CZ211793A3 - Fibrin preparations for sealing and processes of their application - Google Patents

Fibrin preparations for sealing and processes of their application Download PDF

Info

Publication number
CZ211793A3
CZ211793A3 CZ932117A CZ211793A CZ211793A3 CZ 211793 A3 CZ211793 A3 CZ 211793A3 CZ 932117 A CZ932117 A CZ 932117A CZ 211793 A CZ211793 A CZ 211793A CZ 211793 A3 CZ211793 A3 CZ 211793A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
fibrin
composition
monomer
enzyme
thrombin
Prior art date
Application number
CZ932117A
Other languages
English (en)
Inventor
Peter Andrew David Edwardson
John Esam Fairbrother
Ronald Stephen Gardner
Derek Andrew Hollingsbee
Stuart Anth Cederholm-Williams
Original Assignee
Squibb & Sons Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Squibb & Sons Inc filed Critical Squibb & Sons Inc
Publication of CZ211793A3 publication Critical patent/CZ211793A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/10—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a carbohydrate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A61K38/363—Fibrinogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/45—Transferases (2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/482—Serine endopeptidases (3.4.21)
    • A61K38/4833—Thrombin (3.4.21.5)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L15/00—Chemical aspects of, or use of materials for, bandages, dressings or absorbent pads
    • A61L15/16—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons
    • A61L15/22—Bandages, dressings or absorbent pads for physiological fluids such as urine or blood, e.g. sanitary towels, tampons containing macromolecular materials
    • A61L15/32—Proteins, polypeptides; Degradation products or derivatives thereof, e.g. albumin, collagen, fibrin, gelatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L17/00—Materials for surgical sutures or for ligaturing blood vessels ; Materials for prostheses or catheters
    • A61L17/005—Materials for surgical sutures or for ligaturing blood vessels ; Materials for prostheses or catheters containing a biologically active substance, e.g. a medicament or a biocide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
    • A61L24/001—Use of materials characterised by their function or physical properties
    • A61L24/0015—Medicaments; Biocides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L24/00—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices
    • A61L24/04—Surgical adhesives or cements; Adhesives for colostomy devices containing macromolecular materials
    • A61L24/10—Polypeptides; Proteins
    • A61L24/106—Fibrin; Fibrinogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/225—Fibrin; Fibrinogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/75—Fibrinogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/06—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier attached to the carrier via a bridging agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/20—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices containing or releasing organic materials
    • A61L2300/252—Polypeptides, proteins, e.g. glycoproteins, lipoproteins, cytokines
    • A61L2300/254—Enzymes, proenzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/404—Biocides, antimicrobial agents, antiseptic agents
    • A61L2300/406—Antibiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/416—Anti-neoplastic or anti-proliferative or anti-restenosis or anti-angiogenic agents, e.g. paclitaxel, sirolimus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/418—Agents promoting blood coagulation, blood-clotting agents, embolising agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2300/00—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices
    • A61L2300/40—Biologically active materials used in bandages, wound dressings, absorbent pads or medical devices characterised by a specific therapeutic activity or mode of action
    • A61L2300/45—Mixtures of two or more drugs, e.g. synergistic mixtures

