)。使反应混合物在室温下搅拌约20小时。向反应槽中添加MeOH(0.5mL)，并摇晃10分钟或直到气体停止释放。向反应槽中添加MP-TsOH树脂(约100mg)，并且使所得混合物摇晃约2小时。接着过滤去除溶剂，并依序以DCE(3x)，接着以甲醇(3x)洗涤树脂，并且所需产物通过与含2N氨/甲醇(1.5-2mL，1小时)搅拌而自树脂溶洗出，再过滤。减压蒸发有机溶剂，获得式18氮杂环丁酮衍生物，其中R₂基团通过-CH₂-键连接基团与氮杂环丁酮衍生物的哌啶氮原子结合。

氮杂环丁酮衍生物的用途

氮杂环丁酮衍生物可用于治疗或预防患者的病症。因此，本发明的一个实施方案提供一种治疗患者病症的方法，其包括给患者施用有效量的氮杂环丁酮衍生物。在另一个实施方案中，用于治疗患者病症的方法进一步包括施用另一种治疗剂。

在一个实施方案中，该另一种治疗剂选自可用于治疗疼痛的药物、抗糖尿病剂、T-型钙通道阻断剂、TRPV1的拮抗剂、TRPV1的激动剂、GRP119的激动剂、NPC1L1的拮抗剂、HMG-CoA还原酶的抑制剂、烟酸受体激动剂或胆固醇酯转移蛋白质的抑制剂或PPAR活化剂。

疼痛

氮杂环丁酮衍生物可用于治疗疼痛。目前慢性疼痛的疗法仅对有应答的患者部分缓解，并且对其他人为非耐受性的或无效。慢性疼痛可能因组织发炎、病毒感染(HIV、带状疱疹)直接组织受损或创伤所引起，或因化学疗法(例如紫杉醇、长春新碱)、中枢神经系统受损(例如，中风、MS)所引起或由糖尿病所引起。若慢性疼痛伴随体内或内脏组织受损，则病征通常包含其特征为自发性疼痛(通常描述为刺痛、灼热、类电击或抽搐)、痛觉过敏(对疼痛刺激的过度反应)及异常性疼痛(如疼痛的非-有害刺激的感觉)的严重感官失调。人类患者的普遍病征包含冷的痛觉过敏、有感异常性疼痛和较不普遍的热痛觉过敏。病征可能单独存在或并存，并且经常对于与不同疾病状态有关的病征会有可察觉的变化，并且通常介于罹患相同病症的患者之间。在肉体或内脏组织受损/疾病的情况下，这些异常感觉感受将与支配该受影响区域的末梢神经不当活动(病理上的过度刺激现象)有关。神经元过度刺激现象可能因改变离子通道功能或活性所产生。

慢性疼痛是一种真实疾病。相信至少部分为感觉疼痛过程中心突触修补的结果，这是一种称为″中枢敏化″的现象，其包括脊髓背角神经元的增加刺激性。维持中枢敏化相信需要在感觉传入神经中持续末梢神经活性(过度刺激现象)，并且该活性可能因异位病灶的结果而产生。在背根神经节(DRG)的感觉传入神经元中可发现大的T-型钙电流。T-型钙通道由于其作为神经元节律器发挥功能的已知能力，因此已暗示该T-型钙通道为建立该异常过度刺激现象的造成因素。药理学和反意寡核苷酸证据支持了慢性疼痛的DRG T-型钙通道临床前模型的关键作用。

T-型钙通道为电压-控制(voltage-gated)通道，其可能随着来自可激发细胞的静息电位的相对小的偏极化作用而开启。就T-型钙电流而言目前有三种不同基因，其对Ca_V3.1、Ca_V3.2和Ca_V3.3编码。该个别亚型具有独特的分布方式，并且在疼痛路径的末梢及中心部分表达。T-型钙通道发现于小和中等大小的DRG神经元(Ca_V3.2)中以及疼痛过程中涉及的CNS区域中，包含脊髓背角和脑丘(Talley et al.，J Neurosci，1999，19：1895-1911)。通过可使神经元作用电位快速阵发放电的低阈值钙波峰(low-threshold calcium spikes)而显示T-型钙电流在神经爆发性点燃中的作用(Suzuki and Rogwoski，Proc Natl Acad Sci USA，1989，86：7228-7232；White et al.，Proc Natl Acad Sci USA，1989，86：6802-6806)。

通过使用药理上的阻断剂或反意寡核苷酸介导的基因敲除而抑制体内T-型钙通道功能与正常和病理疼痛过程中的T-型通道极度有关联。米贝拉地尔(Mibefradil)和/或乙琥胺对T-型钙通道具有选择性，并且对于包括下列的数种临床前疼痛模型有效：急性热和机械性疼痛，I和II期福尔马林模型，大鼠脊髓神经结扎模型，辣椒素-引发的机械性痛觉过敏，大鼠尾巴抽打、紫杉醇-和长春新碱-引发的化学神经疗法(Barton et al.，Eur J Pharmacol，2005，521：79-8；Dogrul et al.，Pain，2003，105：159：168；Flatters and Bennett，Pain，2004，109：150-161；Todorovic et al.，Brain Res，2002，951：336-340)。

对乙琥胺应答的疼痛缓解可能是因为其中枢或末稍作用。然而对米贝拉地尔应答的效力可归因于两种原因的末稍作用。首先全身性施用米贝拉地尔并不会进入脑部。另外，蛛网膜内施用米贝拉地尔则无效(Dogrul et al.，Pain，2003，105：159：168)。支持来自由阻断末梢T-型通道的效力的进一步证据来自针对于反意寡核苷酸有关抗T-型通道CaV3.2的研究。hCaV3.2特异性寡核苷酸的蜘蛛网膜内注射使DRG神经元中的T-型钙电流降低，并且产生抗伤害感受性、抗痛觉过敏和抗异常性疼痛作用。这些研究中，寡核苷酸的摄取和反意介导的T-型流的基因敲除发生于接近注射部位的DRG神经元中，但末发生于脊髓中(Bourinet et al.，EMBOJ，200524：315-324)。

本发明的氮杂环丁酮衍生物为T-型钙通道阻断剂。因此，本化合物可用于治疗或预防可通过施用T-型钙通道阻断剂而治疗或预防的病症。此类病症包括(但不限于)治疗或预防神经性疼痛。

本发明的氮杂环丁酮衍生物为TRPV1拮抗剂，并且因此可用于治疗或预防可通过施用TRPV1拮抗剂治疗或预防的病症。

以TRPV1拮抗剂治疗的病症包括急性疼痛、慢性疼痛、神经性疼痛、手术后疼痛、风湿性关节炎后的疼痛、骨关节炎疼痛、背部疼痛、内脏疼痛、癌症疼痛、痛觉过敏、神经痛、牙痛、头痛、偏头痛、丛集性头痛、混合型血管和非血管征候群、紧张性头痛、神经疾病、腕管征候群、糖尿病神经性疾病、HIV-相关的神经性疾病、带状疱疹后神经痛、纤维肌痛、神经炎、坐骨神经痛、神经受伤、缺血、神经退化、中风、中风后疼痛、多发性硬化症、呼吸疾病、气喘、咳嗽、慢性阻塞性肺部疾病、支气管收缩、炎性障碍(如一般发炎、发炎性眼睛障碍、发炎性膀胱障碍、发炎性皮肤障碍、慢性发炎症状)、发炎性疼痛和相关的痛觉过敏以及异常性疼痛、神经性疼痛和相关的痛觉过敏以及异常性疼痛、食道炎、心灼热、贝特氏异常增生(Barrett′s metaplasia)、吞咽困难、胃食道逆流障碍、胃及十二指肠溃疡、功能性吞咽困难、刺激性肠躁症、发炎性肠疾病、结肠炎、克隆氏(Crohn′s)症、骨盆过敏、骨盆疼痛、月经痛、肾绞痛、小便失禁、膀胱炎、灼伤、搔痒、牛皮癣、搔痒症(pruritis)、呕吐、灼热痛、交感神经维持性疼痛、去传入神经征候群、上皮神经受损或功能不良、呼吸泌尿生殖器、胃肠或血管区的内脏能动性失调、受伤、白斑、腹泻、因坏死性药物造成的胃部损伤和毛发生长。

在一个实施方案中，本发明的氮杂环丁酮衍生物可用于治疗发炎或神经性疼痛。

可用于本发明的治疗发炎疼痛的方法中的额外药物包括皮质类固醇、非甾体抗炎药、COX-I和COX-II抑制剂、可用于治疗发炎性肠疾病的药物及可用于治疗风湿性关节炎用的药物。在一个实施方案中，治疗发炎性疼痛的额外药物为类固醇和非鸦片止痛剂。

神经性疼痛用于本文中是指疼痛感觉的异常状态，其中由于伴随神经、神经丛或神经束膜软组织受损或退化的功能异常而持续降低疼痛阈值等，此类功能异常是因受伤(例如，伤口、挫伤、神经抽出术受损、手足截肢)、压伤(腕管征候群、三叉神经痛、肿瘤活动)、感染、癌症、缺血等引起，或因代谢障碍如糖尿病等引起。神经性疼痛包括因中枢或末梢神经受损引起的疼痛。还包括因单神经性病变或多神经性病变引起的疼痛。在一些实施方案中，神经性疼痛是由糖尿病引起。

可使用氮杂环丁酮衍生物治疗或预防的神经性疼痛其它实例包括(但不限于)：异常性疼痛(因非正常原因疼痛的机械或热刺激引起的疼痛感)、痛觉过敏(对于正常疼痛的刺激过度反应)、感觉过敏(对于接触刺激过度反应)、糖尿病多神经性病变、受压性神经性病变、癌症疼痛、中枢神经疼痛、分娩疼痛、心肌梗塞疼痛、中风后疼痛、胰脏疼痛、绞痛、肌肉痛、手术后的疼痛、中风后疼痛、与帕金森病相关的疼痛、与重病监护相关的疼痛、与牙周病相关的疼痛(包含牙龈炎和牙周病)、月经痛、偏头痛、持续性头痛(例如，丛集性头痛或慢性紧张头痛)、持续性疼痛状态(例如，纤维肌肉痛或肌筋膜疼痛)、三叉神经痛、带状疱疹后神经痛、滑膜炎、与AIDS相关的疼痛、与多发性硬化相关的疼痛、与脊髓肿瘤和/或退化相关的疼痛、烧伤疼痛、牵涉痛(referred pain)、升高的疼痛记忆和涉及对抗疼痛的神经元机制。发炎性疼痛可能因软组织受损引起，包括肌肉组织(肌炎)和内脏(结肠炎和发炎性肠疾病、胰腺炎、膀胱炎、回肠炎、克隆氏病)、神经(神经炎、神经根病(radiculopathies)、神经根神经节炎(radioculogangionitis))、关节炎病症(例如类风湿疾病和相关的病症如僵直性脊椎炎)、关节疾病(包含骨关节炎)。在特定的实施方案中，本发明的氮杂环丁酮衍生物可用于治疗或预防异常性疼痛或痛觉过敏。

