NO300717B1 - Forbedret fremgangsmåte ved fremstilling av mikrokuleblanding - Google Patents

Description

U.S.-patent 4.837.381 beskriver en mikrokuleblanding av fett eller voks eller en blanding derav og et biologisk aktivt protein, peptid eller polypeptid egnet for parenteral administrasjon. Patentet beskriver nytten av blandingene for langsom avgivelse av et protein, peptid eller polypeptid i en parenteral administrasjon, og beskriver metoder for å øke og bibeholde et øket nivå av veksthormon i blodet hos behandlede dyr i lang tid, og derved øke vekt-økningen hos dyr og øke melkeproduksjonen hos melkedyr ved administrasjon av blandinger ifølge oppfinnelsen.

Fra EP 42 249 og EP 195 476 er det også kjent å fremstille terapeutiske partikler/mikrokuleblandinger inneholdende lipider.

Det er spesielle problemer ved utvikling av farmasøytiske blandinger med forlenget avgivelse av biologisk aktive makromolekyler p.g.a. størrelsen og kompleksiteten av makromolekylene, spesielt proteiner, som er tilbøyelige til kjemisk og strukturell forandring ved blanding med farmasøytiske eksipienter, ved bearbeiding og ved lagring. Disse problemer blir forstått av fagfolk innenfor området farmasøytisk formulering, og kan kate-goriseres som problemer med kjemisk stabilitet. Utilstrekkelig stabilitet av farmasøytiske blandinger som fremkommer ved irrever-sibel forandring av makromolekylenes struktur og/eller interaksjon med eksipientene kan føre til blandinger som enten er inaktive eller som ikke gir det ventede nivå av biologisk respons.

En annen kategori av problemer for farmasøytiske formuleringer er fysisk stabilitet. Et åpenbart eksempel er nedslitning av

tabletter eller implantater under bearbeiding, emballering eller lagring. Et annet eksempel er den fysiske separasjon av en krem, pasta eller gel til komponentdeler som kan føre til en heterogen fordeling av aktiv bestanddel samt forandring av konsistensen. Konsekvensen av en slik fysisk forringelse av formuleringen kan være tap av ønskede egenskaper som grei anvendelse, og en uforut-sigbar dosering til pasienten. Mindre åpenbare fysiske forandringer i en farmasøytisk formulering omfatter forskjellige forandringer av eksipientenes krystallinske eller mikroskopiske struktur. Disse typer av forandringer kan føre til markert avvik i avgivelsen av aktive virkemidler. Det burde være klart at forandringer i den fysiske stabilitet av farmasøytiske doseringsformer, enten de er for oral eller parenteral administrasjon, ville være mest problematisk for preparater med forlenget avgivelse. Det er et sine qua non for kommersielt brukbare farmasøytiske doseringsformer med forlenget avgivelse at de kan opprettholde avgivelses-egenskapene gjennom hele produksjonssekvensen og etter relativt lange lagringstider. Fysisk stabilitet for den farmasøytiske doseringsformen er ment å skulle beskrive både konstante håndteringsegenskaper såsom hardhet, flytbarhet eller viskositet, og konstant farmakologisk yteevne.

Det er et formål ifølge denne oppfinnelse å tilveiebringe en ny forbedret fremgangsmåte for fremstilling av stabile blandinger. Et annet formål er å tilveiebringe en mikrokuleblanding som kan emballeres som en greit anvendelig formulering med god lagrings-evne. Disse og andre formål vil bli klargjort i beskrivelsen av oppfinnelsen.

Den foreliggende oppfinnelse vedrører en forbedret fremgangsmåte for fremstilling av en mikrokuleblanding, ved smelteblanding av 3 0% til 95% av et fett eller en voks eller en blanding derav, og 2% til 70% av et biologisk aktivt protein, peptid eller polypeptid slik at det dannes en blanding, og prilling av nevnte blanding til å danne nevnte mikrokuleblanding, som karakteriseres av at forbedringen omfatter innblanding av 1% til 3 0% av en olje, et halvmykt fett, et fettsyrederivat eller en blanding derav før prilling av nevnte blanding, og eventuelt at fremgangsmåten ytterligere omfatter oppslemming av mikrokuleblandingen i en farmasøytisk eller farmakologisk akseptabel flytende bærer.