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Surgery (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Předložený vynález se týká fibrinových přípravků pro utěsňování. Přesněji se předložený vynález týká použití fibrinových přípravků pro utěsňování při kterém se přípravek, obsahující fibrinový monomer nebo přípravek, obsahující nezesítěný fibrih, použijí jako součást fibrin.ového přípravku pro utěsňování
Dosavadní,stav techniky
Jeden z mechanismů hemostázy, tj. prevence- ztráty krve u savců, je formace krevní sraženiny. Formace sraženiny u lidí, tj. krevní koagulace se děje prostřednictvím komplexní kaskády reakcí s konečným krokem přeměny fibrinogenu - monomeru - prostřednictvím·, trombinu, vápníkových iontů a aktivovaného faktorui XIII - k vytvoření zesítěného fibrin II polymeru, který je fibrihovou sraženinou.
Formace zesítěného fibrin II polymeru- začíná přeměnou fibrinogenu trombinem na fibrin I monomer, který spontánně polymeruje na fibrin I polymer, který je někdy označován jako rozpustný fibrin I, protože působením vhodných chemických látek může být přeměněn zpětně na fibrin I monomer. Fibrin I polymer je pak pře,ěněn trombinem na fibrin II polymer, který je někdy označován jako rozpustný fibrin II, protože působením vhodných chemic.kých látek může být fibrin II polymer přeměněn na fibrin II monomer. Fibrin II monomer pod vlivem faktoru XlIIa, známého jako aktivovaný faktor XIII, je pak zésítěn za tvorby zesítěného fibrinu II, který je fibrinovou sraženinou. Faktor XIII je aktivován trombinem 2a přítomnosti vápníkových iontů. Zesítěný fibrin II je někdy nazýván nerozpustným fibrinem. II, protože nemůže být konvertován na fibrin II monomer.
-2Je zde třeba zdůraznit, že trombin je vytvářen z protrombinu. Protrombin je konvertován na trombin prostřednictvím faktoru /Xa za přítomnosti vápníku nebo
-jl^čh^omncných—substancí-·--— -------——:------------Fibrinogen představuje, asi 2 až 4 g/l krevních plassmatických proteinů. Fibrinogen je monomer, který se sestává ze tří párů disulfidově vázaných polypeptidových řetězců označených (A £\ )2, (B/)> )2, A a **B*' představují dva malá aminoterminální peptidy známé jako fibrinopeptiď A a fibrinopeptiď B. Štěpení fibrinopeptidů A z fibrinogenu při transformaci fibrinogenu trombinem vede k fibrin I sloučenině a následné odštěpení fibrinopeptidú HB”' vede. k fibrin II sloučenině. Takové štěpení fibrinopeptidů A a B snižuje molekulovou hmotnost fibrinogenu o velmi malé množství, asi 6000 z 340000 daltonů, ale obnažuje polymerační místa. Pro objasnění mechanismu krevní koagulace a struktury fibrinogenu viz C.M,Jackson,. Ann.Rev.Biochem., 49:765-811. (1980) a B.
Fúrie, Cell, 53:505-518 (1988).
Fibrinový přípravek pro utěsňování ; je biologické adhezivum, jehož účinek imituje: konečné stupně koagulace a vede tak k vytvoření fibrinové sraženiny. Kon'venčrTí-?’'ib'ri'nové*prostředky-pro-zós-tavu krvácení. .se,, s.e.s_t.á- . vají z koncentrovaného lidského fibrinogenu, hovězího aprotininu a faktoru XIII jako první komponenty á hovězího trombinu a chloridu. -vápenatého. jakp_d.ruhé _komponety. Aplikace je obvykle provedena dvoukomorovou stříkačkou, která dovoluje simultánně aplikaci obou komponent na žádoucí místo tak, aby se vytvořila krevní sraženina.
Fibrinogenová komponenta fibrinových přípravků pro Utěsňování 1 je připravena ze spojené lidské plasmy. Fibrinogen může být koncentrován z lidské plasmy kryoprecipitací nebo precipitací použitím různých činidel, např.
-3polyethylenglykolu, etheru, ethanolu, síranu amonného nebo glycinu. Pro důkladné objasnění fibrinových přípravků pro srážení krve viz M.Beennan, Blood Reviews, 5:240-244 (1991), J.W.Gibble. a P.M.Ness, Transfusion, 30:741-747 (1990), H.Matras, J.Oral MaxiHofac· Surg., 43:605-611 (1985) a R.lerner a N.Binur, J-.off Surgical Resiearch, 48:165-181 (1990).
V poslední době byl též zájem o přípravky pro srážení krve na bázi fibrinu, které využívají autologního fibrinu.
. . Autologní. fibrinový- přípravek -ke srážení krve je Tibrino- ' v.ý přípravek ke srážení krve, kde fibrlnogenová komponenta fibrinového srážení je extrahována z pacientovy vlastní krve. Použití autologního fibrinogenového srážení je preferováno, protože eliminuje riziko přenosu krví přenášených infekcí, např. hepatitidy B, noÉ A nonB hepatitidy a syndromu získaného selhání imunity (AIDS), které
Λ mohou být jinak přítomny ve fibrinogenové složce extrahované z poolované lidské plasmy. Viz L.E.Silberstein a spol., Transfusion, 28:319-321 (1988), K.Laitakari a J. Luotonerr, Daryngoscope, 99:974-976 (1989) a A.Dresdale a spol., The Annals of Thoracic Surgery, 40:385-387 (19θ5).
infekce může být přenesena fibrinovými přípravky pro utěsňování - nejen prostřednictvím fibrinogenu, ale také prostřednictvím hovězího? aprotininu a hovězí trombinové složky. Hovězí trombin je známý jako nosič infekčního agens hovězí spongiformní encefalitidy (BSE) a jiných virových patogenů na savce. Havic je hovězí trombin potentním antigenem, který může způsobovat imunologickou reakci u člověka. Tak může hovězí trombin vést u příjemce hovězího trombinu k nepříznivému ovlivnění. Viz D.M.Taylor-, J.of Hospital Infection, I8(dodatek A):141-146 (1991), S.B. Prusiner a spol., Cornell Vet, 81 No.2:85-96 (1991) a D. Matthews, J.Roy.Soc.Health, 3-5 (únor 1991)*-4V souladu s tím zde existuje potřeba fibrinových srážedel, která mohou být vzata od pacienta bez rizika virové kontaminace a jiných nežádoucích účinků. ,
Podstata_vynálezu
Předložen^ vynález se tedy týká způsobů využití fibrinových přípravků pro utěsňování; který zahrnuje
a) kontakt požadovaného mísťa s přípravkem, ' obsahujícím fibrin monomer a
- -b) převedení - uvedeného- fibrinového móňoměruna fibrin-po-, lymer souběžně s uvedeným kontaktem za vzniku fibrinové sraženiny.
Podstata vynálezu také poskytuje způsob přípravy takového přípravku a přípravků a kitů, obsahujících fibrinový monomer,
Jiný aspekt vynálezu se týká způsobů použití fibrlnových přípravků pro utěsnění, které zahrnují
a) kontakt požadovaného místa s přípravkem, obsahujícím nezesítěný fibrin. a
b) převedení uvedeného nezesítěného fibrinu na zesítěný fibrin souběžně s uvedeným kontaktem, za vzniku fibrinové sraženiny.
i
Předložený vynález také poskytuje způsoby přípravy takových přípravků a přípravků a kitů, obsahujících takový nezesítěný fibrin.
Pro účel předloženého vynálezu jsou použity následu-. „ jící definice:
fibrin - fibrin znamená jakoukoliv formu fibrinu. Neomezující příklady fibrinu jsou: fibrin I, fibrin II, a des BB fibrin. Fibrin může být v monomerizo-5váné formě nebo v polymerní formě, kde v polymerní formě je buď nezesítěný nebo zesítěný.
Fibrin - monomer - Fibrin-monomer zahrnuje jakokoliv formu fibrinu, např. fibrin I, fibrin II nebo des-BB-fibrin, kde fibrin je v monomerní nebo oligomerní formě, která může být rozpuštěna w kompozici, obsahující fibrin-monomer a kde fibrin-monomer může být konvertován na fibrinpolymer.
Fibrin-polymer -Fibrin polymer zahrnuje jakoukoliv formu fibrinu, např. fibrin I nebo fibrin II nebo des-BB-fibrin je v polymerní formě, buď nezesítěný nebo zesítěný.
Nezesítěný fibrin - Nezesítěný fibrin zahrnuje jakoukoliv formu fibrinu, např. fibrin I, fibrin II nebo desrBB-fibrin, kde fibrin je nezesítěný a může být převeden na zesítěný fibrin. Nezesítěný fibrin může být buď fibrin-monomer nebo nezesítěný fibrin-polymer.
2esítěný fibrin - zesítěný fibrin zahrnuje jakoukoliw formu fibrinu, např. fibrin I, fibrin II nebo des-BS-kde fibrin je fibrin polymer, který je zesítěný.
Předložený vynéle& se týká způsobu použití fibrinového přípravku pro utěsňování, . který zahrnuje:
a) kontakt požadovaného místa s přípravkem, obsahujícím fibrin-monomer a
b) převedení uvedeného fibrin monomeru na fibrin polymer souběžně se stupněm kontaktu, a tak vytvoření fibrinové sraženiny.
-6Předmět vynálezu také poskytuje způsoby přípravy takového? přípravku a přípravků a kítů, obsahujících takový nezesítěný fibrin.
4.1. Přípravek, obsahující fibrin-monomer
Fibrinový přípravek podle předloženého vynálezu, obsahující fibrin-monomer je přípravek, který obsahuje jakoukoliv; formu fibrinřmonomeru, která může být konvertována na fibrlm-polymer. Neomezujícími příklady fibrinmonomeru jsou fibrin. 1-monomer, fibrin II-monomer, des-BBfibriri-monomer a fibrin I-monomerem jako nejvýhodnějším. Samozřejmě mohou být přítomny směsi fibrin-monomeru. Pro účel předloženého vynálezu zahrnuje také fibrin-polymer jakýkoliv polymer, vynikající polymeraci fibrin-monomerů.
Tak konverze fibrin I-monomeru na fibrin-polymer může vést k fíbrin-I-polymeru zesítěnému nebo nezesítěnému a/nebo fibrin II-polym.eru, zesítěnému nebo nezesítěnému, podle toho, jaké konvertující kréky byly provedeny.
Fibrin? I-monomer je preferován, protože může oproti fibrinogena, být snadno konvertován na fibrin-polymer bez využití trombinu nebo faktoru’ XIII. Fibrin I-monomer může skutečně spontánně vytvořit fibrin-I-polymer, který může -tvořit-f-i-br-i-no-vou-sraženinu..bez johledu na to, zda je fibrin I-polymer zesítěný nebo nezesítěný nebo dále konvertovaný na fibrin Ilpólýměr. Tak protože^formace fib-----...r.in.. .1,1 ...-polymeru z fibrin I-monomeru je spontánní, může být fibrin I-polymer vytvořen bez trombinu a faktoru XIII, a jsou tak vyloučeny problémy spojené s hovězím trombinem. (Mělo by být připomenuto, že jestli je fibrin I-monomer využit tak:, že fibrin I-monomer přichází do kontaktu s pacientovou krví, například v ráně, může pacientův trombin a faktor XIII konvertovat fibrin I-polymer na zesítěný fibrin II-polymer).
-1~
Přípravek, obsahující nezesítěný fibrin je přípravek, který obsahuje jakoukoliv formu nezesítěného fibrinu. Neome zujícími příklady nezesítěného fibrinu jsou nezesítěný fibrin I, nezesítěný fibrin II a des BS fibrin, s pre- -¼ ferovaným nezesítěným fibrinem I, Samozřejmě mohou být přítomny směsi nezesítěného fibrinu. Také, pro účely předkládaného vynálezu, zahrnuje “zesítěný fibrin jakoukoliv formu fibrinu, vznikající konverzí nezesítěného fibrinu na zesítěný fibrin. Tak například může být zesítěný fibrin, vznikající konverzí nezesítěného fibrinu I na zesítěný fibrin.zesítěným fibrinem: I.aAiebo zesítěný fibrin II,· podle toho. jaké byly provedeny konvertující kroky.
Nezesítěný fibrin I je preferován, protože může být snadněji (ve srovnání s fibrinogenem) konvertován na zesítěný fibrin. úe skutečností, že se věří, že fibrin I může formovat zesítěný fibrin I, který může účinkovat jako fibrinový prostředek pro zástavu krvácení Formace zesítěného fibrinu I z nezesítěného fibrinu I může být provedena bez trombinu, čímž se vyloučí problémy spojené s hovězím trombinem, i když může být vyžadován aktivovaný faktor XIII. (Je třeba poznamenat, že je-li použit nezesítěný fibrin I tak, že nezesítěný fibrin I přichází do kontaktu s pacientovou krví', například v ráně, mohou pacientův trombin a faktor XIII konvertovat fibrin I na zesítěný fibrin II).
Nezesítěným fibrinem může být také polymer, oligomer nebo monomer, i když 'preferován je oligomer nebo monomer, tjt fibrin-monomer. Toto je způsobeno skutečností, že nezesítěný fibrin v polymerní formě je obecně gel a proto je velmi obtížné jej doručit na požadované místo a poskytnout có nejmenší těsný kontakt s buňkami na požadovaném místě, “aopak, výsledný nezesítěný fibrin v oligomerní nebo monomerní formě je rozpustný a proto může
-fíbýt snadněji doručen na požadované místo a mít těsnější kontakt s buňkami. Samozřejmě může přípravek obsahovat takové formy nezesítěného fibrinu.
Zdrojem přípravku, obsahujícího fibr.in-monomer nebo nezesítěný fibrin může být jakýkoliv zdroj, který je znám nebo byl vyvíjen tak dlouho, že fibrin-monomer může být převeden na fibrin-polymer nebo nezesítěný fibrin může být konvertován! na zesítěný fibrin. Neomezující zdroje přípravků, obsahujících· fibrin-monomer nebo nezesítěný fibrin jsou krev, výhodně savčí krev a výhodněji lidská krev·, buněčné kultury, které sekretují fibrinogen a rekombinantní fibrinogejm, preferována je krev. Krev může7 mít jakokoliv formu krve, zahrnující například, celou krev nebo připravené fibrinogenové přípravky. 4íůže být také použita krev pro přípravu autologního fibrinovéno přípravku pro zástavu krvácení, “>·
Bylo pozorováno, že;· přípravek, obsahující nezesítěný fibrin I, buď jako fibrin 1 monomer, nebo fibrin 1 polymer,, připravený z plné krve jak je popsáno dále, může být konvertován na zesítěný fibrin II bez přídavku trombinu, faktoru XIII a jiných nezbytných substancí'pro koagulaci krve. Předpokládá se, že díky skutečností, že přípravek, obsahující- nezesí těný fibri-n-I^připrav.ený. z. qel.é krve si ». .......
udržuje dostatečné množství protrombinu, faktoru XIII a jiných nezbytných substancí z plasmy, takže nezesítěný -f-ibrin- I -může-.-být. pr.ev.e.d.en...na.zesítěný fibrin II bez přídavku exogenního trombinu a faktoru XIII. Tento endogenní protrombin a faktor XIII mohou být využity v přípravcích pro zastavení krvácení, obsahujících fibrin;. podle předloženého vynálezu jako složky přípravku, obsahujícího fibrin monomer nebo nezesítěný fibrin.
Nicméně je nutno uvést, že dostatečné množství tohoto endogenního trombinu a faktoru XIII nejsou zachována,
-9zakže konvertování fibrinogenu na zesítěný fibrin II pří reakční rychlosti, která je vhodná pro fibrinový přípravek pro zastavení krvácení. Předpokládá se, že je požadováno více trombinu pro převedení fibrinogenu na zesítěný fibrin II než pro převedení nezesítěného fibrinu I na zesítěný fibrin II při ekvivalentní reakční rychlosti.
Každý z takových tří zdrojů obsahuje fibrinogen., který může být převeden na fibrin mohomer nebo nezesítěný fibrin. Navíc k takovému konverznímu, stupni, výsledný přípravek, který obsahuje fibrin monomer· nebo nezesítěný fibrin, musí být v koncentrované formě. Je výhodné, není-li koncentrace fibrin monomeru' menší než asi 10 mg/ml, výhodněji, asi 20 mg/ml až asi 200 mg/ml, výhodněji asi 20 · mg/ml až asi 100 mg/ml a nej výhodně jdi asi 25 mg/ml až asi 50 mg/ml.
Dále je výhodné, aby fibrin monomer nebo nezesítěný
-i fibrin byl nedynamický. Pro účely předloženého vynálezu nedynamický přípravek, obsahující nezesítěný fibrin znamená, Že nezesítěný fibrin v takovém přípravku se nezesífcoe alespoň asi 1,5 minuty, výhodně alespoň asi 3 minuty a nejvýhodněji alespoň asi 30 minut po přípravě takového přípravku. Pro účely předloženého vynálezu nedynamický přípravek, obsahující fibrin monomer znamená, že fibrint mobomer v takovém přípravku nepolymeřuje alespoň asi
1,5 minuty, výhodně alespoň asi 3 minuty, výhodněji alespoň asi 30 minut a nejvýhodněji alespoň asi 2 hodiny po přípravě přípravku. Ve skutečnosti by mělo být uvedeno, že přípravek, obsahující fibrin monomer může být ned.ynamický alespoň několik dnů, tj. asi 72 hodin po jeho přípravě.
-10Přípravek, obsahující fibrin monomer nebo nezesítěný fibrin může být připraven z krve:·. Způsob může vést k vodíkem vázanému fibrin polymeru, který je formou nezesítěného fibrinu. Takový polymer můžě~b'ýt~pak“pffůSTt jako”složka fibrinového přípravku pro zástavu krvácení nebo být převeden na fibrin monomer způsobem označovaným jako solubilizace, tyto způsoby jsou popsány dále. Je výhodné, je-li přípravek, obsahující fibrin monomer nebo nezesítěný fibrin, připraven ve sterilním prostředí.
Přípravky, obsahující fibrin monomer nebo nezesítěný fibrin mohou být připraveny z celé krve odebráním krve od dárce a výhodně za přítomnosti antikoagulantu. Může být použit jakýkoliv antikoagulant. Neomezujícími příklady antikoagulantů jsou heparin, EDTA, hirudin, citrát nebo jakékoliv činidlo, které může, přímo nebo ‘nepřímo, bránit tvorbě trombinu. Výhodný je citrát. Plasma, která obsahuje fibrinogen, se pak oddělí od celé krve* Jakékoliv dělení je možno použít, například sedimentaci, odstředění nebo filtraci* Odstředění může býťprovedeno při-asi 3,000 -g po asi 10 minut... Nicméně, je-li žádoucí získat plasmu bohatou na destičky, může být .odstředění provedeno při nižším g, např. 500 g po asi 20 minut. Supernatant, který obsahuje plasmu, může býťód-......““ straněn standardními technikami *____________________________
Filtrace může být provedená průchodem celé'krve~ vhodným filtrem, který oddělí krevní buňky od plasmy. Je výhodné, aby filtrem byla mikroporézní membrána, vykazující dobrou transmisi proteinů.
Výsledná plasma se pak zpracuje pro převedení fibrinogenu na fibrin monomer nebo nezesítěný fibrin. Tato konverze může být provedena jakoukoliv známou technikou nebo technikou vyvinutou pro tento účel.
-11Výhodnou technikou pro produkci fibrin monomeru nebo nezesítěného fibrinu je :opracování enzymem podobným trombinu, který obsahuje trombin. Trominu podobný enzym je jakýkoliv enzym, který katalyzuje tvorbu fibrinu z fibrinogenu. Obvyklým zdrojem enzymů podobných trombinu jsou hadí jedy. Výhodně se trombinu podobný enzym čistí z hadích jedů. V závislosti na zdroji trombin podobného enzymu může takový trombinu podobný enzym uvolňovat fibrinopeptiď A — který tvoří fibrin I — fibrinopeptid B — který tvoří BB fibrin — nebo jak fibrinopepítiď
..A. i Bb^- který tvoří- fibrin II-. Je třeba poznamenatr že tyto trombinu podobné enzymy, které uvolňují fibri* nopeptid A a mohou probíhat různými rychlostmi. Tak by: výsledný přípravek mohl být, například směsí fibrinu II a fibrinu I nebo směsí fibrinu II a BB; fibrinu. >
:-VŽ
Tabulka 1 je neomezujícím seznamem zdrojů hadích jedů, které mohou být použity podle vynálezu, název trombinu podobného enzymu a který fibrinopeptid(y) je uvolňován (jsou uvolňovány) zpracováním s enzymem t
Tabulka 1
Zdroj název uvolňovaný fibrinopeptid
Agkistrodon acutus acutin A
A.contortrix; contortrix venzyme B, (A)x
A.halys Dallas B,(A)x
A. (Calloselasma) ancrod, arvin A
Bothrops ásper (B.atrox) asperase A
B. Atrox batroxobin, A reptilase-činidlo
B.insularis 3. jararaca botropase
A,B
A
-12Tabulka 1 (pokrač.)
B.Moojeni (B.Atrox) batroxobin,
—.--------------------def-Ibrása—
Lachesis tnuta muta
Grotalus adamanteus crotalása A
C.durissus terrificus A
Trimeresurus flavoviridis flavoxobin A
T.gramineus A ^ítis gabonica gabonása A»® x () znamená malou aktivitu
Přehled trombinu podobných áneýraů; z hadích jedů, viz H.Pirkle a K.Stocker, Thrombosis and Haemos.tasis, 65(4): 444-450 (1991). i
Výhodné trombinu podobné enzymy jsou batroxobin, *
zejména z B.Moojeni, B.Maranhao a B.atrox a Ancroď, zejména z A.rhodostoma.
. - . .......Pibrin monomer nebo. nezesítěný fibrin může. být,.pří- '.
praven kontaktem plasmy s trombinu podobným enzymem, což umožní, aby fibrinogen v plasmě byl převeden na fibrin monomer,. Avšak výsledný fibrin monomer spontánně polymeru-------- je na formu gelu, které se odděluje od zbylého séra, kte- ..
rým je roztok. Gel je forma přípravku, obsahujícího neze' sftěňý fibrin. '................. ....... ......’ -,-··..
Tento nezesítěný fibrin gel může být získán, například, odstředěním (3000 g po 10 minut), přímým manuálním oddělením nezesítěného fibrinu ze séra, filtrací, přímo nebo pod tlakem s následujícím odstraněním odděleného séra. (1-100 yum filtr - velikost pórů - může být použit, například sintrovaný polypropylenový filtr o ve-13likosti pórů 20 mikrometrů od Porex,Inc., teflonový filtr o velikosti pórů 20 až 70 mikrometrů od Fluorotechniques , lne. nebo nylonový 66 filtr 0'velikosti pórů 22 až 46 mikrometrů od fy Costar, lne.).
Tato metoda získání odděluje nezesítěný fibrinový gel od séra, kterým je roztok a tím koncentruje nezesítěný fibrinový gel vis-avis plasmy. Je třeba uvést, že nezesítěný fibrinový gel si udržuje alespoň něco protrombinu, faktoru XIII a jiných nezbytných substancí z plasmy, takže nezesítěný fibrin I může být převeden na zesítěný fibrin II bez přídavku exogenního trombinu nebo faktoru XIII. Tento endogenní protrombin a faktor XIII mohou být použity ve fibrinovém přípravku pro zástavu .·» krvácení podle vynálezu jako složky přípravku, obsahu- i jícího fibrin monomer nebo nezesítěný fibrin.