可用于本发明的治疗神经性疼痛的方法中的其它额外药物包括非鸦片(亦称为非甾体抗炎药)止痛剂如乙酰水杨酸、胆碱三水杨酸镁、对乙酰氨基酚、布洛芬、非诺洛芬、第服辛(diflusinal)和萘普生；鸦片止痛剂如吗啡、氢吗啡酮、美沙酮、左啡诺、芬太尼、羟考酮和羟吗啡酮；类固醇如泼尼松龙、氟替卡松、曲安西龙、倍氯米松、莫米松、必第酰胺(budisamide)、倍他米松、地塞米松、波尼松、氟尼缩松和可的松；COX-1抑制剂如阿司匹林和吡罗昔康；COX-II抑制剂如罗非考昔(rofecoxib)、塞来考昔(celecoxib)、伐地考昔(valdecoxib)和艾托考昔(etoricoxib)；可用于治疗发炎性肠疾病的药物如IL-10、类固醇和柳氮磺吡啶(azulfidine)；可用于治疗类风湿关节炎的药物如甲氨蝶呤、硫唑嘌呤、环磷酰胺、类固醇和霉酚酸酯(mycophenolate mofetil)；抗偏头痛药、抗吐剂、β-肾上腺能阻断剂；抗痉孪剂；抗忧郁剂；其它Ca²⁺-通道阻断剂；钠通道阻断剂；抗癌剂；治疗或预防UI的药物；治疗高血压的药物；治疗或预防心绞痛的药物；治疗心房纤维颤动的药物；治疗失眠的药物；治疗肾脏衰竭的药物；治疗阿耳兹海默症的药物；治疗或预防IBS的药物；治疗帕金森病及帕金森氏症候群的药物；治疗焦虑的药物；治疗癫痫的药物；治疗中风的药物；治疗精神病的药物；治疗亨廷顿舞蹈症的药物；治疗ALS的药物；治疗呕吐的药物；治疗运动障碍的药物；以及治疗忧郁的药物。

在一个实施方案中，治疗神经性病变疼痛的其它药物为鸦片类和非鸦片类止痛剂。在另一个实施方案中，治疗神经性病变疼痛的其它药物选自乙酰水杨酸、胆碱三水杨酸镁、对乙酰氨基酚、布洛芬、非诺洛芬、第服辛、萘普生、吗啡、氢吗啡酮、美沙酮、左啡诺、芬太尼、羟考酮和羟吗啡酮。

脂质代谢障碍

氮杂环丁酮衍生物可用于治疗脂质代谢障碍。本发明的氮杂环丁酮衍生物为NPC1L1拮抗剂。在一个实施方案中，氮杂环丁酮衍生物因此可用于治疗脂质代谢障碍，尤其是抑制胆固醇吸收。须了解当施用氮杂环丁酮衍生物以抑制患者的胆固醇吸收时，该抑制作用可为部分抑制或完全抑制。因此，在一个实施方案中，患者的胆固醇吸收为部分受抑制。在另一个实施方案中，患者的胆固醇吸收为完全受抑制。

治疗脂质代谢障碍的方法包含治疗高血脂症、高胆固醇血症、高三酸甘油酯血症、谷甾醇血症(sitosterolemia)和动脉硬化病征；抑制肠的胆固醇吸收；降低血浆或血清的LDL胆固醇浓度；降低血浆或血清中的胆固醇或胆固醇酯浓度；降低血浆或血清中的C-反应性蛋白质(CRP)浓度；降低血浆或血清中的三酸甘油酯浓度；降低血浆或血清中去脂脂蛋白B浓度；增加血浆或血清中的高密度脂质蛋白(HDL)胆固醇浓度；增加胆固醇的排泄分泌；治疗其中适用胆固醇吸收抑制剂的临床病症；降低心血管疾病相关状况的发生；降低血浆或组织中至少一种非类固醇甾醇或5α-固醇的浓度；治疗或预防血管发炎；预防、治疗或减轻阿耳兹海默症的病征；调节患者血流和/或脑中至少一种淀粉样β肽的产生或其量；调节患者血流和/或脑中ApoE异型4的量；预防和/或治疗肥胖症；以及预防或降低黄色瘤(xanthomas)发生。

治疗脂质代谢障碍的本方法中所用额外药物包括胆固醇吸收抑制剂(例如NPC1L1拮抗剂如依泽替米贝(ezetimibe))；胆固醇生物合成抑制剂；胆固醇酯转化蛋白质(CETP)抑制剂，如妥希崔吡(torcetrapib)；胆汁酸螯合剂(sequesterants)；烟酸或其衍生物；烟酸受体激动剂，如烟酸(niacin)或烟酸控释制剂(niaspan)；过氧化物酶体增生物-活化剂受体(PPAR)激动剂或活化剂；酰基辅酶A：胆固醇酰基转移酶(ACAT)抑制剂；回肠胆汁酸运载蛋白(″IBAT″)抑制剂(或回肠钠共同-相关胆脂酸运载蛋白(″ASBT″)抑制剂)；肥胖症控制医药；低血糖药物；抗氧化剂；酰基CoA：胆固醇O-酰基转移酶(″ACAT″)抑制剂；胆甾酰酯转移蛋白(″CETP″)抑制剂；普罗布考或其衍生物；低密度脂质蛋白(″LDL″)受体活化剂；Ω3脂肪酸(″3-PUFA″)；天然水溶性纤维；植物甾醇，植物固醇酯和/或植物固醇酯的脂肪酸酯；以及抗高血压药物。

可用于本方法的适宜胆固醇生物合成抑制剂的非限制性实例包括HMG-CoA还原酶的竞争性抑制剂、角鲨烯合成酶抑制剂、角鲨烯环氧酶抑制剂及其混合物。可用于本方法的适宜HMG-CoA还原酶抑制剂的非限制性实例包括丝他汀类药物(statins)诸如洛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀、阿托伐他汀、西立伐他汀、CI-981、resuvastatin、立伐他汀(rivastatin)及匹伐他汀(pitavastatin)、罗苏伐他汀(rosuvastatin)；HMG-CoA还原酶抑制剂例如L-659，699((E，E)-11-[3′R-(羟基-甲基)-4′-氧代-2′R-氧杂环丁基]-3，5，7R-三甲基-2，4-十一碳二烯酸)；角鲨烯合成抑制剂例如角鲨他汀1(squalestatin 1)；以及角鲨烯环氧酶抑制剂例如NB-598((E)-N-乙基-N-(6，6-二甲基-2-庚烯-4-炔基)-3-[(3，3′-联噻吩-5-基)甲氧基]苯-甲胺盐酸盐)及其它甾醇生物合成抑制剂如DMP-565。在一个实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂包括洛伐他汀、普伐他汀和辛伐他汀。在另一个实施方案中，HMG-CoA还原酶抑制剂为辛伐他汀。

胆汁酸螯合剂在肠内与胆汁酸结合，中断胆汁酸的肠肝循环并造成类固醇的排泄分泌增加。

可用于本方法的适宜胆汁酸螯合剂的非限制性实例包括考来烯胺(可结合胆汁酸的含有季铵阳离子的苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，如购自Bristol-Myers Squibb的

或

考来烯胺)、考来替泊(二亚乙基三胺与1-氯-2，3-环氧丙烷的共聚物，如购自Pharmacia的

片剂)、克雷斯灵(colesevelam)盐酸盐[如购自Sankyo的

Tablets(与表氯醇交联且以1-溴癸烷及(6-溴己基)-三甲基铵溴化物)烷化之聚(烯丙基胺盐酸盐)]、水溶性衍生物如3，3-ioene、N-(环烷基)烷基胺和聚胺葡糖、不溶性季铵化聚苯乙烯、皂苷(saponins)及其混合物。适宜的无机胆固醇螯合剂包括水杨酸铋加蒙脱石、氢氧化铝及碳酸钙抗酸药。

PPAR的活化剂或激动剂作用为过氧化物酶体增生物-活化受体的激动剂。已经确认三种PPAR亚型，并且它们称为过氧化物酶体增生物-活化受体α(PPARα)、过氧化物酶体增生物-活化受体γ(PPARγ)及过氧化物酶体增生物-活化受体δ(PPARδ)。应了解PPARδ在文献中亦称为PPARβ及称为NUC1，并且此类名称各代表相同的受体。本文所用的术语″PPAR活化剂″是指任何PPAR受体亚型的活化剂。

PPARα调节脂质代谢。PPARα是通过贝特类(fibrates)及多种中链及长链脂肪酸活化且其涉及刺激脂肪酸之β-氧化。PPARγ受体亚型涉及使脂肪细胞分化过程活化且不涉及刺激肝脏中过氧化物酶体增生。PPARδ已被确认可用于增加人类高密度脂质蛋白(HDL)量。参见例如WO97/28149。

PPARα活化剂化合物尤其可用于降低三酸甘油酯，适度降低LDL量及增加HDL量。PPARα活化剂的可用实例包括贝特类。

可用于本方法的适宜芳氧芳酸衍生物(″贝特类″)的非限制性实例包括氯贝丁酯；吉非贝齐；环丙贝特；苯扎贝特；克利贝特；比尼贝特；利非贝罗；非诺贝特及其混合物。此类化合物可以各种形式使用，包括(但不限于)酸形式、盐形式、消旋体、对映异构体、两性离子及互变异构体。

可用于本方法的其它PPARα活化剂的非限制性实例包括美国专利号6,028,109(并入本文供参考)中所述的适宜氟苯基化合物；WO00/75103(并入本文供参考)中公开的某些取代的苯基丙酸化合物；WO98/43081(并入本文供参考)中公开的PPARα活化剂化合物。

可用于本方法中的适宜PPARγ活化剂的其它实例包括格列酮类(glitazones)或噻唑烷二酮类，如曲格列酮、罗格列酮及吡格列酮。其它可用的噻唑烷二酮类包括WO 98/05331(并入本文供参考)中公开的环格列酮、恩格列酮、达格列酮及BRL 49653；WO 00/76488(并入本文供参考)中公开的PPARγ活化剂化合物；美国专利号5,994,554(并入本文供参考)中公开的PPARγ活化剂化合物；美国专利号5,859,051(并入本文供参考)中公开的乙酰基酚类；WO 99/20275(并入本文供参考)中公开的喹啉苯基化合物；WO 99/38845(并入本文供参考)中公开的芳基化合物；WO00/63161(并入本文供参考)中公开的1，4-二取代苯基化合物；WO01/00579(并入本文供参考)中公开的芳基化合物；WO 01/12612及WO01/12187(并入本文供参考)中公开的苯甲酸化合物；以及WO97/31907(并入本文供参考)中公开的取代的4-羟基-苯基烷醇酸化合物。

PPARδ化合物尤其可用于降低三酸甘油酯量或升高HDL量。可用于本方法的PPARδ活化剂的非限制性实例包括适宜的噻唑及噁唑衍生物，诸如WO 01/00603(并入本文供参考)中公开的C.A.S.登记号317318-32-4；WO 97/28149(并入本文供参考)中公开的氟、氯或硫代苯氧基苯基乙酸；美国专利号5,093,365(并入本文供参考)中公开的非-β-可氧化脂肪酸类似物；以及WO 99/04815(并入本文供参考)中公开的PPARδ化合物。

再者，具有使PPARα、PPARγ和PPARδ的各种组合活化的多功能性化合物也可用于本方法。非限制性实例包括美国专利号6,248,781、WO00/23416、WO 00/23415、WO 00/23425、WO 00/23445、WO 00/23451和WO 00/63153(所有均并入本文供参考)中公开的取代的芳基化合物，其被描述为有用的PPARα和/或PPARγ活化剂化合物。有用的PPARα和/或PPARγ活化剂化合物的其它非限制性实例包括WO 97/25042(并入本文供参考)中公开的活化剂化合物；WO 00/63190(并入本文供参考)中公开的活化剂化合物；WO 01/21181(并入本文供参考)中公开的活化剂化合物；WO 01/16120(并入本文供参考)中公开的联芳基-噁(噻)唑化合物；WO 00/63196及WO 00/63209(并入本文供参考)中公开的化合物；美国专利号6,008,237(并入本文供参考)中公开的取代的5-芳基-2，4-噻唑烷二酮化合物；WO 00/78312及WO 00/78313G(并入本文供参考)中公开的芳基噻唑烷二酮及芳基噁唑烷二酮化合物；WO 98/05331(并入本文供参考)中公开的GW2331或(2-(4-[二氟苯基]-1-庚基脲基)乙基)苯氧基)-2-甲基丁酸化合物；美国专利号6,166,049(并入本文供参考)中公开的芳基化合物；WO 01/17994(并入本文供参考)中公开的噁唑化合物；以及WO01/25225及WO 01/25226(并入本文供参考)中公开的二硫杂环戊烷化合物。