Det er overraskende blitt funnet at tilsetning av en liten mengde olje, halvmykt fett og/eller fettsyrederivat til blandingen av fett og/eller vokser og det biologisk aktive protein, peptid eller polypeptid før prillingen, vil muliggjøre akselerert omdanning fra alfakrystallstrukturen til betaformen. Fordi betaformen er mye mere stabil vil blandingene fremstilt ifølge oppfinnelsen vise øket stabilitet. Denne oppfinnelse er spesielt overraskende, tatt i betraktning at visse oljer har vært anvendt som bærer for blandinger ifølge tidligere teknologi etter prillingen, men da ikke førte til den akselererte krystallomdanningen.

Blandingene er egnet for parenteral administrasjon til dyr.

De biologisk aktive proteiner, peptider eller polypeptider omfatter veksthormoner, somatomediner, vekstfaktorer og andre biologisk aktive fragmenter eller derivater derav.

Ifølge oppfinnelsen fremstilles det en mikrokuleblanding som kan emballeres i en greit anvendbar formulering med god lagrings-evne på grunn av sin økede stabilitet.

Vokser og fett som er egnet for anvendelse i blandingene fremstilt ifølge denne oppfinnelse har vanligvis smeltepunkter høyere enn 40°C. Voksen som benyttes ifølge oppfinnelsen kan defineres som fremsatt i Hawley's The Condensed Chemical Dictionary. ellevte utgave, som en lavtsmeltende organisk blanding eller forbindelse med høy molekylvekt, fast ved romtemperatur og vanligvis med lignende sammensetning som fett og oljer, bortsett fra at den ikke inneholde glycerider. Noen er hydrokarboner; andre er estere av fettsyrer og alkoholer. Disse forbindelser omfatter mettede eller umettede langkjedede C10-C24-fettsyrer, alkoholer, estere, salter, etere eller blandinger derav. De blir klassifisert som lipider. Vokser er termoplastiske, men siden de ikke er høypolymerer, blir de ikke regnet til plastfamilien. Vanlige egenskaper er vannavstøtning; jevn tekstur; de er ikke-toksiske; de er fri for frastøtende lukt og farge. De er brenn-bare og har gode dielektriske egenskaper. De er løslige i de fleste organiske løsningsmidler og er uløselige i vann. Hovedtypene er følgende:

I. Naturlige

1. Animalske (bivoks, lanolin, skjellakk-voks, kinesisk insektvoks) 2. Vegetabilske (karnauba, kandelilla, laurbær, sukkerrør)

3. Mineralske

(a) Fossile eller jordvokser (ozokeritt, ceresin,

montan)

(b) petroleumvokser (parafin, mikrokrystallinsk)

(slack eller skjellvoks)

II. Syntetiske

1. Etyleniske polymerer og polyoleter-estere ("Carbowax", sorbitol)

2. Klorerte naftalener ("Halowax")

3. Av hydrokarbontypen via Ficher-Tropsch syntese.

Fettet som benyttes ifølge bppinnelsen kan defineres som fremsatt i Hawley's The Condensed Chemical Dictionary, ellevte utgave, som en glycerylester av høyere fettsyrer såsom stearinsyre og palmitinsyre. Slike estere og deres blandinger er faste stoffer ved romtemperatur, og har krystallinsk struktur. Spekk og talg er eksempler. Det er ingen kjemisk forskjell mellom et fett og en olje, den eneste forskjell er at fett er fast ved romtemperaur og oljene er flytende. Betegnelsen "fett" refererer vanligvis spesielt til triglycerider, mens "lipid" er altomfattende.