intenzita odstředění nebo tlak filtrace během získá- U vání budou determinovat, jak mnoho séra se odstraní z ne- -3 zesítěného fibrinového gelu s tím, že čím vyšší síla nebo tlak, tím koncentrovanější je výsledný nezesítěný fibrinový gel. úe však výhodné, že taková síla nebo tlak nejsou tak velké, aby se z nezesítěného fibrinového gelu odstranil protrombin a faktor XIII.
Nezesítěný fibrinový gel je nyní připraven pro použití jako složka fibrinového přípravku pro zástavu krvácení jako forma přípravku, který obsahuje nezesítěný fibrin.
Bylo pozorováno, že jestliže se takový přípravek připraví z celé krve, je v přípravku přítomno asi 60 % až asi 90 % původního fibrinogenu, ale samozřejmě, ve formě nezesítěného fibrinu.
Přípravek, obsahující nezesítěný fibrin může být použit bezprostředně po své přípravě. Ve skutečnosti je zvláště preferováno použití takového přípravku bezprostředně po jeho přípravě, je-li přípravek autologní. Jestliže se
-14- 'li>
přípravek nepoužije přímo po své přípravě, může být přípravek skladován. Skladování přípravku vyžaduje, aby byl přípravek chráněn, například zmrazením nebo lyofilizací přípravku-nebo'“ udržováním~ přípravku při '4' J°G. Přípravek' ve zmrazené nebo lyofilizované formě bude stabilní řádově měsíce. «Jestliže se přípravek udržuje při 4 °C, předpokládá se, že přípravek bude stabilní alespoň po řadu dnů.
vtíaLJ-Xic jeř pnpra v tra, m ι m
U1UŮ X tC 4» x J uj b prcu
4* 4* en pUUĎl LilU ponechán roztát.
Tato technika, která vede ke tvorbě nezesítěného fibrinového gelu konvertuje fibrinogen na nezesítěný fibrinový gel' a koncentruje takový gel v podstatě v jednom stupni. Alternativně a méně výhodně, .je možno koncentrovat fibrinogen obvyklými technikami, např. kryoprecipitací a srážením· zapoužití různých· činidelnapř. polyethylenglykolu, etheru, ethanolu,. síranu., amonného nebo glycinu.. Koncentrovaný fibrinogen . pak;může-, být převedeni na nezesítěný fibrinový gel výše popsanými technikami nebo,í .výhodně,. protože . je fibrinogen vždy koncentrován, může pak být fibrinogen konvertován na přípravek, obsahující fibrin monomer bez potřeby nejprvevytvořitnezesí'těňýfib'rinový gel. Toto je možňoprovést kontaktem koncentrovaného fibrinogenu s chaotropnlm činidlem pro získání fibrinogenového roztoku.
Ghaotropní činidlo.je nezbytné pro chránění fibrin monomeru, který se tvoří za kontaktu fibrinogenu s trombinu podobným.enzymem, před spontánní polymerací. Ghaotropní činidlo se smísí s takovým fibrinogenovýnr přípravkem a potom se míchá asi 1 až 2 minuty za vzniku fibrinogenového roztoku. Fibrinogen může pak být převeden na fibrin monomer, například, trombin podobným enzymem, jak jé popsáno výše, nebo trombinu podobným enzymem-imobi-16lizovaným na nosiči jak je popsáno výše.
Vhodná chaotropní činidla zahrnují močovinu, bromid sodný, hydrochlorid guanidinu, KCNS, jodid draselný a bromid draselný. Výhodná koncentrace chaotropního činidla je od asi 0,2 do asi 6,0 mol a nejvýhodněji od asi 0,3 do asi 2,0 mol. Výhodné je použití alespoň takového množství chaotropního činidla, které ještě chrání fibrin monomer před spontánní polymeraci.
Je třeba uvést, že je výhodné, aby k chaotropnímu Činidlu nebyl přidáván zdroj vápníkových iontů, pokud je Žádoucí převedení fibrin monomeru na fibrin polymer, jakje popsáno výše. Toto zajistí, Že fibrin monomer nebude·, zesítěn působením aktivace jakýchkoliv endogenních faktorů pro koagulaci krve.
Ve výhodném provedení je trombinu podobný enzym imo,bilizován na nosiči. Takové provedení je výhodné, protože je možno snadno oddělit imobilizovaný enzym od plasmy; a tím . ...bránit přípravek, obsahující nezesítěný fibrin před kontaminací enzymem.
V předloženém vynálezu může být použit jakýkoliv nosič, ke kterému může být trombinu podobný enzym připojen. Neomezujícími příklady vhodných nosičů jsou celulóza, .polydextrany, agaroza, polystyreny, oxid křemičitý, polyakrylové kyseliny, polyakrylamidy, polyvinylalkoholy, skleněné kuličky, polytetrafluorethylen, polykarbonáty, kollagen, deriváty celulózy, teflon a jejich kompozity, s tím, že preferován je oxid křemičitý, polystyren a agaroza a nejpreferovanější je agaroza.
V jiném preferovaném provedení je trombinu podobný enzym připojen k nosiči, kterým je filtr nebo na jedné' stra ně filtru a připojen k jinému nosiči, např. kuličkám.
-17Jinak řečeno, trombinu podobný enzym bude procházet filtrem. Velikost pórů filtru by měla být taková, že .imo.b.il.iz.ov-aný tr-ombinu podo.bný enzy.m.ne.může p.ro.ché.ze.ť filtrem, ale nezesítěný fibrin může procházet filtrem. Nezesítěný fibrin se připraví kontaktem plasmy s trombinu podobným enzymem na jedné straně filtru za vzniku fibrin monomeru, který spolu se zbytkem plasmy.prochází filtrem. Takto se výsledný přípravek, obsahující nezesítěný fibrin nezbytně oddělí od trombinu podobného enzymu, fibrin monomer po průchodu filtrem spontánně polymeruje za vzniku nezesítěného fibrin polymeru.
2a účelem imobilizace trombin. podobného- enzymu· na . nosič, musí být nosič aktivován. Toto lze provést jakoukoliv vhodnou technikou. Například roznými.aktivujícími nkiům -| nlz-trm Ί o L·* n m' n a m V tri’ <> Λ n lim 4 np n iJůpivQH^Qpl npci/a í c Γιιι 1 ****** M* A VX > * Λ. «X *4* M* *. fX *. *X **V>**fc**«VA«****'* *« W fc* V W ** W w— diazoniové skupiny,_ isokyanó.tové „skupiny, skupiny chloridů kyselin, skupiny anhydridů kyselin, sulfonylchloridové. skupiny, dinitrofluorfenylové -skupiny;· isothiokyanátové skupiny, hydroxylové skupiny, aminoskupiny, n-hydroxysukcinimidoskupiny, triazinové skupiny, hydrazinoskupiny, karbodiimidové skupiny, silanové skupiny a bromkyan. Viz (a) Pentapharm Patent DT 2440254 AI , (b) P.D.G.Dearri, W.
S.Johnson a P.A.Middle--(Ed-i-tOrs) (1-991-) IRL-Press Oxford1· - Affinity Ohromatography - A practical approach - chapter 2 - Activation Procedures, které jsou zde uvedeny jako. ,.r.ef.er.enc_e...ž:z. ............. ... ... ........... ..........
Výhodně se aktivační chemie provádí pomocí hydrazi•4 dové skupiny. Použití hydrazidem aktivovaného nosiče vede k maximálnímu procentickému (alespoň asi 30 % až asi 50 % měřeno S2238 zkouškou -viz Axelsson 0. a spol., Thromb. ^aemost., 36:517(1976)Judržení aktivity trombinu podobného enzymu bez podstatné ztráty enzymu. Také mohou být použity nízké hodnoty pH, např. pH 4-6, pro kopulaci enzymu pro
-18Obecně je nosič aktivován vysoce reaktivní sloučeninou, která postupně reaguje s funkční skupinou ligandu, např. -OH, -NHg, -SH1, -COOH, -CHO za vzniku kovalentní vazby. Preferovanými aktivačními chemickými postupy pro použití v předloženém vynálezu jsou:
a) působení triazinové skupiny a výhodně triazinhalogenidových skupin,
b) působení tresylchloridové skupiny,
c) působení karbonyldiimidazolové skupiny,
d) působení bromkyanové skupiny a
e) , působení hydrazidové nebo aminoskupiny.
V a) až d) se. protein kopuluje reakcí a -NH2, -SH nebo -OH skupinami, zatímco v e) se protein kopuluje přes oxidovanou uhlohydrátovou skupinu, tj. -CHO. Požití těchto chemismů vede: w maximálních procent (alespoň asi 30 % až asi 50 % měřeno podle S2238 zkoušky) trombinu podobného enzymu k zadržení jeho aktivity v podstatě se žádnou ; ztrátou enzymu. ’
Pro triazinovou aktivaci se používají dvě různé metody. První metoda zahrnuje spojení triazinového kruhu přímo k povrchovým OH skupinám. Toto je podobné jako u CNBr aktivační užité metody, kde povrchové diolové skupiny reagují s CNBr. U triazinové aktivace reagují OH skupiny s triazinem. (kyanurchlorid).
Obecně se nosič aktivuje vysoce reaktivní sloučeninou, která postupně reaguje s funkční skupinou ligandu, např. -OH, -NHg, -SH, -CHO za vzniku kovalentní vazby. 2bylé aktivní sloučeniny, které nejsou spojeny s trombinu podobným enzymem, mohou být, což není ale podstatné, blokovány nereaktivními sloučeninami jako je ethanolamin, acetanhyd-19riď nebo glycin.
Preferovanými aktivačními chemismy pro použití v-před-loženém-vynálezu -jsou-:---------------- --- -—---------------a) aktivace bromkyanem s následujícím přímým spojením enzymu přes ^-NH2 skupiny proteinu.
b) Aktivace nosiče monochlortriazinem s následujícím spojením s enzymem přes -NH2, -OH nebo -SH skupiny.
c) Aktivace nosiče dichlortriazinem s následujícím .napojením enzymu přes -ΝΗ2, -OH nebo -SH skupiny.
d) Tresylehloridové aktivace nosiče s následujícím napojením enzymu přes -Nffg» -GH nebo -SH.
e) Aktivace nosiče hydrazidem adipové kyseliny nebo hydrazinem s následujícím napojením oxidovaného enzymu přes -GHO skupiny.
f) Aktivace nosiče aminoligandem s následujícím napojením oxidovaného enzymu pres -GHO skupiny.
Všechny výše uvedené metody využívají agarosu jako nosič, nicméně je možné použít oxid křemičitý. Jestliže se použije tento nosič, jsou výhodné chemické aktivace následující:
a) gama-glycidyloxypropyltrimethoxysilanová aktivace s přímým napojením trombinu podobného enzymu přes -NH2
- : •skupiny-proteinu..........
b) Bromkyanová aktivace s následujícím přímým napojením enzymu přes -NH2 skupiny proteinu.
oj Gama=gly,cidyloxytr-imethoxysi-lanová--aktivace s následujícím otevřením epoxidového kruhu za vzniku diolové skupiny, která může dále být aktivována bromkyanem. Přímého napojení enzymu může být dosaženo; přes· -NH^ skupiny proteinu.
d) Gamaglycidoxypropyltrimethoxysilanová aktivace s následující přípravou amino-oxidu křemičitého zpracováním s
-20roztokem amoniaku.
Amino-oxid křemičitý může být déle aktivován chlorkyanem (triazin) a enzym být napojen přes -N^, -OH nebo -SH' skupiny.
Napojení enzymu k aktivovanému nosiči musí být pufrováno na určité pH pro dosažení optimálního navázání enzymu. Obecně standardní aktivační techniky jako je gama-glycidoxypropyltrimethoxysilanová kopulace enzymu k aktivovanému nosiči a bromkyanová kopulace jakéhokoliv proteinu k aktivním skupinám vyžaduje pufrování na pH 1-2 jednotky vyžáí než je pKa primárních a sekundárních aminů enzymu. Nicméně použití chlorkyanu jako aktivátoru umožňuje, použití mnohem nižžích pH pufrů (optimální pH kopulace je 4-6).Jiné metoda kopulace glykoproteinů jako je batroxobin k inertnímu nosiči je přes jeho uhlohydrátové skupiny. Toto zahrnuje nejprve oxidaci cukrové skupiny na -CHO skupiny s následujícím přímým napojením při kyselém pH k aminoskupině jako je hydra2iď. Široký rozsah kopulačních pufrů je možno použít. Viz např. tabulka 2.
Tabulka 2
Příklady kopulačních pufrů použitých v imobilizaci enzymu na nosiče - oxid křemičitý a agarosu
Nosič aktivační metoda kopulační pufr oxid gama-glycidoxypropyltrimethoxy- 0,1M hydrogenuhl!
křemičitý sílán čitan pH 8-9 mM HEPES pH 7, ^glycidoxypropyltrimetho- 0,1M hydrogenxysilan + bromkyani uhličitan sodný s _ _ pH 8-9, 10 mM’
HEPES pH 7,0
-21Tabulka 2 (poknač.) oxid kře mičitý
oxid křemičitý bromkyani voda pH 7,0 0,1M hydrogenuhličitan sodný pH 7-9 10 mM HEPES pH 7,0
agarosa monochlortriazin. 50 mM octan sodný/ IMNaCl pH 4,0
agarosa dichlortriazin 0,1M fosforečnan draselný/1MNaCl pH 8,0-9,0
agarosa tresylchlorid! 50 mM fosforečnan draselný/0,5KNaCi pH 7,7 ', ··
agarosa hydrazid 50 mM octan sodný ρΗ 5,5 10 mM NaBH^
agarosa amin 50 mM octan sodný
pH 5,5 10 mM NaBH^
Po aktivaci bude nosič vykazovat více aktivních míst než je požadováno pro kopulaci enzymu. Tato místa, pokuď nejsou deaktivována, mohou kovalentně vázán kontaminující
-22proteiny,* které by mohly ovlivňovat biologickou funkci imobilizovaného enzymu.
Přebytek skupin může být deaktivován kovalentním napojením malých, neinterferujících aminů jako je ethanolamin.
Jestliže se použijí hydrazidem nebo aminoaktovované nosiče, blokování zbytkových reaktivních skupin s následujícím navázáním enzymu může být dosaženo použitím acetanhydridui.
V závislosti na metodě imobilizace a nosiči, dochází k inaktivaci enzymu během imobilizačního procesu. Použitím oxidu křemičitého jako nosiče a nejžádanějSí aktivace (např. bromkyanem), ztrácí enzym až 80-90 % aktivity. Nicméně použití agarosy jako nosiče s aktivací cblorkyanem vede k menší ztrátě enzymové aktivity.
Pro charakterizaci účinnosti imobilizovaného enzymu na nosiči mohou být použity dvě metody pro vyhodnocení množství aktivního enzymu imobilizovaného na nosičiJ doba tvorby sraženiny - Clot Time Assay - Clauss A., Acta hae_ matol., 17:237 (1957) a S2238 Assay - viz Axelsson G. a spol., Thromb.Haemost., 36:51 7 (1976).
Pro stanovení vyluhování enzymu z nosiče může být užito následující metody.
Vyluhování může být zkoušeno radioaktivním značením trombinu podobného enzymu, např. 1^5 batroxobinu. Avšak před provedením této zkoušky vyluhování je nezbytné otfstranit jakékoliv nenavázané radioaktivní značené látky* Tohoto se dosáhne postupným promytím nosiče s: 50 ml 50 mM octanu sodného pH 5,5, 100 ml 50 mM glycin/lM chlo-23ridu sodného pH 3,0, 100 ml 50 mM uhličitanu'sodného/lM chloridu sodného pH 10,0, 100 ml 50 mM fosforečnanu sodného/lM chloridu sodného pH 7,0, 100 ml vodý a 100 ml
5fosforečnanu sodného/l_M_ chloridu sodného ;p_H 7,0,_______
Po takovém promývacím postupu nebylo detegovéno radioaktivní značení v promývacícft kapalinách, s > 50 % počátečního radioaktivně značeného enzymu připojeného k nosiči.
a) Požadované množství enzymu
Množství enzymu požadované pro zpracování 30-70 ml plasmy (získané ze 60-150 ml celé krve) je 30-200 jednotek po asi 10 až 15 minutách míchání.
Jestliže se použije jako nosičová matrice 30-200 j. batroxobinu.vede ke tvorbě nezesítěného fibrinu po asi 7-20 minutách, Tento systém využívá hydrazidovou aktivaci a 0.25 g -1.0 g suché agarosy. V tomto případě není vyžadováno žádné blokování zbylých aktivních skupin.
b) Reakce imobilizovaného enzymu s plasmo v,ým_f ibrinogenera . Cbecně se reakce-imobilizovaného enzymu s fibrinogenem v.plasmě provádí následovně: přibližně 30-70 ml, ..plasmy...se-přidá.ke. známému .mn.ožs-tv.í. suchého nosiče, který- obsahuje zmobilizovaný trombinu podobný enzym. Suspenze se šetrně míchá (otáčení na spirálovém mixéru nebo ručním míšením) přibližně 7-20 minut· Během této dobyse fibrinogen v plasmě štěpí imobilizovaným enzymem za uvolnění fibrinopeptidu A a/nebo fibrinogenu B což vede ke tvorbě vodíkem navázaného fibrin I polymeru, vodíkem navázaného BB fibrin polymeru nebo vodíkem navázaného fibrin. II polymeru, kde každý polymer je spojen s imobilizovaným enzymem.
-24Jak je popsáno výěe, vodíkem navázaný fibrin polymer je ve formě gelu a může být získán například odstředěním (3OOO g po 10 minut) nebo filtrací (přes 1-50 mikrometrový membránový filtr). Takové, získávání odděluje vodíkem.navázaný fibrin polymer ze séra a tím koncentruje polymer.
Je třeba uvést, že jestliže se použije trombinu podobný enzym v plasmě, vede k aktivací faktoru XIII a pak je preferováno, aby plasmový přípravek byl modifikován v době, kdy se použije trombinu podobný enzym tak, aby se zabránilo nezesítěnému fibrinu, např. nezesítěného fibrinu I nebo II, ve tvorbě zesítěného fibrinu, např. zesítěného fibrinu I nebo II. Samozřejmě může být nezbytné modifikovat plasmový přípravek, jestliže se takový přípravek použije jako fibrinové činidlo pro zástavu krvácení ihned poté, kdy fibrinogen byl konvertován na nezesítěný fibrin.
iPlasmový přípravek může být modifikován a&y se zabránilo zesítění nezesítěného fibrinu technikami, které jsou v oboru známé, nebo byly vyvinuty. Je to možno provést' blokováním endogenního trombinu, který může aktivovat faktor XIII, např. inhibitory hirudinu nebo trombinu·, nebo blokovat aktivovaný faktor XIII, např. působením těžkých kovů (Hg), thiomerosalem nebo inhibiČními protilátkami. Zesítění fibrinu I nebo II vyžaduje přítomnost iontů vápníku. Je-li vápník odstraněn z plasmového přípravku, může být inhibováno zesítění fibrinu I nebo II.
Viz Carr a spol., J.Biochem., 239:513 (1986), Kaminski a spol., J.Biol,Chem. 258:10530 (1983) a Kanaide a spol., 13:229 (1982). Do přípravku mohou být přidány vápníkové chelátory pro zabránění zesítění fibrinu I nebo II. Ta-25kové chelátory se vážou k vápníku čímž zabraňují zesítění.
Může být použit jakýkoliv vápníkový chelátor. Neomezující příklady vápníkových chelátorů zahrnují kyselinu cit r onavou,“ 'kyselinu''’ cukrovou’, ’ ’ky s é linuu ethylěňďi ámiň - .........
tetraoctovou (EDTA), kyselinu nitriltrioctovou (NTA), hydroxyethylendiamin-trioctovou kyselinu (HEEDTA), ethylendiamindi-/o-hydroxyfenyloctovou kyselinu/ (EDDHA), ethylenglykolbis(2-aminoethylether)tera-octovou kyselinu (EGTA), diethylentriaminpentaoctovou kyselinu (DTPA), í,2-diaminocyklohexantetraoctovou kyselinu (DCTA), N,Nbishydroxyethylglycin, 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazinethan-sulfonovou kyselinu (HEPES) a N-hydroxyethyliminodioctovou kyselinu (HIMDA) a jejich soli; preferovány jsou soli kyseliny citrónové.
V předloženém vynálezu může být použita jakákoliv buněčná'kultura, která sekretuje fibrinogen. Fibrinogen v buněčné kultuře může být konvertován na fibrin monomer nebo nezesítěný fibrin stejnými technikami jak jsou popsány výše vzhledem k plasmě. Nicméně před takovou konverzí je výhodné, aby byly odstraněny buněčné zlomky...
Způsob může být proveden následovně* HEPG2 buňky, jsou kultivovány a udržovány jak je popsáno ve stsndardních: textech pro kulturu savčích buněk. Také viz Liu a spol.,
Cytotechnology, 5:129-139 O 991 ). Buňky jsou vysety do---------baněk při poměru mezi 1:4 až 1:8 v Minimal Essential Meďiůrnobsahujícím! 0~% tele čího séra a puf rbvaněm? 5% C0’2 .
Po 24 až 36 h růstu při 37 °C se medium odstraní a nahradí se séra prostým mediem, obsahujícím vhodný inhibitor proteásy a 2 m.j./ml heparinu. V kultivaci se .pokračuje po dalších 24 hodin se třemi následnými změnami séra prostého media.
-26Kondicionované medium se odstředuje při 3000 g 10 minut pro odstranění jakýchkoliv buněčných zlomků a vyčiřený supernatant, který obsahuje fibrinogen, se pak šetrně míchá s trombinu podobným enzymem 4-5 hodin. Výhodně je trombinu podobný enzym imobilizován. Je.vhodný poměr asi 1,0 ml k asi 50 ml, usazenéhorobjemu agarosatrombin.podobného enzymu na 500 ml media. Jak je popsáno výše mohou být použity nosiče jiné než agarosa. Výsledný fibrin monomer spontánně polymeruje a zachycuje se kolem imobilního nosiče.
Supernatant, který nyní neobsahuje žádný fibrinogen se slije z gelu nosič/fibrin, který se pak promyje postupně čtyřmi změnami NaCl - 0,15 M v poměru od asi 10 ml k asi 100 ml na 1,0 ml původního usazeného objemu nosiče. Promytý gel se pak semi-hydratuje za použití nálevky se skleněným sintrem za vakua.
t ·
Použití buněčných kultur, které mohou sekretovat fibrinogen jsou zvláště preferována, jestliže se použije... přípravek, obsahující fibrin monomer. Očekává se totiž, že takový přípravek může být použit pro tvorbu fibrin polymeru který je vhodný jako přípravek pro zástavu krvácení, obsahující fibrin, přestože fibrinový polymer nakonec zesítuje. I když taková buněčné kultura neobsahuje faktor XIII, který je podstatný pro zesítění, není nutné přidávat žádný exogenní faktor Xl-I1 pro přípravu účinného fibrinového přípravku pro zástavu krvácení.