可用于本方法的其它有用PPAR活化剂化合物包括WO 01/14349、WO 01/14350及WO/01/04351(并入本文供参考)中公开的取代的苄基噻唑烷-2，4-二酮化合物；WO 00/50392(并入本文供参考)中公开的巯基羧酸化合物；WO 00/53563(并入本文供参考)中公开的壳二孢呋喃酮(ascofuranone)化合物；WO 99/46232(并入本文供参考)中公开的羧酸化合物；WO 99/12534(并入本文供参考)中公开的化合物；WO 99/15520(并入本文供参考)中公开的苯化合物；WO 01/21578(并入本文供参考)中公开的邻-甲氧基苯甲酰胺化合物；以及WO 01/40192(并入本文供参考)中公开的PPAR活化剂化合物。

本方法中所用的普罗布考衍生物包括美国专利号6,121,319及6,147,250中公开的AGI-1067及其它，其可作为胆固醇降低剂以降低LDL及HDL量。

IBAT抑制剂可抑制胆汁酸输送，以降低LDL胆固醇量。可用于本方法的适宜IBAT抑制剂的非限制性实例包括苯并噻庚因诸如包括PCT专利申请号WO 00/38727(并入本文供参考)中公开的2，3，4，5-四氢-1-苯并噻庚因1，1-二氧化物结构的治疗化合物。

本文所用的″烟酸受体激动剂″意指包括可作为烟酸受体的激动剂用的任何化合物。可用于本方法的烟酸受体激动剂包括具有吡啶-3-甲酸酯结构或吡嗪-2-甲酸酯结构的那些，使用时可包括酸形式、盐、酯、两性离子及互变异构体。可用于本方法的烟酸受体激动剂实例包括烟酸戊四醇酯(niceritrol)、尼可呋喃糖(nicofuranose)及阿昔莫司(acipimox)。烟酸及NAR激动剂可抑制VLDL及其代谢物LDL在肝脏中的生成，并且增加HDL和apo A-1水平。适宜烟酸产品实例为购自Kos Pharmaceuticals，Inc.(Cranbury，NJ)的

(烟酸缓释片)。

治疗脂质代谢障碍的本方法可进一步包括施用一种或多种作为脂质降低剂的ACAT抑制剂。ACAT抑制剂可降低LDL及VLDL水平。ACAT是一种负责使过量细胞内胆固醇酯化的酶，并且可降低VLDL(为胆固醇酯化产物)合成以及含apo B-100的脂质蛋白质过度产生。

可用于本方法的有用ACAT抑制剂的非限制性实例包括阿伐麦布(avasimibe)、HL-004、来西贝特(lecimibide)及CL-277082(N-(2，4-二氟苯基)-N-[[4-(2，2-二甲基丙基)苯基]-甲基]-N-庚基脲)。参见P.Chang et al.，“Current，New and Future Treatments in Dyslipidaemia andAtherosclerosis”，Drugs 2000 Jul；60(1)；55-93，该文献并入本文供参考。

治疗脂质代谢障碍的本方法可进一步包括与一种或多种氮杂环丁酮衍生物共同施用或组合施用一种或多种胆甾酰酯转移蛋白(″CEPT″)抑制剂。CEPT负责使带有HDL的胆甾酰酯以及VLDL中的三酸甘油酯交换或转移。

可用于本方法的适宜CEPT抑制剂的非限制性实例公开于PCT专利申请号WO 00/38721及美国专利号6,147,090，其并入本文供参考。胰腺胆甾酰酯水解酶(pCEH)抑制剂如WAY-121898也可与上述芳氧芳酸衍生物和甾醇吸收抑制剂共同施用或组合施用。

在另一个实施方案中，治疗脂质代谢障碍的本方法可进一步包括施用一种或多种作为脂质降低剂的低密度脂质蛋白(LDL)受体活化剂。可用于本方法中的适宜LDL-受体活化剂的非限制性实例包括HOE-402，一种直接刺激LDL受体活性的咪唑啶基-嘧啶衍生物。参见M.Huettinger etal.，”Hypolipidemic activity of HOE-402 is Mediated by Stimulation of theLDL Receptor Pathway″，Arterioscler.Thromb.1993；13：1005-12。

在一个实施方案中，治疗脂质代谢障碍的本方法可进一步包括施用含有Ω3脂肪酸(3-PUFA)的鱼油，其可作为脂质降低剂降低VLDL和三酸甘油酯水平。

在另一个实施方案中，治疗脂质代谢障碍的本方法可进一步包括施用可降低胆固醇量的天然水溶性纤维，如欧车前(psyllium)、琼胶、燕麦和果胶。

在又另一个实施方案中，治疗脂质代谢障碍的本方法可进一步包括施用植物甾醇、植物固醇酯和/或植物固醇酯的脂肪酸酯，如

人造奶油中所用的谷甾醇酯，其可降低胆固醇水平。

脱髓鞘作用

此氮杂环丁酮衍生物可用于治疗脱髓鞘作用。中枢神经系统(脑部和脊髓)中的脱髓鞘作用发生在许多原发性脱髓鞘疾病中，如多发性硬化、急性播散性脑脊髓炎、肾上腺脑白质退化症、肾上腺髓鞘神经病变、赖柏氏(Leber′s)遗传性视神经萎缩以及HTLV-有关和脊髓病变。

糖尿病

氮杂环丁酮衍生物可用于治疗糖尿病。糖尿病(通称为糖尿病症)是指由多种肇病因素所衍生的，并且特征为高水平的血浆葡萄糖(称为高血糖症)的疾病过程。动脉粥状硬化的过早发展以及心血管和末梢血管疾病的比率增加为糖尿病患者的特征。糖尿病有两种主要形式：I型糖尿病(亦称为胰岛素相关糖尿病或IDDM)及II型糖尿病(亦称为非胰岛素相关糖尿病或NIDDM)。在一个实施方案中，此氮杂环丁酮衍生物可用于治疗II型糖尿病。

I型糖尿病为绝对性胰岛素缺乏(调节葡萄糖利用的荷尔蒙)的结果。此胰岛素缺乏的特征一般为胰腺中的β细胞破坏，其通常会造成绝对性胰岛素缺乏。I型糖尿病有二种形式：免疫介导的糖尿病，其是由胰腺β细胞的细胞介导的自我免疫破坏所造成；以及特发性糖尿病，其是指病因未明的疾病形式。

II型糖尿病的特征为因相对(而非绝对)胰岛素缺乏所造成的胰岛素抗性。II型糖尿病范围可以是因相对胰岛素缺乏造成的主要胰岛素抗性至因某些胰岛素抗性造成的主要胰岛素缺乏的范围。胰岛素抗性为胰岛素在广范围的浓度下发挥其生物作用的能力下降。胰岛素抗性的个体中，身体会分泌异常高的胰岛素量以补充该缺乏。当存在不充分胰岛素量以补偿胰岛素抗性并且充分控制葡萄糖时，会发展为葡萄糖耐受性受损的状态。胰岛素分泌可能在一段时间内进一步下降。

II型糖尿病可能是由于在主要胰岛素敏感组织如肌肉、肝脏及脂肪组织中胰岛素对葡萄糖和脂质代谢的刺激调节作用的抗性。对胰岛素反应的该抗性造成肌肉中葡萄糖摄取、氧化及储存的胰岛素活化不足，以及脂肪组织中脂质分解和肝脏中葡萄糖产生及分泌的不当胰岛素抑制。II型糖尿病中，在肥胖和某些非-肥胖患者中的游离脂肪酸量通常会升高，并且脂质氧化增加。

本发明的氮杂环丁酮衍生物为GPR119激动剂。在一个实施方案中，氮杂环丁酮衍生物因此可用于治疗糖尿病。尤其是，II型糖尿病可通过单独或与一种或多种额外治疗糖尿病的药物组合施用氮杂环丁酮衍生物来治疗。

可用于治疗II型糖尿病的本方法中的其它药物实例包括磺酰脲类、胰岛素敏化剂(如PPAR激动剂、DPPIV抑制剂、PTP-1B抑制剂以及葡萄糖激酶活化剂)、α-糖苷酶抑制剂、胰岛素分泌促进剂、使肝脏葡萄糖产量降低的化合物和胰岛素。

磺酰脲类药物的非限制性实例包括格列吡嗪、甲苯磺丁脲、格列本脲、格列美脲、氯磺丙脲、醋酸己脲、格列胺脲、格列齐特、格列本脲(glibenclamide)及妥拉磺脲。胰岛素敏化剂包括上文详述的PPAR-γ激动剂，优选为曲格列酮、罗格列酮、吡格列酮及恩格列酮(englitazone)；双胍类如二甲双胍及苯乙双胍；DPPIV抑制剂如希塔利伯汀(sitagliptin)、沙加利伯汀(saxagliptin)、第纳利伯汀(denagliptin)及维达利伯汀(vildagliptin)；PTP-1B抑制剂；以及葡萄糖激酶活化剂。可用于治疗II型糖尿病的α-糖苷酶抑制剂包括米格列醇、阿卡波糖及伏格列波糖。肝脏葡萄糖产量降低药物包括格华止(Glucophage)及格华止XR(Glucophage XR)。胰岛素分泌促进剂包括磺酰脲类及非磺酰脲类药物如GLP-1、exendin、GIP、分泌素、格列吡嗪、氯磺丙脲、那格列奈、氯茴苯酸(meglitinide)、格列本脲(glibenclamide)、瑞格列奈及格列美脲。胰岛素包含胰岛素的所有制剂，包括长效型和短效型胰岛素。

本发明的氮杂环丁酮衍生物可与治疗肥胖的抗肥胖剂组合施用。可用于本方法的抗肥胖剂实例包括CB1拮抗剂或逆激动剂如利莫那班(rimonabant)、神经肽Y拮抗剂、MCR4激动剂、MCH受体拮抗剂、组织胺H3受体拮抗剂或逆激动剂、脂瘦素(leptin)、食欲抑制剂如西布曲明及脂酶抑制剂如赛尼可。

就糖尿病的治疗而言，本发明化合物也可与抗高血压药物组合施用，例如β-阻断剂及钙通道阻断剂(例如，地尔硫卓、维拉帕米、硝苯地平、氨氯地平(amlopidine)及mybefradil)、ACE抑制剂(例如，卡托普利、赖诺普利、依那普利、螺普利、ceranopril、zefenopril、福辛普利、cilazopril及喹那普利)、AT-1受体拮抗剂(例如，氯沙坦、厄贝沙坦及缬沙坦)、血管紧张肽原酶抑制剂及内皮素受体拮抗剂(例如，sitaxsentan)。

某些氯茴苯酸(meglitinide)药物通过刺激胰岛素自胰腺释放而降低血液葡萄糖水平。此作用与使胰脏胰岛中的β细胞功能化有关。胰岛素释放是葡萄糖依赖性的，并且在低葡萄糖浓度下会减低。氯茴苯酸药物通过在可表征位置结合而关闭β细胞膜中的ATP-相关的钾通道。此钾通道的封闭使β细胞去偏极化，其导致钙通道开启。所产生的钙流增加引发胰岛素分泌。可用于本方法的适宜氯茴苯酸药物包括瑞格列奈及那格列奈。

已经存在的使身体对胰岛素敏化的适宜抗糖尿病药物的非限制性实例包括某些双胍类及某些格列酮类(glitazones)或噻唑烷二酮。某些适宜的双胍类通过降低肝脏葡萄糖产生、降低小肠的葡萄糖吸收并改善胰岛素敏感性(增加末梢葡萄糖摄取和利用)而使血糖下降。适宜双胍类的非限制性实例为二甲双胍。二甲双胍的非限制性实例包括二甲双胍盐酸盐(N，N-二甲基亚酰氨基二甲酰亚胺酸二酰胺盐酸盐，如购自Bristol-Myers Squibb的