Fettet er fortrinnsvis sammensatt av mono-, di- eller triglycerylestere av langkjedede <C>10<-C>24-fettsyrer. Mono-, di- eller triglyceridene omfattes overveiende av stearater, palmitater, laurater, linoleater, linolenater og oleater, og rester eller blandinger derav med smeltepunkt høyere enn 50°C blir mest foretrukket. Glyceryltristearat er et mest foretrukket fett. Dessuten er lipofile salter av fettsyrer såsom magnesiumstearat og lignende også egnet.

Derivatene som benyttes ifølge oppfinnelsen av olje, halvmykt fett eller fettsyrer er virkemidler som er løselige i det smeltede harde fett og som akselererer fysisk omforming av de harde fett-krystaller fra mindre stabile former til mere stabile former ved eller nær romtemperatur etter at det smeltede harde fett eller voks er blitt prillet. Fortrinnsvis kan oljen eller det halvmyke fett omfatte blandinger eller relativt rene former av mono-, di-eller triglycerylestere med korte til midlere fettsyrekjede-lengdef, dvs. C2 til C18. Halvmykt fett refererer til glyceryl-estere som har smeltepunkter ved eller nær romtemperatur. Fettsyrederivater omfatter fettsyrer, alkoholer, estere, etere, salter med kort og midlere kjedelengde, eller blandinger derav. Glyceridoljer og halvmykt fett er spesielt egnet fordi de er fysiologiske bestanddeler av kroppen og er biokompatible og biologisk nedbrytbare.

Mikrokulene fremstilt ifølge oppfinnelsen blir oppslemmet i en farmasøytisk og farmakologisk akseptabel væske for å oppnå en blanding med langsom avgivelse for parenteral administrasjon. Bæreren kan være vandige bufferede systemer eller oljesystemer. Oljesystemet kan avledes fra animalske eller vegetabilske kilder, eller være syntetisk. Foretrukne bærere omfatter nøytrale mono-, di- eller triglyceridvæsker eller blandinger derav. En nøytral olje er én som ikke inneholder noen restsyre. Bærere som egner seg for anvendelse i blandingene fremstilt ifølge denne oppfinnelse, omfatter vandige systemer såsom bufferede saltløsninger; organiske løsningsmidler såsom glykoler og alkoholer; og væsker som ikke er blandbare med vann såsom oljer, avhengig av løselig-heten for den aktive bestanddel som administreres.

Biologisk aktive proteiner, peptider og polypeptider som egner seg for administrasjon i blandingene fremstilt ifølge denne oppfinnelse, omfatter veksthormoner, somatomediner, vekstfaktorer og andre biologiske aktive fragmenter og derivater derav. Foretrukne proteiner omfatter bovine, porcine og aviære veksthormoner; og er ment å omfatte de som er av naturlig, syntetisk, rekombinant eller biosyntetisk opprinnelse. Dessuten er metaller eller metall-forbindelser assosiert med biologisk aktive proteiner, peptider og polypeptider, så vel som syresalter, derivater og komplekser og antihydratiseringsmidler egnet for tilsetning til blandingen fremstilt ifølge oppfinnelsen.

Stabilisatorer, konserveringsmidler, tensider, salter, buffere eller blandinger derav kan eventuelt innbefattes i blandingene fremstilt ifølge oppfinnelsen. Foretrukne stabilisatorer omfatter dehydroeddiksyre, salicylanilid, sorbinsyre, borsyre, benzosyre og salter derav; natriumhitritt og natriumnitrat. Om ønsket kan mengdene av de nevnte stoffene som egner seg for anvendelse i denne oppfinnelse, ligge i området fra 0,1% til 20% på vektbasis.

Foretrukne overflateaktive stoffer for anvendelse i blandingene fremstilt ifølge oppfinnelsen, og som inneholder'' biologisk aktive makromolekyler, er ikke-ioniske av karakter såsom polyoksyetylensorbitanmono-oleat (20 mol etoksylering), og blokk-kopolymerer av etylenoksyd og propylenoksyd. Mengdene av overflateaktive stoffer som egner seg for anvendelse i oppfinnelsen, ligger i området fra 0,1% til 10,0% på vektbasis.