Nezesítěný fibrinový přípravek může být také připraven z rekombinantního fibrinogenu. V poslední době byl fibrinogen vyroben technikami rekombinantní LNA. Viz S.Roy a spol., The Journal oíT Biological Chemistry, 266:4758-274763 (1991)jejichž obsahy jsou zde uvedeny jako reference. Roy a spol. se zadjí být první skupinou pro expresi všech tří řetězců fibrinogenu a uvádějí, že COS buňky exprimují, -sestavují - a -~s ekr e tují- ře t ě z c e~ ve~f o r m ě, k ter á j e - s c h o pna’_ _ tvorby trombinem indukované?.sraženiny. Výsledný fibrinogenový přípravek pak může být použit pro produkci přípravku, obsahujícího fibrin monomer nebo nezešítěný fibrin stejnými technikami, jak jsou'popsány zde výše vzhledem k buněčným kulturám, které sekretují fibrinogen. Nicméně je výhodné, že před tvorbou přípravku, obsahujícího fibrin monomer nebo nezešítěný fibrin, se buněčné zlomky odstraní stejnými technikami jak jsou popsány výše u buněčných kultur. Buněčné zlomky mohou být odstraněny odstředěním nebo filtrací.
Použití rekombinantního fibrinogenu je zvláště preferováno, jestliže se použije přípravek, obsahují cí-řfibrin monomer. Je to proto, že se předpokládá, že takový přípravek bude použit pro přípravu fibrin polymeru, který je použitelný jako fibrinový přípravek pro zástavu krvácení, přestože fibrin polymer nakonec zesítuje.* i když rekombinantní fibrinogenová buněčná Jcultura neobsahuje' faktor XIII, který je podstatný pro zesítění, není nutné přidávat žádný exogenní faktor XIII pro přípravu účinného fibrinového přípravku pro zástavů krvácení.
Konverze fibrinogenu na nezešítěný fibrin, například trombi-n- -podobným-enzymem-,- -v-ed-e-k-e- tvorbě -f-i-brinu ve-formě fibrin vodíkem navázaného polymeru. Nicméně jak bylo uvedeno výše, je výhodné, že přípravek, obsahující nezesítěný fibrin; a to je podstatné pro přípravek, obsahující fibrin monomer, je v oligomerní nebo monomerní formě. Toto může být provedeno solubilizací přípravku, obsahujícího nezešítěný fibrin.
-28Solubilizace se zejména provádí, jestliže se nezesítěný fibrin vytváří pomocí trombinu podobného enzymu, který je imobilizován na nosiči. Toto je způsobeno skutečností, Že použití trombinu podobného enzymu imobilizovaného na nosiči obecně vede k nezesítěnému fibrinovému vodíkem vázanému polymeru, který je spojen s takovým imobilizovaným enzymem.Protože· je výhodné, aby nosič nebyl obsažen ve výsledném přípravku, provádí se solubilizace také pro odstranění nosiče s přípravku, obsahujícího nezesítěný fibrin, spolu s imobilizovaným enzymem.
Solubilizace může být provedena jakoukoliv technikou, která je známá nebo byla vyvinuta, která vede k fibrinovému t monomeru. Solubilizace může být provedena kontaktem přípravku, obsahujícího nezesítěný fibrin se vhodným roztokem kyselého pufru, výhodně kyselého pufru, majícího pH menší než asi 5 a^výhodně od asi 1 do asi 5. Neomezující příklady vhodných kyselých pufrovacích roztoků zahrnují kyselinu octovou, kyselinu jantarovou, kyselinu glukurono, vou, kyselinu cysteinovou, kyselinu krotonovou, kyselinu, itakonovou, kyselinu glutamovou, kyselinu mravenčí, kyselinu aspartovou, kyselinu adipovou a jejich soli a preferovány jsou kyselina jantarová, kyselina aspartová, kyselina adipová a soli kyseliny octové a nejpreferovanější je octan sodný. Bylo pozorováno, že výhodné kyselé pufry působí mnohem účinněji než ostatní kyselé pufry, které byly testovány.
Výhodná koncentrace kyselého pufru je od asi 0,02 M do asi 1 M a nejvýhodnější je od asi 0,1 M do asi 0,3 tó.
Taková výhodná koncentrace? uděluje přípravku iontovou sílu a činí její; více biologicky kompatibilním.
29Je výhodné použít alespoň takový objem kyselého pufru, který ještě umožňuje solubilizovat nezesítěný fibrin za vzniku vodného roztoku, obsahujícího fibrin mo-------nomerv Toto- vede ”k· vodnému· roztoku^ -obsahujícímu-fibrin monomer, který je vysoce koncentrován ve fibrin monomeru, ^becně je vyžadováno asi 1 ml až asi 4 ml kyselého pufru na asi 1 ml přípravku, obsahujícího nezesítěný fibrin.
kyselý pufr se smísí se intenzívně bilizace.
aVX a a luiuiio ao x s nezesítěným fibrinem a pak až 2 minuty až do úplné selu—
Solubilizace se může také provést při neutrálním pH pomocí chaotropního činidla*. Vhodná chaotropní činidla zahrnují močovinu, bromid sodný, hydrochlorid guanidinu, KCNS, jodid draselný a bromid draselný. Výhodné koncentrace? chaotropního činidla je od asi 0,2 do asi .6,0, mol a nejvýhodněji od asi 3,5 do asi 5,0 mol.
Jako u kyselého pufru je výhodné použít alespoň takov · vé množství chaotropního činidla, které ještě umožňuje .. solubílizaci nezesítěného fibrinu.' Obecně je vyžadováno _l ’ od asi 1,0 ml do asi 1,5 ml chaotropního činidla na asi ml přípravku, obsahujícího nezesítěný fibrin.
___________Chaotropní činidlo se smísí s takovým přípravkem a pak se intenzivně míchá asi 1 až 2 minuty *-'do úplné solubili zace. - ......-...... ............... -...... - — - —............. V souladu s tím solubilizace vede k přípravku,* obsahujícímu fibrin monomer a zejména, vodný roztok, obsahující fibrin monomer. Výhodné je, aby koncentrace fibrin monomeru ve vodném roztoku nebyla menší než asi 10 mg/ml,
-30výhodněji asi 20 mg/ml až asi 200 mg/ml a ještě výhodněji asi 20 mg/ml až asi. 100 mg/ml a nejvýhodněji asi 25 mg/ml až asi 50 mg/ml,
Jestliže se použije trombinu podobný enzym imobilizovaný na nosiči/ dochází k tomu, že tento enzym je přítomen v přípravku, obsahujícím nezesítěný fibrin, a po solubilizaci může být imobilizovaný enzym odstraněn z přípravku, obsahujícího fibrin monomer. Toto může být provedeno například filtrací přes jakýkoliv- vhodný filtr, který může oddělovat enzym. Vhodné filtry zahrnují sintrovaný polypropylenový filtr s velikostí pórů 20 mikrometrů od Porex lne., teflonový filtr o velikosti pórů 20-70 mikrometrů od -^luortechniques, lne. nebo nylonový filtr o velikostí pórů 22-46 mikrometrů (nylon 66) od Coster, lne.
Alternativní metoda pro zaručení, že žádný trombinu podobný enzym, např. batroxobin, není přítomen v přípravku, obsahujícím fibrin monomer, je použití rozpustného trombinu podobného enzymu v systému a odstranění' enzymu následující solubilizací fibrinového vodíkem vázaného polymeru. Odstranění enzymu může být dosaženo použitím afinitní matrice, např. ligandov.é vazby na inertní nosič, který mé specifickou afinitu pro trombinu podobný enzym nebo iontovýměnný nebo hydrofobní interakci umožňující nosič nebo nejúčinněji použitím systému avidin-biotin. Interakce' bičtin-ávidin vykazuje jednu z nejsilnějších nekovalentních vazebných konstant známých v přírodě. Viz E.A.Bayer a M.Wilchek, ^ethods of Biochemlcal Analysis, 26:1(1980).
V tomto procesu je biotin kovalentně navázán k, například, batroxobinu a konjugát biotin-batroxobin (který je rozpustný) přímo reaguje s plasmou, např. 10 BU plus 50 ml plasmy reaguje při 37 °C 10 minut. Produkovaný fibrin I polymer se získá odstředěním nebo filtrací a resolubili-31zuje přibližně 4 ml U,2M octanu sodného pH 4,0, obsahujícího 30 mM chloridu vápenatého. K roztoku fibrinu I se přidá molární přebytek avidinu kopulovaného k inertnímu
------nosi-či—jako- je-agarosa-.—Komp-l-ex- agarosaiav-idinií-bio.tin:... ..
batroxobin se pak oddělí od fibrinu I odstředěním nebo filtrací za vzniku přípravku, obsahujícího fibrin monomer, který je v podstatě prostý batroxobinu, který může být repolymerován jak je popsáno dále za vzniku fibrinového v
utěsnovacího přípravku.
V souladu s tím je přípravek, obsahující fibrin monomer v podstatě prostý trombinu podobného enzymu Takový přípravek obsahuje méně než asi 5 %, výhodně méně než asi 2 % a. nejvýhodněji méně než asi 1 % trombinu podobného enzymu použitého pro převedení fibrinogenu na fibrin monomer nebo nezesítěný fibrin. Samozřejmě je výhodné, ;že v takovém přípravku není přítomefíi žádný trombinu·podobný enzym.
i
Přípravek, obsahující fibrin monomer je nyní připraven pro použití jako složka fibrinového přípravku pro utěsňování. Bylo pozorováno, že jestliže se takový přípravek připraví z celé krve;? je v přípravku přítomno oď asi 60 % do asi 90 % původního fibrinogenu, ale samozřejmě, vé fór mě''fibrin monomer ii. ......... ........... ·.......
V souladu s tím, v jednom.provedení předloženého . ..— vyná-lezuj - je -pří-pravek,- - obsahující fibrin ..monomer ,.v. pod-..
statě prostý trombinu podobného enzymu. V podstatě prostý znamená, že buď byl odstraněn· všechen trombinu podobný enzym, nebo že jakýkoliv trombinu podobný enzym zbývající v přípravku je v koncentracích nedostačujících pro poskytnutí jakéhokoliv nežádoucího farmakologického účinku. Přípravky podle vynálezu, u kterých je žádoucí, aby byly “v podstatě prosté“, mohou obsahovat trombinu podobný —31a— enzym v množství mezi asi nula a 10 procenty původního enzymu a výhodně mezi asi nula a.2 procenty trombinu podobného enzymu použitého při přípravě přípravku, obsahujícího fibrinový monomer.
I když tato provedení popisují přípravky, kde byl trombinu podobný enzym odstraněn po požadované konverzí na rozpustný fibrin, přípravky, které si udržují většinu nebo všechen trombinu podobný enzym jsou také považovány za použitelné a tvoří proto součást předloženého vynálezu.
Přípravek, obsahující fibrin monomer může být použit ihned poté, co byl připraven. Ve skutečnosti je zvláště výhodné použití takového přípravku ihned poté, co byl připraven, je-li. přípravek autologní, Jestliže se přípravek nepoužije ihned po jeho přípravě, může být skladován. Skladování přípravku vyžaduje,'aby byl přípravek chráněn, například zmražením nebo lyofilizací přípravku nebo jeho udržováním při 4 °C, Předpokládá se, Že přípravek ve zmrazené nebo lyofilizované formě bude stabilní řádově po dobu měsíců. Jestliže se přípravek udr-32žuje na 4 °C předpokládá se, že přípravek je stabilní alespoň řádově několik dnů.
-----J-estliže_se_přípr.av_ek._zmr.azí_,_m.us í__být v _době použiti_ ponechán roztát. Oestliže je přípravek lyofilizován, je v době použití výhodné, , aby byl přípravek rekonstituován přídavkem· stejného kyselého pufru·, který byl použit v solubilizačním stupni, byla-li kyselina těkavá, např. kyselina octová, nebo bylo-li použito chaotropní Činidlo, přídavkem destilované vody. Jako ve stupni solubilizace.mělo by při rekonstituci být použito alespoň taková množství kyselého pufrovacího roztokui nebo destilované vody, které ještě stačí k tomu, aby fibrin monomer byl rozpustný. Ve skutečnosti může. rekonstituování, .lyof ilizovaného: přípravku, obsahujícího fibrin monomer vést k vodnému· roztoku, obsahujícímu fibrin monomer, kde koncentrace takového .monomeru je až 200 mg/ml. .Před lyofilizací může být přidáno botnající činidlo, např. mannitol nebo laktosa, k přípravku. Alternativně může být lyofilizovaný přípravek použit v lyofilizované formě. Taková forma.·je zvláště preferována, je-li žádoucí přidat přísady, např. antibio'tika, k přípravku.
Přípravek, obsahující fibrin monomer může být vlastně v -jakékoliv formě, například roztoku, ...suspenze,. emulze_____ .
nebo být pevný, preferován je roztok. Například takovým přípravkem může být kapalina, gel, pasta nebo mast. Také může_bJtt .přípravek například ve formě granulí například lyofilizovaného fibrin monomeru, který může být ale nemusí, zpracován ve formě roztoku, emulze nebo suspenze bezprostředně před použitím:.
Jakékoliv vhodné rozpouštědlo může být použito pro přípravu roztoku, ale je samozřejmě preferováno, aby rozpouštědlo bylo netoxické. Neomezující příklady rozpouštědel zahrnují vodu, ethylalkohol, glycerol a propylenglykol,
-33kde nejvíce je preferována voda.
Příkladem suspenze je, Že přípravek, obsahující fibrin monomer může být smísen s organickými rozpouštědly, např. ethanolem, na konečnou koncentraci ethanolu ňaď 3,0 M a třepán. Fibrin monomer se bude srážet a může být odstraněn1 odstředěním. Sraženina by mělgi být promyta organickou fází pro odstranění vodného roztoku použitého v solubilizačním stupni. Ethanolická suspenze monomerního fibrinu pak může být aplikována přímo na obvaz nebo jiný nosič nebo i aplikována přímo na místo rány. Organická fáze :;se nechá odpařit. V případě obvazu nebo jiného nosiče může být suspenze rehydratována kontaktem s místem aplikace nebo některým jiných způsobem· a fibrin ponechán1 polymerovat.
Alternativně, organická suspenze fibrin monomeru připravená ve vysoce těkavé fázi, např. diethyletheru, může ’ být atomizovéna a doručena jako sprejová suspenze na požadované místo. Je výhodné, je-li těkavá fáze nehořlavá'. í; <Je možné, aby organická suspenze fibrin monomeru byla doručena do nosu, ucha, krku nebo plic* postřikem nebo vdechováním nebo být doručena pro uzavření oesofágové nebo gastrické léze injekcí.
Fibrinový přípravek pro utěsňování podle předloženého vynálezu se používá kontaktem.požadovaného místa s přípravkem, obsahujícím fibrin monomer nebo nezesítěný fibrin a převedením fibrin monomeru na fibrin polymer nebo nezesítěného fibrinu ka zesítěný fibrin současně s uvedeným stupněm kontaktu, čímž se vytvoří fibrinová sraženina.
Pro účely předloženého vynálezu je požadované místo místo, kde je třeba vytvořit fibrinovou sraženinu. Co nebo
-34kde je požadované místo, to závisí na použití fibrinového přípravku pro utěsňování podle předloženého vynálezu. Také by mělo být uvedeno, že se předpokládá, že fibrTnpyý_prípray_ek_prp_útěšňpyán,í může být použitt _ nejen u lidí, ale také u jiných savců. Také, je-li zdrojem fibrinového přípravku pro utěsňování, . potom je výhodné, ale není to nezbytné, že krev by měla být 2Ískána od stejných druhů, pro které bude použit fibrinový přípravek: pro zástavu krvácení.
Fibrinový přípravek pro .utěsňování ' může být použit pro jakékoliv použití, které je známo nebo být vyvinuto pro fibrinový přípravek pro utěsňování Metody., kity nebo fibr.inové přípravky pro utěsňování ' podle předloženého vynálezu mohou'být použity pro spojení tkání nebo orgánů, zástavu krvácení, hojení; ran, utěsnění chirurgických ran, použity v-cévní chirurgii zahrnující poskytnutí, hemostase pro krvácející otvory stehů při distélní koronární arteriární anastomose,šit.í levého-V.entpikula r ' místech aortotomie a kanylace., difusním epimyokardiálním krvácení viditelném při reope.racích a prosakováni při venosním krvácení, např. atriální, kavální nebo na úrovni pravého ventrikulú. Předložený vy-’ nález je také vhodný pro utěsnění dakronových arteriálních . ----------—i-mpl-an-tá-tů-před—implantací-,—u-těsnění -tkání-mimo—tě.l.o.,._p.ro__..__ produkci fibrinových plstí s buněčných kultur, ukončení krvácení' z poškozených slezin(Čímž se chrání orgán), ja„ . _.......ter- a. jiných, .parenchymatosních orgánů, utěsnění traeheálních a bronchiálních anastomos a vzdušných úniků nebo lacerací plic.·, utěsnění bronchiálních výběžků, brochiálních fistulí a esofageálních fistulí, pro bezešvé šití (zipper technika) a embolizaci ve vaskulární radiologii intracerebrálních AVM, jaterních AVM, angiodysplasie kolonu esofageální varixech, pumping” GI krvácení po peptickém vředu atd. Předložený vynález je dále použitelný pro poskytnutí hemostasy v rohovkových transplantátech, krvácení z nosu, po tonsilektomií, extrakcích tubů a jiných aplikace. Viz G.F.Gestring a R.Lermer, Vasculary ^urgery,
-35294-304, září/říjen 1993. Také fibrinové utěsňovadlo podle předloženého vynálezu je zvláště vhodné pro individua s koagulačními defekty.
Dávka přípravku, obsahujícího fibrin mohomer nebo přípravku, obsahujícího nezesítěný fibrin závisí na jednotlivém použití fibrinového utěsnovadla, ale dávka by měla z
představovat účinné množství pro zamýšlené použití.
Obecně u přípravků, obsahujících fibrin monomer, který je ve vodném roztoku se předpokládá, že asi 3 ml až asi 5 ml takového přípravku dostačuje, aby bylo fibrinové utěsňovadlo účinné. Nicméně v závislosti na použití přípravku se dávka může měnit od asi 0,05 ml do asi 40 ml. Také, jestliže se použije přípravek, obsahující nezesítěný fibrin v polymerní formě nebo je přípravek v pevné formě', potom by přípravek měl.obsahovat takové množství fibrinu; jako je ve vodném roztoku.
Pro účely předloženého vynálezu konverze fibrim monomeru na fibrin polymer nebo nezesítěného fibrinu na zesítěný fibrin současně s uvedeným stupněm kontaktu znamená, že takový stupen konverze a stupen kontaktu probíhají z
v době každého stupně tak, že se vytvoří fibrinový sraženina na požadovaném místě. Současně může znamenat, že po stupni kontaktu se fibrinový monomer převede na fibrinový polymer hebo se nezesítěný fibrin převede na zesítěný fibrin.. . Toto se provede kontaktem přípravku, obsahujícího fibrinový monomer nebo nezesítěný fibrin, poté, kdy takový přípravek byl aplikován na požadované místo, s přípravkem, který může < konvertovat fibrinový monomer na fibrinový polymer nebo nezesítěný fibrin na zesítěný fibrin. Konverzní stupen by měl obecně nastat asi v 0,5 minutě po stupni kontaktu. Jinak přípravek, obsahující fibrin monomer nebo nezesítěný fibrin, zejména je-li nezesítěným
-36fibrinem fibrinový monomer, může odtékat pryč z požadovaného místa.
Současně může také znamenat, že stupen kontaktu a stupeň převedení působí simultánně. Toto se provádí kontaktem požadovaného místa s přípravkem, obsahujícím fibrinový monomer nebo nezesítěný·fibrin ve stejné době, kdy je přípravek kontaktován s přípravkem, který může konvertovat fibrin monomer na fibrin polymer nebo nezesítěný fibrin na zesítěný fibrin.
uakonec a výhodně, současně může také znamenat, že konverzní stupen .může také nastat před stupněm kontaktu,, i když ne příliš dlouho před stupněm kontaktu, aby- veškerý fibrinový monomer byl kovertovón na fibrinový polymer nebo všechen nezesítěný fibrin.byl konvertován na zesítěný fibrin. Jinak řečeno., všechen fibrinový monomer bude·· konvertován na fibrinový polymer nebo všechen nezesítěný fibrin bude konvertován na zesítěný fibrin, před stupněm: kontaktu, což vede k velmi slabému fibrinovému utěsnovadlu. Toto-provedení se provede smísením kompozice, obsahující fibrinový monomer nebo nezesítěný fibrin s kompoziví, - která může konvertovat fibrinový monomer na fibrinový polymer nebo. nezesítěný fibr_in_ na zesítěný fibrin, před stupněm kontaktu. Protože j©: třebaásí 30 sekund pro konverzi, aby byla úplná, neměl by konverzní stupen začít více než asi 30 sekund a výhodně ne více než asi 3 sekundy před stupněm kontaktu. Toto provedení je preferováno, protože zajišťuje, Že maximální množství přípravku, obsahujícího fibrinový monomer nebo nezesítěný fibrin, zůstane na požadovaném místě a ještě také vytvoří vynikající fibrinovou sraženinu.
Konverze fibrinového monomeru na fibrinový polymer’ nebo nezesítěného fibrinu na zesítěný fibrin může být provedena jakoukoliv technikou, která je známá nebo vyvi-37nutá. Jak se však konverzní stupen provede, to závisí na zdroji přípravku, obsahujícího fibrinový monomer nebo nezesítěný fibrin, např. celá krev nebo rekombinantní fibrinogen, formě fibrinového monomeru nebo nezesítěného fibrinu, např.fibrin I nebo B3 fibrin a k menšímu rozsahu, kde požadované místo bude obsahovat pacientovu krev nebo jiné tělesné tekutiny v době použití fibrinového utěsňovadla.
Jestliže se použije separátní přípravek, jako je alkalický pufr (diskutován dále) pro stupen konverze, potom metoda předloženého vynálezu může být provedena s například dvojzásobníkovou stříkačkou. Dvouzásobníková stříkačka může mít tvar Y, čímž umožní smísení přípravku,, obsahujícího fibrinový monomer nebo nezesítěný fibrin a přípravku užitého v konverzním stupni, aby se smísily bezprostředně před stupněm kontaktu, ^aké spíše než Y-tvarovaná dvojzásobníková stříkačka, může být použita dvojzésobníková stříkačka se dvěma otvory. .Toto umožňujeA
i.
současný kontakt s požadovaným místem a konverzi na fibriftový polymer.· nebo zesítěný fibrin. Také přípravky z dvojzásobníkové stříkačky mohou být nastříkány na požadované místo. Viz H.B.Kram a spol., The American Surgeon, 57*.
381 (1991 ).