片剂)；含格列本脲的二甲双胍盐酸盐，如购自Bristol-Myers Squibb的GLUCOVANCE^TM片剂)；丁福明。

减缓或阻断淀粉及某些糖类分解并且适用于本发明组合物的抗糖尿病药物的非限制性实例包括α-糖苷酶抑制剂以及增加胰岛素产生的某些肽。α-糖苷酶抑制剂通过延缓摄入的碳水化合物消化而协助身体降低血糖，因此使饭后血糖浓度上升较少。适宜的α-糖苷酶抑制剂的非限制性实例包括阿卡波糖、米格列醇、卡格列波糖；如WO 01/47528(并入本文供参考)中所公开的某些多元胺；伏格列波糖。增加胰岛素产生的适宜肽的非限制性实例包括amlintide(得自Amylin的CAS登记号122384-88-7；普兰林肽(pramlintide)、exendin、如WO 00/07617(并入本文供参考)中所述的具有糖原样肽-1(GLP-1)激动活性的某些化合物。

其它抗糖尿病药物的非限制性实例包括可口服施用的胰岛素。适宜的可口服施用的胰岛素或含胰岛素的组合物的非限制性实例包括得自AutoImmune的AL-401，以及如美国专利号4,579,730；4,849,405；4,963,526；5,642,868；5,763,396；5,824,638；5,843,866；6,153,632；6,191,105；及国际专利公开号WO 85/05029(各文献并入本文供参考)公开的某些组合物。

血管病症

氮杂环丁酮衍生物可用于治疗血管病症。血管病症包括动脉粥状硬化、高血脂症(包含但不限于谷甾醇血症)、高血压、血管发炎、心绞痛、心律不齐及中风，以及个体如停经后女性及需要荷尔蒙替代治疗的女性中的血管病症。称为″血液改质剂″的药物可与用于治疗血管病症的氮杂环丁酮衍生物组合。本文所用的″血液改质剂″代表可改变每给定体积血液的血小板数目、抑制血小板功能的此类药物，包括(但不限于)血小板粘附剂、凝集性或因子释放，或降低具有异常高某些血液性恶性疾病患者的血小板数至约正常水平的水平，该正常水平可反向地抗血块形成并降低血液粘度。本发明可用的血液改质剂包括(但不限于)抗凝结剂、抗血栓剂、纤维蛋白原受体拮抗剂、血小板抑制剂、血小板凝集抑制剂、与脂质蛋白有关的凝集抑制剂、血液流变剂、因子VIIa抑制剂、因子Xa抑制剂、及其组合，并且意指不包括HMG CoA还原酶抑制剂。就治疗个体如停经后的女性及需要荷尔蒙替换治疗的女性的血管病症而言，氮杂环丁酮衍生物可与荷尔蒙替换疗法组合施用，包括施用雄激素、雌激素、孕激素或其药学可接受的盐及衍生物。

″抗凝集剂″为通过反向地影响血块形成中必须因素的产生、沉积、断裂和/或活化而抑制凝集路径的药物。可用的抗凝集剂包括(但不限于)阿加曲班；比伐卢定(bivalirudin)；达肝素钠(dalteparin sodium)(肝素)；地西卢定(desirudin)；双香豆素(dicumarol)；阿朴酸钠(lyapolate sodium)；萘莫司他甲磺酸盐(nafamostate mesylate)；二甲烷磺酸盐；亭扎肝素钠(tinzaparin sodium)；华法林钠。

″抗血栓″药物是避免形成血栓的药物。血栓是一种血液因子的凝集物，主要为血小板及纤维蛋白与细胞元素的捕获，经常引起其形成点的血管阻塞。抗血栓药物的适宜实例包括(但不限于)阿那格雷盐酸盐(anagrelide hydrochloride)；上述的亭扎肝素钠(tinzaparin sodium)；西洛他唑(cilostazol)；达肝素钠(dalteparin sodium)(如上述)；达那肝素钠(danaparoid sodium)；阿昔单抗(Abciximab)为嵌合人类-鼠类单克隆抗体7E3的Fab片段，结合至人类血小板的葡糖蛋白(GP)IIb/IIIa((α)_IIb(β)₃)受体，并抑制血小板凝集。阿昔单抗还与血小板及血管壁内皮及平滑肌细胞中发现的玻璃粘连蛋白((α)_v(β)₃)受体结合；如上述的比伐卢定(bivalirudin)；如上述的西洛他唑(cilostazol)；依非加群硫酸盐(efegatransulfate)；达唑氧苯盐酸盐(dazoxiben hydrochloride)；达那肝素钠(danaparoid sodium)(一种低分子量类肝素(heparinoid)，为硫酸乙酰肝素(约84％)、硫酸皮肤素(约12％)及硫酸软骨素(约4％)的混合物，其是由猪之小肠粘膜液衍生)；洛曲非班盐酸盐(lotrafiban hydrochloride)；伊非曲班钠(ifetroban sodium)；拉米非班；氟瑞托芬；依诺肝素钠(enoxaparinsodium)；奈沙加群(napsagatran)、罗昔非班乙酸盐(roxifiban acetate)；西拉非班(sibrafiban)；阿左莫单抗(zolimomab aritox)；三苯格雷(trifenagrel)。

″纤维蛋白原受体拮抗剂″为抑制血小板凝集的一般途径的药物。适宜的纤维蛋白原受体拮抗剂包括(但不限于)上述的托罗昔非班乙酸盐(toroxifiban acetate)；上述的洛曲非班盐酸盐(lotrafiban hydrochloride)；上述的西拉非班(sibrafiban)；单克隆抗体7E3(嵌合人类-鼠类单克隆抗体7E3的Fab片段，结合至人类血小板的葡糖蛋白(GP)IIb/IIIa((α)IIb(β)3)受体，并抑制血小板凝集)；奥波非班(orbofiban)；珍米洛非班(xemilofiban)；夫雷非班(fradafiban)；替罗非班(tirofiban)。

″血小板抑制剂″为损害熟成的血小板执行其正常生理角色(亦即其正常功能)的能力的药物。血小板一般涉及多种生理过程诸如例如粘附至细胞及非细胞体、例如对形成血块目的的凝集，以及释放因子如成长因子(例如血小板衍生的成长因子(PDGF))和血小板粒状成份。适宜的血小板抑制剂包括(但不限于)硫酸氢氯吡格雷(clopidogrel bisulfate)、吲哚美辛；mefenamate；噻氯吡啶盐酸盐(Ticlopidine hydrochloride)；依前列醇钠(epoprostenol sodium)；阿司匹林；苯甲酸；依前列醇(epoprostenol)；萘普生；buprofen；屈噁昔康(droxicam)；双氯芬酸；磺吡酮；吡罗昔康；双嘧达莫；来昔帕泛(lexipafant)；阿帕泛吗啉(apafant Morpholine)。

本文所用的″血小板凝集抑制剂″代表降低或遏止血小板与本身或与其它细胞及非细胞成份物理性缔合的能力，因而阻止血小板形成血栓的能力的那些化合物。适宜的血小板凝集抑制剂包括(但不限于)贝前列素；阿卡地新；贝拉普罗钠(beraprost sodium)；西前列烯钙(ciprostenecalcium)；伊他格雷；利法利嗪；氧格雷酯。

本文所用的术语″血液流变剂″描述通过降低血液粘度而改善其流动性的那些化合物。本发明适宜的血液流变剂为己酮可可碱。

己酮可可碱及其代谢物(可用于本发明中)通过降低血液粘度而改善其流动性。对于具有慢性末梢动脉疾病的患者，这会增加血流以影响微循环，并且提高组织的充氧作用。己酮可可碱的精确作用模式及导致临床改善的事件结果仍须被定义。施用己酮可可碱已显示可产生剂量相关的血液流变作用、降低血液粘度和改善红血球弹性。血液流变重要性的白血球性质已在动物及体外人类研究中获得改良。己酮可可碱已显示会增加白血球变形性，并抑制嗜中性白血球粘附和活化作用。组织含氧量已显示可通过使患有末梢动脉疾病的患者治疗给予己酮可可碱而获得明显改善。

脂质蛋白质相关的凝集抑制剂(LACI)是一种可用作本发明的血液改质剂的分子量为38,000Kd的血清糖蛋白。其亦称为组织因子抑制剂，因为它是凝血激素(组织因子)引发的凝集作用的天然抑制剂(美国专利号5,110,730及5,106,833描述的组织因子，并且并入本文供参考)。LACI是一种蛋白酶抑制剂，并且具有3个Kunitz区域，其中二个已知分别与因子VII及Xa相互作用，但第三个区域的功能则未知。LACI的许多结构特性可被推知，因为其与其它已被充分研究的蛋白酶具有同原性。LACI并非酶，因此可能以化学剂量的方式抑制蛋白酶标靶，即，LACI的一个区域可抑制一种蛋白酶分子(见美国专利号6,063,74，并入本文供参考)。

本文所用的术语″因子VIIa抑制剂″是抑制活化因子VIIa使之不作用于形成纤维蛋白块的那些药物。适宜的因子VIIa抑制剂包括(但不限于)美国专利号6,180,625中所述的4H-3，1-苯并噁嗪-4-酮类、4H-3，1-苯并噁嗪-4-硫酮类、喹唑啉-4-硫酮类、苯并噻嗪-4-酮类；美国专利号5,639,739中所述的咪唑基-硼酸-衍生的肽类似物；美国专利号6,180,625中所述的TFPI-衍生的肽。

其它适宜的因子VIIa抑制剂包括(但不限于)萘-2-磺酸{1-[3-(氨基亚氨基甲基)-苄基]-2-氧代-吡咯烷-3-(S)-基}酰胺三氟乙酸盐、二苯并呋喃-2-磺酸{1-[3-(氨基甲基)-苄基]-5-氧代-吡咯烷-3-基}-酰胺、甲苯-4-磺酸{1-[3-(氨基亚氨基甲基)-苄基]-2-氧代-吡咯烷-3-(S)-基}-酰胺三氟乙酸盐、3，4-二氢-1H-异喹啉-2-磺酸{1-[3-(氨基亚氨基甲基)-苄基]-2-氧代-吡咯啉-3-(S)-基}-酰胺三氟乙酸盐或其组合。

本文所用的术语″因子Xa抑制剂″是抑制活化因子X使之不作用于形成纤维蛋白块的那些药物。本发明中所用作为因子Xa抑制剂的适宜药物包括(但不限于)如美国专利号6,191,159中所述的二取代的吡唑啉类、二取代的三唑啉类；脂质蛋白相关的凝集抑制剂(LACI)(如上述)；后述的低分子量肝素；后述的类肝素；如美国专利号6,207,697中所述的苯并咪唑啉类、苯并噁唑啉酮类、苯并哌嗪酮类、茚满酮类；如J.Med.Chem.37：1200-1207(1994)中所述的二碱式(脒基芳基)丙酸衍生物；如美国专利号5,612,378中所述的双-芳基磺酰基氨基苄酰胺衍生物，如美国专利号6,057,342中所述的脒基苯基-吡咯啶类、脒基苯基-吡咯啉类、脒基苯基-异噁唑烷；如美国专利号6,043,257中所述的脒基吲哚类、脒基唑类；后述的肽性因子Xa抑制剂；如美国专利号6,080,767中所述的取代的n-[(氨基亚氨基甲基)苯基]丙基酰胺类、取代的n-[(氨基甲基)苯基]丙基酰胺类；或其组合。