Det er nå enestående blitt funnet at et øket blodnivå av veksthormoner kan oppnås og holdes vedlike for utstrakte tidsperioder, likesom øket vektøkning og øket melkeproduksjon hos melkedyr, ved å injisere dyrene med blandinger fremstilt ifølge oppfinnelsen i en egnet bærer. Forhøyet blodnivå av de biologisk aktive proteiner, peptider og polypeptider blir vanligvis observert og satt i sammenheng med velgjørende og/eller terapeutiske virkninger. Effektene omfatter vektøkning, øket veksthastighet, øket melkeproduksjon hos melkedyr og medfølgende øket tilgjengelighet av melk til diende avkom av behandlede dyr, forbedret muskelstørrelse, forbedret foringseffektivitet, redusert kroppsfett og forbedret forhold mellom magert kjøtt og fett. Vedlikeholdet av det forhøyede blodnivå er en indikasjon på langsom avgivelse av den aktive bestanddel. Egenskaper såsom øket melkeproduksjon, veksthastighet, forbedret foringseffektivitet og

øket andel av magert kjøtt blir generelt observert når det opprett-holdes et forhøyet blodnivå av den aktive bestanddel. Oppfinnelsen omfatter fremgangsmåte for fremstilling av blandingene heri som kan anvendes til forbedring av melkeproduksjonen, økning av vekst-hastigheten, forbering av foringseffektiviteten, økning av magert kjøtt hos dyr, og økning og opprettholdelse av hormonnivået i blodstrømmen hos dyr.

En foretrukket utførelse av denne oppfinnelse medfører tilsetning av det biologisk aktive protein, peptid eller polypeptid i fett- eller voksmikrokuler og olje eller halvmykt fett som eventuelt også kan inneholde noen eller alle av de eksipienter som er beskrevet ovenfor, og som deretter blir oppslemmet i bæreren. Mikrokulene, fortrinnsvis mikrokuler av fett, kan være opp til 1000 /xm i diameter, med et vektmidlere størrelsesområdet på 25 jum til 300 Am som foretrukket for parenteral administrasjon. Mikrokuler som inneholder opp til ca. 70% av et biologisk aktivt protein, peptid eller polypeptid har forsinket avgivelse i forskjellige tidsperioder, avhengig av den aktive bestanddelens løselighet og karakteren av voksen eller fettet, det overflateaktive stoff, bufferen og bæreren som anvendes.

I sin bredeste oppfatning er oppfinnelsen fremstilling av en blanding med langsom avgivelse, omfattende en blanding av fettet eller voksen eller blandingen derav, et biologisk aktivt protein-, peptid- eller polypeptidmedikament og en olje, halvmykt fett, fettsyrederivat eller blanding derav, oppslemmet i en farmasøytisk og farmakologisk akseptabel bærer. Mikrokuler og belagte protein-partikler kan være tilstede i blandingen med langsom avgivelse. Blandingen kan være proteinet løst i fettet eller voksen, eller det kan være hydrofobisk interaksjon eller binding av den aktive bestanddel til fettet eller voksen. For administrasjon av hormon anvendes blandinger omfattende på vektbasis 1% til 70% av veksthormon, somatomedin, vekstfaktor eller biologisk aktivt fragment eller derivat derav fortrinnsvis med en vektmidlere partikkel-størrelse mindre enn 20 /im, 5% til 60% og fortrinnsvis 10% til 48% av fettet, voksen eller blandingen derav; 1% til 3 0% og fortrinnsvis 5% til 20% av oljen; eventuelt inneholdende opp til 15% av eksipientene såsom tensider, stabilisatorer, konserveringsmidler, salter eller buffere eller blandinger derav med en til-strekkelig mengde av en farmasøytisk og farmakologisk akseptabel flytende bærer til totalt 100%. Bæreren er atter det vandige bufferede eller oljesystemet beskrevet ovenfor.

For parenteral administrasjon av veksthormoner såsom bovint veksthormon, har mikrokuler omfattende på vektbasis 5% til 40% av det faste hormon og som fortrinnsvis har en vektmidlere partikkel-størrelse på mindre enn 2 0 /im, inneholdende opp til 2 0% av de andre eksipienter som beskrevet ovenfor i 40% til 95% av fett eller voks eller en blanding derav; og med ét vektmidlere partikkel-størrelseområde på 25 /im til 300 /im, demonstrert forlenget avgivelse av hormonet og opprettholdt økning i melkeproduksjonen hos melkekyr i ca. to uker, og blir foretrukket. Disse foretrukne blandingene har demonstrert en øket melkeproduksjon som er sammen-lignbar med den som oppnås ved daglig injeksjon av bovint veksthormon.

For administrasjon av blandinger inneholdende vannløselige proteiner, peptider eller polypeptider såsom bovint veksthormon, blir det foretrukket væsker som er ikke blandbare med vann, mens alkoholer og glykoler som ikke er blandbare med oljer eller flytende fett og vann og blandinger derav er mere foretrukket. Bærerne blir valgt for både å dispergere og belegge blandingen av mikrokuler, og også for å gi en akseptabel viskositet for injeksjonsblandingen ved anvendelse av HLB-verdier (hydrofil lipofil balanse) og viskositet som kriterier ved valget av disse.

På denne basis vil fettsyreglycerider og blandinger derav som er flytende ved omgivende temperatur, innbefattet syntetiske oljer; vegetabilske oljer, såsom oliven, sesamfrø, jordnøtt, solsikkefrø, soyabønne, bomullsfrø, mais, saflor, palme, rapsfrø og kokosnøtt; animalske oljer såsom fiskeoljer, fiskeleveroljer, spermoljer; eller fraksjoner avledet derav; og blandinger derav; som har HLB-verdier i området 1 til 5 og viskositeter i området på fra 10 eps til 1000 eps målt med et Brookfield-viskosimeter RTV ved anvendelse av en spindel nr. 1, finne anvendelse som bærere for blandinger fremstilt ifølge den foreliggende oppfinnelse.

Mikrokulene fremstilt ifølge oppfinnelsen kan fremstilles ved tilsetning av den aktive bestanddel med ønsket partikkelstørrelse, og andre eksipienter med smeltet fett, voks eller blanding derav og innblanding av oljen, det halvmyke fett og/eller fettsyre-derivatene, og deretter fremstilling av mikrokuler av den resulterende blanding ved forskjellige teknikker såsom emulgering eller atomisering (eller prilling) av blandingen, eller ved bearbeiding av blandingen av bestanddeler og smeltet fett, voks eller blanding derav mekanisk og avkjøling, f.eks. ved anvendelse av en sentrifugalskive. Alternativt kan blandingen av aktive bestanddeler, eksipienter, fett, voks og blandinger derav og olje, avkjøles slik at det fremkommer et fast stoff som deretter kan bearbeides ved fremgangsmåter såsom knusing, maling og lignende.

Blandinger fremstilt ifølge oppfinnelsen som egner seg for injeksjon, blir greit fremstilt ved oppslemming av proteinet, peptidet eller polypetidet, eksipientene, fettet, voksen eller blandinger derav, og olje ved forhøyet temperatur direkte i bæreren og avkjøling.

Mikrokuler av de fleste fett og blandinger av fett og/eller vokser som fremstilt ved forstøvningsatomisering fra den varme smelte frembringer partikler hvis krystallform basert på DSC-analyse er for det meste ustabil alfaform. Hardt fett såsom tristearin og tripalmitin vil ved forstøvningsatomisering beholde alfakrystallformen i mange måneder når det lagres ved typiske romtemperaturer. Overraskende vil blandinger av hardt fett med flytende fett, når de smelteblandes og forstøvningsatomiseres for fremstilling av priller eller mikrokuler, vise akselerert omdanning av alfa- til betakrystaller ved romtemperatur, vise markert forbedret fysisk stabilitet, og derfor oppnå eksepsjonelle egenskaper for farmasøytiske parenterale blandinger. Avhengig av blandingen er omdanningen i alt vesentlig fullstendig i løpet av flere timer til flere døgn. Passende blandinger av hardt og flytende fett er som følger: 99 til 70 deler hardt fett som er mono-, di- eller triglycerylestere med fettsyrer som har i alt vesentlig mettede hydrokarbonkjedelengder på CIO til C22, fortrinnsvis fra C14 til C18, og med 1 til 30 deler olje(r) som er mono-, di- eller triglycerylestere med fettsyrer som har hydrokarbonkjedelengder på C2 til CIO.