Jestliže je zdrojem přípravku, obsahujícího fíbrinový monomer nebo nezesítěný fibrin je' krev, potom jak je uvedeno výše se předpokládá, že přípravek si bude udržovat dosti protrombinu, faktoru XIII a jiných nezbytných substancí pro převedení takového fibrinového monomeru nebo nezesítěného fibrinu na zesítěný fibrin, např. aktivátory protrombinu. Jestliže nezesítěným fibrinem je fibrinový polymer, tj. nezesítěný fibrin nebyl solubilizován, může být nezesítěný fibrin konvertován na zesítěný fibrin aktivací protrombinu a faktorem XIII takového přípravku za vzniku zesítěného fibrinu. Taková aktivace může být prove-38dena kontaktem přípravku se zdrojem vápníkových iontů.
Neomezující zdroje vápníku zahrnují chlorid vápenatý, výhodně v koncentraci 30 mM. Alternativně a méně výhodně •raohou-vápn-í ková—i-onty-být-dodávána-krví-na-požadované—-----------------místo.
Jestliže byl solubilizován nezesítěný,fibrin, tj. fibrinový monomer závisí převedení fibrinového monomeru na zesítěný fibrin na tom, jak byla provedena solubiliý1*4? Κτί Ί Λ A. MA A.AI η Λ 1 i O M J-V
I kv ? 1 nmřfiA
IMXXXXMW 11 selým pufrem, může být zesítěný fibrin vytvořen zvýšením; pH přípravku, obsahujícího fibrinový monomer tak, že fibrinový monomer může polymerovat. Toto může být provedeno kontaktem takového' přípravku s jakýmkoliv vhodným alkalickým.pufrem. Neomezující příklady: alkalických pufrů zahrnují HEPES, hydroxid sodný, hydroxid draselný, hydroxid vápenatý, hydrogenuhiiěitanové pufry jako jedrydrogenuhličitan sodný a hydrogenuhliěitan: draselný,'triτ-kovové soli kyseliny citrónové, .soli kyseliny octové a soli kyseliny sírové. Výhodné alkalické pufry zahrnují: 0,5-0,75M uhličitan/hydrogenuhličitan sodný pH 10-10,5, 0,5-Q,75M_ hydrogen.uhličitan sodný/NaÓH ρΗ 10,0, V, 5M glycin/NaGH pH 10,0, 0,5-1,0M bish.ydrox.yethylaminoethansulfonovou kyselinu (BES) pH 7,5, 1M hydrox.yethylpiperazinpropansulfohóvóu' kysel”ihu”'(’EPP'S’)pH~’875, 0 ,'5M tricin 'p’H '8,5,'ΪΜ morfolinopropansulfonovoukyselinu (MOPS) pH 8,0, ÍM trishydroxymethylaminoethansulfonovou kyselinu (TES) pH 8,0 ·— a -O j^M-cykl-ohexyl-am-i-noethansm-l-fOnOVOu-kysel-i-nu ÍGHES) pH 10,0, nejvýhodnější jsou G,5-0,75M uhličitšn/hydrogeouhliČitan sodný pH 10-10,5, 0,5-1,0M bis-hydroxyethylarainoethansulfonové kyselina (BES) pH 7,5, 1M hydroxyethylpiperazinpropansulfonová kyselina (EPPS) pH 8,5 a 1M trishydroxymethylaminoethansulfonová kyselina (TES) pH 8,0.
b· i1
-39Množství alkalického pufru, které se použije by mělo být dostatčné pro polymeraci nezesítěného fibrinu. Je výhodné, když se asi. 10 dílů až asi jeden díl přípravku, obsahujícího fibrinový monomer smísí s. asi 1 dílem alkalického pufru. Výhodnější je poměr asi 9:1. Je nutno uvést, že výhodný poměr závisí na zdroji pufru a požadované síle fibrinového polymeru. Samozřejmě požadovaná síla fibrinového polymeru závisí na konečném použití v
fibrinového utěsnovadla.
*
Jestliže se áolubilizace provádí s chaotropním činidlem, potom může být fibrinový monomer konvertován na zesítěný.fibrin zředěním přípravku, obsahujícího fibrinový monomer s, například, destilovanou vodou, Zředění
i.
by mělo být provedeno tak, že se použije minimální množstfí ředidla. Obecně by měla výsledná koncentrace chaotropního činidla po zředění být asi 0,5 až asi 0,1 molární.
lít
Navíc.· ke zvýšení pH nebo zředění chaotropního Činidla přípravku, obsahujícího fibrin monomer, je výhodné, že protrombin a faktor XIII takového přípravku jsou aktivovány za vzniku zesítěného fibrinu. Taková aktivace může být provedena kontaktem přípravku se zdrojem iontů vápníku. Zdrojem vápníkových iontů může být část alkalického pufru nebo část kyselého pufru, který se použije v solubillzačním stupni. Neomezující zdroje vápníkových iontů zahrnují chlorid vápenatý, výhodně v koncentraci 30 mM. Alternativně a méně výhodně může být zdroj vápníkových iontů dodáván krví na požadované místo.
Mělo by být uvedeno, že je-li alkalickým pufrem pufr uhličitan/hydrogenuhličitarc, potom musí být zdroj vápníko-40vých iontů přidán ke kyselému pufru během stupně solubilizace. Toto je vyvoláno skutečností, že chlorid vápenatý není rozpustný v pufru uhličitan/hydrogerauhličitan.
Je výhodné, aby končentrace vápníkových iontů.v kyselém______ pufravacím roztoku byla od asi 5 milimol do asi 150 milimol a výhodněji od asi 5 mM do asi 50 'mM,
Očekává se, že výsledná fibrinová sraženina bude zesítěný fibrin II bez ohledu na to, jaká forma nezesítěného fibrinu, tj. fibrinový monomer nebo fibrinový polymer, je přítomna. Je-li však formou nezesítěného fibrinu BB fibrin, potom se očekává, že může být vyžadován přídavek zdroje dalšího fibrinu pro převedení BB fibrinu na zesítěný fibrin. Takovým zdrojem trombinu.může/být například, plasma pacienta, kdy se-tato plasma přidá k přípravku, obsahujícímu-nezesítěný fibrin.
....... ·. -W,.:’
- · Jestliže požadované místo obsahuje krev a použije se přípravek, obsahující fibrinový monomer., tj. nezesítěný fibrin byl solubilizován, potom může být tato krev/použita jako ředidlo chaotropního'činidla nebo pro zvýšení pH přípravku', .obsahujícího fibrinový monomer. iMení tak nutno použít žádné ředidlo nebo alkalicky pufr.’ V takovém provedení je výhodné, aby zdroj vápníkových iontů byl obsažen, v...kyselém .p.ufr.u. nebo...chao.tro.pni Č.inidílo bylo. .·........ .
použito v solubilizačním stupni. Také v takovém případě může být přípravek, obsahující fibrinový monomer umístěn na pevném nosiči, např. obvazu?, sutura, náhrada nebo li.
dresing, které budou v kontaktu s požadovaným místem. Takový nosič se pak umístí do kontaktu s požadovaným místem až do, například, tvorby fibrinová sraženiny.
Je však třeba uvést, že jestliže přípravek, obsahující fibrinový monomer neobsahuje tolik protrombinu a faktoru: XIII, aby vznikl zesítěný fibrin, je takový přípravek
-41jeStě vhodný jako fibrinové utěsnovadlo, protože polymerace fibřinového monomeru per se je vhodná pro tvorbu fibrinové sraženiny. Takový přípravek tak může být ještě použit pro tvorbu zesítěného fibrinu přídavkem zdroje iontů vápníku a aktivovaného faktoru XIII (nebo prekursorů až aktivovaného faktoru XIII) a popřípadě trombinu. Takový zdroj vápníkových iontů, aktivovaného faktoru XIII a trombinu může být přidán k přípravkům, obsahujícím fibrinový monomer. Aktivovaný faktor XIII může být při dán k přípravku, obsahujícímu fibrinový monomer v konečné koncentraci od asi 1,0 do asi 20 jednotek faktoru XIII na ml přípravku, obsahujícího nezesítěný fibrin. Alternativně může být faktor XIII dodáván krví nebo tělesnými tekutinami na požadované místo nebo přídavkem autologní plasmy k přípravku, obsahujícímu fibrinový monomer. Neomezující zdroje vápníkových iontů zahrnují chlorid vápenatý, výhodně v koncentraci JO nA Alternativně a méně výhodně, mohou být vápníkové ionty dodávány krví nebo tělesnými tekutinami na požadované místo. Od asi 4 jednotek do asi 500 jednotek trombinu na ml. přípravku, obsahujícího fibrinový monomer může být přidáno, nebo trombin může být poskytnut požadovaným místem.
Jestliže jsou zdrojem přípravku, obsahujícího nezesítěný fibrin buněčné kultury, které sekretují fibrinogen nebo rekombinantní fibrinogen a nezesítěným fibrinem — - je-fibrinový polymer,- tj. nezesí těný’fibrin nebyl solubilizován, potom musí být pro tvorbu zesítěného fibrinu použit zdroj vápníkových iontů a aktivovaného faktoru XIII (nebo prekursorů až aktivovaného faktoru XIII). Faktor XIII musí být použit, protože tyto zdroje nezesítěného fibrinu neobsahují jakýkoliv faktor XIII. Aktivovaný faktor XIII může být přidán k přípravku, obsahujícímu nezesítěný fibrin v konečné koncentraci od asi 1,0 do asi 20 jednotek faktoru XIII na ml přípravku, obsahujícího
-42nezesítěný fibrin. Alternativně může být faktor XIII dodáván krví nebo tělesnými tekutinami na požadované místo nebo přídavkem autologní plasmy k přípravku, obsa------hujícímu-nezesí-těný-f-i-br-in.—eomezující -zdr-oje—vápní.k.o^·-... ------vých iontů zahrnují chlorid vápenatý, výhodně v koncentraci 30 mM. Alternativně a méně výhodně mohou být vápníkové ionty dodávány.krví nebo tělesnými tekutinami na požadované místo. Také, jako možnost, může být trombin přidáván k takovému přípravku za účelem zajištění-tvorby zesítěného fibrinu II.. Asi 4 dednotkv až asi 500 nednotek trombinu na ml přípravku, obsahujícího nezesítěný fibrin může být přidáno nebo trombin může být poskytnut požadovaným místem.
Jestliže byl nezesí těný fibrin. s.olubilizován,, tj., je to fibrinový monomer, převedení fibrinového monomeru
- na fibrinový polymer závisí na tom, jak byla provedena solubilizace, např. kyselým puf r.em nebo chaotropním. činidlem.. Tvorba fibrinového polymeru-může být provedena stejnými metodami, jak.jsou,popsány, výše. Tento fibrinový polymer, je-li to žádoucí, může pak být převedeni na zesítěný fibrin přídavkem zdroje vápníkových iontů a . aktivovaného faktoru XIII (nebo prekursorů až aktivovaného faktoru' XIII) a popřípadě trombinu k přípravku, obsahujícímu fi-brinový‘monomer-,- jak je--popsáno výše. -Ak- -- — · tivovaný faktor XIII-může být přidán k přípravku, obsahujícímu nezesítěný fibrin v konečné koncentraci od asi
..... J.,Ó^do-asi-20-jedno-tek--f-ak.tor-u.,XlII.na-.ml .přípravku.,, obsa-.. .,. ..... hujícího nezesítěný fibrin. Alternativně může být faktor XIII dodáván krví nebo tělesnými tekutinami na požadované místo nebo přídavkem autologní plasmy k přípravku, ob- . sáhujícímu nezesítěný fibrin. Neomezující zdroje vápníkových iontů zahrnují chlorid vápenatý, výhodně v koncentraci. 30 mM.. Alternativně a méně výhodně, mohou být váp-43níkové ionty dodávány krví nebo tělesnými tekutinami na požadované místo. Může být přidáno od asi 4 jednotek do asi 500 jednotek trombinu na ml přípravku, obsahujícího fibrinový monomer nebo může být trombin poskytnut požadovaným místem.
Fibrinové utěsnovadlo podle předloženého vynálezu může také obsahovat přísady, například antibiotika, např. gentamycin, cefotaxim, nebacetin a sisomycin, histaminové ^2“an^aSOfl^s^y» např. ranitidin a léčiva proti rakovině, např. OK-432. Toto může být provedeno přídavkem požadovaných antibiotik k přípravku, obsahujícímu fibrinový monomer nebo nezesítěný fibrin. Viz M.C.H. Gersdorff'a T.A.J.Robillard, Raryngoscope, 95:1278-80 (1975)i A. Ederle a spol., Ital.J.Gastroenterol., 23:35456 (1991), V.Ronfard a spol.-, Burns, 174181-84 (1991); ' T. Sakurai a spol., J.OontroliRelease, 18:39-43 (1992); T.Monden a spol., Oancer, 69:636-42 (1992), F.Greco, J. of Biomedical Materials Research, 25:39-51 (1991) a H.B.Kpam a spol., Journal of ^urgical Research 50:175178 (1991), jejich obsah je zde uveden jako reference. Mo hou být rovněž přidány jiné přísady, například fibronektin, fibrinolytické inhibitory jako je aprotinin, alfa-2 antiplasmin, PAI-1 , PAI-2, 6-aminohexahová kyselina, 4aminomethylcyklohexanová kyselina, kollagěn nebo keratlnocyty. Předpokládá se, že dávka takové přísady je stejná jako a,®] používá v běžných fibrinových utěsnovadlech.
Předložený vynález také poskytuje kity fibrinového v
utěsnovadla. Kit může obsahovat první složku přípravku, obsahujícího fibrinový monomer a druhou složku, kterou je alkalický pufr, který je schopen polymerovat fibrinový
-44monomer nebo destilovanou vodu, podle toho, jak byl proveden· solubilizační stupen. Druhá složka může popřípadě obsahovat 2droj vápníkových iontů. Alternativně může
-první- složkou -být-pří pravěk—obsahu jí cí-nezesí-těný-fib----------— rin a druhou složkou být zdroj vápníkových iontů. Je-li použit zdroj fibrinogenu pro přípravu přípravku, obsahujícího nezesítěný fibrin, kterým jsou buněčné kultury, které sekretují fibrinogera nebo rekombinantní fibrinogera, může být první složkou kompozice, obsahující nezesítěný fibrin, druhou složkou může být zdroj vápníkových iontů a třetí složkou aktivovaný faktor XIII.
Příklady_provedení vynálezu Příklad 1 Příprava plasmy z celé krve 5.1 ^elá krev (100 ml) se odebere do standardních obchodně dostupných krevních vaků, obsahujících antikoagulant jako je citrát/fosfét/dextrosa. Krev se pak převede do kontejneru vhodného pro odstře5óvání a odstředuje se přisteplotě místnosti 10 minut při 3000 g*. *irj£ supernatantová plasma (přibližně 50 ml) se dekantuje a buněčná složka se odloží.
Alternativní metodou přípravy plasmy z celé krve je -filtrace-· Opět se 100 ml celé krve odebere-do vaku, obsa- . hujícího vhodný antikoagulant jako je citrát/fosfát/dextrosá. Krev se pak recirkuluje přes filtr vykazující dobrou pro terno vou- ‘trans misi 'pomocí' peristaitické pumpy. Protlačení membránou vede k·plasmě, která je protlačena s buněčnými složkami, zbývajícími v recirkulující krvi. Plasma - ( 50 - ml) se- ofiebere-pro -další -zpracování. — ..... -.....
5.2 Imobilizace batroxobinu na kuličkovou agarosu
V imobilizační studiii se použije kuličková plasma (Pharmacia). Použitá agarosa byla ze 4 % zesítěna, 45165 /um (90 % částic). Tento materiál při hydrataci nabotnal pětkrát ve srovnání s původním objemem:. Batroxobin se nejprve oxiduje 0,1M jodistanem sodným po 1 hodinu při teplotě místnosti u uzavřené scintilační nádobce. Batroxobin se vyčistí průchodem přes sephadex PD-10 gelovou permeáční kolonu.
Oxidovaný batroxobin se __i- i-- — ..i _ pan. nupu-Lujt:
-45k hydrazidem aktivovanému agarosovému gelu přes noc při teplotě místnosti v 50 mM octanu sodném pH 5,5 plus 10 mM borohydridu sodném (30-200 j na 1,75 g vlhkého gelu). Nenavázané reakční složky se odstraní z gelu promytím:
-50 ml mM octanu sodného pH 5,5, 100 ml 50 mM glycin/lM chlorid sodný pH 3,0, 100 ml 50 mM uhličitan sodný/lM chlorid sodný pH 10,0, 100 ml 50 mM fosforečnan: sodnýflM chlorid sodný pH 7,0, 100 ml vody, 100 ml 50 mM fosforečnanj sodný/lM chlorid sodný pH 7,0, 100 ml fosforečnan sodný pH 7,0.
5.3. Reakce imobilizovaného enžymu s plasmovým fibrinogenem za vzniku přípravku, obsahujícího nezesítěný fibrin Imůbilizovaný enzym (350 mg) se přidá k přibližně ml odstředěné nebo filtrované plasmy a Šetrně se míchá 7 až 20 minut dokud se nevytvoří sraženina nezesítěného fibrin I polymeru.
Fibrin I polymer· plus asociovaný imobilizovaný enzym se pak odeberou buď a) odstředěním při 3000 g po 10 min s následujícím odstraněním supernatantového séra dekantací, nebo b) filtrací vhodným filterm, vázajícím malé proteiny s následujícím odložením filtrovaného séra a uchováním fibrin I polymeru plus imobilizovaného enzymu pro další zpracování. CTento fibrin I polymer je příkladem přípravku, obsahujícího nezesítěný fibrin.
5.4. Solubilizace fibrin I polymeru za vzniku přípravku, obsahujícího fibrinový monomer
Solubilizace fibrin T polymeru se dosáhne přídavkem ' .....asi-1-4 ml 0,2M octanu sodného pH 4,0-, obsahujícího 30 mMpufru chloridu vápenatého k získanému fibrin I polymeru, plus imobilizovaného enzymu. Vzorek se dále intenzivně míchá, např. na vortex mixéru, 2 minuty. Odstenění imobilizovaného enzymu může být dosaženo filtrací roztoku fibrinu I filtrem vázajícím 1 až 20 /um malé proteiny.
Enzym agarosa bude zadržen na filtru, čímž se dosáhne jeho odstranění ze systému. Zbylý roztok, přípravek, obsahující fibrin I monomer, obsahuje koncentrovaný roztok fibrin I monomeru ve spojení s jinými plasmovými proteiny.
-46Obecně asi 100 ml celé krve poskytne asi 4 ml nebo 5 ml přípravku, obsahujícího fibrin monomer, kde koncentrace fibrin monomeru je od asi 25 mg/ml do asi 35 mg/ml. Tento je nyní připraveni pro doručení k_pacientpyi_buň_samonný.______ nebo koextrudovaný s repolymerizujícím pufrem za vzniku fibrinového utěsnovadla.
5.5. Repolymerace přípravku, obsahujícího fibrin I monomer Repolymerace se dosáhne současným smísením roztoku·, obsahujícího fibrin 1 monomer s 1 dílem vhodného repolymeračního pufru, např. 0,75 M uhličitan sodný/hydrogenuhličitan sodný, pH 10,0. Poměr míšení může být měněn', avšak poměr 9:1 udržuje vysokou koncentraci fibrinu v konečném produktu·. Koextruzí fibrin I spontánně repolymeruje a konvertuje na fibrin II s následujícím zesítěním fibrinu během periody asi 30 minut.
Předložený vynález není omezen DODsanvmi specifický. - * W 1 .-'SV* * mi provedeními, která jsou míněna jako jednotlivé ilustrace individuálních aspektů vynálezu. Ve skutečnosti budou z uvedeného popisu odborníkům zřejmé různé modifikace předloženého vynálezu Takové modifikace spadají do rozsahu připojených nároků.
- 5.6 Aktivace agaresy'-hyďrazidem a kopulace přes úhlohydrátocou S^r8^reafcf^uliiohydrátové skupiny batroxobinu s ‘hydrazidem aktivovaným...nosičem, .musí být cukr nejprve oxidován za vzniku volných -CHO skupin. Toto se provede následovně.
Batroxobin 1-7 mg se rozpustí ve 2 ml vody a 0,2 ml 0,1M jodistanu sodného. Směs se inkubuje při teplotě místnosti 1 hodinu, po které se odsolí gelovou filtrací na Sephadéxu G-25. Oxidovaný aktivní batroxobin se eluuje z kolony .0,9% hmotn./obj. chloridu sodného.
-47Standardní komerčně dostupná hydrazidem aktivovaná agarosa (Bio-rad Laboratories Ltd UK) nebo jakákoliv skupina s terminální volnou aminoskupinou může být použita pro přímé napojení volných aldehydových skupin (-CHO). Použije-li se hydrazid-agarosa, je kopulační postup následující.
1-5 g gelu hydrazid-agarosy se suspenduje ve 4 ml 50 mM octanu sodného pH 5,5. K suspenzi se přidá 1 ml 10 mM borohydridu sodného spolu s požadovaným množstvím oxidovaného batroxobinu (typicky 100-200 Bj. na g vlhkého gelu).
*
Vzorek se přes noc mísí při teplotě místnosti a postupně se promyje ve skleněné nálevce se sintrem 50 ml 50 mM octanu sodného pH 5,5, 100 ml 50 mM glycin/lM chloridu sodného pH 3,0, 100 ml 50 mM uhličitanu sodného/1M chloridu sodného pH 10,0, 100 ml 50 mM fosfátu sodného/lM chloridu sodného pH 7,0, 100 ml vody a 100 ml 50 mM fosfátu sodného/1M chloridu sodného pH 7,0 a nakonec 100 ml 50 mM fosforečnanu sodného pH 7,0.
Způsob reakce imobilizovaného batroxobinu s plasmou je následující.
ph plasmy (50 ml) se sníží na pH 5,5- přídavkem kyseliny .octové. K. plasmě -se přidá ekvivalent 100-200 Bj -batro xobinu imobilizovaného na přibližně 1,75 g (hmotnost vlhkého gelu) agarosy. Plasma se inkubuje při 37 °C po 10 až 15 minut, po této době se pH zvýší na pH 7,4 přídavkem hydroxidu sodného. Polymerace fibrinu I se objeví téměř okamžitě. Fibrin I polymer se získá odstředěním při 3500 ot/min po 10 minut a znovu se rozpustí ve 3-4 ml 0f2M octanu sodného pH 4,0, obsahujícího 30 mM chloridu vápenatého. Agarosa-enz.ym se pak oddělí od fibrinu 1 odstředěním nebo filtrací. Fibrin I se pak repolymeruje za vzniku fibrinového utěsnovadla přídavkem 9 dílů roztoku
-48fibrinu I k 1 dílu 0,75M uhličitanu sodného/h.ydrogenuhličitanu pH 10,0.
5.7. Systém zachycení enzymu za použití biotin.avidinu
----Zachycení— enzymu-se_provede_ne jprve'_bi_otinyl'ací batroxobinu a zachycením biotin-enzymu imobilizovaným avidinem (avidin- kopulovaný k 6% zesítěné agarosa).
Biotinylace proteinů může být dosaženo za použití mnoha činidel. V tomto případě se použije N-hydroxysukcinimíd-biotin (ve vodě rozpustný) (obchodně dostupný od fy Amersham). NHS-biotin (50 /ul) se přidé k 1 mg batroxobinu při pH 8,6. a roztok se inkubuje při teplotě místnosti 1 hodinu. Přebytek biotinylačního činidla se odstraní gelovou filtrací na sloupci Sephadexu G-25 s 0,1M fosforečnanem draselným pH 7,5 jako elučním činidlem.
K 50 ml plasmy se přidá ekvivalent 10 Sj(Biotin-batroxobin) a inkubuje se-při 37 °C 10 minut.‘Fibrin 1 polymer se získá odstředěním (3500 ot/min 10 minut) a znovu se rozpustí ve 3-4 ml Q,2M octanu sodného pH 4,0, obsahujícího 30 mM chloridu vápenatého. K fibrinu I se přidá avidin-agarosa (obchodně dostupná od Sigma Chemical ,Co. )\pri 0,2 g. (vlhký gel) na.ml fibrinu I. Vzorek se inkubuje při teplotě místnosti 10 minut a odstředí se při 2000 ot/min po 10 minuti'Získaný fibrin I 'je v podstatě prostý batroxobinu. Repolymerace fibrinu za vzniku fibrinového utěsňor vadla se dosáhne jak je popsáno v příkladu 5,6.

