CS238780B1 - Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01 - Google Patents

Abstract

Řešení se týká myšíhe lymfecytárníhe hybridomu, produkujícího protilátku proti lidskému transferinu, uloženého ve sbírce hybridomi. ústavu molekulární genetiky ČSAV pod označením HTF-01. Monoklonální protilátka hybridomu HTF-01 je vhodná pro použití v enzymoimunologické a rádioimunologické analýze.

Description

Vynález se týká nového hybridemu, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky mySí myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti lidskému transferinu.

Doposud se protilátky proti transferinu vyrábějí tak, že je transferin opakovaně injikován jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům,a prasatům. Sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných zejména pro kvantitativní stanovení plazmatického transferinu metodou jednoduché radiální imunodifuze. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné.

Organismus zpravidla vytvoří,kromě protilátek vůči žádanému antigenu í protilátky proti nečistotám antigenního preparátu, ty je nutné ze sér odstraňovat vysycováním. Výrobní Šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit čistý imunizační antigen a další antigeny pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám.

Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridon, produkující monoklonálni protilátku proti lidskému transferinu, uložený ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňské ul. 1 083, pod označením IMG CZAS HTF-01.

Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury /Fazekas de St.

Groth, S., Scheidigger, D.: Production of monoclonal antibodies: Stratégy and tactics,

J. Immunol. Meth.,35: 1-21, 1980. Galfré, G., Howe, S. C., Milstein, C., Butcher, G. W., Howard, J. C.: Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš. Nátuře 266:550, 1977/ klonování souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí buněk myší myelomové linie P3-X63-Ag8.653 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene BAIB/c, imunizovaných lidským transferinem.

Výhodou hybridomů je, že produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonálni, která je schopna specificky reagovat s lidským transferinem. Hybridom HTF-01 je možné kultivovat in vitro v médiích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene BALB/c. Z konzerv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu. Protilátka, produkovaná hybridomem HTF-01 reaguje z lidských sérových proteinů pouze s transferinem a není třeba se zbavovat protilátek balastních. Vedle lidského transferinu reaguje protilátka HTF-01 též s transferinem koňským a psím.

Příklad

Za dčelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 2 x 10? buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 10 dní před přenosem buněk hybridomů ovlivněna parafinovým olejem /0,5 ml intraperitoneálně/. Po 21 dnech růstu hybridomů v peritoneální dutině byla myš zabita a neprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 3.6 ml ascitické tekutiny, která obsahovala 8 mg/ml imunoglobulinu. Protilátka reagovala se specifickým antigenem v enzymoimunologickém testu /při použití prasečí antimyší protilátky značené křenovou peroxidázou/ až do ředění 1:10?.

Buňky hybridomu HTF-01 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální médium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny. L-glutamin /3mM/, pyruvát sodný /1mM/. Toto médium /označované jako H-MEMd, Ústav molekulární genetiky ČSAV/, je pro kultivaci hybridomu HTF-01 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinen, 2-merkaptoetanolem /0,05mM/ pufrem HEPES /10 mM/ a inaktivovaným bovinním sérem /Bioveta, Ivanovice na Hané, 10 %/. Hybridom je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 14,9 hod a 12 měsíců po sestrojení byl modální počet chromosomú 84. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgGI, kappa typu.

Monoklonální protilátka produkovaná hybridomem HTF-01, reaguje specificky s lidským transferlnem.

Hybridom HTF-01 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonélní protilátky proti transferinu v metodách analytických nebo preparativních.

Claims (1)

1. PŘEDMĚT VYNÁLEZU

   Myěí lymfocytární hybridom IMG CZAS HTF-01, produkující monoklonální protilátku podtřídy IgGI proti lidskému transferinu.