CS223535B1 - Myší lymfocytární hybridom - Google Patents
Myší lymfocytární hybridom Download PDFInfo
- Publication number
- CS223535B1 CS223535B1 CS236082A CS236082A CS223535B1 CS 223535 B1 CS223535 B1 CS 223535B1 CS 236082 A CS236082 A CS 236082A CS 236082 A CS236082 A CS 236082A CS 223535 B1 CS223535 B1 CS 223535B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hybridoma
- mice
- tubulin
- lymfocytarous
- hybridon
- Prior art date
Links
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 title description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 claims description 12
- 241001529936 Murinae Species 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 2
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 abstract 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 abstract 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 abstract 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 240000003550 Eusideroxylon zwageri Species 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Vynález se týká myšího lymfoeytárního
hybridomu, produkujícího protilátku
proti tabulinu, zejména prasečímu, uloženého
ve sbírce hybridomů Ústavu molekulární
genetiky ČSAV pod označením TU-01.
Samotná monoklonární protilátka hybridomu
TU-01 je vhodné pro použití v enzymoimunologické
a radioimunologické analyse
a při vizualizaci mikrotubulů v buňkách
na úrovni optického a elektronového
mikroskopu.
Description
Vynález se týká nového hybridomů, tj. hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného buněčnou fúzí myší myelomové linie P3-X63-AgS.653 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkují- : cí protilátku proti prasečímu tubulinu.
Doposud se protilátky proti'tubulinu vyrábějí tak, že je tu-; i ulin opakované injikován jako antigen pokusným zvířatům, nejČastěji králíkům. Sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době působení antigenu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných zejména pro identifikaci buněčných struktur, obsahujících tubulin. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné. Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; ty je nutné ze.sér odstraňovat složitým způsobem, zvaným vysycování. Výrobní šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality.
Pro výrobu každé Šarže je třeba připravit značně čistý imunizační antigen a další antigeny pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám. ,
Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom,produkující monoklonální protilátku proti prasečímu tubulinu, uloženy ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňské ul. č ,.1083, pod označením IMG GAS TU-01.
~2
223 535
Uvedený' hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury /Pazekas de,-St., Groth, S., Scheidigger, D.: Production of monoclonal antíbodies: Stratégy and tactics, J. Imiaunol. íčeth., 35:1-21, 1980; Galfré, G., ílowe, S.G., Milstein, Ge, Butcher, G.U., Howard, J.C.: Antíbodies to major histočompatibili ty antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře, 266x550,
1977/ klonováním souboru hybridních buněk, vzniklých fúzí myší myelomové linie P3-X63-Ag8.ó53 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene Balb/c, imunizovaných prasecím tubulinem.
Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku, tzv. protilátku monoklonální, která je schopna specificky reagovat s prasečím tubulinem, ale i s tubulinem řady dalších druhů /mezi jinými též s lidským tubulinem/. hybridom TU-01 je možné
Z · v kultivovat in vitro v mediích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině myší kmene Balb/c Z konserv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu. Protilátka, produkovaná hybridomem TU-01, je specifická výhradně pro tubulin a není třeba se -zbavovat protilátek balastních.
Příklad:
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 1 x 10 buněk do peritoneální dutiny myší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 9 dní před přenosem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem /0,5 ml intraperitoneálně/. Po 14 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla mys zabita a naprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 5,0 ml ascitické tekutiny, která obsahovala 9 wg/ml imunoglobulinu. Protilátka reagovala se specifickým antigenem v enzymoimunologickém testu /při použití prasečí antimyší protilátky značené křenovou peroxidázou/ až do ředění 1:10^. Za pomoci nepřímé imonofluorescenční techniky byl takto získanou protilátkou zobrazen mikrotubulární ‘komplex v buňkách myší fibroblastoidní linie G^H původu.
Buňky hybridomu TU-01 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné
223 S35 a na membrány vázané polyribosomy. In vitro rostou jako polosuspenzní kultury. Základním kultivačním mediem je Eaglovo minimální esenciální medium s Hanksovou solnou směsí a doplněné o neasenciální aminokyseliny, L-glutamin /3 mM/, pyruvát sodný A mM/. Toto medium, /označované jako H-MEMd, Ústav molekulární genetiky ČSAV/, je pro kultivace hybridomu TU-01' doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycinem, 2-merkaptoetanolem /0.05 mM/ pufrem HEPES AO mM/ a inaktivovaným bovinním sérem /Bioveta, Ivanovice na Rané, 10 %/. Hybridom je kultivován při 3^G. Střední generační čas je 13*1 hod. a pět měsíců po sestrojení byl modální počet chromosomů 82. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgGl.
Monoklonální protilátka, produkovaná hybridomem TU-01 analogicky s konvenčními protilátkami reaguje s tubulinem řady dru- . hů. Je proto využitelná k detekci buněčných cytoskeletálních struktur většiny druhů obsahujících tubulin.
Hybridom TU-01 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti tubulinu v metodách analytických nebo pre parat ivní ch·
Claims (1)
- Myší lymfocytární hybridom IMG GAS TU-01, produkující monoklonální protilátku podtřídy IgGl proti tubulinu, zejména prasečímu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS236082A CS223535B1 (cs) | 1982-04-01 | 1982-04-01 | Myší lymfocytární hybridom |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS236082A CS223535B1 (cs) | 1982-04-01 | 1982-04-01 | Myší lymfocytární hybridom |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS223535B1 true CS223535B1 (cs) | 1983-10-28 |
Family
ID=5360517
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS236082A CS223535B1 (cs) | 1982-04-01 | 1982-04-01 | Myší lymfocytární hybridom |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS223535B1 (cs) |
-
1982
- 1982-04-01 CS CS236082A patent/CS223535B1/cs unknown
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS223535B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS228857B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferům | |
| CS228860B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
| CS236001B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS238780B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01 | |
| US4678746A (en) | Monoclonal antibodies to epizootic hemorrhagic disease virus antigen | |
| CS247450B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS228856B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 | |
| CS245849B1 (cs) | Myší lymfocytární hydridom IMG CZAS VI-01 | |
| CS244398B1 (cs) | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 | |
| CS253336B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 | |
| CS233810B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu | |
| SU1685997A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к тиреотропному гормону человека | |
| CS253337B1 (cs) | Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14 | |
| CS222781B1 (en) | Electromotor with friction brake with decreased noise | |
| CS259995B1 (cs) | Myší lymfooytární hybridom produkující o monoklonální protilátku proti akrozínu | |
| CS255844B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující monoklonální protilátku proti prasečímu akrozínu | |
| CS222779B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS222780B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridem | |
| CS243652B1 (cs) | MySí lyafocytární hybrido· IMG CZAS HP-03 | |
| CS240807B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TEC - 01 |