肽性因子Xa抑制剂诸如吸血虫-衍生的119-氨基酸蛋白质抗斯达汀(antistasin)及软蜱衍生的蛋白质TAP(蜱抗凝集剂肽)加速血块溶解，并且当作为血栓溶解的助剂提供时，可避免再凝聚(Mellott et al.，CirculationResearch 70：1152-1160(1992)；Sitko et al.，Circulation 85：805-815(1992))。1995年1月31日颁发的美国专利号5,385,885公开了蜱抗凝集剂肽及抗斯达汀两者的平滑肌细胞增生抑制活性。肽欧克汀(ecotin)是另一种选择性、可逆、紧密结合的因子Xa的抑制剂，其显示出蛋白质抗凝集活性(Seymour et al.，Biochemistry 33：3949-3959(1994)；PCT专利公开号WO 94/20535，09/14/1994)。硬蜱科(Ixodidae)、阿加新(argasin)及钩虫素(ancylostomatin)是从吸血动物分离的其它代表性肽性因子Xa抑制剂(Markwardt，Thrombosis and Hemostasis 72：477-479(1994)。

本发明中可用的肽性因子Xa抑制剂的那些非限制性实例以其CAS登记号列于后文。这些包括蛋白酶抑制剂；抗斯达汀；CAS登记号110119-38-5；蜱抗凝集剂肽；(蛋白酶抑制剂，TAP)CAS登记号129737-17-3；欧克汀；(蛋白酶抑制剂，欧克汀)CAS登记号87928-05；阿加新(argasin)；CAS登记号53092-89-0；钩虫素；CAS登记号11011-09-9；硬蜱科(Ixodidae)(如Markwardt中所述，1994)。

本文所用的术语″低分子量肝素″是指由相比于标准肝素而言可降低出血发生的肝素所衍生的药物。肝素是其MW范围在2000-10000间的葡萄胺聚糖。其可由猪小肠粘膜液产生，并且除了那屈肝素(nadroparan)以外，均为钠盐。本发明的适宜类肝素包括(但不限于)依诺肝素(enoxaparin)、nardroparin、dalteparin、certroparin、parnaparin、瑞维肝素(reviparin)、tinzaparin及其组合。

本文所用的术语″类肝素″是指与标准肝素相比时，可降低出血发生的肝素改质形式。本发明适宜的类肝素包括(但不限于)达那肝素(Danaparoid)CAS登记号308068-55-5(例如，Orgaran Injection Organon)。

可用的雌激素和雌激素组合的实例包括：equilenin

(a)包括下列合成雌激素物质的混合物：雌酮硫酸钠、马烯雌酮硫酸钠、17α-二氢马烯雌酮硫酸钠、17α-雌二醇硫酸钠、17β-二氢马烯雌酮硫酸钠、17α-二氢马萘雌酮硫酸钠、17β-二氢马萘雌酮硫酸钠、马萘雌酮硫酸钠和17β-雌二醇硫酸钠。

(b)乙炔雌二醇；

(c)酯化雌激素组合如雌酮硫酸钠和马烯雌酮硫酸钠的组合；

(d)雌酮硫酸酯哌嗪(estropipate)；以及

(e)共轭的雌激素(17α-二氢马烯雌酮、17α-雌二醇和17β-二氢马烯雌酮)；购自Wyeth-Ayerst Pharmaceuticals，Philadelphia，PA，商标为PREMARIN。

孕激素和雌激素也可以各种剂量施用，通常约0.05至约2.0mg孕激素以及约0.001mg至约2mg的雌激素。在一个实施方案中，该剂量为约0.1mg至约1mg的孕激素以及约0.01mg至约0.5mg的雌激素。在剂量上和服用方案上可改变的孕激素和雌激素组合的实例包括：

(a)雌二醇与炔诺酮(norethindrone)的组合，购自Pharmacia&Upjohn，Peapack，NJ，商标为ACTIVELLA；

(b)左炔诺孕酮(levonorgestrel)和乙炔雌二醛的组合；购自例如Wyeth-Ayerst，商标为ALESSE；

(c)二乙酸乙炔诺二醇(ethynodiol diacetate)和乙炔雌二醇的组合；购自G.D.Searle&Co.，Chicago，IL，商标为DEMULEN；

(d)脱氧孕烯(desogestrel)和乙炔雌二醇的组合；购自Organon，商标为DESOGEN及MIRCETTE；

(e)炔诺酮(norethindrone)和乙炔雌二醇的组合；购自Parke-Davis，Morris Plains，NJ，商标为ESTROSTEP及Femhrt；

(f)甲炔诺酮(norgestrel)和乙炔雌二醇的组合；购自Wyeth-Ayerst，商标为OVRAL和LO/OVRAL；

(g)炔诺酮、乙炔雌二醇和美雌醇(mestranol)的组合；购自Watson，商标为BREVICON和NORINYL；

(h)17β-雌二醇和微米化炔诺酮的组合，购自Ortho-McNeil，商标为ORTHO-PREFEST；

(i)诺孕酯(norgestimate)和乙炔雌二醇的组合；购自Ortho-McNeil，商标为ORTHO CYCLEN和ORTHO TRI-CYCLEN；以及

(j)共轭雌激素(雌酮硫酸钠和马烯雌酮硫酸钠)和醋酸甲羟孕酮的组合，购自Wyeth-Ayerst，商标为PREMPHASE和PREMPRO。

大体而言，若施用微米化黄体酮，则孕激素的剂量可在约0.05mg至约10mg或至多约200mg间改变。孕激素的实例包括炔诺酮；甲炔诺酮；微米化黄体酮和醋酸甲羟孕酮。

适宜的雌激素受体调节剂或抗雌激素的非限制性实例包括雷洛昔芬盐酸盐、他莫昔芬柠檬酸盐及托瑞米芬柠檬酸盐。

非酒精性脂肪肝疾病

氮杂环丁酮衍生物可用于治疗非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)。NAFLD描述的是从单纯脂肪肝(脂肪变性)到进行性纤维化和肝脏衰竭的非酒精性脂肪肝炎(NASH)的广谱肝脏疾病。具有或不具有高血脂迹象的高血糖症通常会伴随有NAFLD。该疾病在无法消耗明显量酒精的患者中呈现酒精引发的肝脏疾病的组织特性。NAFLD的所有阶段通常在肝脏细胞中累积脂肪。Farrell和Larter在Hepatology，243：S99-S112(2006)中以NAFLD谱中的肝脏脂肪变性和肝硬化间的″关键性事物(lynchpin)″描述NASH。还参见Palekar et al.，Liver Int.，26(2)：151-6(2006)。在NASH中，脂肪累积伴随不同程度的发炎和纤维化。伴随NAFLD最常发生的症状为肥胖症、II型糖尿病和代谢并发症。

美国专利公开号2004/29805描述了通过施用使受体拮抗葡萄糖依赖性促胰岛素多肽的药物而预防或治疗NAFLD。NASH的治疗包括饮食和运动和/或施用普罗布考、氯非贝(clofribrate)、吉非贝齐、甜菜碱、维生素E和/或C、二甲双胍、toglitaxone、罗格列酮(rosiglitazone)或plogitazone及维生素E。M.Charlton，Clinical Gastroenterology and Hepatology，2(12)，1048-56(2004)；P.Portincaso et al.Clinical Biochemistry，38，203-17(2005)。美国专利公开号2004/105870A1描述NASH的治疗，包括施用包含食用卵磷脂补充品、维生素B或抗氧化剂的制剂。美国专利公开号2005/0032823A1和2004/0102466A1描述嘧啶衍生物，其为选择性COX-2抑制剂，如可用于治疗NASH。治疗脂肪肝疾病的其它化合物描述于美国专利公开号2005/0004115A1。通过对哺乳类施用有效量的包括至少一种氮杂环丁酮衍生物或HMG-CoA还原酶抑制剂和/或至少一种H₃受体拮抗剂/逆激动剂的治疗组合而预防或减轻该哺乳类的肝硬化及肝细胞癌的发展。

2005年12月20日申请的美国临时申请号60/752710和2006年3月29日申请的美国临时申请号60/77048揭示单独使用胆固醇吸收剂或与治疗NAFLD或NASH的H₃受体拮抗剂/逆激动剂组合使用。

治疗NAFLD的本方法包含组合疗法，包括施用氮杂环丁酮衍生物和至少一种H₃受体拮抗剂/逆激动剂。H₃受体拮抗剂/逆激动剂为本领域所公知。H₃受体位置见于交感神经上，在该处其调节交感神经传送，并且在交感神经系统控制下使终端器官的反应衰减。尤其是，通过组织胺的H₃受体活化将衰减肾上腺素的流出至阻力和容量血管(resistance andcapacitance vessels)，造成血管扩张。已知H₃受体拮抗剂/逆激动剂可治疗患者如哺乳动物的下列疾病：过敏、过敏引起的呼吸道(例如上呼吸道)反应、充血(例如鼻充血)、高血压、心血管疾病、GI道的疾病、胃肠道的过度和过低蠕动性以及胃酸分泌、肥胖症、睡眠失调(例如，嗜睡、欲睡(somnolence)和发作性睡病(narcolepsy))、中枢神经系统紊乱、注意力不集中的过度反应疾病(ADHD)、中枢神经系统的过低和过度活化(例如焦躁和忧郁)、和/或其它CNS疾病(如阿耳兹海默症、精神分裂症和偏头痛)。此类化合物尤其可用于治疗过敏症、过敏引起的呼吸道反应和/或充血。

可用于本发明的组合疗法中的H₃受体拮抗剂/逆激动剂包括(但不限于)：咪唑类，如国际专利公开号WO 95/14007和WO 99/24405中所述；美国专利号6,720,328中所述的非-咪唑类H₃受体拮抗剂；美国专利公开号US 2004/0019099中所述的吲哚衍生物；美国专利公开号US2004/0048843A1和美国专利公开号US 2004/0097483A1中所述的苯并咪唑衍生物；以及美国专利号6,849,621中所述的哌啶衍生物。上述有关H₃拮抗剂/逆激动剂的专利和申请案并入本文供参考。

组合物和施用

本发明提供一种包含有效量的氮杂环丁酮衍生物和药学可接受的载体的医药组合物。就由使用在本发明方法中所述的化合物制备医药组合物而言，惰性药学可接受的载体可为固体或液体。固体制剂包括粉剂、片剂、可分散细粒剂、胶囊、药片和栓剂。粉剂和片剂可包含约5至约70％的活性成份。适宜的固态载剂为本领域已知，例如碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖。片剂、粉剂、药片及胶囊可以适宜口服施用的固体剂型使用。

就制备栓剂而言，先使低熔点蜡如脂肪酸甘油酯或可可亚奶油熔化，并且以例如搅拌使活性成份均匀分散于其中。接着将熔融的均匀混合物倒入适宜尺寸的模具中，使之冷却并因此而固化。

液体制剂包括溶液、悬浮液和乳剂。可提及的实例为非经肠胃注射的水或水-丙二醇溶液。

液体制剂也可包含鼻内施用的溶液。

适用于吸入的气溶胶制剂包括溶液和粉末态固体，其可与药学可接受的载体如惰性压缩气体并用。

还包括的是在使用前即刻转化成口服或非经肠胃施用的液体制剂的固体制剂。该液体形式包含溶液、悬浮液和乳剂。

本发明的氮杂环丁酮衍生物也可经皮输送。经皮组合物可为乳膏、洗剂、气溶胶和/或乳剂的形式使用，并且可包含于用于该目的的本领域已知的基质经皮贴片或储液囊中。

在一个实施方案中，氮杂环丁酮衍生物是经口施用。

在另一个实施方案中，氮杂环丁酮衍生物是经静脉内施用。

在一个实施方案中，包括一种或多种氮杂环丁酮衍生物的医药制剂是呈单位剂型。在此剂型中，制剂被细分成含适量活性成份例如有效达到所需目的的量的单位剂量。

单位剂量制剂中的氮杂环丁酮衍生物量可在约0.1mg至约1000mg间改变或调整。在一个实施方案中，依据特定用途而定，该量为约1mg至约300mg。

所用的实际剂量可依据患者的需要和欲治疗病症的严重性而定。对特定状况决定适宜剂量是在本领域的技能范围内。通常，治疗开始使用低于化合物最佳剂量的较小剂量。随后，以小增量增加剂量直到该状况下达到最佳效力为止。为方便起见，总日剂量可分成数份，并且如果需要，可以在全天分数次施用。