Som en konsekvens av den akselererte spontane omdanning av mikrokulenes krystallinske struktur gjennomført med det harde og flytende fett med eller uten aktive bestanddeler, vil mikrokulene når de oppslemmes i bæreren, vise mye langsommere økning i viskositeten når de lagres ved typiske romtemperaturer eller ved typiske kjøleskapstemperaturer. Flytende glyceridestere med fettsyrer med kjedelengder på C2 til C12 er spesielt egnet for farmasøytiske eksipienter, fordi de er eksepsjonelt biokompatible og biologisk nedbrytbare. Mikrokuler fremstilt på denne måten for å oppnå rask omdanning fra den ustabile alfakrystallform til den termodynamisk mere stabile betakrystallform, har også følgende egenskaper: pulvere viser god flytbarhet, liten sammenklebing, lav tendens til agglomerering under lagring, øket tetthet og større hardhet ved fysisk bearbeiding. Dessuten har disse forbedrede mikrokuleformuleringene den samme anvendbarhet for parenteral forlenget avgivelse av proteiner, peptider og polypeptider, og for vedlikehold av forhøyet blodnivå med det formål å forbedre vektøkningen og/eller økningen i melkeproduksjonen, som det er beskrevet i USA-patent nr. 4.837.381. Endelig vil den markerte forbedring av den fysiske håndtering og stabiliteten for disse mikrokulene gjøre det mulig å fremstille og emballere en lett anvendelig kommersielt akseptabel formulering med utmerkede lagringsevneegenskaper. Oppfinnelsen skal videre illustreres ved følgende eksempler.

EKSEMPLER 1- 7

Fysisk stabilitet av

mikrokuler i nøytral oliebærer

Disse eksempler illustrerer et område av mikrokuleblandinger som blir tydelig stabilisert ved tilsetning til blandingen av 2-15% oljer, halvmykt fett eller blanding derav. Fysisk stabili-sering blir målt ved oppslemming av mikrokulene i en nøytral triglyceridoljebærer og underkaste oppslemmingen for prøve-betingelser som er utformet for å etterligne lagring av oppslemmingen i varmt omgivende miljø ved enten 30°C (86°F) eller 38°C (100°F). I testen ifølge dette eksempel blir 3 g mikrokuler oppslemmet i 7,5 ml nøytral triglyceridolje, og oppslemmingen blir langsomt omrørt (2-6 OPM) ved den fastsatte temperatur inntil oppslemmingen ikke lenger flyter i beholderen. Geldanningstiden er den omtrentelige tid som er gått inntil oppslemmingen ikke lenger flyter. Resultatene er gitt i Tabell 1 nedenfor. Det er gitt områder for geldanningstidene når det ikke ble observert en eksakt tid. Tiden er i timer dersom intet annet er angitt. Hver porsjon, kilde eller type av hardt fett ble ikke stabilisert i samme utstrekning; men geldanningstiden var avhengig av valget av hardt fett og mengde og type av olje eller halvmykt fett tilsatt til mikrokuleblandingen. Som resultatene viser ville imidlertid tilsetning av olje eller halvmykt fett signifikant øket geldanningstiden for hver spesiell porsjon, kilde eller type av hardt fett. Alderen på mikrokulene er også gitt i parentes i tabellen nedenfor, fordi det er en viktig faktor for geldanningstiden, siden krystallomdanningen fra mindre stabil alfaform til mere stabil betaform er tidsavhengig.