Claims (34)

1. Vodná kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje nezesítěný fibrinový monomer v koncentraci v rozmezí od asi 10 mg/mililitr do asi 200 mg/mililitr a uvedená kompozice má hodnotu pH v rozmezí od asi 1 do asi 5..
2. Vodná kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedená koncentrace je v rozmezí od asi 20 mg/mililitr do aši 100 mg/mililitr.
3, Vodná kompozice podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený fibrinový monomer je vybrán ze skupiny zahrnující fibrin I, des BB fibrin a fibrin II.
4. Vodná kompozice podle nároku 3, vyznačující se tím, že uvedeným fibrinovým monomerem je fibrin I.
5. Vodná kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje fibrinový monomer, přičemž koncentrace uvedeného fibrinového monomeru je v rozmezí od asi 20 mg/mililitr do asi 200 mg/mililitr.
6. Vodná kompozice podle nároku 5, vyznačující se tím, že uvedená koncentrace je v rozmezí od asi 20 mg/mililitr do asi 100 mg/mililitr.
7. Vodná kompozice podle nároku 5, vyznačující se tím, že uvedený fibrinový monomer je vybrán ze skupiny zahrnující fibrin I, des BB fibrin a fibrin II.
v
8. Vodná kompozice podle nároku 7, vyznačující se tím, že uvedeným fibrinovým monomerem je fibrin I.
9. Vodná kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje (a) _ f ibrinoyý__monqmer.,_^a_,_________________.......... . .. .
(b) zdroj vápníkových iontů, přičemž koncentrace uvedených vápníkových iontů se pohybuje v rozmezí od asi 5 mM do asi 200 mM,
10. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje fibrinový monomer a je v pevné formě.
11. Kompozice podle nároku 10, vyznačující se tím, že je tato kompozice vytvořena lyofilizací vodného roztoku ' obsahujícího fibrinový monomer.
*
12. Kompozice, vyznačující se tím, že obsahuje fibrinový monomer a sloučeninu vybranou ze skupiny zahrnující antibiotika, histamin H2-antagonistu, léči-vo proti rakovině, fibronektin a fibrinolytický inhibitor.
13. Kit, vyznačující, se tím, že obsahuje :
(a) kompozici obsahující fibrinový monomer, a (b) kompozici vybranou že souboru zahrnujícího alkalický pufr a destilovanou vodu.
14. Kit podle nároku 13, vyznačující se tím, že uvedený alkalický půfr nebo uvedená destilovaná voda dále obsahuje zdroj vápníkových iontů.
15. Kit, vyznačující se tím, že obsahuje (a) kompozici obsahující nezesítěný fibrin, a (b) kompozici obsahující zdroj vápníkových iontů.
'
16. Kit podle nároku 15, vyznačující se tím, že dále obsahuje aktivovaný faktor XIII.
17. Pevný nosič, vyznačující se tím, že na svém povrchu má kompozici obsahující fibrinový monomer.
18. Pevný nosič podle nároku 17, vyznačující se tím, že uvedený pevný nosič je vybrán ze skupiny zahrnující bandáže, stehy, protézy a obvazy.
19. Pevný nosič podle nároku 17, vyznačující se tím, že uvedený monomer je vybrán ze skupiny zahrnující fibrin I, des BB fibrin a fibrin II.
20. Pevný nosič podle nároku 19, vyznačující se tím, že uvedeným fibrinem je fibrin I.
21. Pevný nosič podle nároku 17, vyznačující se tím, *
že uvedená kompozice je v pevné formě.
22. Pevný nosič podle nároku 21, vyznačující se tím, že uvedená kompozice je vytvořena lyofilizací vodného roztoku obsahujícího fibrinový monomer.
23. Způsob přípravy kompozice obsahující fibrinový monomer z fibrinogenu, vyznačující se tím, že zahrnuje :
(a) kontaktování kompozice obsahující fibrinogen s enzymem podobným thrombinu k převedení uvedeného fibrinogenu na nezesítěný fibrinový polymer, (b) oddělení uvedeného nezesítěného fibrinového polymeru od uvedené kompozice obsahující fibrinogen, a (c) solubilizace uvedeného nezesítěného fibrinového polymeru za vzniku přípravku obsahujícího fibrinový monomer,
24. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že uvedený enzym podobný thrombinu se imobílizuje na nosiči a při provádění uvedeného,kontaktování se.enzym podobný, thrombinu asociuje s uvedeným nezesítěným fibrinovým polymerem, přičemž se dále oddělí uvedený enzym podobný thrombinu od uvedené kompozice obsahující fibrinový monomer,
25. Způsob podle nároku 24, vyznačující se tím, že uvedený nosič je vybrán ze skupiny zahrnující celulózu, polydextrany, agarozu, polystreny, oxid křemičitý, polyakrylové kyseliny, polyakrylamidy, polyvilylalkoholy, skleněné kuličky, polykarbonáty, kolagen., deriváty celulózy, polytetrafluorethylen a jejich kombinace.
26. Způsob podle nároku 25, vyznačující se tíni,^ že uvedený nosič je vybrán ze-skupiny zahrnující agarozu a oxid křemičitý. * ·«
27 Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že uvedený enzym podobný thrombinu se imobílizuje na filtru nebo se tento enzym podobný thrombinu imobiližůje na nosiči aLje umístěn na jedné straně filtru, přičemž po uvedeném kontaktování výsledný fibrinový monomer projde filtrem.
28. 'Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že uvedený stupeň soTůbilizače se provádí pomočí kyselého roztoku pufru, který má pH menší; než asi 5 nebo za použití chaotropního činidla.
29. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že uvedený kyselý roztok pufru je vybrán ze skupiny zahrnující kyselinu octovou, kyselinu jantarovou, kyselinu glukuronovou, kyselinu cystenovou, kyselinu krotonovou, kyselinu itakonovou, kyselinu glutamovou, kyselinu mravenčí, kyselinu aspartovou, kyselinu adipovou a jejich soli.
30. Způsob podle nároku 28, vyznačující se tím, že uvedený kyselý roztok pufru nebo chaotropní činidlo dále obsahuje zdroj vápníkových iont;
31. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že uvedený stupeň oddělení se provede filtrací.
32. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že uvedený enzym podobný thrombinu převádí fibrinogen na fibrin I.
33. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že uvedený enzym podobný thrombinu*je vybrán ze skupiny zahrnující Ancrod a Batroxobin.
34. Způsob podle nároku 23, vyznačující se tím, že dále zahrnuje odstranění uvedeného enzymu podobného thrombinu z uvedené kompozice obsahující fibrinový monomer pomocí biotinylace uvedeného enzymu podobného thrombinu a kontaktování uvedené kompozice obsahující fibrinový monomer s imobilizovaným avidinem, čímž se odstraní uvedený enzym podobný thrombinu z uvedené kompozice obsahující fibrinový monomer. . .. _____
CZ932117A 1992-10-08 1993-10-08 Fibrin preparations for sealing and processes of their application CZ211793A3 (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US95821292A 1992-10-08 1992-10-08