氮杂环丁酮衍生物施用的量和频度将依据参与的临床医师考虑，如年龄、病症和患者大小以及欲治疗病征的严重性等因素判断。就口服施用而言，氮杂环丁酮衍生物的典型建议剂量方案为约10mg/天至约2000mg/天。在一个实施方案中，剂量为约10mg/天至约1000mg/天，分成二或四等分的剂量以使上述疾病或病症获得减轻。

治疗或预防病症的本发明组合疗法中所用其它药物的剂量和剂量方案可由参与的临床医师参考包装说明中经认可的剂量和剂量方案，考虑患者的年龄、性别和病症以及疾病严重性而决定。组合施用时，则治疗上述疾病或病症用的氮杂环丁酮衍生物及其它药物可同时或连续施用。当组合成分优选以不同施用时间给予时，例如一种成分每天施用一次，另一种则每六小时一次，或者当优选的医药组合物并不相同时，例如其中一种优选为片剂而一种为胶囊时尤其有用。因此用包括分开剂型的药盒较为有利。

可用于本方法中的其它治疗剂的非限制剂量范围列于下。然而，确切剂量是由参与的临床医师决定，并且取决于例如施用化合物的效力、患者的年龄、体重、病症和反应等因素。

通常，胆固醇生物合成抑制剂的总日剂量可在每天约0.1至约160mg之间。在一个实施方案中，该剂量为约0.2至约80mg/天，以单次剂量或分2-3次剂量施用。

通常，过氧化物酶体增生剂-活化的受体活化剂的总日剂量可在每天约50至约3000mg之间。在一个实施方案中，日剂量为每天约50至约2000mg，以单次剂量或分2-4次剂量施用。

通常，IBAT抑制剂的总日剂量可在约0.01至约1000mg/天之间。在一个实施方案中，该剂量为约0.1至约50mg/天，以单次剂量或2-4次剂量施用。

通常，烟酸的总日剂量可在约500至约10,000mg/天之间。在一个实施方案中，该剂量为约1000至约8000mg/天。在一个实施方案中，该剂量为约3000至约6000mg/天，以单次剂量或分开剂量施用。通常，NAR激动剂的总日剂量可在约1至约100mg/天之间。

通常，ACAT抑制剂的总日剂量可在约0.1至约1000mg/天之间，以单次剂量或2-4次剂量施用。

通常，CETP抑制剂的总日剂量可在约0.01至约1000mg/天之间，并且较好约0.5至约20mg/kg/天，以单次剂量或分成2或多次剂量施用。

通常，普罗布考或其衍生物的总日剂量可在约10至约2000mg/天之间。在一个实施方案中，剂量为约500至约1500mg/天，以单次剂量或分2-4次剂量施用。

通常，LDL受体活化剂的总日剂量可在约1至约1000mg/天之间，以单次剂量或分2-4次剂量施用。

通常，鱼油或Ω3脂肪酸的总日剂量可在每天约1至约30g之间，以单次剂量或分2-4次剂量施用。

通常，天然水溶性纤维的总日剂量可在每天约0.1至约10g之间，以单次剂量或分2-4次剂量施用。

通常，植物固醇、植物固甾醇和/或植物固甾醇的脂肪酸酯的总日剂量可在每天约0.5至约20g之间，以单次剂量或分2-4次剂量施用。

通常，抗糖尿病剂的总日剂量可在每天约1至约3000mg之间。在一个实施方案中，总日剂量为每天约50至约2000mg，以单次剂量或分2-4次剂量施用。

通常，血液改质剂或医药的总日剂量可在约1至3,000mg/天之间，优选为约1至约1,000mg/天，并且更好为约1至200mg/天，单次或分成2-4次剂量施用。治疗可以治疗有效量的血液改质剂施用，以治疗特定病症，例如日剂量较好在每天约1至约1000mg之间，并且更好为每天约5至约200mg，以单次剂量或分成2-4次剂量施用。然而，确切的剂量是由参与的临床医师决定，并且取决于如施用化合物的效力、患者的年龄、体重、病症和反应等因素。

与氮杂环丁酮衍生物组合使用的雄激素和雌激素的剂量可改变，并且通常在约1mg至约4mg雄激素和约1mg至约3mg雌激素之间。实例包括(但不限于)雄激素与雌激素的组合诸如酯化的雌激素(雌酮硫酸钠和马烯雌酮硫酸钠)与甲基睾酮的组合。

雌激素和雌激素组合的剂量可在约0.01mg至至多8mg间改变。在一个实施方案中，剂量为约0.3mg至约3.0mg。

实施例

通用方法

所有溶剂及试剂均以收到时状态使用。质子NMR光谱是使用VarianXL-400(400MHz)设备获得并且以自Me₄Si低磁场的百万分之一(ppm)记录。LCMS分析是使用装置有岛津SCL-10A LC柱的Applied BiosystemsAPI-100质谱分光仪进行：Altech铂C18，3μm，33mm×7mm ID；梯度流动：0分钟，10％CH₃CN；5分钟，95％CH₃CN；7分钟，95％CH₃CN；7.5分钟，10％CH₃CN；9分钟，停止。快速柱色谱是使用SelectoScientiic快速硅胶，32-63目进行。分析型和制备型TLC是使用Analtech硅胶GF板进行的。手性HPLC是使用装置有Chiralpak OD柱(ChiralTechnologies)的Varian PrepStar系统进行的。

实施例1

中间体化合物IA-1的制备

可用于制备式(IA)氮杂环丁酮衍生物的中间体的化合物IA-1的合成描述于下：

IA-1

使LiHMDS(2.8mol)在THF(1.0升)中的第一溶液冷却至-30℃，并且在搅拌下通过滴加将苯甲醛(300g，2.8mol)添加至所得混合物中。在另一瓶中，使LDA的第二溶液(2.8mol，在THF中)冷却至-78℃，并且滴加BOC-乙基异哌啶酸酯(687g，2.8mol)在THF(500mL)中的溶液。接着将第一溶液在搅拌下滴加至第二溶液中，其速率是使整个添加过程中的反应温度保持在0℃以下。接着使所得反应在0℃下搅拌约3小时，随后使用水(1升)小心地使反应猝灭。用乙酸乙酯(5升)萃取所得溶液，并移到分液漏斗中。收集有机层，使用硫酸镁干燥，真空浓缩，获得粗制产物，使之从1.5升己烷∶乙酸乙酯(2∶1)中重结晶，获得化合物IA-1的固体(67％)。¹HNMR(300MHz，DMSO)δ7.4(d，2H)，7.3(br，3H)，4.6(s，1H)，3.5(br，2H)，3.2(br，1H)，3.0(br，1H)，1.9(br，2H)，1.3(s，9H)，1.2(br，1H)，1.0(br，1H)。

实施例2

中间体化合物IB-1的制备

可用于制备式(IB)氮杂环丁酮衍生物的中间体的化合物IB-1的合成描述于下：

IB-1

使用实施例1中描述的方法，并且以4-氯苯甲醛取代苯甲醛，制备化合物IB-1。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ7.4(d，2H)，7.2(t，3H)，4.5(s，1H)，3.8(br，1H)，3.6(t，1H)，3.3(br，2H)，2.1(br，1H)，1.9(br，1H)，1.4(s，9H)，1.2(br，1H)。

实施例3

中间体化合物IC-1的制备

可用于制备式(IC)氮杂环丁酮衍生物的中间体的化合物IC-1的合成描述于下：

IC-1

使用实施例1中描述的方法，并且以吡啶-3-甲醛取代苯甲醛，制备化合物IC-1。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ8.2(d，2H)，7.3(d，1H)，7.0(m，1H)，4.2(s，1H)，3.3(br，1H)，3.2(t，1H)，3.1(br，1H)，3.0(br，1H)，1.9(d，1H)，1.6(t，1H)，1.1(s，10H)，0.8(m，1H)。

实施例4

中间体化合物ID-1的制备

可用于制备式(ID)氮杂环丁酮衍生物的中间体的化合物ID-1的合成描述于下：

ID-1

使用实施例1中描述的方法，并且以吡啶-2-甲醛取代苯甲醛，制备化合物ID-1。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ8.7(d，1H)，7.8(t，1H)，7.4(d，1H)，7.2(m，1H)，6.2(s，1H)，4.5(s，1H)，3.8(br，1H)，3.6(m，1H)，3.2(br，2H)，2.1(br，1H)，1.9(m，1H)，1.5(m，1H)，1.4(s，9H)，1.1(m，1H)。

实施例5

化合物IA-2的制备

IA-2

向化合物IA-1(94mmol，如实施例1制备)在二噁烷(200mL)中的搅拌溶液中添加溴苯(24g，104mmol)、N，N-二甲基乙二胺(1.1mL，9.4mmol)、CuI(3.6g，18mmol)和碳酸钾(26g，188mmol)。使所得反应加热至回流，并使之在回流下搅拌约15小时。接着使反应混合物冷却至室温，过滤。滤液用乙酸乙酯(1升)稀释，用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，真空浓缩，获得粗制产物，用乙酸乙酯洗涤，获得化合物IA-2(92％)。

实施例6

化合物IA-3的制备

IA-3

在室温下向化合物IA-2(58mmol，如实施例5制备)在DCM(125mL)中的溶液中以滴加方式添加三氟乙酸(23mL，290mmol)。使反应搅拌5小时，真空浓缩，获得粗制残留物。该粗制残留物用二乙醚研碎，获得固体，用乙醚洗涤，获得化合物IA-3的三氟乙酸盐(90％)。¹H NMR(300MHz，DMSO)δ7.3(m，7H)，7.1(d，2H)，7.0(t，1H)，5.2(s，1H)，3.2(br，2H)，3.0(m，1H)，2.6(br，1H)，2.2(m，2H)，1.6(br，1H)，1.2(m，1H)。

实施例7

化合物IB-2的制备

IB-2

使化合物IB-1(160mmol，如实施例2制备)在DMF(200mL)中的搅拌溶液冷却至0℃，并向此冷却溶液中添加NaH(9.07g，207mmol)，接着添加2-溴丙烷(19.4mL，207mmol)。接着使反应温度上升至50℃，并使反应在该温度下搅拌5小时。接着使反应混合物冷却至室温，使用冰水将反应猝灭，并且使用乙酸乙酯萃取所得混合物。收集有机层，用盐水洗涤，用MgSO₄干燥，过滤，真空浓缩，获得粗制残留物，使之从己烷∶乙酸乙酯(2∶1)中重结晶，获得化合物IB-2的固体(60％)。

实施例8

化合物IB-3的制备

IB-3

使用实施例6中所述的方法，以化合物IB-2取代IA-2，制备化合物IB-3的三氟乙酸盐(90％)。¹H NMR(DMSO)δ8.6(br，1H)，8.4(br，1H)，7.5(m，4H)，4.7(s，1H)，3.5(m，1H)，3.3(br，2H)，2.9(br，1H)，2.7(br，1H)，2.1(br，2H)，1.6(br，1H)，1.3(d，3H)，1.2(m，1H)，1.0(d，3H)。

使用上述实施例1-8所述相同的方法，并且依据所需的R₁和R₂基而选择适宜试剂，制备下表7中所述的中间体化合物。须注意，当R₁为芳基或杂芳基时，优选的合成方法为上述实施例5中所述的方法，并且当R₁为烷基或取代的烷基时，优选的合成方法为上述实施例7中所述的方法。

