CZ283053B6

CZ283053B6 - Přípravek ve formě mikrokuliček a způsob jeho výroby

Info

Publication number: CZ283053B6
Application number: CS91791A
Authority: CZ
Inventors: William Steber
Original assignee: American Cyanamid Company
Priority date: 1990-03-30
Filing date: 1991-03-25
Publication date: 1997-12-17
Also published as: ZA912398B; US5213810A; HU219584B; AU7397291A; ES2054380T3; KR910016322A; IE65970B1; PL167692B1; PT97160B; CN1055293A; AU641994B2; IL97145A0; EP0448930B1; FI101676B1; PL289657A1; MX172602B; KR0159778B1; BG93923A; NO300717B1; NZ237509A

Abstract

Řešení se týká stálých přípravků ve formě mikrokuliček, které jsou vhodné pro parenterální podávání. Přípravek obsahuje tuk, vosk nebo jejich směs, biologicky aktivní protein, peptid nebo polypeptid a olej, polotuhý tuk, nebo derivát mastné kyseliny, nebo jejich směs. Přípravek ve formě mikrokuliček se vyrábí tak, že se všechny jeho složky smísí v tavenině a vzniklá směs se konvenčním způsobem zpracuje na mikrokuličky. Před parenterálním podáváním se mikrokuličky suspendují ve vhodném vehikulu.ŕ

Description

Vynález se týká stabilních farmaceutických přípravků ve formě mikrokuliček, které jsou vhodné pro parenterální podávání. Tyto přípravky obsahují tuk nebo vosk, nebo jejich směs a biologicky účinný protein, peptid nebo polypeptid.

Dosavadní stav techniky

V US patentu č. 4 837 381 je popsán přípravek ve formě mikrokuliček, obsahující tuk nebo vosk, nebo jejich směs a biologicky aktivní protein, peptid, nebo polypeptid, který se hodí pro parenterální podávání. V tomto patentu se uvádí, že získané přípravky se hodí pro pomalé uvolňování proteinu, peptidů nebo polypeptidu při parenterálním podávání ajsou zde popsány metody zvyšování a udržování zvýšených hladin růstového hormonu v krvi ošetřených zvířat po dlouhou dobu, což se projevuje ve zvýšení hmotnostního přírůstků zvířat a zvýšení produkce mléka po podání těchto přípravků.

Při vývoji farmaceutických přípravků s prodlouženým uvolňováním účinné složky dochází ke speciálním problémům, které jsou způsobeny velikostí a složitostí biologicky aktivních makromolekul, zejména proteinů, které mají sklon k chemickým a strukturním změnám při míšení s farmaceutický mi excipienty. K těmto změnám dochází buď při zpracování, nebo při skladování. Odborníci v oboru farmaceutických přípravků jsou si vědomi těchto problémů a charakterizují je jako problémy chemické stability. Nedostatečná chemická stabilita farmaceutických přípravků, která má za následek ireverzibilní změny struktury makromolekul a/nebo interakce s excipienty, může mít za následek, že se stanou tyto přípravky buď ne aktivními, nebo že neposkytují očekávanou úroveň biologické odezvy.

Další kategorii problémů farmaceutických přípravků tvoří problémy spojené s fyzikální stabilitou. Jedním zřejmým příkladem je oděr tablet nebo implantátů při zpracování, balení nebo skladování. Jako další příklad je možno uvést separaci masti, pasty, nebo gelu na jednotlivé složky, která může vést k heterogennímu rozdělení účinné složky a ke změně konzistence přípravku. Důsledkem takového zhoršení fyzikálních vlastností přípravků může byt ztráta požadované snadnosti použití přípravku a nepředvídatelnost dávkování účinné složky pacientovi. Méně zřejmé fyzikální změny farmaceutického přípravku zahrnují různé změny krystalické nebo mikroskopické struktury excipientů. Tyto typy změn mohou vést k výrazným změnám v uvolňování účinných látek. Je zřejmé, že změny ve fyzikální stabilitě farmaceutických dávkovačích forem, ať již se jedná o formy určené pro orální nebo parenterální podávání, by činily největší problémy u přípravků s prodlouženým uvolňováním účinné látky. Nutnou podmínkou obchodně využitelných farmaceutických dávkovačích forem s prodlouženým uvolňováním je, že si musí udržovat uvolňovací vlastnosti v jednotlivých šaržích a po relativně dlouhou dobu v průběhu skladování. Pod pojmem fyzikální stabilita farmaceutických dávkovačích forem se rozumí jak konstantnost manipulačních vlastností, jako je tvrdost, sypkost, nebo viskozita, tak konstantnost farmakologického účinku. Vynález se týká stabilních přípravků pro parenterální podávání. Tyká se také nového způsobu přípravy těchto stálých přípravků. Ještě dále se týká přípravku ve formě mikrokuliček, který lze balit jako přípravek pro přímé použití a který se vyznačuje dobrou skladovatelností. Tyto a jiné úkoly, které vynález řeší, jsou zřejmé z následujícího popisu vynálezu.

- 1 CZ 283053 B6

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je farmaceutický přípravek ve formě mikrokuliček pro parenterální podávání, obsahující biologicky aktivní látku, zvolenou ze souboru, zahrnujícího proteiny, peptidy a polypeptidy a tuhý tuk nebo vosk, nebo jejich směs, jehož podstata spočívá v tom, že dále obsahuje olej, tvořený monoestery, diestery a/nebo triestery mastných kyselin se 2 až 18 atomy uhlíku a glycerolu, nebo polotuhý tuk, tvořený estery mastných kyselin a glycerolu o teplotě tání v rozmezí od 15 do 30 °C, nebo jejich směs, přičemž vzájemný poměr jednotlivých složek přípravku je následující: 20 až 70 % hmotnostních biologicky aktivní látky, 30 až 95 % tuhého tuku nebo vosku, nebo jejich směsi, a 1 až 30 % hmotnostních oleje nebo polotuhého tuku, nebo jejich směsi.

Pokud farmaceutický přípravek podle vynálezu obsahuje jako biologicky aktivní protein hovězí, vepřový nebo ptačí růstový hormon, obsahuje jako olej s výhodou neutrální triglyceridový olej, v množství 5 až 20 % hmotnostních.

Mikrokuličky jsou ve farmaceutickém přípravku podle vynálezu s výhodou suspendovány ve farmaceuticky a farmakologicky vhodném kapalném vehikulu.

Předmětem vynálezu je dále také způsob výroby farmaceutického přípravku definovaného výše, při němž se smísí v tavenině tuhý tuk nebo vosk, nebo jejich směs a biologicky aktivní látka, zvolená ze souboru, zahrnujícího proteiny, peptidy a polypeptidy, a vzniklá hmota se zpracuje na přípravek ve formě mikrokuliček, který se následně popřípadě suspenduje ve farmaceuticky a farmakologicky vhodném kapalném vehikulu, jehož podstata spočívá v tom, že se ke hmotě před jejím zpracováním nebo v průběhu její výroby přidá olej nebo polotuhý tuk, nebo jejich směs.

Tento způsob výroby farmaceutického přípravku se opírá o zjištění, že přídavek malého množství oleje, polotuhého tuku a/nebo derivátu mastné kyseliny ke směsi tuků a/nebo vosků a biologicky aktivního proteinu, peptidů, nebo polypeptidů před zpracováním na mikrokuličky umožňuje urychleně transformovat alfa-krystalickou strukturu na beta-formu. Vzhledem k tomu, že betaforma je podstatně stabilnější, jsou i přípravky podle vynálezu podstatně stabilnější. Vynález je zejména překvapující z toho důvodu, že když se podle dosavadního stavu techniky používalo určitých olejů při výrobě přípravků až po zpracování na mikrokuličky, nedosáhlo se urychlené transformace krystalu.

Přípravky podle vynálezu jsou obzvláště vhodné pro parenterální podávání zvířatům. Biologicky aktivní proteiny, peptidy, nebo polypeptidy zahrnují růstové hormony, somatomediny, růstové faktory a jiné biologicky aktivní fragmenty nebo jejich deriváty.

Vynález se vztahuje na přípravky ve formě mikrokuliček, které je možno balit jako přípravky pro přímé použití. Vzhledem ke své zvýšené stabilitě vykazují dobrou skladovatelnost..

Vosky a tuky, které se hodí pro použití v přípravcích podle vynálezu, mají obvykle teplotu tání vyšší než 40 °C. Výrazu vosky se v tomto popisu používá pro látky ve smyslu definice, uvedené v Hawleyově The Condensed Chemical Dictionary, 11. vydání, tj. pro nízkotající organické směsi, nebo sloučeniny s vysokou molekulovou hmotností, které jsou pevné při teplotě místnosti a obvykle mají složení podobné jako tuky a oleje, s tím rozdílem, že neobsahují žádné glyceridy. Některé z nich jsou uhlovodíky, jiné jsou estery mastných kyselin a alkoholů.

Tyto sloučeniny zahrnují mastné kyseliny s 10 až 24 atomy uhlíku, jejichž dlouhý řetězec je nasycený nebo nenasycený, alkoholy, ester Y, soli, ethery nebo jejich směsi. Řadí se mezi lipidy. Vosky jsou termoplastické, ale poněvadž se nejedná o vysoké polymery, neřadí se do třídy plastických hmot. Jejich společnou vlastností je vodoodpudivost, hladká textura, netoxicita, a skutečnost, že nemají nepřijatelný zápach a barvu. Jsou hořlavé a mají dobré dielektrické vlastnosti. Jsou rozpustné ve většině organických rozpouštědel a jsou nerozpustné ve vodě. Jako hlavní typy těchto látek je možno uvést:

I) Přírodní látky

1) živočišné vosky (včelí vosk, lanolin, šelakový vosk, čínský vosk),

2) rostlinné vosky (kamaubský vosk, candelilla, vosk z cukrové třtiny, vosk z bobulí vavřínu),

3) minerální vosky

a) fosilní nebo zemní vosky (ozokerit, ceresin, montánní vosk),

b) ropné vosky (parafín, mikrokrystalický vosk, surový parafín, parafínové šupiny).