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ211793A3 true CZ211793A3 (en) 1996-04-17

Family

ID=25500729

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ932117A CZ211793A3 (en) 1992-10-08 1993-10-08 Fibrin preparations for sealing and processes of their application

Country Status (24)

Country Link
US (12) US5750657A (cs)
EP (2) EP1266666A3 (cs)
JP (1) JP3771284B2 (cs)
KR (1) KR940008697A (cs)
CN (1) CN1091315A (cs)
AT (1) ATE244581T1 (cs)
AU (1) AU676201B2 (cs)
BR (1) BR9304185A (cs)
CA (3) CA2510981C (cs)
CZ (1) CZ211793A3 (cs)
DE (1) DE69333080T2 (cs)
DK (1) DK0592242T3 (cs)
ES (2) ES2202306T3 (cs)
FI (1) FI110616B (cs)
HU (1) HU218898B (cs)
IL (1) IL107211A (cs)
MX (1) MX9306272A (cs)
NO (1) NO314412B1 (cs)
NZ (3) NZ280264A (cs)
PL (3) PL175443B1 (cs)
PT (1) PT592242E (cs)
RU (1) RU2143924C1 (cs)
SG (1) SG49640A1 (cs)
SK (1) SK109393A3 (cs)

Families Citing this family (251)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6054122A (en) 1990-11-27 2000-04-25 The American National Red Cross Supplemented and unsupplemented tissue sealants, methods of their production and use
US6197325B1 (en) 1990-11-27 2001-03-06 The American National Red Cross Supplemented and unsupplemented tissue sealants, methods of their production and use
US7229959B1 (en) * 1990-11-27 2007-06-12 The American National Red Cross Supplemented fibrin matrix delivery systems
US6117425A (en) 1990-11-27 2000-09-12 The American National Red Cross Supplemented and unsupplemented tissue sealants, method of their production and use
CN1091315A (zh) * 1992-10-08 1994-08-31 E·R·斯奎布父子公司 血纤维蛋白封闭剂组合物及其使用方法
US6241747B1 (en) 1993-05-03 2001-06-05 Quill Medical, Inc. Barbed Bodily tissue connector
US8795332B2 (en) 2002-09-30 2014-08-05 Ethicon, Inc. Barbed sutures
ZA948564B (en) * 1993-11-19 1995-07-26 Bristol Myers Squibb Co Liquid separation apparatus and method
AU709134B2 (en) * 1994-05-02 1999-08-19 E.R. Squibb & Sons, Inc. Recombinant fibrin chains, fibrin and fibrin-homologs
DE69535816D1 (de) * 1994-12-02 2008-10-02 Vivolution As Methode und vorrichtung zum abtrennen von fibrinmonomer aus blutplasma
US5733446A (en) * 1994-12-02 1998-03-31 Bristol-Myers Squibb Company Centrifuge with annular filter
US6946079B1 (en) * 1994-12-02 2005-09-20 Bristol-Myers Squibb Company Centrifugal filtration method for separating fibrin monomer from blood
PL320512A1 (en) * 1994-12-02 1997-10-13 Bristol Myers Squibb Co System for feeding a reagent into a centrifuge
US5585007A (en) 1994-12-07 1996-12-17 Plasmaseal Corporation Plasma concentrate and tissue sealant methods and apparatuses for making concentrated plasma and/or tissue sealant
US5605541A (en) 1994-12-07 1997-02-25 E. R. Squibb And Sons, Inc. Fibrin sealant applicatoor
JPH11502431A (ja) * 1995-01-16 1999-03-02 バクスター インターナショナル インコーポレイテッド 手術後の癒着を防止するための架橋化フィブリンの自己支持シート様材料
US5733545A (en) * 1995-03-03 1998-03-31 Quantic Biomedical Partners Platelet glue wound sealant
US6551794B1 (en) * 1995-11-09 2003-04-22 E. R. Squibb & Sons, Inc. Stable biotinylated biomolecule composition
US5691152A (en) * 1995-11-09 1997-11-25 E. R. Squibb & Sons, Inc. Stable avidin composition
ES2227624T3 (es) 1995-12-07 2005-04-01 Bristol-Myers Squibb Company Dispositivo para aplicar una mezcla de dos componentes liquidos.
DE29723807U1 (de) * 1996-04-30 1999-11-04 Medtronic, Inc., Minneapolis, Minn. Autologe Fibrin-Blutstillungsmittel
WO2000062828A1 (en) 1996-04-30 2000-10-26 Medtronic, Inc. Autologous fibrin sealant and method for making the same
AR013829A1 (es) 1996-07-12 2001-01-31 Baxter Int Un dispositivo medico para suministrar cantidades volumetricas de un primer y un segundo fluido, bioquimicamente reactivos, y metodo para suministrarfibrina a una superficie con dicho dispositivo
DE19634313A1 (de) * 1996-08-24 1998-02-26 Behringwerke Ag Methode zur Stabilisierung von Plättchen
US5844087A (en) * 1996-11-05 1998-12-01 Bayer Corporation Method and device for delivering fibrin glue
ATE357946T1 (de) 1996-11-15 2007-04-15 Bristol Myers Squibb Co Vorrichtung zur anwendung einer mischung von zwei oder mehreren flüssigen komponenten zur bildung eines biomaterials
US6613020B1 (en) 1996-12-06 2003-09-02 Bristol-Myers Squibb Company Method of applying a mixture of two liquid components as well as a device for carrying out the method
FR2757770B1 (fr) * 1996-12-30 1999-02-26 Inoteb Procede de preparation d'une colle biologique capable de coaguler par simple addition d'ions calcium
US6132598A (en) * 1997-01-08 2000-10-17 Bristol-Myers Squibb Company Centrifuge apparatus with temperature control means
CA2277860C (en) * 1997-01-08 2005-11-29 Bristol-Myers Squibb Company Centrifuge apparatus for separating blood
DK0951642T3 (da) 1997-01-08 2007-03-12 Bristol Myers Squibb Co Udstyr og fremgangsmåde til fremstilling af oplösninger bestående af blod- eller plasmabestanddele i en kendt koncentration
WO1998042260A1 (en) 1997-03-27 1998-10-01 Bristol-Myers Squibb Company Laparoscopic sealant applicator
US6331172B1 (en) 1997-04-14 2001-12-18 Baxter International Inc. Applicator for dispensing measured quantities with use of controlled suction
US5971956A (en) * 1997-04-15 1999-10-26 Biosurgical Corporation Medical suctioning apparatus and methods of use
US5931855A (en) 1997-05-21 1999-08-03 Frank Hoffman Surgical methods using one-way suture
GB9711927D0 (en) * 1997-06-09 1997-08-06 Bristol Myers Squibb Co Compositions useful as fibrin sealants
US6979307B2 (en) * 1997-06-24 2005-12-27 Cascade Medical Enterprises Llc Systems and methods for preparing autologous fibrin glue
IT1292410B1 (it) * 1997-06-24 1999-02-08 Roberto Beretta Contenitore di pronto impiego per ottenere colla di fibrina autologa
US7745106B2 (en) 1997-06-24 2010-06-29 Cascade Medical Enterprises, Llc Methods and devices for separating liquid components
US6162241A (en) * 1997-08-06 2000-12-19 Focal, Inc. Hemostatic tissue sealants
AT407484B (de) * 1997-11-12 2001-03-26 Bio Prod & Bio Eng Ag Arzneimittel zur förderung der wundheilung
EP1037659A4 (en) 1997-12-09 2005-02-09 Bristol Myers Squibb Co FIBRINOLYTIC INHIBITOR FOR SEALANT
CA2312476A1 (en) * 1997-12-09 1999-06-17 Bristol-Myers Squibb Company Fibrinogen-converting enzyme hybrids
US6159232A (en) 1997-12-16 2000-12-12 Closys Corporation Clotting cascade initiating apparatus and methods of use and methods of closing wounds
US6478808B2 (en) 1997-12-17 2002-11-12 Closys Corporation Clotting cascade initiating apparatus and methods of use and methods of closing wounds
US6762336B1 (en) 1998-01-19 2004-07-13 The American National Red Cross Hemostatic sandwich bandage
US6540716B1 (en) * 1998-05-06 2003-04-01 Bristol-Myers Squibb Company Directional endoscopic delivery of material
US20020022588A1 (en) * 1998-06-23 2002-02-21 James Wilkie Methods and compositions for sealing tissue leaks
US6083383A (en) * 1998-06-25 2000-07-04 Huang; Xun Yang Apparatus for production of fibrin ogen or fibrin glue
US6274090B1 (en) 1998-08-05 2001-08-14 Thermogenesis Corp. Apparatus and method of preparation of stable, long term thrombin from plasma and thrombin formed thereby
JP2000070241A (ja) * 1998-08-31 2000-03-07 Nissho Corp 急速凝固用真空採血管
BE1012536A3 (fr) 1998-11-04 2000-12-05 Baxter Int Element muni d'une couche de fibrine sa preparation et son utilisation.
AU1617800A (en) * 1998-11-12 2000-05-29 Polymer Biosciences, Inc. Hemostatic polymer useful for rapid blood coagulation and hemostasis
KR100858830B1 (ko) * 1998-11-18 2008-09-17 체에스엘 베링 게엠베하 조직 접합제용의 안정화된 단백질 제제
DE19853033A1 (de) * 1998-11-18 2000-05-25 Centeon Pharma Gmbh Stabilisierte Proteinzubereitung für einen Gewebekleber
US7276235B2 (en) * 1998-11-18 2007-10-02 Zlb Behring Gmbh Tissue glue with improved antiadhesive properties
DE10025001A1 (de) * 2000-05-22 2001-11-29 Aventis Behring Gmbh Gewebekleber mit verbesserten anti-adhäsiven Eigenschaften
ES2257877T3 (es) * 1998-12-02 2006-08-01 Bristol-Myers Squibb Company Suministro de celulas por pulverizacion.
DE19858463A1 (de) * 1998-12-18 2000-06-21 Centeon Pharma Gmbh Verwendung eines Fibrinklebers zur Regeneration des Lebergewebes
US6310036B1 (en) 1999-01-09 2001-10-30 Last Chance Tissue Adhesives Corporation High strength, Bio-compatible tissue adhesive and methods for treating vigorously bleeding surfaces
US7015198B1 (en) * 1999-05-11 2006-03-21 Orentreich Foundation For The Advancement Of Science, Inc. Materials for soft tissue augmentation and methods of making and using same
US6921412B1 (en) 1999-05-18 2005-07-26 Cryolife, Inc. Self-supporting, shaped, three-dimensional biopolymeric materials and methods
AT500670A1 (de) * 1999-05-19 2006-02-15 Bio & Bio Licensing Sa Arzneimittel zur lokalen anwendung
AU771557B2 (en) * 1999-06-01 2004-03-25 Vivolution A/S Prevention of post surgical adhesions using a fibrin monomer sealant
CA2373738A1 (en) * 1999-06-01 2000-12-07 Bristol-Myers Squibb Company Fibrin polymer structure
EP1223955A1 (en) * 1999-06-01 2002-07-24 Bristol-Myers Squibb Company Fibrin sealants providing less inflammatory response and methods using same
US6472162B1 (en) 1999-06-04 2002-10-29 Thermogenesis Corp. Method for preparing thrombin for use in a biological glue
WO2000077227A1 (en) * 1999-06-16 2000-12-21 Bristol-Myers Squibb Company Fibrin sealant as a transfection/transformation vehicle for gene therapy
US7654998B1 (en) * 1999-08-23 2010-02-02 Aeris Therapeutics, Inc. Tissue volume reduction
US6610043B1 (en) * 1999-08-23 2003-08-26 Bistech, Inc. Tissue volume reduction
CA2316554C (en) 1999-08-25 2007-10-23 Bristol-Myers Squibb Company Applicator and electro-mechanical applicator drive system
US6463335B1 (en) 1999-10-04 2002-10-08 Medtronic, Inc. Temporary medical electrical lead having electrode mounting pad with biodegradable adhesive
ATE286773T1 (de) * 1999-10-29 2005-01-15 Bristol Myers Squibb Co Verfahren zur herstelung von lösungen mit blut- oder plasma-komponenten mit erhöhten konzentrationen
ATE460951T1 (de) 2000-01-25 2010-04-15 Edwards Lifesciences Corp Freisetzungssysteme zur behandlung von restenose und anastomotischer intimaler hyperplasie
US6187347B1 (en) 2000-02-09 2001-02-13 Ecosafe, Llc. Composition for arresting the flow of blood and method
JP3576063B2 (ja) * 2000-02-22 2004-10-13 株式会社ホギメディカル 凝固蛋白質を含む可溶性創傷治癒止血セルロース繊維とその製造方法
EP1155706A1 (en) * 2000-05-19 2001-11-21 Xun Yang Huang Apparatus for production of fibrin glue and its medical application
US6921532B1 (en) 2000-06-22 2005-07-26 Spinal Restoration, Inc. Biological Bioadhesive composition and methods of preparation and use
US6468527B2 (en) 2000-06-22 2002-10-22 Sam L. Austin Biological bioadhesive composition and methods of preparation and use
CA2421638A1 (en) * 2000-09-11 2002-03-21 Closure Medical Corporation Bronchial occlusion method and apparatus
US7226615B2 (en) * 2000-11-07 2007-06-05 Cryolife, Inc. Expandable foam-like biomaterials and methods
US6942880B1 (en) * 2001-04-09 2005-09-13 Medtronic, Inc. Autologous platelet gel having beneficial geometric shapes and methods of making the same
US7795218B2 (en) 2001-04-12 2010-09-14 Bioaxone Therapeutique Inc. ADP-ribosyl transferase fusion variant proteins
EP1406678B1 (en) * 2001-04-25 2009-01-14 Eidgenössische Technische Hochschule Zürich Drug delivery matrices to enhance wound healing
US7056331B2 (en) 2001-06-29 2006-06-06 Quill Medical, Inc. Suture method
US6994722B2 (en) 2001-07-03 2006-02-07 Scimed Life Systems, Inc. Implant having improved fixation to a body lumen and method for implanting the same
US6848152B2 (en) 2001-08-31 2005-02-01 Quill Medical, Inc. Method of forming barbs on a suture and apparatus for performing same
US6692515B2 (en) * 2001-11-07 2004-02-17 Frank H. Boehm, Jr. Surgical kit for repairing leaks in fluid carrying vessels and organs and method thereof
US7101862B2 (en) 2001-12-31 2006-09-05 Area Laboratories, Llc Hemostatic compositions and methods for controlling bleeding
DE10204405A1 (de) * 2002-02-04 2003-08-21 Surface Care Gmbh Plasmagel
US6998510B2 (en) * 2002-02-04 2006-02-14 Damage Control Surgical Technologies, Inc. Method and apparatus for improved hemostasis and damage control operations
US7832566B2 (en) 2002-05-24 2010-11-16 Biomet Biologics, Llc Method and apparatus for separating and concentrating a component from a multi-component material including macroparticles
US7992725B2 (en) 2002-05-03 2011-08-09 Biomet Biologics, Llc Buoy suspension fractionation system
US20030205538A1 (en) 2002-05-03 2003-11-06 Randel Dorian Methods and apparatus for isolating platelets from blood
DE10392686T5 (de) 2002-05-24 2005-07-07 Biomet Mfg. Corp., Warsaw Vorrichtung und Verfahren zum Trennen und Konzentrieren von Flüssigkeiten, welche mehrere Komponenten enthalten
US20060278588A1 (en) 2002-05-24 2006-12-14 Woodell-May Jennifer E Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components
US7845499B2 (en) 2002-05-24 2010-12-07 Biomet Biologics, Llc Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components
US6773450B2 (en) 2002-08-09 2004-08-10 Quill Medical, Inc. Suture anchor and method
CA2498212C (en) 2002-09-10 2012-07-17 American National Red Cross Multi-layered hemostatic dressing comprising thrombin and fibrinogen
US8100940B2 (en) 2002-09-30 2012-01-24 Quill Medical, Inc. Barb configurations for barbed sutures
US20040088003A1 (en) 2002-09-30 2004-05-06 Leung Jeffrey C. Barbed suture in combination with surgical needle
JP3640655B2 (ja) * 2002-10-23 2005-04-20 一知 井上 血管新生誘導剤
US20050004599A1 (en) * 2003-06-30 2005-01-06 Mcnally-Heintzelman Karen M. Non-light activated adhesive composite, system, and methods of use thereof
US7943810B2 (en) 2003-02-04 2011-05-17 Buckman Robert F Method and apparatus for hemostasis
JP4585743B2 (ja) * 2003-02-13 2010-11-24 独立行政法人物質・材料研究機構 生体内分解吸収性粘着性医用材料
US8394397B2 (en) * 2003-03-28 2013-03-12 Ed. Geistlich Soehne Ag Fuer Chemische Industrie Adhesive antineoplastic compositions
US20040224006A1 (en) * 2003-04-21 2004-11-11 Samn Raffaniello Ancrod irradiated, impregnated or coated sutures and other first aid or wound management bandaging materials for minimizing scarring and/or preventing excessive scar formation
US7624487B2 (en) 2003-05-13 2009-12-01 Quill Medical, Inc. Apparatus and method for forming barbs on a suture
US20070073338A1 (en) * 2003-09-04 2007-03-29 Roy Raghunandan Supercutaneous method and device for promoting hemostasis in cannulated patient
EP1673134A4 (en) 2003-09-12 2007-03-21 Marinepolymer Tech Inc RECEIVING VASCULAR ACCESS IN HEMODIALYSIS PATIENTS
US7044966B2 (en) 2003-10-06 2006-05-16 3F Therapeutics, Inc. Minimally invasive valve replacement system
CA2545874C (en) 2003-10-06 2012-02-21 3F Therapeutics, Inc. Minimally invasive valve replacement system
ES2403357T3 (es) 2003-12-11 2013-05-17 Isto Technologies Inc. Sistema de cartílago particulado
ES2436755T3 (es) 2004-05-14 2014-01-07 Ethicon Llc Dispositivos de sutura
US20070231372A1 (en) * 2004-05-21 2007-10-04 Juridical Foundation the Chemo-Sero- Therapeautic Research Institute Tissue Sealant
JP4767252B2 (ja) 2004-06-14 2011-09-07 ヌームアールエックス・インコーポレーテッド 肺のアクセス装置
US20050281740A1 (en) * 2004-06-16 2005-12-22 Glen Gong Imaging damaged lung tissue
US7608579B2 (en) * 2004-06-16 2009-10-27 Pneumrx, Inc. Lung volume reduction using glue compositions
US20050281739A1 (en) * 2004-06-16 2005-12-22 Glen Gong Imaging damaged lung tissue using compositions
US20050281798A1 (en) * 2004-06-16 2005-12-22 Glen Gong Targeting sites of damaged lung tissue using composition
WO2006009688A2 (en) 2004-06-16 2006-01-26 Pneumrx, Inc. Intra-bronchial lung volume reduction system
US7678767B2 (en) 2004-06-16 2010-03-16 Pneumrx, Inc. Glue compositions for lung volume reduction
US7468350B2 (en) 2004-06-16 2008-12-23 Pneumrx, Inc. Glue composition for lung volume reduction
US7553810B2 (en) * 2004-06-16 2009-06-30 Pneumrx, Inc. Lung volume reduction using glue composition
WO2006014567A2 (en) 2004-07-08 2006-02-09 Pneumrx, Inc. Pleural effusion treatment device, method and material
US7766891B2 (en) 2004-07-08 2010-08-03 Pneumrx, Inc. Lung device with sealing features
US7597687B2 (en) * 2004-10-29 2009-10-06 Spinal Restoration, Inc. Injection of fibrin sealant including an anesthetic in spinal applications
US8419722B2 (en) * 2004-10-29 2013-04-16 Spinal Restoration, Inc. Apparatus and method for injection of fibrin sealant in spinal applications
US8124075B2 (en) * 2004-07-16 2012-02-28 Spinal Restoration, Inc. Enhanced biological autologous tissue adhesive composition and methods of preparation and use
US8206448B2 (en) 2004-10-29 2012-06-26 Spinal Restoration, Inc. Injection of fibrin sealant using reconstituted components in spinal applications
US8403923B2 (en) * 2004-10-29 2013-03-26 Spinal Restoration, Inc. Injection of fibrin sealant in the absence of corticosteroids in spinal applications
US8142475B2 (en) 2004-10-18 2012-03-27 Tyco Healthcare Group Lp Adhesive suture structure and methods of using the same
US20060115455A1 (en) * 2004-10-22 2006-06-01 Reed Kenneth C Therapeutic RNAi agents for treating psoriasis
US20110213464A1 (en) * 2004-10-29 2011-09-01 Whitlock Steven I Injection of fibrin sealant in the absence of corticosteroids in spinal applications
CA2587857C (en) 2004-11-23 2017-10-10 Pneumrx, Inc. Steerable device for accessing a target site and methods
ATE419019T1 (de) * 2005-01-14 2009-01-15 Eska Implants Gmbh & Co Verfahren zur herstellung einer osteoinduktiv- antiseptischen implantatbeschichtung
US7866485B2 (en) 2005-02-07 2011-01-11 Hanuman, Llc Apparatus and method for preparing platelet rich plasma and concentrates thereof
WO2006086201A2 (en) 2005-02-07 2006-08-17 Hanuman Llc Platelet rich plasma concentrate apparatus and method
JP4961354B2 (ja) 2005-02-07 2012-06-27 ハヌマン リミテッド ライアビリティ カンパニー 多血小板血漿濃縮装置および方法
US7766900B2 (en) 2005-02-21 2010-08-03 Biomet Manufacturing Corp. Method and apparatus for application of a fluid
JP5292533B2 (ja) 2005-08-26 2013-09-18 ジンマー・インコーポレイテッド インプラントおよび関節疾患の治療、置換および治療方法
US20070110788A1 (en) * 2005-11-14 2007-05-17 Hissong James B Injectable formulation capable of forming a drug-releasing device
RU2308287C2 (ru) * 2005-12-26 2007-10-20 Владимир Александрович Макаров Гемостатическое средство
US9402633B2 (en) 2006-03-13 2016-08-02 Pneumrx, Inc. Torque alleviating intra-airway lung volume reduction compressive implant structures
US8157837B2 (en) 2006-03-13 2012-04-17 Pneumrx, Inc. Minimally invasive lung volume reduction device and method
US8888800B2 (en) 2006-03-13 2014-11-18 Pneumrx, Inc. Lung volume reduction devices, methods, and systems
US20070248653A1 (en) * 2006-04-20 2007-10-25 Cochrum Kent C Hemostatic compositions and methods for controlling bleeding
WO2007127834A2 (en) 2006-04-26 2007-11-08 Medtronic, Inc. Compositions and methods of preparation thereof
WO2007127390A2 (en) * 2006-04-28 2007-11-08 Biolife, L.L.C. Materials and methods for wound treatment
US7976873B2 (en) 2006-05-10 2011-07-12 Medtronic Xomed, Inc. Extracellular polysaccharide solvating system for treatment of bacterial ear conditions
US7993675B2 (en) * 2006-05-10 2011-08-09 Medtronic Xomed, Inc. Solvating system and sealant for medical use in the sinuses and nasal passages
US20070264296A1 (en) * 2006-05-10 2007-11-15 Myntti Matthew F Biofilm extracellular polysachharide solvating system
US7959943B2 (en) * 2006-05-10 2011-06-14 Medtronics Xomed, Inc. Solvating system and sealant for medical use in the middle or inner ear
US8567609B2 (en) 2006-05-25 2013-10-29 Biomet Biologics, Llc Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components
WO2008019129A2 (en) * 2006-08-04 2008-02-14 Stb Lifesaving Technologies, Inc. Solid dressing for treating wounded tissue
US20100040667A1 (en) * 2006-09-07 2010-02-18 Ed. Geistlich Soehne Ag Fuer Chemische Industrie Method of treating bone cancer
WO2008036763A2 (en) * 2006-09-20 2008-03-27 Pneumrx, Inc. Tissue adhesive compositions and methods thereof
US7968682B2 (en) * 2006-12-12 2011-06-28 Oregon Health & Science University Degradation-resistant fibrinogen sealants
US20080154233A1 (en) * 2006-12-20 2008-06-26 Zimmer Orthobiologics, Inc. Apparatus for delivering a biocompatible material to a surgical site and method of using same
US8163549B2 (en) 2006-12-20 2012-04-24 Zimmer Orthobiologics, Inc. Method of obtaining viable small tissue particles and use for tissue repair
EP2106263B1 (en) * 2007-01-04 2016-12-21 Hepacore Ltd. Water soluble reactive derivatives of carboxy polysaccharides and fibrinogen conjugates thereof
US8088095B2 (en) * 2007-02-08 2012-01-03 Medtronic Xomed, Inc. Polymeric sealant for medical use
GB2447012B (en) * 2007-02-21 2011-03-16 Pharmacure Health Care Ab Composition for combating epistaxis
WO2008128075A1 (en) 2007-04-12 2008-10-23 Isto Technologies, Inc. Compositions and methods for tissue repair
US8328024B2 (en) 2007-04-12 2012-12-11 Hanuman, Llc Buoy suspension fractionation system
US7806276B2 (en) 2007-04-12 2010-10-05 Hanuman, Llc Buoy suspension fractionation system
US20080255612A1 (en) 2007-04-13 2008-10-16 Angiotech Pharmaceuticals, Inc. Self-retaining systems for surgical procedures
US20090075891A1 (en) * 2007-08-06 2009-03-19 Macphee Martin Methods and dressings for sealing internal injuries
US8777987B2 (en) 2007-09-27 2014-07-15 Ethicon, Inc. Self-retaining sutures including tissue retainers having improved strength
US8916077B1 (en) 2007-12-19 2014-12-23 Ethicon, Inc. Self-retaining sutures with retainers formed from molten material
JP5518737B2 (ja) 2007-12-19 2014-06-11 エシコン・エルエルシー 熱接触媒介リテーナを備えた留置縫合糸
US8118834B1 (en) 2007-12-20 2012-02-21 Angiotech Pharmaceuticals, Inc. Composite self-retaining sutures and method
EP2227263A2 (en) * 2007-12-28 2010-09-15 Kuros Biosurgery AG Pdgf fusion proteins incorporated into fibrin foams
EP2242430B1 (en) 2008-01-30 2016-08-17 Ethicon, LLC Apparatus and method for forming self-retaining sutures
US8615856B1 (en) 2008-01-30 2013-12-31 Ethicon, Inc. Apparatus and method for forming self-retaining sutures
EP3533399A3 (en) 2008-02-21 2019-10-23 Ethicon LLC Method for elevating retainers on self-retaining sutures
US8216273B1 (en) 2008-02-25 2012-07-10 Ethicon, Inc. Self-retainers with supporting structures on a suture
US8641732B1 (en) 2008-02-26 2014-02-04 Ethicon, Inc. Self-retaining suture with variable dimension filament and method
EP2259774B1 (en) 2008-02-27 2012-12-12 Biomet Biologics, LLC Methods and compositions for delivering interleukin-1 receptor antagonist
US8337711B2 (en) 2008-02-29 2012-12-25 Biomet Biologics, Llc System and process for separating a material
US8518272B2 (en) 2008-04-04 2013-08-27 Biomet Biologics, Llc Sterile blood separating system
US20090259263A1 (en) 2008-04-11 2009-10-15 Biomet Microfixation, Inc. Apparatus and methods of fixating bone
KR101577602B1 (ko) 2008-04-15 2015-12-28 에티컨, 엘엘씨 이-방향성 유지장치 또는 단일-방향성 유지장치를 갖는 자가-유지 봉합사
US8012077B2 (en) 2008-05-23 2011-09-06 Biomet Biologics, Llc Blood separating device
AU2009257390B2 (en) 2008-06-12 2014-09-04 Medtronic Xomed, Inc. Method for treating chronic wounds with an extracellular polymeric substance solvating system
US9173669B2 (en) 2008-09-12 2015-11-03 Pneumrx, Inc. Enhanced efficacy lung volume reduction devices, methods, and systems
WO2010042427A2 (en) 2008-10-06 2010-04-15 Microbial Defense Systems, Llc Antimicrobial composition and methods of making and using same
MX339174B (es) 2008-11-03 2016-05-12 Ethicon Llc Longitud de sutura autorretenible y metodo y dispositivo para su uso.
US8187475B2 (en) 2009-03-06 2012-05-29 Biomet Biologics, Llc Method and apparatus for producing autologous thrombin
US8110208B1 (en) 2009-03-30 2012-02-07 Biolife, L.L.C. Hemostatic compositions for arresting blood flow from an open wound or surgical site
US8313954B2 (en) 2009-04-03 2012-11-20 Biomet Biologics, Llc All-in-one means of separating blood components
US20100256671A1 (en) * 2009-04-07 2010-10-07 Biomedica Management Corporation Tissue sealant for use in noncompressible hemorrhage
WO2010129258A2 (en) 2009-04-27 2010-11-11 Mallinckrodt Inc. Tissue sealant compositions, vascular closure devices, and uses thereof
CN102573700B (zh) 2009-05-18 2014-12-17 纽姆克斯股份有限公司 细长的肺减容装置在部署过程中的横截面变化
US8367802B2 (en) * 2009-06-18 2013-02-05 Biomedica Management Corporation Method to produce fibrin monomer in acid media for use as tissue sealant
US9011800B2 (en) 2009-07-16 2015-04-21 Biomet Biologics, Llc Method and apparatus for separating biological materials
WO2011040888A1 (en) * 2009-10-01 2011-04-07 Singapore Health Services Pte Ltd A biodegradable composition or combination and uses thereof
US20110171285A1 (en) * 2009-10-28 2011-07-14 The Texas A&M University System Design of Fibrinogen and Fibrinogen Derived Products with Reduced Bacterial Binding by Using Modified Sequences of Fibrinogen Chains
WO2011090628A2 (en) 2009-12-29 2011-07-28 Angiotech Pharmaceuticals, Inc. Bidirectional self-retaining sutures with laser-marked and/or non-laser marked indicia and methods
US8591391B2 (en) 2010-04-12 2013-11-26 Biomet Biologics, Llc Method and apparatus for separating a material
AU2011248117B2 (en) 2010-05-04 2015-01-22 Ethicon, Llc Self-retaining systems having laser-cut retainers
CA2801271C (en) 2010-06-11 2018-10-30 Ethicon, Llc Suture delivery tools for endoscopic and robot-assisted surgery and methods
US10231721B2 (en) 2010-06-24 2019-03-19 St. Croix Surgical Systems, Llc Failsafe percutaneous wound barrier
NZ610341A (en) 2010-11-03 2015-05-29 Tissuegen Inc Drug-eluting self-retaining sutures and methods relating thereto
NZ704802A (en) 2010-11-09 2015-12-24 Ethicon Llc Emergency self-retaining sutures and packaging
RU2659454C2 (ru) 2011-03-23 2018-07-02 ЭТИКОН ЭлЭлСи Самоудерживающиеся нити с регулируемой петлей
WO2012140650A2 (en) 2011-04-12 2012-10-18 Hepacore Ltd. Conjugates of carboxy polysaccharides with fibroblast growth factors and variants thereof
JP6463629B2 (ja) 2011-05-10 2019-02-06 ネクスト サイエンス アイピー ホールディングス ピーティワイ エルティーディ 抗菌性固体およびその製造方法
US20130172931A1 (en) 2011-06-06 2013-07-04 Jeffrey M. Gross Methods and devices for soft palate tissue elevation procedures
DE102011122227A1 (de) 2011-12-23 2013-06-27 Medizinische Hochschule Hannover Verfahren und Vorrichtung zur Herstellung eines bioartifiziellen Gewebekonstrukts
US8999376B2 (en) 2012-02-03 2015-04-07 Xcede Technologies, Inc. Tissue patch
US9642956B2 (en) 2012-08-27 2017-05-09 Biomet Biologics, Llc Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components
CA2868862C (en) 2012-09-25 2017-06-27 Stem Cell Partners Llc Method and apparatus for preparing single donor thrombin serum
US10016527B2 (en) 2012-10-23 2018-07-10 Orthovita, Inc. Materials and methods for repair of cartilage defects
US20140178343A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Jian Q. Yao Supports and methods for promoting integration of cartilage tissue explants
US8906856B2 (en) * 2012-12-31 2014-12-09 Biomedica Mangement Corporation Single component fibrin hemostat
AU2013370223A1 (en) * 2012-12-31 2015-08-06 George David Falus Lyophilized fibrin sealant for high volume hemorrhage
US20140222067A1 (en) * 2013-02-01 2014-08-07 Xcede Technologies, Inc. Minimally invasive surgery, including vascular closure, and associated sealants
KR102252223B1 (ko) 2013-02-12 2021-05-14 리플리셀 라이프 사이언시스 인크. 힘줄 치료 및 회복을 위한 조성물 및 방법
US10143725B2 (en) 2013-03-15 2018-12-04 Biomet Biologics, Llc Treatment of pain using protein solutions
US20140271589A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Biomet Biologics, Llc Treatment of collagen defects using protein solutions
US9895418B2 (en) 2013-03-15 2018-02-20 Biomet Biologics, Llc Treatment of peripheral vascular disease using protein solutions
US9950035B2 (en) 2013-03-15 2018-04-24 Biomet Biologics, Llc Methods and non-immunogenic compositions for treating inflammatory disorders
US10208095B2 (en) 2013-03-15 2019-02-19 Biomet Manufacturing, Llc Methods for making cytokine compositions from tissues using non-centrifugal methods
RU2522879C1 (ru) * 2013-04-23 2014-07-20 ОАО "Научно-исследовательский институт текстильных материалов" (ОАО "НИИТМ") Биодеградируемое гемостатическое лекарственное средство для остановки капиллярных и паренхиматозных кровотечений
IL230150A0 (en) 2013-12-24 2014-09-30 Omrix Biopharmaceuticals Ltd One-component fibrin glue containing zymogens
IL230151A0 (en) * 2013-12-24 2014-09-30 Omrix Biopharmaceuticals Ltd One-component fibrin glue containing a polymerization inhibitor
US10500233B2 (en) 2014-02-12 2019-12-10 Replicel Life Sciences Inc. Compositions and methods for treating bone, joints and cartilage
IL231230A0 (en) * 2014-02-27 2014-08-31 Omrix Biopharmaceuticals Ltd Fibrinogen preparation
IL231792A0 (en) 2014-03-27 2014-08-31 Omrix Biopharmaceuticals Ltd Device and method for the preparation and administration of one-component fibrin glue
BR102014011436A8 (pt) * 2014-05-12 2018-01-09 Univ Estadual Paulista Julio De Mesquita Filho selante de fibrina para uso tópico, método de formação do mesmo e seu uso
US10390838B1 (en) 2014-08-20 2019-08-27 Pneumrx, Inc. Tuned strength chronic obstructive pulmonary disease treatment
US9932388B2 (en) 2014-11-13 2018-04-03 Hemarus Therapeutics Limited Chromatographic process for producing high purity fibrinogen and thrombin
US9713810B2 (en) 2015-03-30 2017-07-25 Biomet Biologics, Llc Cell washing plunger using centrifugal force
US9757721B2 (en) 2015-05-11 2017-09-12 Biomet Biologics, Llc Cell washing plunger using centrifugal force
AU2016307447A1 (en) 2015-08-07 2018-02-22 Xcede Technologies, Inc. Adhesive compositions and related methods
US9833538B2 (en) 2015-08-07 2017-12-05 Xcede Technologies, Inc. Adhesive compositions and related methods
US9540548B1 (en) 2015-08-07 2017-01-10 Xcede Technologies, Inc. Adhesive compositions and related methods
US10501715B1 (en) 2015-09-11 2019-12-10 Mark H. Widick System for the formation of fibrin foam
RU2628809C1 (ru) * 2016-06-30 2017-08-22 Федеральное государственное бюджетное учреждение Гематологический научный центр Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ ГНЦ Минздрава России) Гемостатическая губка и способ ее получения
FR3055805B1 (fr) 2016-09-09 2020-05-15 Assistance Publique - Hopitaux De Paris (Ap-Hp) Biomateriau a usage therapeutique
CN108220233B (zh) * 2016-12-21 2021-07-09 上海透景诊断科技有限公司 细胞分离器具表面处理方法、相关器具、外周血稀有细胞或循环肿瘤细胞快速高效分离方法
CN107589246B (zh) * 2017-03-07 2019-10-01 上海原科实业发展有限公司 一种纤维蛋白激活剂、其制备方法，包括该激活剂的试剂盒及采用该试剂盒的检测方法
RU179063U1 (ru) * 2017-07-03 2018-04-25 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Амурская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации Салфетка с фибрином
JP7110360B2 (ja) 2017-10-09 2022-08-01 テルモ ビーシーティー バイオテクノロジーズ，エルエルシー 凍結乾燥方法
US11154637B2 (en) 2018-11-07 2021-10-26 Industrial Technology Research Institute Biodegradable sealant and use of a biodegradable sealant in manufacture of an agent for biological tissue adhesion or repair
CN109679946B (zh) * 2019-01-04 2020-11-13 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 一种血液病毒rna保护剂及采血管
JP7495426B2 (ja) 2019-03-14 2024-06-04 テルモ ビーシーティー バイオテクノロジーズ，エルエルシー 凍結乾燥容器用充填治具、システム及び使用方法
RU2749983C1 (ru) * 2020-11-09 2021-06-21 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Алтайский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ герметизации панкреато-кишечного анастомоза с применением фибринового композита
CN116669780A (zh) * 2021-01-07 2023-08-29 巴克斯特国际公司 不含凝血酶的止血材料，其制造方法和用途
WO2023222770A1 (en) 2022-05-17 2023-11-23 Julius-Maximilians-Universitaet Wuerzburg Novel recombinant fibrinogen variants for fibrin sealants for surgical wound care