表7

表7中所式的化合物可依据实施例6中所述的方法，用TFA处理，移除BOC保护基，并且获得如上述反应图1、3、4和5中所述式6的各种中间体化合物。

实施例9

氮杂环丁酮衍生物对离子通道的功能性效果评估

电压控制的离子通道的功能性评估可用于测定氮杂环丁酮衍生物的强效性和/或单一浓度效力。可使用二种不同方法以测量离子电流：IonWorks HT(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)，这是一种使用96-孔化合物盘的中等通量电压夹筛选平台；以及针对更低通量、更高真实度测定法的常规全细胞片夹。

细胞株

HEK细胞被暂时转染，然后选择所关心的不同通道蛋白质的稳定异源表达。钙通道细胞株表达休止钾电流(人类K_ir2.1)和形成电压控制的钙通道的α-亚单位的孔。在Ca_v2.1细胞的情况下，辅助亚单位β₂a亦被表达。用以产生数据的钙通道细胞株将会表达人类Ca_v3.2、大鼠Ca_v3.2或人类Ca_v2.1。该人类心脏钠通道hNa_v1.5在CHO细胞中稳定表达。

细胞株可在37℃下在95％空气/5％CO₂平衡的孵育箱中生长。CHO细胞株可在Ham′s F-12培养基中生长。HEK细胞可在DMEM中生长。所有培养基补充有10％热-灭活的胎牛血清、青霉素、链霉素和适当选择的抗生素(zeocin、庆大霉素(geneticin)和/或潮霉素)。当80％融合或更少时，该细胞被传代。

对hCav3.2的IonWork筛选

用于使用此设备的细胞外缓冲液含有下列(mM)(NaCl 125、HEPES10、KCl 5.4、CaCl₂ 1.8、MgCl₂ 1.8、0.2 BaCl₂ pH 7.35)。该IonWork使用两性霉素以达到接近细胞内部的电流。该内部溶液含有(mM浓度)：130K-葡糖酸酯、20KCl、5HEPES-KOH(pH 7.25)、2CaCl₂、1MgCl₂。若存在两性霉素则其以5mg添加于65mL中(在650微升DMSO中)。所有用于此实验的内部和外部溶液含有1％DMSO。细胞确实从T-75瓶中胰蛋白酶化，并且以2×10⁵个细胞/mL的密度再悬浮于细胞外缓冲液中。

实验在室温下进行。进行电压协议之前，转膜电位保持在-100mV达5秒。在此期间，在步进至-110mV(200毫秒)期间测量渗漏电流。T-型钙电流以250毫秒步进至-20mV而活化。此去偏极化步骤以1秒的脉冲间间隔1秒总计重复10个脉冲。若未符合下列可接受标准则排除该数据：对化合物前(pre-compound)扫描的总电阻＞65MΩ，化合物前的电流＞250pA，化合物后的总电阻＞50MΩ。

T-型电流测量为顶点内向电流减去250毫秒步进至-20mV结束时的电流。建立记录过程后，化合物前的测量电流扩增。化合物以含1％DMSO的3X溶液添加。与化合物孵育10分钟后，再度测量电流。化合物添加后的电流扩增除以10脉冲的化合物前的电流，以确定化合物添加后电流维持分率。对各化合物而言，以1/2对数连续稀释测量8-点浓度-效果关系。这些数据接着转移至GraphPad Prism(v 4)，并使用非线性回归分析以评估各试验化合物的IC₅₀。

使用该方法，获得下列数据用于说明示例性的氮杂环丁酮衍生物：

常规全细胞膜片夹片

在适宜生长的培养基中将细胞铺于9mm直径圆形盖玻片上，并在使用前放置在37℃孵育箱中。使用常规方法在室温下进行全细胞膜片夹片研究。使用PCLAMP软件(v8或9)与可兼容A/D D/A板连用，可使用Pentium III个人计算机与Multiclamp 700或AxoPatch 1D增幅器以产生电压夹片协议、获取数据和测量电流。

研究时，将附有细胞的一片盖玻片移至倒置显微镜的台上的记录腔室内，并建立膜片夹片的全细胞离心。该记录腔室通过重力以约3mL/分钟的流速灌注细胞外溶液。当填充移液管溶液时，贴片电极应具有2-3MΩ的电阻。所用的细胞外溶液为HEPES-缓冲的盐水(NaCl(149mM))、HEPES-NaOH(10mM，pH 7.4)、葡萄糖(10mM)、CsCl(5mM)、MgCl₂(2mM)、CaCl₂(5mM)。移液管溶液含有：CsCl(115mM)、HEPES-CsOH(10mM，pH 7.3)、MgATP(4mM)、EGTA(10mM)；用蔗糖渗透至310mM。所有溶液含有0.1％ DMSO。

所有协议中固定电位为-100mV。脉冲内间隔为15秒。以200毫秒试验脉冲至-35mV检测hCa_v3.2或rCa_v3.2电流的时间历程。Ca_v3.2电流测定为电压步进至-35mV后10-30毫秒的峰值电流。使用P/N 4漏减。增幅器低通滤设定为10kHz，并在10kHz对数据取样。数据以具有280Hz的-3dB截断的高斯(Gaussian)滤波器离线滤波。对hCa_V2.1电流的电压协议应仅对去极化试验电位的电压不同。对hCa_V2.1而言，电流以200毫秒步进至0mV而活化。自漏减轨迹测量hCa_V2.1电流作为步进至0mV后190至200毫秒间的平均电流。对于钠电流的电压协议包括150毫秒过度极化脉冲至-140mV至使通道利用性最佳化，接着20毫秒试验脉冲至-20mV。自漏减轨迹测量钠电流作为峰值瞬间内向电流。

达到稳定态效果后测量所有药物效果。通过将各细胞仅暴露至单一浓度试验物而推演出浓度-效果关系。就非线性回归分析而言，对各细胞的该化合物后电流增幅经标化(normalized)至化合物前的电流。若给定电流在10μM或以下的浓度被抑制至＞50％，则对多数浓度的化合物以及对应的载体以及时间控制细胞的数据进入非线性回归分析的GraphPadPrism(v4)，以确定IC₅₀。

实施例10

TRPV1筛选分析

材料：

1)细胞株：HEK293-Tet^OFF-TRPV1

2)培养基：MEM(Invitrogen)

3)10％Tet-FBS(Clontech#8630-1)

4)两性霉素B洗剂(Fungizone)(Gibco#15290-018(100X))

5)青霉素/链霉素(Penn/Strep)(Gibco#15140-122(100X))

6)庆大霉素(Geneticin)(Gibco#10131-027(100X))

7)潮霉素(Hygromycin)(Clontech#8057-1)

8)多西环素(Doxycycline)(Clontech#8634-1)

9)胰蛋白酶/EDTA(Gibco#25200-056)

10)100mm细胞培养盘(Falcon#3003)

11)96-孔聚-D-赖氨酸盘(Fisher#08-774-256)

12)汉克氏(Hank′s)平衡的盐溶液(HBSS)(GIBCO#14025-092)

13)HEPES缓冲液(GIBCO#15630-080)

14)30％BSA(Research Organics#1334A)

15)丙磺舒(Sigma P-8761)

16)Fluo-4，AM(50μg)(Molecular Probes F-23917)

17)普郎尼克F-12720％(Molecular Probes P-3000)

18)卡沙齐平(capsazepine)(Sigma C-191)

19)辣椒碱(capsaicin)(Sigma M-2028)

20)化合物盘(NUNC#442587)

21)黑色移液管尖96-孔FLIPR(Robbins Scientific 1043-24-0)

22)购自Fisher的其它试剂：甲醇、DMSO、NaOH

试剂制备：

1)细胞：HEK293-Tet^OFF-TRPV11

生长培养基：MEM

10％Tet-FBS

两性霉素B洗剂(Fungizone)

青霉素/链霉素(Penn/Strep)

庆大霉素(Geneticin)

新鲜添加于培养物中：潮霉素25μg/mL最终

及多西环素2.5μg/mL最终(来自在PBS中的1000X贮备液中)

-细胞必须每2-3天馈入和/或分裂(以多西环素维持转录阻抑)。

-必须分裂不超过1∶5(50-75％融合)以维持成长和存活力。

-在正规组织培养盘上生长(例如，Falcon 3003-100mm)。

-经胰蛋白酶/EDTA分裂细胞：在室温下以胰蛋白酶培养不超过5分钟(HEK293细胞若过度胰蛋白酶化则有团块化的倾向)。

-分析前两天，以40,000个细胞/孔的浓度以体积200微升在不含多西环素的细胞培养基中，使细胞分裂于96-孔盘中。

2)新鲜制备FLIPR缓冲液：

500mL汉克氏平衡的盐溶液(HBSS)

10mL的1M HEPES缓冲液pH 7.2

16.6mL的30％BSA

添加5mL如以下制备的丙磺舒溶液：使710mg丙磺舒(Sigma P-8761)溶于5mL的1N NaOH中，添加5mL的上述缓冲液使最终体积为10mL(其5mL会回到FLIPR缓冲液中)

3)染料制备：

在22微升DMSO中使Fluo-4，AM(50μg)重组。

添加22微升普朗尼克F-127 20％。

使42微升染料混合物与11mL的FLIPR缓冲液/96-孔盘合并。

4)竞争性拮抗剂制备：

卡沙齐平(5mg)含于1.3mL的MeOH中＝10mM溶液(IC₅₀约500nM)。

5)激动剂制备：

在MeOH中制备含0.1M辣椒碱的贮备溶液(50mg+1.6mL MeOH)。在-80℃下储存50微升的等份溶液。

就分析而言：

a)将0.8微升贮备液添加于1mL的MeOH中而稀释(最终＝80μM)。

b)将50微升经稀释的贮备液添加于20mL的FLIPR缓冲液中(最终＝0.2μM)。

c)以150微升/孔将激动剂溶液添加于96-孔盘中。

d)细胞上的最终激动剂浓度为50nM(约EC₈₀)。

6)化合物盘制备：

a)化合物盘以150微升/孔充填有FLIPR缓冲液。

b)将3微升化合物混合物(1mg/mL)添加于各孔中(代表3X溶液，并且最终DMSO＝0.67％)。

分析程序：

1)自96-孔盘中成长的细胞移去培养基。

2)将100μL含Fluo-4的FLIPR缓冲液移液到各孔中。

3)使盘在37℃下在5％CO₂孵育器中孵育30-60分钟。

4)接着以100微升FLIPR缓冲液洗涤盘三次。

5)在各孔中留下100微升FLIPR缓冲液，再在37℃下培养该盘至少20分钟。

6)使用激光在0.300W下以0.4秒的曝露时间最初测定经染料标记的盘的信号。将激光向上调整使平均信号≥10,000/孔，并且变异性小于10％。

7)化合物添加条件如下：

FLIPR设定(双重顺序参数)：

顺序1：

第一次间隔1秒/60计数

第二次间隔6秒/50计数

流体添加＝50微升

移液管高度＝110微升

分液速度＝30微升/秒

顺序2：

第二次间隔1秒/60计数

第二次间隔6秒/40计数

流体添加＝50微升

移液管高度＝140微升

分液速度＝50微升/秒

数据分析：

1)对于各孔，来自二次添加的数据记录为Max-Min。

NT＝未测试

实施例11

氮杂环丁酮衍生物对疼痛的效果

氮杂环丁酮衍生物对于治疗或预防疼痛的作用可使用各种动物模型分析，包括(但不限于)以下所述的那些：

福尔马林试验：将小鼠柔和的绑住，并使用27号针的微针筒在小鼠右后脚爪脚底表面皮下注射30微升福尔马林溶液(1.5％，在盐水中)。注射福尔马林后，立即将小鼠放回塑料玻璃观察室(30×20×20cm)中，并观察动物对福尔马林注射的感受伤害反应历时60分钟。整个观察期间每5分钟记录并量化经注射的脚爪的舔食和退缩持续时间。立即开始早期(第一期)的记录，并且持续5分钟。后期(第二期)在注射福尔马林后约10-15分钟开始。

坐骨神经的L5和L6脊神经结扎(神经性疼痛模型)：以Kim和Chung(1992)先前所述的方法为准，通过使右坐骨神经的L5和L6脊神经结扎产生末梢神经性病痛。简言之，以水合氯醛(400mg/kg，i.p.)将大鼠麻醉，以俯卧的姿势放置，并在L4-S2水平处使右椎旁肌肉与棘突分离。L5横突以小的咬骨钳小心移开，以确认L4-L5脊神经。分离右L5和L6脊神经，并以7/0丝线捆紧。确认完全止血并缝合伤口。

坐骨神经的慢性收缩损伤(CCI)(神经性疼痛模型)：依据Bennett&Xie(1987)所述的方法进行手术。以水合氯醛(400mg/kg，i.p.)将大鼠麻醉，并使共通坐骨神经在中大腿骨水平处暴露出。在邻近处，在距离三叉神经约1cm处，将间隔1mm的四条松绑的捆线(4/0丝线)捆紧神经周围。使该捆绑延长(但不防止)通过表面上神经血管的循环。对第二群动物进行相同程序，但捆绑配置(虚拟手术)除外。

角叉菜聚糖(Carrageenan)(发炎疼痛模型)：对每一动物右后爪足底(25GA针筒)注射0.1mL角叉菜聚糖的量。在角叉菜聚糖或药物施用之前测定前试验(pre-test)。依后处理(POST-TREATMENT)协议，大鼠在角叉菜聚糖处理后3小时进行试验，以建立痛觉过敏的存在，接着在药物施用后的不同时间进行试验。依前处理(PRE-TREATMENT)协议，在药物施用后一小时，以角叉菜聚糖处理大鼠，并在3小时后开始测试。

弗氏佐剂引发的关节炎模型(发炎疼痛模型)：使动物接受100mL的在液状石蜡与乳化剂(二缩甘露糖单油酸酯)(弗氏完全佐剂)的混合物中的500mg剂量经热杀死并干燥的结核分歧杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)(H37Ra，Difco实验室，Detroit，MI，USA)的单次足底注射。对照组动物注射以0.1mL矿物油(弗氏不完全佐剂)。

触觉异常性疼痛(tactile allodynia)的测量(行为试验)：行为试验是通过在光量循环期间隐蔽观察而进行的，以避免生理时钟节律混乱。触觉敏感度是使用一系列校正过的Semmes-Weinstein(Stoelting，IL)von Frey细丝评估，其弯曲力在0.25至1.5g之间。实验开始前，将大鼠放在装置金属网地板的透明塑料盒中，并使之习惯该环境。将von Frey细丝垂直施加于同侧后脚爪之中间足底表面，并通过依次增加和减少刺激强度(细丝表现的″增加-减少(up-down)″规程)而测定机械异常性疼痛。以Dixon非参数试验(Chaplan et al.1994)分析数据。刺激后舔脚爪或剧烈摇摆视为类似疼痛反应。

热痛觉过敏(行为试验)：对辐射热的热痛觉过敏是通过测量缩回的潜伏时间作为热感受伤害指数而评估的(Hargreaves et al.，1998)。选择脚爪试验(Basile，Comerio，Italy)是因为其对痛觉过敏的敏感度。简言之，该试验是由置于玻璃板下方的可移动红外线源组成，大鼠放置于该玻璃上。以三个单个透明塑料盒同时测试三只大鼠。将红外线源直接放在后脚爪之脚底表面下方，脚爪缩回潜伏时间(PWL)定义为大鼠将其后脚爪从热源移开花费的时间。对每只大鼠的二后脚爪取三次PWL，并且各脚爪的平均值代表大鼠的热疼痛阈值。调整辐射热源获得10-12秒的基线潜伏时间。设备关闭固定为21秒以防止组织受伤。

重量荷载(行为试验)：使用双足平衡测痛仪测定后脚爪重量分布。将大鼠放置在配置成有角度的塑料玻璃室中，使得每一后脚爪停在分别的施力板上。重量荷载试验代表关节炎大鼠在未施加任何应力或刺激下的病理病症的直接指标，因此此试验测量动物的自发性疼痛行为。

实施例12

NPC1L1结合分析

将表达人类NPC1L1的HEK-293细胞铺在384-孔黑色/透明盘(BDBiosciences，Bedford MA)中，供次日的结合实验用。吸取细胞生长培养基(DMEM、10％胎牛血清、1mg/mL庆大霉素、100单位/mL青霉素)。向各孔中添加含有250nM BODIPY-标记的葡糖醛酸化依泽替米贝(ezetimibe)的细胞生长培养基(20mL)。接着向这些孔中加入含有所示浓度化合物的细胞生长培养基(20mL)。使用未标记的葡糖醛酸化依泽替米贝(100mM)以测定非特异结合。使结合反应在37℃下进行4小时。接着，吸取细胞生长培养基并以PBS洗涤细胞一次。使用FlexStation盘读取机(Molecular Devices，Sunnyvale CA)对与细胞结合的剩余荧光剂标记的葡糖醛酸化依泽替米贝定量，以测量荧光强度。使用Prism and Activity Base软件，自竞争结合曲线(各点的n＝4)测定Ki值。

使用此方法，对本发明所示的氮杂环丁酮衍生物获得下列数据：

NT＝未测试

实施例13

GPR119筛选分析

试剂制备

刺激缓冲液：100mL HBSS (GIBCO#14025-092)

+100mg BSA(MP Biomedicals faction V，#103703)＝0.1％

+500微升1M HEPES(Cellgro#25-060-Cl)＝5mM

+75微升RO-20(Sigma B8279；在DMSO中的20mM贮备液，以等份储存在-20℃下)＝15μM(每天新制)

B84(N-[4-(甲基磺酰基)苯基]-5-硝基-6-[4-(苯基硫基)-1-哌啶基]-4-嘧啶胺，参见WO 2004/065380)：制备在DMSO中的试验化合物的10mM贮备溶液，分成等份后储存于-20℃下。就总计而言-在DMSO中稀释1∶33.3，接着在刺激缓冲液中稀释1∶50＝6μM，在2％DMSO中(＝3μMB84和1％DMSO，最终)。就剂量反应曲线而言-3微升贮备液+7微升DMSO+490微升刺激缓冲液＝60μM，在2％DMSO中(＝30μM B84和1％DMSO，最终)。(每天新制)。

细胞株

人类结肠3：以人类-SP9215(GPR119)/pcDNA3.1稳定转染HEK 293细胞，并且还对pCRELuc(Stratagene)稳定转染。将细胞维持在含10％FBS(Invitrogen#02-4006Dk，lot#1272302，热灭活)、1×MEM、1×青霉素/链霉素、0.1mg/mL潮霉素B和0.5mg/mL G418的DMEM中。细胞每周两次分裂1∶8。

cAMP药盒：LANCE^TM cAMP 384药盒，Perkin Elmer#AD0263。

化合物稀释：

1.在含化合物之安瓿中添加DMSO，获得1mg/mL溶液。

2.在刺激缓冲液稀释化合物至60μM。使用epMotion自动设备在含2％DMSO的刺激缓冲液中进行1/2对数稀释。10点剂量反应曲线1nM至30μM。

3.化合物重复四次操作，对组别1和1a各2次分别稀释。

分析程序

1.分析前当天下午，以Optimem.(Gibco#11058-021)更换人类结肠3细胞的瓶中培养基。注意：细胞应在培养物中6-8天。

2.次日早晨，使用HBSS将细胞轻移出瓶外(在室温下)。

3.使细胞成粒状(1300rpm，7分钟，室温)，并以2.5×10e6/mL(＝5-8,000个细胞/6微升)再悬浮于刺激缓冲液中。向细胞悬浮液中直接添加1∶100稀释的Alexa Fluor 647-抗cAMP抗体(以药盒提供)。

4.在白色384-孔盘(Matrix)中添加6微升2×B84、化合物或刺激缓冲液用于nsb。它们均含有2％DMSO(＝1％DMSO，最终)。

5.添加6微升细胞悬浮液于此类孔中，在室温下孵育30分钟。

6.就标准(std)曲线而言，依据药盒指示，添加6微升的cAMP标准溶液，其稀释于刺激缓冲液+2％DMSO中(1000-3nM)。向标准孔中添加6微升的在刺激缓冲液中的1∶100抗cAMP。

7.依据药盒指示制备检测混合物，并在室温下孵育15分钟。

8.在所有孔中添加12微升检测混合物。通过轻敲温和混合，并在室温下孵育2-3小时。

9.依据协议″Lance/Delphia cAMP″在Envision上读取。

10.从标准曲线通过外推法确定各样品的值(nM)。对各化合物确定对照％、倍数(Fold)以及EC50(对照组＝3μM B84)，对组别1和1a加以平均。

实施例14

氮杂环丁酮衍生物对胆固醇吸收抑制作用的体内影响

通过口服管饲法对雄鼠施用0.25mL玉米油或含有试验化合物的玉米油；施用后30分钟，对各大鼠施用0.25mL玉米油和2μCi ¹⁴C-胆固醇、1.0mg冷却胆固醇。2小时后，以100mg/kg IP以硫巴比妥(Inactin)使大鼠麻醉，并从腹部大动脉收集10mL血液样本。接着移除小肠，分成三段，各段以15mL冷却盐水洗涤并收集洗液。接着移除肝脏，秤重，再移除三个约350mg等份。向各小肠切片中添加5mL的1N NaOH，向各肝脏份数中添加1mL以在40℃溶解过夜。以0.25mL 4N HCl中和2×1mL份的SI消化物和肝脏消化物，计数。计数2×1mL份的血浆和小肠洗液。

实施例15

脱髓鞘作用的假设性体内评估

可对已被诱发成发展出实验性自动免疫脑脊髓炎(″EAE″)的啮齿类(人类多发性硬化及脱髓鞘疾病之模型)施用氮杂环丁酮化合物。可用的啮齿类包括以髓鞘寡突胶质细胞蛋白质(MOG)35-55肽免疫化的C57BL/6小鼠(得自Jackson实验室或Charles River实验室)、以蛋白脂质蛋白质(PLP)肽免疫化的SJL/J小鼠(亦得自Jackson实验室或Charles River实验室)、或以天竺鼠脊髓同源物或髓磷脂碱性蛋白(MBP)免疫化的Lewis、BN或DA大鼠(得自Charles River实验室或Harlan实验室)。所有免疫作用通过使引发肽在弗氏不完全佐剂或弗氏完全佐剂中乳化而进行，施用或不施用百日咳毒素(如Current Protocols in Immunology，Unit 15，JohnWiley&Sons，Inc.NY，或Tran et al.，Eur.J.Immunol.30：1410，2002，或H.Butzkeuven et al.，Nat.Med.8：613，2002所述)。

可用于此试验的其它啮齿类包括抗-MBPT细胞受体转基因小鼠(如Grewal et al.，Immunity 14：291，2001所述)，其自然发展出EAE疾病；以MBP-特异性、PLP-特异性或MOG-特异性的T细胞株过继性转移的啮齿类(如Current Protocols in Immunology，Unit 15，John Wiley&Sons，Inc.NY所述)；或可通过脑内接种Theiler′s小鼠脑脊髓癌病毒(如Pope et al.，J.Immunol.156：4050，1994所述)或通过腹膜内注射Silmliki Forest病毒(如Soilu-Hanninen et al.，J.Virol.68：6291，1994所述)而诱发发展出明显脱髓鞘疾病的SJL/J或C57BL/6小鼠。

本发明不受实施例中所述具体实施方案限制其范围，此类实施例是用于说明本发明少数方面，并且功能等同物的其它任何实施方案均在本发明范围内。事实上，除了本文所显示和所述的那些外外，本发明的各种改质对熟知相关领域的人员是显而易见的，并且将落入所附权利要求的范围内。

已引述数个参考文献，此类文献的整体公开以其全部内容并入本文供参考。