II) Syntetické látky

1) polymery ethylenu a polyoletherestery (Carbowax, sorbitol),

2) chlorované naftaleny (Halowax),

3) vosky uhlovodíkového typu, připravené Fischer-Tropschovou syntézou.

Za tuky se ve smyslu vynálezu povazují látky, definované v Hawleyově The Condensed Chemical Dictionary, 11. vydání, tvořené glycerylestery vyšších mastných kyselin, jako kyseliny, stearové a kyseliny palmitové. Tyto estery a jejich směsi jsou při teplotě místnosti pevné látky a vykazují krystalickou struk turu. Jako jejich příklady je možno uvést sádlo a lůj. Mezi tuky a oleji není žádný chemický rozdíl, jediný rozdíl spočívá v tom, ze tuky jsou při teplotě místnosti pevné, zatím co oleje jsou kapalné. Termínu tuk se obvykle používá specificky pro triglyceridy, zatím co pojem lipidy zahrnuje všechny tyto látky.

Tuky se přednostně skládají z mono-, di- nebo triglycerylesterů mastných kyselin s dlouhým řetězcem, obsahujících 10 až 14 atomů uhlíku. Mono-, di- nebo triglyceridy se skládají převážně ze stearátů, palmitátů, laurátů, linoleátů, linolenátů, oleátů a jejich zbytků nebo směsí a největší přednost se dává látkám s teplotou tání vyšší než 50 °C. Nejvhodnějším tukem je glyceryl tristearát. Vhodné jsou také lipofílní soli mastných kyselin, jako je stearan hořečnatý apod.

Oleje, polotuhé tuky, nebo deriváty mastných kyselin podle vynálezu jsou činidla, která jsou rozpustná v roztaveném tuhém tuku a která urychlují fyzikální transformaci krystalů tuhého tuku z méně stálých forem na stálejší formy při teplotě místnosti nebo v blízkosti teploty místnosti, poté, co byl roztavený tuhý tuk nebo vosk zpracován na mikrokuličky. Přednostně obsahují oleje, nebo polotuhé tuky směsi poměrně čistých forem mono-, di-, nebo triglycerylesterů mastných kyselin s krátkým až středním řetězcem, tj. s řetězcem, obsahujícím 2 až 18 atomů uhlíku. Polotuhé tuky jsou glycerylestery s teplotou tání při teplotě místnosti nebo v její blízkosti. Pod pojmem deriváty mastných kyselin se rozumějí mastné kyseliny, alkoholy, estery, ethery, soli s krátkým až středním řetězcem nebo jejich směsi. Oleje a polotuhé tuky na bázi glyceridů jsou obzvláště vhodné, poněvadž jsou fyziologickými složkami těla a jsou biokompatibilní a biodegradovatelné.

Mikrokuličky podle vynálezu jsou dispergovány ve farmaceuticky a farmakologicky vhodné kapalině za vzniku přípravků s pomalým uvolňováním, které se hodí pro parenterální podávání. Vehikulem může být vodný pufrovaný systém nebo olejový systém. Olejové systémy mohou pocházet z živočišných nebo rostlinných zdrojů, nebo mohou být syntetické. Přednostní vehikula zahrnují neutrální mono-, di-, nebo triglyceridy, které jsou kapalné, nebo jejich směsi. Pod pojmem neutrální olej se rozumí olej, který neobsahuje žádné kyselinové zbytky. Vehikula, vhodná pro použití v přípravcích podle vynálezu, zahrnují vodné systémy, jako jsou tlumené roztoky solí; organická rozpouštědla, jako glykoly a alkoholy, a kapaliny nemísitelné s vodou, jako jsou oleje, v závislosti na rozpustnosti účinné složky, která se má podávat.

-3 CZ 283053 B6

Biologicky aktivní proteiny, peptidy a polypeptidy, které jsou vhodné pro podávání v přípravcích podle vynálezu, zahrnují růstové hormony, somatomediny, růstové faktory a jiné biologicky aktivní fragmenty ajejich deriváty. Jako přednostní proteiny je možno uvést růstové hormony skotu, ovcí, koňů, vepřů, ptáků a lidí. Tyto látky zahrnují růstové hormony přírodního, syntetického, rekombinantního nebo biosyntetického původu. Pro zavádění do přípravků podle vynálezu jsou dále vhodné kovy nebo sloučeniny kovů, asociované s biologicky aktivními proteiny, peptidy a polypeptidy, jakož i soli kyselin deriváty a komplexy a antihydratační činidla.

Přípravky podle vynálezu mohou také obsahovat stabilizátory, konzervační činidla, povrchově aktivní látky, soli, pufry nebo jejich směsi. Jako přednostní stabilizátory je možno uvést kyseliny dihydrooctovou, salicylanilid, kyselinu sorbovou, kyselinou boritou, kyselinou benzoovou ajejich soli; dusitan sodný a dusičnan sodný. Pokud se používá těchto látek, může být jejich množství účelně v rozmezí od asi 0,1 do asi 20 % hmotnostních.

Přednostními povrchově aktivními látkami pro použití v přípravcích podle vynálezu, které obsahují biologicky aktivní makromolekuly, jsou neiontové povrchově aktivní látky, jako je polyoxyethylensorbitanmonooleát (20 mol ethylenoxidu) a blokové kopolymery ethylenoxidu a propylenoxidu. Množství povrchově aktivních látek, přítomných v přípravcích podle vynálezu, leží účelně v rozmezí od 0,1 do 10 % hmotnostních.

Zjistilo se, že při injekčním podávání přípravků podle vynálezu ve vhodném vehikulu zvířatům je možno dosáhnout zvýšené hladiny růstového hormonu v krvi, kterou je možno udržovat dlouhodobě. To se projeví zvýšením hmotnostních přírůstků a zvýšením produkce mléka u zvířat v období laktace. Zvýšená úroveň biologicky aktivních proteinů, peptidů a polypeptidů v krvi je obvykle spojována s užitečnými a/nebo terapeutickými účinky. Tyto účinky zahrnují hmotnostní přírůstky, zvýšenou rychlost růstu, zvýšenou tvorbu mléka u zvířat v období laktace a v důsledku toho zvýšenou dostupnost mléka pro potomky ošetřených zvířat, zlepšenou velikost svalů, zlepšenou využitelnost krmivá, snížené množství tělesného tuku a zlepšený poměr libového masa k tuku. Z okolnosti, že se v krvi udržuje zvýšená hladina biologicky účinných látek, je zřejmé, že se aktivní složka uvolňuje z přípravku pomalu. Při udržování zvýšené hladiny účinné složky v krvi je obvykle pozorována zvýšená tvorba mléka, zvýšená lychlost růstu, zlepšená využitelnost krmivá a zvýšený poměr libového masa k tuku. Do rozsahu vynálezu tedy spadá také použití přípravků podle vynálezu pro zlepšení produkce mléka, zvýšení rychlosti růstu, zlepšení využitelnosti krmivá, zvýšení obsahu libového masa a zvýšení a udržování zvýšené úrovně hormonů v krevním proudu.

Podle přednostního provedení zahrnuje vynález zavádění biologicky aktivního proteinu, peptidu nebo polypeptidů a oleje nebo polotuhého tuku, který může také popřípadě obsahovat některé nebo všechny shora uvedené excipienty, do tukových nebo voskových mikrokuliček, které jsou potom dispergovány ve vehikulu. Mikrokuličky, přednostně tukové mikrokuličky, mohou mít průměr až do 1000 pm, přičemž pro parenterální podávání se dává přednost rozmezí hmotnostního středního průměru od 25 do 300 pm. Mikrokuličky, obsahující až do asi 70 % biologicky aktivního proteinu, peptidu, nebo polypeptidů, vykazují zpomalené zvolňování po různou dobu, v závislosti na rozpustnosti aktivní složky a povaze tuku, nebo vosku, povrchově aktivní látky, pufru a vehikula, kterých se používá.

V nejširším smyslu je předmětem vynálezu přípravek pro zpomalené uvolňování, obsahující směs tuku nebo vosku, nebo jejich směsi, biologicky aktivního proteinu, peptidu, nebo polypeptidu a oleje, polotuhého tuku, derivátu mastné kyseliny nebo jejich směsi, dispergovanou ve farmaceutickém a farmakologicky vhodném vehikulu. V přípravcích pro zpomalené uvolňování mohou být přítomny mikrokuličky a povlečené proteinové částice. Přípravek může obsahovat protein rozpuštěný v tuku nebo vosku, nebo může docházet k hydrofobní interakci nebo vazbě mezi účinnou přísadou a tukem nebo voskem. Při podávání hormonů se dává přednost

-4CZ 283053 B6 přípravkům, které obsahují hmotnostně 1 až 70 % růstového hormonu, somatomedinu, růstového faktoru, nebo biologicky aktivního fragmentu nebo jejich derivátu, přednostně ve formě částic o hmotnostní střední velikosti menší než 20 pm; asi 5 až 60 %, přednostně asi 10 až 48 % tuku, vosku nebo jejich směsi; asi 1 až 30 % a přednostně 5 až 20 % oleje; a popřípadě až asi 15 % excipientů, jako jsou povrchově aktivní látky, stabilizátory, konzervační činidla, soli nebo pufry nebo jejich směsi s dostatečným množstvím farmaceuticky a farmakologicky vhodného kapalného vehikula do 100 %. Jako vehikula se opět může použít vodného tlumeného systému nebo olejového systému, popsaného shora.

Pro parenterální podávání růstových hormonů, jako hovězího růstového hormonu, jsou vhodné mikrokuličky, obsahující hmotnostně asi 5 až 40 % pevného hormonu, přednostně ve formě částic o hmotnostním středním průměru nižším než 20 pm, které obsahují až do asi 20 % jiných excipientů, popsaných shora, vaši 40 až 95 % tuku nebo vosku, nebo jejich směsi; s částicemi o hmotnostním středním průměru v rozmezí o 25 do 300 pm. Tyto přípravky vykazují zpomalené uvolňování hormonu a dlouhodobě zvýšenou produkci mléka u mléčných krav v období laktace po dobu asi 2 týdnů. Zvýšená produkce mléka, které se s přípravky podle vynálezu dosáhne, je srovnatelná s produkcí, které se dosáhne při každodenním injekčním podávání hovězího růstového hormonu.

Pro podávání přípravků, obsahujících proteiny, peptidy nebo polypeptidy, které jsou rozpustné ve vodě, jako je hovězí růstový hormon, se dává přednost kapalinám, které jsou nemísitelné s vodou. Větší přednost se dává olejům nebo tekutým tukům, alkoholům nemísitelným s vodou aglykolům ajejich směsím. Vehikula se volí tak, aby jak dispergovaly, tak povlékaly směsi mikrokuliček a aby poskytovaly vhodnou viskozitu injekční směsi. Jako kritérií pro jejich volbu se používá hodnoty HLB (hydrofilně-lipofilní rovnováha) a viskozity.

Jako vehikul v přípravcích podle vynálezu se, ve smyslu tohoto výkladu, používá glyceridů mastných kyselin ajejich směsí, které jsou kapalné při teplotě okolí, jako jsou syntetické oleje, rostlinné oleje, jako je olivový olej, sezamový olej, podzemnicový olej, slunečnicový olej, sojový olej, olej ze semen bavlníku, kukuřičný olej, světlicový olej, palmový olej, řepkový olej a kokosový olej; živočišné oleje, jako jsou rybí oleje, oleje z rybích jater, spermové oleje; nebo frakce získané z těchto olejů; ajejich směsi, které mají hodnotu HLB v rozmezí od 1 do 5 a viskozitu v rozmezí od 10 mPa.s do 1000 mPa.s, při měření v Brookfieldově viskozimetru RTV, za použití vřetene č. 1.

Mikrokuličky podle vynálezu se mohou připravovat tak, že se účinná složka o velikosti částic v požadovaném rozmezí a jiné excipienty zamísí do roztaveného tuku, vosku nebo jejich směsi, přidá se olej, polotuhý tuk a/nebo derivát mastné kyseliny a potom se výsledná směs zpracuje na mikrokuličky různými technologiemi, jako je emulgace nebo atomizace (nebo prilování). Směs přísad a roztaveného tuku, vosku, nebo jejich směsi se také může zpracovávat mechanicky a potom se může ochladit, například za použití odstředivého disku. Alternativně se může směs účinných přísad, excipientů, tuku, vosků ajejich směsí a oleje ochladit na pevnou látku, která se může dále zpracovávat takovými postupy, jako je mletí, drcení apod.

Směsi podle vynálezu, vhodné pro injekční podávání, se snadno připravují dispergací proteinu, peptidu, nebo polypeptidu, excipientů, tuku, vosku, nebo jejich směsi a oleje při zvýšených teplotách, přímo ve vehikulu a následujícím ochlazením.

Mikrokuličky většiny tuků a směsí tuků a/nebo vosků, pokud jsou připraveny rozprašovací atomizací z horkých tavenin, jsou tvořeny částicemi, jejichž krystalická forma je většinou tvořena nestálou alfa-formou (podle analýzy DSC). Tvrdé tuky, jako je tristearin a tripalmitin, pokud jsou zpracovávány na mikrokuličky rozprašovací atomizací, si podržují alfa-krystalickou formu po dobu mnoha měsíců při skladování za teplot, které jsou typické pro teploty místnosti.

-5CZ 283053 B6

S překvapením se zjistilo, že pokud se v tavenině smísí tvrdé tuky s kapalnými tuky a směs se atomizuje rozprašováním na mikrokuličky, dochází k urychlené transformaci alfa-krystalů na beta krystaly při teplotě místnosti, což se projevuje v podstatně zlepšené fyzikální stabilitě a v důsledku toho výjimečných atributech pro farmaceutické parenterální přípravky. V závislosti na povaze směsi je transformace v podstatě ukončena v průběhu několika hodin, až několika dnů. Vhodné složení tvrdého a kapalného tuku je následující: 99 až 70 dílů tvrdých tuků, kterými jsou mono-, di-, nebo triglycerylestery s mastnými kyselinami, které mají převážně nasycený uhlovodíkový řetězec o délce 10 až 22 atomů uhlíku, přednostně 14 až 18 atomů uhlíku, a 1 až 30 dílů oleje nebo olejů, kterými jsou mono-, di-, nebo triglycerylestery mastných kyselin s uhlovodíkovým řetězcem, obsahujícím 2 až 10 atomů uhlíku.

Důsledkem urychlené spontánní transformace krystalické struktury mikrokuliček, vyrobených za použití tvrdých a kapalných tuků bez účinných složek nebo s nimi, je, že se viskozita suspenze těchto mikrokuliček ve vehikulu zvyšuje podstatně pomaleji při skladování za typických teplot místnosti nebo typických teplot při chlazení v lednici. Kapalné glycerylestery mastných kyselin se 2 až 12 atomy uhlíku v řetězci jsou obzvláště vhodné pro farmaceutické excipienty, poněvadž jsou výjimečně dobře biokompatibilní a biodegradovatelné. Mikrokuličky, které jsou takto vyrobeny, aby u nich proběhla rychlá transformace z nestabilní alfa-krystalické formy na termodynamicky stálejší beta-krystalickou formu, také vykazují následující vlastnosti: prášky jsou dobře sypké, mají nízkou lepivost a nízkou tendenci k aglomeraci během skladování, zvýšenou hustotu a zvýšenou tuhost při fyzikálním zpracovávání. Mimo to mají tyto zlepšené mikrokuličkové přípravky stejnou použitelnost pro parenterální prodloužené dodávání proteinů, peptidů, a polypeptidů a pro udržování zvýšených hladin těchto látek v krvi, za účelem zvýšení hmotnostního přírůstku a/nebo zvýšení produkce mléka, jako přípravky, popsané v US patentu č. 4 837 381. Konečně, podstatné zlepšení fyzikálních manipulačních vlastností a stability těchto mikrokuliček umožňuje jejich přípravu a balení na obchodně přijatelné přípravky, připravené pro bezprostřední použití, které mají výbornou skladovatelnost. Vynález je lépe popsán v následujících příkladech provedení. Příklady mají výhradně ilustrativní charakter a rozsah vynálezu v žádném ohledu neomezují.

Příklady provedení wnálezu

Příklady 1 až 7

Fyzikální stabilita mikrokuliček v neutrálním olejovém vehikulu

Tyto příklady ilustrují řadu přípravků ve formě mikrokuliček, které jsou výrazně stabilizovány tím, že se do přípravku zavede 2 až 15 % olejů, polotuhých tuků, nebo jejich směsí. Fyzikální stabilizace se měří tak, že se mikrokuličky suspendují v neutrálním olejovém vehikulu na bázi triglyceridů a suspenze se podrobí podmínkám zkoušení, které simulují skladování suspenze v teplém prostředí o teplotě buď 30 °C, nebo 38 °C. Při zkoušce, prováděné v tomto příkladu, se 3 g mikrokuliček suspendují v 7,5 ml neutrálního triglyceridového oleje a suspenze se nechá pomalu rotovat (2-6 min'¹) při nastavené teplotě tak dlouho, až již suspenze v nádobě neteče. Za želatinační dobu se považuje doba, která uplyne před tím, než se tok suspenze zastaví. Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce 1. Pokud nebyla zjištěna přesná doba, je zde uvedeno rozmezí želatinační doby. Doba je uvedená v hodinách, pokud není uvedeno jinak. Každá šarže, každý druh, nebo každý typ tvrdého tuku nebyl stabilizován ve stejném rozsahu. Želatinační doba byla proto závislá na volbě tvrdého tuku a na množství a typu oleje nebo polotuhého tuku, přidaného ke směsi v podobě mikrokuliček. Jak však výsledky ukazují, přídavek oleje nebo polotuhého tuku podstatně zvyšuje želatinační dobu každé konkrétní šarže, každého druhu nebo každého typu tvrdého tuku. V závorkách je v tabulce uvedeno také stáří mikrokuliček, poněvadž je důležitým určujícím faktorem želatinační doby, vzhledem ktomu, že transformace krystalů z méně stálých alfa-forem na stálejší beta-formy je časově závislá.

-6CZ 283053 B6

Tabulka 1

Tuk	olej nebo polotuhý tuk	želatinační doba (hodiny) stáří mikrokuliček (dny) při 30°C	při 38°C
GTS¹ l.a.	žádný	1,5/1/
b.	žádný	6-24/14/	10 min/29/
c.	10% Miglyol² 812 ^(R)	>168/1/	6/15/
d.	5% GDS		6-24/21/
2.a.	žádný		7 min/1/
b.	10% Miglyol 812 ^(R)		1(0
c.	10% Miglyol 812 ^(R)		2/80/
3.a	žádný	<1 /1/
b.	žádný	1,3/6/	7 min /39/
c.	2% Miglyol 812^(R)	2/8/
d.	5% Miglyol 812^(R)	1,3/8/	12 min /22/
e.	10% Miglyol 812^(R)	6-24/8/	1 /29/
f.	15% Miglyol 812^(R)	24/1/
g-	2 % GDS	<2/1/
h.	5 % GDS	3/21/	7 min /39/
i.	10% GDS	1,3/1/
j-	5 % Triacetin	8-24/1/	1,25 /8/
k.	2 % GDS a	8-24/1/
4.a.	10% Miglyol 812 ^(R)žádný	1,6/1/
b.	10% Miglyol 812^(R)	24/1/
5.a.	žádný	6-24/21/
b.	10% Miglyol 812^(R)	>168/1/
6.a.	žádný	5 min /1/
b.	10% Miglyol 812^(R>	6-24/1/
GDS³ 7.a.	žádný	1,1 /120/
b.	10% Miglyol 812^(R)	2/0/

1. V příkladech 1 až 5 se používá různých šarží glyceryltristearátu (GTS) od firmy Huls of America, obchodního označení Dynasan 118. V příkladu 6 se používá výrobku Pfaltz and Bauer.

2. Miglyol 812 ^(R) je neutrální triglyceridový olej, výrobek firmy Huls of America.

3. Zdroj materiálu: Gattefosse, obch. označení Gelucire 64/02.

Příklad 8

Připraví se nestabilizovaný přípravek na bázi glyceryltristearátu (GTS) ve formě mikrokuliček a stabilizovaný GTS mikrokuličkový přípravek následujícího složení:

nestabilizované mikrokuličky: 28 % hovězí somatotripin, % benzoan sodný,

0,14 % Pluronic F68 ^(R)', % glyceryltristearát, stabilizované mikrokuličky: 28 % hovězí somatotropin, % benzoan sodný,

0,14 % Pluronic F68^(R), % glyceryltristearát, % Miglyol 812 ^<R),

Oba přípravky ve formě mikrokuliček se suspendují ve stejném množství neutrálního oleje jako vehikula a uloží se při 25 nebo 4 °C. Periodicky se odebírají vzorky uložených přípravků, nechají se ohřát na teplotu místnosti (22 až 25 °C) a měří se jejich viskozita (Brookfieldův viskozimetr T, vřeteno C, 100 min’¹). Výsledky, uvedené v tabulce 2, ukazují, ze za typických podmínek skladování vykazuje stabilizovaný přípravek podstatně nižší přírůstek viskozity s časem.

Poznámka: ¹ Pluronic F68 ^(R) je blokový kopolymer ethylenoxidu a propylenoxidu, prodávaný firmou BASF

Tabulka 2

Porovnání viskozity nestabilizovaných a stabilizovaných přípravků ve formě mikrokuliček na bázi GTS

Viskozita (mPa.s) měřená při 25 °C

doba	skladování při 25 °C	skladování při 4 °C
nestabilizováno	stabilizováno	nestabilizováno	stabilizováno
0 den	66	66	66	66
1 den	452	—	168	—
5 den	2300	—	159	—
1 týden	7300	119	159	70
2 týdny	--	195	159	71
4 týdny	-	442	-	79
8 týdnů	-	1971	164	82
13 týdnů	-	2629	270	74
26 týdnů	—	2629	624	70
39 týdnů	-	5280	741	71

Příklad 9

Porovnání a analýza produkce mléka

Vyrobí se mikrokuličky o stejném složení, jako mají nestabilizované a stabilizované mikrokuličky, vyrobené podle příkladu 8, a zkoušejí se na mléčných kravách, aby se vyhodnotila jejich účinnost při produkci mléka. Pro výrobu injekcí se mikrokuličky suspendují v neutrálním triglyceridovém oleji Miglyol 812^(R). V tomto příkladu se druh ošetření po uplynutí dvoutýdenního injekčního období vymění. Krávy ze skupiny B dostávají tedy nestabilizované přípravky po dobu prvních čtyř týdnů s injekcemi na začátku prvního a třetího týdne. Na začátku 5., 7. a 9. týdne se těmto kravám injikuje stabilizovaný přípravek. Krávy ze skupiny C naproti tomu dostávají stabilizovaný přípravek na počátku 1. a 3. týdne a potom nestabilizovaný přípravek na začátku 5., 7. a 9. týdne. Výsledky z tohoto pokusu jsou uvedeny v tabulce 3. Provede se statistické porovnání obou přípravků tím, že se stanoví střední rozdíl v odezvě mezi průměrnou produkcí mléka u každé krávy při dávkování nestabilizovaného přípravku a průměr

- 8 CZ 283053 B6 nou produkcí mléka při dávkování stabilizovaného přípravku. Produkce mléka v průběhu 5. a 6. týdne se do statistické analýzy nezahrnuje, poněvadž v tomto období může docházet k interakcím mezi dvěma přípravky. Střední rozdíl je -0,9 ± 4,7 %, což není statisticky významné (p 0,05). Závěrem je tedy možno konstatovat, že produkce mléka za použití obou přípravků je v podstatě stejná.

Tabulka 3

Porovnání a analýza produkce mléka za použití nestabilizovaných a stabilizovaných přípravků ve formě mikrokuliček s pozvolným uvolňováním účinné složky

Procentické zvýšení produkce mléka skupina skupina

dvoutýden kráva	1 přípn	2 ivek 1	3	4 přípravek 2	5	rozdíl
1	18,5	24,2	24,6	15,5	15,4	2,9
2	12,4	15,3	7,3	9,7	6,3	5,9
3	5,6	14,3	13,8	9,9	9,8	0,2
4	6,4	2,7	12,9	7,3	12,2	-5,2
5	0,9	4,5	12,8	7,9	8,1	-5,3
6	-4,5	8,3	8,1	8,0	13,9	-9,0
7	8,5	31,9	33,4	21,7	24,4	-2,9
8	4,7	10,9	4,5	7,9	9,9	-1,1
9	7,4	16,7	16,4	14,3	14,3	-2,3
10	18,5	19,2	23,5	21,3	22,3	-3,0
dvoutýden	1	2	3	4	5	rozdiT
kráva
	přípravek 2		přípravek 1
1	-6,9	5,3	12,3	3,5	6,2	5,7
2	4,0	6,5	-3,2	3,0	5,0	-1,2
3	3,1	4,6	8,2	7,1	8,7	4,0
4	4,3	10,5	15,4	9,9	12,3	3,7
5	2,9	15,4	19,5	16,9	11,7	5,2
6	4,9	4,8	9,8	-6,9	-13,0	-7,4
7	2,9	4,9	7,7	2,5	-3,1	-4,2
8	7,7	11,7	12,7	9,1	11,9	1,6
9	9,9	14,1	18,1	6,0	6,3	-5,8
10	13,3	20,4	23,1	13,5	15,6	-2,6

střední rozdíl -0,9 +/- standardní odchylka +/- 4,7 + Rozdíl je vyjádřen pro každou krávu a jedná se o rozdíl mezi průměrnou produkcí mléka při nasazení přípravku 1 (nestabilizovaného) ve dvojtýdnech 1 a 2 u skupiny B nebo ve dvojtýdnech 4 a 5 u skupiny C a průměrnou produkcí mléka při nasazení přípravku 2 (stabilizovaného) ve dvojtýdnu 4 a 5 u skupiny B nebo dvojtýdnu 1 a 2 u skupiny C. V důsledku záměny přípravků na začátku 3. dvojtýdne se experiment vyrovnává, pokud se týče pořadí dávkování. Výsledky v průběhu třetího dvojtýdne se nezpracovávají statisticky, aby se snížil

-9CZ 283053 B6 možný přenosový účinek jednoho druhu ošetření do druhého. Střední rozdíl odráží rozdíl v odezvě na tyto dva přípravky.

Claims

1. Farmaceutický přípravek ve formě mikrokuliček pro parenterální podávání, obsahující biologicky aktivní látku, zvolenou ze souboru, zahrnujícího proteiny, peptidy a polypeptidy, a tuhý tuk nebo vosk, nebo jejich směs, vyznačující se tím, že dále obsahuje olej, tvořený monoestery, diestery a/nebo triestery mastných kyselin se 2 až 18 atomy uhlíku a glycerolu, nebo polotuhý tuk, tvořený estery mastných kyselin a glycerolu o teplotě tání v rozmezí od 15 do 30 °C, nebo jejich směs, přičemž vzájemný poměr jednotlivých složek přípravku je následující: 20 až 70 % hmotnostních biologicky aktivní látky, 30 až 95 % tuhého tuku nebo vosku, nebo jejich směsi a 1 až 30 % hmotnostních oleje nebo polotuhého tuku, nebo jejich směsi.

2. Farmaceutický přípravek podle nároku 1, obsahující jako biologicky aktivní protein hovězí, vepřový nebo ptačí růstový hormon, vyznačující se tím, že jako olej obsahuje neutrální triglyceridový olej v množství 5 až 20 % hmotnostních.

3. Farmaceutický přípravek podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že mikrokuličky jsou suspendovány ve farmaceuticky a farmakologicky vhodném kapalném vehikulu.

4. Způsob výroby farmaceutického přípravku podle některého z nároků 1, 2 nebo 3, při němž se smísí v tavenině tuhý tuk nebo vosk, nebo jejich směs a biologicky aktivní látka, zvolená ze souboru, zahrnujícího proteiny, peptidy a polypeptidy, a vzniklá hmota se zpracuje na přípravek ve formě mikrokuliček, který se následně popřípadě suspenduje ve farmaceuticky a farmakologicky vhodném kapalném vehikulu, vyznačující se tím, že se ke hmotě před jejím zpracováním nebo v průběhu její výroby přidá olej nebo polotuhý tuk, nebo jejich směs.