Family Cites Families (73)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2533004A (en) * 1943-10-27 1950-12-05 John D Ferry Fibrin clots and methods for preparing the same
CH586233A5 (cs) * 1971-01-18 1977-03-31 Pentapharm Ag
GB1417003A (en) * 1972-06-22 1975-12-10 Radiochemical Centre Ltd Stabilisation of fibrinogen
US3915640A (en) * 1974-08-06 1975-10-28 Warner Lambert Co Method and composition for detecting fibrin monomers and fibrin degradation products
SU663404A1 (ru) * 1976-12-30 1979-05-25 Московский Ордена Ленина И Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им. М.В.Ломоносова Способ получени фибрин-мономера
US4442650A (en) * 1977-12-15 1984-04-17 Sivachenko Eugene W Girder construction
US4167823A (en) * 1978-06-21 1979-09-18 Kumming Deborah G Coagulation puzzle for teaching coagulation theory
JPS5598196A (en) * 1979-01-16 1980-07-25 Meito Sangyo Kk Fractionation of fibrinogen or its constituents and their use
SE417342B (sv) * 1979-02-05 1981-03-09 Nya Asfalt Ab Forfarande och anordning for grundleggning av for tillverkade anleggningar i land
AT359653B (de) * 1979-02-15 1980-11-25 Immuno Ag Verfahren zur herstellung eines gewebekleb- stoffes
DE3017707A1 (de) * 1980-05-08 1981-11-12 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren und reagens zum nachweis von fibrinmonomer
US4488198A (en) * 1981-01-15 1984-12-11 Sundstrand Corporation Protective circuit for clutchless parallel generating system
US4455290A (en) * 1981-04-02 1984-06-19 Research Corporation Inhibition of fibrin polymerization by a peptide isolated from fibrin Fragment D1
US4480029A (en) * 1981-04-27 1984-10-30 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Biological indicators and their use
US4495278A (en) * 1981-04-27 1985-01-22 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Process for making novel blood clotting enzyme compositions
EP0068149A3 (de) * 1981-06-25 1983-07-20 Serapharm GmbH &amp; Co. KG Fibrinogen-haltiges Trockenpräparat, dessen Herstellung und Verwendung
ATE20824T1 (de) * 1981-06-25 1986-08-15 Serapharm Gmbh & Co Kg Angereichertes plasmaderivat zur unterstuetzung von wundverschluss und wundheilung.
DE3171072D1 (en) * 1981-06-25 1985-07-25 Stroetmann M Serapharm Enriched plasma derivative for promoting wound sealing and wound covering
US4442655A (en) * 1981-06-25 1984-04-17 Serapharm Michael Stroetmann Fibrinogen-containing dry preparation, manufacture and use thereof
US4438198A (en) * 1981-09-30 1984-03-20 Trimedyne, Inc. Biochemically active matrix for use in a bio-artificial organ
DE3203775A1 (de) * 1982-02-04 1983-08-11 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Fibrinogenzubereitung, verfahen zu ihrer herstellungund ihre verwendung
DE3230849A1 (de) * 1982-08-19 1984-02-23 Behringwerke Ag, 3550 Marburg Pasteurisiertes human-fibrinogen (hf) und verfahren zu dessen herstellung
US5357042A (en) * 1984-04-23 1994-10-18 The General Hospital Corporation Synthetic peptides capable of eliciting fibrin-specific monoclonal antibodies lacking fibrinogen-cross-reactivity
US4927916A (en) * 1984-04-23 1990-05-22 The General Hospital Corporation Method of producing fibrin-specific monoclonal antibodies lacking fibrinogen-cross-reactivity using fibrin-specific peptides
DE3430906A1 (de) * 1984-08-22 1986-02-27 Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim Verfahren zur bestimmung von fibrinmonomer in plasma
US4627879A (en) * 1984-09-07 1986-12-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Fibrin adhesive prepared as a concentrate from single donor fresh frozen plasma
US4928603A (en) * 1984-09-07 1990-05-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method of preparing a cryoprecipitated suspension and use thereof
US5223420A (en) * 1985-03-01 1993-06-29 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale Elastin-based product, a procedure for its preparation and its biological applications; in particular as biomaterials and artificial supports
SE447579B (sv) * 1985-04-01 1986-11-24 Biopool Ab Solubiliserbar, fibrinbaserad komposition och anvendning av kompositionen vid bestemning av fibrinolysparametrar
DE3622642A1 (de) * 1986-07-05 1988-01-14 Behringwerke Ag Einkomponenten-gewebekleber sowie verfahren zu seiner herstellung
DD261844A1 (de) * 1986-07-09 1988-11-09 Adw Ddr Verfahren zur praezipitation von fibrinmonomeren
US4714457A (en) * 1986-09-15 1987-12-22 Robert Alterbaum Method and apparatus for use in preparation of fibrinogen from a patient's blood
DK475386D0 (da) * 1986-10-03 1986-10-03 Weis Fogh Ulla Sivertsen Fremgangsmaade og apparat til fremstilling af biologiske stoffer
US4915847A (en) * 1987-08-04 1990-04-10 Baxter International Inc. Cryoglobulin separation
GB8628398D0 (en) * 1986-11-27 1986-12-31 Central Blood Lab Authority Pharmaceutically-active conjugates
US4709037A (en) * 1987-02-17 1987-11-24 Hoechst Celanese Corporation Biotinylating agents
US5175087A (en) * 1987-07-06 1992-12-29 Biopool International, Inc. Method of performing tissue plasminogen activator assay
DE3808048A1 (de) * 1988-03-11 1989-09-21 Behringwerke Ag Verfahren zum affinitaetschromatografischen reinigen von faktor xiii
US5290552A (en) * 1988-05-02 1994-03-01 Matrix Pharmaceutical, Inc./Project Hear Surgical adhesive material
AT397203B (de) * 1988-05-31 1994-02-25 Immuno Ag Gewebeklebstoff
DE3819923A1 (de) * 1988-06-11 1989-12-21 Behringwerke Ag Fibrin(ogen)derivate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung
JPH03501777A (ja) * 1988-10-17 1991-04-18 モレキユラー　デヴアイシズ　コーポレイシヨン ハプテン誘導捕獲膜及び該膜を使用する診断アツセイ法
JPH02129234A (ja) * 1988-11-09 1990-05-17 Kanebo Ltd 難燃性フェノール系樹脂プリプレグ
JPH02129224A (ja) * 1988-11-10 1990-05-17 Terumo Corp フィブリンの製造法
DE3900493A1 (de) * 1989-01-10 1990-07-12 Thomae Gmbh Dr K Verfahren zur bestimmung der fibrinolytischen gesamtaktivitaet im plasma
US5026785A (en) * 1989-05-12 1991-06-25 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Avidin and streptavidin modified water-soluble polymers such as polyacrylamide, and the use thereof in the construction of soluble multivalent macromolecular conjugates
CA1335361C (en) * 1989-05-24 1995-04-25 Andrei Z. Budzynski Thrombus-targeted complexes of plasminogen activator and fibrin fragments
US5226877A (en) * 1989-06-23 1993-07-13 Epstein Gordon H Method and apparatus for preparing fibrinogen adhesive from whole blood
FR2649982B1 (fr) * 1989-07-20 1991-09-27 Inst Nat Sante Rech Med Membrane biologique artificielle
EP0423938B1 (en) * 1989-09-29 1994-03-02 Rohm And Haas Company Ligand-containing medium for chromatographic separation, process for preparing the medium, and use of the medium for isolating synthetic or natural molecules from a fluid mixture
US5252743A (en) * 1989-11-13 1993-10-12 Affymax Technologies N.V. Spatially-addressable immobilization of anti-ligands on surfaces
US5219328A (en) * 1990-01-03 1993-06-15 Cryolife, Inc. Fibrin sealant delivery method
US5318524A (en) * 1990-01-03 1994-06-07 Cryolife, Inc. Fibrin sealant delivery kit
US5030215A (en) * 1990-01-03 1991-07-09 Cryolife, Inc. Preparation of fibrinogen/factor XIII precipitate
US5185001A (en) * 1990-01-18 1993-02-09 The Research Foundation Of State University Of New York Method of preparing autologous plasma fibrin and application apparatus therefor
US5180828A (en) * 1990-02-09 1993-01-19 Molecular Devices Corporation Chromophoric reagents for incorporation of biotin or other haptens into macromolecules
US5420250A (en) * 1990-08-06 1995-05-30 Fibrin Corporation Phase transfer process for producing native plasma protein concentrates
AU644205B2 (en) * 1990-08-23 1993-12-02 New York Blood Center, Inc., The Assays using a soluble fibrin-like monomer
EP0485904B1 (en) * 1990-11-13 1997-08-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Mitomycin derivatives
US5206023A (en) * 1991-01-31 1993-04-27 Robert F. Shaw Method and compositions for the treatment and repair of defects or lesions in cartilage
CH681693A5 (cs) * 1991-02-28 1993-05-14 Pentapharm Ag
EP0534178B1 (en) * 1991-09-27 2001-04-18 Omrix Biopharmaceuticals S.A. Improved tissue glue prepared by using cryoprecipitate
US5527692A (en) * 1991-12-31 1996-06-18 Zymogenetics, Inc. Methods for producing thrombin
US5272074A (en) * 1992-04-23 1993-12-21 Mcmaster University Fibrin coated polymer surfaces
US5443959A (en) * 1992-09-09 1995-08-22 Tokuyama Corporation Method of assaying fibrinogen, dry reagent therefor, and process for the preparation thereof
CN1091315A (zh) 1992-10-08 1994-08-31 E·R·斯奎布父子公司 血纤维蛋白封闭剂组合物及其使用方法
US5292416A (en) * 1992-11-13 1994-03-08 Indiana University Foundation Pulsed-field separation of polysaccharides in capillaries
US5520885A (en) * 1993-01-19 1996-05-28 Thermogenesis Corporation Fibrinogen processing apparatus, method and container
US5330974A (en) * 1993-03-01 1994-07-19 Fibratek, Inc. Therapeutic fibrinogen compositions
EP0696201B2 (en) * 1993-03-12 2012-09-19 The American National Red Cross Supplemented tissue sealants, methods of their production and use
US5464471A (en) * 1994-11-10 1995-11-07 Whalen Biomedical Inc. Fibrin monomer based tissue adhesive
US5510102A (en) * 1995-01-23 1996-04-23 The Regents Of The University Of California Plasma and polymer containing surgical hemostatic adhesives
EP0841108A1 (en) * 1996-11-06 1998-05-13 Norsk Hydro ASA Process for connecting metal members

Also Published As

Publication number Publication date
CA2566574A1 (en) 1994-04-09
BR9304185A (pt) 1994-05-03
HU9302839D0 (en) 1994-01-28
NO314412B1 (no) 2003-03-17
CA2108104A1 (en) 1994-04-09
US5962420A (en) 1999-10-05
NZ280264A (en) 1997-08-22
DE69333080D1 (de) 2003-08-14
NZ328064A (en) 2000-08-25
JP3771284B2 (ja) 2006-04-26
ES2065294A1 (es) 1995-02-01
CA2510981A1 (en) 1994-04-09
SG49640A1 (en) 1998-06-15
PT592242E (pt) 2003-11-28
EP0592242A1 (en) 1994-04-13
US6048966A (en) 2000-04-11
EP1266666A2 (en) 2002-12-18
NO933624L (no) 1994-04-11
CN1091315A (zh) 1994-08-31
MX9306272A (es) 1994-07-29
DE69333080T2 (de) 2004-04-15
US5773418A (en) 1998-06-30
RU2143924C1 (ru) 2000-01-10
US5763410A (en) 1998-06-09
FI934440A0 (fi) 1993-10-08
EP1266666A3 (en) 2003-01-22
AU4887893A (en) 1994-04-21
AU676201B2 (en) 1997-03-06
CA2510981C (en) 2007-02-13
US5962026A (en) 1999-10-05
US5763411A (en) 1998-06-09
ES2065294B1 (es) 1995-11-01
ATE244581T1 (de) 2003-07-15
PL176202B1 (pl) 1999-04-30
SK109393A3 (en) 1994-06-08
ES2202306T3 (es) 2004-04-01
HU218898B (hu) 2000-12-28
PL173858B1 (pl) 1998-05-29
CA2108104C (en) 2005-09-27
PL175443B1 (pl) 1998-12-31
JPH06199685A (ja) 1994-07-19
FI110616B (fi) 2003-02-28
EP0592242B1 (en) 2003-07-09
US5739288A (en) 1998-04-14
US5750657A (en) 1998-05-12
US6077507A (en) 2000-06-20
NO933624D0 (no) 1993-10-08
KR940008697A (ko) 1994-05-16
IL107211A (en) 1997-09-30
IL107211A0 (en) 1994-01-25
NZ248897A (en) 1996-08-27
FI934440A (fi) 1994-04-09
US5804428A (en) 1998-09-08
DK0592242T3 (da) 2003-10-27
HUT66587A (en) 1994-12-28
US5770194A (en) 1998-06-23
US6262236B1 (en) 2001-07-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5770194A (en) Fibrin sealant compositions and methods for utilizing same
US5330974A (en) Therapeutic fibrinogen compositions
EP0654078B1 (en) A thrombin blood fraction for use in a medical procedure
US20120156284A1 (en) Enhanced biological autologous tissue adhesive composition and methods of preparation and use
US5883078A (en) Hemostyptic and tissue adhesive
WO1992013495A1 (en) Fibrinogen based adhesive
EP0193584A1 (en) Fibrin adhesive prepared as a concentrate from single donor fresh frozen plasma
US5795780A (en) Method of use of autologous thrombin blood fraction in a cell culture with keratinocytes
CZ294292A3 (en) Tissue adhesive containing cryo precipitate, process of its preparation and the use of aprotinin, protease from snake poison and batroxobin for preparing such adhesive

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic