CS244398B1 - Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 - Google Patents
Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 Download PDFInfo
- Publication number
- CS244398B1 CS244398B1 CS851255A CS125585A CS244398B1 CS 244398 B1 CS244398 B1 CS 244398B1 CS 851255 A CS851255 A CS 851255A CS 125585 A CS125585 A CS 125585A CS 244398 B1 CS244398 B1 CS 244398B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- hybridoma
- albumin
- antibody
- czas
- img
- Prior art date
Links
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 claims abstract description 6
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 9
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 9
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 9
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 9
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 229920002271 DEAE-Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000005662 Paraffin oil Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 239000008241 heterogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 210000002729 polyribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000011833 salt mixture Substances 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 238000011895 specific detection Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Řešení se týká myšího lymfocytámího
hybridomu, produkujícího protilátku proti
lidskému albuminu, uloženého ve sbírce
hybrldomů Ústavu molekulární genetiky
ČSAV pod označením AL - 01. Monoklonální
protilátka hybridomu AL - 01 je vhodná
pro použití v metodách enzymoimunologickýoh,
radioimunologických a preparativníoh.
Description
Vynález se týká nového hybridomu, tj· hybridního jednobuněčného organismu, sestrojeného fúzí buňky myší jnyelomové linie P3-X63-Ag8.653 a myší slezinné lymfoidní buňky, produkující protilátku proti lidskému albuminu·
Doposud se protilátky proti albuminu vyrábějí tak, že je albumin opakovaně injikován jako antigen pokusným zvířatům, nejčastěji králíkům a prasatům. Sérum takto imunizovaných zvířat, odebírané po určité době působení antigonu, slouží jako zdroj protilátek, užívaných zejména pro kvantitativní stanovení plazmatického albuminu a k odstranění albuminu z testovaných sér. Tento postup, nazývaný konvenční imunizací, má několik nevýhod. V séru imunizovaných zvířat se nachází heterogenní směs protilátek, jejichž spektrum je v každém jednotlivém organismu různé a neopakovatelné· Organismus zpravidla vytvoří kromě protilátek vůči žádanému antigenu i protilátky proti nečistotám antigenního preparátu; ty je nutné ze sér odstraňovat vysycováním. Výrobní šarže konvenčních sér se proto dají těžko standardizovat a vycházejí z výroby v širokém rozmezí kvality. Pro výrobu každé šarže je třeba připravit čistý imunizační antigen a další antigeny pro vysycení balastních protilátek proti nečistotám.
Uvedené nedostatky výše zmíněného a dosud používaného postupu odpadnou, je-li k dispozici hybridom, produkuj-fc-f monoklonální protilátku proti lidskému albuminu, uložený ve Sbírce hybridomů Ústavu molekulární genetiky ČSAV v Praze 4, Vídeňské ul'. 1083, pod označením IMG CZAS AL - 01.
Uvedený hybridom byl získán způsobem známým z odborné literatury /Fazekas de St. Groth, S·, Scheidigger, D·· Production of monoclonal antibodies. Stratégy and tactics.
J. Immunol. Ifeth., 35: 1-21, 1980; Galfré, G., Howe,S.C., Milstein, C., jautcher, G.W·, Howard, J»C.s Antibodies to major histocompatibility antigens produced by hybrid cell lineš, Nátuře 266:550, 1977/ klonováním souboru hybridních
244 398 buněk, vzniklých fúzí buněk myší myelomové linie P3-X63-Ag 8.653 a buněk, získaných ze sleziny myší kmene BALB/c imunizovaných směsí lidských sérových bílkovin obsahující zvláště albumin a transferin.
Výhodou hybridomu je, že produkuje homogenní protilátku, tzv· protilátku raonoklonální, která je schopna specificky reagovat s lidským albuminem. Hybridom AL - 01 je možné kultivovat in vitro v mediích vhodných pro živočišné buňky a je adaptován pro růst in vivo v peritoneální dutině.myší kmene BALB/c. Z konzerv, uchovávaných v kapalném dusíku, je možné zahájit produkci protilátky bez dalšího antigenu. Protilátka, produkovaná hybridomem AL - 01 reaguje z lidských sérových proteinů pouze s albuminem, jak bylo zjištěno po elektroforetickém přenosu sérových proteinů (separovaných na elektroforéze v polyakrylamidovém gelu v prostředí dodecylsulfátu sodného za redukujících i neredukujících podmínek) na nitrocelulosovou membránu a specifické detekci nepřímým imunologickým testem /s využitím protilátky AL - 01 a praseěí protilátky proti myším imunoglobulinům konjugované s peroxidázou. ÚSOL,Praha/· Protilátka AL - 01 nereaguje s albuminem prasečím, králičím, myším ani hovězím. Příklad:
Za účelem pomnožení hybridomových buněk in vivo bylo aplikováno 2 x 10θ buněk ďo peritoneální dutiny «ryší. Aby došlo k lepšímu uchycení aplikovaných buněk, byla myš 13 dní před převodem buněk hybridomu ovlivněna parafinovým olejem /0.5 ml intraperitoneálně/· Po 18 dnech růstu hybridomu v peritoneální dutině byla myš zabita a neprodukovaná ascitická tekutina odebrána. Celkem bylo získáno 4.6 ml ascitické tekutiny, která obsahovala 5 mg/ml imunoglobulinu· Monoklonální protilátka reagovala se specifickým antigenem /albumin izolovaný iontoměničovou chromátografií krevní plazmy na DEAE-Sepharose, čistý podle výsledků SDS elektroforézy/ v enzymoimunologickém testu /při použití prasečí antimyší protilátky značené křenovou peroxidázou/ až do ředění 1:10^·
Buňky hybridomu AL - 01 mají ultrastrukturální obraz typických myelomových buněk, kde převažující organelou jsou volné a na membrány vázané polyribosomy. In vitro rostou jako
- 3 244 398 polosuspenzní kultury* Základním kultivačním médiem je Eaglovo minimální esenciální medium s Hanksovou solnou směsí doplněné o neesenciální aminokyseliny, L-glutamin /3mM/, pyruvát sodný 1 mM/* Toto médium /označené jako H-MEMd, Ústav molekulární genetiky ČSAV/ je pro kultivaci hybridomu AL-01 doplněno penicilinem, streptomycinem, gentamycínem, 2-merkapto ethanolem /0.05 nM/, pufrem HEPES /10 raM/ a inaktivovaným bovinním sérém /Bioveta, Ivanovice na Hané 10%/. Hybridom je kultivován při 37 °C. Střední generační čas je 15 »9 hod a 13 měsíců po sestrojení byl modální počet chromosomů 80. Produkovaná protilátka je monoklonální imunoglobulin podtřídy IgG1, s lehkými řetězci typu kappa, její izoelektrický bod je pH 7,6(08,0.
Monoklonální protilátka, produkovaná hybridomem AL - 01 reaguje specificky s lidským albuminem.
Hybridom AL - 01 může být průmyslově využíván jako zdroj monoklonální protilátky proti albuminu v metodách analytických nebo preparátivních, zejména k odstranění albuminu při detekci minoritních sérových proteinů a pro kvantitativní stanovení velmi nízkých koncentrací albuminu v moči a výplachu plic.
Claims (1)
- PŘEDMĚT VYNÁLEZUMyší lymfocytámí hybridom IMG CZAS AL-01 , produkující monoklonální protilátku podtřídy IgGl proti lidskému albuminu.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS851255A CS244398B1 (cs) | 1985-02-21 | 1985-02-21 | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS851255A CS244398B1 (cs) | 1985-02-21 | 1985-02-21 | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS125585A1 CS125585A1 (en) | 1985-08-15 |
| CS244398B1 true CS244398B1 (cs) | 1986-07-17 |
Family
ID=5346467
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS851255A CS244398B1 (cs) | 1985-02-21 | 1985-02-21 | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS244398B1 (cs) |
-
1985
- 1985-02-21 CS CS851255A patent/CS244398B1/cs unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS125585A1 (en) | 1985-08-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CS244398B1 (cs) | Myěí lymfocytámí hybridom IMG - CZAS AL - 01 | |
| CS240846B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS IN - 04 | |
| CS238780B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF 01 | |
| CS243348B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG-CZAS HTF-21 | |
| CS228857B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferům | |
| CS253336B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS RT-12 | |
| CS228860B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS233810B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti praseSímu a lidskému insulinu | |
| CS235850B1 (cs) | Myší lymfocitární hybridom produkující protilátku proti lidskému -transferinu | |
| CS228858B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu 6 | |
| CS253337B1 (cs) | Myši lymfocytárnf hybridem IMG CZAS RT-14 | |
| CS236001B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti lidskému transferinu | |
| CS234935B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridem IMG CZAS B2M-01 | |
| CS228856B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom produkující protilátku proti prasečímu imunoglobulinu G | |
| CS239800B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS TU-04 | |
| CS222781B1 (en) | Electromotor with friction brake with decreased noise | |
| CS243652B1 (cs) | MySí lyafocytární hybrido· IMG CZAS HP-03 | |
| CS223535B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS222779B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom | |
| CS222780B1 (cs) | Myší lymfocytámí hybridem | |
| CS248383B1 (cs) | Myši lymfocytárni hybridem IMG CZAS MEM-09 | |
| SU1685997A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к тиреотропному гормону человека | |
| CS247450B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridom IMG CZAS MA-01 | |
| CS263122B1 (cs) | Myší lymfocytární hybridorn produkující protilátku pr >ti lidskému alfa-1'etoproteinu | |
| CS263121B1 (cs) | i.iyóí lymfocytúrní hybridom produkující protilátku proti lidskému alfa-fetoproteinu |