EKSEMPEL 8

En ustabilisert glyceryltristearat (GTS) mikrokuleformulering og stabilisert GTS-mikrokuleformulering blir fremstilt med følgende sammensetninger:

Begge mikrokuleformuleringene blir oppslemmet i samme mengde nøytral oljebærer og lagret ved 25 eller 4°C. Periodisk fjernes prøver av disse formuleringene fra lagringen og får varme seg opp til romtemperatur (22-25°C) før måling av viskositeten (Brookfield Viscométer T spindle C, 100 RPM). Resultater gjengitt i Tabell 2 nedenfor viser at under typiske lagringsbetingelser har den stabiliserte formuleringen tydelig langsommere viskositetsøkning over tid.

<1>1. Pluronic F68<®> er en blokk-kopolymer av etylenoksyd og propylenoksyd som selges av BASF Corporation.

EKSEMPEL 9

Sammenligning og analyse av melkeproduksjon

Mikrokuler med samme sammensetning som de ustabiliserte og stabiliserte mikrokulene i Eksempel 8 blir fremstilt og testet på melkekuer for å evaluere effektiviteten av melkeproduktet. For injeksjon blir mikrokulene oppslemmet i Miglyol 812<®>, en nøytral triglyceridolje. I dette eksempel blir behandlingene kryssbyttet etter to injeksjonsperioder på to uker. Dvs. at gruppe B kuer får de ustabiliserte formuleringene i de første 4 uker med injeksjoner ved begynnelsen av ukene 1 og 3. Ved begynnelsen av ukene 5, 7 og 9 blir disse kuene injisert med den stabiliserte formulering. Gruppe C kuer får den stabiliserte formulering ved begynnelsen av ukene 1 og 3, deretter den ustabiliserte formulering ved begynnelsen av ukene 5, 7 og 9. Resultater av dette eksperiment er gitt i Tabell 3 nedenfor. En statistisk sammenligning av de to formuleringer blir utført ved bestemmelse av den midlere differanse i respons mellom den gjennomsnittlige melkeproduksjon for hver ku når den ble dosert med den ustabiliserte formulering, og den gjennomsnittlige melkeproduksjon når den ble dosert med den stabiliserte formulering. Melkepoduksjonen i løpet av ukene 5 og 6 er ikke tatt med i den statistiske analyse, fordi det kunne være interaksjon mellom de to formuleringene i løpet av denne periode. Den midlere differanse er -0,9 + 4,7%, hvilket ikke er statistisk signifikant, p > 0,05. Det konkluderes med at melkeproduksjonen fra de to formuleringene er svært nær den samme.

Claims (5)

1. Forbedret fremgangsmåte for fremstilling av en mikrokuleblanding, ved smelteblanding av 30% til 95% av et fett eller en voks eller en blanding derav, og 2% til 70% av et biologisk aktivt protein, peptid eller polypeptid slik at det dannes en blanding, og prilling av nevnte blanding til å danne nevnte mikrokuleblanding, karakterisert ved at forbedringen omfatter innblanding av 1% til 3 0% av en olje, et halvmykt fett, et fettsyrederivat eller en blanding derav før prilling av nevnte blanding, og eventuelt at fremgangsmåten ytterligere omfatter oppslemming av mikrokuleblandingen i en farmasøytisk eller farmakologisk akseptabel flytende bærer.

2. Fremgangsmåte ifølge krav 1, karakterisert ved at det biologisk aktive protein er bovint, porcint eller aviært veksthormon.

3. Fremgangsmåte ifølge krav 2, karakterisert ved at blandingen omfatter 5% til 20% av en nøytral triglycerololje.

4. Fremgangsmåte for fremstilling av en mikrokuleblanding ifølge krav 1, ved smelteblanding av 30 vekt% til 95 vekt% av et fett eller én voks eller blanding derav, 2 vekt% til 70 vekt% av et biologisk aktivt protein, peptid eller polypeptid, karakterisert ved innblanding av 1 vekt% til 30 vekt% av en olje slik at det dannes en blanding; og prilling av nevnte blanding slik at nevnte sammensetning blir dannet.

5. Fremgangsmåte ifølge krav 4, karakterisert ved at blandingen omfatter 5% til 2 0% av en nøytral triglycerololje, og det biologisk aktive protein er bovint, porcint eller aviært veksthormon.